Set reagensa “Hranljivi medij za izolaciju gonokoka, suvi” (GNK agar) je namijenjen za mikrobiološke svrhe. Koristi se za izolaciju gonokoka prilikom proučavanja zaraženog materijala, kao i kao podloga za uzgoj i čuvanje gonokoka u istraživačkom radu.
Komplet reagensa dostupan je kao set od dvije liofilizirane komponente:

• osnove hranljivog medija - liofilizat od zapremine od 100 ml u boci - 1 komad;
• dodatak bazi hranljivog medijuma - liofilizat od zapremine 24 ml u boci - 1 kom.

Compound: osnova hranljive podloge - ekstrakt mesa kunića, suvi enzimski pepton za bakteriološke potrebe, natrijum hlorid, autolizat pekarskog kvasca, orotna kiselina, mikrobiološki agar. Dodatak bazi hranljive podloge - normalna tečna konjska surutka za bakteriološke hranljive podloge, autolizat pekarskog kvasca, aminopeptid za mikrobiološke hranljive podloge.

Priprema: 100 ml sterilne prečišćene vode se dodaje u bocu sa bazom hranljivog medijuma i drži (30±5) minuta, zatim stavlja u ključalu vodenu kupelj dok se agar potpuno ne otopi, a nakon topljenja agar se drži u vodeno kupatilo ne duže od 5 minuta. U bocu dodati 24 ml sterilne prečišćene vode sa dodatkom hranjive podloge i ostaviti (20±2) minuta do potpunog rastvaranja na temperaturi od 20-25°C. Rastvoreni aditiv se prebacuje u rastvorenu bazu ohlađenu na temperaturu od (50±2)°C. Medijum se promeša, 3 ml se sipa u sterilne epruvete i pokosi.. 0,5 ml sterilnog rastvora natrijum hlorida 0,9% dodat u svaku epruvetu da navlaži medijum. Medijum se takođe može sipati 10-15 ml u sterilne Petrijeve posude. Epruvete ili posude sa hranljivim medijumom stavljaju se na (24±1) sat u termostat na temperaturi od (37±1)°C radi kontrole sterilnosti. Pripremljena hranljiva podloga se čuva na temperaturi od (6±2)°C do 7 dana.

Princip rada: set reagensa treba da osigura rast svakog test soja Neisseria gonorrhoeae "Loshakov" i Neisseria gonorrhoeae "Denisov" kada se inokulira 0,5 ml mikrobne suspenzije iz razblaženja od 10"5 nakon 24 - 48 sati inkubacije na temperaturi od ( 37 ± 1) °C u obliku prozirnih ili prozirnih bezbojnih kolonija veličine od 0,5 do 2 mm sa glatkim ivicama.

Sprovođenje analize: Rezultati inokulacije se bilježe nakon 24, 48 i 72 sata inkubacije na temperaturi od (37±1)°C. Kod inokulacije sekreta genitourinarnih organa bolesnika s gonorejom, rast gonokoka na hranljivoj podlozi treba primećeno nakon 24-72 sata. Ako nema rasta gonokoka, usjeve držite u termostatu do 7 dana.

Pakovanje: Polietilenske tegle od 0,25 kg za pripremu 3,6 litara medijuma.

Rok trajanja - 1 godina.

Cijena je data sa PDV-om po 1 kg.

Gonokoki su grahastog oblika, raspoređeni u obliku diplokoka, okruženi mikrokapsulom, nemaju flagele i ne formiraju spore, slično meningokima. Ćelijski zid ima vanjsku membranu, čiji su proteini podijeljeni u tri grupe prema svom funkcionalnom značaju. Gonokoke karakteriše prisustvo pilija, koji se međusobno razlikuju po svojim antigenskim svojstvima (16 antigenskih varijanti). Gonokoki se uzgajaju na hranljivim podlogama koje sadrže prirodne proteine ​​(krvni serum, ascitična tečnost). Bolje rastu na 3-5% CO2. Na ascitagarusu se formiraju prozirne kolonije sa glatkim ivicama. Od ugljikohidrata fermentira se samo glukoza, formiraju se katalaza i citokrom oksidaza - enzimi tipični za Neisseria.

Antigeni

Antigenska struktura gonokoka je promjenjiva. To je zbog prisustva brojnih antigenskih varijanti pilija koje nastaju tokom razvoja infekcije.

Patogenost i patogeneza

Gonokoki se vežu za cilindrični epitel uretre, vaginalni dio cerviksa, rektum, konjunktivu oka, kao i spermatozoide i protozoe (trihomonade, amebe). Adhezija nastaje zbog pila i proteina vanjske membrane ćelijskog zida. Karakteristična karakteristika gonokoka je njihova sposobnost da prodiru u leukocite i umnožavaju se u njima. Lipooligosaharidni dio ćelijskog zida ima toksično djelovanje. Kapsularni polisaharidi inhibiraju fagocitozu. Povezujući se s resicama cilindričnog epitela sluznice uretre, a kod žena, endocervikalnim kanalom, gonokoki prodiru u stanice uz sudjelovanje proteina vanjske membrane ćelijskog zida. To dovodi do razvoja akutnog uretritisa, cervicitisa i oštećenja grlića materice, privjesaka (cijev, jajnika) kod žena, sjemenih mjehurića i prostate kod muškaraca. Uz ekstragenitalnu lokalizaciju, gonokoki mogu oštetiti rektum i krajnike, a također mogu uzrokovati blenoreju (konjunktivitis) kod novorođenčadi. Infekcija se javlja tokom prolaska porođajnog kanala majke sa gonorejom.

Imunitet

Kod gonoreje se javlja humoralni imuni odgovor. Međutim, nastala antibakterijska antitijela nemaju zaštitna svojstva. U toku bolesti stvara se IgA, koji potiskuje vezivanje pilića patogena za ćelije sluzokože uretre. Međutim, oni nisu u stanju zaštititi sluznicu od naknadne infekcije drugim generacijama gonokoka, što je povezano s promjenom njihove antigenske strukture. To dovodi do ponovnih infekcija i recidiva, kao i do hronične bolesti.

Gonokokne infekcije

Uzročnik gonoreje i blenoreje N.gonorrhoeae (preliminarno klasifikovan kao gonococcus) pripada porodici Neisseriaceae, rodu Neisseria. U brisevima iz sekreta pacijenata gonokoki imaju oblik zrna kafe, gram-negativni su i nalaze se u parovima kako unutar leukocita (nepotpuna fagocitoza) tako i izvan ćelija. Po svojim morfološkim karakteristikama vrlo su slični meningokokama. Gonokoke karakteriše polimorfizam - postoje male i velike ćelije, ređe štapićaste, veoma su izbirljivi u pogledu hranljivih materija. Bolje rastu na podlogama koje sadrže krv, serum i ascitičnu tekućinu. Gonokoki sadrže proteinske i polisaharidne antigene prema kojima se dijele na 16 serovara, ali se još ne određuju u rutinskim bakteriološkim laboratorijama.Za mikrobiološku dijagnostiku gonokoknih infekcija koriste se bakterioskopske, bakteriološke, serološke i alergijske metode.

Uzimanje materijala za istraživanje

Za dostojanstveno i kvalitetno obavljanje bakteriološke i bakterioskopske dijagnostike važno je pravilno uzimanje kliničkog materijala. U pravilu ga treba obaviti ljekar.Kod muškaraca se ispituje sekret mokraćne cijevi, parauretralni kanali, rektum i po indikacijama materijal iz orofarinksa, kao i sekret prostate nakon njegovog masaža. Također možete pregledati sediment i "nitove" urina, ali gonokoki se u njima otkrivaju mnogo rjeđe. Prije uzimanja materijala iz uretre, pacijent ne smije mokriti 4-5 sati, ne smije koristiti antimikrobne lijekove i dezinficijense. Vanjski otvor mokraćne cijevi prvo se obriše sterilnim pamučnim štapićem navlaženim u 0,85% otopini natrijum hlorida, a zatim suvim štapićem. Razmazi se ne prave od stajnjaka, koji slobodno teče, već od materijala koji se uzima struganjem sa sluznice uretre bakteriološkom petljom ili posebnom Volkmannovom kašikom. Za manji iscjedak potrebno je obaviti preliminarnu masažu uretre. Kod žena se materijal uzima iz uretre, parauretralnih prolaza, cerviksa, rektuma i, ako je indicirano, iz orofarinksa. Prvo se čisti vagina od sekreta, masira mokraćna cijev, a materijal se odstranjuje struganjem bakteriološkom petljom ili Volkmann kašikom. Cerviks se prvo obriše sterilnim pamučnim štapićem kako bi se uklonio sluzni čep. Iscjedak iz cervikalnog kanala uzima se bakteriološkom petljom ili pincetom. Materijal iz distalnog rektuma uzima se Volkmannovom kašikom na slijepo, odnosno bez ikakve pripreme pacijenta, ili pomoću rekoskopa ili rektalnog spekuluma.U tom slučaju se materijal koji se proučava uzima direktno sa vidljivog mjesta lezije. Kod orofaringealne gonoreje sluz Uzimaju se iz orofarinksa sterilnim pamučnim štapićima na specijalnim držačima od čelične žice.Za dijagnosticiranje lenoreje bakteriološkom petljom se uklanja konjunktivni sekret. Rijetko je gonoreja komplikovana gonosepsom, endokarditisom ili artritisom. Tada je materijal za juslidzhenju krv ili sinovijalna tekućina. Uzimajući u obzir visoku osjetljivost gonokoka na temperaturne fluktuacije, materijali koji se proučavaju isporučuju se u laboratoriju u posebnim termozama ili vrećicama s grijaćim jastučićem.

Bakterioskopski pregled

Bakterioskopski pregled je najčešća, ali manje osjetljiva metoda laboratorijske dijagnostike gonoreje i blenoreje u odnosu na izolaciju stvarnih kultura. To se posebno odnosi na kronični tok bolesti, kada testni materijal sadrži malu količinu gonokoka. Međutim, uz pravilno prikupljanje materijala, ponovljene preglede pacijenata, primjenu metoda provokacije i kvalifikovanu procjenu brisa, bakterioskopski pregled često omogućava brzu i tačnu dijagnozu bolesti.Izrađuju se dva tanka, ujednačena preparata brisa. materijal koji se proučava. Jedan je obojen metilenskim plavim, drugi je obojen metodom po Gramu. U nedostatku metilen plavog, jedan bris se može bojiti 1% vodenim rastvorom kristalno ljubičaste ili 0,5% rastvorom briljantno zelene boje u trajanju od 1 minute. Zaključak o prisustvu gonokoka donosi se na osnovu njihovih svojstava: gram-negativna boja, diplokokna struktura, oblik zrna kafe, lokacija unutar leukocita.Pod uticajem antibiotika i drugih hemoterapijskih lekova, kao i kod hronične gonoreje, morfologija i boja gonokoka se može promijeniti. Pojedine ćelije dobijaju različite oblike i veličine (tzv. Asch forme). Osim toga, materijal za ispitivanje može sadržavati gram-negativne koke slične gonokokama iz roda Veillonella. Ovo u određenoj mjeri ograničava dijagnostičku vrijednost metode primarne mikroskopije.Najbolji i najpouzdaniji rezultati se dobijaju imunofluorescentnom metodom. Tanke mrlje iz sekreta pacijenta fiksiraju se u plamenu plamenika. Antigonokokni serum označen fluorescein izotiocijanatom nanosi se na njih 1 sat na 35°C u vlažnoj komori. Nakon toga, brisevi se dva puta isperu puferskom otopinom, nanose se puferirani glicerolom i prekriju pokrovnim stakalcima. Kada gonokoki stupe u interakciju s obilježenim antitijelima, pod fluorescentnim mikroskopom vidljiv je karakterističan sjaj oko bakterijskih stanica.

Bakteriološka istraživanja

Indikacije za izolovanje čistih kultura gonokoka su ponovljeni negativni rezultati bakterioskopije, prisustvo mikroorganizama sumnjivih na gonokoke, ali nisu morfološki identifikovani, kao i za pouzdano utvrđivanje izlečenja bolesti. Vrlo je važno odmah staviti usjeve u termostat. Ako je nemoguće izvršiti kultivaciju na mjestu prikupljanja materijala, možete okačiti pamučni štapić u epruvetu sa Stewartovim transportnim medijem, čime se osigurava očuvanje vitalnosti gonokoka prilikom isporuke u laboratorij. izneti prema standardnoj šemi u jednom od specijalnih hranljivih podloga u epruvetama ili Petrijevim posudama (CDS, Bailey, krvni ili serumski agar, suvi hranljivi medijum harkovskog preduzeća "Biolek" za proizvodnju bakterijskih i medicinskih preparata). Za dijagnostičku kultivaciju gonokoka u mnogim zemljama koristi se i “čokoladni” agar. Najbolji mediji su oni na bazi zečjeg mesa ili svježeg goveđeg srca. Dodavanje 20 jedinica/ml polimiksina i 2 μg/ml linkomicina značajno povećava učestalost inokulacije gonokoka, jer ovi lijekovi inhibiraju rast drugih bakterija. Prije sjetve sve podloge se zagrijavaju u termostatu 15-20 minuta. Posude i epruvete sa kulturama stavljaju se u eksikatore, gdje se stvara atmosfera od 20% CO2. Kolonije obično rastu u roku od 18-24 sata, ali je moguć i kasni rast. Zatim se usjevi drže u termostatu (u eksikatoru!) do 8 dana, svakodnevno provjeravaju izgled rasta.Izrasle kolonije gonokoka imaju okrugao, blago konveksan oblik, glatke rubove, sjajnu površinu i sluzavost. konzistentnost. Prozirne su, poput kapi rose, gotovo bezbojne, mada se mogu javiti i bjelkaste varijante. Nastale kolonije se pregledavaju makroskopski i mikroskopski. U razmazima, gonokoki se nalaze u parovima, tetradama i grozdovima. Tipične kolonije su subkulturisane na serum agar kosim slojevima kako bi se izolovala čista kultura. Konačna identifikacija se provodi uzimajući u obzir morfološka, ​​kulturološka, ​​enzimska i antigenska svojstva. Biohemijski, gonokoki su malo aktivni. Na podlogama surutke sa 1,5% različitih ugljikohidrata razgrađuju samo glukozu, ali ne i maltozu i saharozu.Oksidazna aktivnost izolovanih kultura utvrđuje se primjenom 1% otopine dimetilparafenilendiamina na kolonije (nakon mikroskopije). Kolonije pozitivne na oksidazu prvo postaju crvene, a kasnije crne Diferencijacija gonokoka od drugih vrsta roda Neisseria je od posebnog značaja u dijagnozi orofaringealne gonoreje. Kao što je poznato, na sluznici krajnika, usta i nazofarinksa uvijek postoji veliki broj gram-negativnih Neisseria - predstavnika normalne ljudske mikroflore. Pouzdane metode za identifikaciju gonokoka su reakcije imunofluorescencije, lateksa i koaglutinacije, kao i određivanje enzimskih svojstava. Imperativ je da se izvrši kvalitativno određivanje osjetljivosti ili rezistencije mikroorganizama na antibiotike metodom agar difuzije pomoću diskova, kako bi se povećala učestalost nalaženja gonokoka u brisevima pri primarnoj mikroskopiji i pouzdanije izolacije čistih kultura, posebno u U slučajevima tromog, kroničnog tijeka bolesti, koriste se metode izazivanja gonoreje, odnosno umjetno pogoršanje patološkog procesa, zbog čega se u sekretima pojavljuje veći broj gonokoka. Glavne od ovih metoda su: a) hemijska - instilacija 0,5% rastvora srebrnog nitrata u uretru kod muškaraca, podmazivanje cervikalnog kanala sa 2-5% rastvorom srebrnog nitrata; b) mehanička - umetanje direktnog bougie u uretru u trajanju od 10 minuta, ili prednja uretroskopija; c) biološka - intramuskularna injekcija gonovaccine u količini od 500 miliona mikrobnih tijela ili pyrogenal 200 MTD; d) nutritivna - konzumacija slane, začinjene hrane; e) termalna - zagrijavanje genitalije sa induktotermnom strujom;f) fiziološko - uzimanje mrlja u toku menstruacije.Još je bolje kombinovati nekoliko metoda provokacije npr. hemijsku, nutritivnu i biološku.U poslednje vreme se koristi lančana reakcija polimerazom za pouzdaniju identifikaciju uzročnika od gonoreje. Omogućuje vam identifikaciju patogena u slučajevima kronične gonoreje, kada bakterioskopski i bakteriološki pregled ne daju pozitivne rezultate.

Serološka dijagnoza

Serološka dijagnoza gonoreje se provodi relativno rijetko, uglavnom u kroničnom toku, kada bakterioskopske i bakteriološke studije ne daju pozitivne rezultate. U savremenim uslovima provode se enzimski imunotest, RNGA i Bordet-Gengou reakcije (BRS). Antigeni za ove reakcije su: polivalentna gonokokna vakcina uništena toplinom, ultrazvučno inaktivirana vakcina, proteinske i polisaharidne frakcije gonokoka, kao i piridinski antigen. ELISA i RNGA su visoko specifične i pouzdane serološke reakcije. U odnosu na prošlost, RSK je donekle izgubila svoju ulogu. Nema praktičnu vrijednost u dijagnostici akutne gonoreje, jer se liječi prije stvaranja značajne količine antitijela. Općenito je neprikladan za utvrđivanje pouzdanosti lijeka. Bordet-Gengou reakcija je važna u serodijagnostici kronične gonoreje, posebno u njenim komplikovanim oblicima (gonosepsa, metritis, artritis, prostatitis itd.) Dijagnostička vrijednost alergijskih testova donekle je obezvrijeđena činjenicom da su kod mnogih pozitivni. godine nakon gonoreje. Da bi se postavili, intradermalno se ubrizgava 0,1 ml svježe vakcine protiv gonokoka (100 miliona mikrobnih ćelija u 1 ml). Nakon 24 sata uočava se hiperemija, ponekad sa otokom u centru.

Liječenje i prevencija

Za hemoterapiju gonoreje koriste se antibiotici: beta-laktami (penicilini, cefalosporini) i drugi antibiotici. Vakcinalna prevencija gonoreje se ne sprovodi zbog nedostatka efikasnih vakcina. Kako bi se spriječila blenoreja, svim novorođenčadima se daje otopina jednog od navedenih antibiotika ukapljena u konjuktivu oka.

Neisseria gonorrhoeae pripada porodici Neisseriaceae, rodu Neisseria. Gonokoke je otkrio Neisser 1879. godine i cijela porodica je dobila ime po njemu.

Morfologija. Gonokoki su diplokoki koji se sastoje od dvije koke u obliku zrna koje leže konkavno jedna uz drugu (podsjećaju na zrna kafe). Veličina gonokoka je 1,2-1,3 × 0,7-0,8 mikrona. Polimorfne su; uz velike, postoje vrlo male bakterije L-oblika nepravilnog oblika. Gonokoki su nepokretni i nemaju spore. U patološkom materijalu (gnoj) nalazi se tvar u obliku kapsule. Gram negativan. Pod utjecajem lijekova i drugih supstanci brzo se mijenjaju: pojavljuju se gram-pozitivni oblici. U patološkom materijalu nalaze se intracelularno (u leukocitu), ali mogu biti i izvan ćelije. Mogu se naći u obliku pojedinačnih koka (vidi sliku 4).

Uzgoj. Gonokoki su aerobi. Veoma zahtjevna za hranljive podloge. Rastu na podlozi koja sadrži prirodni protein (ljudski) - krv, serum, na temperaturi od 37°C i pH 7,2-7,4. Medij mora biti svježe pripremljen i vlažan. Sjetvu treba obaviti odmah nakon uzimanja materijala. Na serumskom mediju gonokoki formiraju male kolonije od 1-2 mm, prozirne, sjajne sa glatkim rubovima, nalik kapljicama rose. U krvnom mediju nema hemolize. U surutkinoj juhi daju blago zamućenje i film koji se taloži na dno epruvete. Ako je rast slab nakon 24 sata, usjevi se ostavljaju u termostatu drugi dan.

Enzimska svojstva. Saharolitička svojstva su slabo izražena. Gonokoki razgrađuju samo jedan šećer - glukozu, stvarajući kiselinu. Nemaju proteolitička svojstva.

Formiranje toksina. Ćelijski zid gonokoka sadrži toksičnu supstancu - lipopolisaharid (malo proučavan).

Antigenska struktura. Antigenska struktura je heterogena i lako se menja pod uticajem faktora sredine. Ne postoji općeprihvaćena podjela gonokoka na serovare i serotipove.

Otpornost na faktore okoline. U vanjskom okruženju gonokoki nisu vrlo stabilni. Na temperaturi od 56-60°C uginu. Na temperaturi od 40°C njihova vitalnost naglo opada. Niske temperature i sušenje brzo ih uništavaju. Ali ostaju u gnoju do 24 sata.Dezinfekcioni rastvori - 1% rastvor fenola, živin hlorid 1:1000 ubijaju gonokoke u roku od nekoliko minuta. Gonokoki su posebno osjetljivi na soli srebra - 1% otopina srebrovog nitrata ih odmah ubija. UV zraci ih ubijaju za nekoliko minuta.

Osjetljivost životinja. Životinje nisu osjetljive na gonokoke. Međutim, intraperitonealna injekcija gonokoknog toksina u bijele miševe uzrokuje njihovu smrt.

Izvori infekcije. Osoba sa gonorejom.

Putevi prijenosa. Kontaktirajte domaćinstvo (seksualno), rjeđe preko kontaminiranih predmeta (peškira, sunđera itd.).

Bolesti kod ljudi. Gonoreja i blenoreja.

Patogeneza. Prirodni domaćin gonokoka je bolesna osoba. Gonokoki prodiru kroz sluzokožu mokraćne cijevi (kod žena, uretru i cerviks). Faktor patogenosti gonokoka je prisustvo pila, koji, povezujući se s mikroresicama cilindričnog epitela, olakšavaju prodiranje gonokoka u epitelnu ćeliju, uzrokujući akutni upalni proces u sluznici.

Klinički, gonoreja se manifestuje bolom tokom mokrenja, ispuštanjem gnoja iz uretre i vagine. Bolest je akutna, ali ponekad postaje hronična. Gonokoki mogu uzrokovati gonorejski konjuktivitis - blenoreju (gnojna upala sluznice očiju kod novorođenčadi). Gonokoki rijetko prodiru iz uretre u druge organe, ali ponekad mogu uzrokovati artritis, endokarditis itd.

Imunitet. Ne postoji prirodna otpornost na gonokoke. Prenesena bolest takođe ne stvara imunitet. Opažena fagocitoza je nepotpuna.

Prevencija. Zdravstveno obrazovanje. Podizanje kulturnog i higijenskog nivoa. Ne postoji posebna prevencija. Da bi se spriječila blenoreja, djeci se odmah po rođenju mora ubrizgati 1-2 kapi 30% otopine albucida u konjunktivalnu vreću.

Tretman. Antibiotici (penicilin, bicilin, streptomicin, itd.). Koriste se i sulfonamidni lijekovi. Za hronični oblik koristi se vakcina protiv gonokoka.

Kontrolna pitanja

1. Opišite morfološka svojstva gonokoka.

2. Koja je enzimska aktivnost i proizvodnja toksina gonokoka?

3. Koja je otpornost gonokoka. Na koji lijek su gonokoki posebno osjetljivi?

4. Koje bolesti uzrokuju gonokoki i njihova patogeneza.

Mikrobiološki pregled

Svrha istraživanja: identifikacija gonokoka i antigonokoknih antitijela.

Materijal za istraživanje

1. Iscjedak iz sluznice uretre kod muškaraca.

2. Iscjedak iz sluzokože mokraćne cijevi i grlića materice kod žena.

3. Gnojni iscjedak iz očiju.

4. Krv za serum.

Bilješka. Za bakterioskopsko i bakteriološko ispitivanje uzima se materijal: 1) prije početka liječenja antibioticima: 2) najkasnije 10 dana nakon završetka liječenja antibiotikom; 3) najkasnije 2 sata nakon poslednjeg mokrenja; 4) ne ranije od 2 sata nakon ispiranja.

Osnovne metode istraživanja

1. Mikroskopski (uglavnom se koristi za akutne oblike).

2. Mikrobiološka.

3. Serološki.

Napredak studije

Drugi dan studija

Izvadite usjeve iz termostata i pregledajte ih. Proucavanje kolonija. Prave mrlje. Ako postoje sumnjive gram-negativne diplokoke, kolonije se subkulturiraju na kosi medij u epruvetama (medij mora biti svježe pripremljen i sadržavati dovoljnu količinu kondenzata) i testirati na oksidazu. Da biste to učinili, na koloniju se pipetom nanese kap 1% otopine dimetilparafenilendiamina; kolonije mijenjaju boju iz tamno smeđe u crnu.

Treći dan studija

Kulture se vade iz termostata, prave se razmazi od kosog agara, boje se po Gramu i mikroskopski ispituju. Inokulirajte na Hiss podloge (laktoza, glukoza, manitol i maltoza). Ovi ugljikohidrati trebaju sadržavati 30% krvnog seruma. Inokulirane epruvete se stavljaju u termostat.

Četvrti dan istraživanja

Izvadite epruvete iz termostata; ako nema rasta, ostavite ih u termostatu još 1-2 dana. Ako postoji rast, rezultati se uzimaju u obzir (Tabela 28).

Serološka dijagnoza

Treća nedelja bolesti. U hroničnom toku bolesti iu sumnjivim slučajevima, RSC se radi pacijentovim serumom (videti Poglavlje 12). Kao antigen koristi se ubijena kultura gonokoka, koja se priprema u industrijskim uslovima. Možete koristiti reakciju indirektne hemaglutinacije (vidi Poglavlje 12).

Kontrolna pitanja

1. Koji materijal se koristi za identifikaciju gonokoka i kako se dobija?

2. Koliko dugo nakon mokrenja (ili ispiranja kod žena) se može uzeti materijal za istraživanje?

3. Koja je metoda istraživanja glavna za akutni, a koja za kronični oblik gonoreje?

4. Kada i koji serološki test se radi ako se sumnja na gonoreju?

5. Od kojih mikroorganizama treba razlikovati gonokoke?

Uzmi lijek od svog učitelja. Proučite ga i skicirajte gonokoke koji se nalaze unutar i izvan leukocita pomoću boje po Gramu.

Kulturni mediji

Žumance srednje. U 100 ml MPA iz mesa kunića dodati 15 ml žumanca (svježe kokošje jaje), 6 ml indikatora fenol crvenog, 1,5 ml šećera rastvorenog u 1 ml sterilne destilovane vode.

Hranljivi medij ascites-agar. Filtratu juhe pripremljene od mesa kunića dodati 2% agara, 1% peptona i 0,5% natrijum hlorida. Zagrijte dok se agar ne otopi, postavite pH na 7,4-7,5 i alkalizirajte sa 20% natrijum hidroksida. Medij se dovede do ključanja, filtrira, sipa u sterilne bočice i steriliše u autoklavu 15 minuta na 115°C.

Recepti za podloge bez ascitesa (MPA pH 7,4-7,5).

1) mesna voda od zečjeg mesa ili volovskog srca - 100 ml

kazein hidrolizat - 2 ml

autolizat kvasca - 2 ml

serum goveda - 20 ml

2) mesna voda od zečjeg mesa ili volovskog srca - 100 ml

5% rastvor hemohidrolizata - 2 ml

autolizat kvasca - 2 ml

goveđi serum - 20 ml

3) mesna voda od zečjeg mesa ili volovskog srca - 100 ml

pileće žumance - 10 ml

serum goveda - 20 ml

Rast gonokoka na ovim podlogama je obilan. Kolonije gonokoka mogu se otkriti pomoću oksidaznog testa, u kojem postaju crvene, postaju crne.

Uzročnik gonoreje je Neisseria gonorrhoeae , uzrokujući akutne i kronične upalne lezije genitourinarnih organa, sluznice orofarinksa i konjunktive oka.

Materijal za istraživanje je gnojni iscjedak iz genitourinarnih organa, rektuma ili konjunktiva očiju (sa blenorejom), zglobnog i peritonealnog eksudata. Strogo propisane metode laboratorijske dijagnostike gonoreje su mikroskopski i bakteriološki (kulturološki) pregled. Metode mikrobiološke dijagnoze gonoreje prikazane su u šemi 18.

Šema 18. Metode mikrobiološke dijagnostike gonoreje

Mikroskopska metoda sastoji se od pregleda razmaza sa test materijala, obojenih Gramom i metilenskim plavim. Kod bojenja preparata za gonoreju koristi se modifikacija Gram metode (gentian violet boja se zamjenjuje kristalno ljubičastom, a neutralno crvena se koristi umjesto fuksina; preparat se pere nakon svake faze bojenja). U razmazima akutne gonoreje nalazi se veliki broj polimorfonuklearnih leukocita, unutar i izvan kojih se nalaze gram-negativni diplokoki u obliku graha; prateća mikroflora je ili minimalna ili potpuno odsutna (slika 25). Kod kronične gonoreje, u nekim slučajevima, tipični gonokok se ne otkriva u razmazima, ili izgleda atipično u obliku malih prašinastih ili velikih sferičnih formacija; često su 2 ćelije gonokoka smještene pod uglom jedna prema drugoj, a prateća je obilna mikroflora. , nalaze se leukociti, epitelne i druge ćelije. IFM se može koristiti kao ekspresna dijagnostička metoda.

Rice. 25. Uzročnik gonoreje (Neisseria gonorrhoeae) u brisevima iz uretre pacijenta sa akutnom gonorejom. Interno i ekstracelularno smješteni gramatički diplokoki, obilje leukocita.

Bakteriološka metoda. Gonococcus je vrlo osjetljiv na različite nepovoljne faktore, pa se kulturološka ispitivanja moraju izvršiti odmah nakon prikupljanja materijala. Sjetva se vrši na posebnim hranljivim podlogama. Osnova ovih podloga je MPA iz mesa kunića sa dodatkom autolizata kvasca, hidrolizata kazeina ili hemohidrolizata i goveđe surutke. Ascitična tečnost i žumance se trenutno ne koriste kao aditivi u medijumu kulture gonokoka. Drugi tip podloge za kulturu je selektivan i uključuje, pored navedenih komponenti, antibiotike (polimiksin, linkomicin, a za dijagnozu faringealne gonoreje - orotičnu kiselinu). Usjevi se uzgajaju na 37 0 C tokom 24-72 sata u atmosferi sa visokim sadržajem CO 2 . Kolonije gonokoka su okrugle, prozirne, u obliku kapi rose. Kolonije tipične za gonokoke se subkulturiraju u epruvete sa medijumom za uzgoj gonokoka da bi se dobile čiste kulture, koje se identifikuju po morfološkim i saharolitičkim svojstvima na „raznobojnim“ podlogama (polutečni agar sa sirutom i ugljenim hidratima) ili korišćenjem mikrotest sistema. U brisevima iz čistih kultura gonokoki se ne nalaze u parovima, već odvojeno. Biohemijski, gonokoki su neaktivni i fermentiraju samo glukozu uz stvaranje kiseline i proizvode oksidazu. Za otkrivanje oksidaze koristi se test s 1% vodenom otopinom dimetilparafenilendiamina ili dietilparafenilendiamina, koji boji kolonije gonokoka prvo ružičasto, zatim crveno, a nakon nekoliko minuta - crno. Također se proučava osjetljivost gonokoka na antibiotike i njihova beta-laktamazna aktivnost.

Serološka metoda(određivanje antitela na gonokok u krvi pacijenata primenom RSK i ELISA) nije striktno regulisano, nema dijagnostičku vrednost, nije metoda za praćenje efikasnosti lečenja i trenutno se ne koristi u realnoj praksi.

Genetska dijagnostika. Usmjeren je na otkrivanje specifičnih fragmenata gonokokne DNK pomoću PCR-a i može se koristiti kao dodatna visoko informativna metoda za dijagnosticiranje gonoreje.

Samostalni rad studenata

1. Mikroskopska metoda- pregled gnojnog iscjetka iz uretre kod bolesnika sa sumnjom na gonoreju (demonstracijski mikroslajd, boja po Gramu).

2. Bakteriološka metoda. Studij kulture . uzročnik gonoreje na hranljivoj podlozi za izolovanje gonokoka, na kojoj gonokoki formiraju okrugle, prozirne kolonije u obliku kapi rose. Enzimski, gonokok je neaktivan i samo fermentira glukozu da bi stvorio kiselinu. Uzmite u obzir rezultate sjetve gonokoka na „raznobojni“ red (demonstracija).

Dijagnoza gonoreje

Bez testiranja na gonoreju, nijedan savremeni lekar neće postaviti dijagnozu. Nije važno kakve simptome ima pacijent - gonoreja se, kao i mnoge druge infekcije, prvenstveno utvrđuje laboratorijskim metodama. A pravovremeno testiranje, zajedno sa kompetentnim izborom metode koja je najprikladnija u svakom konkretnom slučaju, igra odlučujuću ulogu u prevenciji ozbiljnih komplikacija.

Za laboratorijsku dijagnostiku gonoreje koristi se nekoliko metoda:

• mikroskopija razmaza na Neisser gonokok (bakterioskopska metoda);
• bakterijska kultura za gonoreju (gonokoki);
• serološki testovi (serodijagnostika);
• enzimski imunotest (ELISA);
• PCR (lančana reakcija polimeraze);
• brzi testovi na gonoreju.

Najprecizniji i najčešći od njih su kultura rezervoara i PCR. Pogledajmo svaki detaljnije kako bismo razumjeli zašto.

Kako se radi mikroskopski test na gonoreju?

Mikroskopija brisa iz uretre ili vagine (cerviksa) je najjednostavniji metod preliminarne dijagnoze gonoreje. Princip studije je jednostavan. Razmaz se boji i pregleda pod mikroskopom. Pri tome se obraća pažnja na prisustvo dvostrukih kokica sa oblikom u obliku zrna kafe karakterističnim za gonokoke.

Uz bilo koju upalu, bris sadrži veliki broj leukocita - krvnih stanica odgovornih za zaštitu tijela. Kod gonoreje je i njihov broj povećan, ali ta činjenica ne može potvrditi dijagnozu. Prisustvo bijelih krvnih stanica samo ukazuje na upalu, ali ne ukazuje na to koja infekcija ju je izazvala.

Leukociti i gonokoki kod gonoreje mogu se odrediti u općem testu urina (naći se u sedimentu).

Prednost metode je njena jednostavnost i brzina. A glavni problem je niska preciznost. Analizu možete završiti za 10-15 minuta, ali je vjerovatnoća da je rezultat tačan 50%. Sličan izgled karakterističan je za gotovo sve Neisseria, uključujući i nepatogene. Zbog toga se mikroskopija koristi samo za skrining, kako bi se utvrdilo da li u brisu ima nečeg stranog. Ako se otkriju bakterije slične gonokokama, provode se drugi, precizniji testovi: kultura, PCR ili test krvi pomoću ELISA.

Kako se izvodi bakterijska kultura na gonokoke?

Za razliku od mikroskopskog pregleda razmaza, kultura u rezervoaru je informativna metoda. Gonokoki rastu samo na posebnim podlogama, njihove kolonije imaju karakterističan izgled i boju. Osim toga, različite vrste bakterija imaju različite sposobnosti obrade određenih tvari (posebno šećera). Uzete zajedno, ove karakteristike pomažu u identifikaciji i vrste i podvrste mikroba. Tačnost metode je 90%.

Ako se nađu gonokoki, tada će se u laboratoriji odrediti osjetljivost na antibiotike na istim kolonijama. Tada će doktor tačno znati koji je lijek jači u svakom konkretnom slučaju. Stoga ima smisla izvršiti analizu, čak i ako je druga metoda jasno utvrdila prisutnost infekcije.

Nedostatak metode je njeno trajanje. Vrijeme potrebno za pripremu takve analize za gonoreju može biti od nekoliko dana do nekoliko sedmica.

U kojim slučajevima se provodi serodijagnostika gonoreje?

Za borbu protiv bolesti, imunološki sistem proizvodi antitijela - posebne zaštitne proteine. Oni su specifični za svaku infekciju s kojom se moraju boriti. Doktori su krenuli od suprotnog - ako postoje antitijela (učinak), onda mora postojati i bakterija (uzrok). Princip serološke metode je promatranje reakcije krvi pacijenta, koja sadrži antitijela na gonokoke, s antigenima na ta antitijela sadržana u dijagnostičkom kompletu. Antitijela i antigeni se privlače jedni prema drugima poput polova magneta i lijepe se zajedno. Zbog toga se u otopini formira talog.

Serološke metode se rijetko koriste za dijagnosticiranje gonoreje. Uglavnom od interesa za naučnike. Ranije su se široko koristile za otkrivanje gonoreje, ali su napuštene zbog niske točnosti i ovisnosti rezultata o subjektivnim faktorima.

Period čekanja na rezultate testova na gonoreju serološkim metodama je nekoliko sati. Informativni sadržaj – od 60 do 75%, u zavisnosti od dijagnostičkog seta antigena. Serološki testovi ne otkrivaju bolest u prvim sedmicama nakon infekcije – tijelu je potrebno vrijeme da akumulira antitijela u krvi.

Kako otkriti gonoreju pomoću enzimskog imunotesta

Enzimski imunološki test ili ELISA je metoda koja je zamijenila serološke dijagnostičke metode. Na isti način, omogućava vam da odredite u krvi određene klase antitijela specifičnih za gonoreju, ali preciznije. Može dijagnosticirati i akutnu (nekoliko dana nakon infekcije) i kroničnu gonoreju. Široko se koristi za dijagnostiku i skrining.

Prednosti metode su dovoljna tačnost (75-85%), razumna cijena. Nedostatak: rezultati mogu biti iskrivljeni iz subjektivnih (pokvareni reagensi, ljudski faktor) i objektivnih (prisustvo imunodeficijencije, imunološke bolesti) razloga. Koliko vremena je potrebno da se uradi analiza krvi na gonoreju pomoću ELISA-e zavisi od svakog konkretnog laboratorija i reagensa (od 1 do 5-6 dana).

Testirajte na gonoreju PCR metodom

Metoda polimerazne lančane reakcije je kruna dostignuća u oblasti dijagnostike bolesti. Veoma je precizan i konkretan. Tvorac metode, Kary Mullis, dobio je Nobelovu nagradu za medicinu 1993. godine. Princip metode zasniva se na detekciji genetskog materijala patogena (DNK neisseria gonorrhoeae) u proučavanim uzorcima biološkog materijala. Za provođenje studije možete koristiti bilo koji biološki materijal - krv, serum, izlučevine iz genitalnog trakta, uretru, razmaze i struganje. Materijal može biti kontaminiran gnojem, eksudatom, urinom i sekretom, ali to ne utiče na efikasnost analize.

U materijalu se traži sekvenca gena karakteristična za patogen. Ako se pronađe, to je jasan znak infekcije. PCR test za gonoreju ima najveću informativnost i specifičnost. Njegova tačnost je oko 95%. Trajanje analize je od jednog do nekoliko dana, u zavisnosti od laboratorije i reagensa.

Ekspresni testovi za gonoreju kod kuće

Najpopularniji proizvođač ekspresnih testova je STD Test Express

Ekspresni testovi za gonoreju razvijeni su posebno za osobe koje su seksualno aktivne. Zasniva se na principu sličnom ELISA-i (reakcija gonokoknog antigena sa antitijelima iz materijala uzetog od osobe sa sumnjom na bolest). Uzorci krvi, sekreta iz genitalnog trakta, uretre i rektuma su pogodni za testiranje.

Glavna prednost ekspresnih testova je brzina. Procedura traje 10-20 minuta. Nedostatak metode su česti lažno pozitivni i lažno negativni rezultati, ovisnost o ispravnom testiranju, izobličenje rezultata zbog kršenja pravila skladištenja. Stoga je bolje pogledati u najbližu laboratoriju.

Hajde da sumiramo

U većini slučajeva, gonokoki se prenose zajedno s drugim spolno prenosivim infekcijama. Ako sumnjate na bolest, potrebno je da se testirate na sve moguće bolesti. Stoga je optimalno započeti s PCR analizom – priprema se brzo, a jedan bris se može istovremeno pregledati na različite bakterije i viruse.

Ima smisla napraviti akvarijumsku kulturu ako je već poznata gonoreja da bi se potvrdila dijagnoza i utvrdila osjetljivost na antibiotike.

Može li se gonoreja ne pojaviti na testovima? Lažno negativni rezultati se javljaju kod najpreciznijih metoda. Antibiotici i drugi lijekovi, karakteristike organizma pacijenta, kronična infekcija i drugi faktori mogu promijeniti izgled i oblik gonokoka, pretvarajući ih u takozvane L-oblike. U teškim slučajevima, liječnik propisuje provokaciju gonoreje - namjerno slabljenje imunološkog sistema kako bi se stimulirala infekcija da se manifestira. Kućni način provokacije je jednostavan i prijatan - popijte pivo i okupajte se u vrućoj kupki, a preporučuje se svima koji se podvrgavaju brisevima na kulturu.

Kultura za gonoreju

Gonoreja je spolno prenosiva bolest koja je jedna od najčešćih među populacijom.

Bolest se karakteriše upalom mokraćnog sistema. Čest uzrok infekcije je promiskuitet bez upotrebe zaštitne opreme.

I muškarci i žene mogu se zaraziti.

Bitan! Gonoreja, bez pravovremenog liječenja, doprinosi razvoju neplodnosti.

Danas ćemo vam reći kada i kako uzeti kulture na gonokoknu infekciju i pomoći ćemo vam da shvatite rezultate testova.

Kultura za gonoreju: indikacije

Od trenutka infekcije do prvih vidljivih znakova obično prođe od 3 do 15 dana. Može biti asimptomatski.

Karakteristični su sljedeći simptomatski znaci:

• Gnojni iscjedak;
• Crvenilo i oticanje uretre;
• Peckanje i svrab u području genitalija;
• Bol u donjem dijelu trbuha;
• Moguće povećanje tjelesne temperature;
• Bolno mokrenje.

Ako primijetite ove simptome, trebate što prije potražiti pomoć od ljekara. Indikacija za pregled je gonokokna infekcija kod seksualnog partnera.

Pažnja! Prijelaz bolesti u kronični može dovesti do brojnih komplikacija i neplodnosti.

Priprema: kultura za gonoreju

Za bakteriološka istraživanja može se koristiti bilo koji biološki materijal.

Prije studije uzima se ograda:

• Skin;
• sperma;
• Oralna sluznica, gastrointestinalni trakt;
• Struganje genitourinarnog trakta.

Bakteriološku kulturu propisuje urolog ili ginekolog.

Da biste dobili pouzdan rezultat, trebali biste znati pravila za pripremu za bakteriološku inokulaciju.

Ako vam je ljekar propisao test brisa, morate:

• Nemojte imati seksualne odnose dva dana prije pregleda;
• Nemojte se ispirati;
• Provoditi genitalnu higijenu bez proizvoda za intimnu higijenu;
• 2-3 sata prije uzimanja materijala suzdržite se od odlaska u toalet;
• Prestanite da uzimate lekove nedelju dana pre testa.

Kod žena se bris uzima prvih dana nakon završetka menstruacije.

Usjevi se stavljaju u termostat pri optimalnim uslovima vlažnosti i temperature. Za gonokok je potrebno održavati temperaturu unutar 37 stepeni. Nakon toga se proučavaju upitne kolonije.

Karakteristike vrste rasta kolonija na agaru:

• Bezbojan ili sa žutom nijansom;
• Nije velika;
• Površina je glatka i sjajna;
• Blago konveksan.

Ova metoda istraživanja je prilično informativna. Loša strana je što je potrebno mnogo vremena za istraživanje. Bakteriološkim ispitivanjem može se odrediti osjetljivost mikroorganizma na antibakterijske lijekove. Ovo je neophodno za efikasnost daljeg lečenja.

Kultura grla za gonoreju

Ako sumnjate na gonorejski proces u grlu, obratite se specijalistu ORL ili venerologu. Svakako treba uzeti bris iz grla, krajnika ili ždrijela.

Istovremeno se uzima test iz genitourinarnih organa. Prije početka liječenja potrebno je napraviti test na gonokoknu infekciju. Nakon tretmana potrebno je da se podvrgnete kontrolnom pregledu.

Kultura za gonoreju iz oka

Zahvaćeni kapak otiče i postaje plavkasto-crven. U procesu velikog pražnjenja gnoja, očni kapak se može spojiti.

Pojavljuju se bol, svrab i peckanje. Iscjedak iz oka se uzima na analizu. Sprovode se PCR studija i bakteriološka kultura uz daljnja ispitivanja na osjetljivost na antibiotike.

Kultura sekreta prostate za gonoreju

Masažom prostate se sakuplja sekret prostate.

Ovo je bistra tekućina koja je inokulirana na posebnim hranjivim podlogama. Nakon jednog ili dva dana mogu se identificirati kolonije mikroorganizama. Radi se antibiogram kako bi se odredio efikasan lijek za daljnje liječenje.

Kultura gonoreje iz anusa

Za prikupljanje materijala koristi se nekoliko metoda. U prvom slučaju, pamučni štapić se provlači duž perianalnih nabora. Nakon toga se stavljaju u sterilnu posudu. Druga metoda je uzimanje struganja.

Vremenski okvir za pripremu kultura za gonoreju

Laboratorijski testovi mogu trajati od pet do devet dana.

To ovisi o vrsti i metodologiji izvršene analize. Rezultat mikroskopske analize može se dobiti za oko pola sata.

PCR se radi ne više od jednog dana, a može se uraditi i ekspresna analiza. PCR paleta omogućava paralelno testiranje na prisustvo pratećih infekcija.

Kultura gonoreje za određivanje efikasnosti liječenja

Odsustvo simptomatskih znakova gonoreje i negativnih laboratorijskih testova prirodan je rezultat liječenja. Kontrola se vrši 10. dana nakon prestanka uzimanja antibakterijskih lijekova.

Studija uključuje ispitivanje razmaza tri puta pod mikroskopom i inokulaciju materijala jednom na hranljivu podlogu.

Muškarci su obavezni da polažu test jednom, a žene tri puta. Nakon dve nedelje prekida terapije, tokom i posle menstruacije.

Ako nema simptoma i dobije se negativan test, osoba je zdrava. Ako su rezultati pozitivni, ali se ne uoče simptomi, to ukazuje na skriveni proces.

Tok tretmana treba ponoviti. Negativni rezultati i prisutnost znakova upale ukazuju na prisutnost druge vrste patogena u tijelu.

Kultura za gonoreju: kom lekaru da se obratim?

Kulture za gonoreju mogu propisati odgovarajući specijalisti - ginekolog, urolog, venerolog.

Pregled se može obaviti u bilo kojoj javnoj ili privatnoj klinici. Ako su vam potrebni hitni rezultati testova, preporučujemo da se obratite privatnoj laboratoriji.

Zapamtite! Ako se pojave prvi simptomi, odmah se obratite lekaru specijalistu.

Kultura za gonoreju: cijena

Cijena analiza ovisi o načinu proučavanja materijala.

Cijene će varirati između 150-2000 rubalja. Bakteriološka sjetva u cjenovnoj politici iznosit će otprilike 800-1300 rubalja.

Ako trebate obaviti test kulture na gonoreju u Moskvi, obratite se našoj klinici. Naša vlastita laboratorija nam omogućava da brzo, efikasno i jeftino provodimo istraživanja. Kada dobijete rezultate, možete se obratiti venerologu.

U preventivne svrhe treba koristiti barijernu kontracepciju. Bolje je spriječiti razvoj bolesti nego kasnije liječiti.

Ako sumnjate na gonoreju, obratite se nadležnom venerologu.

Upotreba: mikrobiologija, dijagnostika gonoreje, hranljiva podloga za izolaciju i uzgoj gonokoka. Suština pronalaska: hranljiva podloga sadrži kao hranljivu bazu hidrolizat pankreasa ribljeg brašna i hlorovodonične kiseline hidrolizat kazeina, kao stimulans rasta i izvor vitamina - autolizat pekarskog ili pivskog kvasca, stimulator rasta hemofilnih mikroorganizama. Podloga dodatno sadrži glukozu, mikrobiološki agar, polimiksin-B sulfat, linkomicin hidrohlorid i destilovanu vodu. Medij osigurava rast gonokoka muzejskih sojeva i iz materijala oboljelih od gonoreje, čuvajući tipičnu morfologiju mikroorganizma, što doprinosi njegovoj širokoj primjeni u praktičnoj zdravstvenoj zaštiti u dijagnostici i liječenju spolno prenosivih bolesti. 3 stola

Pronalazak se odnosi na oblast medicinske mikrobiologije i može se koristiti u dijagnostici gonoreje. Vodeće strane kompanije ("Oxoid", "Gibco", "BRL" itd.) proizvode hranljive podloge za uzgoj gonokoka na bazi mesnih digestata i fermentolizata uz dodatak sterilne domaće krvi. Od domaćih preparata poznati su: hranljiva podloga "Arginin-agar", dijagnostička, suva, proizvedena od strane NPO Nutrient Media, Mahačkala, koja se sastoji od sledećih komponenti, g: pepton 8,0-12,0; arginin 0,07-0,3; cistin 0,007-0,03; glutaminska kiselina 1,0-1,8; EKD 4,0-7,0; tiamin bromid 0,002-0,007; gvožđe nitrat 0,002-0,01; kalijum hlorid 0,07-0,2; natrijum hlorid 5,0-8,0; amonijum hlorid 0,9-2,0; magnezijum sulfat 0,4-0,9; glukoza 4,0-7,0; skrob 0,5-2,0; Tris pufer 1,0-2,5; agar 13-17,0; goveđi serum 153,0-255,0; polimiksin-M sulfat 15000-25000 jedinica; linkomicin hidrohlorid 0,001-0,003; destilovana voda do 1 litra. Nedostatak ovog medija je: niska osjetljivost, nestabilnost rezultata o intenzitetu rasta gonokoka. Liofilno osušeni medij za izolaciju gonokoka (proizvoda Naučno-istraživački institut VSA, Sankt Peterburg) koji se sastoji od podloge i aditiva u sljedećem omjeru komponenti, g; prikazan je u tabeli 1. Nedostatak ovog medijuma je: nestabilnost rezultata o intenzitetu rasta gonokoka i osetljivosti. U praksi se uglavnom koriste laboratorijski pripremljene podloge bez ascitesa od ekstrakata svježeg zečjeg mesa i svježih goveđih srca uz dodatak peptona i 20% seruma goveđe krvi ili sterilne nativne krvi. Nedostatak potrebne količine domaćih hranljivih podloga za dijagnozu gonoreje, kao i njihov kvalitet, izaziva kritike praktične zdravstvene službe. Cilj pronalaska je stvaranje suve hranljive podloge koja obezbeđuje stabilne rezultate u pogledu intenziteta rasta i povećane osetljivosti, a ne inferiorne u odnosu na komercijalne podloge za dijagnostiku gonokoka, kao i korišćenje neprehrambenih proizvoda za njegovu proizvodnju. Problem se rješava balansiranjem komponentnog sastava podloge koja sadrži hranljivu proteinsku bazu, autolizat pekarskog ili pivskog kvasca, agar, natrijum hlorid, inhibitore strane mikroflore linkomicin hidrohlorid i polimiksin-B sulfat; kao nutritivnu bazu sadrži hidrolizat pankreasa krmnog brašna za ribu i hidrolizata kazeina hlorovodonične kiseline, osim toga, dodatno sadrži stimulator rasta hemofilnih mikroorganizama (enzimski hidrolizat crnog albumina), glukozu, za povećanje stabilnosti rezultata pri pregledu pacijenata sa hroničnom gonorejom, moguće je u podlogu (5-10)% dodati serum krvi goveda sa sledećim sadržajem komponenti, g/l: hidrolizat pankreasa ribljeg brašna 22,0-28,0 kiseli hidrolizat kazeina 2,8-3,2 autolizat pekarskog ili pivskog kvasca 0,8-1,2 stimulator rasta. hemofilnih mikroorganizama 2,0-10,0 glukoza 9,0 -11,0 natrijum hlorid 2,9-3,1 mikrobiološki agar 12,0-15,0 polimiksin-B sulfat 15000-25000 jed.
linkomicin hidrohlorid 0,001-0,003
destilovana voda do 1 l
pH 7,3+0,2
Kvantitativni odnos komponenti hranljive podloge i njenog pH obezbeđuju povećan nivo intenziteta rasta gonokoka i osetljivosti podloge. Hranljivi medij se priprema na sljedeći način: izvagani dijelovi glavnih sastojaka dodaju se u tikvicu s destilovanom vodom. Medij se dobro promeša i, zatvarajući bocu čepom od pamučne gaze, steriliše se na (115-119) o C 30 minuta. zatim ohlađen na temperaturu od (45-50) o C i sterilan, prethodno rastvoren u sterilnom fiziološkom rastvoru. rastvora, dodati izmerene količine polimiksin-B sulfata i linkomicin hidrohlorida. Medij se miješa i sipa u sterilne Petrijeve posude. Za biološku kontrolu medija kulture korištena je kultura muzejskih sojeva Neisseria gonorrhoeae i materijal pacijenata oboljelih od gonoreje. Svi usevi su kultivisani na temperaturi od (37+0,5) o C u atmosferi od 10% CO 2 i visokoj vlažnosti tokom 24-48 sati: podaci u tabeli 1. Primer 1. Predložena podloga je testirana kultivacijom sojeva Neisseria gonorrhoeae i na kliničkom materijalu na hranljivoj podlozi sledećeg sastava, g:
hidrolizat pankreasa ribljeg brašna 22.0
autolizat pekarskog kvasca 0,8
hidrolizat kazeina hlorovodonične kiseline 2.8
stimulator rasta hemofilnih mikroorganizama 2.0
glukoza 9,0
natrijum hlorid 2.9
mikrobiološki agar 12.0
polimiksin-B sulfat 15000 jedinica
linkomicin hidrohlorid 0,001
destilovana voda do 1 l
pH 7,3+0,2
Rezultati su zabilježeni nakon 24-48 sati kultivacije. Primjer 2. Predložena podloga je ispitana inokulacijom sojeva Neisseria gonorrhoeae i korištenjem kliničkog materijala na hranljivoj podlozi sa optimalnim sadržajem komponenti sljedećeg sastava, g:
hidrolizat pankreasa ribljeg brašna 25.0
autolizat pekarskog kvasca 1.0
hidrolizat kazeina hlorovodonične kiseline 3.0
stimulator rasta hemofilnih mikroorganizama 5.0
glukoza 10,0
natrijum hlorid 3.0
mikrobiološki agar 13.0
polimiksin-B sulfat 20000 jedinica
linkomicin hidrohlorid 0,002
destilovana voda do 1 l
pH 7,3+0,2
Rezultati su zabilježeni nakon 24-48 sati kultivacije. Primjer 3. Predložena podloga ispitana je inokulacijom sojeva Neisseria gonorrhoeae i korištenjem kliničkog materijala na hranljivoj podlozi sa maksimalnim sadržajem komponenti sljedećeg sastava, g:
hidrolizat pankreasa ribljeg brašna 28.0
autolizat pekarskog kvasca 1.2
hidrolizat kazeina hlorovodonične kiseline 3.2
stimulator rasta hemofilnih mikroorganizama 10.0
glukoza 11.0
natrijum hlorid 3.1
mikrobiološki agar 15.0
polimiksin-B sulfat 25000 jedinica
linkomicin hidrohlorid 0,003
destilovana voda do 1 l
pH 7,3+0,2
Rezultati su zabilježeni nakon 24-48 sati kultivacije. Primjer 4. Predloženi medij je testiran inokulacijom sojeva Neisseria gonorrhoeae i korištenjem kliničkog materijala na hranljivoj podlozi uz kršenje kvantitativnog omjera komponenti sljedećeg sastava, g:
hidrolizat pankreasa ribljeg brašna 31.0
autolizat pekarskog kvasca 1.4
hidrolizat kazeina hlorovodonične kiseline 3.4
stimulator rasta hemofilnih mikroorganizama 15.0
glukoza 13,0
natrijum hlorid 3.5
mikrobiološki agar 20.0
polimiksin-B sulfat 30000 jedinica
destilovana voda do 1 l
pH 7,3+0,2
Rezultati su zabilježeni nakon 24-48 sati kultivacije. Primjer 5. Predloženi medij je testiran inokulacijom sojeva Neisseria gonorrhoeae i korištenjem kliničkog materijala na hranljivoj podlozi uz kršenje kvantitativnog omjera komponenti sljedećeg sastava, g:
hidrolizat pankreasa ribljeg brašna 18.0
autolizat pekarskog kvasca 0,5
hidrolizat kazeina hlorovodonične kiseline 2.5
stimulator rasta hemofilnih mikroorganizama 0,5
glukoza 5.0
natrijum hlorid 2.5
mikrobiološki agar 10.0
polimiksin-B sulfat 10000 jedinica
linkomicin hidrohlorid 0,005
destilovana voda do 1 l
pH 7,3+0,2
Rezultati su zabilježeni nakon 24-48 sati kultivacije. Tabela 2 daje uporedni opis rasta gonokoka iz kliničkog materijala i muzejskih sojeva na predloženim i poznatim podlogama nakon 24-48 sati rasta. Morfologija kolonija i obojenih razmaza na svim testiranim podlogama identična je onoj tipičnoj za gonokok. Tabela 2 pokazuje da je predloženi medij superiorniji od komercijalnih medija u pogledu intenziteta i osjetljivosti rasta gonokoka. Kršenje kvantitativnog omjera komponenti okoliša dovodi do oštrog pogoršanja mikrobioloških pokazatelja kvalitete predloženog okoliša. Predloženi medij omogućava održavanje vitalnosti sojeva Nisseria gonorrhoeae (svježe izolovanih od pacijenata i muzejskih uzoraka) tokom pasiranja tokom 9 mjeseci. U tabeli 3 prikazani su podaci o održivosti kulture Neisseria gonorrhoeae kada se uzgaja i čuva na čvrstim podlogama,
Iz tabele 3 se vidi da je predložena hranljiva podloga pogodna za dijagnostičke svrhe u identifikaciji pacijenata sa akutnom i hroničnom gonorejom, kao i za dobijanje biomase Neisseria gonorrhoeae za stvaranje gonovaccina. Izvori informacija
1. Priručnik Kulturni mediji (1982.)
2. Priručnik za podloge za mikrobiološke kulture (Gibco BRL 1988)
3. Oxoid priručnik kulturnih medija, sastojaka i drugih laboratorijskih usluga. (Oxoid Limited 1979.)
4. Priručnik za BBL proizvode i laboratorijske procedure. 1991. 5. Autor. Potvrda br. 1451167, rođ. Gadzhieva i saradnici “Hranljivi medij za izolaciju gonokoka.” 6. FS 42-146 VS-88 Hranljivi medij za izolaciju gonokoka, suv.

TVRDITI

1 Hranljivi medij za izolaciju i uzgoj gonokoka, koji sadrži hranljivu bazu, autolizat pekarskog ili pivskog kvasca, mikrobiološki agar, natrijum hlorid, inhibitor strane mikroflore i destilovanu vodu, naznačen time što kao hranljiva baza sadrži hidrolizat ribe pankreasa brašno i hidrolizat kazeina hlorovodonične kiseline, dodatno sadrži stimulator rasta hemofilnih mikroorganizama, glukozu, a kao inhibitor strane mikroflore polimiksin-B sulfat i linkomicin hidrohlorid u sledećem omjeru komponenti, g/l: 3 Hidrolizat gušterače ribljeg brašna7 22 283 Hidrolizat hlorovodonične kiseline kazeina7 2,8 3,23 Pekarski autolizat ili pivski kvasac7 0,8 1,23 Stimulator rasta hemofilnih mikroorganizama7 2 103 Glukoza7 9 113 Natrijum hlorid 3-big-hlorid7 17x51 Mikrobiološki hlorid7 17x59 2. e, jedinica7 15000 250003 Linkomicin hidrohlorid7 0,001 0,0033 B Destilirana voda7 Do 1 l3 pH7 7,3 + 0,2

Slični patenti:

Pronalazak se odnosi na medicinsku biotehnologiju i odnosi se na proizvodnju meningokoknog adhezina, preparata bakterijskog porijekla, koji se koristi, na primjer, za određivanje stepena adhezije meningokoka tokom njihove interakcije sa ćelijama domaćinima.