Tanīni (miecvielas) ir augu lielmolekulārie fenola savienojumi, kas var izgulsnēt olbaltumvielas un kuriem ir savelkoša garša.
Termins “tanīns” tika izveidots vēsturiski, pateicoties šo savienojumu spējai neapstrādātu dzīvnieku ādu pārveidot par izturīgu ādu, kas ir izturīga pret mitrumu un mikroorganismiem. Šo terminu oficiāli ierosināja lietot 1796. gadā Seguins, lai apzīmētu vielas noteiktu augu ekstraktos, kas spēj veikt miecēšanas procesu.
Sauļošanās ir sarežģīta miecvielu ķīmiskā mijiedarbība ar kolagēna molekulām, galveno saistaudu proteīnu. Daudzkodolu fenoliem, kas satur vairāk nekā vienu hidroksilgrupu vienā molekulā, ir iedeguma īpašības. Kad tannīds ir novietots plakaniski uz proteīna molekulas, starp tām veidojas stabilas ūdeņraža saites:
Olbaltumvielu molekulas fragments Tannīda molekulas fragments
Tannīda un proteīna mijiedarbības stiprums ir atkarīgs no ūdeņraža saišu skaita, un to ierobežo polifenola savienojuma molekulas lielums. Tanīnu molekulmasa var būt līdz 20 000. Tajā pašā laikā uz 100 molekulmasas vienībām tanīdos ir 1-2 fenola hidroksigrupas. Tāpēc izveidoto ūdeņraža saišu skaits ir liels un miecēšanas process ir neatgriezenisks. Hidrofobie radikāļi, kas orientēti uz ārējo vidi, padara ādu nepieejamu mitrumam un mikroorganismiem.
Ne visi tanīni spēj patiesi iedegties. Šī īpašība ir raksturīga savienojumiem, kuru molekulmasa ir 1000 vai vairāk. Polifenola savienojumi, kuru masa ir mazāka par 1000, nespēj miecēt ādu un tiem ir tikai savelkoša iedarbība.
Tanīnus plaši izmanto rūpniecībā. Pietiek pateikt, ka pasaules tanīdu ražošana pārsniedz 1 500 000 tonnu gadā, un augu tanīdu īpatsvars ir līdz 50-60% no kopējā apjoma.
Izplatība augu pasaulē un tanīnu loma augos. Tanīni ir plaši sastopami segsēklu un ģimnosēkļu, aļģu, sēņu, ķērpju, sūnu un paparžu pārstāvjiem. Tie ir sastopami daudzos augstākajos augos, īpaši divdīgļlapās. Lielākais to skaits konstatēts vairākiem Fabaceae, Myrtaceae, Rosaceae, Anacardiaceae, Fagaceae, Polygonaceae dzimtu pārstāvjiem.
Tanīni augā atrodas šūnu vakuolos un šūnu novecošanas laikā adsorbējas uz šūnu sieniņām. Tie lielos daudzumos uzkrājas pazemes orgānos, mizā, bet var atrast arī lapās un augļos.
Tanīni augos pilda galvenokārt aizsargfunkcijas. Ar audu mehāniskiem bojājumiem sākas pastiprināta tanīnu veidošanās, ko papildina to oksidatīvā kondensācija virsmas slāņos, tādējādi pasargājot augu no turpmākiem bojājumiem un patogēnu negatīvās ietekmes. Pateicoties lielajam fenola hidroksilu daudzumam, tanīniem ir izteiktas bakteriostatiskas un fungicīdas īpašības, tādējādi aizsargājot augu organismus no dažādām slimībām.
Tanīnu klasifikācija. 1894. gadā G. Prokters, pētot tanīnu pirolīzes galaproduktus, atklāja 2 savienojumu grupas - pirogallus (veidojas pirogalols) un pirokatehola savienojumus (sadalīšanās laikā veidojas pirokatehols):
K. Freidenbergs 1933. gadā precizēja G. Proktera klasifikāciju. Viņš, tāpat kā Prokters, klasificēja tanīnus pēc to sadalīšanās galaproduktiem, taču ne pirolīzes apstākļos, bet gan skābes hidrolīzes laikā. Atkarībā no hidrolīzes spējas K. Freidenbergs ierosināja izdalīt divas tanīnu grupas: hidrolizējams un kondensēts.Šobrīd biežāk tiek izmantota K. Freidenberga klasifikācija.
Uz grupu hidrolizējamie tanīni Tie ietver savienojumus, kas veidoti kā esteri un sadalās skābes hidrolīzes laikā to sastāvdaļās. Centrālā vienība visbiežāk ir glikoze, retāk citi cukuri vai alicikliskie savienojumi (piemēram, hīnskābe). Centrālās atlikuma spirta hidroksilgrupas var saistīt ar estera saiti ar gallskābi, tādējādi veidojot grupu galotanīni, vai ellagīnskābe, veidojot grupu ellagitanīni.
Gallotanīni- gallskābes esteri, visizplatītākie hidrolizējamo tanīnu grupā. Ir mono-, di-, tri-, tetra-, penta- un poligaloilēteri. Monogaloilēteru pārstāvis ir b-D-glikogalīns:
Polihaloilēteru piemērs ir ķīniešu tanīns, kura struktūru 1963. gadā pirmo reizi noteica Havorts:
Ellagotanīni ir cukura un ellagīnskābes vai tās atvasinājumu esteri. Ellagīnskābe veidojas, oksidējot divas gallskābes molekulas par heksaoksidifēnskābi, kas nekavējoties veido laktonu - ellagīnskābi:
Tāpat kā iepriekšējā gadījumā, ellagitanīnu cukura sastāvdaļa visbiežāk ir glikoze.
Gallusskābju esteri, kas nav cukuri ir gallskābes esteri un sastāvdaļa, kas nav cukurs, piemēram, hinskābe, hidroksikanēļskābe utt. Šīs vielu grupas piemērs ir 3,4,5-trigalloilhīnskābe.
Kondensēti tanīni Tie atšķiras no hidrolizējamiem ar to, ka skābes hidrolīzes laikā tie nesadalās to sastāvdaļās, bet gluži pretēji, minerālskābju iedarbībā veidojas blīvi sarkanbrūni polimerizācijas produkti - flobafēni.
Kondensētos tanīnus veido galvenokārt katehīni un leikocianidīni, un daudz retāk citas reducētas flavonoīdu formas. Kondensēti tanīni neietilpst “glikozīdu” grupā: kondensētie tanīni nesatur cukura komponentu.
Kondensētu tanīnu veidošanās var notikt divos veidos. K. Freidenbergs (XX gs. 30. gadi) konstatēja, ka kondensēto tanīnu veidošanās ir neenzimatisks katehīnu vai leikocianidīnu autokondensācijas (vai to šķērskondensācijas) process, ko izraisa atmosfēras skābekļa, siltuma un skāba vide. Autokondensāciju pavada katehīnu pirāna gredzena plīsums un vienas molekulas C-2 oglekļa atoms ar oglekļa-oglekļa saiti tiek savienots ar citas molekulas C-6 vai C-8 oglekļa atomu. Šajā gadījumā var izveidot diezgan pagarinātu ķēdi:
Saskaņā ar cita zinātnieka D. Hatuey teikto, kondensēti tanīni var veidoties molekulu fermentatīvās oksidatīvās kondensācijas rezultātā, piemēram, "no galvas līdz astei" (no gredzena A līdz gredzenam B) vai "astei līdz astei" (no B līdz gredzenam B):
Augi, kas satur kondensētus tanīnus, obligāti satur to prekursorus - brīvos katehīnus vai leikocianidīnus. Bieži sastopami jaukti kondensēti polimēri, kas sastāv no katehīniem un leikocianidīniem.
Parasti augos vienlaikus ir gan kondensētās, gan hidrolizējamās grupas tanīni.
Tanīnu fizikāli ķīmiskās īpašības. Tanīniem ir augsta molekulmasa - līdz 20 000. Dabiskie tanīni, ar dažiem izņēmumiem, līdz šim ir zināmi tikai amorfā stāvoklī. Iemesls tam ir tas, ka šīs vielas ir savienojumu maisījumi, kuriem ir līdzīga ķīmiskā struktūra, bet atšķiras molekulmasa.
Tanīni ir dzelteni vai brūni savienojumi, kas ūdenī veido koloidālus šķīdumus. Šķīst etanolā, acetonā, butanolā un nešķīst šķīdinātājos ar izteiktu hidrofobitāti - hloroformu, benzolu utt.
Gallotanīni slikti šķīst aukstā ūdenī un samērā labi šķīst karstā ūdenī.
Tanīniem ir optiska aktivitāte un tie viegli oksidējas gaisā.
Fenola hidroksilu klātbūtnes dēļ tie tiek izgulsnēti ar smago metālu sāļiem un veido krāsainus savienojumus ar Fe +3.
Tanīnu izolēšana no augu materiāliem. Tā kā tanīni ir dažādu polifenolu maisījums, to izolēšana un analīze ir sarežģīta.
Bieži vien tanīnu daudzuma iegūšanai izejvielu ekstrahē ar karstu ūdeni (aukstā ūdenī tanīni slikti šķīst) un atdzesēto ekstraktu apstrādā ar organisko šķīdinātāju (hloroformu, benzolu u.c.), lai atdalītu lipofīlās vielas. Pēc tam tanīnus izgulsnē ar smago metālu sāļiem, kam seko kompleksa iznīcināšana ar sērskābi vai sulfīdiem.
Lai iegūtu ķīmiskajā struktūrā līdzīgu tanīnu frakciju, varat izmantot izejvielu ekstrakciju ar dietilēteri, metil vai etilspirtiem ar iepriekšēju lipofīlo komponentu atdalīšanu, izmantojot šķīdinātājus ar izteiktu hidrofobitāti - petrolēteri, benzolu, hloroformu.
Ir plaši izplatīta atsevišķu tanīnu komponentu izolēšana, izgulsnējot no ūdens vai ūdens-spirta šķīdumiem ar svina sāļiem. Pēc tam iegūtās nogulsnes apstrādā ar atšķaidītu sērskābi.
Izolējot atsevišķus tanīnu komponentus, tiek izmantotas hromatogrāfijas metodes: adsorbcijas hromatogrāfija uz celulozes, poliamīda; jonu apmaiņa uz dažādiem katjonu apmainītājiem; izplatīšana uz silikagela; gēla filtrēšana uz molekulārajiem sietiem.
Atsevišķu tanīnu komponentu identificēšana tiek veikta, izmantojot hromatogrāfiju uz papīra vai plānā sorbenta slānī, izmantojot spektrālo analīzi, kvalitatīvas reakcijas un pētot noārdīšanās produktus.
Tanīnu kvalitatīvā analīze. Kvalitatīvas reakcijas uz tanīniem var iedalīt divās grupās: nokrišņu reakcijas un krāsu reakcijas. Lai veiktu augstas kvalitātes reakcijas, izejvielas visbiežāk ekstrahē ar karstu ūdeni.
Nokrišņu reakcijas. 1. Tanīniem mijiedarbojoties ar 10% nātrija hlorīda šķīdumā pagatavotu 1% želatīna šķīdumu, veidojas nogulsnes vai šķīdums kļūst duļķains. Pievienojot lieko želatīnu, duļķainība pazūd.
2. Tannīdi dod bagātīgu nokrišņu daudzumu ar alkaloīdiem (kofeīns, pahikarpīns), kā arī dažām slāpekļa bāzēm (urotropīns, novokaīns, dibazols).
3. Mijiedarbojoties ar 10% svina acetāta šķīdumu, hidrolizējamās grupas tanīni veido flokulējošas nogulsnes.
4. Kondensētās grupas tanīni reakcijā ar broma ūdeni veido flokulējošas nogulsnes.
Krāsu reakcijas. Hidrolizējamās grupas tanīni veido melni zilas krāsas savienojumus ar dzelzs amonija alauna šķīdumu un melni zaļas krāsas kondensētās grupas savienojumus.
Ja augs vienlaikus satur tanīnus un hidrolizējamās un kondensētās grupas, tad vispirms ar 10% svina acetāta šķīdumu izgulsnē hidrolizējamos tanīdus, nogulsnes filtrē un pēc tam filtrātu reaģē ar feroamonija alauna šķīdumu. Tumši zaļas krāsas izskats norāda uz kondensētās grupas vielu klātbūtni.
Tanīnu kvantitatīvā noteikšana. Neskatoties uz to, ka ir aptuveni 100 dažādas tanīnu kvantitatīvās noteikšanas metodes, precīzu šīs bioloģiski aktīvo vielu grupas kvantitatīvo analīzi ir grūti veikt.
No plaši izmantotajām tanīnu kvantitatīvās noteikšanas metodēm var izdalīt sekojošo.
1. Gravimetriska - balstās uz tanīnu kvantitatīvo izgulsnēšanos ar želatīnu, smago metālu sāļiem utt.
2. Titrimetriska – balstīta uz oksidatīvām reakcijām, galvenokārt ar kālija permanganātu.
3. Fotoelektrokolorimetriskā - balstās uz tanīnu spēju veidot stabilus krāsainus reakcijas produktus ar dzelzs oksīda sāļiem, fosfotungstīnskābi u.c.
Valsts farmakopeja X un XI izdevumos iesaka izmantot titrimetrisko metodi tanīnu kvantitatīvai noteikšanai.
Satura rādītājs
GPM.1.5.3.0008.15 Tanīnu satura noteikšana ārstniecības augu izejvielās un ārstniecības augu preparātos
Art. GF XI
Tanīnu satura noteikšanu ārstniecības augu izejvielās un ārstniecības augu preparātos veic ar titrimetrisko un/vai spektrofotometrisko metodi. Titrimetriskā metode ir tanīnu daudzuma noteikšana tanīna izteiksmē, un spektrofotometriskā metode ļauj noteikt tanīnu daudzumu pirogalola izteiksmē.
1. metode. Tanīnu daudzuma noteikšana tanīna izteiksmē
Apmēram 2 g (precīzi nosverot) sasmalcinātu ārstniecības augu izejvielu vai ārstniecības augu preparātu, izsijātu caur sietu ar 3 mm caurumiem, ievieto 500 ml tilpuma koniskajā kolbā, aplej ar 250 ml līdz vārīšanās temperatūrai uzkarsēta ūdens. un vāra uz elektriskās plīts ar slēgtu spirāli 30 minūtes, laiku pa laikam maisot. Iegūto ekstraktu atdzesē līdz istabas temperatūrai un caur vati filtrē 250 ml mērkolbā, lai kolbā neiekļūtu izejmateriāla/preparāta daļiņas, šķīduma tilpumu noregulē līdz atzīmei ar ūdeni un samaisa. 25,0 ml iegūtā ūdens ekstrakta ievieto koniskajā kolbā ar tilpumu 1000 ml, pievieno 500 ml ūdens, 25 ml indigo sulfonskābes šķīduma un titrē, pastāvīgi maisot kālija permanganātu ar 0,02 M šķīdumu līdz zeltaini dzeltenai krāsai. .
Tajā pašā laikā tiek veikts kontroles eksperiments: 525 ml ūdens, 25 ml indigosulfonskābes šķīduma ievieto koniskajā kolbā ar tilpumu 1000 ml un titrē, pastāvīgi maisot kālija permanganātu ar 0,02 M šķīdumu līdz. tas kļūst zeltaini dzeltens.
1 ml 0,02 M kālija permanganāta šķīduma tanīna izteiksmē atbilst 0,004157 g tanīnu.
(V – V 1 ) · 0,004157 · 250 · 100 · 100
X = ————————————————— ,
a· 25 · (100 – W)
V– ūdens ekstrakta titrēšanai izmantotā kālija permanganāta šķīduma tilpums 0,02 M, ml;
V 1 — kontroleksperimentā titrēšanai izmantotā kālija permanganāta šķīduma 0,02 M tilpums, ml;
0,004157 – tanīnu daudzums, kas atbilst 1 ml kālija permanganāta šķīduma 0,02 M (tanīna izteiksmē), g;
a– izejvielu vai ārstniecības augu preparāta nosvērtā porcija, g;
W– ārstniecības augu izejvielu vai ārstniecības augu preparāta mitrums, %;
250 – kopējais ūdens ekstrakcijas tilpums, ml;
25 – titrēšanai ņemtā ūdens ekstrakta tilpums, ml.
Piezīme.Indigosulfonskābes šķīduma pagatavošana. 1 g indigokarmīna izšķīdina 25 ml koncentrētas sērskābes, tad pievieno vēl 25 ml koncentrētas sērskābes un atšķaida ar ūdeni līdz 1000 ml, iegūto šķīdumu uzmanīgi ielejot ūdenī 1000 ml mērkolbā, maisot.
2. metode. Tanīnu daudzuma noteikšanapirogalola ziņā
Aptuveni 0,5 - 1,0 g (precīzi nosverot vai citādi norādīts farmakopejas monogrāfijā vai normatīvajā dokumentācijā) sasmalcinātu ārstniecības augu izejvielu vai ārstniecības augu preparātu, kas izsijāti caur sietu ar caurumiem 0,18 mm, ievieto koniskajā kolbā ar ietilpību 250 ml , pievieno 150 ml ūdens un vāra ūdens vannā ar atteci 30 minūtes. Iegūto ūdens ekstraktu kolbā atdzesē līdz istabas temperatūrai, filtrē caur vati 250 ml mērkolbā tā, lai kolbā neiekļūtu izejmateriāla daļiņas, šķīduma tilpumu noregulē līdz atzīmei ar ūdeni un samaisa. . Iegūto šķīdumu filtrē caur papīra filtru, kura diametrs ir aptuveni 125 mm, izmetot pirmos 50 ml filtrāta.
Noteikšanu veic vietā, kas ir aizsargāta no gaismas.
Tanīnu daudzuma noteikšana. 5,0 ml filtrāta ievieto 25 ml mērkolbā, šķīduma tilpumu noregulē līdz atzīmei ar ūdeni un samaisa. 2,0 ml iegūtā šķīduma ievieto 25 ml mērkolbā, pievieno 1 ml fosfomolibdēna volframa reaģenta, 10 ml ūdens un šķīduma tilpumu noregulē līdz atzīmei ar 10,6% nātrija karbonāta šķīdumu (pārbaudāmais šķīdums). . Pēc 30 minūtēm izmēra testa šķīduma (A 1) optisko blīvumu ar spektrofotometru pie viļņa garuma 760 nm kivetē ar slāņa biezumu 10 mm, par standartšķīdumu izmantojot ūdeni.
Ādas pulvera neadsorbēto tanīnu daudzuma noteikšana. 10,0 ml filtrāta pievieno 0,1 g ādas pulvera, iegūto maisījumu maisa 60 minūtes un filtrē caur papīra filtru. 5,0 ml iegūtā filtrāta ievieto 25 ml mērkolbā, šķīduma tilpumu noregulē līdz atzīmei ar ūdeni un samaisa. 2,0 ml iegūtā šķīduma ievieto 25 ml mērkolbā, pievieno 1 ml fosfomolibdēna volframa reaģenta un 10 ml ūdens, šķīduma tilpumu noregulē līdz nātrija karbonāta atzīmei ar 10,6% šķīdumu un samaisa (tests). risinājums). Pēc 30 minūtēm izmēra testa šķīduma (A 2) optisko blīvumu ar spektrofotometru pie viļņa garuma 760 nm kivetē ar slāņa biezumu 10 mm, par standartšķīdumu izmantojot ūdeni.
Paralēli tiek mērīts standartšķīduma optiskais blīvums.
25 ml mērkolbā ievieto 2,0 ml CO pirogalola šķīduma, pievieno 1 ml fosfomolibdēna volframa reaģenta un 10 ml ūdens, šķīduma tilpumu noregulē līdz atzīmei ar nātrija karbonātu ar 10,6% šķīdumu un samaisa ( standarta risinājums). Pēc 30 minūtēm mēra standartšķīduma (A 3) optisko blīvumu ar spektrofotometru pie viļņa garuma 760 nm kivetē ar slāņa biezumu 10 mm, par standartšķīdumu izmantojot ūdeni.
A 1– testa šķīduma optiskais blīvums, nosakot tanīnu daudzumu;
A 2 – testa šķīduma optiskais blīvums, nosakot miecvielu daudzumu, ko mizas pulveris neadsorbē, izteikts kā pirogalols;
A 3— standartšķīduma optiskais blīvums;
a— ārstniecības augu izejvielu vai ārstniecības augu preparātu nosvērtā daļa, g;
a 0 — CO pirogalola paraugs, g;
W– ārstniecības augu izejvielu vai ārstniecības augu preparāta mitrums, %.
Piezīme. CO pirogalola šķīduma pagatavošana. 0,05 g (precīzi nosvērta) pirogalola CO ievieto 100 ml mērkolbā, izšķīdina ūdenī, šķīduma tilpumu noregulē līdz atzīmei ar ūdeni un samaisa. 5,0 ml iegūtā šķīduma ievieto 100 ml mērkolbā, šķīduma tilpumu noregulē līdz atzīmei ar ūdeni un samaisa. Šķīdumu lieto svaigi pagatavotu.
Ievads
Augos viena no izplatītākajām bioloģiski aktīvo vielu (BAS) grupām ir tanīni (tanīni), kam ir plašs farmakoloģiskās aktivitātes spektrs.Tanīniir hemostatiska, savelkoša, pretiekaisuma, pretmikrobu iedarbība, kā arī augsta P-vitamīna aktivitāte, anti-sklerotiska un antihipoksiska iedarbība. Kondensēti tanīni ir antioksidanti un tiem piemīt pretvēža iedarbība. Tanīnilieto kā pretlīdzekli saindēšanās gadījumos ar glikozīdiem, alkaloīdiem un smago metālu sāļiem. Medicīnā tanīnus izmanto tādu slimību ārstēšanā kā stomatīts, gingivīts, faringīts, tonsilīts, kolīts, enterokolīts, dizentērija, tos lieto arī apdegumiem, dzemdes, kuņģa un hemoroīdu asiņošanai..
Satura definīcijatanīni ir svarīga sastāvdaļa, lai noteiktu tanīnus saturošu augu materiālu kvalitāti. Tanīnu noteikšanai ir dažādas metodes, bet visbiežāk tiek izmantotas titrimetriskās un spektrofotometriskās metodes.
Darba mērķis– tanīnu kvantitatīvās noteikšanas metožu validācijas novērtējums attiecībā uz konverģenci, precizitāti, linearitāti.
Materiāli un izpētes metodes
Izejviela, kas tika izmantota kā izpētes objekts, bija gaisā žāvēta zāle.parastā manšete (Alchemilla vulgaris L.) dzimta. Rosaceae (Rosaceae).
Lai apstiprinātu metodes tanīnu kvantitatīvai noteikšanai gaisā žāvētā zālēNo kopējās aproces tika izvēlētas divas metodes: permanganatometriskā titrēšana un spektrofotometriskā noteikšana, pamatojoties uz reakciju ar Folin-Ciocalteu reaģentu. Metožu izvēle ir pamatota ar to izmantošanas biežumu praksē.
Gaisa žāvēta zālecuff vulgaris sagatavots iekšā 2015. gada septembrī Arhangeļskas apgabala Primorskas rajonā, kas bija izejviela tanīnu (tanīnu) izpētei un kvantitatīvai noteikšanai.
Permanganatometriskās noteikšanas metode ir farmakopejas, kaspamatojoties uz tanīnu oksidācijas reakciju ar kālija permanganāta šķīdumu.Apmēram 2 g (precīzi nosvērtas) sasmalcinātas izejvielas, izsijātas caur sietu ar 3 mm caurumu, ievietoja 500 ml tilpuma koniskajā kolbā, pievienoja 250 ml līdz vārīšanās temperatūrai uzkarsēta ūdens un uzkarsēja elektriskā plīts ar slēgtu spirāli 30 minūtes, periodiski maisot. Iegūtais ekstrakts tika atdzesēts līdz istabas temperatūrai un 250 ml koniskā kolba tika filtrēta caur vati, lai izejmateriāla daļiņas neiekļūtu kolbā. 25 ml iegūtā ekstrakta tika pipeti un pārnesticitā koniskajā kolbā ar ietilpību 750 ml, pievieno 500 ml ūdens, 25 ml indigosulfonskābes šķīduma un, nepārtraukti maisot, titrē ar kālija šķīdumupermanganātu (0,02 mol/l) līdz zeltaini dzeltenai.
Paralēli tika veikts kontroles eksperiments.
1 ml kālija permanganāta šķīduma (0,02 mol/l) tanīna izteiksmē atbilst 0,004157 g tanīnu.
Tanīnu (X) saturs procentos absolūto sauso izejvielu izteiksmē tika aprēķināts, izmantojot formulu (1):
Kur (1)
V – ekstrakta titrēšanai izmantotā kālija permanganāta šķīduma (0,02 mol/l) tilpums, ml;
– kontroles eksperimentā titrēšanai izmantotā kālija permanganāta šķīduma (0,02 mol/l) tilpums, ml;
0,004157 – tanīnu daudzums, kas atbilst 1 ml kālija permanganāta šķīduma (0,02 mol/l) (tanīna izteiksmē), g;
250 – kopējais ekstrakcijas tilpums, ml;
25 – titrēšanai ņemtā ekstrakta tilpums, ml.
m– izejvielu masa, g;
W– svara zudums izejvielu žāvēšanas laikā, g;
Tanīnu kvantitatīvai noteikšanai ar spektrofotometriju apmēram 1 g (precīzi nosvērta) pētāmā augu materiāla, kas sasmalcināts līdz daļiņu izmēram, kas iziet caur sietiem ar 1 mm caurumu, tika ievietots koniskajā kolbā ar slīpētu sekciju ar ar ietilpību 50 ml, pievienoja 25 ml acetona-ūdens maisījuma proporcijā 7:3 (70% acetona šķīdums). Kolbu noslēdza un ievietoja laboratorijas maisīšanas ierīcē (LAB PU-2, Krievija) uz 60 minūtēm. Iegūtais ekstrakts tika filtrēts 50 ml mērkolbā un tilpumu noregulēja līdz atzīmei ar 70% acetona šķīdumu (šķīdums A).
1 ml šķīduma A ievietoja 10 ml mērkolbā, šķīduma tilpumu kolbā noregulēja līdz atzīmei ar attīrītu ūdeni (šķīdums B).
0,5 ml šķīduma B ievietoja 10 ml mērkolbā, pievienoja 2 ml attīrīta ūdens, 0,25 ml Folen-Ciocalteu reaģenta, 1,25 ml 20% nātrija karbonāta šķīduma un šķīduma tilpumu noregulēja līdz atzīmei. ūdens. Kolbu atstāja uz 40 minūtēm no gaismas aizsargātā vietā. Šķīduma optiskais blīvums tika noteikts pie viļņa garuma 750 nm. Par standartšķīdumu tika izmantots reaģentu maisījums, nepievienojot ekstraktu.
Tanīnu saturs augu izejvielu ekstraktos tika aprēķināts no kalibrēšanas grafika vērtībām, kuras konstruēšanai tika izmantots CO tanīna standartparauga 0,1 mg/ml šķīdums. Šim nolūkam 0,05 g (precīza masa) CO tanīna ievietoja 100 ml mērkolbā, izšķīdina 30 ml ūdens un tilpumu kolbā noregulēja līdz atzīmei ar to pašu šķīdinātāju (šķīdums A).
1 ml iegūtā šķīduma pārnesa 10 ml mērkolbā. Šķīduma tilpumu kolbā noregulēja līdz atzīmei ar ūdeni (šķīdums B).
Risinājumu sērija, kas satur 1; 2; 3; 4; 5 µg/ml CO tanīns tika pagatavots, ievietojot B šķīduma daļas 10 ml mērkolbās, pievienojot Folina-Čokaltē reaģentu un 20% nātrija karbonāta ūdens šķīdumu un noregulējot šķīdumu tilpumu kolbā līdz atzīmei ar ūdeni. .
Šķīdumus sajauca, kolbas aizvākoja un 40 minūtes tur istabas temperatūrā no gaismas aizsargātā vietā.
Iegūto šķīdumu optiskais blīvums tika noteikts spektrofotometriski kvarca kivetēs ar slāņa biezumu 1 cm pie viļņa garuma 725 nm attiecībā pret standartšķīdumu.
Standartšķīdums bija reaģentu maisījums bez tanīna CO pievienošanas (šķīdums B).
Pamatojoties uz pētījumu rezultātiem, tika izveidots optiskā blīvuma atkarības no tanīna koncentrācijas grafiks (1. att.).
Ņemot vērā iegūtās vērtības, tika aprēķināts tanīnu daudzums tanīna izteiksmē, izmantojot formulu:
, Kur
rezultātus
Tanīnu kvantitatīvās noteikšanas ar titrēšanu rezultāti ir parādīti tabulā. 1.
1. tabula. Tanīnu kvantitatīvās noteikšanas ar permanganatometrijas rezultāti
| Augu izejvielu parauga svars, g | Iegūtā augu izejvielu ekstrakta titrēšanai izmantotā kālija permanganāta (0,02 mol/l) tilpums, ml | Tanīnu daudzums, % (X i) | |
|
2,10250 |
15,34892 |
15,72%
|
|
|
2,03255 |
15,21262 |
||
|
2,18345 |
15,84713 |
||
|
2,24350 |
16,24333 |
||
|
2,12465 |
15,85257 |
||
|
2,07055 |
15,80574 |
Vidējais tanīnu saturs izejvielās bija 15,7%. Relatīvās standartnovirzes (0,024%) aprēķinātā vērtība, kas nepārsniedz 2%, kas raksturo iegūto rezultātu apmierinošu konverģenci.
Lai noteiktu procedūras pareizību, tika izmantota pievienošanas metode. Šim nolūkam titrēšanas kolbā tika pievienots 1 ml 0, 05%, 0, 1% un 0, 15% CO tanīna un katrā gadījumā titrēts trīs reizes. Pētījumu rezultāti ir parādīti tabulā. 2.
2. tabula. Tanīnu permanganatometriskās titrēšanas metodes pareizības noteikšana
| Pievienotā CO tanīna daudzums, g | Izejvielu svars, g | Aprēķināts tanīnu daudzums, g | Atrasts tanīnu daudzums, g | Atvēršanas līmenis, % | Metroloģiskās īpašības |
|
0,0005 |
2,2435 |
0,0357 |
0,0353 |
98,87 |
99,91%
|
|
2,1247 |
0,0339 |
0,0340 |
100,29 |
||
|
2,0706 |
0,0330 |
0,0337 |
102,12 |
||
|
0,001 |
2,2435 |
0,0362 |
0,0357 |
98,61 |
|
|
2,1247 |
0,0344 |
0,0340 |
98,84 |
||
|
2,0706 |
0,0335 |
0,0336 |
100,51 |
||
|
0,0015 |
2,2435 |
0,0367 |
0,0366 |
99,73 |
|
|
2,1247 |
0,0349 |
0,0353 |
101,14 |
||
|
2,0706 |
0,0340 |
0,0337 |
99,12 |
Iegūtie rezultāti liecina, ka aprēķinātais Studenta koeficients ir mazāks par tabulā norādīto vērtību untehnika nesatur sistemātisku kļūdu, kas ļauj izdarīt secinājumu par tās pareizību.
Lai pētītu linearitāti, mēs noteicām tanīnu kvantitatīvā satura atrasto vērtību atkarību no pētāmā augu materiāla svērtās daļas. Šim nolūkam tika veikta tanīnu kvantitatīvā noteikšana sešos gaisā kaltētas neapstrādātas mantijas paraugos, kas atšķiras pēc svara (3. tabula).
3. tabula. Atrastā tanīnu satura atkarība no augu izejvielu parauga masas, izmantojot permanganatometriju
|
|
Titrēšanai izmantotā kālija permanganāta tilpums, ml |
|
|
2,0706 |
0,3159 |
|
|
3,0013 |
10,8 |
0,4490 |
|
4,0595 |
13,0 |
0,5404 |
|
5,1180 |
15,3 |
0,6360 |
|
6,1385 |
18,2 |
0,7566 |
Pamatojoties uz pētījuma laikā iegūtajiem datiem, tika uzzīmēts noteikta tanīnu satura atkarības grafiks no pētāmā augu materiāla parauga svara (2. att.) un aprēķināts korelācijas koeficients.
Rīsi. 2. Atrastā tanīnu daudzuma atkarības grafiks no parastās manšetes gaissusinātas izejvielas parauga masas.
Aprēķinātais korelācijas koeficients nepārsniedza 0,95, kas norāda uz pētāmo vielu satura noteikšanas rezultātu linearitāti no analizētā augu materiāla parauga masas noteiktajā koncentrācijas diapazonā.
Tanīnu kvantitatīvās noteikšanas rezultāti parastās mantijas zāles gaissusinātās izejvielās ar spektrofotometrisko metodi parādīti tabulā. 4.
4. tabula. Tanīnu kvantitatīvās noteikšanas rezultāti ar spektrofotometriju
|
Parauga svars, g |
Šķīduma optiskais blīvums |
Atrasts tanīnu daudzums, % (X i) |
Metroloģiskās īpašības |
|
|
1,02755 |
0,5957 |
7,30920 |
7,87340 |
7,84%
|
|
0,99745 |
0,6130 |
7,52147 |
8,34656 |
|
|
1,0068 |
0,5678 |
6,96687 |
7,65932 |
|
|
0,99580 |
0,5742 |
7,04539 |
7,83120 |
|
|
1,0060 |
0,5750 |
7,05521 |
7,76261 |
|
|
1,00670 |
0,5617 |
6,89202 |
7,57779 |
Vidējais tanīnu saturs augu izejvielās ir 7,8% ar relatīvo standartnovirzi (0,034%), kas nepārsniedz 2%, kas raksturo apmierinošu rezultātu konverģenci.
Lai noteiktu procedūras pareizību, tika izmantota pievienošanas metode. Šim nolūkam kolbā ar primāro acetona ekstrakciju pievienoja 1 ml 0,05%, 0,1% un 0,15% CO tanīna šķīduma, un pēc tam katrai koncentrācijai trīs reizes veica tanīnu kvantitatīvo noteikšanu. Pētījumu rezultāti ir parādīti tabulā. 5.
Patenta RU 2439568 īpašnieki:
Izgudrojums attiecas uz farmakoloģijas jomu, un to var izmantot, lai noteiktu tanīnus augu materiālos. Metode tanīnu noteikšanai augu izejvielās ir tāda, ka izejvielas paraugu ekstrahē ar verdošu ūdeni, atdzesē, filtrē, alikvotās parauga daļas optisko blīvumu mēra pie viļņa garuma 277 nm un visu vērtību summas saturu. tanīnus aprēķina pēc noteiktas formulas, pēc tam filtrātu pievieno alikvotai paraugam. 1% kolagēna šķīdumu 1% etiķskābē sakrata, filtrē, mēra filtrāta optisko blīvumu pie viļņa garuma 277 nm un saturu. nogulsnēto tanīnu daudzumu aprēķina pēc noteiktas formulas. Metode dod iespēju palielināt tanīnu satura noteikšanas precizitāti augu materiālos un selektīvi noteikt nogulsnētos un neizgulsnētos tanīnus augu materiālos.
Izgudrojums attiecas uz ķīmijas un farmācijas rūpniecību, farmakognozijas un farmaceitiskās ķīmijas jomu, un to var izmantot, lai kontrolētu tanīnus saturošu augu izejvielu kvalitāti.
Ir zināma metode tanīnu noteikšanai ārstniecības augu izejmateriālos (MPS) ar kulometriju tanīna izteiksmē (S.G. Abdullina et al. Tanīnu kulonometriskā noteikšana ārstniecības augu izejmateriālos. // Aptieka. Nr. 4. - 2010. - P.13 -15).
Šīs metodes trūkums ir papildu aprīkojuma (kulonometra), specifiska titranta (kālija hipojodīda) izmantošana, kas pēc oksidējošām īpašībām ir tuvs kālija permanganātam un neļauj atšķirt tanīnus ar augstu un zemu molekulmasu.
Ir arī zināma metode tanīna un gallskābes atvasinājumu satura noteikšanai tējā, izmantojot konduktometriju (Patents Nr. 2127878. Metode atsevišķai tanīna un katehīnu (gallskābes izteiksmē) noteikšanai tējā. M.: 1999).
Šīs metodes trūkums ir toksisku organisko šķīdinātāju (izobutilspirta) izmantošana, kā arī krāsu reakcijas izmantošana ar Fe (III), kura produkts ir krāsains savienojums, kura krāsa laika gaitā ir nestabila.
Ir arī zināma metode tanīnu kvantitatīvai noteikšanai attiecībā uz tanīnu makreles un sumaka lapās ar kompleksometriju pēc tanīnu nogulsnēšanas ar cinka sāļiem (GOST 4564-79. Makreles lapa. Tehniskie nosacījumi; GOST 4565-79. Sumaka lapa. Tehniskie nosacījumi).
Šīs metodes trūkums ir analīzes ilgums un grūtības noteikt ekvivalences punktu.
Ir arī zināma metode tanīnu kvantitatīvai noteikšanai ar spektrofotometrisko metodi pēc reakcijas ar Folina-Čokaltē reaģentu gallskābes izteiksmē (Bioloģiski aktīvo pārtikas piedevu kvalitātes kontroles un drošības metožu ceļvedis. Rokasgrāmata. R 4.1.1672 -03. - M. - 2004 . - 94.-95.lpp).
Šīs metodes trūkums ir neiespējamība atsevišķi noteikt zemas un augstas molekulārās tanīnus.
Piedāvātajai metodei vistuvākā ir tā, ka tanīnus nosaka ar spektrofotometriju gallskābes izteiksmē (Ceļvedis bioloģiski aktīvo pārtikas piedevu kvalitātes kontroles un drošuma metodēm. Rokasgrāmata. R 4.1.1672-03. - M. - 2004 g. - 120. lpp.).
Šīs metodes trūkums ir testa parauga atkārtota atšķaidīšana, kā rezultātā ir grūti noteikt tanīnu koncentrāciju šķīdumā. Arī šajā metodē atsauces šķīdums ir buferšķīdums, kas sarežģī analīzi. Turklāt šī metode neļauj atsevišķi noteikt mazmolekulāro un lielmolekulāro tanīnu saturu.
Izgudrojuma mērķis ir palielināt tanīnu noteikšanas precizitāti un iespēju atsevišķi noteikt nogulsnētos un neizgulsnētos tanīnus augu izejvielās.
Problēma tiek atrisināta, ekstrahējot izejvielu paraugu ar verdošu ūdeni, atdzesējot, filtrējot, izmērot parauga alikvotas daļas optisko blīvumu pie viļņa garuma 277 nm un aprēķinot visu tanīnu summas saturu, izmantojot formulu.
50 - kolbas tilpums, ml,
W - izejvielu mitrums, %,
filtrāta alikvotajai daļai pievieno 1% kolagēna šķīdumu 1% etiķskābē, sakrata, filtrē, mēra filtrāta optisko blīvumu pie viļņa garuma 277 nm un aprēķina nogulsnēto tanīnu saturu, izmantojot formulu.
D 1 - 1. šķīduma optiskais blīvums,
D 2 - 2. šķīduma optiskais blīvums,
m nav - izejvielas masa, g,
V a - parauga alikvotās daļas tilpums, ml,
250 - kopējais ekstrakcijas tilpums, ml,
50 - kolbas tilpums, ml,
508 - gallskābes īpatnējais absorbcijas ātrums (1% gallskābes šķīduma optiskais blīvums 1 mg/ml),
W - izejvielu mitruma saturs, %.
Praksē metode tiek veikta šādi. Apmēram 2,0 (precīzi nosvērtas) sasmalcinātas izejvielas, izsijātas caur sietu ar cauruma diametru 3 mm, ievieto 500 ml tilpuma kolbā, aplej ar 250 ml ūdens, kas uzkarsēts līdz vārīšanās temperatūrai un vāra 30 minūtes plkst. ar atteci, laiku pa laikam maisot. Atdzesē līdz istabas temperatūrai, pievieno ūdeni līdz 250 ml, filtrē caur vati, lai izejvielu daļiņas neiekļūtu ūdens ekstraktā. Pirmos 50 ml filtrāta izmet.
Ievieto 1–4 ml ūdens ekstrakta 50 ml mērkolbā un atšķaida ar ūdeni līdz atzīmei (1. šķīdums). Šķīduma 1 optiskais blīvums tiek mērīts pie viļņa garuma 277 nm. Salīdzinājumam tiek izmantots ūdens.
30 ml ūdens ekstrakta ievieto mērtraukā ar tilpumu 50 ml, pievieno 2-10 ml nokrišņu reaģenta, krata 30-60 minūtes, nostādina, filtrē. 1-4 ml iegūtā filtrāta pārnes 50 ml kolbā un atšķaida ar ūdeni līdz atzīmei (2. šķīdums). Šķīduma 2 optiskais blīvums tiek mērīts pie viļņa garuma 277 nm. Salīdzinājumam tiek izmantots ūdens.
Izgudrojumu ilustrē šādi piemēri.
1. piemērs. Analīzei tika ņemts augu materiāls - ozola miza.
Apmēram 2,0 (precīzi nosvērtas) sasmalcinātas neapstrādātas ozola mizas, izsijātas caur sietu ar cauruma diametru 3 mm, ievieto 500 ml tilpuma kolbā, aplej ar 250 ml līdz vārīšanās temperatūrai uzkarsēta ūdens un vāra 30 minūtes. ar atteci, laiku pa laikam maisot. Atdzesē līdz istabas temperatūrai, pievieno ūdeni līdz 250 ml, filtrē caur vati, lai izejvielu daļiņas neiekļūtu ūdens ekstraktā. Pirmos 50 ml filtrāta izmet.
2 ml ūdens ekstrakta no ozola mizas ievieto 50 ml mērkolbā un noregulē līdz atzīmei ar ūdeni (1. šķīdums). Šķīduma 1 optiskais blīvums tiek mērīts pie viļņa garuma 277 nm. Salīdzinājumam tiek izmantots ūdens. D 1 ozola mizai ir 0,595.
30 ml ūdens ekstrakta ievieto mērtraukā ar tilpumu 50 ml, pievieno 2 ml nogulsnēšanas reaģenta, krata 30 minūtes, nostādina, filtrē. 2 ml iegūtā filtrāta pārnes 50 ml kolbā un atšķaida ar ūdeni līdz atzīmei (2. šķīdums). Šķīduma 2 optiskais blīvums tiek mērīts pie viļņa garuma 277 nm. Salīdzinājumam tiek izmantots ūdens. D 2 ozola mizai ir 0,276.
2. piemērs. Analīzei tika ņemtas augu izejvielas no serpentīna auga sakneņiem.
Apmēram 2,0 (precīzi nosvērtas) serpentīna sakneņu sasmalcinātas izejvielas, izsijātas caur sietu ar cauruma diametru 3 mm, ievieto 500 ml tilpuma kolbā, ielej ar 250 ml ūdens, kas uzkarsēts līdz temperatūrai. uzvāra un vāra 30 minūtes ar atteci, laiku pa laikam maisot. Atdzesē līdz istabas temperatūrai, pievieno ūdeni līdz 250 ml, filtrē caur vati, lai izejvielu daļiņas neiekļūtu ūdens ekstraktā. Pirmos 50 ml filtrāta izmet.
1 ml ūdens ekstrakta no serpentīna sakneņa ievieto 50 ml mērkolbā un noregulē līdz atzīmei ar ūdeni (1. šķīdums). Šķīduma 1 optiskais blīvums tiek mērīts pie viļņa garuma 277 nm. Salīdzinājumam tiek izmantots ūdens.
30 ml ūdens ekstrakta ievieto mērtraukā ar tilpumu 50 ml, pievieno 7 ml nogulsnēšanas reaģenta, krata 60 minūtes, nostādina, filtrē. 1 ml iegūtā filtrāta pārnes 50 ml kolbā un atšķaida ar ūdeni līdz atzīmei (2. šķīdums). Šķīduma 2 optiskais blīvums tiek mērīts pie viļņa garuma 277 nm. Salīdzinājumam tiek izmantots ūdens.
Piedāvātā metode ļauj palielināt tanīnu satura noteikšanas precizitāti augu materiālos un selektīvi noteikt nogulsnētos un neizgulsnētos tanīnus augu materiālos.
Metode augu izejvielu tanīnu noteikšanai gallskābes izteiksmē, kas sastāv no izejvielu parauga ekstrahēšanas ar verdošu ūdeni, atdzesēšanu, filtrēšanu, alikvotas parauga optiskā blīvuma mērīšanu pie viļņa garuma 277 nm un satura aprēķināšanu. no visu tanīnu summas, izmantojot formulu: 
kur x a ir kopējo tanīnu saturs gallskābes izteiksmē, %;
50 - kolbas tilpums, ml;
508 - gallskābes īpatnējais uzsūkšanās ātrums (1% gallskābes šķīduma optiskais blīvums 1 mg/ml);
W - izejvielu mitrums, %,
filtrāta alikvotajai daļai pievieno 1% kolagēna šķīdumu 1% etiķskābē, sakrata, filtrē, mēra filtrāta optisko blīvumu pie viļņa garuma 277 nm un aprēķina nogulsnēto tanīnu saturu, izmantojot formulu. : 
kur X ir izgulsnēto tanīnu saturs gallskābes izteiksmē, %;
D 1 - 1. šķīduma optiskais blīvums;
D 2 - 2. šķīduma optiskais blīvums;
m nav - izejvielas masa, g;
V a - parauga alikvotās daļas tilpums, ml;
250 - kopējais ekstrakcijas tilpums, ml;
50 - kolbas tilpums, ml;
508 - gallskābes īpatnējās absorbcijas ātrums (1% gallskābes šķīduma optiskais blīvums 1 mg/ml);
W - izejvielu mitruma saturs, %.
Līdzīgi patenti:
Izgudrojums attiecas uz medicīnu, proti, uz psihoneiroloģiju, un apraksta metodi neiroloģisko funkciju atveseļošanās prognozēšanai pacientiem išēmiskā insulta akūtā periodā, veicot klīniskos un bioķīmiskos pētījumus par albumīna (TAC) kopējo koncentrāciju asins serumā g. /l, kur papildus 5-7 Slimības dienā nosaka efektīvo albumīna koncentrāciju (ECA), aprēķina albumīna saistošo rezervi (ABR) un, ja šis rādītājs ir mazāks par vienu, negatīvs rezultāts atjaunošanā. tiek prognozēta neiroloģisko funkciju uzlabošanās pacientiem išēmiskā insulta akūtā periodā.
Izgudrojums attiecas uz medicīnu, uz bioloģiskajiem pētījumiem onkoloģijā, un to var izmantot ļaundabīga procesa attīstības noteikšanai smadzeņu audzējos pēc ķirurģiskas ārstēšanas.
Izgudrojums attiecas uz medicīnas jomu, konkrēti uz onkoloģiju, un apraksta metodi urīnpūšļa vēža neoadjuvantās ķīmijterapijas efektivitātes novērtēšanai, izmeklējot pacientu, kurā tiek noteikta maksimālā audzēja audu autofluorescences intensitāte spektra zaļajā apgabalā. reģistrēts primārās diagnozes stadijā un 1 mēnesi pēc pirmsoperācijas ķīmijterapijas un, kad pacientam audzēja audu autofluorescences maksimālā intensitāte palielinās par 15% no sākotnējām vērtībām vai vairāk, ārstēšanas efektivitāti novērtē kā daļēju regresiju. audzēja process; ja audzēja audu autofluorescences intensitāte nemainās no sākotnējām vērtībām, tiek noteikta procesa stabilizācija; kad audzēja audu autofluorescences intensitāte samazinās par 15% un vairāk no sākotnējām, progresē audzēja audu autofluorescences intensitāte. tiek atzīmēts audzēja process.
Notiek ielāde...