مقدمة.

1. الخصائص العامة وتصنيف السيتوكينات.

1.1 آليات العمل.

1.2 خصائص السيتوكينات.

1.3 دور السيتوكينات في تنظيم الوظائف الفسيولوجية للجسم.

2- دراسات خاصة للسيتوكينات.

2.1 دور السيتوكينات في التسبب في أمراض التهاب القولون عند الأطفال.

2.2 دور أكسيد النيتريك والسيتوكينات في تطوير متلازمة إصابة الرئة الحادة.

3. طرق تحديد السيتوكينات

3.1 تحديد النشاط البيولوجي للسيتوكينات

3.2 القياس الكمي للسيتوكينات باستخدام الأجسام المضادة

3.3 تحديد السيتوكينات بالمقايسة المناعية الإنزيمية.

3.3.1 عامل نخر الورم ألفا.

3.3.2 جاما إنترفيرون.

3.3.3 انترلوكين -4

3.3.4 انترلوكين -8

3.3.5 مناهض مستقبلات إنترلوكين -1.

3.3.6 ألفا إنترفيرون.

3.3.7 الأجسام المضادة لـ alpha-IFN.

4. الأدوية المناعية القائمة على السيتوكينات.

قائمة الأدب المستخدم.

استنتاج.

مقدمة.

لقد مر القليل من الوقت منذ وصف السيتوكينات الأولى. ومع ذلك ، أدى بحثهم إلى تخصيص قسم واسع من المعرفة - علم الحركة الخلوي ، وهو جزء لا يتجزأ من مجالات المعرفة المختلفة ، وقبل كل شيء ، علم المناعة ، مما أعطى دفعة قوية لدراسة هؤلاء الوسطاء. يتخلل علم الحركات الخلوية جميع التخصصات السريرية ، من مسببات الأمراض وإمراضها إلى الوقاية والعلاج من مختلف الحالات المرضية. وبالتالي ، فإن الباحثين العلميين والأطباء بحاجة إلى الإبحار في تنوع الجزيئات التنظيمية ولديهم فهم واضح لدور كل من السيتوكينات في العمليات قيد الدراسة. جميع خلايا الجهاز المناعي لها وظائف معينة وتعمل في تفاعل منسق بوضوح ، والذي يتم توفيره بواسطة مواد نشطة بيولوجيًا خاصة - السيتوكينات - منظمات تفاعلات المناعة. السيتوكينات عبارة عن بروتينات محددة يمكن من خلالها لخلايا الجهاز المناعي المختلفة تبادل المعلومات مع بعضها البعض وتنسيق الإجراءات. تمثل مجموعة وكمية السيتوكينات التي تعمل على مستقبلات سطح الخلية - "بيئة السيتوكين" - مصفوفة من الإشارات المتفاعلة والمتغيرة بشكل متكرر. هذه الإشارات معقدة بسبب التنوع الكبير في مستقبلات السيتوكينات وبسبب حقيقة أن كل من السيتوكينات يمكنها تنشيط أو قمع العديد من العمليات ، بما في ذلك توليفها الخاص وتخليق السيتوكينات الأخرى ، وكذلك تكوين وظهور مستقبلات السيتوكينات على سطح الخلية. الهدف من عملنا هو دراسة السيتاكينات ووظائفها وخصائصها ، بالإضافة إلى إمكانية تطبيقها في الطب. السيتوكينات عبارة عن بروتينات صغيرة (وزن جزيئي من 8 إلى 80 كيلو دالتون) تعمل على الأوتوكرين (أي على الخلية التي تنتجها) أو الباراكرين (على الخلايا الموجودة في مكان قريب). إن تكوين وإطلاق هذه الجزيئات النشطة للغاية قصير العمر ومنظم بإحكام.

عرض الادب.

الخصائص العامة وتصنيف السيتوكينات.

السيتوكينات هي مجموعة من الوسطاء متعدد الببتيد للتفاعل بين الخلايا ، والتي تشارك بشكل أساسي في تكوين وتنظيم ردود الفعل الدفاعية للجسم أثناء إدخال مسببات الأمراض وتعطيل سلامة الأنسجة ، وكذلك في تنظيم عدد من الوظائف الفسيولوجية الطبيعية. يمكن عزل السيتوكينات في نظام تنظيمي جديد مستقل موجود جنبًا إلى جنب مع الجهاز العصبي والغدد الصماء للحفاظ على التوازن ، وجميع الأنظمة الثلاثة مترابطة ومترابطة بشكل وثيق. على مدى العقدين الماضيين ، تم استنساخ جينات معظم السيتوكينات وتم الحصول على نظائرها المؤتلفة التي تكرر تمامًا الخصائص البيولوجية للجزيئات الطبيعية. أكثر من 200 مادة فردية تنتمي إلى عائلة السيتوكينات معروفة الآن. بدأ تاريخ دراسة السيتوكينات في الأربعينيات من القرن العشرين. عندها تم وصف التأثيرات الأولى للكاشكتين ، وهو عامل موجود في مصل الدم وقادر على التسبب في الهزال أو فقدان الوزن. بعد ذلك ، تم عزل هذا الوسيط وتبين أنه مطابق لعامل نخر الورم (TNF). في ذلك الوقت ، أجريت دراسة السيتوكينات على مبدأ الكشف عن أي تأثير بيولوجي واحد ، والذي كان بمثابة نقطة البداية لاسم الوسيط المقابل. لذلك في الخمسينيات من القرن الماضي ، تم استدعاء الإنترفيرون (IFN) بسبب قدرته على التدخل أو زيادة المقاومة أثناء العدوى الفيروسية المتكررة. كان يُطلق على Interleukin-1 (IL-1) في البداية اسم البيروجين الداخلي بدلاً من عديدات السكاريد الدهنية البكتيرية ، والتي كانت تعتبر من البيروجينات الخارجية. ترتبط المرحلة التالية من دراسة السيتوكينات ، التي يعود تاريخها إلى 60-70 عامًا ، بتنقية الجزيئات الطبيعية والتوصيف الشامل لعملها البيولوجي. بحلول هذا الوقت ، ينتمي اكتشاف عامل نمو الخلايا التائية ، المعروف الآن باسم IL-2 ، وعدد من الجزيئات الأخرى التي تحفز النمو والنشاط الوظيفي للخلايا اللمفاوية التائية والبائية وأنواع أخرى من الكريات البيض. في عام 1979 ، لتعيينهم وتنظيمهم ، تم اقتراح مصطلح "interleukins" ، أي الوسطاء الذين يتواصلون بين الكريات البيض. ومع ذلك ، سرعان ما أصبح واضحًا أن التأثيرات البيولوجية للسيتوكينات تمتد إلى ما هو أبعد من جهاز المناعة ، وبالتالي أصبح مصطلح "السيتوكينات" المقترح سابقًا ، والذي نجا حتى يومنا هذا ، أكثر قبولًا. حدث تحول ثوري في دراسة السيتوكينات في أوائل الثمانينيات بعد استنساخ جينات الفأر والانترفيرون البشري وإنتاج جزيئات مؤتلفة تكرر تمامًا الخصائص البيولوجية للسيتوكينات الطبيعية. بعد ذلك ، كان من الممكن استنساخ جينات وسطاء آخرين من هذه العائلة. من المعالم المهمة في تاريخ السيتوكينات الاستخدام السريري للإنترفيرون المؤتلف ، وخاصة IL-2 المؤتلف ، لعلاج السرطان. تميزت التسعينيات باكتشاف بنية الوحدة الفرعية لمستقبلات السيتوكين وتشكيل مفهوم "شبكة السيتوكين" ، وبداية القرن الحادي والعشرين - اكتشاف العديد من السيتوكينات الجديدة من خلال التحليل الجيني. تشمل السيتوكينات الإنترفيرون وعوامل تحفيز المستعمرات (CSF) والكيموكينات التي تحول عوامل النمو ؛ عامل نخر الورم؛ interleukins مع أرقام تسلسلية ثابتة تاريخيا وبعض الوسطاء الداخليين الآخرين. لا تنتمي إنترلوكينات ذات الأرقام التسلسلية التي تبدأ من 1 إلى نفس المجموعة الفرعية من السيتوكينات المرتبطة بوظائف مشتركة. ويمكن تقسيمها بدورها إلى السيتوكينات المنشطة للالتهابات ، وعوامل النمو والتمايز للخلايا الليمفاوية ، والسيتوكينات التنظيمية الفردية. يتم تعيين اسم "إنترلوكين" للوسيط المكتشف حديثًا إذا تم استيفاء المعايير التالية التي طورتها لجنة التسمية التابعة للاتحاد الدولي لجمعيات المناعة: الاستنساخ الجزيئي والتعبير عن جين العامل قيد الدراسة ، ووجود نوكليوتيد فريد وتسلسل الأحماض الأمينية المقابلة ، للحصول على الأجسام المضادة أحادية النسيلة المعادلة. بالإضافة إلى ذلك ، يجب أن يتم إنتاج الجزيء الجديد بواسطة خلايا الجهاز المناعي (الخلايا الليمفاوية أو الخلايا الوحيدة أو أنواع أخرى من الكريات البيض) ، ولها وظيفة بيولوجية مهمة في تنظيم الاستجابة المناعية ، بالإضافة إلى وظائف إضافية ، وهذا هو السبب في أنها لا تستطيع الحصول على اسم وظيفي. أخيرًا ، يجب نشر الخصائص المدرجة للإنترلوكين الجديد في مجلة علمية محكمة. يمكن تصنيف السيتوكينات وفقًا لخصائصها البيوكيميائية والبيولوجية ، وكذلك حسب أنواع المستقبلات التي تؤدي من خلالها السيتوكينات وظائفها البيولوجية. لا يأخذ تصنيف السيتوكينات حسب التركيب (الجدول 1) في الحسبان تسلسل الأحماض الأمينية فحسب ، بل يأخذ في الاعتبار قبل كل شيء البنية الثلاثية للبروتين ، والتي تعكس بدقة أكبر الأصل التطوري للجزيئات.

الجدول 1. تصنيف السيتوكينات حسب الهيكل.

أظهر استنساخ الجينات وتحليل بنية مستقبلات السيتوكين أنه ، تمامًا مثل السيتوكينات نفسها ، يمكن تقسيم هذه الجزيئات إلى عدة أنواع وفقًا لتشابه تسلسل الأحماض الأمينية وخصائص تنظيم المجالات خارج الخلية (الجدول 2). واحدة من أكبر عائلات مستقبلات السيتوكين تسمى عائلة مستقبلات الهيماتوبويتين أو عائلة مستقبلات السيتوكين من النوع الأول. الميزة الهيكلية لهذه المجموعة من المستقبلات هي وجود 4 سيستين في جزيء وتسلسل الأحماض الأمينية Trp-Ser-X-Trp-Ser (WSXWS) ، الموجود على مسافة قصيرة من غشاء الخلية. تتفاعل مستقبلات السيتوكينات من الفئة الثانية مع الإنترفيرون و IL-10. كلا النوعين الأول من المستقبلات لهما تماثل مع بعضهما البعض. تتوسط مجموعات المستقبلات التالية التفاعل مع السيتوكينات لعائلة عامل نخر الورم وعائلة IL-1. حاليًا ، من المعروف أن أكثر من 20 مستقبلًا كيميائيًا مختلفًا تتفاعل بدرجات متفاوتة من التقارب مع واحد أو أكثر من روابط عائلة كيموكين. تنتمي مستقبلات Chemokine إلى فصيلة مستقبلات رودوبسين الفائقة ، ولها 7 مجالات عبر الغشاء وتوصيل إشارة بمشاركة بروتينات G.

الجدول 2. تصنيف مستقبلات السيتوكين.

تتكون العديد من مستقبلات السيتوكين من 2-3 وحدات فرعية مشفرة بواسطة جينات مختلفة ويتم التعبير عنها بشكل مستقل. في هذه الحالة ، يتطلب تكوين مستقبل عالي التقارب التفاعل المتزامن لجميع الوحدات الفرعية. مثال على مثل هذا التنظيم لمستقبلات السيتوكين هو هيكل معقد مستقبلات IL-2. كان من المثير للدهشة اكتشاف حقيقة أن الوحدات الفرعية الفردية لمركب مستقبل IL-2 شائعة في IL-2 وبعض السيتوكينات الأخرى. وبالتالي ، فإن سلسلة β هي في الوقت نفسه مكونًا لمستقبل IL-15 ، وتعمل السلسلة γ كوحدة فرعية مشتركة لمستقبلات IL-2 و IL-4 و IL-7 و IL-9 و IL- 15 و IL-21. هذا يعني أن جميع السيتوكينات المذكورة أعلاه ، والتي تتكون مستقبلاتها أيضًا من 2-3 بولي ببتيدات فردية ، تستخدم سلسلة γ كمكون لمستقبلاتها ، علاوة على ذلك ، مكون مسؤول عن نقل الإشارة. في جميع الحالات ، يتم توفير خصوصية التفاعل لكل سيتوكين بواسطة وحدات فرعية أخرى تختلف في الهيكل. من بين مستقبلات السيتوكين ، هناك وحدتان فرعيتان أكثر شيوعًا للمستقبلات التي توصل إشارة بعد التفاعل مع السيتوكينات المختلفة. إنها وحدة فرعية شائعة لمستقبلات βc (gp140) لمستقبلات IL-3 و IL-5 و GM-CSF ، بالإضافة إلى الوحدة الفرعية لمستقبلات gp130 ، الشائعة لأفراد عائلة IL-6. إن وجود وحدة فرعية مشتركة للإشارة في مستقبلات السيتوكين بمثابة أحد الأساليب لتصنيفها ، حيث أنه يسمح للمرء بإيجاد قواسم مشتركة في كل من بنية الترابط والتأثيرات البيولوجية.

يوضح الجدول 3 التصنيف الهيكلي والوظيفي المشترك ، حيث يتم تقسيم جميع السيتوكينات إلى مجموعات ، مع مراعاة نشاطها البيولوجي في المقام الأول ، بالإضافة إلى السمات الهيكلية المذكورة أعلاه لجزيئات السيتوكينات ومستقبلاتها.

الجدول 3. التصنيف الهيكلي والوظيفي للسيتوكينات.

	عائلات السيتوكينات	المجموعات الفرعية والروابط	الوظائف البيولوجية الأساسية
	اكتب أنا الإنترفيرون	IFN a ، b ، d ، k ، w ، t ، IL-28 ، IL-29 (IFN l)	نشاط مضاد للفيروسات ، مضاد للتكاثر ، عمل مناعي
	عوامل نمو الخلايا المكونة للدم	عامل الخلايا الجذعية (مجموعة ترابطية ، عامل فولاذي) ، يجند Flt-3 ، G-CSF ، M-CSF ، IL-7 ، IL-11 روابط GP140: IL-3 ، IL-5 ، GM-KSF	تحفيز التكاثر والتمايز لأنواع مختلفة من الخلايا السلفية في نخاع العظم ، وتفعيل تكون الدم إرثروبويتين ، ثرومبوبويتين
	عائلة الإنترلوكين 1 و FRF	عائلة FRF: حامض FRF ، FRF أساسي ، FRF3 - FRF23 عائلة IL-1 (F1-11): IL-1α ، IL-1β ، مضاد مستقبل IL-1 ، IL-18 ، IL-33 ، إلخ.	تفعيل تكاثر الخلايا الليفية والخلايا الظهارية عمل مضاد للالتهابات ، تنشيط مناعة محددة
	عائلة عامل نخر الورم	TNF ، lymphotoxins α و ، يجند فاس ، إلخ.	العمل المؤيد للالتهابات ، وتنظيم موت الخلايا المبرمج والتفاعل بين الخلايا للخلايا ذات الكفاءة المناعية
	عائلة انترلوكين 6	روابط GP130: IL-6 ، IL-11 ، IL-31 ، Oncostatin-M ، Cardiotropin-1 ، عامل تثبيط اللوكيميا ، عامل التغذية العصبية الهدبية	التأثيرات المضادة للالتهابات والمناعة
	كيموكينيس	SS ، SXS (IL-8) ، SX3S ، S.	تنظيم الانجذاب الكيميائي لأنواع مختلفة من الكريات البيض
	عائلة انترلوكين 10	IL-10،19،20،22،24،26	عمل مثبط للمناعة
	عائلة انترلوكين 12		تنظيم تمايز الخلايا اللمفاوية التائية المساعدة
	السيتوكينات من الحيوانات المستنسخة T-helper والوظائف التنظيمية للخلايا الليمفاوية	T-helpers النوع 1: IL-2 ، IL-15 ، IL-21 ، IFNg T-helpers النوع 2: IL-4 ، IL-5 ، IL-10 ، IL-13 روابط سلسلة مستقبلات IL-2: IL-7 TSLP	تفعيل المناعة الخلوية تفعيل المناعة الخلطية ، تأثير مناعي تحفيز التمايز والتكاثر والخصائص الوظيفية لأنواع مختلفة من الخلايا الليمفاوية ، DC ، الخلايا القاتلة الطبيعية ، الضامة ، إلخ.
	عائلة انترلوكين 17	IL-17A ، B ، C ، D ، E ، F	تفعيل تخليق السيتوكينات المؤيدة للالتهابات
	الفصيلة الفائقة من عامل نمو الأعصاب وعامل نمو الصفائح الدموية وتحويل عوامل النمو	عائلة عامل نمو الأعصاب: NGF ، عامل التغذية العصبية للدماغ عوامل النمو المشتقة من الصفيحات (PDGF) ، وعوامل النمو الوعائية (VEGF) عائلة TRF: TPPb ، أكتيفينز ، إيبينينز ، عقدي ، بروتينات مُشكِّلة للعظام ، مادة مثبطة مولر	تنظيم الالتهاب وتكوين الأوعية الدموية والوظيفة العصبية والتطور الجنيني وتجديد الأنسجة
	عائلة عامل نمو البشرة	ERF ، TRFα ، إلخ.
	عائلة من عوامل النمو الشبيهة بالأنسولين	IRF-I ، IRF-II	تحفيز تكاثر أنواع الخلايا المختلفة

تتضمن المجموعة الأولى إنترفيرون من النوع الأول وهي الأبسط في التنظيم ، حيث أن جميع الجزيئات المتضمنة فيها لها هيكل مماثل وفي كثير من النواحي نفس الوظائف المرتبطة بالحماية المضادة للفيروسات. المجموعة الثانية تضمنت عوامل النمو والتمايز للخلايا المكونة للدم ، وتحفيز نمو الخلايا المكونة للدم انطلاقا من الخلية الجذعية. تشتمل هذه المجموعة على السيتوكينات المحددة بشكل ضيق للخطوط الفردية لتمايز الخلايا المكونة للدم (إرثروبويتين ، وثرومبوبويتين ، وإنترلوكين -7 ، التي تعمل على سلائف الخلايا الليمفاوية لمرض السل) ، بالإضافة إلى السيتوكينات ذات طيف أوسع من النشاط البيولوجي ، مثل IL-3 ، IL-11 ، عوامل تحفيز المستعمرات. ضمن هذه المجموعة من السيتوكينات ، تم عزل ligands gp140 ، والتي لها وحدة فرعية مشتركة للمستقبلات ، وكذلك ثرومبوبويتين وإريثروبويتين بسبب تشابه التنظيم الهيكلي للجزيئات. السيتوكينات من FGF و IL-1 الفائقة لها درجة عالية من التماثل وبنية مماثلة من البروتينات ، مما يؤكد الأصل المشترك. ومع ذلك ، من حيث مظاهر النشاط البيولوجي ، يختلف FGF في كثير من النواحي عن ناهضات عائلة IL-1. تحتوي عائلة جزيئات IL-1 حاليًا ، بالإضافة إلى الأسماء الوظيفية ، على التعيينات F1-F11 ، حيث يتوافق F1 مع IL-1α ، F2 إلى IL-1β ، F3 مع مستقبل مستقبل IL-1 ، F4 إلى IL- 18. تم اكتشاف بقية أفراد الأسرة نتيجة للتحليل الجيني ولديهم تناظر مرتفع إلى حد ما مع جزيئات IL-1 ؛ ومع ذلك ، لم يتم توضيح وظائفهم البيولوجية بشكل كامل. تشتمل مجموعات السيتوكينات الأخرى على عائلات IL-6 (روابط الوحدة الفرعية للمستقبلات المشتركة gp130) ، وعامل نخر الورم والكيموكينات ، والتي يتم تمثيلها بأكبر عدد من الروابط الفردية ويتم سردها بالكامل في الفصول المعنية. تتشكل عائلة عامل نخر الورم أساسًا على أساس التشابه في بنية الروابط ومستقبلاتها ، والتي تتكون من ثلاث وحدات فرعية متطابقة غير مرتبطة تساهميًا تشكل جزيئات نشطة بيولوجيًا. في الوقت نفسه ، من حيث الخصائص البيولوجية ، تشتمل هذه العائلة على السيتوكينات ذات الأنشطة المختلفة نوعًا ما. على سبيل المثال ، يعتبر عامل نخر الورم أحد ألمع السيتوكينات المسببة للالتهابات ، ويؤدي رابط Fas إلى موت الخلايا المبرمج للخلايا المستهدفة ، ويوفر يجند CD40 إشارة محفزة أثناء التفاعل بين الخلايا للخلايا اللمفاوية التائية والبائية. يتم تحديد هذه الاختلافات في النشاط البيولوجي للجزيئات المتشابهة هيكليًا بشكل أساسي من خلال سمات التعبير وهيكل مستقبلاتها ، على سبيل المثال ، وجود أو عدم وجود مجال "موت" داخل الخلايا ، والذي يحدد موت الخلايا المبرمج. تم أيضًا تجديد عائلات IL-10 و IL-12 في السنوات الأخيرة بأعضاء جدد تلقوا أرقامًا مسلسلة من الإنترلوكين. ويتبع ذلك مجموعة معقدة للغاية من السيتوكينات ، وهي وسطاء للنشاط الوظيفي للخلايا الليمفاوية التائية المساعدة. يعتمد التضمين في هذه المجموعة على مبدأين أساسيين: 1) الانتماء إلى السيتوكينات المُصنَّعة بواسطة Th1 أو Th2 ، والتي تحدد تطور النوع الخلطي أو الخلوي في الغالب من التفاعلات المناعية ، 2) وجود وحدة فرعية مشتركة لمستقبلات - سلسلة جاما من مجمع مستقبلات IL-2. من بين روابط سلسلة جاما ، تم عزل IL-4 بشكل إضافي ، والذي يحتوي أيضًا على وحدات فرعية مشتركة مع IL-13 ، والتي تحدد إلى حد كبير النشاط البيولوجي المتداخل جزئيًا لهذه السيتوكينات. تم عزل IL-7 ، الذي يحتوي على بنية مشتركة من المستقبلات مع TSLP ، بطريقة مماثلة. ترتبط مزايا التصنيف أعلاه بالدراسة المتزامنة للخصائص البيولوجية والكيميائية الحيوية للسيتوكينات. يتم تأكيد جدوى هذا النهج حاليًا من خلال اكتشاف السيتوكينات الجديدة عن طريق التحليل الجيني للجينوم والبحث عن الجينات المماثلة هيكليًا. بفضل هذه الطريقة ، توسعت عائلة الإنترفيرون من النوع الأول ، IL-1 ، IL-10 ، IL-12 بشكل كبير ، ظهرت عائلة جديدة من السيتوكينات التماثلية IL-17 ، تتكون بالفعل من 6 أعضاء. على ما يبدو ، في المستقبل القريب ، سيحدث ظهور السيتوكينات الجديدة بشكل أبطأ بكثير ، حيث أن تحليل الجينوم البشري قد اكتمل تقريبًا. من المرجح أن تكون التغييرات ممكنة بسبب توضيح متغيرات تفاعلات مستقبلات الترابط والخصائص البيولوجية ، والتي ستسمح بتصنيف السيتوكينات للحصول على الشكل النهائي.

آليات العمل.

مستقبلات السيتوكينات B. السيتوكينات عبارة عن مواد تأشير محبة للماء ، يتوسط عملها مستقبلات محددة على السطح الخارجي لغشاء البلازما. يؤدي ارتباط السيتوكينات بالمستقبل (1) عبر عدد من المراحل الوسيطة (2-5) إلى تنشيط نسخ جينات معينة (6) ، ولا تمتلك مستقبلات السيتوكين نفسها نشاط التيروزين كيناز (مع استثناءات قليلة). بعد الارتباط بالسيتوكين (1) ، ترتبط جزيئات المستقبل لتشكيل متجانسات. بالإضافة إلى ذلك ، يمكنهم تكوين مقاييس غير متجانسة عن طريق الارتباط ببروتينات نقل الإشارة [STPs] أو تحفيز ثنائي مفعول BPSs نفسها (2). يمكن أن تتجمع مستقبلات السيتوكينات من الفئة الأولى مع ثلاثة أنواع من BPS: البروتينات GP130 أو βc أو c. هذه البروتينات المساعدة نفسها ليست قادرة على ربط السيتوكينات ، لكنها تقوم بنقل الإشارة إلى كينازات التيروزين (3). نفس أطياف النشاط البيولوجي للعديد من السيتوكينات يمكن تفسيرها من خلال حقيقة أن مجمعات مستقبلات السيتوكينات المختلفة يمكنها تنشيط نفس BPS.

كمثال على تحويل الإشارة من السيتوكينات ، يوضح الرسم التخطيطي كيف أن مستقبل IL-6 (IL-6) ، بعد الارتباط بالرابط (1) ، يحفز تضاعف GP130 (2). يربط ثنائي البروتين الغشائي GP130 وينشط كيناز التيروزين السيتوبلازمي لعائلة YK (جانوس كينازات مع موقعين نشطين) (3). Janus kinases phosphorylate cytokine receptors، BPS، والعديد من البروتينات السيتوبلازمية التي تقوم بمزيد من نقل الإشارات؛ هم أيضًا عوامل النسخ الفسفورية - محولات الإشارة ومنشطات النسخ [PSAT (STAT ، من محولات الإشارة الإنجليزية ومنشطات النسخ)]. تنتمي هذه البروتينات إلى عائلة BPS ، والتي لها مجال SH3 في بنيتها التي تتعرف على بقايا الفوسفوتيروزين (انظر ص 372). لذلك ، لديهم خاصية الارتباط بمستقبل السيتوكين الفسفوري. إذا حدث بعد ذلك فسفرة جزيء PSAT (4) ، يتحول العامل إلى شكل نشط ويشكل ثنائى (5). بعد الانتقال إلى النواة ، يرتبط الثنائى ، كعامل نسخ ، بالمحفز (انظر ص 240) للجين المبتدئ ويحث على نسخه. (غير مبين في الرسم التخطيطي). يدخل المجال الدم ، حيث يتنافس على الارتباط بالسيتوكين ، مما يقلل من تركيز السيتوكينات في الدم ، وتشكل السيتوكينات معًا شبكة تنظيمية (سلسلة السيتوكين) ذات تأثير متعدد الوظائف. يؤدي التداخل بين السيتوكينات إلى حقيقة أن التآزر لوحظ في عمل العديد منها ، وبعض السيتوكينات هي مضادات. غالبًا ما يمكن ملاحظة سلسلة السيتوكين بأكملها مع ردود الفعل المعقدة في الجسم.

خصائص السيتوكينات.

الخصائص العامة للسيتوكينات ، والتي يمكن من خلالها دمج هؤلاء الوسطاء في نظام تنظيمي مستقل.

1. السيتوكينات عبارة عن بروتينات متعددة البيبتيدات ، وغالبًا ما تكون غليكوزيلاتيد ، ومعظمها يحتوي على ميغاواط من 5 إلى 50 كيلو دالتون. يمكن أن تتكون جزيئات السيتوكينات النشطة بيولوجيًا من وحدة أو اثنتين أو ثلاثة أو أكثر من الوحدات الفرعية المتماثلة أو المختلفة.

2. السيتوكينات ليس لديها خصوصية مستضدية للعمل البيولوجي. أنها تؤثر على النشاط الوظيفي للخلايا المشاركة في ردود فعل المناعة الفطرية والمكتسبة. ومع ذلك ، من خلال العمل على الخلايا الليمفاوية T و B ، تكون السيتوكينات قادرة على تحفيز العمليات التي يسببها المستضد في جهاز المناعة.

3. بالنسبة لجينات السيتوكين ، هناك ثلاثة متغيرات للتعبير: أ) تعبير خاص بالمرحلة في مراحل معينة من التطور الجنيني ، ب) التعبير التأسيسي لتنظيم عدد من الوظائف الفسيولوجية الطبيعية ، ج) نوع محفز من التعبير المميز لمعظم السيتوكينات. في الواقع ، لا يتم تصنيع معظم السيتوكينات خارج الاستجابة الالتهابية والاستجابة المناعية بواسطة الخلايا. يبدأ التعبير عن جينات السيتوكين استجابة لاختراق مسببات الأمراض في الجسم ، أو تهيج المستضدات أو تلف الأنسجة. تعتبر الهياكل الجزيئية المرتبطة بالعوامل الممرضة من بين المحرضات الأكثر فاعلية لتخليق السيتوكينات المسببة للالتهابات. لتحفيز تخليق السيتوكينات للخلايا التائية ، يلزم تنشيط الخلايا بواسطة مستضد معين بمشاركة مستقبلات مستضد الخلايا التائية.

4. يتم تصنيع السيتوكينات استجابة للتحفيز لفترة قصيرة من الزمن. تم إنهاء التخليق بسبب مجموعة متنوعة من آليات التنظيم الذاتي ، بما في ذلك زيادة عدم استقرار الحمض النووي الريبي ، وبسبب وجود ردود فعل سلبية بوساطة البروستاجلاندين وهرمونات الكورتيكوستيرويد وعوامل أخرى.

5. يمكن إنتاج نفس السيتوكين بواسطة أنواع مختلفة من الخلايا في الجسم في أعضاء مختلفة من أصل نسجي.

6. يمكن أن ترتبط السيتوكينات بأغشية الخلايا التي تصنعها ، والتي تمتلك في شكل غشاء مجموعة كاملة من النشاط البيولوجي وتظهر عملها البيولوجي أثناء الاتصال بين الخلايا.

7. يتم التوسط في التأثيرات البيولوجية للسيتوكينات من خلال مجمعات مستقبلات خلوية محددة تربط السيتوكينات بتقارب عالٍ جدًا ، ويمكن للسيتوكينات الفردية استخدام وحدات فرعية مشتركة من المستقبلات. يمكن أن توجد مستقبلات السيتوكين في شكل قابل للذوبان ، مع الاحتفاظ بالقدرة على ربط الروابط.

8. السيتوكينات لها عمل بيولوجي متعدد الاتجاهات. يمكن أن يعمل نفس السيتوكين على العديد من أنواع الخلايا ، مما يتسبب في تأثيرات مختلفة اعتمادًا على نوع الخلايا المستهدفة (الشكل 1). يتم ضمان عمل السيتوكينات متعدد الاتجاهات من خلال التعبير عن مستقبلات السيتوكين في أنواع الخلايا ذات الأصول والوظائف المختلفة وتوصيل الإشارة باستخدام العديد من الرسل المختلفة داخل الخلايا وعوامل النسخ.

9. تتميز السيتوكينات بإمكانية تبادل العمل البيولوجي. يمكن أن تسبب العديد من السيتوكينات المختلفة نفس التأثير البيولوجي أو لها أنشطة مماثلة. تحفز السيتوكينات أو تمنع تخليق نفسها ، السيتوكينات الأخرى ومستقبلاتها.

10. استجابة لإشارة التنشيط ، تقوم الخلايا في نفس الوقت بتجميع العديد من السيتوكينات المشاركة في تكوين شبكة السيتوكين. تعتمد التأثيرات البيولوجية في الأنسجة وعلى مستوى الجسم على وجود وتركيز السيتوكينات الأخرى مع تأثيرات تآزرية أو مضافة أو معاكسة.

11. يمكن أن تؤثر السيتوكينات على الانتشار والتمايز والنشاط الوظيفي للخلايا المستهدفة.

12. تعمل السيتوكينات على الخلايا بطرق مختلفة: الأوتوكرين - على الخلية التي تصنع وتفرز هذا السيتوكين. paracrine - على الخلايا الموجودة بالقرب من الخلية المنتجة ، على سبيل المثال ، في بؤرة الالتهاب أو في العضو اللمفاوي ؛ الغدد الصماء - بعيدًا عن خلايا أي أعضاء وأنسجة بعد دخولها الدورة الدموية. في الحالة الأخيرة ، يشبه عمل السيتوكينات عمل الهرمونات (الشكل 2).

أرز. 1. يمكن إنتاج نفس السيتوكين بواسطة أنواع مختلفة من الخلايا في الجسم في أعضاء مختلفة من أصل نسجي ، ويعمل على العديد من أنواع الخلايا ، مما يتسبب في تأثيرات مختلفة اعتمادًا على نوع الخلايا المستهدفة.

أرز. 2. ثلاثة متغيرات من مظاهر العمل البيولوجي للسيتوكينات.

على ما يبدو ، حدث تكوين نظام تنظيم السيتوكينات تطوريًا جنبًا إلى جنب مع تطور الكائنات متعددة الخلايا وكان بسبب الحاجة إلى تكوين وسطاء للتفاعل بين الخلايا ، والتي قد تشمل الهرمونات والببتيدات العصبية وجزيئات الالتصاق وبعضها الآخر. في هذا الصدد ، تعتبر السيتوكينات أكثر الأنظمة التنظيمية تنوعًا ، حيث إنها قادرة على إظهار النشاط البيولوجي بعيدًا بعد إفراز الخلية المنتجة (محليًا ونظاميًا) ، وأثناء الاتصال بين الخلايا ، كونها نشطة بيولوجيًا في شكل غشاء. هذه هي الطريقة التي يختلف بها نظام السيتوكين عن جزيئات الالتصاق ، التي تؤدي وظائف أضيق فقط عندما تكون الخلايا على اتصال مباشر. في الوقت نفسه ، يختلف نظام السيتوكين عن الهرمونات ، التي يتم تصنيعها بشكل أساسي بواسطة أجهزة متخصصة وتعمل بعد دخولها في نظام الدورة الدموية.

دور السيتوكينات في تنظيم الوظائف الفسيولوجية للجسم.

يمكن تقسيم دور السيتوكينات في تنظيم الوظائف الفسيولوجية للجسم إلى 4 مكونات رئيسية:

1. تنظيم التطور الجنيني ، وإنشاء وتطوير الأعضاء ، بما في ذلك. أعضاء جهاز المناعة.

2. تنظيم بعض الوظائف الفسيولوجية الطبيعية.

3. تنظيم ردود الفعل الدفاعية للجسم على المستوى المحلي والنظامي.

4. تنظيم عمليات تجديد الأنسجة.

يحدث التعبير عن جينات السيتوكينات الفردية بمرحلة معينة في مراحل معينة من التطور الجنيني. عامل الخلايا الجذعية ، عوامل النمو المحولة ، السيتوكينات لعائلة TNF والكيموكينات تنظم التمايز والهجرة بين الخلايا المختلفة وتكوين أعضاء الجهاز المناعي. بعد ذلك ، قد لا يتم استئناف تركيب بعض السيتوكينات ، بينما يستمر البعض الآخر في تنظيم العمليات الفسيولوجية الطبيعية أو المشاركة في تطوير ردود الفعل الوقائية.

على الرغم من حقيقة أن معظم السيتوكينات عبارة عن وسطاء محفزين نموذجيين وفي فترة ما بعد الولادة لا يتم تصنيعها بواسطة خلايا خارج الاستجابة الالتهابية والاستجابة المناعية ، فإن بعض السيتوكينات لا تندرج تحت هذه القاعدة. نتيجة للتعبير التأسيسي للجينات ، يتم تصنيع بعضها باستمرار وبكميات كبيرة بما يكفي في التداول ، مما ينظم تكاثر وتمايز أنواع معينة من الخلايا طوال الحياة. يمكن أن تكون الأمثلة على هذا النوع من التنظيم الفسيولوجي للوظائف بواسطة السيتوكينات ارتفاعًا مستمرًا في مستوى الإريثروبويتين وبعض CSFs لضمان تكون الدم. لا يحدث تنظيم ردود الفعل الدفاعية للجسم بواسطة السيتوكينات داخل الجهاز المناعي فحسب ، بل يحدث أيضًا عن طريق تنظيم ردود الفعل الدفاعية على مستوى الكائن الحي بأكمله من خلال تنظيم جميع جوانب تطور الالتهاب والاستجابة المناعية تقريبًا. ترتبط هذه الوظيفة ، التي تعتبر الأكثر أهمية لنظام السيتوكين بأكمله ، بالاتجاهين الرئيسيين للعمل البيولوجي للسيتوكينات - الحماية من العوامل المعدية واستعادة الأنسجة التالفة. تنظم السيتوكينات بشكل أساسي تطور تفاعلات الدفاع المحلية في الأنسجة بمشاركة أنواع مختلفة من خلايا الدم والبطانة والأنسجة الضامة والظهارة. تتطور الحماية على المستوى المحلي من خلال تكوين تفاعل التهابي نموذجي بمظاهره الكلاسيكية: احتقان الدم ، وتطور الوذمة ، وظهور الألم والخلل الوظيفي. يبدأ تخليق السيتوكينات عندما تدخل مسببات الأمراض الأنسجة أو تنتهك سلامتها ، والتي عادة ما تستمر بالتوازي. يعد إنتاج السيتوكينات جزءًا لا يتجزأ من الاستجابة الخلوية المرتبطة بالتعرف على سلسلة الخلايا النخاعية للمكونات الهيكلية المتشابهة لمسببات الأمراض المختلفة ، والتي تسمى الأنماط الجزيئية المرتبطة بمسببات الأمراض. ومن الأمثلة على هذه الهياكل الممرضة عديدات السكاريد الدهنية للبكتيريا سالبة الجرام ، والببتيدوغليكان للكائنات الدقيقة إيجابية الجرام ، والسوط أو الحمض النووي الغني بتسلسل CpolyG ، وهو نموذجي للحمض النووي لجميع أنواع البكتيريا. تعبر الكريات البيضاء عن مستقبلات التعرف على الأنماط المقابلة ، وتسمى أيضًا المستقبلات الشبيهة بالرصد (TLR) ، ومخصصة لأنماط هيكلية معينة من الكائنات الحية الدقيقة. بعد تفاعل الكائنات الحية الدقيقة أو مكوناتها مع TLR ، يتم تشغيل سلسلة نقل الإشارة داخل الخلايا ، مما يؤدي إلى زيادة النشاط الوظيفي للكريات البيض والتعبير عن جينات السيتوكين.

يؤدي تنشيط TLR إلى تخليق مجموعتين رئيسيتين من السيتوكينات: السيتوكينات المنشطة للالتهابات والنوع الأول من الإنترفيرونات ، وبشكل رئيسي IFNα /. تطوير تفاعل التهابي وتوفير توسع يشبه المروحة لتنشيط أنواع مختلفة من الخلايا المشاركة في الصيانة وتنظيم الالتهاب ، بما في ذلك جميع أنواع الكريات البيض والخلايا التغصنية والخلايا اللمفاوية التائية والبائية والخلايا القاتلة الطبيعية والخلايا البطانية والظهارية والأرومات الليفية وغيرها. يوفر هذا مراحل متسقة في تطوير الاستجابة الالتهابية ، وهي الآلية الرئيسية لتنفيذ المناعة الفطرية. بالإضافة إلى ذلك ، يبدأ تخليق السيتوكينات لعائلة IL-12 بواسطة الخلايا المتغصنة ، مما يحفز تمايز الخلايا الليمفاوية التائية المساعدة ، والتي تعمل كنوع من الجسر لبداية تطور تفاعلات مناعية محددة مرتبطة بالتعرف على أنواع محددة الهياكل المستضدية للكائنات الحية الدقيقة.

تضمن الآلية الثانية التي لا تقل أهمية المرتبطة بتوليف IFN تنفيذ الحماية المضادة للفيروسات. تُظهر الإنترفيرون من النوع الأول 4 خصائص بيولوجية رئيسية:

1. عمل مضاد للفيروسات مباشر عن طريق منع النسخ.

2. منع تكاثر الخلايا ضروري لمنع انتشار الفيروس.

3. تفعيل وظائف الخلايا القاتلة الطبيعية التي لديها القدرة على تحليل خلايا الجسم المصابة بالفيروس.

4. التعبير المحسن عن الجزيئات المعقدة ذات التوافق النسيجي الرئيسية من الفئة الأولى المطلوبة لزيادة كفاءة عرض المستضدات الفيروسية بواسطة الخلايا المصابة على الخلايا اللمفاوية التائية السامة للخلايا. يؤدي هذا إلى تنشيط التعرف المحدد على الخلايا المصابة بالفيروس بواسطة الخلايا اللمفاوية التائية - المرحلة الأولى من تحلل الخلايا المستهدفة المصابة بالفيروس.

نتيجة لذلك ، بالإضافة إلى التأثير المباشر المضاد للفيروسات ، يتم تنشيط آليات كل من المناعة الفطرية (الخلايا القاتلة الطبيعية) والمناعة المكتسبة (الخلايا اللمفاوية التائية). هذا مثال على كيفية قدرة جزيء خلوي صغير واحد مع MM 10 مرات أقل من MM من جزيئات الجسم المضاد على تنشيط آليات مختلفة تمامًا للتفاعلات الدفاعية بسبب النوع متعدد الاتجاهات من العمل البيولوجي ، والذي يهدف إلى تحقيق هدف واحد - إزالة الفيروس الذي يحتوي على دخلت الجسد.

على مستوى الأنسجة ، تكون السيتوكينات مسؤولة عن تطور الالتهاب ثم تجدد الأنسجة. مع تطور تفاعل التهابي جهازي (استجابة المرحلة الحادة) ، تؤثر السيتوكينات على جميع أعضاء وأنظمة الجسم تقريبًا المشاركة في تنظيم التوازن. يؤدي عمل السيتوكينات المنشطة للالتهابات على الجهاز العصبي المركزي إلى انخفاض الشهية وتغيير في مجمع التفاعلات السلوكية بالكامل. يعد إيقاف البحث عن الطعام مؤقتًا وتقليل النشاط الجنسي مفيدًا من حيث توفير الطاقة لمهمة واحدة - لمحاربة مسببات الأمراض الغازية. يتم توفير هذه الإشارة عن طريق السيتوكينات ، نظرًا لأن دخولها في الدورة الدموية يعني بالتأكيد أن الدفاع المحلي لم يتعامل مع العامل الممرض ، وأن تنشيط الاستجابة الالتهابية الجهازية مطلوب. أحد المظاهر الأولى للتفاعل الالتهابي الجهازي المرتبط بعمل السيتوكينات على مركز التنظيم الحراري في منطقة ما تحت المهاد هو زيادة درجة حرارة الجسم. تعد الزيادة في درجة الحرارة تفاعلًا وقائيًا فعالًا ، حيث تقل قدرة عدد من البكتيريا على التكاثر في درجات الحرارة المرتفعة ، ولكن على العكس من ذلك ، يزداد تكاثر الخلايا الليمفاوية.

في الكبد ، تحت تأثير السيتوكينات ، يزداد تخليق بروتينات المرحلة الحادة ومكونات النظام التكميلي الضروري لمحاربة العامل الممرض ، ولكن في نفس الوقت ينخفض ​​تخليق الألبومين. مثال آخر على الفعل الانتقائي للسيتوكينات هو التغيير في التركيب الأيوني لبلازما الدم أثناء تطور تفاعل التهابي جهازي. في الوقت نفسه ، هناك انخفاض في مستوى أيونات الحديد ، ولكن هناك زيادة في مستوى أيونات الزنك ، ومن المعروف أن حرمان الخلية البكتيرية من أيونات الحديد يعني تقليل قدرتها على التكاثر (عمل اللاكتوفيرين هو بناء على هذا). من ناحية أخرى ، فإن الزيادة في مستويات الزنك ضرورية لسير الجهاز المناعي بشكل طبيعي ، على وجه الخصوص ، من الضروري تكوين عامل الغدة الصعترية النشط بيولوجيًا - أحد هرمونات الغدة الصعترية الرئيسية التي تضمن تمايز الخلايا الليمفاوية. يرتبط تأثير السيتوكينات على نظام المكونة للدم بتنشيط كبير لتكوين الدم. من الضروري زيادة عدد الكريات البيض لتجديد الخسارة وزيادة عدد الخلايا ، وخاصة الخلايا الحبيبية العدلات ، في بؤرة الالتهاب القيحي. يهدف العمل على نظام تخثر الدم إلى تعزيز قابلية التخثر ، وهو أمر ضروري لوقف النزيف ومنع العوامل الممرضة مباشرة.

وهكذا ، مع تطور الالتهاب الجهازي ، تعرض السيتوكينات مجموعة كبيرة من الأنشطة البيولوجية وتتداخل مع عمل جميع أجهزة الجسم تقريبًا. ومع ذلك ، فإن أيًا من التغييرات التي تحدث ليست ذات طبيعة عشوائية: فجميعها إما مطلوبة للتفعيل المباشر للتفاعلات الدفاعية أو مفيدة من حيث تبديل تدفقات الطاقة لمهمة واحدة فقط - لمحاربة العامل الممرض الغازي. في شكل تنظيم التعبير عن الجينات الفردية ، والتحولات الهرمونية والتغيرات في التفاعلات السلوكية ، تضمن السيتوكينات التنشيط والكفاءة القصوى لعمل أنظمة الجسم المطلوبة في وقت معين لتطوير ردود الفعل الوقائية. على مستوى الكائن الحي بأكمله ، تتواصل السيتوكينات بين الجهاز المناعي والجهاز العصبي والغدد الصماء والدم وأنظمة أخرى وتعمل على إشراكهم في تنظيم وتنظيم رد فعل دفاعي واحد. السيتوكينات هي على وجه التحديد النظام المنظم الذي يشكل وينظم المجموعة الكاملة من ردود الفعل الوقائية للجسم أثناء إدخال مسببات الأمراض. على ما يبدو ، تم تشكيل مثل هذا النظام من التنظيم تطوريًا وله فوائد غير مشروطة للاستجابة الوقائية المثلى للكائن الحي. لذلك ، من الواضح أنه من المستحيل قصر مفهوم ردود الفعل الدفاعية على مشاركة آليات مقاومة غير محددة واستجابة مناعية محددة. يشارك الجسم بأكمله وجميع الأنظمة التي لا ترتبط بالحفاظ على المناعة للوهلة الأولى في تفاعل وقائي واحد.

دراسات خاصة للسيتوكينات.

أهمية السيتوكينات في التسبب في أمراض التهاب القولون عند الأطفال.

S.V. بيلمر ، أ. Simbirtsev، O. V. جولوفينكو ، إل. بوبنوفا ، إل. كاربينا ، ني. Shchigoleva ، T.L. ميخائيلوفا. تعمل الجامعة الطبية الحكومية الروسية ومركز أبحاث القولون والمستقيم الحكومي في موسكو ومعهد أبحاث الدولة للبيولوجيا عالية النقاء في سانت بطرسبرغ على دراسة أهمية السيتوكينات في التسبب في أمراض التهاب القولون عند الأطفال. تحتل الأمراض الالتهابية المزمنة في الجهاز الهضمي حاليًا أحد الأماكن الرائدة في أمراض الجهاز الهضمي عند الأطفال. تعلق أهمية خاصة على الأمراض الالتهابية للقولون (IBD) ، والتي يتزايد حدوثها باطراد في جميع أنحاء العالم. مسار طويل مع انتكاسات متكررة ، وفي بعض الحالات قاتلة ، وتطور مضاعفات محلية وجهازية - كل هذا يدفع إلى دراسة شاملة لتسبب المرض بحثًا عن طرق جديدة لعلاج مرض التهاب الأمعاء. في العقود الأخيرة ، كان معدل حدوث التهاب القولون التقرحي (UC) 510 حالة في السنة لكل 100 ألف نسمة ، مع مرض كرون (CD) 16 حالة في السنة لكل 100 ألف من السكان. تتوافق معدلات الانتشار في روسيا ، في منطقة موسكو مع متوسط ​​البيانات الأوروبية ، ولكنها أقل بكثير مما هي عليه في الدول الاسكندنافية وأمريكا وإسرائيل وإنجلترا. بالنسبة لـ NUC ، يبلغ معدل الانتشار 19.3 لكل 100 ألف ، ويبلغ معدل الإصابة 1.2 لكل 100 ألف شخص سنويًا. بالنسبة للقرص المضغوط ، يبلغ معدل الانتشار 3.0 لكل 100 ألف ، ويبلغ معدل الإصابة 0.2 لكل 100 ألف شخص سنويًا. حقيقة أن أعلى معدل يتم ملاحظته في البلدان المتقدمة للغاية لا يرجع فقط إلى العوامل الاجتماعية والاقتصادية ، ولكن أيضًا إلى الخصائص الجينية والمناعية للمرضى ، والتي تحدد الاستعداد للإصابة بمرض التهاب الأمعاء. هذه العوامل أساسية في نظرية الوراثة المناعية لأصل مرض التهاب الأمعاء. تشرح النظريات الفيروسية و / أو البكتيرية فقط البداية الحادة للمرض ، ويرجع تأريخ العملية إلى كل من الاستعداد الوراثي وخصائص الاستجابة المناعية ، والتي يتم تحديدها أيضًا وراثيًا. تجدر الإشارة إلى أن IBTC مصنف حاليًا على أنه مرض له استعداد معقد غير متجانس وراثيًا. تم تحديد أكثر من 15 جينًا مرشحًا مفترضًا من مجموعتين (خاص مناعي وتنظيم مناعي) ، مما يسبب الاستعداد الوراثي. على الأرجح ، يتم تحديد الاستعداد من خلال عدة جينات تحدد طبيعة التفاعلات المناعية والالتهابية. استنادًا إلى نتائج العديد من الدراسات ، يمكن الاستنتاج أن التوطين الأكثر ترجيحًا للجينات المرتبطة بتطور IBT هو الكروموسومات 3 و 7 و 12 و 16. في الوقت الحالي ، يتم إيلاء الكثير من الاهتمام لدراسة ميزات وظيفة الخلايا الليمفاوية T و B ، بالإضافة إلى وسطاء الالتهاب الخلوي. تجري دراسة دور الإنترلوكينات (IL) ، والإنترفيرون (IFN) ، وعامل نخر الورم (TNF-a) ، والضامة والأجسام المضادة الذاتية لبروتينات الغشاء المخاطي للأمعاء الغليظة والنباتات الدقيقة الذاتية. تم الكشف عن خصائص اضطراباتهم في CD و UC ، ولكن لا يزال من غير الواضح ما إذا كانت هذه التغييرات تحدث بشكل أساسي أم ثانوي. لفهم العديد من جوانب التسبب في المرض ، ستكون الدراسات التي أجريت في المرحلة قبل السريرية من مرض التهاب الأمعاء ، وكذلك في الأقارب من الدرجة الأولى ، مهمة للغاية. من بين وسطاء الالتهاب ، دور خاص ينتمي إلى السيتوكينات ، وهي مجموعة من الجزيئات متعددة الببتيد بكتلة من 5 إلى 50 كيلو دالتون تشارك في تكوين وتنظيم ردود الفعل الدفاعية للجسم. على مستوى الجسم ، تتواصل السيتوكينات بين الجهاز المناعي والجهاز العصبي والغدد الصماء والدم وأنظمة أخرى وتعمل على إشراكهم في تنظيم وتنظيم ردود الفعل الدفاعية. يظهر تصنيف السيتوكينات في الجدول 2. لا يتم تصنيع معظم السيتوكينات بواسطة الخلايا خارج الاستجابة الالتهابية والاستجابة المناعية. يبدأ التعبير عن جينات السيتوكين استجابة لاختراق مسببات الأمراض في الجسم ، أو تهيج المستضدات أو تلف الأنسجة. من أقوى محفزات تخليق السيتوكين مكونات جدران الخلايا البكتيرية: LPS ، و peptidoglycans ، و muramyldipeptides. منتجي السيتوكينات المؤيدة للالتهابات هم بشكل رئيسي الخلايا الوحيدة ، الضامة ، الخلايا التائية ، إلخ. اعتمادًا على التأثير على العملية الالتهابية ، تنقسم السيتوكينات إلى مجموعتين: مؤيدة للالتهابات (IL-1 ، IL-6 ، IL-8 ، TNF-a ، IFN-g) ومضادات الالتهاب (IL-4 ، IL-10 ، TGF-b). Interleukin-1 (IL-1) هو وسيط منظم للمناعة يتم إطلاقه أثناء التفاعلات الالتهابية وتلف الأنسجة والالتهابات (السيتوكين المؤيد للالتهابات). يلعب IL-1 دورًا مهمًا في تنشيط الخلايا التائية عندما تتفاعل مع المستضد. هناك نوعان من IL-1: IL-1a و IL-1b ، وهما منتجان لموقعين جيني مختلفين يقعان على كروموسوم بشري 2. يبقى IL-1a داخل الخلية أو قد يكون في شكل غشاء ، ويظهر بكميات صغيرة في الفضاء خارج الخلية. يتمثل دور الشكل الغشائي لـ IL - 1a في نقل الإشارات المنشطة من البلاعم إلى الخلايا اللمفاوية التائية والخلايا الأخرى أثناء الاتصال بين الخلايا. IL - 1a هو الوسيط الرئيسي قصير المدى. على النقيض من IL-1a ، يتم إفراز IL-1b بشكل نشط بواسطة الخلايا ، والتي تعمل بشكل منهجي ومحلي. من المعروف اليوم أن IL-1 هو أحد الوسطاء الرئيسيين للتفاعلات الالتهابية ، ويحفز تكاثر الخلايا التائية ، ويزيد من التعبير عن مستقبلات IL-2 على الخلايا التائية وإنتاجها من IL-2. يحفز IL-2 مع المستضد تنشيط والالتصاق العدلات ، ويحفز تكوين السيتوكينات الأخرى (IL-2 ، IL-3 ، IL-6 ، إلخ) بواسطة الخلايا التائية النشطة والخلايا الليفية ، ويحفز تكاثر الخلايا الليفية والخلايا البطانية. بشكل منهجي ، يعمل IL-1 بشكل تآزري مع TNF-a و IL-6. مع زيادة التركيز في الدم ، يؤثر IL-1 على خلايا منطقة ما تحت المهاد ويسبب زيادة في درجة حرارة الجسم ، والحمى ، والنعاس ، وانخفاض الشهية ، كما يحفز خلايا الكبد على إنتاج بروتينات المرحلة الحادة (CRP ، amyloid A ، أ -2 ماكروغلوبولين والفيبرينوجين). IL4 (كروموسوم 5). يمنع تنشيط الضامة ويمنع العديد من التأثيرات التي يحفزها IFNg ، مثل إنتاج IL1 وأكسيد النيتريك والبروستاجلاندين ، ويلعب دورًا مهمًا في التفاعلات المضادة للالتهابات ، وله تأثير مثبط للمناعة. IL6 (كروموسوم 7) ، أحد السيتوكينات الرئيسية المسببة للالتهابات ، هو المحفز الرئيسي للمرحلة النهائية من تمايز الخلايا البائية والضامة ، وهو محفز قوي لإنتاج بروتينات المرحلة الحادة بواسطة خلايا الكبد. تتمثل إحدى الوظائف الرئيسية لـ IL6 في تحفيز إنتاج الأجسام المضادة في الجسم الحي وفي المختبر. IL8 (كروموسوم 4). يشير إلى الوسطاء الكيميائيون الذين يتسببون في الهجرة الموجهة (الانجذاب الكيميائي) للكريات البيض إلى تركيز الالتهاب. تتمثل الوظيفة الرئيسية لـ IL10 في تثبيط إنتاج السيتوكين حسب النوع الأول Thelpers (TNFb ، IFNg) والضامة المنشطة (TNF-a ، IL1 ، IL12). من المعترف به الآن أن أنواع الاستجابة المناعية مرتبطة بأحد متغيرات تنشيط الخلايا الليمفاوية بالمشاركة السائدة للنسخ المستنسخة من مساعدي الخلايا اللمفاوية التائية من النوع الأول (TH2) أو النوع الثاني (TH3). تؤثر المنتجات TH2 و TH3 سلبًا على تنشيط الحيوانات المستنسخة المعاكسة. التنشيط المفرط لأي نوع من أنواع الحيوانات المستنسخة يمكن أن يوجه الاستجابة المناعية وفقًا لأحد خيارات النمو. يؤدي عدم التوازن المزمن في تنشيط الحيوانات المستنسخة إلى تطور أمراض مناعية. يمكن دراسة التغييرات في السيتوكينات في IBTD بطرق مختلفة مع تحديد مستواها في الدم أو في الموقع. ترتفع مستويات IL1 في جميع أمراض الأمعاء الالتهابية. الاختلافات بين NNC و CD في زيادة التعبير عن IL2. إذا تم العثور على مستوى منخفض أو طبيعي من IL2 في NUC ، ثم في القرص المضغوط ، يتم الكشف عن مستواه المتزايد. يزيد محتوى IL4 في NUC ، بينما يظل في القرص المضغوط طبيعيًا أو حتى ينخفض. مستوى IL6 ، الذي يتوسط تفاعلات المرحلة الحادة ، يزداد أيضًا في جميع أشكال الالتهاب. جعلت البيانات التي تم الحصول عليها بخصوص ملف تعريف السيتوكينات من الممكن اقتراح أن الشكلين الرئيسيين من مرض التهاب الأمعاء المزمن يتميزان بتنشيط مختلف والتعبير عن السيتوكينات. تشير نتائج الدراسات إلى أن ملف تعريف السيتوكين الذي لوحظ في مرضى UC أكثر اتساقًا مع ملف تعريف TH3 ، في حين يجب اعتبار ملف تعريف TH2 أكثر تميزًا للمرضى المصابين بالقرص المضغوط. إن جاذبية هذه الفرضية حول دور ملامح TH2 و TH3 هي أيضًا أن استخدام السيتوكينات يمكن أن يغير الاستجابة المناعية في اتجاه أو آخر ويؤدي إلى مغفرة مع استعادة التوازن الخلوي. يمكن تأكيد ذلك ، على وجه الخصوص ، من خلال استخدام IL10. يجب أن تظهر المزيد من الدراسات ما إذا كانت استجابة السيتوكينات هي ظاهرة ثانوية استجابة للتحفيز أو ، على العكس من ذلك ، فإن التعبير عن السيتوكينات المقابلة يحدد تفاعل الكائن الحي مع تطور المظاهر السريرية اللاحقة. لم يتم بعد إجراء دراسة على مستوى السيتوكينات في مرض التهاب الأمعاء عند الأطفال. هذا العمل هو الجزء الأول من دراسة علمية مكرسة لدراسة حالة السيتوكين في مرض التهاب الأمعاء عند الأطفال. كان الهدف من هذا العمل هو دراسة النشاط الخلطي للبلاعم مع تحديد مستويات (IL1a ، IL8) في دم الأطفال المصابين بـ NUC و CD ، وكذلك ديناميكياتهم أثناء العلاج. من عام 2000 إلى عام 2002 ، تم فحص 34 طفلاً من NUC و 19 طفلاً مصابًا بالقرص المضغوط تتراوح أعمارهم بين 4 إلى 16 عامًا في قسم أمراض الجهاز الهضمي في مستشفى الأطفال السريري الروسي. تم التحقق من التشخيص شريحيًا وتنظيريًا وصرفياً. تم إجراء دراسة مستويات السيتوكينات المنشطة للالتهابات IL1a، IL8 بطريقة مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA). لتحديد تركيز IL1a ، IL8 ، استخدمنا أنظمة الاختبار المصنعة بواسطة OOO Cytokin (سانت بطرسبرغ ، روسيا). تم إجراء التحليل في مختبر علم الأدوية المناعي التابع للمركز العلمي التابع لمعهد أبحاث المستحضرات الحيوية عالية النقاء (رئيس المختبر ، دكتوراه في الطب ، الأستاذ AS Simbirtsev). أظهرت النتائج التي تم الحصول عليها أثناء الدراسة زيادة معنوية في مستويات IL1a و IL8 خلال فترة التفاقم ، أكثر وضوحًا في الأطفال الذين يعانون من NUC مقارنة بالأطفال المصابين بالقرص المضغوط. بدون تفاقم ، تنخفض مستويات السيتوكينات المنشطة للالتهابات ، لكنها لا تصل إلى القاعدة. في جامعة كاليفورنيا ، زادت مستويات IL-1a و IL-8 في فترة التفاقم في 76.2 ٪ و 90 ٪ من الأطفال ، وفي فترة الهدوء - في 69.2 ٪ و 92.3 ٪ على التوالي. في القرص المضغوط ، تزداد مستويات IL-1a و IL-8 في فترة التفاقم في 73.3 ٪ و 86.6 ٪ من الأطفال ، وفي فترة الهدوء - في 50 ٪ و 75 ٪ على التوالي.

اعتمادًا على شدة المرض ، تلقى الأطفال العلاج بالأمينوساليسيلات أو القشرانيات السكرية. أثرت طبيعة العلاج بشكل كبير على ديناميكيات مستوى السيتوكين. أثناء العلاج بالأمينوساليسيلات ، كانت مستويات السيتوكينات المنشطة للالتهابات في مجموعة الأطفال المصابين بـ NUC و CD أعلى بكثير من تلك الموجودة في المجموعة الضابطة. في الوقت نفسه ، لوحظت معدلات أعلى في مجموعة الأطفال الذين يعانون من UC. في NUC على خلفية العلاج بالأمينوساليسيلات ، تمت زيادة IL1a و IL8 في 82.4٪ و 100٪ من الأطفال ، على التوالي ، بينما أثناء العلاج بالجلوكوكورتيكويد في 60٪ من الأطفال لكل من السيتوكينات. في CD ، IL1a ، IL8 تزداد أثناء العلاج بالأمينوساليسيلات في جميع الأطفال ، وأثناء العلاج بالجلوكوكورتيكويد في 55.5٪ و 77.7٪ من الأطفال ، على التوالي. وبالتالي ، فإن نتائج هذه الدراسة تشير إلى تورط كبير لرابط البلاعم للجهاز المناعي في العملية المسببة للأمراض لدى معظم الأطفال الذين يعانون من UC و CD. لا تختلف البيانات التي تم الحصول عليها في هذه الدراسة اختلافًا جوهريًا عن البيانات التي تم الحصول عليها أثناء فحص المرضى البالغين. الاختلافات في مستويات IL1a و IL8 في المرضى الذين يعانون من UC و CD هي كمية ، ولكنها ليست نوعية ، مما يشير إلى طبيعة غير محددة لهذه التغييرات بسبب مسار عملية التهابية مزمنة. لذلك ، هذه المؤشرات ليس لها قيمة تشخيصية. تثبت نتائج الدراسة الديناميكية لمستويات IL1a و IL8 الكفاءة العالية للعلاج بأدوية الجلوكوكورتيكويد مقارنة بالعلاج بالأمينوساليسيلات. البيانات المقدمة هي نتيجة المرحلة الأولى من دراسة الحالة الخلوية للأطفال المصابين بالـ IBT. مطلوب مزيد من الدراسة للمشكلة ، مع الأخذ في الاعتبار مؤشرات السيتوكينات الأخرى المؤيدة للالتهابات والمضادة للالتهابات.

دور أكسيد النيتريك والسيتوكينات في تطوير متلازمة إصابة الرئة الحادة.

يدرس T. A. Shumatova ، V. B. Shumatov ، E. V. Markelova ، L.G Suhoteplaya هذه المشكلة: قسم التخدير وعلم الإنعاش ، جامعة فلاديفوستوك الطبية الحكومية. متلازمة إصابة الرئة الحادة (متلازمة الضائقة التنفسية عند البالغين ، ARDS) هي واحدة من أشد أشكال الفشل التنفسي الحاد الذي يحدث في المرضى على خلفية الصدمات الشديدة ، وتعفن الدم ، والتهاب الصفاق ، والتهاب البنكرياس ، وفقدان الدم الغزير ، والشفط ، بعد تدخلات جراحية مكثفة وفي 50 ، 60٪ من الحالات قاتلة. إن البيانات البحثية حول التسبب في متلازمة الضائقة التنفسية الحادة ، ووضع معايير للتشخيص المبكر والتنبؤ بالمتلازمة قليلة ، ومتناقضة إلى حد ما ، مما لا يسمح بتطوير مفهوم تشخيصي وعلاجي متماسك. وجد أن متلازمة الضائقة التنفسية الحادة تقوم على الضرر الذي يصيب بطانة الشعيرات الدموية الرئوية والظهارة السنخية ، مما يؤدي إلى انتهاك الخصائص الانسيابية للدم ، مما يؤدي إلى حدوث وذمة في الأنسجة الخلالية والسنخية ، والتهاب ، وانخماص ، وارتفاع ضغط الدم الرئوي. في الأدبيات في السنوات الأخيرة ، هناك معلومات كافية حول المنظم العالمي لعملية التمثيل الغذائي الخلوي والأنسجة - أكسيد النيتريك. يرجع الاهتمام بأكسيد النيتريك (NO) في المقام الأول إلى حقيقة أنه يشارك في تنظيم العديد من الوظائف ، بما في ذلك نغمة الأوعية الدموية ، وانقباض القلب ، وتجميع الصفائح الدموية ، والنقل العصبي ، وتخليق البروتين ATP ، والدفاع المناعي. بالإضافة إلى ذلك ، اعتمادًا على اختيار الهدف الجزيئي وخصائص التفاعل معه ، فإن NO له أيضًا تأثير ضار. من المعتقد أن آلية تنشيط تنشيط الخلية هي خلل خلوي في الدم. السيتوكينات عبارة عن ببتيدات قابلة للذوبان تعمل كوسيط للجهاز المناعي وتوفر التعاون الخلوي والتنظيم المناعي الإيجابي والسلبي. حاولنا تنظيم المعلومات المتوفرة في الأدبيات حول دور NO والسيتوكينات في تطوير متلازمة إصابة الرئة الحادة. لا هو غاز قابل للذوبان في الماء والدهون. جزيءه عبارة عن جذر حر غير مستقر ، ينتشر بسهولة في الأنسجة ، ويتم امتصاصه وتدميره بسرعة بحيث يمكن أن يؤثر فقط على الخلايا الموجودة في البيئة المباشرة. يحتوي جزيء NO على جميع الخصائص المتأصلة في الرسل الكلاسيكيين: يتم إنتاجه بسرعة ، ويعمل بتركيزات منخفضة جدًا ، وبعد توقف الإشارة الخارجية ، يتحول بسرعة إلى مركبات أخرى ، مؤكسدة إلى أكاسيد النيتروجين غير العضوية المستقرة: النتريت والنترات. يتراوح عمر أكسيد النيتروجين في الأنسجة ، وفقًا لمصادر مختلفة ، من 5 إلى 30 ثانية. الأهداف الجزيئية الرئيسية لأكسيد النيتروجين هي الإنزيمات والبروتينات المحتوية على الحديد: محلقة الجوانيلات القابلة للذوبان ، سينثاز النيتروكسيد (NOS) السليم ، الهيموغلوبين ، إنزيمات الميتوكوندريا ، إنزيمات دورة كريبس ، البروتين وتخليق الحمض النووي. يحدث تخليق NO في الجسم من خلال التحولات الأنزيمية للجزء المحتوي على النيتروجين من الأحماض الأمينية L-arginine تحت تأثير إنزيم معين NOS ويتوسط تفاعل أيونات الكالسيوم مع كالمودولين. يتم تعطيل الإنزيم بتركيزات منخفضة ويكون نشطًا إلى أقصى حد عند 1 ميكرومتر من الكالسيوم الحر. تم تحديد اثنين من الأشكال الإسوية لـ NOS: التكويني (cNOS) والمستحث (iNOS) ، وهما نتاج جينات مختلفة. يوجد cNOS المعتمد على الكالسيوم والكالموديولين باستمرار في الخلية ويعزز إطلاق كميات صغيرة من أكسيد النيتروجين استجابة للمستقبلات والتحفيز البدني. لا ، الذي تم إنشاؤه تحت تأثير هذا الشكل الإسوي ، يعمل كحامل في عدد من الاستجابات الفسيولوجية. يتشكل iNOS المستقل عن الكالسيوم والكالودولين في أنواع مختلفة من الخلايا استجابة للسيتوكينات المؤيدة للالتهابات والسموم الداخلية والمؤكسدات. يتم نسخ هذا الشكل الإسوي NOS بواسطة جينات محددة على الكروموسوم 17 ويعزز تخليق كميات كبيرة من NO. يصنف الإنزيم أيضًا إلى ثلاثة أنواع: NOS-I (الخلايا العصبية) ، NOS-II (الضامة) ، NOS-III (البطانية). تم العثور على عائلة الإنزيمات التي تصنع NO في مجموعة متنوعة من خلايا الرئة: في الخلايا الظهارية القصبية ، في الخلايا السنخية ، في الضامة السنخية ، في الخلايا البدينة ، في الخلايا البطانية للشرايين والأوردة القصبية ، في الخلايا العضلية الملساء للقصبات والأوعية الدموية ، في الخلايا العصبية غير الكولينية غير الأدرينالية. تم تأكيد القدرة التكوينية للخلايا الظهارية في الشعب الهوائية والحويصلات الهوائية للإنسان والثدييات على إفراز أكسيد النيتروجين في العديد من الدراسات. لقد ثبت أن الأجزاء العلوية من الجهاز التنفسي البشري ، وكذلك الأجزاء السفلية ، تشارك في تكوين أكسيد النيتروجين. أظهرت الدراسات التي أجريت على المرضى الذين يعانون من ثقب القصبة الهوائية أن كمية الغاز في الهواء التي يتم إخراجها من خلال فغر القصبة الهوائية أقل بكثير مما هي عليه في تجويف الأنف والفم. يعاني تخليق أكسيد النيتروجين الداخلي في المرضى الخاضعين للتهوية الميكانيكية بشكل كبير. تؤكد الأبحاث أنه لا يحدث أي إطلاق في وقت توسع القصبات ويتم التحكم فيه بواسطة نظام العصب المبهم. تم الحصول على البيانات أن تكوين أكسيد النيتروجين في ظهارة الجهاز التنفسي البشري يزيد من الأمراض الالتهابية للجهاز التنفسي. يتم زيادة تخليق الغاز بسبب تنشيط NOS المستحث تحت تأثير السيتوكينات ، وكذلك السموم الداخلية وعديدات السكاريد الدهنية.

حاليًا ، هناك أكثر من مائة سيتوكينات معروفة ، والتي تنقسم تقليديًا إلى عدة مجموعات.

1. Interleukins (IL-1 - IL18) - بروتينات تنظيمية إفرازية توفر تفاعلات وسيطة في جهاز المناعة وارتباطه بأنظمة الجسم الأخرى.

2. الإنترفيرون (IFN-alpha، beta، gamma) - السيتوكينات المضادة للفيروسات ذات التأثير المناعي الواضح.

3. عوامل نخر الورم (TNF alpha، beta) هي السيتوكينات ذات التأثيرات السامة للخلايا والتأثيرات التنظيمية.

4. عوامل تحفيز المستعمرات (G-CSF ، M-CSF ، GM-CSF) - محفزات نمو وتمايز الخلايا المكونة للدم ، وتنظيم تكون الدم.

5. Chemokines (IL-8، IL-16) - عوامل الجذب الكيميائي للكريات البيض.

6. عوامل النمو - منظمات النمو والتمايز والنشاط الوظيفي للخلايا من مختلف الأنسجة المنتمية (عامل نمو الأرومة الليفية ، عامل نمو الخلايا البطانية ، عامل نمو البشرة) وعوامل النمو المحولة (TGF beta).

تحدد جزيئات التنظيم الحيوي نوع ومدة الاستجابة الالتهابية والمناعة ، وتكاثر الخلايا المتحكمة ، وتكوين الدم ، وتكوين الأوعية الدموية ، والتئام الجروح ، والعديد من العمليات الأخرى. يؤكد جميع الباحثين أن السيتوكينات تفتقر إلى خصوصية المستضدات. أظهرت التجارب التي أجريت على الضامة الرئوية والخلايا البدينة تكوين iNOS استجابةً لإنترفيرون جاما ، والإنترلوكين -1 ، وعامل نخر الورم ، وعديدات السكاريد الدهنية. تم العثور على تعبير عن iNOS و cNOS للسيتوكينات المنشطة للالتهابات في الخلايا السنخية الحيوانية والبشرية. أدت إضافة عامل نمو البشرة ، وهو منظم لوظيفة الخلية الظهارية إلى المزرعة ، إلى تقليل نشاط الإنزيم المستحث فقط. من المعروف أنه ، اعتمادًا على الطبيعة ، تعمل السيتوكينات على الأوتوكرين - على الخلايا المنتجة نفسها ، الباراكرين - على الخلايا المستهدفة الأخرى أو الغدد الصماء - على خلايا مختلفة خارج مكان إنتاجها. في الوقت نفسه ، يمكنهم التفاعل مع بعضهم البعض وفقًا لمبدأ ناهض أو عدائي ، مما يؤدي إلى تغيير الحالة الوظيفية للخلايا المستهدفة وتشكيل شبكة خلوية. وبالتالي ، فإن السيتوكينات ليست ببتيدات معزولة ، ولكنها نظام متكامل ، ومكوناته الرئيسية هي الخلايا المنتجة ، والبروتين نفسه عبارة عن سيتوكين ، ومستقبلاته ، وخلية مستهدفة. وجد أنه مع تطور إصابة الرئة الحادة ، يزداد مستوى السيتوكينات المسببة للالتهابات: IL-1 ، 6 ، 8 ، 12 ، TNF alpha ، IFN alpha. يرتبط تأثيرها بتوسع الأوعية وزيادة نفاذيةها وتراكم السوائل في أنسجة الرئة. بالإضافة إلى ذلك ، أظهرت الدراسات قدرة IFN gamma و TNF alpha للحث على التعبير عن جزيئات الالتصاق - ICAM -1 على الخلايا البطانية البشرية. جزيئات الالتصاق ، الملتصقة بالكريات البيض والصفائح الدموية والخلايا البطانية ، تشكل العدلات "المتدحرجة" وتعزز تراكم جزيئات الفيبرين. تساهم هذه العمليات في انتهاك تدفق الدم الشعري ، وزيادة نفاذية الشعيرات الدموية ، والحث على وذمة الأنسجة المحلية. يتم تعزيز إبطاء تدفق الدم الشعري عن طريق تنشيط أكسيد النيتروجين ، مما يسبب توسع الشرايين. يتم التحكم في هجرة الكريات البيض إلى بؤرة الالتهاب عن طريق السيتوكينات الخاصة - الكيميائيات ، التي يتم إنتاجها وإفرازها ليس فقط عن طريق الضامة المنشطة ، ولكن أيضًا عن طريق الخلايا البطانية ، والأرومات الليفية ، والخلايا العضلية الملساء. وتتمثل مهمتها الرئيسية في إمداد تركيز الالتهاب إلى العدلات وتنشيط نشاطها الوظيفي. الكيموكين الرئيسي للعدلات هو Il-8. محفزاته الأكثر فعالية هي عديدات السكاريد الدهنية البكتيرية ، IL-1 و TNFalpha. ر. بحرة وآخرون. نعتقد أن كل خطوة من الهجرة عبر البطانة للعدلات تنظم عن طريق تحفيز تركيزات ألفا عامل نخر الورم. مع تطور إصابة الرئة الحادة ، يتم تنشيط الخلايا البطانية الوعائية والخلايا الظهارية القصبية والضامة السنخية وتشارك في تفاعلات المرحلة. نتيجة لذلك ، من ناحية ، يحدث تعبئتها وتعزيز خصائص الحماية ، ومن ناحية أخرى ، من الممكن حدوث تلف للخلايا نفسها والأنسجة المحيطة بها. أظهر عدد من الدراسات أن ناتج الاختزال الجزئي للأكسجين ، وهو الأكسيد الفائق ، يمكن أن يتراكم في بؤرة الالتهاب ، مما يبطل التأثير الفعال للأكسجين لأكسيد النيتروجين. يتفاعل أنيون أكسيد النيتروجين والأكسيد الفائق بسرعة لتشكيل البيروكسينيتريت المدمر للخلايا. يعزز هذا التفاعل إزالة أكسيد النيتروجين من جدران الأوعية الدموية والشعب الهوائية ، وكذلك من سطح الخلايا السنخية. تُظهر الدراسات أن البيروكسينيتريت ، الذي يُعتبر تقليديًا وسيطًا لسمية NO ، يمكن أن يكون له تأثير فسيولوجي ويحث على استرخاء الأوعية الدموية من خلال زيادة NO بوساطة cGMP في البطانة الوعائية. بدوره ، يعد البيروكسينيتريت مؤكسدًا قويًا قادرًا على إتلاف الظهارة السنخية وخافض التوتر السطحي في الرئة. يتسبب في تدمير بروتينات الغشاء والدهون ، وإتلاف البطانة ، وزيادة تراكم الصفائح الدموية ، والمشاركة في التسمم الداخلي للدم. لوحظ زيادة تكوينه في متلازمة إصابة الرئة الحادة. يعتقد الباحثون أن أكسيد النيتروجين الناتج عن تنشيط الإنزيم المستحث مخصص لحماية غير محددة للجسم ضد مجموعة واسعة من العوامل المسببة للأمراض ، ويثبط تراكم الصفائح الدموية ويحسن الدورة الدموية المحلية. لقد وجد أن الكمية الزائدة من أكسيد النيتروجين تثبط نشاط cNOS في الخلايا بسبب التفاعل مع الأكسيد الفائق ، وربما نتيجة لإزالة التحسس من محلقة الجوانيلات ، مما يؤدي إلى انخفاض cGMP في الخلية وزيادة الكالسيوم داخل الخلايا. . بريت وآخرون. و Kooy et al. ، بتحليل أهمية آليات nitrooxidergic في التسبب في متلازمة الضائقة التنفسية الحادة ، اقترحوا أن iNOS ، والبيروكسينيتريت ، والنتروتيروزين ، المنتج الرئيسي لتأثير البيروكسينيتريت على البروتين ، قد يلعب دورًا رئيسيًا في تطور المتلازمة. كاثبرتسون وآخرون. نعتقد أن أساس إصابة الرئة الحادة هو تأثير أكسيد النيتروجين والبيروكسينيتريت على الإيلاستاز والإنترلوكين -8. كوباياشي وآخرون سجل أيضًا زيادة في محتوى iNOS ، و interleukin-1 ، و interleukin-6 ، و interleukin-8 في السائل القصبي السنخي في المرضى الذين يعانون من متلازمة إصابة الرئة الحادة. ميلدروم وآخرون. أظهر انخفاضًا في إنتاج السيتوكينات الالتهابية بواسطة الضامة الرئوية في متلازمة الضائقة التنفسية الحادة تحت تأثير ركيزة الإنتاج المحلي لـ NO-L-arginine. لقد وجد أنه في نشأة متلازمة إصابة الرئة الحادة ، يلعب دور مهم هو ضعف نفاذية الأوعية الدموية الناجم عن عمل السيتوكينات - TNF alpha و IL-2 و GM-CSF والأجسام المضادة وحيدة النسيلة للخلايا الليمفاوية CD3 على الخلايا البطانية الوعائية في الرئتين والخلايا المناعية. تؤدي الزيادة السريعة والقوية في نفاذية الأوعية الرئوية إلى هجرة العدلات إلى أنسجة الرئة وإطلاق الوسطاء السامة للخلايا بواسطتهم ، مما يؤدي إلى تطور التغيير الرئوي المرضي. أثناء تطور إصابة الرئة الحادة ، يزيد TNF alpha من التصاق العدلات بجدار الأوعية الدموية ، ويعزز هجرتها إلى الأنسجة ، ويعزز التغيرات الهيكلية والتمثيل الغذائي في الخلايا البطانية ، ويعطل نفاذية أغشية الخلايا ، وينشط تكوين السيتوكينات الأخرى و eicosanoids ، ويسبب موت الخلايا المبرمج ونخر الخلايا الظهارية في الرئة. تشير البيانات التي تم الحصول عليها إلى أن موت الخلايا المبرمج للبلاعم الناجم عن إدخال LPS يرتبط إلى حد كبير بـ IFN gamma ويتم تقليله من خلال عمل IL-4 و IL-10 و TGF beta. ومع ذلك ، Kobayashi et al. تم الحصول على بيانات تشير إلى أن IFN gamma قد تشارك في إصلاح ظهارة الغشاء المخاطي في الجهاز التنفسي. تحتوي دراسات هاجيموتو على معلومات تفيد بأن الخلايا الظهارية في الشعب الهوائية والحويصلات الهوائية استجابةً لعامل TNF alpha أو Fas ligand الذي يطلق IL-8 ، IL-12. ترتبط هذه العملية بتنشيط العامل النووي Carr-B بواسطة رابط Fas.

يُعتقد أن IL-8 هو أحد أهم السيتوكينات في الفيزيولوجيا المرضية للإصابة الرئوية الحادة. ميلر وآخرون. في دراسة السائل القصبي السنخي في المرضى الذين يعانون من متلازمة الضائقة التنفسية الحادة على خلفية التشريح ، تم العثور على زيادة كبيرة في مستوى IL-8 ، مقارنة مع المرضى الذين يعانون من وذمة رئوية قلبية. تم اقتراح أن المصدر الأساسي لـ Il-8 هو الرئتين ، ويمكن استخدام هذا المعيار في التشخيص التفريقي للمتلازمة. جراو وآخرون. يعتقد أن الخلايا البطانية للشعيرات الدموية الرئوية هي مصدر مهم للسيتوكينات - IL-6 ، IL-8 في تطور إصابة الرئة الحادة. Goodman et al. عند دراسة ديناميات مستوى السيتوكينات في سائل غسل القصبات الهوائية في المرضى الذين يعانون من متلازمة الضائقة التنفسية الحادة ، زيادة كبيرة في IL-1beta ، IL-8 ، الببتيد الكيميائي أحادي الخلية -1 ، المنشط العدلات للخلايا الظهارية ، الببتيد الالتهابي الضخم -1 تم العثور على ألفا. في الوقت نفسه ، يعتقد المؤلفون أن زيادة محتوى IL-1 بيتا قد تكون بمثابة علامة على نتيجة غير مواتية للمتلازمة. باور وآخرون. تبين أن التحكم في محتوى IL-8 في سائل القصبات الهوائية لدى مرضى متلازمة الضائقة التنفسية الحادة يمكن استخدامه للمراقبة ، يشير انخفاض مستوى IL-8 إلى مسار غير موات للعملية. يحتوي عدد من الدراسات أيضًا على معلومات تفيد بأن مستوى إنتاج السيتوكينات بواسطة البطانة الوعائية للرئتين يؤثر على تطور الإصابة الرئوية الحادة ويمكن استخدام السيطرة عليها في الممارسة السريرية للتشخيص المبكر. تتضح الآثار السلبية المحتملة لزيادة مستوى السيتوكينات المسببة للالتهاب لدى مرضى متلازمة الضائقة التنفسية الحادة من خلال دراسات مارتن وآخرون ووارنر وآخرون.الضامة السنخية التي تنشطها السيتوكينات والسموم الداخلية البكتيرية تزيد من تخليق NO يزداد أيضًا مستوى إنتاج NO عن طريق الخلايا الظهارية القصبية والسنخية ، والعدلات ، والخلايا البدينة ، والخلايا البطانية ، والخلايا العضلية الملساء للأوعية الرئوية ، ربما من خلال تنشيط العامل النووي Carr-B. يعتقد المؤلفون أن أكسيد النيتريك الناتج عن تنشيط NOS المستحث يهدف في المقام الأول إلى الدفاع غير المحدد عن الجسم. تم إطلاقه من الضامة ، وهو يخترق البكتيريا والفطريات بسرعة ، حيث يثبط ثلاث مجموعات حيوية من الإنزيمات: نقل الإلكترون ، ودورة كريبس ، وتخليق الحمض النووي. لا يشارك في دفاع الجسم في المراحل الأخيرة من الاستجابة المناعية ويعتبر مجازيًا "السيف المعاقب" لجهاز المناعة. ومع ذلك ، فإن التراكم في الخلية بكميات كبيرة غير كافية ، كما أن له تأثير ضار. وهكذا ، مع تطور متلازمة إصابة الرئة الحادة ، تؤدي السيتوكينات و NO إلى سلسلة متسلسلة من التفاعلات المعبر عنها في ضعف دوران الأوعية الدقيقة ، ونقص الأكسجة في الأنسجة ، والوذمة السنخية والخلالية ، وتلف وظيفة التمثيل الغذائي للرئتين. لذلك ، يمكن القول أن دراسة الآليات الفسيولوجية والفيزيولوجية المرضية لعمل السيتوكينات وأكسيد النيتروجين هي مجال واعد للبحث وستسمح في المستقبل ليس فقط بتوسيع فهم التسبب في متلازمة الضائقة التنفسية الحادة ، ولكن أيضًا لتحديد العلامات التشخيصية والإنذارية للمتلازمة ، لتطوير خيارات العلاج القائم على مسببات الأمراض التي تهدف إلى تقليل معدل الوفيات.

طرق تحديد السيتوكينات.

المراجعة مخصصة للطرق الرئيسية لدراسة السيتوكينات المستخدمة حاليًا. يتم وصف الاحتمالات والغرض من الأساليب بإيجاز. يتم تقديم مزايا وعيوب الأساليب المختلفة لتحليل التعبير عن جينات السيتوكين على مستوى الأحماض النووية وعلى مستوى إنتاج البروتين. (السيتوكينات والالتهابات. 2005. T. 4 ، رقم 1. S. 22-27.)

السيتوكينات هي بروتينات تنظيمية تشكل شبكة عالمية من الوسطاء ، وهي خاصية مميزة لكل من الجهاز المناعي وخلايا الأعضاء والأنسجة الأخرى. تحدث جميع الأحداث الخلوية تحت سيطرة هذه الفئة من البروتينات التنظيمية: الانتشار والتمايز والاستماتة والنشاط الوظيفي المتخصص للخلايا. تتميز تأثيرات كل سيتوكين على الخلايا بتعدد الأشكال ، وتداخل طيف تأثيرات الوسطاء المختلفين ، وبشكل عام ، تعتمد الحالة الوظيفية النهائية للخلية على تأثير العديد من السيتوكينات التي تعمل بشكل تآزري. وبالتالي ، فإن نظام السيتوكين عبارة عن شبكة تنظيمية عالمية متعددة الأشكال من الوسطاء مصممة للتحكم في عمليات الانتشار والتمايز والاستماتة والنشاط الوظيفي للعناصر الخلوية في مكونات الدم والجهاز المناعي وأنظمة التماثل الساكن الأخرى في الجسم. لقد مرت طرق تحديد السيتوكينات بتطور سريع للغاية على مدار 20 عامًا من الدراسة المكثفة ، وهي تمثل اليوم مجالًا كاملاً من المعرفة العلمية. يواجه الباحثون في علم الخلايا الخلوية في بداية عملهم مسألة اختيار طريقة. وهنا يجب أن يعرف الباحث بالضبط ما هي المعلومات التي يحتاجها للحصول على الهدف المحدد. حاليًا ، تم تطوير مئات الطرق المختلفة لتقييم نظام السيتوكينات ، والتي توفر معلومات متنوعة حول هذا النظام. يمكن أن يعتمد تقييم السيتوكينات في الوسائط البيولوجية المختلفة على نشاط بيولوجي محدد. يمكن قياسها كمياً باستخدام مجموعة متنوعة من طرق المقايسة المناعية باستخدام الأجسام المضادة متعددة النسيلة وحيدة النسيلة. بالإضافة إلى دراسة الأشكال الإفرازية للسيتوكينات ، فمن الممكن دراسة محتواها داخل الخلايا وإنتاجها في الأنسجة عن طريق قياس التدفق الخلوي ، والنشاف الغربي ، والكيمياء المناعية في الموقع. يمكن الحصول على معلومات مهمة جدًا من خلال دراسة التعبير عن السيتوكين mRNA ، واستقرار mRNA ، ووجود الأشكال الإسوية للسيتوكين mRNA ، وتسلسل النيوكليوتيدات الطبيعية المضادة للتأثير. يمكن أن توفر دراسة المتغيرات الأليلية لجينات السيتوكين معلومات مهمة حول الإنتاج المرتفع أو المنخفض المبرمج وراثيًا لوسيط أو آخر. كل طريقة لها عيوبها ومزاياها ، دقة القرار ودقة التحديد الخاصة بها. جهل الباحث وسوء فهمه لهذه الفروق الدقيقة يمكن أن يؤدي به إلى استنتاجات خاطئة.

تحديد النشاط البيولوجي للسيتوكينات.

ارتبط تاريخ الاكتشاف والخطوات الأولى في دراسة السيتوكينات ارتباطًا وثيقًا بزراعة الخلايا وخطوط الخلايا ذات الكفاءة المناعية. ثم تم عرض التأثيرات التنظيمية (النشاط البيولوجي) لعدد من العوامل القابلة للذوبان ذات الطبيعة البروتينية على النشاط التكاثري للخلايا الليمفاوية ، على تخليق الغلوبولين المناعي ، على تطوير الاستجابات المناعية في النماذج المختبرية. إحدى الطرق الأولى لتحديد النشاط البيولوجي للوسطاء هي تحديد عامل هجرة الخلايا الليمفاوية البشرية وعامل تثبيطها. كما تمت دراسة التأثيرات البيولوجية للسيتوكينات ، ظهرت طرق مختلفة لتقييم نشاطها البيولوجي. وهكذا ، تم تحديد IL-1 من خلال تقييم تكاثر الخلايا التوتية الفأرية في المختبر ، IL-2 - من خلال القدرة على تحفيز النشاط التكاثري للأرومة اللمفاوية ، IL-3 - عن طريق نمو مستعمرات المكونة للدم في المختبر ، IL-4 - عن طريق التأثير المكوّن ، عن طريق زيادة التعبير عن بروتينات Ia ، عن طريق تحريض تكوين IgG1 و IgE ، إلخ. يمكن متابعة قائمة هذه الطرق ، ويتم تحديثها باستمرار مع اكتشاف أنشطة بيولوجية جديدة لعوامل قابلة للذوبان. عيبهم الرئيسي هو الأساليب غير القياسية ، واستحالة توحيدهم. أدى التطوير الإضافي لطرق تحديد النشاط البيولوجي للسيتوكينات إلى إنشاء عدد كبير من خطوط الخلايا الحساسة لواحد أو آخر من السيتوكينات ، أو الخطوط متعددة الحساسية. يمكن الآن العثور على معظم هذه الخلايا الحساسة للسيتوكين في قوائم خطوط الخلايا التجارية. على سبيل المثال ، لاختبار IL-1a و b ، يتم استخدام خط الخلية D10S ، لـ IL-2 و IL-15 - خط الخلايا CTLL-2 ، لـ IL-3 ، IL-4 ، IL-5 ، IL-9 ، IL-13 ، GM-CSF - خط الخلية TF-1 ، لـ IL-6 - خط الخلية B9 ، لـ IL-7 - خط الخلية 2E8 ، لـ TNFa و TNFb - خط الخلية L929 ، لـ IFNg - خط الخلية WiDr ، من أجل IL-18 - خط الخلية KG-1. ومع ذلك ، فإن هذا النهج لدراسة البروتينات المناعية ، إلى جانب المزايا المعروفة مثل قياس النشاط البيولوجي الحقيقي للبروتينات الناضجة والنشطة ، والتكاثر العالي في ظل ظروف معيارية ، له عيوبه. وتشمل هذه ، أولاً وقبل كل شيء ، حساسية خطوط الخلايا ليس تجاه سيتوكين واحد ، ولكن للعديد من السيتوكينات ذات الصلة ، والتي تتداخل آثارها البيولوجية. بالإضافة إلى ذلك ، لا يمكن استبعاد إمكانية تحريض إنتاج السيتوكينات الأخرى بواسطة الخلايا المستهدفة ، والتي يمكن أن تشوه المعلمة المختبرة (كقاعدة عامة ، الانتشار ، السمية الخلوية ، الانجذاب الكيميائي). نحن لا نعرف حتى الآن جميع السيتوكينات وليس كل آثارها ، لذلك فنحن لا نقيم السيتوكين نفسه ، ولكن إجمالي النشاط البيولوجي المحدد. وبالتالي ، فإن تقييم النشاط البيولوجي باعتباره النشاط الكلي للوسطاء المختلفين (عدم الخصوصية) هو أحد عيوب هذه الطريقة. بالإضافة إلى ذلك ، باستخدام خطوط حساسة للسيتوكين ، من المستحيل تحديد الجزيئات المعطلة والبروتينات المرتبطة بها. هذا يعني أن مثل هذه الأساليب لا تعكس الإنتاج الفعلي لعدد من السيتوكينات. عيب آخر مهم لاستخدام خطوط الخلايا هو الحاجة إلى مختبر لزراعة الخلايا. بالإضافة إلى ذلك ، فإن جميع إجراءات نمو الخلايا واحتضانها بالبروتينات والوسائط قيد الدراسة تستغرق وقتًا طويلاً. وتجدر الإشارة أيضًا إلى أن استخدام خطوط الخلايا على المدى الطويل يتطلب تجديدًا أو إعادة اعتماد ، نظرًا لأنه نتيجة للزراعة يمكن أن تتغير وتعديل ، مما قد يؤدي إلى تغيير في حساسيتها للوسطاء وتقليل دقة تحديد النشاط البيولوجي. ومع ذلك ، فإن هذه الطريقة مثالية لاختبار النشاط البيولوجي المحدد للوسطاء المؤتلف.

القياس الكمي للسيتوكينات باستخدام الأجسام المضادة.

يتم إطلاق السيتوكينات التي تنتجها الخلايا ذات الكفاءة المناعية وأنواع أخرى من الخلايا في الفضاء خارج الخلية من أجل تفاعلات إشارات paracrine و autocrine. من خلال تركيز هذه البروتينات في مصل الدم أو في بيئة مكيفة ، يمكن للمرء أن يحكم على طبيعة العملية المرضية وزيادة أو نقص وظائف خلايا معينة في المريض. تعد طرق تحديد السيتوكينات باستخدام أجسام مضادة محددة اليوم أكثر الأنظمة شيوعًا للكشف عن هذه البروتينات. لقد مرت هذه الطرق بسلسلة كاملة من التعديلات باستخدام تسميات مختلفة (النظائر المشعة ، الفلورسنت ، الإضاءة الكهربية ، الإنزيم ، إلخ). إذا كان لطرق النظائر المشعة عددًا من العيوب المرتبطة باستخدام ملصق إشعاعي وإمكانية زمنية محدودة لاستخدام الكواشف المصنفة (نصف العمر) ، فإن طرق الامتصاص المناعي المرتبطة بالإنزيم قد وجدت الاستخدام الأكثر انتشارًا. وهي تستند إلى تصور المنتجات غير القابلة للذوبان لتفاعل إنزيمي ، تمتص الضوء بطول موجة معروف ، بكميات تعادل تركيز الحليلة. تُستخدم الأجسام المضادة المطبقة على قاعدة بوليمر صلبة لربط المواد المراد قياسها ، وتستخدم الأجسام المضادة المرتبطة بالإنزيمات ، عادةً الفوسفاتاز القلوي أو بيروكسيداز الفجل ، للتصوير. مزايا الطريقة واضحة: دقة عالية في التحديد في ظل ظروف تخزين معيارية للكواشف والإجراءات ، والتحليل الكمي ، وإمكانية التكاثر. تشمل العيوب نطاقًا محدودًا من التركيزات المحددة ، ونتيجة لذلك تعتبر جميع التركيزات التي تتجاوز عتبة معينة مساوية لها. وتجدر الإشارة إلى أن الوقت اللازم لإكمال الطريقة يختلف باختلاف توصيات الشركة المصنعة. ومع ذلك ، في أي حال ، نحن نتحدث عن عدة ساعات مطلوبة للحضانات وغسل الكاشف. بالإضافة إلى ذلك ، يتم تحديد الأشكال الكامنة والمقيدة من السيتوكينات ، والتي في تركيزها يمكن أن تتجاوز بشكل كبير الأشكال الحرة ، المسؤولة بشكل أساسي عن النشاط البيولوجي للوسيط. لذلك ، من المستحسن استخدام هذه الطريقة مع طرق تقييم النشاط البيولوجي للوسيط. هناك تعديل آخر لطريقة المقايسة المناعية ، والذي وجد تطبيقًا واسعًا ، وهو طريقة التلألؤ الكهربائي (ECL) لتحديد البروتينات ذات الأجسام المضادة الموصوفة بالروثينيوم والبيوتين. تتميز هذه الطريقة بالمزايا التالية مقارنة بالنظائر المشعة والمقايسات المناعية للأنزيمات: سهولة التنفيذ ، وقت تنفيذ قصير للطريقة ، عدم وجود إجراءات غسيل ، حجم عينة صغير ، نطاق واسع من التركيزات المحددة للسيتوكينات في المصل وفي بيئة مكيفة ، حساسية عالية من الطريقة وقابليتها للتكاثر. الطريقة قيد الدراسة مقبولة للاستخدام في كل من البحث العلمي والدراسات السريرية. تم تطوير الطريقة التالية لتقييم السيتوكينات في الوسائط البيولوجية بناءً على تقنية قياس التدفق الفلوري. يسمح لك بتقييم ما يصل إلى مئات البروتينات في نفس الوقت في عينة واحدة. حاليًا ، تم إنشاء مجموعات تجارية لتحديد ما يصل إلى 17 سيتوكينات. ومع ذلك ، فإن مزايا هذه الطريقة تحدد أيضًا عيوبها. أولاً ، هذا هو الجهد المبذول في اختيار الظروف المثلى لتحديد العديد من البروتينات ، وثانيًا ، يتدفق إنتاج السيتوكينات مع قمم الإنتاج في أوقات مختلفة. لذلك ، فإن تحديد عدد كبير من البروتينات في وقت واحد ليس دائمًا مفيدًا. المطلب العام لأساليب المقايسة المناعية باستخدام ما يسمى ب. "ساندويتش" ، هو اختيار دقيق لزوج من الأجسام المضادة ، مما يسمح بتحديد الشكل الحر أو المرتبط للبروتين الذي تم تحليله ، مما يفرض قيودًا على هذه الطريقة ، والذي يجب أن يؤخذ في الاعتبار دائمًا عند تفسير البيانات التي تم الحصول عليها. تحدد هذه الطرق إجمالي إنتاج السيتوكينات بواسطة خلايا مختلفة ، وفي الوقت نفسه ، من الممكن الحكم على إنتاج السيتوكينات الخاص بالمستضد بواسطة الخلايا ذات الكفاءة المناعية فقط افتراضيًا. حاليًا ، تم تطوير نظام ELISpot (بقعة مناعية محببة بالإنزيم) ، والذي يقضي إلى حد كبير على هذه العيوب. تتيح هذه الطريقة إجراء تقييم شبه كمي لإنتاج السيتوكينات على مستوى الخلايا الفردية. تسمح الدقة العالية لهذه الطريقة للفرد بتقييم إنتاج السيتوكين الذي يحفزه المستضد ، وهو أمر مهم جدًا لتقييم استجابة مناعية محددة. الطريقة التالية ، المستخدمة على نطاق واسع للأغراض العلمية ، هي التحديد داخل الخلايا للسيتوكينات عن طريق قياس التدفق الخلوي. مزاياها واضحة. يمكننا تمييز مجموعة الخلايا المنتجة للسيتوكين ظاهريًا و / أو تحديد طيف السيتوكينات التي تنتجها الخلايا الفردية ، مع إمكانية التوصيف الكمي النسبي لهذا الإنتاج. في الوقت نفسه ، فإن الطريقة الموصوفة معقدة نوعًا ما وتتطلب معدات باهظة الثمن. السلسلة التالية من الطرق ، والتي تُستخدم أساسًا للأغراض العلمية ، هي طرق كيميائية مناعية باستخدام الأجسام المضادة وحيدة النسيلة المسمى. المزايا واضحة - تحديد إنتاج السيتوكين مباشرة في الأنسجة (في الموقع) ، حيث تحدث تفاعلات مناعية مختلفة. ومع ذلك ، فإن الأساليب المدروسة شاقة للغاية ولا توفر بيانات كمية دقيقة.

تحديد السيتوكينات بالمقايسة المناعية الإنزيمية.

Vector-Best CJSC تحت قيادة T.G. Ryabicheva، N.A. Varaksin ، N.V. تيموفيفا ، إم يو. يعمل Rukavishnikov بنشاط من أجل تحديد السيتوكينات. السيتوكينات هي مجموعة من وسطاء عديد الببتيد ، غالبًا غليكوزيلاتي ، بأوزان جزيئية تتراوح من 8 إلى 80 كيلو دالتون. تشارك السيتوكينات في تكوين وتنظيم تفاعلات دفاع الجسم والتوازن. يشاركون في جميع روابط الاستجابة المناعية الخلطية والخلوية ، بما في ذلك تمايز الخلايا السلفية ذات الكفاءة المناعية ، وعرض المستضد ، والتنشيط الخلوي والانتشار ، والتعبير عن جزيئات الالتصاق ، واستجابة المرحلة الحادة. بعضها قادر على إظهار العديد من التأثيرات البيولوجية على الخلايا المستهدفة المختلفة. يتم تنفيذ عمل السيتوكينات على الخلايا بالطرق التالية: autocrine - على الخلية التي تصنع وتفرز هذا السيتوكين ؛ paracrine - على الخلايا الموجودة بالقرب من الخلية المنتجة ، على سبيل المثال ، في بؤرة الالتهاب أو في العضو اللمفاوي ؛ الغدد الصماء عن بعد - على خلايا أي أعضاء وأنسجة بعد دخول السيتوكين إلى الدورة الدموية. عادة ما يكون تكوين وإطلاق السيتوكينات قصير الأجل ومنظم بإحكام. تعمل السيتوكينات على الخلية من خلال الارتباط بمستقبلات محددة على الغشاء السيتوبلازمي ، مما يتسبب في سلسلة من التفاعلات التي تؤدي إلى تحريض أو تعزيز أو قمع نشاط عدد من الجينات التي تنظمها. تتميز السيتوكينات بطابع شبكة معقدة من الأداء ، حيث يؤثر إنتاج أحدها على تكوين أو مظهر نشاط عدد من الآخرين. السيتوكينات هي الوسطاء المحليون ؛ لذلك ، يُنصح بقياس مستوياتها في الأنسجة المقابلة بعد استخراج بروتينات الأنسجة من خزعات الأعضاء المقابلة أو في السوائل الطبيعية: البول ، السائل الدمعي ، سائل الجيب اللثوي ، غسل القصبات الهوائية ، الإفرازات المهبلية ، القذف ، يغسل من التجاويف ، النخاع الشوكي أو السوائل الزليليّة ، إلخ. يمكن الحصول على معلومات إضافية عن حالة الجهاز المناعي للجسم من خلال دراسة قدرة خلايا الدم على إنتاج السيتوكينات في المختبر. تعكس مستويات السيتوكينات في البلازما الحالة الحالية لجهاز المناعة وتطور الاستجابات الدفاعية في الجسم الحي. إن الإنتاج التلقائي للسيتوكينات عن طريق زراعة الخلايا أحادية النواة في الدم المحيطي يجعل من الممكن تقييم حالة الخلايا المقابلة. يشير الإنتاج التلقائي المتزايد للسيتوكينات إلى أن الخلايا قد تم تنشيطها بالفعل بواسطة المستضد في الجسم الحي. يجعل الإنتاج المستحث للسيتوكينات من الممكن تقييم القدرة المحتملة للخلايا المقابلة على الاستجابة لتحفيز المستضد. يمكن أن يكون انخفاض تحريض السيتوكينات في المختبر ، على سبيل المثال ، بمثابة إحدى علامات حالة نقص المناعة. لذلك ، فإن كلا الخيارين لدراسة مستويات السيتوكينات في كل من الدورة الدموية وأثناء إنتاجها بواسطة مزارع الخلايا مهمان من وجهة نظر خصائص النشاط المناعي للكائن الحي ووظيفة الروابط الفردية لجهاز المناعة. حتى وقت قريب ، في روسيا ، شاركت مجموعات قليلة من الباحثين في دراسة السيتوكينات ، نظرًا لأن طرق البحث البيولوجي تستغرق وقتًا طويلاً للغاية ، كما أن المعدات الكيميائية المناعية المستوردة باهظة الثمن. مع ظهور مجموعات الممتز المناعي المحلية المرتبطة بالإنزيم ، يُظهر الأطباء الممارسون اهتمامًا متزايدًا بدراسة ملف السيتوكين. في الوقت الحالي ، تتمثل الأهمية التشخيصية لتقييم مستوى السيتوكينات في ذكر حقيقة الزيادة أو النقصان في تركيزها لدى مريض معين مصاب بمرض معين. علاوة على ذلك ، لتقييم شدة المرض والتنبؤ بمسار المرض ، يُنصح بتحديد تركيز السيتوكينات المضادة للالتهابات في ديناميات تطور علم الأمراض. على سبيل المثال ، يتم تحديد محتوى السيتوكينات في الدم المحيطي حسب توقيت التفاقم ، ويعكس ديناميات العملية المرضية في مرض القرحة الهضمية وأمراض الجهاز الهضمي الأخرى. في المراحل الأولى من التفاقم ، تسود زيادة في محتوى إنترلوكين 1 بيتا (IL-1beta) ، إنترلوكين 8 (IL-8) ، ثم تركيز إنترلوكين 6 (IL-6) ، جاما إنترفيرون (جاما) -INF) ، يزيد عامل نخر الورم-alpha (alpha-TNF). وصل تركيز إنترلوكين 12 (IL-12) ، جاما- INF ، alpha-TNF إلى أقصى حد له في ذروة المرض ، بينما اقترب محتوى علامات المرحلة الحادة خلال هذه الفترة من القيم الطبيعية. في ذروة التفاقم ، تجاوز مستوى alpha-TNF بشكل كبير محتوى إنترلوكين 4 (IL-4) في كل من مصل الدم ومباشرة في الأنسجة المصابة في المنطقة المحيطة بالقرحة ، وبعد ذلك بدأ تدريجياً ينقص. مع انحسار ظاهرة المرحلة الحادة وتكثيف عمليات الإصلاح ، زاد تركيز IL-4. من خلال التغيير في ملف تعريف السيتوكين ، يمكن للمرء أن يحكم على فعالية وجدوى العلاج الكيميائي. عند إجراء علاج السيتوكين ، على سبيل المثال ، أثناء العلاج باستخدام alpha-interferon (alpha-IFN) ، من الضروري التحكم في كل من مستوى محتواه في الدورة الدموية وإنتاج الأجسام المضادة لـ alpha-IFN. من المعروف أنه عندما يتم إنتاج عدد كبير من هذه الأجسام المضادة ، فإن العلاج بالإنترفيرون لا يتوقف عن كونه فعالاً فحسب ، بل يمكن أن يؤدي أيضًا إلى أمراض المناعة الذاتية. في الآونة الأخيرة ، تم تطوير أدوية جديدة وإدخالها في الممارسة ، والتي بطريقة أو بأخرى تغير حالة السيتوكين في الجسم. على سبيل المثال ، لعلاج التهاب المفاصل الروماتويدي ، يُقترح دواء يعتمد على الأجسام المضادة لـ alpha-TNF ، وهو مصمم لإزالة alpha-TNF ، الذي يشارك في تدمير النسيج الضام. ومع ذلك ، وفقًا لبياناتنا والأدبيات ، ليس كل المرضى الذين يعانون من التهاب المفاصل الروماتويدي المزمن لديهم مستوى متزايد من عامل نخر الورم ألفا ، لذلك ، بالنسبة لهذه المجموعة من المرضى ، يمكن أن يؤدي انخفاض مستوى عامل نخر الورم ألفا إلى تفاقم اختلال التوازن. الجهاز المناعي. وبالتالي ، فإن العلاج الصحيح للسيتوكين يفترض التحكم في حالة السيتوكين للكائن الحي أثناء العلاج. يتجلى الدور الوقائي للسيتوكينات المؤيدة للالتهابات محليًا ، في بؤرة الالتهاب ، لكن إنتاجها الجهازي لا يؤدي إلى تطوير مناعة مضادة للعدوى ولا يمنع تطور الصدمة البكتيرية السامة ، والتي هي سبب الوفيات المبكرة في مرضى الجراحة الذين يعانون من مضاعفات قيحية. أساس التسبب في العدوى الجراحية هو إطلاق سلسلة السيتوكين ، التي تشمل ، من ناحية ، السيتوكينات المؤيدة للالتهابات ، ومن ناحية أخرى ، السيتوكينات المضادة للالتهابات. يحدد التوازن بين هاتين المجموعتين المتعارضتين إلى حد كبير طبيعة المسار ونتائج أمراض الإنتان القيحي. ومع ذلك ، فإن تحديد التركيز في الدم لسيتوكين واحد من هذه المجموعات (على سبيل المثال ، alpha-TNF أو IL-4) لن يعكس بشكل كاف حالة توازن السيتوكين بأكمله. لذلك ، من الضروري إجراء تقييم من مرحلة واحدة لمستوى العديد من الوسطاء (على الأقل 2-3 من المجموعات الفرعية المتعارضة). في الوقت الحالي ، طور برنامج "Vector-Best" التابع لـ CJSC وينتج بشكل متسلسل مجموعات من الكواشف من أجل التحديد الكمي لما يلي: عامل نخر الورم ألفا (الحساسية - 2 بيكوغرام / مل ، 0-250 بيكوغرام / مل) ؛ جاما انترفيرون (الحساسية - 5 بيكوغرام / مل ، 0-2000 بيكوغرام / مل) ؛ إنترلوكين 4 (حساسية - 2 بيكوغرام / مل ، 0-400 بيكوغرام / مل) ؛ إنترلوكين -8 (حساسية - 2 بيكوغرام / مل ، 0-250 بيكوغرام / مل) ؛ مضاد مستقبلات الإنترلوكين 1 (IL-1RA) (الحساسية - 20 بيكوغرام / مل ، 0-2500 بيكوغرام / مل) ؛ ألفا إنترفيرون (حساسية - 10 بيكوغرام / مل ، 0-1000 بيكوغرام / مل) ؛ الأجسام المضادة المناعية الذاتية لألفا إنترفيرون (الحساسية - 2 نانوغرام / مل ، 0-500 نانوغرام / مل). تم تصميم جميع المجموعات لتحديد تركيز هذه السيتوكينات في السوائل البيولوجية البشرية ، في المستنبتات الطافية عند دراسة قدرة مزارع الخلايا البشرية على إنتاج السيتوكينات في المختبر. مبدأ التحليل هو متغير "شطيرة" لمقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم على الصفائح ذات المرحلة الصلبة (وقت الحضانة - 4 ساعات) أو مرحلتين (وقت الحضانة - 3.5 ساعات). يتطلب الفحص 100 ميكرولتر من السائل البيولوجي أو ثقافة طاف لكل بئر. حساب النتائج - قياس الطيف الضوئي بطول موجة 450 نانومتر. في جميع المجموعات ، يكون الكروموجين هو رباعي ميثيل بنزيدين. تم تمديد العمر الافتراضي لمجموعاتنا إلى 18 شهرًا من تاريخ الإصدار وشهر واحد بعد بدء الاستخدام. أظهر تحليل بيانات الأدبيات أن محتوى السيتوكينات في بلازما الدم للأشخاص الأصحاء يعتمد على كل من المجموعات المستخدمة لتحديدها وعلى المنطقة التي يعيش فيها هؤلاء الأشخاص. لذلك ، لمعرفة قيم التركيزات الطبيعية للسيتوكينات في سكان منطقتنا ، قمنا بتحليل عينات عشوائية من البلازما (من 80 إلى 400 عينة) من المتبرعين بالدم الأصحاء عمليًا ، وممثلي المجموعات الاجتماعية المختلفة الذين تتراوح أعمارهم بين 18 إلى 60 عامًا بدون المظاهر السريرية للأمراض الجسدية الإجمالية وغياب الأجسام المضادة لـ HBsAg لفيروس نقص المناعة البشرية والتهاب الكبد B و C.

عامل نخر الورم ألفا.

TNF-alpha عبارة عن سيتوكين متعدد الاتجاهات مؤيد للالتهابات يتكون من سلسلتين b ممدودتين بوزن جزيئي يبلغ 17 كيلو دالتون ويقومان بوظائف تنظيمية ومؤثرة في الاستجابة المناعية والالتهاب. المنتجون الرئيسيون لـ alpha-TNF هم الخلايا الوحيدة والبلاعم. يتم إفراز هذا السيتوكين أيضًا عن طريق الخلايا الليمفاوية والخلايا المحببة في الدم ، والخلايا القاتلة الطبيعية ، وخطوط الخلايا اللمفاوية التائية. المحرضات الرئيسية لـ alpha-TNF هي الفيروسات والكائنات الدقيقة ومنتجات التمثيل الغذائي الخاصة بها ، بما في ذلك عديدات السكاريد الدهنية البكتيرية. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن لبعض السيتوكينات ، مثل IL-1 و IL-2 وعامل تحفيز مستعمرة الخلايا الضامة المحببة و alpha و beta-INF ، أن تلعب دور المحرضات. الاتجاهات الرئيسية للنشاط البيولوجي لـ alpha-TNF: تعرض سمية انتقائية للخلايا فيما يتعلق ببعض الخلايا السرطانية ؛ ينشط الخلايا المحببة ، الضامة ، الخلايا البطانية ، الخلايا الكبدية (إنتاج بروتينات المرحلة الحادة) ، ناقضات العظم والخلايا الغضروفية (ارتشاف أنسجة العظام والغضاريف) ، تخليق السيتوكينات الأخرى المؤيدة للالتهابات ؛ يحفز التكاثر والتمايز: العدلات ، الخلايا الليفية ، الخلايا البطانية (تكوين الأوعية) ، الخلايا المكونة للدم ، الخلايا اللمفاوية التائية والبائية ؛ يعزز تدفق العدلات من نخاع العظام إلى الدم ؛ له نشاط مضاد للورم والفيروسات في الجسم الحي وفي المختبر ؛ لا يشارك فقط في ردود الفعل الدفاعية ، ولكن أيضًا في عمليات التدمير والتعويض المصاحبة للالتهاب ؛ يعمل كواحد من الوسطاء لتدمير الأنسجة ، وهو أمر شائع في الالتهابات المزمنة لفترات طويلة.

أرز. 1. توزيع مستوى alpha-TNF

في بلازما المتبرعين الأصحاء.

لوحظ ارتفاع مستوى alpha-TNF في مصل الدم خلال حالة ما بعد الصدمة ، مع اختلالات رئوية ، وانتهاكات للمسار الطبيعي للحمل ، والسرطان ، والربو القصبي. مستوى alpha-TNF أعلى بـ 5-10 مرات من المعدل الطبيعي أثناء تفاقم الشكل المزمن لالتهاب الكبد الفيروسي C. خلال فترة تفاقم أمراض الجهاز الهضمي ، يتجاوز تركيز alpha-TNF في المصل القاعدة بمعدل 10 مرات ، وفي بعض المرضى - 75-80 مرة. تم العثور على تركيزات عالية من alpha-TNF في السائل الدماغي الشوكي في المرضى الذين يعانون من التصلب المتعدد والتهاب السحايا النخاعي ، وفي المرضى الذين يعانون من التهاب المفاصل الروماتويدي - في السائل الزليلي. هذا يشير إلى تورط TNF alpha في التسبب في عدد من أمراض المناعة الذاتية. لا يتجاوز تواتر الكشف عن alpha-TNF في مصل الدم ، حتى مع الالتهاب الشديد ، 50 ٪ ، مع الإنتاج المستحث والعفوي - حتى 100 ٪. كان نطاق تركيزات alpha-TNF 0-6 بيكوغرام / مل ، المتوسط ​​- 1.5 بيكوغرام / مل (الشكل 1).

جاما انترفيرون.

أرز. 2. توزيع مستويات IFN-gamma

في بلازما المتبرعين الأصحاء.

انترلوكين 4

IL-4 هو بروتين سكري بوزن جزيئي 18-20 كيلو دالتون ، وهو مثبط طبيعي للالتهاب. جنبا إلى جنب مع IFN-gamma ، IL-4 هو سيتوكين رئيسي تنتجه الخلايا التائية (بشكل رئيسي الخلايا الليمفاوية TH-2). وهو يدعم توازن TH-1 / TH-2. الاتجاهات الرئيسية للنشاط البيولوجي لـ IL-4: يعزز فرط الحمضات ، وتراكم الخلايا البدينة ، وإفراز IgG4 ، والاستجابة المناعية الخلطية بوساطة TH-2 ؛ يمتلك نشاطًا مضادًا للورم الموضعي ، مما يحفز سكان الخلايا اللمفاوية التائية السامة للخلايا وتسلل الورم عن طريق الحمضات ؛ يمنع إطلاق السيتوكينات الالتهابية (alpha-TNF ، IL-1 ، IL-8) والبروستاجلاندين من الخلايا الوحيدة المنشطة ، إنتاج السيتوكينات بواسطة الخلايا الليمفاوية TH-1 (IL-2 ، جاما- INF ، إلخ).

أرز. 3. توزيع مستوى IL-4 في البلازما

المتبرعين الأصحاء.

يمكن ملاحظة زيادة مستوى IL-4 في كل من المصل وفي الخلايا الليمفاوية المحفزة في أمراض الحساسية (خاصة في وقت التفاقم) ، مثل الربو القصبي والتهاب الأنف التحسسي وحمى القش والتهاب الجلد التأتبي وأمراض الجهاز الهضمي. يرتفع مستوى الإنترلوكين 4 بشكل ملحوظ في مرضى التهاب الكبد المزمن سي (سي إتش سي). خلال فترات تفاقم CHC ، يزيد مقدارها 3 مرات تقريبًا مقارنة بالقاعدة ، وأثناء مغفرة CHC ، ينخفض ​​مستوى IL-4 ، خاصة على خلفية العلاج باستخدام IL-2 المؤتلف. كان مدى تركيزات IL-4 0–162 بيكوغرام / مل ، وكان المتوسط ​​6.9 بيكوغرام / مل ، وكان المعدل الطبيعي 0-20 بيكوغرام / مل (الشكل 3).

انترلوكين 8

ينتمي IL-8 إلى الكيموكينات ، وهو بروتين بوزن جزيئي 8 كيلو دالتون. يتم إنتاج IL-8 بواسطة خلايا بلعمية وحيدة النواة وخلايا بيضاء متعددة الأشكال وخلايا بطانية وأنواع أخرى من الخلايا استجابة لمحفزات مختلفة ، بما في ذلك البكتيريا والفيروسات ومنتجاتها الأيضية ، بما في ذلك السيتوكينات المؤيدة للالتهابات (على سبيل المثال ، IL-1 ، TNF alpha ). يتمثل الدور الرئيسي للإنترلوكين -8 في تعزيز الانجذاب الكيميائي للكريات البيض. يلعب دورًا مهمًا في كل من الالتهابات الحادة والمزمنة. لوحظ ارتفاع مستوى IL-8 في المرضى الذين يعانون من الالتهابات البكتيرية وأمراض الرئة المزمنة وأمراض الجهاز الهضمي. ترتفع مستويات الإنترلوكين 8 في البلازما لدى مرضى الإنتان ، وترتبط التركيزات العالية بزيادة معدل الوفيات. يمكن استخدام نتائج قياس محتوى IL-8 لمراقبة مسار العلاج والتنبؤ بنتيجة المرض. وبالتالي ، تم العثور على محتوى متزايد من IL-8 في السائل الدمعي في جميع المرضى الذين يعانون من قرحة القرنية. في جميع المرضى الذين يعانون من مسار معقد لقرحة القرنية ، كان تركيز IL-8 أعلى بمقدار 8 مرات من المرضى الذين يعانون من مسار إيجابي للمرض. وبالتالي ، يمكن استخدام محتوى السيتوكينات المنشطة للالتهابات (خاصة IL-8) في السائل الدمعي في قرح القرنية كمعيار تنبؤي لمسار هذا المرض.

أرز. 4. توزيع مستوى IL-8 في

بلازما المتبرعين الأصحاء (نوفوسيبيرسك).

وفقًا لبياناتنا والمنشورة ، في الأشخاص الأصحاء ، نادرًا ما يتم اكتشاف IL-8 في مصل الدم ؛ لوحظ الإنتاج العفوي لـ IL-8 بواسطة الخلايا أحادية النواة في الدم بنسبة 62٪ ، وقد أدى إلى إنتاج 100٪ من المتبرعين الأصحاء. كان مدى تركيزات IL-8 من 0 إلى 34 بيكوغرام / مل ، وكان المتوسط ​​2 بيكوغرام / مل ، وكان المعدل الطبيعي 0-10 بيكوغرام / مل (الشكل 4).

أرز. 5. توزيع مستوى IL-8 في البلازما

المتبرعين الأصحاء (روبتسوفسك).

مناهض مستقبلات إنترلوكين -1.

ينتمي IL-1RA إلى السيتوكينات ، وهو قليل الببتيد بوزن جزيئي 18-22 كيلو دالتون. IL-1RA هو مثبط داخلي من IL-1 ، ينتج عن طريق الضامة ، وحيدات ، العدلات ، الخلايا الليفية والخلايا الظهارية. يثبط IL-1RA النشاط البيولوجي للإنترلوكين IL-1alpha و IL-1beta ، ويتنافسان معه على الارتباط بمستقبل الخلية.

أرز. 6. توزيع مستوى IL-1RA

في بلازما المتبرعين الأصحاء

يتم تحفيز إنتاج IL-1RA بواسطة العديد من السيتوكينات والمنتجات الفيروسية وبروتينات المرحلة الحادة. يمكن التعبير عن IL-1RA بفاعلية في بؤر التهابية في مجموعة متنوعة من الأمراض المزمنة: التهاب المفاصل الروماتويدي والتهاب المفاصل المزمن عند الأحداث ، الذئبة الحمامية الجهازية ، آفات الدماغ الإقفارية ، أمراض الأمعاء الالتهابية ، الربو القصبي ، التهاب الحويضة والكلية ، الصدفية وغيرها. في الإنتان ، لوحظت أعلى زيادة في IL-1RA - تصل إلى 55 نانوغرام / مل في بعض الحالات ، ووجد أن زيادة تركيزات IL-1RA ترتبط بالتشخيص الإيجابي. لوحظت مستويات عالية من IL-1RA في النساء البدينات للغاية ، وهذا المستوى ينخفض ​​بشكل ملحوظ في غضون 6 أشهر بعد شفط الدهون. تراوح مدى تركيزات IL-1RA بين 0 و 3070 بيكوغرام / مل ، وكان المتوسط ​​316 بيكوغرام / مل. المعدل الطبيعي هو 50-1000 بيكوغرام / مل (الشكل 6).

ألفا إنترفيرون.

Alpha-IFN هو بروتين أحادي غير جليكوزيلاتي بوزن جزيئي يبلغ 18 كيلو دالتون ، يتم تصنيعه بشكل أساسي بواسطة الكريات البيض (الخلايا الليمفاوية B ، وحيدات). يمكن أيضًا إنتاج هذا السيتوكين عن طريق أي نوع من الخلايا تقريبًا استجابة للإثارة المناسبة ، ويمكن أن تكون العدوى الفيروسية داخل الخلايا محفزات قوية لتخليق IFN-alpha. تشمل محفزات alpha-INF ما يلي: الفيروسات ومنتجاتها ، ومن بينها احتلال الحمض النووي الريبي مزدوج الشريطة الذي يتم إنتاجه أثناء تكاثر الفيروس ، بالإضافة إلى البكتيريا ، والميكوبلازما والأوليات ، والسيتوكينات وعوامل النمو (مثل IL-1 و IL -2 ، alpha -FNO ، عوامل تحفيز المستعمرات ، إلخ). يشمل رد الفعل الدفاعي الأولي للاستجابة المناعية غير النوعية للجسم المضاد للبكتيريا تحريض ألفا وبيتا IFN. في هذه الحالة ، يتم إنتاجه بواسطة الخلايا العارضة للمستضد (الضامة) التي غزت البكتيريا. تلعب الإنترفيرونات (بما في ذلك alpha-IFN) دورًا مهمًا في الارتباط غير المحدد للاستجابة المناعية المضادة للفيروسات. إنها تعزز المقاومة المضادة للفيروسات عن طريق تحفيز الخلايا على تخليق الإنزيمات التي تثبط تكوين الأحماض النووية وبروتينات الفيروسات. بالإضافة إلى ذلك ، لديهم تأثير مناعي ، ويعزز التعبير عن مستضدات معقد التوافق النسيجي الرئيسي في الخلايا. تم الكشف عن تغيير في محتوى alpha-IFN في التهاب الكبد وتليف الكبد من المسببات الفيروسية. في لحظة تفاقم الالتهابات الفيروسية ، يزداد تركيز هذا السيتوكين بشكل كبير في معظم المرضى ، وخلال فترة النقاهة ينخفض ​​إلى المستوى الطبيعي. تم إثبات وجود علاقة بين مستوى alpha-INF في المصل وشدة الإصابة بالإنفلونزا ومدتها.

أرز. 7. توزيع مستوى alpha-IFN

في بلازما المتبرعين الأصحاء.

لوحظ زيادة في تركيز alpha-IFN في مصل معظم المرضى الذين يعانون من أمراض المناعة الذاتية مثل التهاب المفاصل الروماتويدي والتهاب المفاصل الروماتويدي وداء الفقار والتهاب المفاصل الصدفي وآلام العضلات الروماتيزمية وتصلب الجلد والذئبة الحمامية الجهازية والتهاب الأوعية الدموية الجهازية. لوحظ ارتفاع مستوى هذا الإنترفيرون أيضًا في بعض المرضى أثناء تفاقم القرحة الهضمية وتحص صفراوي. كان مدى تركيزات alpha-INF هو 0–93 بيكوغرام / مل ، وكان المتوسط ​​20 بيكوغرام / مل. المعدل الطبيعي يصل إلى 45 جزء من الغرام / مل (الشكل 7).

الأجسام المضادة لـ alpha-IFN.

يمكن الكشف عن الأجسام المضادة لـ alpha-IFN في مصل مرضى الذئبة الحمامية الجسدية. لوحظ أيضًا التحريض التلقائي للأجسام المضادة لـ alpha-IFN في مصل المرضى الذين يعانون من أشكال مختلفة من السرطان. في بعض الحالات ، تم العثور على أجسام مضادة لـ alpha-IFN في مصل المرضى المصابين بفيروس نقص المناعة البشرية ، وكذلك في السائل النخاعي وفي مصل مرضى التهاب السحايا خلال المرحلة الحادة ، في مصل مرضى التهاب المفاصل المزمن.

أرز. 8. توزيع مستوى الأجسام المضادة لـ alpha-IFN

في بلازما المتبرعين الأصحاء.

Alpha-IFN هو أحد الأدوية العلاجية الفعالة المضادة للفيروسات والأورام ، ولكن استخدامه على المدى الطويل يمكن أن يؤدي إلى إنتاج أجسام مضادة محددة لـ alpha-IFN. هذا يقلل من فعالية العلاج ، وفي بعض الحالات يسبب آثارًا جانبية مختلفة: من الشبيهة بالأنفلونزا إلى تطور أمراض المناعة الذاتية. في ضوء ذلك ، أثناء العلاج INF ، من المهم التحكم في مستوى الأجسام المضادة لـ alpha-INF في جسم المريض. يعتمد تكوينها على نوع الدواء المستخدم في العلاج ومدة العلاج ونوع المرض. كان نطاق تركيزات الأجسام المضادة لـ alpha-IFN 0-126 نانوغرام / مل ، وكان المتوسط ​​6.2 نانوغرام / مل. المعدل الطبيعي يصل إلى 15 نانوغرام / مل (الشكل 8). يسمح تقييم مستوى السيتوكينات باستخدام مجموعات الكاشف المتاحة تجاريًا في "Vector-Best" CJSC باتباع نهج جديد لدراسة حالة الجهاز المناعي للجسم في الممارسة السريرية.

الأدوية المناعية القائمة على السيتوكينات.

عمل مثير للاهتمام S. Simbirtseva ، معهد أبحاث الدولة للمنتجات البيولوجية عالية النقاء ، وزارة الصحة الروسية ، سانت بطرسبرغ). يمكن عزل السيتوكينات في نظام مستقل جديد لتنظيم الوظائف الرئيسية للجسم ، والذي يوجد جنبًا إلى جنب مع الجهاز العصبي والغدد الصماء التنظيم ويرتبط في المقام الأول بالحفاظ على التوازن أثناء إدخال مسببات الأمراض وانتهاك سلامة الأنسجة. تم إنشاء هذه الفئة الجديدة من الجزيئات التنظيمية بواسطة الطبيعة على مدار ملايين السنين من التطور ولديها إمكانات غير محدودة لاستخدامها كأدوية. داخل جهاز المناعة ، تتوسط السيتوكينات العلاقة بين الاستجابات الدفاعية غير المحددة والمناعة المحددة ، وتعمل في كلا الاتجاهين. على مستوى الجسم ، تتواصل السيتوكينات بين الجهاز المناعي والجهاز العصبي والغدد الصماء والدم وأنظمة أخرى وتعمل على إشراكهم في تنظيم وتنظيم ردود الفعل الدفاعية. لطالما كانت القوة الدافعة وراء الدراسة المكثفة للسيتوكينات هي الاحتمال الواعد لاستخدامها السريري في علاج الأمراض المنتشرة ، بما في ذلك السرطان والأمراض المعدية ونقص المناعة. تم تسجيل العديد من مستحضرات السيتوكين في روسيا ، بما في ذلك الإنترفيرون ، والعوامل المحفزة للمستعمرات ، والإنترلوكينات ومضاداتها ، وعامل نخر الورم. يمكن تقسيم جميع مستحضرات السيتوكين إلى مستحضرات طبيعية ومؤتلفة. المستحضرات الطبيعية هي مستحضرات بدرجات متفاوتة من التنقية ، يتم الحصول عليها من وسط زراعة الخلايا حقيقية النواة المحفزة ، وخاصة الخلايا البشرية. تتمثل العيوب الرئيسية في انخفاض درجة التنقية ، واستحالة التوحيد بسبب كثرة المكونات ، واستخدام مكونات الدم في الإنتاج. على ما يبدو ، يرتبط مستقبل العلاج الخلوي بالأدوية المعدلة وراثيًا التي تم الحصول عليها باستخدام أحدث التطورات في التكنولوجيا الحيوية. على مدى العقدين الماضيين ، تم استنساخ جينات معظم السيتوكينات وتم الحصول على نظائرها المؤتلفة التي تكرر تمامًا الخصائص البيولوجية للجزيئات الطبيعية. في الممارسة السريرية ، هناك ثلاثة مجالات رئيسية لاستخدام السيتوكين:

1) العلاج الخلوي لتنشيط ردود الفعل الدفاعية للجسم ، أو تعديل المناعة ، أو تعويض نقص السيتوكينات الذاتية ،

2) العلاج المناعي المضاد للسيتوكين الذي يهدف إلى منع التأثير البيولوجي للسيتوكينات ومستقبلاتها ،

3) العلاج الجيني السيتوكيني بهدف تعزيز المناعة المضادة للأورام أو تصحيح العيوب الوراثية في نظام السيتوكين.

يمكن استخدام عدد من السيتوكينات سريريًا للاستخدام الجهازي والمحلي. يكون الإعطاء الجهازي له ما يبرره في الحالات التي يكون فيها من الضروري ضمان عمل السيتوكينات في العديد من الأعضاء من أجل تنشيط أكثر فعالية للمناعة ، أو لتنشيط الخلايا المستهدفة الموجودة في أجزاء مختلفة من الجسم. في حالات أخرى ، يحتوي التطبيق الموضعي على عدد من المزايا ، لأنه يسمح لك بتحقيق تركيز محلي عالٍ للمبدأ النشط ، واستهداف العضو المستهدف وتجنب المظاهر الجهازية غير المرغوب فيها. تعتبر السيتوكينات حاليًا واحدة من أكثر الأدوية الواعدة لاستخدامها في الممارسة السريرية.

استنتاج.

وبالتالي ، في الوقت الحاضر ليس هناك شك في أن السيتوكينات هي أهم العوامل في أمراض المناعة. تسمح دراسة مستوى السيتوكينات للفرد بالحصول على معلومات حول النشاط الوظيفي لأنواع مختلفة من الخلايا ذات الكفاءة المناعية ، ونسبة عمليات تنشيط المساعدين T من النوعين الأول والثاني ، وهو أمر مهم جدًا في التشخيص التفريقي لعدد من العمليات المعدية والمرضية. السيتوكينات هي بروتينات محددة يمكن من خلالها لخلايا الجهاز المناعي تبادل المعلومات والتفاعل مع بعضها البعض. اليوم ، تم اكتشاف أكثر من مائة سيتوكينات مختلفة ، والتي تنقسم تقليديًا إلى مؤيدة للالتهابات (مسببة للالتهاب) ومضادة للالتهابات (تمنع تطور الالتهاب). لذلك ، تنقسم الوظائف البيولوجية المختلفة للسيتوكينات إلى ثلاث مجموعات: فهي تتحكم في تطور وتوازن جهاز المناعة ، وتتحكم في نمو خلايا الدم وتمايزها (نظام المكونة للدم) وتشارك في ردود فعل دفاعية غير محددة للجسم ، مما يؤثر على الالتهابات. العمليات ، تخثر الدم ، ضغط الدم.

قائمة الأدب المستخدم.

S.V. بيلمر ، أ. Simbirtsev، O. V. جولوفينكو ، إل. بوبنوفا ، إل. كاربينا ، ني. Shchigoleva ، T.L. ميخائيلوفا. / الجامعة الطبية الحكومية الروسية ، المركز العلمي الحكومي لطب القولون ، موسكو ومعهد أبحاث الدولة للمستحضرات الحيوية عالية النقاء ، سانت بطرسبرغ.

S.V. سينيكوف ، أ. سيلكوف // مجلة "السيتوكينات والالتهابات" ، 2005 ، العدد 1 ت. 4 ، رقم 1. ص 22 - 27.

ت. Ryabicheva، N.A. Varaksin ، N.V. تيموفيفا ، إم يو. Rukavishnikov ، مواد عمل JSC "Vector-Best".

A..Simbirtsev ، معهد أبحاث الدولة للبيولوجيا عالية النقاوة ، وزارة الصحة الروسية ، سانت بطرسبرغ.

Ketlinsky S.A. ، Simbirtsev A.S .. المعهد الحكومي لبحوث المستحضرات الحيوية عالية النقاء ، سانت بطرسبرغ.

شوماتوفا ، في.ب. شوماتوف ، إي في ماركيلوفا ، إل جي جاف دافئ. قسم التخدير والإنعاش ، جامعة ولاية فلاديفوستوك الطبية.

في العمل ، تم استخدام المواد من الموقع http://humbio.ru/humbio/spid/000402c2.htm

بعض مسببات الأمراض المعدية. لذا ، نورسلفازول ...

1. الآليات الجزيئية والخلوية للمناعة المضادة للفيروسات ، وأنماط التطور والمناعة

   الخلاصة >> طب ، صحة

   ... يشير "الموقع" إلى موقع محدد معينعديد ببتيد (مستضد) الذي بواسطته ... مراحلها المبكرة. السيتوكيناتو chemokines. آخر السيتوكينات، بالإضافة إلى الإنترفيرون ، ... التي تنتجها لكل وحدة زمنية السيتوكيناتيحدد شدة الانتشار و ...

2. دراسة أسباب تطور تليف نخاع العظم في أمراض التكاثر النقوي من خلال تحليل تأثير عوامل الصفائح الدموية على الخلايا الجذعية اللحمية المتوسطة

   الواجب المنزلي >> الطب والصحة

   تركيز مختلف - كمي تعريفالبروتين في الأنظمة التجريبية ... يؤدي إلى مفعول مطول السيتوكينمما يعزز عملية التليف ... الصفائح الدموية. كما زاد المحتوى السيتوكينوجد في البول ...

3. التسبب في مرض السل في البشر

   الخلاصة >> طب ، صحة

   لكن الغذاء ممكن أيضًا. معينيلعب دورًا في العدوى الهوائية ... يلعب ، التي تفرزها الضامة والوحيدات السيتوكين- عامل نخر الورم (TNF). ... الأيونات ، تمتلك كل خلية المؤكدنظام يضمن نقل المواد ...

). نظرًا لحقيقة أنها قامت بتنشيط أو تعديل الخصائص التكاثرية لخلايا هذه الفئة ، فقد تم تسميتها بالخلايا المناعية. بعد أن أصبح معروفًا أن هذه المركبات لا تتفاعل مع خلايا الجهاز المناعي فقط ، تم اختصار اسمها إلى السيتوكينات ، والتي تشمل أيضًا عامل تحفيز المستعمرات (CSF) والعديد من العوامل الأخرى (انظر العوامل الفعالة في الأوعية والالتهابات).

السيتوكينات [اليونانية. kytos- إناء ، هنا خلية و كينو- تحريك ، تشجيع] - مجموعة كبيرة ومتنوعة من وسطاء بروتينات صغيرة الحجم (وزن جزيئي من 8 إلى 80 كيلو دالتون) - جزيئات وسيطة ("بروتينات الاتصال") تشارك في الإشارات بين الخلايا بشكل رئيسي في الجهاز المناعي. تشتمل السيتوكينات على عامل نخر الورم ، والإنترفيرون ، وعدد من الإنترلوكينات ، وما إلى ذلك. تسمى السيتوكينات التي يتم تصنيعها بواسطة الخلايا الليمفاوية وهي منظمات للتكاثر والتمايز ، ولا سيما الخلايا المكونة للدم وخلايا الجهاز المناعي ، تسمى اللمفوكينات. تم اقتراح مصطلح "السيتوكينات" بواسطة S. Coen et al. في عام 1974

جميع خلايا الجهاز المناعي لها وظائف معينة وتعمل في تفاعل منسق بوضوح ، والذي يتم توفيره بواسطة مواد نشطة بيولوجيًا خاصة - السيتوكينات - منظمات تفاعلات المناعة. السيتوكينات هي بروتينات محددة يمكن من خلالها لخلايا الجهاز المناعي المختلفة تبادل المعلومات مع بعضها البعض وتنسيق أعمالها. تمثل مجموعة وكمية السيتوكينات التي تعمل على مستقبلات سطح الخلية - "بيئة السيتوكين" - مصفوفة من الإشارات المتفاعلة والمتغيرة بشكل متكرر. هذه الإشارات معقدة بسبب التنوع الكبير في مستقبلات السيتوكينات وبسبب حقيقة أن كل من السيتوكينات يمكنها تنشيط أو قمع العديد من العمليات ، بما في ذلك توليفها الخاص وتخليق السيتوكينات الأخرى ، وكذلك تكوين وظهور مستقبلات السيتوكينات على سطح الخلية. الأنسجة المختلفة لها "بيئة خلوية" صحية خاصة بها. تم اكتشاف أكثر من مائة سيتوكينات مختلفة.

السيتوكينات هي عنصر مهم في تفاعل الخلايا الليمفاوية المختلفة مع بعضها البعض ومع الخلايا البلعمية (الشكل 4). من خلال السيتوكينات ، تساعد T-helpers في تنسيق عمل مجموعة متنوعة من الخلايا المشاركة في الاستجابة المناعية.

منذ اكتشاف الإنترلوكينات في السبعينيات ، تم اكتشاف أكثر من مائة مادة نشطة بيولوجيًا حتى الآن. تنظم السيتوكينات المختلفة تكاثر وتمايز الخلايا المناعية. وإذا تمت دراسة تأثير السيتوكينات على هذه العمليات جيدًا ، فإن البيانات حول تأثير السيتوكينات على موت الخلايا المبرمج ظهرت مؤخرًا نسبيًا. يجب أيضًا أخذها في الاعتبار عند الاستخدام السريري للسيتوكينات.

يتم تنفيذ الإشارات بين الخلايا في الجهاز المناعي عن طريق تفاعل الاتصال المباشر للخلايا أو بمساعدة وسطاء التفاعلات بين الخلايا. دراسة التمايز بين الخلايا ذات الكفاءة المناعية والخلايا المكونة للدم ، بالإضافة إلى آليات التفاعل بين الخلايا التي تشكل الاستجابة المناعية ، وهي مجموعة كبيرة ومتنوعة من الوسطاء القابل للذوبان من طبيعة بروتينية - جزيئات وسيطة ("بروتينات ملزمة") تشارك في الإشارات بين الخلايا - السيتوكينات اكتشف. عادة ما يتم استبعاد الهرمونات من هذه الفئة على أساس طبيعة عمل الغدد الصماء (بدلاً من paracrine أو autocrine). (انظر السيتوكينات: آليات نقل الإشارات الهرمونية). جنبا إلى جنب مع الهرمونات والناقلات العصبية ، فإنها تشكل الأساس للغة الإشارات الكيميائية ، والتي يتم من خلالها تنظيم تكوين وتجديد الأنسجة في كائن متعدد الخلايا. يلعبون دورًا رئيسيًا في التنظيم الإيجابي والسلبي للاستجابة المناعية. حتى الآن ، تم اكتشاف ودراسة أكثر من مائة سيتوكينات عند البشر بدرجة أو بأخرى ، كما ذكر أعلاه ، وهناك تقارير مستمرة عن اكتشاف أخرى جديدة. بالنسبة للبعض ، تم الحصول على نظائرها المعدلة وراثيًا. تعمل السيتوكينات من خلال تنشيط مستقبلات السيتوكينات.

في كثير من الأحيان ، لا يتم تقسيم السيتوكينات إلى عدد من العائلات من خلال وظائفها ، ولكن من خلال طبيعة الهيكل ثلاثي الأبعاد ، والذي يعكس التشابه داخل المجموعة في التشكل وتسلسل الأحماض الأمينية لمستقبلات خلوية محددة (انظر " مستقبلات السيتوكينات "). يتم إنتاج بعضها بواسطة الخلايا التائية (انظر "السيتوكينات التي تنتجها الخلايا التائية"). يتمثل النشاط البيولوجي الرئيسي للسيتوكينات في تنظيم الاستجابة المناعية في جميع مراحل تطورها ، والتي تلعب فيها دورًا مركزيًا. بشكل عام ، توفر هذه المجموعة الكبيرة الكاملة من المنظمين الداخليين مجموعة متنوعة من العمليات ، مثل:

تحريض السمية الخلوية في الضامة ،

تؤدي العديد من الأمراض الخطيرة إلى زيادات كبيرة في مستويات ألفا IL-1 و TNF. تعزز هذه السيتوكينات تنشيط الخلايا البلعمية ، وهجرتها إلى موقع الالتهاب ، وكذلك إطلاق وسطاء التهابات - مشتقات الدهون ، أي البروستاغلاندين E2 ، والثرموبوكسانات وعامل تنشيط الصفائح الدموية. بالإضافة إلى ذلك ، فإنها تسبب بشكل مباشر أو غير مباشر تمدد الشرايين ، وتخليق البروتينات السكرية اللاصقة ، وتنشيط الخلايا اللمفاوية التائية والبائية. يقوم IL-1 بتشغيل تخليق IL-8 ، والذي يعزز الانجذاب الكيميائي للخلايا الوحيدة والعدلات وإطلاق الإنزيمات من العدلات. في الكبد ، ينخفض ​​تخليق الألبومين ويزداد تخليق البروتينات في المرحلة الحادة من الالتهاب ، بما في ذلك مثبطات الأنزيم البروتيني ، والمكونات التكميلية ، والفيبرينوجين ، والسيرولوبلازمين ، والفيريتين ، والهبتوغلوبين. يمكن أن يزيد مستوى البروتين التفاعلي C ، الذي يرتبط بالخلايا التالفة والميتة ، وكذلك بعض الكائنات الحية الدقيقة ، حتى 1000 مرة. من الممكن أيضًا حدوث زيادة كبيرة في تركيز الأميلويد أ في الدم وترسبه في أعضاء مختلفة ، مما يؤدي إلى الإصابة بالداء النشواني الثانوي. الوسيط الأكثر أهمية في المرحلة الحادة من الالتهاب هو IL-6 ، على الرغم من أن IL-1 و TNF-alpha يمكن أن يسببا أيضًا التغيرات الموصوفة في وظائف الكبد. يعزز IL-1 و TNF-alpha تأثير بعضهما البعض على المظاهر المحلية والعامة للالتهاب ؛ لذلك ، فإن الجمع بين هذين السيتوكينات ، حتى في الجرعات الصغيرة ، يمكن أن يتسبب في فشل العديد من الأعضاء وانخفاض ضغط الدم الشرياني المستمر. قمع نشاط أي منهم يلغي هذا التفاعل ويحسن حالة المريض بشكل ملحوظ. ينشط IL-1 الخلايا اللمفاوية التائية والبائية بقوة أكبر عند 39 * درجة مئوية مقارنة بـ 37 * درجة مئوية. يتسبب IL-1 و TNF alpha في انخفاض كتلة الجسم النحيل وفقدان الشهية ، مما يؤدي إلى دنف مع ارتفاع في درجة الحرارة. تدخل هذه السيتوكينات إلى مجرى الدم لفترة قصيرة فقط ، لكنها كافية لتحفيز إنتاج الإنترلوكين 6. يتواجد الإنترلوكين 6 بشكل دائم في الدم ، لذا فإن تركيزه يكون أكثر اتساقًا مع شدة الحمى ومظاهر العدوى الأخرى. ومع ذلك ، فإن IL-6 ، على عكس IL-1 و TNF-alpha ، لا يعتبر سيتوكين قاتل.

ملخص. السيتوكينات عبارة عن بروتينات صغيرة تعمل على الأوتوكرين (أي على الخلية التي تنتجها) أو الباراكرين (على الخلايا الموجودة في مكان قريب). إن تكوين وإطلاق هذه الجزيئات النشطة للغاية قصير العمر ومنظم بإحكام. السيتوكينات ، التي تصنعها الخلايا الليمفاوية وهي منظمات للتكاثر والتمايز ، لا سيما الخلايا المكونة للدم وخلايا الجهاز المناعي ، تسمى أيضًا اللمفوكينات و

سينظر هذا الفصل في نهج متكامل لتقييم نظام السيتوكين باستخدام طرق البحث الحديثة الموصوفة سابقًا.

أولاً ، نحدد المفاهيم الأساسية للنظام الخلوي.

تعتبر السيتوكينات حاليًا جزيئات بروتين ببتيد تنتجها خلايا مختلفة من الجسم وتنفذ تفاعلات بين الخلايا وبين الأنظمة. السيتوكينات هي منظمات عالمية لدورة حياة الخلايا ، فهي تتحكم في عمليات التمايز والتكاثر والتفعيل الوظيفي والاستماتة للخلايا.

تسمى السيتوكينات التي تنتجها خلايا الجهاز المناعي الخلايا المناعية. هم فئة من وسطاء الببتيد القابل للذوبان في الجهاز المناعي الضروري لتطويره وعمله والتفاعل مع أنظمة الجسم الأخرى (Kovalchuk L.V. et al. ، 1999).

تلعب السيتوكينات ، بصفتها جزيئات تنظيمية ، دورًا مهمًا في تفاعلات المناعة الفطرية والتكيفية ، وتضمن ترابطها ، وتتحكم في تكون الدم ، والالتهابات ، والتئام الجروح ، وتشكيل أوعية دموية جديدة (تكوين الأوعية) والعديد من العمليات الحيوية الأخرى.

يوجد حاليًا العديد من التصنيفات المختلفة للسيتوكينات ، مع مراعاة هيكلها ونشاطها الوظيفي وأصلها ونوع مستقبلات السيتوكينات. تقليديا ، وفقا للتأثيرات البيولوجية ، من المعتاد التمييز بين مجموعات السيتوكينات التالية.

1. إنترلوكينز(IL-1-IL-33) عبارة عن بروتينات تنظيمية إفرازية للجهاز المناعي توفر تفاعلات وسيطة في الجهاز المناعي وارتباطه بأنظمة الجسم الأخرى. يتم تصنيف الإنترلوكينات وفقًا لنشاطها الوظيفي إلى السيتوكينات المؤيدة والمضادة للالتهابات وعوامل نمو الخلايا الليمفاوية والسيتوكينات التنظيمية وما إلى ذلك.

3. عوامل نخر الورم (TNF)- السيتوكينات ذات الإجراءات التنظيمية السامة للخلايا: TNFa والسموم اللمفاوية (LT).

4. عوامل نمو الخلايا المكونة للدم- عامل نمو الخلايا الجذعية (Kit - ligand) ، IL-3 ، IL-7 ، IL-11 ، إرثروبويتين ، trobopoietin ، عامل تحفيز مستعمرة الخلايا الضامة المحببة - GM-CSF ، الخلايا المحببة CSF - G-CSF ، البلاعم -

نيويورك KSF - M-KSF).

5. كيموكينيس- С ، CC ، СХС (IL-8) ، СХ3С - منظمات الانجذاب الكيميائي لأنواع مختلفة من الخلايا.

6. عوامل نمو الخلايا غير اللمفاوية- منظمات النمو والتمايز والنشاط الوظيفي للخلايا التي تنتمي إلى الأنسجة المختلفة (عامل نمو الخلايا الليفية - FGF ، عامل نمو الخلايا البطانية ، عامل نمو البشرة - EGF للبشرة) وتحويل عوامل النمو (TGFβ ، TGFα).

من بين أمور أخرى ، في السنوات الأخيرة ، تمت دراسة العامل الذي يثبط هجرة الضامة (عامل تثبيط الهجرة - MIF) ، والذي يعتبر بمثابة هرمون عصبي مع نشاط خلوي وأنزيمي ، تمت دراسته بنشاط (Suslov AP ، 2003 ؛ Kovalchuk LV et al. و

تختلف السيتوكينات في التركيب والنشاط البيولوجي وخصائص أخرى. ومع ذلك ، جنبا إلى جنب مع الاختلافات ، السيتوكينات لديها الخصائص العامة،سمة من سمات هذه الفئة من جزيئات التنظيم الحيوي.

1. السيتوكينات هي ، كقاعدة عامة ، بولي ببتيدات غليكوزيلاتي بمتوسط ​​وزن جزيئي (أقل من 30 كيلو دالتون).

2. يتم إنتاج السيتوكينات بواسطة خلايا الجهاز المناعي وخلايا أخرى (على سبيل المثال ، البطانة ، الخلايا الليفية ، إلخ) استجابةً لمحفز منشط (الهياكل الجزيئية المرتبطة بالعوامل الممرضة ، المستضدات ، السيتوكينات ، إلخ) والمشاركة في التفاعلات مناعة فطرية وتكيفية ، تنظم قوتها ومدتها. يتم تصنيع بعض السيتوكينات بشكل أساسي.

3. إفراز السيتوكينات هو عملية قصيرة المدى. لا يتم تخزين السيتوكينات كجزيئات مُشكلة مسبقًا ، ولكن يتم تخزينها

يبدأ التوليف دائمًا بنسخ الجينات. تنتج الخلايا السيتوكينات بتركيزات منخفضة (بيكوجرام لكل مليلتر).

4. في معظم الحالات ، يتم إنتاج السيتوكينات وتعمل على الخلايا المستهدفة على مقربة (عمل قصير المدى). الموقع الرئيسي لعمل السيتوكين هو المشبك بين الخلايا.

5. وفرةيتجلى نظام السيتوكينات في حقيقة أن كل نوع من الخلايا قادر على إنتاج العديد من السيتوكينات ، ويمكن أن تفرز خلايا مختلفة كل سيتوكين.

6. تتميز جميع السيتوكينات بـ تعدد الأشكال ،أو تعدد وظائف العمل. وبالتالي ، فإن ظهور علامات الالتهاب يرجع إلى تأثير IL-1 و TNFα و IL-6 و IL-8. يضمن ازدواج الوظائف موثوقية نظام السيتوكين.

7. يتم التوسط في عمل السيتوكينات على الخلايا المستهدفة عن طريق مستقبلات غشائية عالية التقارب عالية التحديد ، وهي بروتينات سكرية عبر الغشاء ، تتكون عادة من أكثر من وحدة فرعية واحدة. الجزء خارج الخلية من المستقبلات مسؤول عن الارتباط الخلوي. هناك مستقبلات تقضي على السيتوكينات الزائدة في التركيز المرضي. هذه هي ما يسمى مستقبلات المصيدة. المستقبلات القابلة للذوبان هي المجال خارج الخلية لمستقبلات الغشاء ، مفصولة بإنزيم. المستقبلات القابلة للذوبان قادرة على تحييد السيتوكينات ، والمشاركة في نقلها إلى بؤرة الالتهاب وفي إفرازها من الجسم.

8. السيتوكينات العمل على مبدأ الشبكة.يمكنهم العمل في حفلة موسيقية. يبدو أن العديد من الوظائف المنسوبة في البداية إلى سيتوكين واحد يتم التوسط فيها من خلال العمل المتضافر للعديد من السيتوكينات. (التعاضدأجراءات). من أمثلة التفاعلات التآزرية للسيتوكينات تحفيز الاستجابات الالتهابية (IL-1 و IL-6 و TNF-a) ، بالإضافة إلى تخليق IgE

(IL-4 و IL-5 و IL-13).

تحث بعض السيتوكينات على تخليق السيتوكينات الأخرى (تتالي).يعد العمل المتسلسل للسيتوكينات ضروريًا لتطوير الاستجابات الالتهابية والمناعة. تحدد قدرة بعض السيتوكينات على تعزيز أو إضعاف إنتاج البعض الآخر آليات تنظيمية إيجابية وسلبية مهمة.

يُعرف التأثير المضاد للسيتوكينات ، على سبيل المثال ، يمكن أن يكون إنتاج IL-6 استجابةً لزيادة تركيز TNF α

آلية تنظيمية سلبية للتحكم في إنتاج هذا الوسيط أثناء الالتهاب.

يتم تنظيم السيتوكين لوظائف الخلية المستهدفة باستخدام آليات أوتوكرين أو باراكرين أو الغدد الصماء. بعض السيتوكينات (IL-1 ، IL-6 ، TNFα ، إلخ) قادرة على المشاركة في تنفيذ جميع الآليات المذكورة أعلاه.

تعتمد استجابة الخلية لتأثير السيتوكين على عدة عوامل:

من نوع الخلايا ونشاطها الوظيفي الأولي ؛

من التركيز المحلي للسيتوكين.

من وجود جزيئات وسيطة أخرى.

وهكذا ، فإن الخلايا المنتجة والسيتوكينات ومستقبلاتها المحددة على الخلايا المستهدفة تشكل شبكة وسيطة واحدة. إن مجموعة الببتيدات التنظيمية ، وليس السيتوكينات الفردية ، هي التي تحدد استجابة الخلية النهائية. في الوقت الحاضر ، يعتبر نظام السيتوكين نظامًا عالميًا للتنظيم على مستوى الكائن الحي بأكمله ، مما يضمن تطوير ردود الفعل الوقائية (على سبيل المثال ، أثناء الإصابة).

في السنوات الأخيرة ، ظهرت فكرة النظام الخلوي الذي يجمع بين:

1) الخلايا المنتجة ؛

2) السيتوكينات القابلة للذوبان ومضاداتها ؛

3) الخلايا المستهدفة ومستقبلاتها (الشكل 7.1).

تؤدي انتهاكات المكونات المختلفة للنظام الخلوي إلى تطوير العديد من العمليات المرضية ، وبالتالي فإن تحديد العيوب في هذا النظام التنظيمي مهم للتشخيص الصحيح وتعيين العلاج المناسب.

دعونا نفكر أولاً في المكونات الرئيسية لنظام السيتوكين.

الخلايا المنتجة للسيتوكين

I. المجموعة الرئيسية من الخلايا المنتجة للسيتوكين في الاستجابة المناعية التكيفية هي الخلايا الليمفاوية. لا تفرز خلايا الراحة السيتوكينات. مع التعرف على المستضد وبمشاركة تفاعلات المستقبلات (CD28-CD80 / 86 للخلايا اللمفاوية التائية و CD40-CD40L للخلايا الليمفاوية B) ، يحدث تنشيط الخلية ، مما يؤدي إلى نسخ جينات السيتوكين ، وترجمة وإفراز الببتيدات السكرية في الخلايا البينية فضاء.

أرز. 7.1نظام السيتوكين

يتم تمثيل مساعدي CD4 T من قبل مجموعات سكانية فرعية: Th0 ، Th1 ، Th2 ، Th17 ، Tfh ، والتي تختلف في طيف السيتوكينات المفرزة استجابة لمولدات المضادات المختلفة.

ينتج Th0 مجموعة واسعة من السيتوكينات بتركيزات منخفضة جدًا.

اتجاه التمايز Th0يحدد تطور شكلين من الاستجابة المناعية مع غلبة الآليات الخلطية أو الخلوية.

طبيعة المستضد وتركيزه وتوطينه في الخلية ونوع الخلايا العارضة للمستضد ومجموعة معينة من السيتوكينات تنظم اتجاه تمايز Th0.

بعد التقاط المستضد ومعالجته ، تقدم الخلايا التغصنية الببتيدات المستضدية لخلايا Th0 وتنتج السيتوكينات التي تنظم اتجاه تمايزها إلى الخلايا المستجيبة. يظهر دور السيتوكينات الفردية في هذه العملية في الشكل. 7.2 يحث IL-12 على تخليق IFNγ بواسطة الخلايا اللمفاوية التائية و] HGC. يوفر IFNu تمايز Th1 ، والذي يبدأ في إفراز السيتوكينات (IL-2 ، IFNu ، IL-3 ، TNF-a ، lymphotoxins) التي تنظم تطور التفاعلات مع مسببات الأمراض داخل الخلايا

(فرط الحساسية المتأخرة (HRT) وأنواع مختلفة من السمية الخلوية).

يضمن IL-4 تمايز Th0 إلى Th2. ينتج Th2 المنشط السيتوكينات (IL-4 ، IL-5 ، IL-6 ، IL-13 ، إلخ) ، والتي تحدد تكاثر الخلايا الليمفاوية B ، وتمايزها الإضافي في خلايا البلازما ، وتطوير استجابات الأجسام المضادة ، بشكل أساسي مسببات الأمراض خارج الخلية.

ينظم IFNu بشكل سلبي وظيفة خلايا Th2 ، وعلى العكس من ذلك ، فإن IL-4 و IL-10 الذي يفرزه Th2 يثبط وظيفة Th1 (الشكل 7.3). ترتبط الآلية الجزيئية لهذا التنظيم بعوامل النسخ. يوجه التعبير عن T-bet و STAT4 ، الذي يحدده IFNy ، تمايز الخلايا التائية على طول مسار Th1 ويمنع تطور Th2. يستحث IL-4 التعبير عن GATA-3 و STAT6 ، والذي يضمن ، على التوالي ، تحويل THO الساذج إلى خلايا Th2 (الشكل 7.2).

في السنوات الأخيرة ، تم وصف مجموعة سكانية فرعية خاصة من الخلايا التائية المساعدة (Th17) التي تنتج IL-17. يمكن التعبير عن أعضاء عائلة IL-17 بواسطة خلايا الذاكرة النشطة (CD4CD45RO) ، وخلايا y5T ، وخلايا NKT ، والعدلات ، والوحيدات تحت تأثير IL-23 ، و IL-6 ، و TGFβ التي تنتجها البلاعم والخلايا التغصنية. عامل التمايز الرئيسي في البشر هو ROR-C ، في الفئران - ROR-γ لتم توضيح الدور الأساسي لـ IL-17 في تطور الالتهاب المزمن وأمراض المناعة الذاتية (انظر الشكل 7.2).

بالإضافة إلى ذلك ، يمكن أن تتمايز الخلايا الليمفاوية التائية في الغدة الصعترية إلى خلايا تنظيمية طبيعية (Treg) معبرة عن علامات السطح CD4 + CD25 + وعامل النسخ FOXP3. هذه الخلايا قادرة على قمع الاستجابة المناعية بوساطة خلايا Th1 و Th2 من خلال الاتصال المباشر بين الخلايا وتوليف TGFβ و IL-10.

يتم عرض مخططات التمايز لاستنساخ Th0 والسيتوكينات التي تفرزها في الشكل. 7.2 و 7.3 (انظر أيضًا إدراج اللون).

تعد الخلايا التائية السامة للخلايا (CD8 +) ، والخلايا القاتلة الطبيعية منتجة ضعيفة للسيتوكينات مثل الإنترفيرون و TNF-a والسموم اللمفاوية.

التنشيط المفرط لأحد المجموعات السكانية الفرعية يمكن أن يحدد تطور أحد المتغيرات للاستجابة المناعية. يمكن أن يؤدي الخلل المزمن في تنشيط Th إلى تكوين حالات مرضية مناعية مرتبطة بظهور

الحساسية ، أمراض المناعة الذاتية ، عمليات الالتهابات المزمنة ، إلخ.

أرز. 7.2مجموعات سكانية فرعية مختلفة من الخلايا اللمفاوية التائية المنتجة للسيتوكينات

ثانيًا. في نظام المناعة الفطري ، المنتجون الرئيسيون للسيتوكينات هم الخلايا النخاعية. بمساعدة المستقبلات الشبيهة بـ Toll (TLRs) ، يتعرفون على الهياكل الجزيئية المتشابهة لمسببات الأمراض المختلفة ، ما يسمى بالأنماط الجزيئية المرتبطة بالعوامل الممرضة (RAMP) ، على سبيل المثال ، عديد السكاريد الدهني (LPS) للبكتيريا سالبة الجرام ، والأحماض الدهنية الدهنية ، الببتيدوغليكان للكائنات الدقيقة إيجابية الجرام ، والسوط ، والحمض النووي الغني بتكرارات G ، وما إلى ذلك نتيجة لذلك

يؤدي هذا التفاعل مع TLR إلى سلسلة تحويل الإشارات داخل الخلايا ، مما يؤدي إلى التعبير عن جينات مجموعتين رئيسيتين من السيتوكينات: النوع 1 الالتهابي و IFN (الشكل 7.4 ، انظر أيضًا اللون الداخلي). بشكل أساسي ، تحفز هذه السيتوكينات (IL-1 ، -6 ، -8 ، -12 ، TNFa ، GM-CSF ، IFN ، chemokines ، إلخ) تطور الالتهاب وتشارك في حماية الجسم من الالتهابات البكتيرية والفيروسية.

أرز. 7.3.طيف السيتوكينات التي تفرزها خلايا TH1 و TH2

ثالثا. الخلايا التي لا تنتمي إلى الجهاز المناعي (خلايا النسيج الضام ، والظهارة ، والبطانة) تفرز بشكل أساسي عوامل النمو الذاتي (FGF ، EGF ، TGFR ، إلخ). والسيتوكينات التي تدعم تكاثر الخلايا المكونة للدم.

السيتوكينات ومضاداتهاموصوفة بالتفصيل في عدد من الدراسات (Kovalchuk L.V. et al. ، 2000 ؛ Ketlinsky SA ، Simbirtsev A.S. ،

أرز. 7.4.الحث بوساطة TLR لإنتاج السيتوكين بواسطة الخلايا المناعية الفطرية

الإفراط في التعبير عن السيتوكينات غير آمن للجسم ويمكن أن يؤدي إلى تطور استجابة التهابية مفرطة ، استجابة طورية حادة. تشارك مثبطات مختلفة في تنظيم إنتاج السيتوكينات المنشطة للالتهابات. وهكذا ، تم وصف عدد من المواد التي تربط السيتوكين IL-1 بشكل غير محدد وتمنع ظهور تأثيره البيولوجي (a2-macroglobulin ، C3-مكون من مكمل ، uromodulin). تشمل مثبطات IL-1 المحددة مستقبلات الطعم القابلة للذوبان والأجسام المضادة ومضاد مستقبلات IL-1 (IL-1RA). مع تطور الالتهاب ، تحدث زيادة في التعبير عن جين IL-1RA. ولكن حتى بشكل طبيعي ، يوجد هذا المضاد في الدم بتركيز عالٍ (يصل إلى 1 نانوغرام / مل أو أكثر) ، مما يعيق عمل IL-1 الداخلي.

الخلايا المستهدفة

يتم التوسط في عمل السيتوكينات على الخلايا المستهدفة من خلال مستقبلات محددة تربط السيتوكينات بتقارب عالٍ جدًا ، ويمكن استخدام السيتوكينات الفردية

الوحدات الفرعية للمستقبلات الشائعة. كل سيتوكين يرتبط بمستقبلاته المحددة.

مستقبلات السيتوكين هي بروتينات عبر الغشاء وتنقسم إلى 5 أنواع رئيسية. الأكثر شيوعًا هو ما يسمى بنوع مستقبلات الهيماتوبويتين ، والذي يحتوي على مجالين خارج الخلية ، يحتوي أحدهما على تسلسل مشترك من بقايا الأحماض الأمينية من مكررين من التربتوفان والسيرين ، مفصولة بأي حمض أميني (شكل WSXWS). يمكن أن يحتوي النوع الثاني من المستقبلات على مجالين خارج الخلية مع عدد كبير من السيستين المحفوظة. هذه مستقبلات لعائلة IL-10 و IFN. النوع الثالث يمثله مستقبلات السيتوكينات التي تنتمي إلى مجموعة عامل نخر الورم. ينتمي النوع الرابع من مستقبلات السيتوكين إلى فصيلة مستقبلات الغلوبولين المناعي الفائقة ، والتي لها مجالات خارج الخلية تشبه هيكليًا مجالات جزيئات الغلوبولين المناعي. يتم تمثيل النوع الخامس من المستقبلات التي تربط جزيئات عائلة الكيموكين ببروتينات الغشاء التي تعبر غشاء الخلية في 7 أماكن. يمكن أن توجد مستقبلات السيتوكين في شكل قابل للذوبان ، مع الاحتفاظ بالقدرة على ربط الروابط (Ketlinsky S.A. et al. ، 2008).

السيتوكينات قادرة على التأثير على الانتشار والتمايز والنشاط الوظيفي وموت الخلايا المبرمج للخلايا المستهدفة (انظر الشكل 7.1). يعتمد مظهر النشاط البيولوجي للسيتوكينات في الخلايا المستهدفة على مشاركة الأنظمة المختلفة داخل الخلايا في إرسال الإشارات من المستقبل ، والذي يرتبط بخصائص الخلايا المستهدفة. يتم تنفيذ الإشارة إلى موت الخلايا المبرمج ، من بين أشياء أخرى ، بمساعدة منطقة معينة من عائلة مستقبلات TNF ، ما يسمى بمجال "الموت" (الشكل 7.5 ، انظر اللون الداخلي). تنتقل إشارات التمايز والتفعيل من خلال بروتينات Jak-STAT داخل الخلايا - محولات الإشارة ومنشطات النسخ (الشكل 7.6 ، انظر اللون الداخلي). تشارك بروتينات G في إرسال الإشارات من الكيموكينات ، مما يؤدي إلى زيادة الهجرة والالتصاق الخلوي.

يتضمن التحليل الشامل لنظام السيتوكين ما يلي.

I. تقييم الخلايا المنتجة.

1. تحديد التعبير:

المستقبلات التي تتعرف على العامل الممرض أو المستضد TCR ، TLR) على مستوى الجينات وجزيئات البروتين (PCR ، قياس التدفق الخلوي) ؛

جزيئات المحول التي تنقل إشارة تؤدي إلى نسخ جينات السيتوكين (PCR ، إلخ) ؛

أرز. 7.5انتقال الإشارة من مستقبلات TNF

أرز. 7.6. Jak-STAT - مسار الإشارة من مستقبلات السيتوكينات من النوع 1

جينات السيتوكين (PCR) ؛ جزيئات البروتين من السيتوكينات (تقييم وظيفة تخليق السيتوكين للخلايا أحادية النواة البشرية).

2. التحديد الكمي لمجموعات سكانية فرعية من الخلايا التي تحتوي على سيتوكينات معينة: Th1، Th2 Th17 (طريقة تلطيخ السيتوكينات داخل الخلايا) ؛ تحديد عدد الخلايا التي تفرز بعض السيتوكينات (طريقة ELISPOT ، انظر الفصل 4).

ثانيًا. تقييم السيتوكينات ومضاداتها في الوسط البيولوجي للجسم.

1. اختبار النشاط البيولوجي للسيتوكينات.

2. التحديد الكمي للسيتوكينات باستخدام ELISA.

3. تلطيخ المناعي من السيتوكينات في الأنسجة.

4. تحديد نسبة السيتوكينات المتعارضة (المؤيدة والمضادة للالتهابات) ، السيتوكينات ومناهضات مستقبلات السيتوكينات.

ثالثا. تقييم الخلايا المستهدفة.

1. تحديد التعبير عن مستقبلات السيتوكين على مستوى الجينات وجزيئات البروتين (PCR ، طريقة التدفق الخلوي).

2. تحديد جزيئات الإشارة في المحتوى داخل الخلايا.

3. تحديد النشاط الوظيفي للخلايا المستهدفة.

حاليًا ، تم تطوير العديد من الطرق لتقييم نظام السيتوكين ، والتي توفر معلومات متنوعة. من بينها تتميز:

1) الطرق البيولوجية الجزيئية ؛

2) طرق التحديد الكمي للسيتوكينات باستخدام المقايسة المناعية ؛

3) اختبار النشاط البيولوجي للسيتوكينات.

4) تلطيخ السيتوكينات داخل الخلايا ؛

5) طريقة ELISPOT ، والتي تسمح باكتشاف السيتوكينات حول خلية مفردة منتجة للسيتوكين ؛

6) التألق المناعي.

هنا وصف موجز لهذه الأساليب.

باستخدام الطرق البيولوجية الجزيئيةمن الممكن دراسة التعبير عن جينات السيتوكينات ، مستقبلاتها ، إشارات الجزيئات ، لدراسة تعدد الأشكال لهذه الجينات. في السنوات الأخيرة ، تم إجراء عدد كبير من الدراسات التي كشفت عن وجود ارتباطات بين متغيرات أليلات جينات جزيئات نظام السيتوكين والاستعداد

لعدد من الأمراض. يمكن أن توفر دراسة المتغيرات الأليلية لجينات السيتوكين معلومات عن الإنتاج المبرمج وراثيًا للسيتوكين المعين. الأكثر حساسية هو تفاعل البلمرة المتسلسل في الوقت الحقيقي - RT-PCR (انظر الفصل 6). طريقة التهجين فى الموقعيسمح بتوضيح توطين الأنسجة والخلوية للتعبير عن جينات السيتوكين.

يمكن وصف التحديد الكمي للسيتوكينات في السوائل البيولوجية وفي مزارع الخلايا أحادية النواة في الدم المحيطي بواسطة ELISA على النحو التالي. نظرًا لأن السيتوكينات هي وسطاء محليين ، فمن الأنسب قياس مستوياتها في الأنسجة المقابلة بعد استخراج بروتينات الأنسجة أو في السوائل الطبيعية ، على سبيل المثال ، في الدموع ، وغسل التجاويف ، والبول ، والسائل الأمنيوسي ، والسائل النخاعي ، إلخ. تعكس مستويات السيتوكين في المصل أو سوائل الجسم الأخرى الحالة الحالية لجهاز المناعة ، أي تخليق السيتوكينات بواسطة خلايا الجسم في الجسم الحي.

يُظهر تحديد مستويات إنتاج السيتوكين بواسطة خلايا الدم وحيدة النواة (MNCs) الحالة الوظيفية للخلايا. يشير الإنتاج التلقائي للسيتوكينات MNC في الثقافة إلى أن الخلايا نشطة بالفعل في الجسم الحي.يعكس تخليق السيتوكينات المستحثة (بواسطة منشطات مختلفة ، ميتوجينات) القدرة ، والقدرة الاحتياطية للخلايا على الاستجابة لمحفز مستضد (على وجه الخصوص ، لعمل الأدوية). يمكن أن يكون انخفاض إنتاج السيتوكينات بمثابة إحدى علامات حالة نقص المناعة. السيتوكينات ليست محددة لمستضد معين. لذلك ، من المستحيل إجراء تشخيص محدد للأمراض المعدية وأمراض المناعة الذاتية والحساسية عن طريق تحديد مستوى بعض السيتوكينات. في الوقت نفسه ، يسمح تقييم مستويات السيتوكين بالحصول على بيانات حول شدة العملية الالتهابية ، وانتقالها إلى المستوى الجهازي والتشخيص ، والنشاط الوظيفي لخلايا جهاز المناعة ، ونسبة خلايا Th1 و Th2 ، والتي مهم جدًا في التشخيص التفريقي لعدد من العمليات المعدية والمرضية المناعية.

في الوسط البيولوجي ، يمكن قياس السيتوكينات باستخدام مجموعة متنوعة من طرق المقايسة المناعية ،باستخدام الأجسام المضادة متعددة النسيلة وحيدة النسيلة (انظر الفصل 4). تسمح لك ELISA بمعرفة التركيزات الدقيقة للسيتوكينات في علم الأحياء

سوائل الجسم المنطقية. إن مقايسة السيتوكينات المناعية المرتبطة بالإنزيم لها عدد من المزايا مقارنة بالطرق الأخرى (الحساسية العالية ، الخصوصية ، الاستقلال عن وجود الخصوم ، إمكانية المحاسبة الآلية الدقيقة ، التوحيد المحاسبي). ومع ذلك ، فإن هذه الطريقة لها أيضًا قيودها: لا تميز ELISA النشاط البيولوجي للسيتوكينات ، بل يمكن أن تعطي نتائج خاطئة بسبب الحواتم المتفاعلة.

الاختبار البيولوجيأجريت على أساس معرفة الخصائص الأساسية للسيتوكينات ، وعملها على الخلايا المستهدفة. سمحت دراسة التأثيرات البيولوجية للسيتوكينات بتطوير أربعة أنواع من اختبارات السيتوكينات:

1) عن طريق تحريض تكاثر الخلايا المستهدفة ؛

2) عن طريق التأثير السام للخلايا.

3) عن طريق تحريض التمايز بين أسلاف نخاع العظام ؛

4) لعمل مضاد للفيروسات.

يتم تحديد IL-1 من خلال التأثير المحفز على تكاثر الخلايا التوتية في الفئران التي يتم تنشيطها بواسطة ميتوجين في المختبر؛ IL-2 - من خلال القدرة على تحفيز النشاط التكاثري للأرومات اللمفاوية ؛ يتم اختبار TNFa و lymphotoxins للعمل السام للخلايا على الخلايا الليفية للفأر (L929). يتم تقييم عوامل تحفيز المستعمرات لقدرتها على دعم نمو أسلاف نخاع العظام في شكل مستعمرات في أجار. يتم الكشف عن النشاط المضاد للفيروسات لـ IFN عن طريق تثبيط تأثير اعتلال الخلايا للفيروسات في ثقافة الخلايا الليفية ثنائية الصبغيات البشرية وخط الورم للخلايا الليفية للفئران L-929.

تم إنشاء خطوط خلوية يعتمد نموها على وجود بعض السيتوكينات. طاولة 7.1 هي قائمة بخطوط الخلايا المستخدمة في اختبار السيتوكين. وفقًا للقدرة على إحداث تكاثر الخلايا المستهدفة الحساسة ، يتم إجراء اختبار حيوي لـ IL-1 و IL-2 و IL-4 و IL-6 و IL-7 و IL-15 وما إلى ذلك. تتميز بعدم كفاية الحساسية والمحتوى المعلوماتي. يمكن للجزيئات المانع والمضادة أن تحجب النشاط البيولوجي للسيتوكينات. تظهر العديد من السيتوكينات نشاطًا بيولوجيًا عامًا. ومع ذلك ، فإن هذه الطرق مثالية لاختبار النشاط المحدد للسيتوكينات المؤتلفة.

الجدول 7.1.تستخدم خطوط الخلايا لاختبار النشاط البيولوجي للسيتوكينات

نهاية الجدول. 7.1

معمل 7-1

تحديد النشاط البيولوجي لـ IL-1 من خلال التأثير المسبب للمرض على تكاثر الخلايا التوتية في الفأر

تعتمد طريقة الاختبار البيولوجي لـ IL-1 على قدرة السيتوكين على تحفيز تكاثر الخلايا التوتية في الفئران.

يمكن تحديد IL-1 في مزرعة الخلايا الوحيدة التي يتم تحفيزها باستخدام LPS ، وكذلك في أي سائل بيولوجي في الجسم.من الضروري الانتباه إلى عدد من التفاصيل.

1. تستخدم الخلايا Thymocytes لفئران C3H / HeJ المحفزة للتكاثر عن طريق الميثوجينات (concanavalin A - ConA و phytohemagglutinin - PHA) للاختبار. لم يتم اختيار Thymocytes C3H / HeJ بالصدفة: فئران هذا الخط الفطري لا تستجيب لـ LPS ، والذي قد يكون موجودًا في مادة الاختبار ويسبب إنتاج IL-1.

2. تستجيب الخلايا Thymocytes لـ IL-2 والميتوجينات ، لذلك يجب تحديد وجود IL-2 والميتوجينات أيضًا في المستحضرات التي تم اختبارها لـ IL-1.

إجراءات التشغيل

1. احصل على معلق من الخلايا التوتية بتركيز 12 × 10 6 / مل متوسط ​​RPMI 1640 يحتوي على 10٪ مصل من أجنة الأبقار و 2-مركابتوإيثانول (5 × 10 -5 م).

2. إعداد سلسلة من التخفيفات المتتالية ذات الشقين التجريبية (سوائل الجسم البيولوجية) والعينات الضابطة. يتم استخدام السوائل البيولوجية التي تحتوي على IL-1 أو العينات التي تم الحصول عليها عن طريق حضانة الخلايا أحادية النواة بدون LPS والمستحضر الذي يحتوي على معيار المختبر IL-1 كعناصر تحكم. في صفيحة سفلية مستديرة 96 بئر ، يتم نقل 50 ميكرولتر من كل تخفيف إلى 6 آبار.

3. في ثلاث آبار من كل تخفيف ، أضف 50 ميكرولتر من PHA المنقى (ويلكوم) المذاب في وسط كامل بتركيز 3 ميكروغرام / مل ، وفي الآبار الثلاثة الأخرى - 50 ميكرولتر من المتوسط.

4. أضف 50 ميكرولتر من تعليق خلية الغدة الصعترية إلى كل بئر واحتضانها لمدة 48 ساعة عند 37 درجة مئوية.

6. قبل نهاية الزراعة ، يضاف 50 ميكرولتر من محلول (1 ميكروليتر / مل) من ثيميدين ["3 ساعات] إلى الآبار ويحتضن لمدة 20 ساعة أخرى.

7. لتحديد مستوى النشاط الإشعاعي ، يتم نقل الخلايا المستنبتة إلى ورق الترشيح باستخدام آلة حصاد الخلايا الأوتوماتيكية ، ويتم تجفيف المرشحات ويتم تحديد إدراج الملصق بواسطة عداد وميض سائل.

8. يتم التعبير عن النتائج كعامل تحفيز.

حيث m cp هو متوسط ​​عدد النبضات في 3 ثقوب.

إذا كانت الخلايا التوتية تستجيب للتحفيز باستخدام IL-1 القياسي ، فإن مؤشر التحفيز لعينة الاختبار التي تتجاوز 3 يشير بشكل موثوق إلى نشاط IL-1.

المقايسة الحيوية هي الطريقة الوحيدة لتقييم وظيفة السيتوكين ، ولكن يجب استكمال هذه الطريقة بأنواع مختلفة من التحكم المناسب للخصوصية باستخدام الأجسام المضادة وحيدة النسيلة. تؤدي إضافة بعض الأجسام المضادة وحيدة النسيلة إلى السيتوكين في المزرعة إلى منع النشاط البيولوجي للسيتوكين ، مما يثبت أن السيتوكين المكتشف يعمل كإشارة لتكاثر خط الخلية.

استخدام المقايسة الحيوية للكشف عن الانترفيرون.يعتمد مبدأ تقييم النشاط البيولوجي لـ IFN على تأثيره المضاد للفيروسات ، والذي يتم تحديده من خلال درجة تثبيط تكاثر فيروس الاختبار في مزرعة الخلية.

يمكن استخدام الخلايا الحساسة لتأثير IFN في هذا العمل: الخلايا الليفية التي تم تجريبها بشكل أساسي من أجنة الدجاج والبشر ، والخلايا المزروعة من الخلايا الليفية ثنائية الصبغيات البشرية ، وزراعة خلايا الفئران (L929).

عند تقييم التأثير المضاد للفيروسات لـ IFN ، يُنصح باستخدام فيروسات ذات دورة تكاثر قصيرة ، وحساسية عالية لعمل IFN: فيروس التهاب الدماغ والنخاع في الفئران ، والتهاب الفم الحويصلي بالفأر ، إلخ.

معمل 7-2

تحديد نشاط الإنترفيرون

1. يُسكب تعليق من الخلايا الليفية ثنائية الصبغيات لجنين بشري على وسط يحتوي على 10٪ مصل من الأجنة البقري (تركيز الخلية - 15-20 × 10 6 / مل) في أطباق معقمة ذات قاع مسطح 96 بئر ، 100 ميكرولتر لكل بئر وتوضع في حاضنة CO 2 عند درجة حرارة 37 درجة مئوية.

2. بعد تكوين طبقة أحادية كاملة ، تتم إزالة وسط النمو من الآبار ويضاف 100 ميكرولتر من وسط الدعم إلى كل بئر.

3. يتم إجراء معايرة نشاط IFN في عينات الاختبار بطريقة التخفيفات ذات الشقين على طبقة أحادية من الخلايا الليفية.

بالتزامن مع العينات ، يتم إدخال فيروس التهاب الدماغ والنخاع (VEM) في الآبار بجرعة تتسبب في تلف الخلايا بنسبة 100٪ بعد 48 ساعة من الإصابة.

4. للتحكم في استخدام الآبار مع الخلايا السليمة (غير المعالجة) المصابة بالفيروس.

في كل دراسة ، يتم استخدام عينات IFN المرجعية ذات النشاط المعروف كأدوية مرجعية.

5. يتم تحضين الصفائح التي تحتوي على عينات مخففة لمدة 24 ساعة عند 37 درجة مئوية في جو يحتوي على 5٪ من ثاني أكسيد الكربون.

6. يتم تحديد مستوى نشاط IFN من خلال المعاملة بالمثل للحد الأقصى للتخفيف من عينة الاختبار ، والذي يثبط التأثير الخلوي للفيروس بنسبة 50٪ ، ويتم التعبير عنه بوحدات النشاط لكل مل.

7. لتحديد نوع IFN ، يتم إضافة المصل المضاد ضد IFNα أو IFNβ أو IFNγ إلى النظام. يلغي المصل عمل السيتوكين المقابل ، مما يجعل من الممكن تحديد نوع IFN.

تحديد النشاط البيولوجي لهجرة العامل المثبط.حاليًا ، تم تشكيل أفكار جديدة تمامًا حول طبيعة وخصائص الأسطورة ، والتي تم اكتشافها في الستينيات من القرن الماضي كوسيط للمناعة الخلوية وظلت لسنوات عديدة دون الاهتمام الواجب (Bloom BR، Bennet B.، 1966 ؛ ديفيد جي آر ، 1966). فقط في السنوات العشر إلى الخمس عشرة الماضية أصبح واضحًا: الأسطورة هي واحدة من أهم الوسطاء البيولوجيين في الجسم مع مجموعة واسعة من الوظائف البيولوجية للسيتوكين والهرمونات والإنزيم. يتم تحقيق عمل MIF على الخلايا المستهدفة من خلال مستقبل CD74 أو من خلال المسار غير الكلاسيكي للالتقام الخلوي.

تعتبر الأسطورة وسيطًا مهمًا للالتهاب ، حيث تعمل على تنشيط وظيفة البلاعم (إنتاج السيتوكين ، البلعمة ، السمية الخلوية ، إلخ) ، بالإضافة إلى هرمون تنظيم المناعة الذاتية الذي ينظم نشاط الجلوكوكورتيكويد.

تتراكم المزيد والمزيد من المعلومات حول دور MIF في التسبب في العديد من الأمراض الالتهابية ، بما في ذلك الإنتان والتهاب المفاصل الروماتويدي (RA) والتهاب كبيبات الكلى وما إلى ذلك. في التهاب المفاصل الروماتويدي ، يزداد تركيز MIF في سائل المفاصل المصابة بشكل كبير ، الذي يرتبط بشدة المرض. تحت تأثير الأسطورة ، يزداد إنتاج السيتوكينات المؤيدة للالتهابات بواسطة كل من الخلايا الضامة والخلايا الزليليّة.

تُعرف طرق مختلفة لاختبار نشاط MIF ، عند وضع الخلايا المهاجرة (الخلايا المستهدفة لـ MIF) في أنبوب شعري زجاجي (اختبار شعري) ، في قطرة من الاغاروز أو في بئر agarose.

نقدم طريقة فحص بسيطة نسبيًا تعتمد على تكوين المزارع الدقيقة للخلايا (الكريات البيض أو الضامة) بشكل قياسي في المنطقة وعدد الخلايا في قاع الآبار في صفيحة مسطحة القاع 96 بئرًا ، متبوعة بزراعتها في وسط مغذي وتحديد التغيير في مجال هذه الثقافات الصغيرة تحت تأثير MIF (Suslov A.P. ، 1989).

معمل 7-3

تعريف نشاط الأسطورة

يتم تحديد النشاط البيولوجي لـ MIF باستخدام جهاز لتشكيل الخلايا الدقيقة (الشكل 7.7) - MIGROSKRIN (معهد أبحاث علم الأوبئة والأحياء الدقيقة المسمى NF Gamaleya RAMS).

1. في آبار صفيحة 96 بئر (تدفق ، بريطانيا العظمى أو ما شابه) أضف 100 ميكرولتر من عينة مخففة في وسط المزرعة ، حيث يتم تحديد نشاط الأسطورة (كل تخفيف في 4 متوازيات ، عينات تجريبية). يحتوي وسط الاستزراع على RPMI 1640 ، 2 ملي L- الجلوتامين ، 5٪ مصل بقري جنيني ، 40 ميكروغرام / مل جنتاميسين.

2. أضف وسط استزراع (في 4 متوازيات) للتحكم في الآبار ، 100 ميكرولتر لكل منها.

3. تحضير معلق خلية من الضامة البريتونية ، حيث يتم حقن 2 من الفئران الهجينة (CBAxC57B1 / 6) F1 داخل الصفاق مع 10 مل من محلول هانكس مع الهيبارين (10 يو / مل) ، وتدليك البطن برفق لمدة 2-3 دقائق. ثم يتم ذبح الحيوان بقطع رأسه ، ويتم ثقب جدار البطن بعناية في منطقة الفخذ ويتم امتصاص الإفرازات من خلال إبرة باستخدام حقنة. يتم غسل خلايا الإفرازات البريتونية مرتين بمحلول هانكس ، وطردها لمدة 10-15 دقيقة عند 200 جم. ثم يتم تحضير معلق الخلية بتركيز 10 ± 1 مليون / مل من وسط RPMI 1640. ويتم العد في غرفة Goryaev.

4. قم بتجميع نظام MIGROSKRIN ، وهو عبارة عن رف للتثبيت الموجه والقياسي للنصائح مع مزارع الخلايا في وضع عمودي صارم على ارتفاع معين فوق مركز بئر من 96 لوحة ثقافة ، ويتضمن أيضًا 92 طرفًا من أجل ماصة آلية من كوستار ، الولايات المتحدة الأمريكية (الشكل 7.7).

أدخل أرجل الحامل ثلاثي القوائم في آبار الزاوية من اللوحة. يتم أخذ تعليق الخلية بواسطة ماصة تلقائية إلى أطراف - 5 ميكرولتر في كل منها ، وشطفها من الخلايا الزائدة عن طريق خفض واحد في الوسط وإدخالها عموديًا في مآخذ رف النظام. يتم الاحتفاظ بالرف المملوء بأطراف في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة على سطح أفقي تمامًا. خلال هذا الوقت ، تستقر خلايا المعلق في قاع الآبار ، حيث تتشكل البكتريا الصغيرة الخلوية القياسية.

5. تمت إزالة رف الحافة بعناية من اللوحة. يتم وضع الصفيحة المزروعة بخلايا دقيقة في وضع أفقي تمامًا في حاضنة ثاني أكسيد الكربون ، حيث تتم زراعتها لمدة 20 ساعة ، وأثناء الزراعة ، تهاجر الخلايا على طول قاع البئر.

6. يتم إجراء الحساب الكمي للنتائج بعد الحضانة على عدسة مكبرة ثنائية العدسة ، وتقييم بصريًا لحجم المستعمرة على المقياس داخل العدسة. الثقافات الصغيرة دائرية. ثم حدد الباحثون متوسط ​​قطر المستعمرة من قياسات المستعمرات في 4 آبار اختبار أو تحكم. خطأ القياس ± 1 مم.

يتم حساب مؤشر الهجرة (MI) بالصيغة التالية:

تحتوي العينة على نشاط أسطوري إذا كانت قيم MI متساوية

بالنسبة للوحدة التقليدية (U) من نشاط الأسطورة ، يتم أخذ المعاملة بالمثل ، والتي تساوي قيمة أعلى تخفيف للعينة (العينة) ، حيث يكون مؤشر الترحيل 0.6 ± 0.2.

النشاط البيولوجي لل FEOيتم تقييم α من خلال تأثيره السام للخلايا على خط الخلايا الليفية المحولة L-929. تم استخدام TNFα المؤتلف كعنصر تحكم إيجابي ، واستخدمت الخلايا في وسط الثقافة كعنصر تحكم سلبي.

احسب المؤشر السام للخلايا (CI):

أين أ- عدد الخلايا الحية الموجودة في مجموعة التحكم ؛ ب- عدد الخلايا الحية في التجربة.

أرز. 7.7مخطط MIGROSKRIN - أجهزة لقياس هجرة الثقافات الخلوية

الخلايا ملطخة بصبغة (الميثيلين الأزرق) ، والتي يتم دمجها فقط في الخلايا الميتة.

يتم أخذ قيمة التخفيف المتبادل للعينة المطلوبة للحصول على 50٪ من السمية الخلوية الخلوية كوحدة تقليدية لنشاط عامل نخر الورم. النشاط النوعي للعينة هو نسبة النشاط بوحدات عشوائية لكل مل إلى تركيز البروتين الموجود في العينة.

تلطيخ خلوي داخل الخلايا.قد يعكس التغيير في نسبة الخلايا التي تنتج السيتوكينات المختلفة التسبب في المرض ويكون بمثابة معيار للتنبؤ بالمرض وتقييم العلاج.

من خلال طريقة التلوين داخل الخلايا ، يتم تحديد تعبير السيتوكين على مستوى خلية واحدة. يسمح لك قياس التدفق الخلوي بحساب عدد الخلايا التي تعبر عن سيتوكين معين.

دعونا ندرج المراحل الرئيسية في تحديد السيتوكينات داخل الخلايا.

تنتج الخلايا غير المحفزة كميات صغيرة من السيتوكينات ، والتي ، كقاعدة عامة ، لا تترسب ؛ لذلك ، فإن مرحلة مهمة في تقييم السيتوكينات داخل الخلايا هي تحفيز الخلايا الليمفاوية والحصار المفروض على إطلاق هذه المنتجات من الخلايا.

محفز السيتوكين الأكثر شيوعًا هو منشط بروتين كيناز C phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA) بالاشتراك مع حامض أيون الكالسيوم (IN). يؤدي استخدام مثل هذا المزيج إلى تخليق مجموعة واسعة من السيتوكينات: IFNu و IL-4 و IL-2 و TNFα. عيب استخدام PMA-IN هو مشكلة اكتشاف جزيئات CD4 على سطح الخلايا الليمفاوية بعد هذا التنشيط. أيضًا ، يتم تحفيز إنتاج السيتوكينات بواسطة الخلايا اللمفاوية التائية بواسطة الميثوجين (PHA). تحفز الخلايا البائية والوحيدات

يتم تحضين الخلايا أحادية النواة في وجود محرضات لإنتاج السيتوكين ومانع لنقلها داخل الخلايا ، بريفيلدين أ أو مونينسين ، لمدة 2-6 ساعات.

ثم يتم تعليق الخلايا في محلول ملحي مخزّن. للتثبيت ، يضاف 2٪ فورمالديهايد ، تحضين لمدة 10-15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.

ثم يتم معالجة الخلايا بالسابونين ، مما يزيد من نفاذية غشاء الخلية ، وملطخة بأجسام مضادة وحيدة النسيلة خاصة بالسيتوكينات المكتشفة. يؤدي التلوين المسبق لعلامات السطح (CD4 ، CD8) إلى زيادة كمية المعلومات التي يتم الحصول عليها حول الخلية ويسمح لك بتحديد هوية السكان بدقة أكبر.

هناك بعض القيود في تطبيق الأساليب المذكورة أعلاه. لذلك ، بمساعدتهم ، من المستحيل تحليل تخليق السيتوكينات بواسطة خلية واحدة ، ومن المستحيل تحديد عدد الخلايا المنتجة للسيتوكين في مجموعة سكانية فرعية ، ومن المستحيل تحديد ما إذا كانت الخلايا المنتجة للسيتوكين تعبر عن علامات فريدة ، سواء تم تصنيع السيتوكينات المختلفة بواسطة خلايا مختلفة أو بواسطة نفس الخلايا. يتم الحصول على الإجابة على هذه الأسئلة باستخدام طرق بحث أخرى. لتحديد تواتر الخلايا المنتجة للسيتوكين في مجتمع ما ، يتم استخدام طريقة الحد من التخفيفات ومتغير مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم ELISPOT (انظر الفصل 4).

طريقة التهجين في الموقع.الطريقة تشمل:

2) التثبيت مع لامتصاص العرق ؛

3) الكشف عن مرنا باستخدام المسمى [كدنا]. في بعض الحالات ، يتم تحديد السيتوكين mRNA على أقسام باستخدام النظائر المشعة PCR.

تألق مناعي.الطريقة تشمل:

1) تجميد الجهاز وتحضير أقسام ناظم البرد.

2) التثبيت.

3) معالجة الأقسام بالأجسام المضادة للسيتوكين المسمى الفلورسين ؛

4) المراقبة البصرية للفلورة.

هذه التقنيات (التهجين فى الموقعو المناعي) سريعة ولا تعتمد على عتبة تركيزات المنتج المفرز. ومع ذلك ، فإنها لا تحدد كمية السيتوكين المفرزة ويمكن أن تكون معقدة تقنيًا. مطلوب مجموعة متنوعة من المراقبة الدقيقة للتفاعلات غير المحددة.

باستخدام الطرق المقدمة لتقييم السيتوكينات ، تم تحديد العمليات المرضية المرتبطة بالاضطرابات في نظام السيتوكين على مستويات مختلفة.

وبالتالي ، فإن تقييم نظام السيتوكين مهم للغاية لتوصيف حالة الجهاز المناعي للجسم. توفر دراسة المستويات المختلفة لنظام السيتوكين معلومات عن النشاط الوظيفي لأنواع مختلفة من الخلايا ذات الكفاءة المناعية ، وشدة العملية الالتهابية ، وانتقالها إلى المستوى الجهازي ، وعن تشخيص المرض.

أسئلة ومهام

1. قائمة الخصائص العامة للسيتوكينات.

2. إعطاء تصنيف السيتوكينات.

3. قائمة المكونات الرئيسية لنظام السيتوكين.

4. قائمة الخلايا المنتجة للسيتوكين.

5. وصف عائلات مستقبلات السيتوكين.

6. ما هي آليات عمل شبكة السيتوكينات؟

7. أخبرنا عن إنتاج السيتوكينات في الجهاز المناعي الفطري.

8. ما هي المناهج الرئيسية لتقييم شامل للنظام الخلوي؟

9. ما هي طرق اختبار السيتوكينات في سوائل الجسم؟

10. ما هي عيوب الجهاز الخلوي في أمراض مختلفة؟

11. ما هي الطرق الرئيسية للاختبار البيولوجي لـ IL-1 و IFN و MIF و TNFa في السوائل البيولوجية؟

12. وصف عملية تحديد المحتوى داخل الخلايا من السيتوكينات.

13. وصف عملية تحديد السيتوكينات التي تفرزها خلية واحدة.

14. وصف تسلسل الطرق المستخدمة لاكتشاف الخلل على مستوى مستقبل السيتوكين.

15. وصف تسلسل الطرق المستخدمة لاكتشاف الخلل على مستوى الخلايا المنتجة للسيتوكين.

16. ما هي المعلومات التي يمكن الحصول عليها من خلال فحص إنتاج السيتوكينات في مزرعة الخلايا وحيدة النواة ، في مصل الدم؟

مقدمة

معلومات عامة

تصنيف السيتوكين

مستقبلات السيتوكين

السيتوكينات وتنظيم الاستجابة المناعية

استنتاج

المؤلفات

مقدمة

السيتوكينات هي أحد أهم أجزاء جهاز المناعة. يحتاج جهاز المناعة إلى نظام تنبيه من خلايا الجسم ، مثل صرخة استغاثة. ربما يكون هذا هو أفضل تعريف للسيتوكينات. عندما تتضرر الخلية أو تتأثر بكائن حي مسبب للأمراض ، تطلق البلاعم والخلايا التالفة السيتوكينات. يتضمن ذلك عوامل مثل الإنترلوكين والإنترفيرون وعامل نخر الورم ألفا. هذا الأخير يثبت أيضًا أن تدمير أنسجة الورم يتحكم فيه جهاز المناعة. عندما يتم إطلاق السيتوكينات ، فإنها تستدعي خلايا مناعية معينة ، مثل خلايا الدم البيضاء والخلايا التائية والخلايا البائية.

تشير السيتوكينات أيضًا إلى هدف محدد يجب أن تحققه هذه الخلايا. تختلف السيتوكينات والأجسام المضادة تمامًا ، نظرًا لأن الأجسام المضادة هي التي ترتبط بالمستضدات ، فهي تسمح لجهاز المناعة بتحديد الكائنات الغريبة الغازية. وبالتالي ، يمكن رسم تشبيه: السيتوكينات هي إشارة الإنذار الرئيسية للغزاة ، والأجسام المضادة هي الكشافة. تسمى عملية تحليل السيتوكينات بالكشف عن السيتوكينات.

معلومات عامة

السيتوكينات [اليونانية. kytos - وعاء ، هنا - خلية و kineo - يتحرك ، يحفز] - مجموعة كبيرة ومتنوعة من وسطاء بروتينات صغيرة الحجم (وزن جزيئي من 8 إلى 80 كيلو دالتون) - جزيئات وسيطة ("بروتينات الاتصال") تشارك في الإشارات بين الخلايا في الغالب في جهاز المناعة.

تشتمل السيتوكينات على عامل نخر الورم ، والإنترفيرون ، وعدد من الإنترلوكينات ، وما إلى ذلك. تسمى السيتوكينات التي يتم تصنيعها بواسطة الخلايا الليمفاوية وهي منظمات للتكاثر والتمايز ، ولا سيما الخلايا المكونة للدم وخلايا الجهاز المناعي ، تسمى اللمفوكينات.

جميع خلايا الجهاز المناعي لها وظائف معينة وتعمل في تفاعل منسق بوضوح ، والذي يتم توفيره بواسطة مواد نشطة بيولوجيًا خاصة - السيتوكينات - منظمات تفاعلات المناعة. السيتوكينات هي بروتينات محددة يمكن من خلالها لخلايا الجهاز المناعي المختلفة تبادل المعلومات مع بعضها البعض وتنسيق أعمالها.

تمثل مجموعة وكمية السيتوكينات التي تعمل على مستقبلات سطح الخلية - "بيئة السيتوكين" - مصفوفة من الإشارات المتفاعلة والمتغيرة بشكل متكرر. هذه الإشارات معقدة بسبب التنوع الكبير في مستقبلات السيتوكينات وبسبب حقيقة أن كل من السيتوكينات يمكنها تنشيط أو قمع العديد من العمليات ، بما في ذلك توليفها الخاص وتخليق السيتوكينات الأخرى ، وكذلك تكوين وظهور مستقبلات السيتوكينات على سطح الخلية.

يتم تنفيذ الإشارات بين الخلايا في الجهاز المناعي عن طريق تفاعل الاتصال المباشر للخلايا أو بمساعدة وسطاء التفاعلات بين الخلايا. دراسة التمايز بين الخلايا ذات الكفاءة المناعية والخلايا المكونة للدم ، بالإضافة إلى آليات التفاعل بين الخلايا التي تشكل الاستجابة المناعية ، وهي مجموعة كبيرة ومتنوعة من الوسطاء القابل للذوبان من طبيعة بروتينية - جزيئات وسيطة ("بروتينات ملزمة") تشارك في الإشارات بين الخلايا - السيتوكينات اكتشف.

عادة ما يتم استبعاد الهرمونات من هذه الفئة على أساس طبيعة عمل الغدد الصماء (بدلاً من paracrine أو autocrine). (انظر السيتوكينات: آليات نقل الإشارات الهرمونية). جنبا إلى جنب مع الهرمونات والناقلات العصبية ، فإنها تشكل الأساس للغة الإشارات الكيميائية ، والتي يتم من خلالها تنظيم تكوين وتجديد الأنسجة في كائن متعدد الخلايا.

يلعبون دورًا رئيسيًا في التنظيم الإيجابي والسلبي للاستجابة المناعية. حتى الآن ، تم اكتشاف ودراسة أكثر من مائة سيتوكينات عند البشر بدرجة أو بأخرى ، كما ذكر أعلاه ، وهناك تقارير مستمرة عن اكتشاف أخرى جديدة. بالنسبة للبعض ، تم الحصول على نظائرها المعدلة وراثيًا. تعمل السيتوكينات من خلال تنشيط مستقبلات السيتوكينات.

ألف الإنترفيرون (IFN):

1. طبيعي >> صفة IFN (الجيل الأول):

2. المؤتلف IFN (الجيل الثاني):

أ) قصير المفعول:

IFN a2b: intron-A

IFN β: أفونيكس وآخرون.

(IFNs pegylated): بيج إنترفيرون

محرضات الإنترفيرون (مضاد للفيروسات):

1... اصطناعي- سيكلوفيرون ، تيلورون ، ديبازول وإلخ.

2. طبيعي- ريدوستين ، إلخ.

الخامس. إنترلوكينز : المؤتلف انترلوكين -2 (رونكوليوكين ، الديسلوكين ، برولوكين ، ) ، إنترلوكين 1-بيتا المؤتلف (بيتاليوكين).

ج. عوامل تحفيز المستعمرات (مولجراموستيم ، إلخ.)

مستحضرات الببتيد

مستحضرات الببتيد الزعتر .

مركبات الببتيد التي تنتجها الغدة الصعترية تحفيز نضج الخلايا اللمفاوية التائية(ثيموبويتين).

عند القيم المنخفضة في البداية ، تزيد مستحضرات الببتيدات النموذجية من عدد الخلايا التائية ونشاطها الوظيفي.

كان مؤسس الجيل الأول من مستحضرات الغدة الصعترية في روسيا تاكتيفين، وهو مركب من الببتيدات المستخرجة من الغدة الصعترية للماشية. تشمل المستحضرات التي تحتوي على مركب من الببتيدات الصعترية أيضًا تيمالين ، تيموبتينوغيرها ، وتلك التي تحتوي على مستخلصات الغدة الصعترية - تيموستيمولين وفيلوزين.

مستحضرات الببتيد من التوتة الماشية ثيمالين ، ثيموستيمولينالحقن العضلي ، و taktivin ، تيموبتين- تحت الجلد ، خاصة مع نقص المناعة الخلوية:

مع نقص المناعة T ،

عدوى فيروسية

للوقاية من الالتهابات أثناء العلاج الإشعاعي والعلاج الكيميائي للأورام.

لا شك أن الفعالية السريرية للجيل الأول من مستحضرات الغدة الزعترية لا شك ، ولكن لها عيبًا واحدًا: فهي تمثل مزيجًا غير مقسم من الببتيدات النشطة بيولوجيًا ، والتي يصعب توحيدها إلى حد ما.

ذهب التقدم في مجال العقاقير من أصل الغدة الصعترية على طول خط إنتاج أدوية من الأجيال الثانية والثالثة - نظائر اصطناعية لهرمونات الغدة الصعترية الطبيعية أو أجزاء من هذه الهرمونات ذات النشاط البيولوجي.

عقار حديث إيمونوفان -يستخدم هيكسابيبتيد ، وهو نظير اصطناعي لمركز ثيموبويتين النشط ، في حالات نقص المناعة والأورام. يحفز الدواء تكوين IL-2 بواسطة الخلايا المناعية ، ويزيد من حساسية الخلايا الليمفاوية لهذا الليمفوكين ، ويقلل من إنتاج عامل نخر الورم (TNF) ، وله تأثير تنظيمي على إنتاج وسطاء المناعة (الالتهاب) والغلوبولين المناعي.

مستحضرات ببتيد نخاع العظام

المايلوبيدتم الحصول عليها من زراعة خلايا نخاع العظام في الثدييات (عجول ، خنازير). ترتبط آلية عمل الدواء بتحفيز التكاثر والنشاط الوظيفي للخلايا B و T.

في الجسم يعتبر هدف هذا الدواء الخلايا اللمفاوية ب.في حالة ضعف المناعة أو تكون الدم ، يؤدي إدخال النخاع العظمي إلى زيادة النشاط الانقسامي العام لخلايا نخاع العظم واتجاه تمايزها نحو الخلايا الليمفاوية البائية الناضجة.

يستخدم Myelopid في العلاج المعقد لحالات نقص المناعة الثانوية مع الآفة السائدة للوصلة الخلطية للمناعة ، للوقاية من المضاعفات المعدية بعد التدخلات الجراحية ، والصدمات ، والتهاب العظم والنقي ، مع أمراض الرئة غير النوعية ، تقيح الجلد المزمن. الآثار الجانبية للدواء هي الدوخة ، والضعف ، والغثيان ، واحتقان وألم في موقع الحقن.

جميع الأدوية في هذه المجموعة هي بطلان في النساء الحوامل ، و myelopid و imunofan هي بطلان في وجود صراع Rh بين الأم والجنين.

مستحضرات الغلوبولين المناعي

الغلوبولين المناعي البشري

أ) الغلوبولين المناعي للإعطاء العضلي

غير محدد:الغلوبولين المناعي البشري الطبيعي

محدد:الغلوبولين المناعي البشري ضد التهاب الكبد B ، الغلوبولين المناعي البشري المضاد للمكورات العنقودية ، الغلوبولين المناعي البشري للكزاز ، الغلوبولين المناعي البشري ضد التهاب الدماغ الذي ينقله القراد ، الغلوبولين المناعي البشري ضد فيروس داء الكلب ، إلخ.

ب) الغلوبولين المناعي للإعطاء عن طريق الوريد

غير محدد:الغلوبولين المناعي البشري الطبيعي للإعطاء عن طريق الوريد (غابريجلوبين ، مناعي ، إنتراجلوبين ، هيوماجلوبين)

محدد:الغلوبولين المناعي ضد التهاب الكبد البشري B (Neohepatect) ، البنتاغلوبين (يحتوي على مضاد للبكتيريا IgM ، IgG ، IgA) ، الغلوبولين المناعي ضد الفيروس المضخم للخلايا (cytotect) ، الغلوبولين المناعي البشري ضد التهاب الدماغ الذي ينقله القراد ، مضاد داء الكلب IG ، إلخ.

ج) الغلوبولين المناعي للإعطاء عن طريق الفم:تحضير مركب الغلوبولين المناعي (CIP) للإعطاء المعوي في حالات العدوى المعوية الحادة ؛ الغلوبولين المناعي المضاد لفيروس الروتا للإعطاء عن طريق الفم.

الجلوبولينات المناعية غير المتجانسة:

الغلوبولين المناعي لداء الكلب من مصل الحصان ، مصل الحصان متعدد التكافؤ المضاد للتقرح ، إلخ.

يتم استخدام مستحضرات الغلوبولين المناعي غير المحدد في حالات نقص المناعة الأولية والثانوية ، وتحضيرات الغلوبولين المناعي المحدد للعدوى المناسبة (لأغراض علاجية أو وقائية).

السيتوكينات والمستحضرات القائمة عليها

يتم تنظيم الاستجابة المناعية المتقدمة بواسطة السيتوكينات - مجمع معقد من جزيئات المناعة الذاتية، والتي هي أساس إنشاء مجموعة كبيرة من الأدوية المعدلة للمناعة الطبيعية والمترابطة.

الإنترفيرون (IFN):

1. طبيعي >> صفة IFN (الجيل الأول):

Alphaferons: الكريات البيض البشرية IFN ، إلخ.

Betaferons: الخلايا الليفية البشرية IFN ، إلخ.

2. المؤتلف IFN (الجيل الثاني):

أ) قصير المفعول:

IFN a2a: ريفيرون ، فيفيرون ، إلخ.

IFN a2b: intron-A

IFN β: أفونيكس وآخرون.

ب) العمل المطول(IFNs pegylated): peginterferon (IFN a2b + Polyethylene glycol) ، إلخ.

الاتجاه الرئيسي لعمل عقاقير IFN هو الخلايا اللمفاوية التائية (الخلايا القاتلة الطبيعية والخلايا اللمفاوية التائية السامة للخلايا).

يتم الحصول على الإنترفيرون الطبيعي في زراعة كريات الدم البيضاء في دم المتبرع (في زراعة الخلايا الليمفاوية والخلايا الأخرى) تحت تأثير الفيروس المحفز.

يتم إنتاج الإنترفيرون المؤتلف عن طريق طريقة الهندسة الوراثية - عن طريق زراعة سلالات بكتيرية تحتوي في أجهزتها الوراثية على بلازميد مأشوب من جين الإنترفيرون البشري.

للإنترفيرون تأثيرات مضادة للفيروسات ومضادة للأورام ومعدلة للمناعة.

كعوامل مضادة للفيروسات ، تعد مستحضرات الإنترفيرون أكثر فاعلية في علاج أمراض العين الهربسية (محليًا على شكل قطرات ، تحت الملتحمة) ، الهربس البسيط الموضعي على الجلد ، الأغشية المخاطية والأعضاء التناسلية ، القوباء المنطقية (محليًا في شكل هيدروجيل مرهم) ، التهاب الكبد الفيروسي B و C الحاد والمزمن (بالحقن ، عن طريق المستقيم في التحاميل) ، في العلاج والوقاية من الأنفلونزا والالتهابات الفيروسية التنفسية الحادة (داخل الأنف على شكل قطرات). في الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية ، تعمل مستحضرات الإنترفيرون المؤتلفة على تطبيع المعلمات المناعية ، وتقلل من شدة مسار المرض في أكثر من 50 ٪ من الحالات ، وتسبب انخفاضًا في مستوى الفيروس ومحتوى علامات المصل للمرض. في الإيدز ، يتم إجراء علاج مركب مع أزيدوثيميدين.

يرتبط التأثير المضاد للأورام لمستحضرات الإنترفيرون بالتأثير المضاد للتكاثر وتحفيز نشاط الخلايا القاتلة الطبيعية. كعوامل مضادة للأورام ، يتم استخدام IFN-alpha و IFN-alpha 2a و IFN-alpha-2b و IFN-alpha-n1 و IFN-beta.

يستخدم IFN-beta-lb كمنظم مناعي في التصلب المتعدد.

الاستعدادات الانترفيرون تسبب مماثلة آثار جانبية... تتميز بمتلازمة تشبه الانفلونزا. تغيرات في الجهاز العصبي المركزي: دوار ، تشوش الرؤية ، تخليط ، اكتئاب ، أرق ، تنمل ، رعشة. من الجهاز الهضمي: فقدان الشهية والغثيان. من جانب الجهاز القلبي الوعائي ، من الممكن ظهور أعراض قصور القلب ؛ من الجهاز البولي - بروتينية. على جزء من نظام المكونة للدم - قلة الكريات البيض العابرة. قد يحدث أيضًا طفح جلدي ، وحكة ، وثعلبة ، وعجز مؤقت ، ونزيف في الأنف.

محرضات الإنترفيرون (مضاد للفيروسات):

1. اصطناعي - سيكلوفرون ، تيلورون ، بولودان ، إلخ.

2. طبيعي >> صفة - ريدوستين ، إلخ.

محرضات الإنترفيرون هي أدوية تعزز تخليق الإنترفيرون الداخلي. هذه الأدوية لها مزايا عديدة على الإنترفيرون المؤتلف. ليس لديهم نشاط مستضدي. لا يسبب التوليف المحفز للانترفيرون الداخلي فرط انترفيرون الدم.

تيلورون(أميكسين) يشير إلى مركبات اصطناعية منخفضة الوزن الجزيئي ، وهو محفز فموي للإنترفيرون. يمتلك طيفًا واسعًا من النشاط المضاد للفيروسات ضد فيروسات DNA و RNA. كعامل مضاد للفيروسات والمناعة ، يتم استخدامه للوقاية والعلاج من الأنفلونزا والتهابات الجهاز التنفسي الفيروسية الحادة والتهاب الكبد أ ، لعلاج التهاب الكبد الفيروسي ، والهربس البسيط (بما في ذلك الجهاز البولي التناسلي) والهربس النطاقي ، في العلاج المعقد لعدوى المتدثرة ، الأمراض العصبية والفيروسية المعدية والحساسية المصحوبة بنقص المناعة الثانوي. الدواء جيد التحمل. أعراض عسر الهضم المحتملة ، قشعريرة قصيرة المدى ، زيادة النغمة العامة ، والتي لا تتطلب التوقف عن تناول الدواء.

بولودانعبارة عن مركب بولي نيوكليوتيد صناعي حيوي من أحماض بولي أدينليك وعديد يوريديليك (بنسب متساوية المولي). الدواء له تأثير مثبط واضح على فيروسات الهربس البسيط. يتم استخدامه على شكل قطرات وحقن للعين تحت الملتحمة. يوصف هذا الدواء للبالغين لعلاج أمراض العين الفيروسية: التهاب الملتحمة الهربسي والفيروسي الغدي ، والتهاب القرنية والملتحمة ، والتهاب القرنية والتهاب القرنية والجسم الهدبي (التهاب القرنية) ، والتهاب القزحية والجسم الهدبي ، والتهاب المشيمية والشبكية ، والتهاب العصب البصري.

آثار جانبيةنادرًا ما تحدث وتتجلى في تطور الحساسية: الحكة والإحساس بجسم غريب في العين.

سيكلوفرون- محفز إنترفيرون منخفض الوزن الجزيئي. له تأثيرات مضادة للفيروسات ، مناعية ومضادة للالتهابات. Cycloferon فعال ضد فيروسات التهاب الدماغ التي تنقلها القراد ، والهربس ، والفيروس المضخم للخلايا ، وفيروس نقص المناعة البشرية ، وما إلى ذلك. وله تأثير مضاد للكلاميديا. فعال لأمراض النسيج الضام الجهازية. تم تحديد التأثير الإشعاعي والمضاد للالتهابات للدواء.

أربيدولتوصف داخليا للوقاية والعلاج من الأنفلونزا والتهابات الجهاز التنفسي الحادة الأخرى الفيروسية ، وكذلك لأمراض الهربس.

إنترلوكينز:

المؤتلف IL-2 (الديسلوكين ، البرولوكين ، الرونكولوكين ) ، IL-1beta المؤتلف ( بيتالوكين).

بالنسبة لمستحضرات السيتوكين ذات الأصل الطبيعي ، والتي تحتوي على مجموعة كبيرة إلى حد ما من السيتوكينات الالتهابية والمرحلة الأولى من الاستجابة المناعية ، فإن التأثير متعدد الأوجه على جسم الإنسان هو سمة مميزة. تعمل هذه الأدوية على الخلايا المتورطة في الالتهاب والتجدد والاستجابة المناعية.

الديسلوكين- التناظرية المؤتلفة من IL-2. له تأثير مناعي ومضاد للورم. ينشط المناعة الخلوية. يعزز تكاثر الخلايا الليمفاوية التائية ومجموعات الخلايا المعتمدة على IL-2. يزيد من السمية الخلوية للخلايا الليمفاوية والخلايا القاتلة ، التي تتعرف على الخلايا السرطانية وتدمرها. يعزز إنتاج إنترفيرون جاما ، TNF ، IL-1. يتم استخدامه لسرطان الكلى.

بيتالوكين- المؤتلف الإنسان IL-1 بيتا. يحفز الكريات البيض والدفاع المناعي. يتم إعطاؤه تحت الجلد أو عن طريق الوريد لعمليات قيحية مع نقص المناعة ، قلة الكريات البيض نتيجة العلاج الكيميائي ، للأورام.

رونكوليوكين- يتم إعطاء مستحضر مؤتلف من الإنترلوكين -2 عن طريق الوريد للإنتان المصحوب بنقص المناعة ، وكذلك لعلاج سرطان الكلى.

عوامل تحفيز المستعمرات:

مولجراموستيم(Leukomax) هو تحضير مؤتلف لعامل تحفيز مستعمرة الخلايا المحببة البشرية. يحفز الكريات البيض ، له نشاط مناعي. يعزز تكاثر وتمايز السلائف ، ويزيد من محتوى الخلايا الناضجة في الدم المحيطي ، ونمو الخلايا المحببة ، وحيدات ، والضامة. يزيد من النشاط الوظيفي للعدلات الناضجة ، ويعزز البلعمة والتمثيل الغذائي التأكسدي ، ويوفر آليات البلعمة ، ويزيد من السمية الخلوية ضد الخلايا الخبيثة.

فيلجراستيم(نيوبوجين) هو مستحضر مؤتلف لعامل تحفيز مستعمرة محببات الإنسان. ينظم Filgrastim إنتاج العدلات ودخولها إلى الدم من النخاع العظمي.

لينوجراستيم- مستحضر مؤتلف لعامل تحفيز مستعمرة المحببات البشرية. إنه بروتين مكرر للغاية. وهو جهاز مناعي ومحفز لتكوين الكريات البيض.

المنشطات المناعية الاصطناعية: ليفاميزول ، إيزوبرينوسين بولي أوكسيديونيوم ، جالافيت.

ليفاميزول(decaris) ، مشتق من imidazole ، يستخدم كمنشط مناعي ، وكذلك عامل مضاد للديدان في داء الصفر. ترتبط خصائص التحفيز المناعي للليفاميزول بزيادة نشاط الضامة والخلايا اللمفاوية التائية.

يوصف ليفاميزول عن طريق الفم للعدوى العقبولية المتكررة ، والتهاب الكبد الفيروسي المزمن ، وأمراض المناعة الذاتية (التهاب المفاصل الروماتويدي ، والذئبة الحمامية الجهازية ، ومرض كرون). يستخدم الدواء أيضًا لأورام الأمعاء الغليظة بعد العلاج الجراحي أو الإشعاعي أو الدوائي للأورام.

إيزوبرينوزين- مستحضر يحتوي على إينوزين. يحفز نشاط الضامة ، إنتاج الإنترلوكينات ، تكاثر الخلايا اللمفاوية التائية.

خصص من الداخل للعدوى الفيروسية والالتهابات المزمنة في الجهاز التنفسي والمسالك البولية ونقص المناعة.

بوليوكسيدونيوم- مركب بوليمر صناعي قابل للذوبان في الماء. الدواء له تأثير منشط للمناعة وإزالة السموم ، ويزيد من مقاومة الجسم المناعية ضد العدوى المحلية والمعممة. ينشط البولي أوكسيديونيوم جميع عوامل المقاومة الطبيعية: خلايا نظام أحادية الخلية ، العدلات والخلايا القاتلة الطبيعية ، مما يزيد من نشاطها الوظيفي بالمعدلات المنخفضة في البداية.

جالافيت- مشتق من فثالهيدرازيد. تكمن خصوصية هذا الدواء في وجود ليس فقط خصائص مناعية ، ولكن أيضًا خصائص مضادة للالتهابات واضحة.

أدوية الفئات الدوائية الأخرى ذات النشاط المناعي

1. المحولات والمستحضرات العشبية (المستحضرات النباتية):مستحضرات القنفذية (مناعية) ، الإليوثروكسوكوس ، الجينسنغ ، الروديولا الوردية ، إلخ.

2. الفيتامينات:حمض الأسكوربيك (فيتامين ج) ، أسيتات توكوفيرول (فيتامين إي) ، أسيتات الريتينول (فيتامين أ) (انظر قسم "الفيتامينات").

مستحضرات إشنسالها خصائص مناعية ومضادة للالتهابات. عندما تؤخذ عن طريق الفم ، تزيد هذه الأدوية من نشاط البلعمة للبلاعم والعدلات ، وتحفز إنتاج إنترلوكين 1 ، ونشاط T-helpers ، وتمايز الخلايا اللمفاوية البائية.

تستخدم مستحضرات إشنسا في حالات نقص المناعة والأمراض الالتهابية المزمنة. خاصه، مناعةتوصف عن طريق الفم في قطرات للوقاية والعلاج من التهابات الجهاز التنفسي الحادة ، وكذلك مع العوامل المضادة للبكتيريا لالتهابات الجلد والجهاز التنفسي والمسالك البولية.

المبادئ العامة لاستخدام المنشطات المناعية في المرضى الذين يعانون من نقص المناعة الثانوي

يبدو أن الاستخدام الأكثر منطقية للمنشطات المناعية يكون في حالة نقص المناعة ، والذي يتجلى في زيادة المراضة المعدية. يظل الهدف الرئيسي من الأدوية المنشطة للمناعة هو نقص المناعة الثانوي ، والذي يتجلى في تكرار تكرار الأمراض المعدية والتهابات التي يصعب علاجها من جميع المواقع وأي مسببات. في قلب كل عملية معدية والتهابات مزمنة توجد تغيرات في جهاز المناعة ، وهي أحد أسباب استمرار هذه العملية.

· توصف الأدوية المعدلة للمناعة في العلاج المركب بالتزامن مع المضادات الحيوية ، ومضادات الفطريات ، ومضادات الطفيليات ، أو العوامل المضادة للفيروسات.

· عند تنفيذ إجراءات إعادة التأهيل المناعي ، لا سيما في حالة التعافي غير الكامل بعد الإصابة بمرض مُعدٍ حاد ، يمكن استخدام مُعدِّلات المناعة كعلاج وحيد.

· يُنصح باستخدام مُعدِّلات المناعة على خلفية المراقبة المناعية ، والتي يجب إجراؤها بغض النظر عن وجود أو عدم وجود تغييرات أولية في جهاز المناعة.

· يمكن وصف الأدوية المعدلة للمناعة التي تعمل على الرابط البلعمي للمناعة للمرضى الذين يعانون من اضطرابات محددة وغير مكتشفة في الحالة المناعية ، أي أساس استخدامها هو الصورة السريرية.

انخفاض في أي معلمة للمناعة ، تم الكشف عنه خلال دراسة التشخيص المناعي في شخص سليم عمليًا ، ليسبالضرورةهو أساس تعيين العلاج المناعي.

أسئلة المراقبة:

1. ما هي المنشطات المناعية ، ما هي مؤشرات العلاج المناعي ، ما هي أنواع حالات نقص المناعة مقسمة؟

2. تصنيف مناعة وفقا للانتقائية التفضيلية للعمل؟

3. المنشطات المناعية من أصل جرثومي ونظائرها الاصطناعية ، وخصائصها الدوائية ، ودواعي استخدامها ، وموانع الاستعمال ، والآثار الجانبية؟

4. المنشطات المناعية الذاتية ونظائرها الاصطناعية ، خصائصها الدوائية ، مؤشرات للاستخدام ، موانع الاستعمال ، الآثار الجانبية؟

5. محضرات ببتيدات الغدة الصعترية ونخاع العظام ، خصائصها الدوائية ، مؤشرات للاستخدام ، موانع الاستعمال ، الآثار الجانبية؟

6. مستحضرات الغلوبولين المناعي والإنترفيرون (IFN) ، خصائصها الدوائية ، مؤشرات للاستخدام ، موانع الاستعمال ، الآثار الجانبية؟

7. مستحضرات محرضات الانترفيرون (interferonogens) ، خصائصها الدوائية ، مؤشرات للاستخدام ، موانع الاستعمال ، الآثار الجانبية؟

8. محضرات الانترلوكينات وعوامل تحفيز المستعمرات ، خصائصها الدوائية ، مؤشرات للاستخدام ، موانع الاستعمال ، الآثار الجانبية؟

9. منبهات المناعة الاصطناعية ، خصائصها الدوائية ، مؤشرات للاستخدام ، موانع الاستعمال ، الآثار الجانبية؟

10. الأدوية من الفئات الدوائية الأخرى ذات النشاط المناعي والمبادئ العامة لاستخدام المنشطات المناعية في المرضى الذين يعانون من نقص المناعة الثانوي؟