4402 0
Kahjuks võib isegi praegu väita, et seenhaiguste diagnoosimine on sageli enneaegne (juuste hõrenemine, koorimine on sageli ekslikult "kõõm", "kuivus"). Samal ajal ei esine kahjustustes sageli subjektiivseid aistinguid (sügelus, valu jne) ja seetõttu ei lähe patsiendid pikka aega spetsialisti juurde.
Küünte muutusi (inetuid, murenevaid, hõrenenud) peetakse vigastuste, külmakahjustuste jms järel "onühhodüstroofiaks". Samal ajal (isegi üksikud kahjustused, sealhulgas küüned) võivad põhjustada keha allergilist ümberkorraldamist, mõjutada verd ja lümfisooned jne Selle määramata pikkusega patsiendid jäävad seeninfektsiooni leviku allikaks. Seoses eeltooduga on mükooside õigeaegne laboratoorne diagnostika ja võimalik varajane ravi alati olulised.
Valdavalt inimestel esinevate seenhaiguste kliiniliste variantide mitmekesisus, aga ka erinevat tüüpi seente (ja perekondade) mikrobioloogia, morfostruktuuri, immunoloogiliste ja muude parameetrite iseärasused on kaasa toonud märkimisväärse hulga meetodite olemasolu. mükooside diagnoosimine; Tuleb märkida, et olemasolevaid meetodeid täiustatakse pidevalt ja neil on (suhteliselt hiljuti) eripära immunoloogiliste ja molekulaarsete geneetiliste testide suhtes.
Teisest küljest on kultuuriuuringud endiselt "kulla lähedaste standardite kategoorias" ja neid kasutatakse teiste uuringute kahtlaste tulemuste kinnitamiseks; Arvatakse, et kultuuriliste ja molekulaargeneetiliste meetodite kombinatsioon diagnostiliste "kahtlaste" mükoosivormide jaoks (eriti levitatud, mis tahes geneesi immunosupressiooni taustal, siseorganite kahjustusega jne) on üks usaldusväärsemaid viise. protsessi mükootilise olemuse registreerimiseks.
Siiski ei tohiks tähelepanuta jätta "vanu" tehnikaid, eriti bakterioskoopiat (eriti eelnevat uurimist), eriti kuna igapäevases praktikas kasutatakse paljudes dermatoloogiaasutustes mükoosi mikroskoopilist "kontrollimist" kõige laialdasemalt võrreldes teiste testidega.
Arvestades allergiliste ilmingute arvu märkimisväärset suurenemist nahal (ja mõnikord vistseraalsel) - pikaajalise, kroonilise, perioodiliselt süveneva mükoosiga (nahk, küüned jne), on soovitatav teha allergoloogilised testid selle astme kindlakstegemiseks. keha sensibiliseerimine, sealhulgas kombineeritud seen- ja bakteriaalne infektsioon; see asjaolu võib mõjutada konkreetse patsiendi ravi spetsiifilisust - näiteks määrata antimükootikumide ja desensibiliseerivate ainete ratsionaalne määramine jne.
Traditsiooniliselt tehakse seenhaiguse eeldatav diagnoos kliiniliste ilmingute põhjal ja kinnitatakse laboratoorsete testidega.
Raamatu selles osas tutvustame lühidalt mükooside registreerimise põhimeetodeid (olenemata nende asukohast), võttes arvesse "uurimistöö liiki ja võetud materjali". Tuleb märkida, et mükooside (sealhulgas allergilise komponendiga) kliiniliste ilmingute polümorfism määrab kindlaks uuritava patoloogilise materjali mitmekesisuse. Sel juhul sõltub seente elementide otsimise edukus selle õigest võtmisest.
Niisiis, erütematoos-lamerakkude, sageli lokkis puhangute perifeerne tsoon on seeneniidistiku, seente eoste rikkam; kahjustuse karvastel aladel, keerdunud, valkjad, värvunud, tuhmid juuksed või nende killud - võetakse "kanep" (soovitav on kontrollida juuste võtmist Wood -lambi abil). Teatud oskusi nõuab materjali proovide võtmine (nõela abil) nn. "Mustad täpid" - tumedad sarvjas koonused folliikulite suus.
Igapäevases praktikas uuritakse tavaliselt naha soomuseid (kogutakse kraapides, määrides, kleeplindi abil), muutunud küüsi kraapides, subunguaalse hüperkeratoosi piirkonda, samuti limaskestade tühjenemist. Vastavalt näidustustele uuritakse röga, loputusvedelikku, uriini (kateteriseerimata põiega patsientidel); uriin kottidest, voodianumaid ei saa uurimiseks võtta.
Veri on ka diagnostilise väärtusega (kultuuri uurimiseks, samuti ELISA, PCR), tserebrospinaalvedelik ja muud keha biovedelikud (pleura, intraartikulaarne, intraperitoneaalne - sealhulgas aspiratsiooni või drenaažiga kogutud); mõnel juhul (sõltuvalt paikse diagnoosist) on oluline sapp, väljaheited, nahaaluste abstsesside punktid, fistulite eritis (eriti sügavate mükooside korral). Isegi lihtsad diagnostilised testid nõuavad mitmete tingimuste ranget järgimist.
Praegu kasutatakse seenhaiguste diagnoosimiseks järgmisi meetodeid:
- mikroskoopia; põhineb haigustekitaja avastamisel uuritavas materjalis, sh. inimese kudedes;
- kultuuriuuringud, millele järgneb seenekultuuri mikroskoopiline uurimine;
- histoloogiline uuring (nt sügavate mükoosidega);
- immuun- ja molekulaarmeetodid.
Mikroskoopiline diagnostika
Mikroskoopiline diagnostika - sai võimalikuks spetsiaalse optilise ja hiljem elektroonilise mikroskoopilise tehnoloogia ilmumise perioodist, mis võimaldas üksikasjalikult uurida seente ultrastruktuuri. Samal ajal on diagnostilise väärtusega seente elementide tuvastamine - õhukesed hargnevad niidid, mis moodustavad seeneniidistiku (seeneniidistik), ümarad kehad (eosed; on seente paljunemisorgan).Mikroskoopiline diagnostika hõlmab värvimata (natiivsete) ja värvitud preparaatide uurimist. See meetod, nagu märgitud, on dermatoloogilises praktikas kõige levinum oma võrdleva lihtsuse ja madalate kulude tõttu, kuid teisest küljest ei ole see piisavalt tundlik, nõuab mõnel juhul korduvaid analüüse, kinnitust teiste meetoditega.
Nii et värvimata preparaate uurides võib lisaks seenelementidele leida epiteelirakke, vererakke, erinevaid väliskeskkonnast pärinevaid saasteaineid, mis raskendab mükoosi tekitaja leidmist, nõuab materjali täiendavat "ettevalmistamist" - niinimetatud. Selle "valgustumine" (leotamine), kontsentratsioon, lahjendus jne.
Sellegipoolest võimaldab natiivsete preparaatide otsene mikroskoopia kiiresti diagnoosida mükoosi, otsustada, millisele toitainekeskkonnale (vajadusel) materjali tuleks inokuleerida, arvatakse, et selle positiivne tulemus võib jääda ainsaks mükoosi laboratoorseks kinnituseks, millel on negatiivne vastus. kultuur (A. Yu Sergeev, Yu.V. Sergeev, 2003).
Narkootikumide "valgustamise" erinevate võimaluste hulgas on kõige tavalisem KOH või NaOH lisamine katsematerjalile (seda kasutatakse sagedamini seente avastamiseks nahasoomustes, juustes, aga ka mitmetes sügavate haiguste tekitajates). mükoosid rögas, biopsiad).
Purustatud ja klaasist slaidile leotamiseks viiakse 10-20% naatriumhüdroksiidi (või kaaliumi) lahus-1-3 tilka, 10-20 minutit; preparaat on kergelt pressitud katteklaasiga, kiiremaks leotamiseks - kuumutatakse leegil, kuni ilmuvad aurud. Vaatamine toimub kõigepealt väikese suurendusega, seejärel suure suurendusega (kuiv süsteem).
Nõuetekohaselt valmistatud preparaat, mida ei mõjuta tugevad mehaanilised, termilised ja keemilised mõjud, kujutab endast pilti homogeensest massist, mis koosneb epiteelirakkudest, seente elementide - seeneniidistiku kiudude ja eoste - rakulise lagunemise saadustest.
Vahetatud juuksed asetatakse 10-30% leelisega klaasist slaidile ja töödeldakse samamoodi, kuid pikemaks ajaks-20 minutist 3-4 tunnini. Rikkaliku pigmendisisaldusega on soovitatav eelvalgendada juuksed 5% vesinikperoksiidi lahusega. Nad peavad oluliseks seene elementide avastamist, samuti nende asukohta juuste suhtes.
Materjali ettevalmistamine patoloogiliselt muutunud küüntest (eelistatavalt peen pulber, mis on saadud fookuse sügavuselt kraapides) toimub samal viisil, kuid kasutades 30% naatriumhüdroksiidi, kohustuslikku ettevaatlikku kuumutamist leegil kergete aurude kätte ja kokkupuudet umbes 1 tund (mõnikord kuni mitu tundi). Leelisega töödeldud preparaate ei tohi nende "halvenemise" tõttu (reaktiivi kristalliseerumine, mikroskoopilise pildi abil määratud diagnostilise usaldusväärsuse vähenemine) hoida kauem kui 1,5-2 tundi.
KOH või NOOH asemel võite kasutada: a) KOH ja 15% DMSO segu segu lahust; b) fenooli (2 osa) ja kloraalhüdraadi (2 osa) ja piimhappe (1 osa) segu; c) valge kaltsofluoriid, millel on afiinsus higi ja tselluloosi suhtes; uurimiseks on vaja fluorestsentsmikroskoopi (sõltuvalt kasutatavast filtrist täheldatakse sinist või rohelist sära). Tserebrospinaalvedeliku uurimisel (krüptokoktoosi kahtlusega) kasutati sageli tindiga värvimist.
Kulaga V.V., Romanenko I.M., Afonin S.L., Kulaga S.M.
MÜKOOSI LABORATORIAALNE DIAGNOSTIKA
Materjali võtmine seente laboratoorseteks uuringuteks.
1.OST 42-21-2-854: tellimus nr 222/80, kuupäev 27.06.00
2. Varustus: pintsetid, mikroskoobi slaidid, käärid, rahvamehe lusikas.
4. Näidustused: seenhaigused.
5. Tüsistused: ei.
Hooldusruumi ettevalmistamine:
Lahenduste muutmine.
Valmistage ette:
-1% klooramiini lahus kaltsude jaoks
-3% klooramiinilahus - sidemete ja pintsettide desinfitseerimiseks
- pesulahus (156 ml. vesinikperoksiid + 5 g. pesuainepulber + 839 ml. destilleeritud vesi) - pintsettide töötlemiseks
- 6% vesinikperoksiidi lahus - kinnaste töötlemiseks.
Manipuleerimise algoritm.
Peate võtma pintsetid, klaasist slaidi, Folkmani lusika, käärid;
- kutsuge patsient riietusruumi;
- patsient istub toolil või diivanil;
- m / s seisab.
Täitmise tehnika:
Võtke pintsettidega nahakaalud ja juuksed kahjustusest;
- pange võetud materjal klaasist slaidile ja katke teise klaasliuguga.
- peske käsi seebi ja veega;
- saatke võetud materjal laborisse.
MATERJALI KOGUMINE
Võtke käärid ja klaasist slaidid;
- lõigake tükk küünte vabast servast kääridega;
- katta võetud materjal teise klaasliuguga;
Leota käärid ja pintsetid 3% formaliini lahuses.
Õige materjali kogumine kahjustatud küüntelt on eduka mikrobioloogilise uuringu võti. Materjali korjamisel ei haara nad alati elujõulisi seeni sisaldavaid küünte piirkondi. Loomulikult ei kasva elujõulised seened kultuuris ja nende liike ei saa kindlaks teha.
Võetava küünte pindala määratakse onühhomükoosi vormiga.
Niisiis, onühhomükoosi pindmise vormiga tuleks küüneplaadi pinnalt kraapida.
Kõige tavalisemal distaalsel subunguaalsel kujul paiknevad kõige elujõulisemad seened küüneplaadi all. Uurimiseks saadetav materjal peaks hõlmama mitte ainult küüneplaadi kärpimist, vaid ka kraapimist küünte voodilt, plaadi alt.
Lisaks tuleks jäädvustada muutmata küünte piirkonnad, kuna kõige aktiivsemad seened asuvad nende ja küünte kahjustatud piirkondade vahelisel piiril.
Proksimaalses subunguaalses vormis on materjali raske kätte saada. Nendel juhtudel võtavad nad mõnikord, eriti histoloogilise uuringu või diferentsiaaldiagnostika läbiviimiseks, küünte biopsia ja kasutavad aeg -ajalt külvikut.
Paronüühia korral tehakse kraapid proksimaalsest rullist ja sellest.
Bakteriaalse saastumise vältimiseks tuleb küünt enne proovi võtmist igal juhul töödelda etüülalkoholiga.
MIKROSKOOPILINE UURING
Seente patoloogilise materjali mikroskoopiline uurimine viiakse läbi natiivsetes ja värvilistes preparaatides.
Värvimata preparaatide valmistamiseks purustatakse saadud materjal skalpelli või lahkamisnõelaga ja asetatakse klaasist slaidi keskele. Seene elementide selgemaks tuvastamiseks on materjal valgustatud (leotatud). Selleks kasutavad nad mitmesuguseid aineid, kõige sagedamini söövitavat leelist (KOH, NaOH), mis lahustavad epidermise soomuseid, lima, mäda, selgitavad juuksepigmenti ja muudavad seened uurimiseks kättesaadavaks.
Naha või küünte pehmendatud kaaludele, mis asetatakse slaidi keskele, kantakse 1-3 tilka 20-30% KOH (NaOH) lahust. Leelisetilkades sisalduvat uuritavat materjali kuumutatakse ettevaatlikult alkohollambi leegi kohal, kuni tilga perifeerias ilmub leeliskristallide õrn valge äär. Ärge kuumutage keemiseni. Pärast kuumutamist kaetakse tilk katteklaasiga, vältides õhumullide sissepääsu.
RA Arabiyskiy ja GI Gorshkova (1995) soovitavad enne mikroskoopiat jätta nahakaalud ja juuksepreparaadid katteklaasiga kaetuks 5–10 minutiks ja küüneplaadid 30–40 minutiks.
Ravimite valgustamist saab läbi viia ilma kuumutamiseta, selleks jäetakse need 20% KOH lahusesse 30–60 minutiks või kasutatakse muid patoloogilise materjali valgustamise meetodeid: kloranoktofenool vastavalt Amanile; laktofenool; lahus, mis sisaldab 15% dimetüülsulfoksiidi ja KOH vees. Häid tulemusi saadakse pärast küüneplaatide valgustamist, mis asetatakse 24 tunniks 5% KOH lahusesse, sel juhul pole kuumutamist vaja.
Mikroskoopiline uuring viiakse läbi tavalisel laboratoorsel mikroskoobil ilma sukeldamiseta.
Mikroskoobi kondensaator tuleb langetada, diafragma kitsendada. Alguses leidub ravimit klaasil väikese suurendusega (40x), järgnev uuring viiakse läbi suurema suurendusega (100x);
preparaati uuritakse üksikasjalikult suurendusega 400x. Testi usaldusväärsuse suurendamiseks ja valepositiivsete tulemuste vältimiseks on vaja uurida mitmeid ravimeid.
Seente mikroskoopilise diagnoosimise vead võivad ilmneda nii ravimi valmistamise defektide kui ka laborandi kogemuste puudumise tõttu.
Tootmisvead on peamiselt seotud:
koos ravimi ülekuumenemisega, mis võib põhjustada leeliskristallide kadu, juuste hävimist ja peeneteralise lagunemise ilmnemist patoloogilises materjalis.
Pikade, isegi leeliste kristallide lineaarne paigutus meenutab väga palju septilise seeneniidistiku niite isegi puhtal klaasil ilma patoloogilise materjalita.
Diferentsiaaldiagnostika tunnused on kristallide erakordne ühtlus, nende klaasjas läbipaistvus, servade mitmekülgsus ja lahutamatu ühenduse puudumine ühe ja teise elemendi vahel. Kahtlastel juhtudel soovitatakse preparaadile lisada tilgad veidi soojendatud destilleeritud vett, mis kiiresti leeliskristalle lahustavad.
Seene elementidega võib segi ajada järgmist:
- rasvatilgad,
- õhumullid,
- puuvillane riide niit
- ja nn "mosaiik seen".
Naha lipiidid, rakkude rasvane lagunemine ja keratohüaliini terad, eriti õige kujuga, võivad sarnaneda seene üksikute eostega. Kuid nende elementide seente olemuse vastu räägib mitmesugune kuju ja, mis kõige tähtsam, suurus, moodustiste (vakuoolid, kestad) sisemise struktuuri puudumine. Lipiidid võivad ravimisse sattuda ka siis, kui nad võtavad ebapiisavalt puhastatud kahjustusest patoloogilist materjali.
Õhumullid võivad sarnaneda pärmitaoliste rakkude eostega, kuid erinevalt viimastest on need ümbritsetud tiheda tumeda membraaniga ja isegi kõige väiksemad õhumullid on alati suuremad kui seene rakud.
Sokkide, riiete jms kangast niidid asuvad tavaliselt patoloogilisest materjalist eraldi, need on alati suuremad kui hüüfid, jämedamad ja mitte septilised.
"Mosaiik seen" on artefakt, mis tekib kristalliseerumise ajal (võib -olla kolesterooli lagunemise tõttu). Sellel on võrgusilma või silmuste kuju, mille piirjooned vastavad sarvjas kaalude piiridele, erinevalt seeneniidistiku niitidest ei ületa see kunagi epidermise rakkude seinu.
Mõnes laboris tehakse mikroskoopiliseks uurimiseks mõeldud preparaatide selgitamine 15–30% KOH lahusega, millele on lisatud 5–10% Parkeri kaubanduslikust tumesinisest tintist (Parkeri Superchrome Blue -Black Ink).
Selle värviga muutuvad hüüfid ja eosed siniseks.
Mikroskoopia näitab niitjaid seenhüüfe või lootustandvaid rakke (joonis 1).
Seega annab mikroskoopia järelduse ainult nakkuse seente olemuse kohta, kuid mitte seene tekitaja tüübi kohta.
Muidugi sõltub mikroskoopilise uuringu tõhusus laboritöötaja kvalifikatsioonist.
Riis. 1. T. rubrumi kahjustatud küünte kraapide mikroskoopia. Seene hüüfid on nähtavad.
KULTUURIUURINGUD
Materjal inokuleeritakse standardsele Sabouraud söötmele, sageli antibiootikumidega. Dermatofüütide infektsioonide diagnoosimisel on tavaks lisada Sabouraudi söötmesse tsükloheksimiidi, mis pärsib õhust tulevate saastavate seente kasvu. Müügil on müügil olevad söötmed, mis sisaldavad antibiootikume ja tsükloheksimiidi lisandeid. Tuleb meeles pidada, et paljud mitte-dermatofüütilised hallitusseened ja mõned Candida liigid ei kasva tsükloheksimiidiga söötmel, seetõttu on soovitatav inokuleerida Sabouraud söötmesse tsükloheksimiidiga ja söötmesse ilma selleta. Liikide identifitseerimine viiakse tavaliselt läbi kasvanud kultuuri mikroskoopilise uurimise või selektiivse söötme uuesti külvamisega (joonis 2-15).
Riis. 2. Mõjutatud küüntelt isoleeritud T. rubrum seene kultuur. Saadud Sabouraudi söötmel (vasakul) ja maisiagaril (paremal).
Riis. 3. Seene kultuur T. mentagrophytes var. kahjustatud küüntest eraldatud interdigitale. Saadud Saburo keskkonnast.
Riis. 4. Seene Candida albicans kultuur. Saadud Saburo keskkonnast.
Riis. 5. Mõjutatud küüntest eraldatud seene Torulopsis glabrata kultuur. Saadud Saburo keskkonnast.
Riis. 6. Seene kultuur Ulocladium sp., Isoleeritud kahjustatud küüntest.
Riis. 7. Acremonium sp. Mikromorfoloogia, mis on isoleeritud kahjustatud küüntest.
Riis. 8. Fusarium sp. Mikromorfoloogia. Eraldatud kahjustatud küüntest.
Riis. 9. Scopulariopsis sp. Mikromorfoloogia, mis on isoleeritud kahjustatud küüntest.
Riis. 10. Mõjutatud küüntest eraldatud Candida albicans'i mikromorfoloogia.
Riis. 11. Altemaria sp. Mikromorfoloogia, mis on isoleeritud kahjustatud küüntest.
Riis. 12. Aspergillus sp. Mikromorfoloogia, mis on isoleeritud kahjustatud küüntest.
Riis. 13. Mõjutatud küüntelt isoleeritud Ulocladium sp mikromorfoloogia.
Riis. 14. Chaetomium sp. Mikromorfoloogia, mis on isoleeritud kahjustatud küüntest.
Joonis 15. Dermatofüütide (vasakpoolne kultuur T rubrum, parem - T mentagrophytes var. Mterdigitale) tuvastamiseks etteantud toitainepaneel.
Vasakult paremale: Sabouraudi sööde, Baxteri sööde, Christenseni sööde, maisiagar
Tuleb märkida, et mõned hallitusseened, sealhulgas dermatofüüdid, kasvavad kultuuris aeglaselt, 2-3 nädala jooksul.
Isegi kui järgitakse kõiki materjali kogumise reegleid, on hea laboriseadmete ja töötajate kõrge kvalifikatsiooni korral kultuuriuuringute positiivsete tulemuste arv väga väike.
Väliskirjanduse andmetel ei ületa positiivsete uuringute osakaal 50.
Parimate kodumaiste laborite positiivsete tulemuste protsent ulatub vaevalt 30 -ni.
Seega ei ole kahel kolmel onühhomükoosi juhtumil võimalik kindlaks teha selle etioloogiat.
LUMINESCENT UURIMINE
Aastal 1925 avastasid Margaret ja Deveze, et teatud dermatofüütidest mõjutatud karvad annavad Byda filtri kaudu läbitud ultraviolettkiirte mõjul iseloomuliku sära. Byda klaas koosneb baariumsulfaadist, sisaldab umbes 9% nikkeloksiidi; see edastab kiirte pikkusega 365 nm. Ultraviolettkiirguse allikana saab kasutada erinevaid seadmeid. Hõõgumise olemust ei ole täpselt kindlaks tehtud. Juuksed säravad ka pärast seene surma ja pärast katseid fluorestseeruvat materjali kuuma vee või külma naatriumbromiidi lahusega ekstraheerida. Hõõgumise intensiivsus ja iseloom sõltuvad lahuse pH -st. Arvatakse, et fluorestseeruv aine ilmneb seente ja kasvavate juuste vahelise interaktsiooni protsessis.
Heledus ultraviolettkiirtes, läbides puidu filtri, on tüüpiline ainult juustele, mida mõjutavad perekonna Microsporum seened (M. canis, M. audouinii, M. ferrugineum, M. deformium, mõnikord M. gypseum ja M. nanum), samuti Trichophyton schonleinii ... Juuksed, mida mõjutavad mikrospoorid, eriti M. canis ja M. audouinii, annavad kõige säravama sära; T. schonleinii kahjustatud karvadel on tuhm rohekas fluorestsents.
Hõõgumist täheldatakse ainult juustest, mis on seenest täielikult mõjutatud. See ei pruugi olla värsketes kahjustustes. Sellistel juhtudel tuleks juuksed epileerida kõige aktiivsemast servapiirkonnast ja sära võib leida juuste juureosast.
Luminestsentsmeetodit saab kasutada nii diagnoosimiseks kui ka ravi efektiivsuse jälgimiseks üksikutel patsientidel ja epidemioloogilistes fookustes. Kompaktsed mobiilseadmed on mugavad kontaktisikute uurimiseks koolides, lasteaedades jne.
Luminestsentsuuring tuleb teha pimendatud ruumis, kahjustused tuleb eelnevalt puhastada koorikutest, salvijääkidest jne. Luminestsentsmeetodit saab kasutada pityriasis samblike diagnoosimiseks, eriti kui kahjustused on lokaliseeritud peanahal. Selle haiguse kahjustused on punakaskollase või pruuni säraga. See sära ei ole aga rangelt spetsiifiline, kuna seda võib täheldada kõõma esinemisel peanahal ja isegi tervetel inimestel näo ja ülakeha karvanääpsude suu piirkonnas. Luminestsentsmeetodi abil tuvastatud kahjustatud karvad tuleb mikroskoopiliselt uurida.
IMMUNOLOOGILINE JA BIOLOOGILINE UURIMINE
Keha spetsiifilise ümberkorraldamise ja seenhaiguste seroloogilise diagnoosimise tuvastamiseks kasutatakse immunoloogilisi uurimismeetodeid. Spetsiifiliste antikehade tuvastamiseks proovi seerumis viiakse läbi järgmised seroloogilised reaktsioonid: aglutinatsioon, sadestumine, komplemendi sidumine, immunofluorestsents vastavate antigeenidega.
Allergiliste nahatestide abil tuvastatakse patsiendi keha allergiline seisund. Allergeene kantakse armistunud nahale Pirquet'i järgi või hõõrudes nahka Moro järgi, intradermaalselt Mantouxi järgi ja ka naha sisse süstides. Nende testide abil tuvastatakse nii vahetu kui ka hilinenud tüüpi allergilised reaktsioonid, mis võimaldab hinnata humoraalse ja rakulise immuunsuse seisundit.
Lümfotsüütide spetsiifilise sensibiliseerimise tuvastamiseks kasutatakse basofiilide degranulatsiooni, aglomeratsiooni ja muutumisreaktsioone, lööklaine transformatsiooni testi, makrofaagide migratsiooni pärssimist jne.
Seroloogiliste ja allergiliste reaktsioonide tulemuste võrdlemine on kasulik nii mükooside diagnoosimisel kui ka prognoosimisel.
Bioloogiline meetod. Seda kasutatakse sügavate ja eriti ohtlike mükooside laboratoorseks diagnoosimiseks. Põhineb loomade nakatumisel patoloogilise materjaliga patsiendilt või uuritud seene kultuurist. Teostatakse spetsiaalsetes laborites.
HISTOLOOGILINE UURIMINE
Dermatofüütide põhjustatud naha mükooside histoloogia
Kahjustuste patomorfoloogilised muutused on põhjustatud seente sissetoomisest epidermise, juuste ja küünte sarvkihti ning naha põletikulisest reaktsioonist, mis võib olla äge, alaäge või krooniline. Diagnoosi võib lugeda kehtestatud ainult siis, kui histoloogilistes preparaatides leitakse seente elemente. Selleks kasutatakse erinevaid histoloogilisi plekke, kõige informatiivsem on perioodiline happereaktsioon (PAS), mis võimaldab tuvastada polüsahhariide, mis esinevad enamiku dermatofüütide rakuseina tselluloosis ja kitiinis (Shifu plekk ja selle modifikatsioonid). Võite kasutada ka sulfatsioonireaktsioone ja histoloogiliste lõikude immutamist hõbedaga [Khmelnitsky OK, 1973; Lewer W. F. ja Schaumburg-Lewerl., 1983].
Epidermise sarvkihis olevaid seeni avastatakse isegi spetsiaalsete plekkide kasutamisel väikestes kogustes seeneniidistiku niitide ja eoste kujul. Harvadel juhtudel, kui kahjustustes on palju seeni, võib neid leida hemotoksüliin-eosiiniga värvitud sektsioonidest, sarvkihis õrnade basofiilsete struktuuride kujul.
Põletikulised muutused epidermis võivad olla erinevad: alates ogarakkude kergest intra- ja ekstratsellulaarsest tursest kuni raske spongioosini. Spongioos areneb tavaliselt jalgade ja käte mükooside düshidrootiliste variantidega, kliiniliselt märgitakse nendel juhtudel vesiikulid. Seda reaktsiooni põhjustavad tavaliselt T. mentagrophytes var. interdigitale. Mõnikord on epidermis väljendunud hüperkeratoos, mida kõige sagedamini täheldatakse T. rubrumi põhjustatud mükoosi korral.
Dermise histoloogilised muutused ei ole spetsiifilised ja vastavad ägedale, alaägedale ja kroonilisele põletikule.
T. rubrum'i põhjustatud sileda naha mükoosi korral leitakse mõnikord seeni velluse juustes ja karvanääpsudes. Folliikulite ümber areneb põletikuline reaktsioon, mis seente sisenemise tõttu pärisnahasse võib omandada granulomatoosse iseloomu. Infiltraadi keskosa võib sellistel juhtudel läbida mädanemise ja nekroosi ning perifeerne osa koosneb lümfotsüütidest, histotsüütidest, epiteelidest ja mitmetuumalistest hiiglasrakkudest, mille sees leidub mõnikord seente eoseid. Eoste suurused ulatuvad siin 6 mikronini, juuksed ei ületa tavaliselt 2 mikronit.
Peanaha mükooside ning habeme ja vuntside kasvupiirkonna infiltratiivse-suppuratiivse vormi korral leidub seente elemente karvanääpsus, juuste sees ja ümber. Juustes määratakse need vahetult keratiniseerumise alguse tsooni kohal (ligikaudu 30 mikroni tasemel). Dermis täheldatakse erineva intensiivsusega põletikulist reaktsiooni, mis on kõige märgatavam kerion Celsii korral. Ägeda mädase reaktsiooni korral täheldatakse infiltraadi koostises suurt hulka neutrofiilseid leukotsüüte, seente elemendid võivad sel juhul täielikult kaduda. Protsessi kroonilise käigus võib infiltraat omandada granulomatoosse iseloomu, sellesse ilmuvad mitmetuumalised hiidrakud. Diagnoosi kinnitamiseks, kui infiltraadis pole seeni, võib kasutada immunofluorestseeruvaid värvimismeetodeid. Nendel eesmärkidel kasutatakse fluorestseiiniga märgistatud antiseerumit T. mentagrophytes suhtes, mis võimaldab tuvastada seeneantigeene juustes ja perifollikulaarses infiltraadis.
Infiltratiivse-mädase nahareaktsiooni teke peanaha mükoosis (kerion Celsii) ning seente M. canis, T. tonsurans ja T. verrucosum põhjustatud habeme ja vuntside kasvupiirkonnas on immunoloogilise ilming. reaktsioon. Seda tõendab:
1. Kahjustuste kalduvus spontaansele taandumisele.
2. Seenelementide puudumine väga väljendunud põletikulise reaktsiooniga nahaosas koos mükoosiga, mille on põhjustanud T. verrucosum (faviforme) ja T. tonsurans.
3. Pidev positiivne reaktsioon vastuseks trichophytin'i intradermaalsele manustamisele zoofiilsete trichophytins (näiteks T. tonsurans) põhjustatud mükoosi infiltratiivse -suppuratiivse vormi korral ja negatiivne - samade T. tonsurans'i põhjustatud pindmiste mükooside korral.
Favusi korral leidub epidermise sarvkihis suur hulk seeneniidistikku ja üksikuid eoseid. Scutulat esindavad eksudaat, epidermise parakeratootilised rakud, põletikulise infiltraadi rakud, samuti seeneniidistiku niidid ja seente eosed, mis asuvad peamiselt scutula perifeerses tsoonis. Haiguse aktiivses staadiumis täheldatakse degeneratiivsete karvanääpsude ümber olevas dermises märgatavat põletikulist infiltraati, mis sisaldab mitmetuumalisi hiiglasi ja plasmarakke. Vanade kahjustuste korral puuduvad juuksed ja rasunäärmed, esineb fibroosi nähtusi.
Pärmitaoliste seente põhjustatud naha ja limaskestade mükooside histoloogia
Naha ja limaskestade kandidoosiga leitakse perekonna Candida seeni epidermise sarvkihist või limaskesta epiteeli pindmistest kihtidest. Seeneelemente on tavaliselt vähe, need on PAS-reaktsiooni või grammiga hästi värvitud; esitatakse septilise hargneva seeneniidistiku hõõgniitide kujul, läbimõõduga 2-4 mikronit või munajaste eostega, mille läbimõõt on 3-5 mikronit. Seene mütseelivormi tuvastamine on diagnostilise väärtusega.
Naha ja limaskestade kroonilise granulomatoosse kandidoosi histoloogilises uuringus leidub seente elemente valdavalt ka epidermise sarvkihis või limaskesta epiteeli ülemistes osades, kuid mõnikord kipitavas kihis. juustes ja pärisnahas. Samuti on märgatav hüperkeratoos ja papillomatoos; pärisnahas - tihe põletikuline infiltraat, mis koosneb lümfoidrakkudest, neutrofiilidest, plasmast ja mitmetuumalistest hiidrakkudest. Infiltraat võib levida nahaalusesse rasvkoesse.
Pityriasis versicolor'iga leitakse epidermise sarvkihist suur hulk seente elemente õrnade basofiilsete struktuuride kujul, mis on selgelt nähtavad isegi siis, kui preparaadid on värvitud hemotoksüliin-eosiiniga. Seeni esindavad nii hõõgniidid kui ka eosed.
Pityriasis samblike follikulaarse vormi korral koguneb sarvjas mass ja põletikulise infiltraadi rakud karvanääpsude laienenud suhu. Põletikulist infiltratsiooni täheldatakse ka folliikulite ümber. PAS-reaktsiooni korral leitakse seene sfäärilised või ovaalsed eosed, läbimõõduga 2-4 mikronit, juuksefolliikulite suu sees ja mõnikord perifollikulaarses infiltraadis. Mütseeli ei avastata kunagi.
Naha pigmentatsiooni halvenemine pityriasis versicolor'iga patsientidel on tingitud seente Pityrosporum võimest toota ainet, mis pärsib epidermise pigmentatsiooni. Hüpopigmenteerunud piirkondade nahabiopsiate elektronmikroskoopiline uurimine näitas, et melanotsüütides tekivad väga väikesed melanosoomid, mis ei suuda keratinotsüütidesse tungida. Teisest küljest on naha hüperpigmenteeritud piirkondades melanosoomid suured ja sisaldavad suures koguses melaniini.
Seenhaiguste diagnoosimise aluseks on naha ja küünte kahjustatud piirkondadest valmistatud preparaatide mikroskoopiline uurimine. Kuid mikroskoopiline pilt erinevat tüüpi mükoosides on sarnane: nahasoomustel ja küüntel on nähtavad seente eosed ja hargnenud vaheseinte seeneniidistik läbimõõduga 4-7 mikronit. Seetõttu ei saa seente perekonda ja liiki enamikul juhtudel kindlaks määrata naha skaalas oleva mikroskoopilise pildi või küüntelt kraapimise teel. Patogeeni tuvastamiseks viiakse inokuleerimine läbi toitainekeskkonda, kõige sagedamini Sabouraudi söötmele.
Epidermofütoos. Mõjutatud on naha sarvkiht, kõige sagedamini jalad ja alajäsemete küüned. Juuksed ei mõjuta kunagi. Küüntele ilmuvad kollased laigud või triibud, seejärel areneb hüperkeratoos (küünte paksenemine), nende deformatsioon ja hävitamine. Taldade ja interdigitaalsete voltide lamellkoorimine, jalgade nahale ilmub punetus. Mõnikord moodustuvad mullid, mähkmelööve, praod. Haigusega kaasneb sügelus, põletustunne, valulikkus.
Kraapide, kaalude, põiekorkide mikroskoopilisel uurimisel avastatakse 3-5 mm läbimõõduga seeneniidistiku väheseptilised kiud, osa hõõgniite laguneb ümarateks ja ristkülikukujulisteks eosteks.
Trichophytosis. See on naha ja selle lisandite seenhaigus, millel on eriline kalduvus juukseid mõjutada [lat. trihhosid juuksed + phyton seen]. Peanahale ilmub palju kahjustusi läbimõõduga umbes 1,5 cm. Nahk neil on ödeemiline, hüperemiline, kaetud kaaludega. Juuksed kahjustustes katkevad 2-3 mm kõrgusel naha pinnast, sellest ka nimi "sõrmuss".
Mikroskoopiline uurimine näitab Trichophyton seente iseloomulikku joont - nende eoste paigutus ahelatesse. Sõltuvalt seente omadustest on:
Endothrix (pindmise trikhofütoosi põhjustaja). Seened kasvavad juuste sees, muutes dramaatiliselt nende struktuuri. Kogu juuksed on täidetud (täidisega) paralleelsete kettide ridadega, mis koosnevad suurtest ümaratest või ruudukujulistest eostest;
Ectothrix (sügava trikhofütoosi põhjustaja), mille puhul juuksed on ümbritsetud väikeste või suurte eoste ümbrisega, mis on paigutatud piki telge ahelatesse.
Favus on kärn. Mõjutatud on juuksed ja nahk, harvem küüned. Juuksed muutuvad õhukesteks, tuhmideks, pulbrilisteks, nagu vanad parukad, kuid ei lagune. Nahakahjustusi iseloomustab kõrgete servadega kollakashallide koorikute ilmumine, nagu alustassidel.
Mikroskoopiline uurimine näitab kahjustatud juuste sees õhumulle.
Microsporia. Mõjutatud on nahk ja juuksed. Kahjustuste korral katkevad juuksed 6-8 mm kõrgusel naha pinnast. Ülejäänud kändude ümber on näha valkjad ümbrised.
Mõjutatud juuste mikroskoopiline uurimine näitab eoseid, mis paiknevad juuste ümber ja sees mosaiikmustris (juhuslikult). Need on väga väikesed (1-3 mm), sellest ka haiguse nimi. Juustele iseloomulik fluorestseeruv sära aitab diagnoosida mikrospoori.
Mikroskoopiline uurimine näitab ümardatud lootustandvaid rakke, sageli viinamarjakobara kujul.
Sügavad (hallituse) mükoosid. Neid esineb sagedamini kutsehaigustena antibiootikumitehastes, põllumajandustöötajatel, kes puutuvad kokku hallitanud tera, heina, kompostiga jne. Penitsillioosi (harjaseene) tekitaja on krobeline, lai, septiline seeneniidistik, mis lõpeb harjaga. Mucoroosi tekitajal on lai mitteseptiline seeneniidistik, mis lõpeb eostega. Aspergilloosi (leukeemiavorm) tekitajat leidub sageli hallitanud puuviljadel ja leival. Sellel on jäme vaheseinte seeneniidistik, mis lõpeb laienemisega, millest eostega niidid meenutavad veevoogudega kastekannu.
Aktinomükoos. Põhjustatud erinevat tüüpi kiirgava seenega. Seda iseloomustab tihedate infiltraatide moodustumine nahal, limaskestadel ja siseorganites, mis on altid mädanemisele ja fistulite väljanägemisele. Fistuli väljavoolus oleval silmal on nähtavad iseloomuliku särava servaga väikesed kollased terad - aktinomütseedid. Mikroskoopia ettevalmistused valmistatakse fistulite ja röga eraldumisest.
Väikese suurenduse korral on kiirgava seene droosidel ümmarguse kujuga kollakad moodustised, millel on kerge amorfne keskosa ja servades tumedam värv. Suure suurendusega määratakse mütseeli hõõgniidid druseni keskel ja kolvikujulised tursed perifeerias. Grami järgi värvimisel on seeneniidistiku niidid G +ja koonused G-.
Invasiivsete mükooside täpne diagnoos ei ole lihtne. Seda ei seleta mitte ainult raskused seenekultuuri saamisel, vaid ka uurimistulemuste tõlgendamine, kuna nii pärmi- kui seeneniidistiku seened võivad koloniseerida limaskesti ja saastada uuritavaid proove. Sellega seoses põhineb invasiivsete mükooside diagnoos integreeritud lähenemisviisil, mis hõlmab mitte ainult mükoloogiliste (kultuuriliste) ja seroloogiliste (seeneantigeeni määramine) uuringute tulemusi, vaid ka seeninfektsiooni kliinilisi sümptomeid, täiendavate uurimismeetodite andmeid. (arvutatud või magnetresonantstomograafia, ultraheli).
Euroopa-Ameerika ühisturühm invasiivsete mükooside uurimiseks immuunpuudulikkusega patsientidel on välja töötatud invasiivsete mükooside diagnoosimise kriteeriumid. Neid esitleti 2001. aastal rahvusvahelisel antimikroobsete ainete ja keemiaravi konverentsil (ICAAC, Chicago) ning 2002. aastal trükisena. Määratud on tõestatud, tõenäolise ja võimaliku invasiivse mükoosi kriteeriumid, mida soovitatakse kasutada kliinilistes ja epidemioloogilistes uuringutes.
Niitjate seente põhjustatud invasiivne mükoos: seeneniidistiku avastamine biopsiates või aspiraatides histoloogilise või tsütoloogilise uuringu käigus või kultuuri eraldamine steriilsest fookusest aseptilistes tingimustes saadud proovidest, mis vastavalt kliiniliste ja radioloogiliste uuringute tulemustele on seotud nakkusega, välja arvatud uriini ja limaskestade uuringud.
Pärmi põhjustatud invasiivne mükoos pärmirakkude (perekonna Candida seened võivad moodustada pseudomükeeliumi või tõelise seeneniidistiku) avastamine biopsiates või aspiraatides, välja arvatud limaskestadelt võetud proovid, või kultuuri eraldamine aseptilistes tingimustes saadud proovidest tavaliselt steriilsest fookusest, vastavalt infektsiooniga seotud kliiniliste ja radioloogiliste uuringute tulemustele, välja arvatud uriini-, siinus- ja limaskestade proovid, või mikroskoopia ja spetsiifilise värvimisega (tinditilgas, mukikarmiiniga värvimine) pärmirakkude või positiivse antigeeni Cryptococcus abil spp. tserebrospinaalvedelikus.
Niitidest põhjustatud seenhaigus: seente, välja arvatud Aspergillus spp., verekultuuride eraldamine. ja Penicillium spp., sealhulgas Penicillium marneffei, kombinatsioonis isoleeritud patogeeniga kooskõlas oleva nakkusprotsessi kliiniliste sümptomitega.
Pärmseentest tingitud fungaemia: Candida või teiste pärmseente verekultuuride eraldamine patsientidel, kellel on selle patogeeniga seotud nakkuse kliinilised tunnused.
Invasiivsete mükooside diagnostiliste uuringute kompleks
| Uuritud biomaterjal | Märge, kasutatud meedia, väärtus |
| Veri |
Näidustused:
püsiv palavik (4-5 päeva või rohkem) laia toimespektriga antibiootikumravi ajal; palaviku teine "laine" antibiootikumravi taustal Vere kogumine veenist viaalidesse aeroobsete bakterite jaoks * või seente valikulises söötmes, korratakse (2-3 korda päevas 1-tunnise intervalliga) Diagnostiline asjakohasus: pärmi eraldamine, hoolikas tõlgendamine niitjate seente isoleerimisel, välja arvatud Fusarium spp. |
| Venoosne kateeter |
Näidustused:
pärmi eraldamine verest Kesk- või perifeerne veenikateeter eemaldatakse kõikidel juhtudel, kui pärm eritub verest Mükoloogiliseks uurimiseks kasutatakse aseptiliselt eemaldatud kateetri 5-6 cm pikkust distaalset segmenti. Uuring viiakse läbi poolkvantitatiivsel (Maki meetod) või kvantitatiivsel meetodil Sabouraudi söötmel Diagnostiline asjakohasus:
|
| Ülemiste hingamisteede, röga, hingetoru, bronhide, bronhoalveolaarse loputusvedeliku loputamine |
Näidustused:
niitjate seente või Cryptococcus neoformans'i põhjustatud mükooside kahtlus; pikaajaline palavik laia toimespektriga antibiootikumravi ajal ja neutropeenia Proovide mikroskoopia valge kaltsofluoriga (seeneniidistiku või pseudomütseeli avastamine); külv Saburo kolmapäeval; Aspergilluse antigeeni määramine bronhoalveolaarses loputusvedelikus invasiivsele aspergilloosile iseloomulike kolde olemasolu korral kopsudes Diagnostiline asjakohasus: Niitjate seente või Cryptococcus neoformans isoleerimine |
| Tserebrospinaalvedelik |
Näidustused:
meningiidi sümptomid; fookuse (fookuste) tuvastamine ajus arvutatud või magnetresonantstomograafia abil; Palaviku ja neutropeeniaga seotud "aju" sümptomid Mikroskoopia valge kaltsofluoriga, tinditilgas; Aspergilluse, Cryptococcuse antigeeni määramine; külv kolmapäevaks Saburo Diagnostiline asjakohasus:
|
| Biopsiad, aspiraadid, kõhukelmevedelik, pleura vedelik |
Näidustused:
invasiivse mükoosi kliinilised ja / või radioloogilised tunnused; palavik laia toimespektriga antibiootikumidega ravi ajal. Mikroskoopia valge kaltsofluoriga, plaatimine Sabouraud söötmel Diagnostiline asjakohasus:
|
Tõenäoline invasiivne mükoos diagnoositud järgmiste kriteeriumide kombinatsiooniga:
üks tunnus mikrobioloogiliste kriteeriumide kategooriast;
üks märk kategooriast "märkimisväärne" või kaks nakkusprotsessi "vähem oluliste" kliiniliste sümptomite rühmast.
Võimalik invasiivne mükoos diagnoositud järgmiste kriteeriumide kombinatsiooni alusel:
vähemalt ühe invasiivse mükoosi arengut esile kutsuva riskiteguri olemasolu;
üks märk mikrobioloogiliste kriteeriumide kategooriast või üks märk nakkusprotsessi kliiniliste sümptomite "oluliste" (kaks "vähemoluliste" rühmast) kategooriast.
Kontseptsioon " võimalik invasiivne mükoos»Ei soovitata kasutada kliinilistes uuringutes, mis uurivad seenevastaste ravimite efektiivsust. Seda terminit saate kasutada empiirilise seenevastase ravi analüüsis, epidemioloogilistes uuringutes ja farmakoökonoomika uurimises.
Kell mükoloogilised uuringud Steriilsed aspiraadid või biopsiad võtavad arvesse mitte ainult seenekultuuri isoleerimist, vaid ka seeneniidistiku või pseudomütseeli avastamist mikroskoopia abil. Histoloogilistes preparaatides on Aspergillust raske eristada Fusarium spp. Diferentsiaaldiagnostika jaoks tuleks läbi viia immunohistokeemiline uuring Aspergillus'e vastaste antikehadega.
Pärmseente eraldamine verest vähemalt ühes uuringus kuulub "tõestatud" invasiivse mükoosi kategooriasse ja on absoluutne näidustus süsteemsete antimükootikumide määramiseks neutropeeniaga patsientidel. Pärmseente verest avastamise sagedus on madal, isegi levinud kandidoosi korral on see 35-50%.
Läbiviimine korduvad verekultuurid suurendab positiivsete tulemuste saamise tõenäosust.
Muu tõlgendamine tulemuseks on niitjate seente avastamine veres. Niitjate seente isoleerimise kõrge sagedus on iseloomulik Fusarium spp. ja on 40-60%. Aspergillust leitakse harva ja seda peetakse enamikul juhtudel saastatuks, välja arvatud Aspergillus terreus.
Esiletõstmine Aspergillus terreus hemoblastoosiga patsientide verest võib viidata tõelisele aspergilloomile ja nakkuse kliiniliste sümptomite esinemisel on see antimükootikumide määramise aluseks.
Invasiivse mükoosi kriteeriumid
| Indeks | Kriteeriumid |
| Invasiivse mükoosi (makroorganism) algust soodustavad tegurid | Neutropeenia (< 0,5*109/л в течение 10 дней)
Püsiv palavik üle 96 tunni laia toimespektriga antibiootikumravi korral Kehatemperatuur üle 38 ° C või alla 36 ° C ja mis tahes järgmised eelsoodumustunnused: pikaajaline neutropeenia (rohkem kui 10 päeva) viimase 60 päeva jooksul, intensiivne immunosupressiivne ravi viimase 30 päeva jooksul, tõestatud või tõenäoline invasiivne mükoos eelmisel perioodi neutropeenia või AIDS GVHD sümptomid, peamiselt raske haiguse (II aste) või kroonilise haiguse ulatusliku juhtumi juhtumid Glükokortikoidide pikaajaline (rohkem kui 3 nädalat) kasutamine viimase 60 päeva jooksul |
| Mikrobioloogilised tunnused | Niitjate seente (sealhulgas Aspergillus spp., Fusaruim spp., Sceclosporium spp. Ja zygomycetes) kultuuri ja Cryptococcus neqformans kultuuri eraldamine rögast või bronhoalveolaarsest loputusvedelikust Kultuuri või tsütoloogilise uuringu (otsemikroskoopia) positiivsed tulemused ninakõrvalkoobaste aspiraatidest pärit niitjate seente avastamiseks Niitjate seente või Cryptococcus neoformans'i tuvastamine tsütoloogia / otsemikroskoopia abil röga või bronhoalveolaarse loputusvedeliku abil Aspergilluse antigeen positiivne bronhoalveolaarse loputusvedeliku, tserebrospinaalvedeliku ja vereproovides (vähemalt kaks) Krüptokoki positiivne antigeen vereproovides Tuvastamine tsütoloogilise uuringu või seente elementide otsese mikroskoopia abil tavaliselt steriilsetes vedelike proovides (näiteks Cryptococcus spp. Tserebrospinaalvedelikus) Kaks positiivset tulemust uuringutes pärmseente kultuuri avastamiseks uriinis, kus puudub kusepõie kateeter Candida kristallid uriinis uriinikateetri puudumisel Candida spp. Isoleerimine verekultuuridest |
|
Kliinilised tunnused
Alumised hingamisteed |
Tuleb seostada kohaga, kust võetakse proove mikrobioloogiliseks uurimiseks Üks järgmistest uut tüüpi kopsuinfiltraatidest CT -le: halo sümptom, poolkuu sümptom, süvend koos konsolideeritud piirkondadega * Alumiste hingamisteede infektsiooni sümptomid (köha, valu rindkeres, hemoptüüs, hingeldus), pleura hõõrdumise mürin, mis tahes uus infiltraat, mis ei kuulu kõrge raskusastme sümptomite hulka; pleuraefusioon |
| Ülemised hingamisteed Märgid suure tähtsusega Väiksema tähtsusega märgid |
Invasiivse siinusinfektsiooni radioloogilised tunnused (seina erosioon või nakkuse levik külgnevatele struktuuridele, kolju luude ulatuslik hävitamine) Nohu, ninakinnisus, nina limaskesta haavandid, ninaverejooks, periorbitaalne turse, ülemise lõualuu valu, must nekrootiline haavand või kõva suulae perforatsioon |
| kesknärvisüsteem Märgid suure tähtsusega Väiksema tähtsusega märgid |
Kahtlustatud kesknärvisüsteemi nakkuse röntgenikiirgusnähud (mastoidiit või muu parageeniaalne fookus, ekstraduraalne emfüseem, mitu kahjustust ajus või seljaajus) Fokaalsed neuroloogilised sümptomid ja nähud, sealhulgas fokaalsed krambid, hemiparees; teadvushäired, meningeaalsed sümptomid, tserebrospinaalvedeliku ja selle rakulise koostise biokeemilise koostise rikkumine (muude patogeenide puudumisel, vastavalt kultuurile ja mikroskoopiale, kasvajarakkude puudumisel) |
Kell avastamine veres või muud pärmi seente steriilsed biosubstraadid, on niitjate (hallitusseente) isoleerimisel hädavajalik identifitseerida liigid ja määrata tundlikkus seenevastaste ravimite suhtes - ainult identifitseerimine liigi suhtes, tundlikkust ei määrata.
Kliinilises harjutada niitjate seente tundlikkust ei uurita, kuna selliste seente tundlikkus antimükootikumide suhtes on ebatäiuslik. Lisaks on ainult üks uuring näidanud korrelatsiooni Aspergillus spp. ja invasiivse aspergilloosi ravi tulemused hemoblastoosiga patsientidel. Ükski pärast seda tehtud uuringutest ei ole andnud sarnaseid tulemusi.
Hiljuti hakkasid ilmuma üksikud teated A. fumigatus seente omandatud resistentsuse tekkimise kohta itrakonasooli, vorikonasooli suhtes.
Seente identifitseerimine liikide kaupa, eriti steriilsetest lookustest saadud, on esiteks vajalik antimükootilise aine valimiseks ja piisava seenevastase ravi jaoks. Seega on Candida krusei flukonasooli suhtes resistentsed ja vähem tundlikud kui teised pärmiliigid amfoteritsiin B suhtes; Aspergillus terreus, Scedosporium apiospermum (Pseudallescheria boydii), Trichosporon beigelii, Scopulariopsis spp. vastupidav amfoteritsiin B -le; Mucorales on resistentsed itrakonasooli, vorikonasooli suhtes, Candida glabrata on annusest sõltuv tundlikkus flukonasooli suhtes ja seda tüüpi seente, isegi tundlike tüvede isoleerimisel tuleb flukonasooli annust suurendada (täiskasvanutele määratakse 400 mg asemel 800 mg); Candida lusitaniae on resistentsed amfoteritsiin B suhtes.
Seente identifitseerimine liikide kaupa See on oluline ka haiglas epidemioloogilise analüüsi läbiviimiseks - haiguspuhangute tekitajate ja võimaluse korral nakkusallika määramiseks. Kirjeldatakse selliste haruldaste seente nagu C. lusitaniae, C. krusei, C. lipolytica põhjustatud nakkuspuhanguid.
Põhineb seente liikide identifitseerimine võib eeldada invasiivset mükoosi või limaskestade seente koloniseerumist. Näiteks põhjustab Aspergillus niger ägeda leukeemiaga patsientidel invasiivset aspergilloosi oluliselt vähem kui Aspergillus fumigatus. Aspergillus niger isoleerimist bronhoalveolaarsest loputusvedelikust peetakse kõige sagedamini hingamisteede koloniseerimiseks ja röga saastamiseks õhust ning see nõuab täiendavaid uuringuid invasiivse aspergilloosi diagnoosi kinnitamiseks.
Põhineb niitjate seente väljutamine röga, bronhoalveolaarse vedeliku, ninakõrvalkoobaste aspiraadi põhjal võib eeldada ainult invasiivset mükoosi, arvestamata seda kategooriaga "tõestatud". Siiski tuleb alati kaaluda Aspergilluse avastamist rögas, eriti Aspergillus fumigatus või Aspergillus flavus neutropeeniaga patsientidel, allogeense luuüdi saajatel. See nõuab korduvat mükoloogilist uurimist ja kopsude kompuutertomograafiat. Niisiis, neutropeenia korral on invasiivse aspergilloosi avastamise tõenäosus positiivse Aspergillus spp. Kultuuri korral tõenäoline. rögas on 80%.
Esiletõstmine Cryptococcus neoformans immuunpuudulikkusega patsientidel hingamisteedest (pesemine, pesemine) on diagnostiliselt oluline. Kui immuunpuudulikkusega patsientide pärmseente tuvastamine hingamisteedest saadud hingamisteedest (loputus hingetorust, bronhidest, bronhoalveolaarsest pesust) ei ole kohustuslik, siis on vajalik nende proovide skriinimine Cryptococcus neoformans'i avastamiseks.
Candida avastamine uriinis neutropeenia ja palavikuga patsientidel peetakse seda tavaliselt levinud kandidaalse infektsiooni ilminguks.
Õigel ajal diagnostika invasiivne kasutas edukalt kaubanduslikku testi seente Aspergillus spp. spetsiifilise antigeeni ringluse tuvastamiseks. galaktomanna (seenrakkude seina vees lahustuv polüsahhariidkomponent).
Galactomann saab määrata kahe meetodiga: lateksi aglutinatsiooni meetodiga (Pastorex Aspergillus, BioRAD) ja ensüümidega seotud immunosorbentanalüüsiga (Platelia Aspergillus, BioRAD).
Eeliseks ensüümi immuunanalüüs on madalam tundlikkuslävi galaktomanni taseme määramiseks veres - 1 ng / ml või vähem ja lateksi aglutinatsiooni abil - 15 ng / ml. Galaktomanismi määratlus veres (vähemalt kahes proovis), tserebrospinaalvedelikus, bronhoalveolaarses pesus on diagnostilise väärtusega. Ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsi tundlikkus on umbes 90%, spetsiifilisus 90–99%; allogeensete luuüdi retsipientide puhul on need näitajad vastavalt madalamad ja võrdsed vastavalt 60–70%ja 80–90%. seenevastaste ravimite profülaktiline kasutamine (antimükootikumid vähendavad galaktomanni läve taset).
40% juhtudest avastamine galaktomanism veres edestab see kopsu arvutiuuringuga määratud invasiivse aspergilloosi ilminguid ja 70% -l infektsiooni kliinilistest sümptomitest.
Antigeeni tuvastamise testi diagnostiline väärtus Aspergillus juhul, kui uuring viiakse läbi korduvalt. Aspergillus antigeeni määramine veres tuleb läbi viia palaviku korral laia toimespektriga antibiootikumravi ajal neutropeeniaga patsientidel 2 korda nädalas; kopsupõletikuga, mis tekib või püsib antibiootikumravi taustal; kui kopsukoes leitakse koldeid (kompuutertomograafia).
Peamised meetodid mükooside etioloogilises laboratoorses diagnoosimisel on siiani klassikalised meetodid, sealhulgas materjali mikroskoopia, patogeeni puhta kultuuri eraldamine ja selle hilisem tuvastamine. Immunoloogilised diagnostikameetodid on teisejärgulised. Neid kasutatakse kõige olulisemate patogeenide tuvastamiseks: patogeensed dimorfsed seened, samuti krüptokoktoosi, kandidoosi ja aspergilloosi tekitajad. Genoindikatsioonimeetodeid (polümeraasi ahelreaktsioon) rakendatakse samuti spetsiifilisuse puudumise tõttu piiratud ulatuses, kuid neid kasutatakse peamiselt sügavate ja oportunistlike mükooside diagnoosimisel.
Materjal mükooside laboratoorse diagnoosimise uurimiseks võib sõltuvalt haiguse vormist olla: nahk ja selle lisandid (juuksed, küüned), haavade ja fistulite eritumine, röga, veri, tserebrospinaalvedelik ja uriin, kudede biopsiad. Patoloogilise materjali võtmise täpsuse määrab suuresti edasiste laboriuuringute tõhusus. Nahakahjustuste korral valitakse materjal kõige sagedamini kraapides või kleeplindiga (peamiselt pindmiste vormide jaoks) enne töötlemist värsketest, kuid täielikult välja kujunenud kolletest perifeerias, kus asuvad kõige elujõulisemad haigustekitajad.
Dermatofüütide seente avastamisel on juuksed äärmiselt informatiivne materjal, kuna juuste kahjustuse iseloom võimaldab patogeeni tuvastada. Mõnel juhul aitab Wood -lambi kasutamine määrata kahjustuse fookust. Mõjutatud juuksed koos kaaludega eemaldatakse epileerimispintsettidega. Kroonilise musta punkti trihhofütoosi korral eemaldatakse juuksed nahalt lahkava nõelaga.
Küüned võetakse mööda kõiki kihte, lõigates terava skalpelli või kääridega. Proovide võtmine hambaharjaga on tõhusam. Kandidoosikahjustuste korral valitakse materjal küünevaltsilt kraapides. Valitud materjal tarnitakse laborisse tumedates paberkottides, et vältida kuivamist ja saastumist kõrvalise mikroflooraga. Mäda sisaldav materjal tarnitakse steriilsete bakteritrükkide või Petri tassidega. Röga kogutakse steriilsesse mahutisse. Röga uurimine tuleb läbi viia hiljemalt 2 tundi pärast kogumist. Kui uuringuperioodi pikendatakse, tuleb proove hoida külmkapis temperatuuril + 4 ° C, vastasel juhul võivad esineda pärmrakkude pseudomütseelsete vormide ilmnemisega seotud diagnostilised vead.
Veri ja tserebrospinaalvedelik kogutakse aseptiliselt. Vere külvamine toimub Sabouraudi vedelas keskkonnas. Vereproovide saastumise välistamiseks kontrollitakse neid uuesti. Tserebrospinaalvedelik tsentrifuugitakse ning setet kasutatakse mikroskoopiaks ja inokuleerimiseks.
Uriin kogutakse hommikul steriilsesse anumasse, samal ajal kui on vaja vältida materjali saastumist perineumi naha mikroflooraga. Uriinikultuur viiakse läbi kvantitatiivse kultuurimeetodi abil.
Mükooside diagnoosimisel kasutatakse preparaate nii looduslikust materjalist kui ka värvitud. Värvimata preparaate uurides selgitatakse (leotatakse) tihe materjal eelnevalt 10–30% KOH lahusega (võib kasutada dimetüülsulfoksiidi lahuseid) ja seejärel mikroskoopitakse “purustatud tilga” meetodil. Kontrasti lisamiseks värvitakse preparaadid metüleensinise vesilahusega.
Fikseeritud määrdeainete värvimine toimub mitmel viisil: Grami järgi metüleensinine, vastavalt Romanovski - Giemsa. Viimane meetod võimaldab teil näha väikeseid pärmirakke ja fagotsütoosi etappe. Krüptokokkide jaoks kasutage tindiplekki, Southgate'i mukikarmiini plekki. Näiteks melaniini sisaldavad seened (tumedat värvi) Cladophialophora bandana, värvitud Mass - Fontana (melaniini värv, mis on osa rakuseinast). Fluorestseeruvaid seerumeid kasutatakse sügavate mükooside, dermatofütoosi patogeenide, perekonna seente diagnoosimisel Candida.
Patogeeni puhta kultuuri eraldamine võimaldab kindlaks teha seene üldise ja liigilise kuuluvuse, uurida selle omadusi ja tundlikkust antimikroobsete ravimite suhtes. Seente isoleerimiseks ja identifitseerimiseks kasutatakse Sabouraudi tihedaid ja vedelaid söötmeid, virde-agarit. Need keskkonnad tagavad enamiku patogeensete ja oportunistlike seente kasvu. Lisaks stimuleerib Sabouraud keskkond (joonis 8.2) seente pigmentatsiooniprotsesse, mis on identifitseerimiseks olulised.
Saastavate bakterite kasvu pärssimiseks lisatakse söötmele antibiootikume: klooramfenikooli, streptomütsiini, penitsilliini, tetratsükliini. Eriskummaliste patogeensete seente isoleerimiseks kasutatakse vere ja aju südameekstraktiga rikastatud söötmeid. Seente kasvatamiseks ja identifitseerimiseks kasutatakse spetsiaalseid söötmeid: Czapeki sööde - koniidide moodustamiseks hallitusseente tuvastamisel, kartuli (kartuli -porgandi) agar, riisi agar - kasvutüüpide tuvastamiseks ja klamüdospooride saamiseks perekonna seente tuvastamisel. Candida, porgandi (köögivilja) agar - tüüpiliste seenekultuuride kolooniate saamiseks Trichophyton schonleini, Kashkini sööde - pigmenti moodustavate seente isoleerimiseks. Diferentsiaaldiagnostika keskkondi kasutatakse ka näiteks C tuvastamiseks. albicans - kromogeenne sööde või sööde, mis võimaldab teil määrata seene fosfolipaasi aktiivsust.
Seente inkubatsiooniaeg on mitu päeva kuni 1 kuu või rohkem. Kui kahtlustatakse patogeenseid dimorfseid seeni, kasvatatakse negatiivse vastuse saamiseks 8 nädalat.
Inokuleerimine viiakse läbi söötmetesse, mis valatakse katseklaasidesse, viaalidesse ja Petri tassidesse. Materjali inokuleerimine dermatofüütide seentele viiakse samaaegselt mitmele tuubile koos söötmega. Materjalid, millel on hallitusseened (röga), inokuleeritakse 3 punkti ja inkubeeritakse temperatuuril 28 ja 37 ° C. Materjali proovide võtmise ajal saastumise puudumise probleemi lahendamiseks viiakse labori ruumides ja osakondades, kus patsiendid asuvad, hallitusseente sisalduse kontrollimiseks õhukultuurid.
Mükoloogilises laboris seente kasvatamisel järgitakse turvameetmeid, mis on sarnased bakterioloogiliste laborite omadega. Allergia vältimiseks teevad töötajad vormide ja mükotoksiinidega tööd kastidega ruumides marli sidemetes või kapuutsiga lauakarpides. Töö II patogeensuse rühma kuuluvate kultuuridega (patogeensed dimorfsed seened) on võimalik ainult spetsialiseeritud laborites.
Seeneliikide identifitseerimine toimub kultuuriliste, morfoloogiliste ja muude tunnuste kompleksi alusel. Esimene hõlmab koloonia morfoloogiat, selle värvi ja suurust, kui seda kasvatatakse spetsiaalsel söötmel, serva ja keskosa struktuuri, pinna olemust, reproduktiivorganite olemasolu ja olemust, teine - mikroskoopilise seeneniidistiku struktuur, suguelundite struktuur, kuju ja suurus - konidiofoorid, koniidid, klamüdospoor, artrospoor jne.
Seened moodustavad tahketele toitainekeskkondadele erinevat tüüpi kolooniaid. G. Venteri instituudi (USA) teadlased, võttes arvesse seente võimet keskkonda pigmendiaineid eraldada, lõid toitainekeskkonda "jõulupuu" (joonis 8.3).
Riis. 8.3. Seente "jõulupuu" (ülaosas: Talaromyces stipitatus; puit Aspergillus nidulans; kaunistused: Penicillium marneffei; känd: Aspergillus terreus)
Pärmide (pärmitaoliste seente) tuvastamisel on kultuuride ensümaatilised ja assimilatsioonivõimed väga olulised. Praegu kasutatakse tavalisi seeni - inimeste ja loomade haiguste põhjustajaid - kaubanduslike katsesüsteemide tuvastamiseks: BBL Mycotube, API 20C bio Merieux jne.
Laadimine ...