L'ensemble de réactifs « Milieu nutritif pour l'isolement des gonocoques, sec » (gélose GNK) est destiné à des fins microbiologiques. Il est utilisé pour isoler les gonocoques lors de l'étude du matériel infecté, ainsi que comme milieu de culture et de stockage des gonocoques dans le cadre de travaux de recherche.
Le kit de réactifs est disponible sous la forme d'un ensemble de deux composants lyophilisés :

bases du milieu nutritif - lyophilisat d'un volume de 100 ml dans une bouteille - 1 pièce;
additif à la base du milieu nutritif - lyophilisat d'un volume de 24 ml dans un flacon - 1 pc.

Composé: base du milieu nutritif - extrait de viande de lapin, peptone enzymatique sèche à usage bactériologique, chlorure de sodium, autolysat de levure de boulanger, acide orotique, gélose microbiologique. Additif à la base du milieu nutritif - lactosérum liquide normal pour milieux nutritifs bactériologiques, autolysat de levure de boulanger, aminopeptide pour milieux nutritifs microbiologiques.

Préparation: 100 ml d'eau purifiée stérile sont ajoutés au flacon avec la base du milieu nutritif et conservés pendant (30 ± 5) minutes, puis placés dans un bain-marie bouillant jusqu'à ce que la gélose soit complètement fondue, après fusion la gélose est conservée dans un bain-marie pendant 5 minutes maximum. Ajouter 24 ml d'eau purifiée stérile dans le flacon avec l'ajout de milieu nutritif et laisser reposer (20 ± 2) minutes jusqu'à dissolution complète à une température de 20-25°C. L'additif dissous est transféré dans une base dissoute refroidie à une température de (50 ± 2)°C. Le milieu est agité, 3 ml sont versés dans des tubes à essai stériles et fauchés. 0,5 ml d'une solution stérile de chlorure de sodium à 0,9% est ajouté à chaque tube à essai pour humidifier le milieu. Le milieu peut également être versé 10 à 15 ml dans des boîtes de Pétri stériles. Les tubes à essai ou les boîtes contenant du milieu nutritif sont placés pendant (24 ± 1) heures dans un thermostat à une température de (37 ± 1) °C pour contrôler la stérilité. Le milieu nutritif préparé est conservé à une température de (6 ± 2) °C pendant 7 jours maximum.

Principe de fonctionnement: l'ensemble de réactifs doit assurer la croissance de chaque souche test de Neisseria gonorrhoeae "Loshakov" et Neisseria gonorrhoeae "Denisov" lors de l'inoculation de 0,5 ml de suspension microbienne à partir d'une dilution de 10"5 après 24 à 48 heures d'incubation à une température de ( 37 ± 1) °C sous forme de colonies incolores transparentes ou translucides dont la taille varie de 0,5 à 2 mm avec des bords lisses.

Réalisation d'une analyse: Les résultats de l'inoculation sont enregistrés après 24, 48 et 72 heures d'incubation à une température de (37 ± 1) ° C. Lors de l'inoculation des sécrétions des organes génito-urinaires de patients atteints de gonorrhée, la croissance du gonocoque sur le milieu nutritif doit être observé après 24 à 72 heures. S'il n'y a pas de croissance de gonocoques, conservez les cultures dans un thermostat jusqu'à 7 jours.

Conditionnement : Pots en polyéthylène de 0,25 kg pour préparer 3,6 litres de milieu.

Durée de conservation - 1 an.

Le prix est indiqué TTC par 1 kg.

Les gonocoques sont en forme de haricot, disposés en forme de diplocoques, entourés d'une microcapsule, n'ont pas de flagelles et ne forment pas de spores, semblables aux méningocoques. La paroi cellulaire possède une membrane externe dont les protéines sont divisées en trois groupes selon leur signification fonctionnelle. Les gonocoques se caractérisent par la présence de pili, qui diffèrent les uns des autres par leurs propriétés antigéniques (16 variantes antigéniques). Les gonocoques sont cultivés sur des milieux nutritifs contenant des protéines natives (sérum sanguin, liquide d'ascite). Ils poussent mieux avec 3 à 5 % de CO2. Des colonies transparentes aux bords lisses se forment sur les ascitagarus. Parmi les glucides, seul le glucose est fermenté, la catalase et la cytochrome oxydase se forment - des enzymes typiques de Neisseria.

Antigènes

La structure antigénique des gonocoques est variable. Cela est dû à la présence de nombreuses variantes antigéniques de pili, qui se forment au cours du développement de l'infection.

Pathogénicité et pathogenèse

Les gonocoques s'attachent à l'épithélium cylindrique de l'urètre, à la partie vaginale du col de l'utérus, au rectum, à la conjonctive de l'œil, ainsi qu'aux spermatozoïdes et aux protozoaires (Trichomonas, amibe). L'adhésion est due aux pili et aux protéines de la membrane externe de la paroi cellulaire. Une caractéristique des gonocoques est leur capacité à pénétrer dans les leucocytes et à s'y multiplier. La partie lipooligosaccharide de la paroi cellulaire a un effet toxique. Les polysaccharides capsulaires inhibent la phagocytose. Se connectant aux villosités de l'épithélium cylindrique de la muqueuse urétrale et chez la femme au canal endocervical, les gonocoques pénètrent dans les cellules avec la participation de protéines de la membrane externe de la paroi cellulaire. Cela conduit au développement d'une urétrite aiguë, d'une cervicite et de lésions du col de l'utérus, des appendices (trompes, ovaires) chez la femme, des vésicules séminales et de la prostate chez l'homme. Avec une localisation extragénitale, les gonocoques peuvent endommager le rectum et les amygdales, ainsi que provoquer une blénorrhée (conjonctivite) chez les nouveau-nés. L'infection se produit lors du passage du canal génital d'une mère atteinte de gonorrhée.

Immunité

Avec la gonorrhée, une réponse immunitaire humorale se produit. Cependant, les anticorps antibactériens qui en résultent n’ont pas de propriétés protectrices. Au cours de la maladie, des IgA se forment, ce qui supprime l'attachement des pili de l'agent pathogène aux cellules de la muqueuse urétrale. Cependant, ils ne sont pas capables de protéger la muqueuse contre une infection ultérieure par d'autres générations de gonocoques, associée à une modification de leur structure antigénique. Cela conduit à des réinfections et des rechutes, ainsi qu’à une maladie chronique.

Infections gonococciques

L'agent causal de la gonorrhée et de la blénorrhée N.gonorrhoeae (classé provisoirement comme gonocoque) appartient à la famille des Neisseriaceae, genre Neisseria. Dans les frottis des sécrétions des patients, les gonocoques ont la forme de grains de café, sont à Gram négatif et sont localisés par paires à la fois à l'intérieur des leucocytes (phagocytose incomplète) et à l'extérieur des cellules. Selon leurs caractéristiques morphologiques, ils ressemblent beaucoup aux méningocoques. Les gonocoques sont caractérisés par un polymorphisme : il existe des cellules petites et grandes, rarement en forme de bâtonnet. Ils sont très pointilleux sur les milieux nutritifs. Ils se développent mieux sur des milieux contenant du sang, du sérum et du liquide ascitique. Les gonocoques contiennent des antigènes protéiques et polysaccharidiques, selon lesquels ils sont divisés en 16 sérotypes, mais ils ne sont pas encore déterminés dans les laboratoires bactériologiques de routine. Pour le diagnostic microbiologique des infections gonococciques, des méthodes bactérioscopiques, bactériologiques, sérologiques et allergiques sont utilisées.

Prendre du matériel pour la recherche

Afin de réaliser des diagnostics bactériologiques et bactérioscopiques dignes et de bonne qualité, il est important de prélever correctement le matériel clinique. En règle générale, elle doit être effectuée par un médecin. Chez l'homme, les sécrétions de l'urètre, des canaux paraurétraux, du rectum sont examinées et, si cela est indiqué, le matériel de l'oropharynx, ainsi que les sécrétions de la prostate après son massage. Vous pouvez également examiner les sédiments et les «fils» d'urine, mais les gonocoques y sont détectés beaucoup moins fréquemment. Avant de prélever du matériel de l'urètre, le patient ne doit pas uriner pendant 4 à 5 heures et ne pas utiliser de médicaments antimicrobiens ni de solutions désinfectantes. L'ouverture externe de l'urètre est d'abord essuyée avec un coton-tige stérile imbibé d'une solution de chlorure de sodium à 0,85 %, puis avec un coton-tige sec. Les frottis ne sont pas fabriqués à partir de fumier, qui s'écoule librement, mais à partir de matériaux prélevés en grattant la muqueuse urétrale avec une anse bactériologique ou une cuillère spéciale Volkmann. En cas d'écoulement mineur, il est nécessaire d'effectuer un massage urétral préalable. Chez la femme, le matériel provient de l'urètre, des voies paraurétrales, du col de l'utérus, du rectum et, si indiqué, de l'oropharynx. Tout d'abord, le vagin est nettoyé des sécrétions, l'urètre est massé et le matériau est retiré par grattage avec une anse bactériologique ou une cuillère Volkmann. Le col est d'abord essuyé avec un coton-tige stérile pour retirer le bouchon muqueux. L'écoulement du canal cervical est prélevé avec une anse bactériologique ou une pince à épiler. Le matériel du rectum distal est prélevé à l'aide d'une cuillère de Volkmann à l'aveugle, c'est-à-dire sans aucune préparation du patient, ou à l'aide d'un recoscope ou d'un spéculum rectal. Dans ce cas, le matériel étudié est prélevé directement sur le site visible de la lésion. Avec la gonorrhée oropharyngée, le mucus Ils sont prélevés dans l'oropharynx avec des cotons-tiges stériles sur des supports spéciaux en fil d'acier. Pour diagnostiquer la lénorrhée, la sécrétion conjonctivale est éliminée à l'aide d'une anse bactériologique. Dans de rares cas, la gonorrhée se complique d'une gonosepsie, d'une endocardite ou d'une arthrite. Ensuite, le matériau pour juslidzhenya est du sang ou du liquide synovial. Compte tenu de la grande sensibilité des gonocoques aux fluctuations de température, les matériaux étudiés sont livrés au laboratoire dans des thermos spéciaux ou des sachets avec coussin chauffant.

Examen bactérioscopique

L'examen bactérioscopique est la méthode de diagnostic en laboratoire de la gonorrhée et de la blénorrhée la plus courante, bien que moins sensible, par rapport à l'isolement de cultures réelles. Cela est particulièrement vrai pour l'évolution chronique de la maladie, lorsque le matériel de test contient une petite quantité de gonocoques. Cependant, avec une collecte correcte du matériel, des examens répétés des patients, l'utilisation de méthodes de provocation et une évaluation qualifiée des frottis, l'examen bactérioscopique permet assez souvent de diagnostiquer rapidement et correctement la maladie. Deux préparations de frottis minces et uniformes sont réalisées à partir de la matière étudiée. L’un est coloré au bleu de méthylène, le second est coloré selon la méthode Gram. En l’absence de bleu de méthylène, un frottis peut être coloré avec une solution aqueuse à 1 % de violet cristallin ou une solution à 0,5 % de vert brillant pendant 1 minute. Une conclusion sur la présence de gonocoques est tirée sur la base de leurs propriétés : couleur Gram négatif, structure diplocoque, forme des grains de café, localisation à l'intérieur des leucocytes. Sous l'influence d'antibiotiques et d'autres médicaments de chimiothérapie, ainsi que dans la gonorrhée chronique, la morphologie et la couleur des gonocoques peut changer. Les cellules individuelles acquièrent différentes formes et tailles (les formes dites d'Asch). De plus, le matériel de test peut contenir des coques à Gram négatif similaires aux gonocoques du genre Veillonella. Cela limite dans une certaine mesure la valeur diagnostique de la méthode de microscopie primaire. Les résultats les meilleurs et les plus fiables sont obtenus par la méthode d'immunofluorescence. De fines frottis provenant des sécrétions du patient sont fixés dans la flamme du brûleur. Du sérum antigonococcique marqué à l'isothiocyanate de fluorescéine leur est appliqué pendant 1 heure à 35°C en chambre humide. Après cela, les frottis sont lavés deux fois avec une solution tampon, tamponnés avec du glycérol, appliqués et recouverts de lamelles. Lorsque les gonocoques interagissent avec des anticorps marqués, une lueur caractéristique autour des cellules bactériennes est visible au microscope fluorescent.

Recherche bactériologique

Les indications pour isoler des cultures pures de gonocoques sont des résultats de bactérioscopie négatifs répétés, la présence de micro-organismes suspects de gonocoques, mais non identifiés morphologiquement, ainsi que pour établir de manière fiable la guérison de la maladie. Il est très important de placer immédiatement les récoltes dans le thermostat. S'il est impossible de réaliser des cultures sur le site de collecte du matériel, vous pouvez accrocher un coton-tige dans un tube à essai avec le milieu de transport de Stewart, ce qui assure la préservation de la viabilité des gonocoques lors de la livraison au laboratoire. effectué selon le schéma standard dans l'un des milieux nutritifs spéciaux en éprouvettes ou boîtes de Pétri (CDS, Bailey, gélose au sang ou au sérum, milieu nutritif sec de l'entreprise de Kharkov "Biolek" pour la production de préparations bactériennes et médicinales). Pour la culture diagnostique des gonocoques dans de nombreux pays, la gélose « chocolat » est également utilisée. Les meilleurs milieux sont ceux à base de gélose à la viande de lapin ou de cœurs de bovins frais. L'ajout de 20 unités/ml de polymyxine et de 2 µg/ml de lincomycine augmente considérablement la fréquence d'inoculation des gonocoques, car ces médicaments inhibent la croissance d'autres bactéries. Avant le semis, tous les supports sont chauffés dans un thermostat pendant 15 à 20 minutes. Les boîtes et les tubes à essai contenant les cultures sont placés dans des dessiccateurs, où une atmosphère de 20 % de CO2 est créée. Les colonies se développent généralement en 18 à 24 heures, mais une croissance tardive est également possible. Ensuite, les cultures sont conservées dans un thermostat (dans un dessiccateur !) pendant 8 jours maximum, en vérifiant quotidiennement l'apparence de la croissance. Les colonies de gonocoques cultivées ont une forme ronde et légèrement convexe, des bords lisses, une surface brillante et une muqueuse. cohérence. Ils sont transparents, comme des gouttes de rosée, presque incolores, bien que des variantes blanchâtres puissent également apparaître. Les colonies résultantes sont examinées macroscopiquement et microscopiquement. Dans les frottis, les gonocoques sont localisés par paires, tétrades et grappes. Les colonies typiques sont repiquées sur des géloses au sérum inclinées pour isoler une culture pure. L'identification finale est réalisée en tenant compte des propriétés morphologiques, culturelles, enzymatiques et antigéniques. Biochimiquement, les gonocoques sont peu actifs. Sur des milieux de lactosérum contenant 1,5% de glucides divers, ils décomposent uniquement le glucose, mais pas le maltose et le saccharose. L'activité oxydase des cultures isolées est déterminée en appliquant une solution à 1% de diméthylparaphénylènediamine sur les colonies (après microscopie). Les colonies oxydase-positives deviennent d'abord rouges, puis noires. La différenciation des gonocoques des autres espèces du genre Neisseria revêt une importance particulière dans le diagnostic de la gonorrhée oropharyngée. Comme on le sait, sur la membrane muqueuse des amygdales, de la bouche et du nasopharynx, il y a toujours un grand nombre de Neisseria à Gram négatif, représentants de la microflore humaine normale. Les méthodes fiables d'identification des gonocoques sont les réactions d'immunofluorescence, de latex et de coagulation, ainsi que la détermination des propriétés enzymatiques. Il est impératif de réaliser une détermination qualitative de la sensibilité ou de la résistance des micro-organismes aux antibiotiques par la méthode de diffusion sur gélose à l'aide de disques.Afin d'augmenter la fréquence de détection de gonocoques dans les frottis en microscopie primaire et un isolement plus fiable des cultures pures, notamment en dans les cas d'évolution lente et chronique de la maladie, des méthodes pour provoquer la gonorrhée sont utilisées, c'est-à-dire une exacerbation artificielle du processus pathologique, à la suite de laquelle un plus grand nombre de gonocoques apparaissent dans les sécrétions. Les principales de ces méthodes sont : a) chimique - instillation d'une solution à 0,5 % de nitrate d'argent dans l'urètre chez l'homme, lubrification du canal cervical avec une solution à 2-5 % de nitrate d'argent ; b) mécanique - insertion d'un bougie dans l'urètre pendant 10 minutes, ou urétroscopie antérieure ; c) biologique - injection intramusculaire de gonovaccine à raison de 500 millions de corps microbiens ou pyrogènes 200 MTD ; d) nutritionnelle - consommation d'aliments salés et épicés ; e) thermique - réchauffement de l'urètre. organes génitaux avec un courant inductothermique ; f) physiologique - réalisation de frottis pendant la menstruation. Il est encore préférable de combiner plusieurs méthodes de provocation, par exemple chimique, nutritionnelle et biologique. Récemment, la réaction en chaîne par polymérase a été utilisée pour identifier de manière plus fiable l'agent causal de la gonorrhée. Il permet d'identifier l'agent pathogène en cas de gonorrhée chronique, lorsque l'examen bactérioscopique et bactériologique ne donne pas de résultats positifs.

Diagnostic sérologique

Le diagnostic sérologique de la gonorrhée est effectué relativement rarement, principalement dans son évolution chronique, lorsque les études bactérioscopiques et bactériologiques ne donnent pas de résultats positifs. Dans les conditions modernes, des tests immunoenzymatiques, des réactions RNGA et Bordet-Gengou (BRS) sont réalisés. Les antigènes de ces réactions sont : le vaccin gonococcique polyvalent tué par la chaleur, le vaccin inactivé par ultrasons, les fractions protéiques et polysaccharidiques des gonocoques, ainsi que l'antigène pyridine. ELISA et RNGA sont des réactions sérologiques hautement spécifiques et fiables. Par rapport au passé, RSK a quelque peu perdu son rôle. Il n'a aucune valeur pratique dans le diagnostic de la gonorrhée aiguë, puisqu'il est traité avant la formation d'une quantité importante d'anticorps. Elle n’est généralement pas adaptée pour établir la fiabilité d’une guérison. La réaction de Bordet-Gengou est importante dans le sérodiagnostic de la gonorrhée chronique, notamment dans ses formes compliquées (gonosepsie, métrite, arthrite, prostatite, etc.). La valeur diagnostique des tests d'allergie est quelque peu dévalorisée par le fait qu'ils sont positifs pour de nombreuses des années après la gonorrhée. Pour les mettre en place, 0,1 ml de vaccin gonococcique frais (100 millions de cellules microbiennes dans 1 ml) est injecté par voie intradermique. Après 24 heures, une hyperémie est observée, parfois accompagnée d'un gonflement au centre.

Traitement et prévention

Pour la chimiothérapie de la gonorrhée, des antibiotiques sont utilisés : bêta-lactamines (pénicillines, céphalosporines) et autres antibiotiques. La prévention vaccinale de la gonorrhée n'est pas réalisée en raison du manque de vaccins efficaces. Pour prévenir la blénorrhée, tous les nouveau-nés reçoivent une solution de l'un des antibiotiques répertoriés instillée sur la conjonctive de l'œil.

Neisseria gonorrhoeae appartient à la famille des Neisseriaceae, genre Neisseria. Les gonocoques ont été découverts par Neisser en 1879 et toute la famille porte son nom.

Morphologie. Les gonocoques sont des diplocoques constitués de deux coques en forme de haricot concaves l'une par rapport à l'autre (rappelant les grains de café). La taille des gonocoques est de 1,2 à 1,3 × 0,7 à 0,8 microns. Elles sont polymorphes ; à côté des plus grandes, il existe de très petites bactéries en forme de L de forme irrégulière. Les gonocoques sont immobiles et ne sporulent pas. Une substance en forme de capsule se trouve dans le matériel pathologique (pus). Gram négatif. Sous l'influence de drogues et d'autres substances, ils évoluent rapidement : des formes à Gram positif apparaissent. Dans le matériel pathologique, ils sont localisés au niveau intracellulaire (dans un leucocyte), mais peuvent se trouver à l'extérieur de la cellule. On les retrouve sous forme de coques individuelles (voir Fig. 4).

Cultivation. Les gonocoques sont des aérobies. Très exigeant en milieux nutritifs. Ils poussent sur des milieux contenant des protéines natives (humaines) - sang, sérum, à une température de 37°C et un pH de 7,2-7,4. Le support doit être fraîchement préparé et humide. Le semis doit être effectué immédiatement après la prise du matériel. Sur milieu sérique, les gonocoques forment de petites colonies de 1 à 2 mm, transparentes, brillantes aux bords lisses, ressemblant à des gouttes de rosée. Il n'y a pas d'hémolyse dans le milieu sanguin. Dans le bouillon de lactosérum, ils donnent une légère turbidité et un film qui se dépose au fond du tube à essai. Si la croissance est mauvaise après 24 heures, les cultures sont laissées dans le thermostat pendant le deuxième jour.

Propriétés enzymatiques. Les propriétés saccharolytiques sont faiblement exprimées. Les gonocoques ne décomposent qu'un seul sucre, le glucose, produisant de l'acide. Ils n'ont pas de propriétés protéolytiques.

Formation de toxines. La paroi cellulaire des gonocoques contient une substance toxique - le lipopolysaccharide (peu étudié).

Structure antigénique. La structure antigénique est hétérogène et change facilement sous l'influence de facteurs environnementaux. Il n'existe pas de division généralement acceptée des gonocoques en sérovars et sérotypes.

Résistance aux facteurs environnementaux. Dans le milieu extérieur, les gonocoques ne sont pas très stables. A une température de 56-60° C, ils meurent. A une température de 40°C, leur viabilité diminue fortement. Les basses températures et le séchage les détruisent rapidement. Mais ils restent dans le pus jusqu'à 24 heures. Les solutions désinfectantes - solution de phénol à 1%, chlorure mercurique 1: 1000 tuent les gonocoques en quelques minutes. Les gonocoques sont particulièrement sensibles aux sels d'argent : une solution à 1 % de nitrate d'argent les tue immédiatement. Les rayons UV les tuent en quelques minutes.

Sensibilité animale. Les animaux ne sont pas sensibles aux gonocoques. Cependant, l’injection intrapéritonéale de toxine gonococcique à des souris blanches provoque leur mort.

Sources d'infection. Une personne atteinte de gonorrhée.

Voies de transmission. Contact domestique (sexuel), moins souvent via des objets contaminés (serviette, éponges, etc.).

Maladies chez l'homme. Gonorrhée et blénorrhée.

Pathogénèse. L’hôte naturel des gonocoques est une personne malade. Les gonocoques pénètrent à travers les muqueuses de l'urètre (chez la femme, l'urètre et le col de l'utérus). Le facteur de pathogénicité des gonocoques est la présence de pili qui, se connectant aux microvillosités de l'épithélium cylindrique, facilitent la pénétration du gonocoque dans la cellule épithéliale, provoquant un processus inflammatoire aigu dans la membrane muqueuse.

Cliniquement, la gonorrhée se manifeste par des douleurs lors de la miction, un écoulement de pus de l'urètre et du vagin. La maladie est aiguë, mais elle devient parfois chronique. Les gonocoques peuvent provoquer une conjonctivite gonorrhéique - blénorrhée (inflammation purulente de la membrane muqueuse des yeux chez le nouveau-né). Les gonocoques pénètrent rarement de l'urètre vers d'autres organes, mais ils peuvent parfois provoquer de l'arthrite, une endocardite, etc.

Immunité. Il n’existe pas de résistance naturelle aux gonocoques. La maladie transférée ne crée pas non plus d'immunité. La phagocytose observée est incomplète.

La prévention. Éducation à la santé. Augmenter le niveau culturel et hygiénique. Il n’y a pas de prévention spécifique. Pour prévenir la blénorrhée, les enfants doivent recevoir une injection dans le sac conjonctival immédiatement après la naissance avec 1 à 2 gouttes d'une solution d'albucide à 30 %.

Traitement. Antibiotiques (pénicilline, bicilline, streptomycine, etc.). Des médicaments sulfamides sont également utilisés. Pour la forme chronique, le vaccin gonococcique est utilisé.

Questions de contrôle

1. Décrire les propriétés morphologiques des gonocoques.

2. Quelle est l’activité enzymatique et la production de toxines des gonocoques ?

3. Quelle est la résistance des gonocoques. À quel médicament les gonocoques sont-ils particulièrement sensibles ?

4. Quelles maladies sont causées par les gonocoques et leur pathogenèse.

Examen microbiologique

Objectif de l'étude : identification des gonocoques et des anticorps antigonococciques.

Matériel pour la recherche

1. Écoulement de la muqueuse urétrale chez l'homme.

2. Écoulement de la membrane muqueuse de l'urètre et du col de l'utérus chez la femme.

3. Écoulement purulent des yeux.

4. Du sang pour le sérum.

Note. Pour l'examen bactérioscopique et bactériologique, le matériel est prélevé : 1) avant le début du traitement antibiotique : 2) au plus tôt 10 jours après la fin du traitement antibiotique ; 3) au plus tôt 2 heures après la dernière miction ; 4) au plus tôt 2 heures après la douche.

Méthodes de recherche fondamentales

1. Microscopique (principalement utilisé pour les formes aiguës).

2. Microbiologique.

3. Sérologique.

Avancement de l'étude

Deuxième journée d'étude

Sortez les récoltes du thermostat et inspectez-les. Étudier les colonies. Ils font des frottis. En cas de présence suspecte de diplocoques à Gram négatif, les colonies sont repiquées sur un milieu incliné dans des tubes à essai (le milieu doit être fraîchement préparé et contenir une quantité suffisante de condensat) et testées pour l'oxydase. Pour ce faire, une goutte d'une solution de diméthylparaphénylènediamine à 1% est appliquée sur la colonie à l'aide d'une pipette ; les colonies changent de couleur du brun foncé au noir.

Troisième jour d'étude

Les cultures sont sorties du thermostat, des frottis sont réalisés à partir de la gélose inclinée, colorés au Gram et examinés au microscope. Inoculer sur milieu Hiss (lactose, glucose, mannitol et maltose). Ces glucides doivent contenir 30 % de sérum sanguin. Les tubes à essai inoculés sont placés dans un thermostat.

Quatrième jour de recherche

Retirez les tubes du thermostat ; s’il n’y a pas de croissance, laissez-les dans le thermostat pendant encore 1 à 2 jours. S'il y a croissance, les résultats sont pris en compte (tableau 28).

Diagnostic sérologique

Troisième semaine de maladie. Au cours de l’évolution chronique de la maladie et dans les cas douteux, la RSC est réalisée à partir du sérum du patient (voir chapitre 12). Une culture tuée de gonocoques, préparée dans des conditions industrielles, est utilisée comme antigène. Vous pouvez utiliser la réaction d'hémagglutination indirecte (voir chapitre 12).

Questions de contrôle

1. Quel matériel est utilisé pour identifier les gonocoques et comment est-il obtenu ?

2. Combien de temps après la miction (ou les douches vaginales chez la femme) le matériel peut-il être prélevé à des fins de recherche ?

3. Quelle méthode de recherche est la principale pour la forme aiguë et laquelle pour la forme chronique de la gonorrhée ?

4. Quand et quel test sérologique est réalisé en cas de suspicion de gonorrhée ?

5. De quels micro-organismes doivent-ils différencier les gonocoques ?

Obtenez les médicaments auprès de votre professeur. Étudiez-le et dessinez les gonocoques situés à l’intérieur et à l’extérieur du leucocyte à l’aide de la coloration de Gram.

Média culturel

Jaune moyen. A 100 ml de MPA de viande de lapin, ajoutez 15 ml de jaune (œuf de poule frais), 6 ml d'indicateur rouge de phénol, 1,5 ml de sucre dissous dans 1 ml d'eau distillée stérile.

Milieu nutritif ascite-agar. Au filtrat du bouillon préparé à partir de viande de lapin, ajouter 2% d'agar, 1% de peptone et 0,5% de chlorure de sodium. Chauffer jusqu'à ce que la gélose se dissolve, régler le pH entre 7,4 et 7,5 et alcaliniser avec de l'hydroxyde de sodium à 20 %. Le milieu est porté à ébullition, filtré, versé dans des flacons stériles et stérilisé en autoclave pendant 15 minutes à 115°C.

Recettes pour milieux de culture sans ascite (MPA pH 7,4-7,5).

1) eau de viande de viande de lapin ou de cœur de bœuf - 100 ml

hydrolysat de caséine - 2 ml

autolysat de levure - 2 ml

sérum sanguin de bovin - 20 ml

2) eau de viande de viande de lapin ou de cœur de bœuf - 100 ml

Solution à 5% d'hémohydrolysat - 2 ml

autolysat de levure - 2 ml

sérum de bovin - 20 ml

3) eau de viande de viande de lapin ou de cœur de bœuf - 100 ml

jaune d'oeuf de poule - 10 ml

sérum sanguin de bovin - 20 ml

La croissance des gonocoques sur ces supports est abondante. Les colonies de gonocoques peuvent être détectées à l'aide d'un test à l'oxydase, dans lequel elles deviennent rouges puis noires.

L'agent causal de la gonorrhée est Neisseria gonorrhoeae , provoquant des lésions inflammatoires aiguës et chroniques des organes génito-urinaires, de la muqueuse de l'oropharynx et de la conjonctive de l'œil.

Le matériel de recherche est un écoulement purulent des organes génito-urinaires, du rectum ou de la conjonctive des yeux (avec blénorrhée), un exsudat articulaire et péritonéal. Les méthodes strictement réglementées pour le diagnostic en laboratoire de la gonorrhée sont l'examen microscopique et bactériologique (culturel). Les méthodes de diagnostic microbiologique de la gonorrhée sont reflétées dans le schéma 18.

Schéma 18. Méthodes de diagnostic microbiologique de la gonorrhée

Méthode microscopique consiste à examiner des frottis du matériel à tester, colorés au Gram et au bleu de méthylène. Lors de la coloration des préparations pour la gonorrhée, une modification de la méthode Gram est utilisée (le colorant violet de gentiane est remplacé par du violet cristal et le rouge neutre est utilisé à la place de la fuchsine ; la préparation est lavée après chaque étape de coloration). Dans les frottis de gonorrhée aiguë, on trouve un grand nombre de leucocytes polymorphonucléaires, à l'intérieur et à l'extérieur desquels se trouvent des diplocoques à Gram négatif en forme de haricot ; la microflore qui l'accompagne est soit minime, soit totalement absente (Fig. 25). Dans la gonorrhée chronique, dans certains cas, un gonocoque typique n'est pas détecté dans les frottis ou semble atypique sous la forme de petites formations ressemblant à de la poussière ou de grandes formations sphériques ; souvent 2 cellules de gonocoque sont situées à un angle l'une par rapport à l'autre et une microflore abondante les accompagne , des leucocytes, des cellules épithéliales et autres sont trouvés. L'IFM peut être utilisé comme méthode de diagnostic express.

Riz. 25. L'agent causal de la gonorrhée (Neisseria gonorrhoeae) dans des frottis de l'urètre d'un patient atteint de gonorrhée aiguë. Diplocoques grammaticaux localisés à l'intérieur et à l'extérieur de la cellule, abondance de leucocytes.

Méthode bactériologique. Le gonocoque est très sensible à divers facteurs défavorables, c'est pourquoi des tests culturels doivent être effectués immédiatement après la collecte du matériel. Le semis est effectué sur des milieux nutritifs spéciaux. La base de ces milieux est du MPA issu de viande de lapin additionné d'autolysat de levure, d'hydrolysat ou d'hémohydrolysat de caséine et de lactosérum bovin. Le liquide d'ascite et le jaune d'œuf ne sont actuellement pas utilisés comme additifs au milieu de culture du gonocoque. Le deuxième type de milieu de culture est sélectif et comprend, en plus des composants ci-dessus, des antibiotiques (polymyxine, lincomycine et pour le diagnostic de la gonorrhée pharyngée - acide orotique). Les cultures sont cultivées à 37 0 C pendant 24 à 72 heures dans une atmosphère à forte teneur en CO 2. Les colonies de gonocoques sont rondes, transparentes, en forme de gouttes de rosée. Les colonies typiques des gonocoques sont repiquées dans des tubes à essai avec un milieu de culture de gonocoques pour obtenir des cultures pures, identifiées par leurs propriétés morphologiques et saccharolytiques sur des milieux « panachés » (gélose semi-liquide avec lactosérum et glucides) ou à l'aide de systèmes de microtests. Dans les frottis de cultures pures, les gonocoques ne sont pas localisés par paires, mais séparément. Biochimiquement, les gonocoques sont inactifs et fermentent uniquement le glucose avec formation d'acide et produisent de l'oxydase. Pour détecter l'oxydase, on utilise un test avec une solution aqueuse à 1% de diméthylparaphénylènediamine ou de diéthylparaphénylènediamine, qui colore les colonies de gonocoques d'abord en rose, puis en rouge et après quelques minutes en noir. La sensibilité des gonocoques aux antibiotiques et son activité bêta-lactamase sont également étudiées.

Méthode sérologique(détermination des anticorps anti-gonocoques dans le sang des patients par RSK et ELISA) n'est pas strictement réglementée, n'a pas de valeur diagnostique, ne constitue pas une méthode de contrôle de l'efficacité du traitement et n'est actuellement pas utilisée dans la pratique réelle.

Diagnostic génétique. Il vise à détecter des fragments spécifiques d'ADN gonococcique par PCR et peut être utilisé comme méthode supplémentaire hautement informative pour diagnostiquer la gonorrhée.

Travail indépendant des étudiants

1. Méthode microscopique- examen d'un écoulement purulent de l'urètre d'un patient suspecté de gonorrhée (microlame de démonstration, coloration de Gram).

2. Méthode bactériologique. Etude de la culture . l'agent causal de la gonorrhée sur un milieu nutritif pour isoler les gonocoques, sur lesquels les gonocoques forment des colonies rondes et transparentes sous forme de gouttes de rosée. Sur le plan enzymatique, le gonocoque est inactif et ne fait que fermenter le glucose pour former de l'acide. Prendre en compte les résultats du semis de gonocoques sur le rang « panaché » (démonstration).

Diagnostic de la gonorrhée

Sans test de dépistage de la gonorrhée, aucun médecin moderne ne pourra poser de diagnostic. Quels que soient les symptômes du patient, la gonorrhée, comme de nombreuses autres infections, est déterminée principalement par des méthodes de laboratoire. Et des tests opportuns, associés à un choix judicieux de la méthode la mieux adaptée à chaque cas spécifique, jouent un rôle décisif dans la prévention des complications graves.

Plusieurs méthodes sont utilisées pour le diagnostic en laboratoire de la gonorrhée :

microscopie des frottis pour le gonocoque de Neisser (méthode bactérioscopique) ;
culture bactérienne pour la gonorrhée (gonocoques);
tests sérologiques (sérodiagnostic);
test immunoenzymatique (ELISA);
PCR (réaction en chaîne par polymérase) ;
tests rapides pour la gonorrhée.

Les plus précis et les plus courants sont la culture en cuve et la PCR. Examinons chacun en détail pour comprendre pourquoi.

Comment se déroule un test microscopique pour la gonorrhée ?

La microscopie d'un frottis de l'urètre ou du vagin (col de l'utérus) est la méthode la plus simple de diagnostic préliminaire de la gonorrhée. Le principe de l'étude est simple. Le frottis est coloré et examiné au microscope. Dans le même temps, une attention particulière est portée à la présence de coques doubles en forme de grain de café, caractéristiques des gonocoques.

Avec toute inflammation, le frottis contient un grand nombre de leucocytes - des cellules sanguines chargées de protéger l'organisme. Avec la gonorrhée, leur nombre augmente également, mais ce fait ne peut confirmer le diagnostic. La présence de globules blancs indique uniquement une inflammation, mais n’indique pas quelle infection l’a provoquée.

Les leucocytes et les gonocoques de la gonorrhée peuvent être déterminés lors d'un test d'urine général (trouvés dans les sédiments).

L’avantage de la méthode est sa simplicité et sa rapidité. Et le principal problème est la faible précision. Vous pouvez terminer l'analyse en 10 à 15 minutes, mais la probabilité que le résultat soit correct est de 50 %. Une apparence similaire est caractéristique de presque toutes les Neisseria, y compris les non pathogènes. Par conséquent, la microscopie est utilisée uniquement à des fins de dépistage, pour comprendre s’il y a quelque chose d’étranger dans le frottis. Si des bactéries similaires aux gonocoques sont détectées, d’autres tests plus précis sont réalisés : culture, PCR ou prise de sang par ELISA.

Comment se déroule la culture bactérienne des gonocoques ?

Contrairement à l’examen microscopique d’un frottis, la culture en cuve est une méthode informative. Les gonocoques se développent uniquement sur des supports spéciaux ; leurs colonies ont un aspect et une couleur caractéristiques. De plus, différents types de bactéries ont des capacités différentes à traiter certaines substances (en particulier les sucres). Prises ensemble, ces caractéristiques aident à identifier à la fois les espèces et les sous-espèces du microbe. La précision de la méthode est de 90 %.

Si des gonocoques sont détectés, la sensibilité aux antibiotiques sera déterminée en laboratoire sur les mêmes colonies. Le médecin saura alors exactement quel médicament est le plus puissant dans chaque cas spécifique. Par conséquent, il est logique d'effectuer l'analyse, même si une autre méthode a clairement déterminé la présence d'une infection.

L’inconvénient de la méthode est sa durée. Le temps nécessaire pour préparer une telle analyse de la gonorrhée peut varier de plusieurs jours à plusieurs semaines.

Dans quels cas le sérodiagnostic de la gonorrhée est-il réalisé ?

Pour combattre la maladie, le système immunitaire produit des anticorps, des protéines protectrices spéciales. Ils sont spécifiques à chaque infection qu’ils doivent combattre. Les médecins sont partis du contraire : s'il y a des anticorps (effet), alors il doit y avoir des bactéries (cause). Le principe de la méthode sérologique est d’observer la réaction du sang du patient, contenant des anticorps contre les gonocoques, avec les antigènes de ces anticorps contenus dans le kit de diagnostic. Les anticorps et les antigènes sont attirés les uns vers les autres comme les pôles d’un aimant et se collent. De ce fait, un précipité se forme dans la solution.

Les méthodes sérologiques sont rarement utilisées pour diagnostiquer la gonorrhée. Intéressant principalement les scientifiques. Auparavant, ils étaient largement utilisés pour détecter la gonorrhée, mais ils ont été abandonnés en raison de leur faible précision et de la dépendance du résultat à l'égard de facteurs subjectifs.

Le délai d'attente pour obtenir les résultats des tests de gonorrhée utilisant des méthodes sérologiques est de plusieurs heures. Contenu informatif – de 60 à 75%, selon l'ensemble diagnostique d'antigènes. Les tests sérologiques ne détectent pas la maladie dans les premières semaines suivant l'infection - le corps a besoin de temps pour accumuler des anticorps dans le sang.

Comment détecter la gonorrhée à l'aide du dosage immunoenzymatique

Le test immuno-enzymatique ou ELISA est une méthode qui a remplacé les méthodes de diagnostic sérologique. De la même manière, il permet de déterminer dans le sang certaines classes d'anticorps spécifiques de la gonorrhée, mais plus précisément. Capable de diagnostiquer la gonorrhée aiguë (plusieurs jours après l'infection) et chronique. Largement utilisé pour le diagnostic et le dépistage.

Les avantages de la méthode sont une précision suffisante (75-85%), un coût raisonnable. Inconvénient : les résultats peuvent être faussés pour des raisons subjectives (réactifs altérés, facteur humain) et objectives (présence d'immunodéficience, maladies immunitaires). Le temps nécessaire pour effectuer un test sanguin pour la gonorrhée par ELISA dépend de chaque laboratoire et réactifs spécifiques (de 1 à 5-6 jours).

Test de gonorrhée à l'aide de la méthode PCR

La méthode de réaction en chaîne par polymérase constitue le couronnement dans le domaine du diagnostic des maladies. Il est très précis et précis. Le créateur de la méthode, Kary Mullis, a reçu le prix Nobel de médecine en 1993. Le principe de la méthode repose sur la détection du matériel génétique de l'agent pathogène (ADN de Neisseria gonorrhoeae) dans les échantillons de matériel biologique étudiés. Pour mener l'étude, vous pouvez utiliser n'importe quel matériel biologique - sang, sérum, sécrétions du tractus génital, de l'urètre, frottis et grattages. Le matériel peut être contaminé par du pus, des exsudats, de l'urine et des sécrétions, mais cela n'affecte pas l'efficacité de l'analyse.

Le matériel est recherché pour la séquence de gènes caractéristiques de l'agent pathogène. S'il est détecté, il s'agit d'un signe clair d'infection. Le test PCR pour la gonorrhée a le contenu informatif et la spécificité les plus élevés. Sa précision est d'environ 95%. La durée de l'analyse est de un à plusieurs jours, selon le laboratoire et les réactifs.

Tests express pour la gonorrhée à domicile

Le fabricant de tests express le plus populaire est STD Test Express

Des tests express pour la gonorrhée ont été développés spécialement pour les personnes sexuellement actives. Il est basé sur un principe similaire à l'ELISA (la réaction de l'antigène gonococcique avec des anticorps provenant de matériel prélevé sur une personne suspectée d'être malade). Les échantillons de sang, de sécrétions du tractus génital, de l'urètre et du rectum conviennent aux tests.

Le principal avantage des tests express est la rapidité. La procédure prend 10 à 20 minutes. L'inconvénient de la méthode est la fréquence des résultats faussement positifs et faussement négatifs, la dépendance à l'égard des tests corrects, la distorsion des résultats due à la violation des règles de stockage. Il est donc préférable de se tourner vers le laboratoire le plus proche.

Résumons-le

Dans la plupart des cas, les gonocoques sont transmis avec d'autres infections sexuellement transmissibles. Si vous soupçonnez une maladie, vous devez subir des tests pour détecter toutes les maladies possibles. Par conséquent, il est optimal de commencer par une analyse PCR - elle est préparée rapidement et un frottis peut être examiné simultanément pour différentes bactéries et virus.

Il est logique de faire une culture en cuve si la gonorrhée est déjà connue pour confirmer le diagnostic et déterminer la sensibilité aux antibiotiques.

La gonorrhée peut-elle ne pas apparaître dans les tests ? Des résultats faussement négatifs se produisent avec les méthodes les plus précises. Les antibiotiques et autres médicaments, les caractéristiques du corps du patient, les infections chroniques et d’autres facteurs peuvent modifier l’apparence et la forme des gonocoques, les transformant en formes dites L. Dans les cas difficiles, le médecin prescrit une provocation à la gonorrhée - un affaiblissement délibéré du système immunitaire afin de stimuler la manifestation de l'infection. La méthode de provocation à domicile est simple et agréable - boire de la bière et prendre un bain chaud, et est recommandée à toute personne sur le point de subir un frottis de culture.

Culture pour la gonorrhée

La gonorrhée est une maladie sexuellement transmissible qui est l’une des plus courantes dans la population.

La maladie se caractérise par une inflammation du système urinaire. Une cause fréquente d’infection est la promiscuité sans utilisation d’équipement de protection.

Les hommes comme les femmes peuvent être infectés.

Important! La gonorrhée, sans traitement rapide, contribue au développement de l'infertilité.

Aujourd'hui, nous vous dirons quand et comment prélever des cultures pour une infection gonococcique et vous aiderons à comprendre les résultats des tests.

Culture pour la gonorrhée : indications

Entre le moment de l’infection et les premiers signes visibles, cela prend généralement de 3 à 15 jours. Peut être asymptomatique.

Les signes symptomatiques suivants sont caractéristiques :

Écoulement purulent ;
Rougeur et gonflement de l'urètre ;
Brûlures et démangeaisons dans la région génitale ;
Douleur dans le bas-ventre ;
Augmentation possible de la température corporelle ;
Miction douloureuse.

Si vous remarquez ces symptômes, vous devez demander l'aide d'un médecin dès que possible. L'indication de l'examen est une infection gonococcique chez un partenaire sexuel.

Attention! La transition de la maladie vers une maladie chronique peut entraîner un certain nombre de complications et d'infertilité.

Préparation : culture pour la gonorrhée

Tout matériel biologique peut être utilisé pour la recherche bactériologique.

Avant l'étude, une clôture est réalisée :

Peau;
Sperme;
Muqueuse buccale, tractus gastro-intestinal ;
Grattage du tractus génito-urinaire.

La culture bactériologique est prescrite par un urologue ou un gynécologue.

Pour obtenir un résultat fiable, vous devez connaître les règles de préparation à l'inoculation bactériologique.

Si votre médecin vous a prescrit un frottis, vous devez :

Ne pas avoir de rapports sexuels deux jours avant l'examen ;
Ne vous douchez pas ;
Réaliser une hygiène génitale sans produits d'hygiène intime ;
2-3 heures avant de prendre le matériel, évitez d'aller aux toilettes ;
Arrêtez de prendre vos médicaments une semaine avant le test.

Chez la femme, un frottis est réalisé dans les premiers jours après la fin des règles.

Les récoltes sont placées dans un thermostat dans des conditions d'humidité et de température optimales. Pour le gonocoque, il est nécessaire de maintenir une température inférieure à 37 degrés. Ensuite, les colonies douteuses sont étudiées.

Caractéristiques spécifiques de la croissance des colonies sur gélose :

Incolore ou avec une teinte jaune ;
Pas grand;
La surface est lisse et brillante ;
Légèrement convexe.

Cette méthode de recherche est très informative. L’inconvénient est que la recherche prend beaucoup de temps. Grâce à des tests bactériologiques, la sensibilité d'un micro-organisme aux médicaments antibactériens peut être déterminée. Ceci est nécessaire pour l’efficacité du traitement ultérieur.

Culture de gorge pour la gonorrhée

Si vous soupçonnez un processus gonorrhéique dans la gorge, vous devez contacter un ORL ou un vénéréologue. Vous devez absolument prélever un échantillon de la gorge, des amygdales ou du pharynx.

Dans le même temps, un test est effectué sur les organes génito-urinaires. Un test d'infection gonococcique doit être effectué avant de commencer le traitement. Après le traitement, vous devez subir un examen de contrôle.

Culture pour la gonorrhée de l'oeil

La paupière affectée gonfle et devient rouge bleuâtre. Lors d'un écoulement important de pus, la paupière peut se coller.

Des douleurs, des démangeaisons et des brûlures apparaissent. L'écoulement oculaire est prélevé pour analyse. Une étude PCR et une culture bactériologique sont réalisées avec des tests complémentaires de sensibilité aux antibiotiques.

Culture de sécrétion de prostate pour la gonorrhée

Grâce au massage de la prostate, les sécrétions de la prostate sont collectées.

Il s'agit d'un liquide clair inoculé sur un milieu nutritif spécial. Après un ou deux jours, des colonies de micro-organismes peuvent être identifiées. Un antibiogramme est réalisé pour déterminer un médicament efficace pour un traitement ultérieur.

Culture pour la gonorrhée de l'anus

Plusieurs méthodes sont utilisées pour collecter du matériel. Dans le premier cas, un coton-tige est passé le long des plis périanaux. Ils sont ensuite placés dans un récipient stérile. La deuxième méthode consiste à effectuer un grattage.

Délai de préparation des cultures pour la gonorrhée

Les tests de laboratoire peuvent prendre de cinq à neuf jours.

Cela dépend du type et de la méthodologie de l’analyse effectuée. Le résultat d'une analyse microscopique peut être obtenu en une demi-heure environ.

La PCR est réalisée en une journée maximum et une analyse expresse peut également être effectuée. La palette PCR permet de tester en parallèle la présence d'infections concomitantes.

Culture pour la gonorrhée pour déterminer l'efficacité du traitement

L’absence de signes symptomatiques de gonorrhée et de tests de laboratoire négatifs est un résultat naturel du traitement. Le contrôle est effectué le 10ème jour après l'arrêt des médicaments antibactériens.

L'étude comprend l'examen du frottis trois fois au microscope et l'inoculation du matériel une fois sur un milieu nutritif.

Les hommes doivent passer le test une fois, tandis que les femmes le font trois fois. Après deux semaines d'arrêt du traitement, pendant et après les règles.

S’il n’y a aucun symptôme et que les tests sont négatifs, la personne est en bonne santé. Si les résultats sont positifs mais qu’aucun symptôme n’est observé, cela indique un processus caché.

Le traitement doit être répété. Des résultats négatifs et la présence de signes d’inflammation indiquent la présence d’un autre type d’agent pathogène dans l’organisme.

Culture pour la gonorrhée : quel médecin dois-je contacter ?

Les cultures pour la gonorrhée peuvent être prescrites par des spécialistes appropriés - un gynécologue, un urologue, un vénéréologue.

L'examen peut être effectué dans n'importe quelle clinique publique ou privée. Si vous avez besoin de résultats de tests urgents, nous vous recommandons de contacter un laboratoire privé.

Souviens-toi! Si les premiers symptômes apparaissent, consultez immédiatement un médecin spécialiste.

Culture pour la gonorrhée : prix

Le coût des analyses dépend de la méthode d'étude du matériau.

Les prix varient entre 150 et 2 000 roubles. Les semis bactériologiques dans la politique de prix coûteront environ 800 à 1 300 roubles.

Si vous devez effectuer un test de culture pour la gonorrhée à Moscou, veuillez contacter notre clinique. Notre propre laboratoire nous permet de mener des recherches rapidement, efficacement et à moindre coût. Lorsque vous recevrez les résultats, vous pourrez consulter un vénéréologue.

À des fins préventives, une contraception barrière doit être utilisée. Il vaut mieux prévenir le développement de la maladie que de la traiter plus tard.

Si vous soupçonnez une gonorrhée, contactez un vénéréologue compétent.

Utilisation : microbiologie, diagnostic de la gonorrhée, milieu nutritif pour l'isolement et la culture du gonocoque. L'essence de l'invention : le milieu nutritif contient comme base nutritive un hydrolysat pancréatique de farine de poisson et un hydrolysat d'acide chlorhydrique de caséine, comme stimulant de croissance et source de vitamines - un autolysat de levure de boulanger ou de bière, un stimulateur de croissance de micro-organismes hémophiles. Le milieu contient en outre du glucose, de la gélose microbiologique, du sulfate de polymyxine-B, du chlorhydrate de lincomycine et de l'eau distillée. Le milieu assure la croissance de gonocoques de souches de musée et à partir de matériel provenant de patients atteints de gonorrhée, en préservant la morphologie typique du micro-organisme, ce qui contribue à son utilisation généralisée dans les soins de santé pratiques pour le diagnostic et le traitement des maladies sexuellement transmissibles. 3 tableaux

L'invention concerne le domaine de la microbiologie médicale et peut être utilisée dans le diagnostic de la gonorrhée. Les principales entreprises étrangères ("Oxoid", "Gibco", "BRL", etc.) produisent des milieux nutritifs pour la culture du gonocoque à base de digestats de viande et de fermentolysats additionnés de sang natif stérile. Parmi les préparations nationales, on connaît les suivantes : milieu nutritif "Arginine-agar", diagnostic, sec, produit par NPO Nutrient Media, Makhachkala, qui comprend les composants suivants, g : peptone 8,0-12,0 ; arginine 0,07-0,3 ; cystine 0,007-0,03 ; acide glutamique 1,0-1,8 ; EKD 4,0-7,0 ; bromure de thiamine 0,002-0,007 ; nitrate de fer 0,002-0,01 ; chlorure de potassium 0,07-0,2 ; chlorure de sodium 5,0-8,0 ; chlorure d'ammonium 0,9-2,0 ; sulfate de magnésium 0,4-0,9 ; glucose 4,0-7,0 ; amidon 0,5-2,0 ; Tampon Tris 1,0-2,5 ; gélose 13-17,0 ; sérum bovin 153,0-255,0 ; sulfate de polymyxine-M 15 000 à 25 000 unités ; chlorhydrate de lincomycine 0,001-0,003 ; eau distillée jusqu'à 1 litre. L'inconvénient de ce milieu est : une faible sensibilité, une instabilité des résultats sur l'intensité de croissance des gonocoques. Milieu séché lyophile pour l'isolement des gonocoques (produit par l'Institut de recherche du VCA, Saint-Pétersbourg) constitué d'une base de milieu et d'un additif dans le rapport de composants suivant, g ; est présenté dans le tableau 1. L'inconvénient de ce milieu est : l'instabilité des résultats sur l'intensité de la croissance et la sensibilité des gonocoques. En pratique, les milieux sans ascite préparés en laboratoire sont principalement utilisés à partir d'extraits de viande de lapin fraîche et de cœurs de bovins frais additionnés de peptone et de 20 % de sérum sanguin de bovin ou de sang natif stérile. Le manque de quantité requise de milieux nutritifs domestiques pour le diagnostic de la gonorrhée, ainsi que leur qualité, suscitent des critiques de la part du service de santé pratique. L'objectif de l'invention est de créer un milieu nutritif sec qui garantit des résultats stables en termes d'intensité de croissance et de sensibilité accrue, non inférieurs aux milieux commerciaux pour le diagnostic du gonocoque, et d'utiliser des produits non alimentaires pour sa production. Le problème est résolu en équilibrant la composition du milieu contenant une base protéique nutritive, un autolysat de levure de boulangerie ou de bière, de l'agar, du chlorure de sodium, des inhibiteurs de la microflore étrangère, du chlorhydrate de lincomycine et du sulfate de polymyxine B ; comme base nutritionnelle, il contient de l'hydrolysat pancréatique. de farine de poisson et d'hydrolysat d'acide chlorhydrique de caséine, en outre, il contient en outre un stimulateur de croissance de micro-organismes hémophiles (hydrolysat enzymatique d'albumine noire), du glucose, pour augmenter la stabilité des résultats lors de l'examen de patients atteints de gonorrhée chronique, il est possible de ajouter du sérum sanguin de bovin (5-10) % au milieu avec la teneur en composants suivante, g/l : hydrolysat pancréatique de farine de poisson 22,0-28,0 hydrolysat acide de caséine 2,8-3,2 autolysat de levure de boulangerie ou de bière 0,8-1,2 stimulateur de croissance de micro-organismes hémophiles 2,0-10,0 glucose 9,0-11,0 chlorure de sodium 2,9-3,1 gélose microbiologique 12,0-15,0 sulfate de polymyxine-B 15 000-25 000 unités
chlorhydrate de lincomycine 0,001-0,003
eau distillée jusqu'à 1 l
pH7,3+0,2
Le rapport quantitatif des composants du milieu nutritif et son pH assurent un niveau accru d'intensité de croissance des gonocoques et de sensibilité du milieu. Le milieu nutritif est préparé comme suit : des portions pesées des principaux ingrédients sont ajoutées dans un ballon contenant de l'eau distillée. Le milieu est soigneusement mélangé et, fermant le flacon avec un bouchon en gaze de coton, stérilisé à (115-119)°C pendant 30 minutes. puis refroidi à une température de (45-50) o C et stérile, après avoir été préalablement dissous dans une solution saline stérile. solution, ajoutez des quantités pesées de sulfate de polymyxine-B et de chlorhydrate de lincomycine. Le milieu est mélangé et versé dans des boîtes de Pétri stériles. Pour le contrôle biologique des milieux de culture, une culture de souches de musée de Neisseria gonorrhoeae et du matériel provenant de patients atteints de gonorrhée ont été utilisés. Toutes les cultures ont été cultivées à une température de (37+0,5) o C dans une atmosphère de 10 % de CO 2 et une humidité élevée pendant 24 à 48 heures : données dans le tableau 1. Exemple 1. Le milieu proposé a été testé en cultivant des souches de Neisseria gonorrhoeae. et sur matériel clinique sur milieu nutritif de composition suivante, g :
hydrolysat pancréatique de farine de poisson 22,0
autolysat de levure de boulangerie 0,8
hydrolysat d'acide chlorhydrique de caséine 2,8
stimulateur de croissance des micro-organismes hémophiles 2.0
glucose 9,0
chlorure de sodium 2,9
gélose microbiologique 12,0
sulfate de polymyxine-B 15 000 unités
chlorhydrate de lincomycine 0,001
eau distillée jusqu'à 1 l
pH7,3+0,2
Les résultats ont été enregistrés après 24 à 48 heures de culture. Exemple 2. Le milieu proposé a été testé en inoculant des souches de Neisseria gonorrhoeae et en utilisant du matériel clinique sur un milieu nutritif avec la teneur optimale en composants de composition suivante, g :
hydrolysat pancréatique de farine de poisson 25,0
autolysat de levure de boulanger 1.0
hydrolysat d'acide chlorhydrique de caséine 3.0
stimulateur de croissance des micro-organismes hémophiles 5.0
glucose 10,0
chlorure de sodium 3,0
gélose microbiologique 13,0
sulfate de polymyxine-B 20 000 unités
chlorhydrate de lincomycine 0,002
eau distillée jusqu'à 1 l
pH7,3+0,2
Les résultats ont été enregistrés après 24 à 48 heures de culture. Exemple 3. Le milieu proposé a été testé en inoculant des souches de Neisseria gonorrhoeae et en utilisant du matériel clinique sur un milieu nutritif avec la teneur maximale en composants de composition suivante, g :
hydrolysat pancréatique de farine de poisson 28,0
autolysat de levure de boulanger 1.2
hydrolysat d'acide chlorhydrique de caséine 3.2
stimulateur de croissance des micro-organismes hémophiles 10,0
glucose 11,0
chlorure de sodium 3.1
gélose microbiologique 15,0
sulfate de polymyxine-B 25 000 unités
chlorhydrate de lincomycine 0,003
eau distillée jusqu'à 1 l
pH7,3+0,2
Les résultats ont été enregistrés après 24 à 48 heures de culture. Exemple 4. Le milieu proposé a été testé en inoculant des souches de Neisseria gonorrhoeae et en utilisant du matériel clinique sur un milieu nutritif avec une violation du rapport quantitatif des composants de la composition suivante, g :
hydrolysat pancréatique de farine de poisson 31,0
autolysat de levure de boulangerie 1.4
hydrolysat d'acide chlorhydrique de caséine 3.4
stimulateur de croissance des micro-organismes hémophiles 15,0
glucose 13,0
chlorure de sodium 3,5
gélose microbiologique 20,0
sulfate de polymyxine-B 30 000 unités
eau distillée jusqu'à 1 l
pH7,3+0,2
Les résultats ont été enregistrés après 24 à 48 heures de culture. Exemple 5. Le milieu proposé a été testé en inoculant des souches de Neisseria gonorrhoeae et en utilisant du matériel clinique sur un milieu nutritif avec une violation du rapport quantitatif des composants de la composition suivante, g :
hydrolysat pancréatique de farine de poisson 18,0
autolysat de levure de boulangerie 0,5
hydrolysat d'acide chlorhydrique de caséine 2,5
stimulateur de croissance des micro-organismes hémophiles 0,5
glucose 5,0
chlorure de sodium 2,5
gélose microbiologique 10,0
sulfate de polymyxine-B 10 000 unités
chlorhydrate de lincomycine 0,005
eau distillée jusqu'à 1 l
pH7,3+0,2
Les résultats ont été enregistrés après 24 à 48 heures de culture. Le tableau 2 fournit une description comparative de la croissance des gonocoques à partir de matériel clinique et de souches de musée sur les milieux proposés et connus après 24 à 48 heures de croissance. La morphologie des colonies et des frottis colorés sur tous les milieux testés est identique à celle typique du gonocoque. Le tableau 2 montre que le milieu proposé est supérieur aux milieux commerciaux en termes d’intensité et de sensibilité de croissance des gonocoques. La violation du rapport quantitatif des composants du milieu entraîne une forte détérioration des indicateurs microbiologiques de la qualité du milieu proposé. Le milieu proposé permet de maintenir la viabilité des souches de Nisseria gonorrhoeae (à la fois fraîchement isolées de patients et de spécimens de musée) pendant un passage pendant 9 mois. Le tableau 3 présente des données sur la viabilité de la culture de Neisseria gonorrhoeae lorsqu'elle est cultivée et stockée sur milieu solide,
Le tableau 3 montre que le milieu nutritif proposé convient à des fins de diagnostic pour identifier les patients atteints de gonorrhée aiguë et chronique, ainsi que pour obtenir de la biomasse de Neisseria gonorrhoeae pour créer des gonovaccines. Sources d'informations
1. Manuel Culture Médias (1982)
2. Le manuel des milieux de culture microbiologique (Gibco BRL 1988)
3. Le manuel Oxoid des supports culturels, ingrédients et autres services de laboratoire. (Oxoïde Limitée 1979)
4. Manuel des produits BBL et des procédures de laboratoire. 1991. 5. Auteur. Certificat n° 1451167, né. Gadzhieva et al. « Milieu nutritif pour l'isolement des gonocoques ». 6. FS 42-146 VS-88 Milieu nutritif pour l'isolement des gonocoques, sec.

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1 Milieu nutritif pour l'isolement et la culture des gonocoques, contenant une base nutritive, de l'autolysat de levure de boulanger ou de bière, de la gélose microbiologique, du chlorure de sodium, un inhibiteur de la microflore étrangère et de l'eau distillée, caractérisé en ce qu'il contient comme base nutritive de l'hydrolysat pancréatique de poisson de la farine et de l'hydrolysat d'acide chlorhydrique de caséine, contient en outre un stimulateur de croissance des micro-organismes hémophiles, du glucose et, en tant qu'inhibiteur de la microflore étrangère, du sulfate de polymyxine-B et du chlorhydrate de lincomycine dans le rapport de composants suivant, g/l : 3 Hydrolysat pancréatique de farine de poisson7 22 283 Hydrolysat d'acide chlorhydrique de caséine7 2,8 3,23 Autolysat de boulangerie ou levure de bière7 0,8 1,23 Stimulateur de croissance de micro-organismes hémophiles7 2 103 Glucose7 9 113 Chlorure de sodium7 2,9 3,13 Gélose microbiologique7 12 - 153 Sulfate de polymyxine-B, unité7 15000 250 003 Chlorhydrate de lincomycine7 0,001 0,0033 B Eau distillée7 Jusqu'à 1 l3 pH7 7,3 + 0,2

Brevets similaires :

L'invention relève du domaine de la biotechnologie médicale et concerne la production d'adhésine méningococcique, préparation d'origine bactérienne, utilisée par exemple pour déterminer le degré d'adhésion des méningocoques lors de leur interaction avec les cellules hôtes.