Vai perisinusoidālās šūnas varētu būt reģionālās aknu cilmes šūnas? Pētījums par aknu šūnu ietekmi uz cilmes šūnām Zvaigžņu šūnas

Gēni un šūnas: V sējums, 1. nr., 2010, 33.–40. lpp.

Autori

Gumerova A., Kijasovs A.P.

Reģeneratīvā medicīna ir viena no visstraujāk augošajām un perspektīvākajām medicīnas jomām, kuras pamatā ir principiāli jauna pieeja bojāta orgāna atjaunošanai, stimulējot un (vai) izmantojot cilmes (cilmes) šūnas, lai paātrinātu atjaunošanos. Lai īstenotu šo pieeju, ir jāzina, kas ir cilmes šūnas un jo īpaši reģionālās cilmes šūnas, kāds ir to fenotips un iedarbība. Vairākiem audiem un orgāniem, piemēram, epidermai un skeleta muskuļiem, jau ir identificētas cilmes šūnas un aprakstītas to nišas. Taču aknas, orgāns, kura atjaunošanās spējas ir zināmas kopš seniem laikiem, savu galveno noslēpumu – cilmes šūnas noslēpumu – vēl nav atklājušas. Šajā pārskatā, pamatojoties uz mūsu pašu un literatūras datiem, mēs apspriežam hipotēzi, ka perisinusoidālās zvaigžņu šūnas var pretendēt uz aknu cilmes šūnu lomu.

Perisinusoidālās aknu šūnas (Ito šūnas, zvaigžņu šūnas, lipocīti, taukus uzkrājošās šūnas, A vitamīnu uzkrājošās šūnas) ir viens no noslēpumainākajiem aknu šūnu veidiem. Šo šūnu izpētes vēsture sniedzas vairāk nekā 130 gadus senā pagātnē, un joprojām ir daudz vairāk jautājumu par to fenotipu un funkcijām nekā atbilžu. Šūnas 1876. gadā aprakstīja Kupfers, ko viņš nosauca par zvaigžņu šūnām un klasificēja kā makrofāgus. Vēlāk īstie mazkustīgie aknu makrofāgi saņēma nosaukumu Kupffer.

Ir vispārpieņemts, ka Ito šūnas atrodas Disse telpā tiešā saskarē ar hepatocītiem, uzkrāj A vitamīnu un spēj ražot starpšūnu vielas makromolekulas, kā arī, kam ir kontrakta aktivitāte, regulē asins plūsmu sinusoidālajos kapilāros, piemēram, pericītos. Zelta standarts Ito šūnu identificēšanai dzīvniekiem ir identificēt muskuļu audiem raksturīgo citoskeleta starpposma pavedienu proteīnu, desmīnu. Citi diezgan izplatīti šo šūnu marķieri ir neironu diferenciācijas marķieri - glia fibrilārās skābes proteīns (GFAP) un nestīns.

Gari gadi Ito šūnas tika ņemtas vērā tikai no to līdzdalības viedokļa aknu fibrozes un cirozes attīstībā. Tas ir saistīts ar faktu, ka tad, kad aknas ir bojātas, vienmēr notiek šo šūnu aktivācija, kas sastāv no pastiprinātas desmīna ekspresijas, proliferācijas un transdiferenciācijas par miofibroblastiem līdzīgām šūnām, kas ekspresē gludo muskuļu aktīnu (--SMA) un sintezē. ievērojams daudzums starpšūnu vielas, jo īpaši I tipa kolagēna. Tieši šādu aktivētu Ito šūnu darbība, pēc daudzu pētnieku domām, noved pie aknu fibrozes un cirozes attīstības.

No otras puses, pamazām krājas fakti, kas ļauj paskatīties uz Ito šūnām no pavisam negaidītām pozīcijām, proti, kā uz svarīgāko mikrovides sastāvdaļu hepatocītu, holangiocītu un asins šūnu attīstībai hematopoēzes aknu stadijā, un , turklāt kā iespējamās cilmes šūnas (aknu cilmes šūnas. Šī pārskata mērķis ir analizēt mūsdienu datus un uzskatus par šo šūnu raksturu un funkcionālo nozīmi, novērtējot to iespējamo piederību aknu cilmes šūnu (cilmes šūnu) populācijā.

Ito šūnas ir vissvarīgākais dalībnieks parenhīmas atjaunošanā aknu reģenerācijas laikā, pateicoties to radītajām starpšūnu matricas makromolekulām un tās pārveidošanai, kā arī augšanas faktoru ražošanai. Pirmās šaubas par iedibinātās teorijas patiesumu, kurā Ito šūnas tiek uzskatītas tikai par galvenajām aknu fibrozes vaininiekiem, radās, kad tika konstatēts, ka šīs šūnas ražo ievērojamu skaitu morfogēno citokīnu. Starp tiem ievērojamu grupu veido citokīni, kas ir potenciāli hepatocītu mitogēni.

Svarīgākais šajā grupā ir hepatocītu augšanas faktors – hepatocītu mitogēns, kas nepieciešams proliferācijai, izdzīvošanai un šūnu kustībai (to sauc arī par izkliedes faktoru. Šī augšanas faktora un (vai) tā receptora C-met defekts pelēm noved pie aknu hipoplāzija un tās parenhīmas iznīcināšana hepatoblastu proliferācijas nomākšanas, palielinātas apoptozes un nepietiekamas šūnu adhēzijas rezultātā.

Papildus hepatocītu augšanas faktoram Ito šūnas ražo cilmes šūnu faktoru. Tas tika parādīts aknu reģenerācijas modelī pēc daļējas hepatektomijas un 2-acetoaminofluorēna iedarbības. Ir arī noskaidrots, ka Ito šūnas izdala transformējošo augšanas faktoru un epidermas augšanas faktoru, kam ir svarīga loma gan hepatocītu proliferācijā reģenerācijas laikā, gan stimulē pašu Ito šūnu mitozi. Hepatocītu proliferāciju izraisa arī Ito šūnu ekspresētais mezenhimālais morfogēnais proteīns epimorfīns, kas tajās parādās pēc daļējas hepatektomijas, un pleiotropīns.

Papildus parakrīnajiem hepatocītu un Ito šūnu mijiedarbības mehānismiem zināma loma ir arī šo šūnu tiešiem starpšūnu kontaktiem ar hepatocītiem. Starpšūnu kontaktu nozīme starp Ito šūnām un epitēlija cilmes šūnām tika pierādīta in vitro, kad jauktā kultūra izrādījās efektīvāka, diferencējot pēdējos albumīnu ražojošos hepatocītos nekā ar membrānu atdalītu šūnu kultūru, kur tās varēja apmainīties tikai ar šķīstošiem faktoriem, izmantojot kultūras barotni. Izolēts no peļu augļa aknām 13.5. dienā. grūsnības, mezenhimālās šūnas ar Thy-1+/С049!±/vimentin+/desmin+/ --GMA+ fenotipu pēc tiešu starpšūnu kontaktu nodibināšanas stimulēja primitīvu aknu endodermālo šūnu populācijas diferenciāciju - hepatocītos (satur glikogēnu, ekspresē m -RNS tirozīna aminotransferāzes un triptofāna skābekļa nosaukumi). Thy-1+/desmin+ mezenhimālo šūnu populācija neizpauda hepatocītu, endotēlija un Kupfera šūnu marķierus, un acīmredzot tos īpaši pārstāvēja Ito šūnas. In vivo žurku un cilvēka pirmsdzemdību aknās ir novērots augsts desmīna pozitīvo Ito šūnu blīvums un to izvietojums ciešā saskarē ar diferencējošiem hepatocītiem. Tādējādi visi šie fakti ļauj secināt, ka šis šūnu tips ir vissvarīgākā mikrovides sastāvdaļa, kas nepieciešama normāla attīstība hepatocīti ontoģenēzē un to atjaunošana reparatīvās reģenerācijas procesā.

IN pēdējie gadi Tika iegūti dati, kas liecina par Ito šūnu būtisku ietekmi uz hematopoētisko cilmes šūnu diferenciāciju. Tādējādi Ito šūnas ražo eritropoetīnu un neirotrofīnu, kas ietekmē ne tikai aknu epitēlija šūnu, bet arī hematopoētisko cilmes šūnu diferenciāciju. Augļa hematopoēzes pētījums žurkām un cilvēkiem parādīja, ka tieši šīs šūnas veido hematopoētisko salu mikrovidi aknās. Ito šūnas ekspresē asinsvadu šūnu adhēzijas molekulu-1 (VCAM-1), kas ir galvenā molekula hematopoētisko priekšteču adhēzijas uzturēšanai ar kaulu smadzeņu stromas šūnām. Turklāt tie arī ekspresē stromas atvasinātu faktoru-1 (SDF-1-) - potenciālu hematopoētisko cilmes šūnu ķīmisko atraktantu, stimulējot to migrāciju uz hematopoēzes vietu mijiedarbības ar specifisko receptoru Cystein-X- Cystein receptor 4 dēļ ( CXR4), kā arī homeoboksa proteīns Hlx, ja tas ir bojāts, tiek traucēta gan pašu aknu attīstība, gan aknu hematopoēze. Visticamāk, tieši VCAM-1 un SDF-1a ekspresija uz augļa Ito šūnām ir tas, kas izraisa hematopoētisko cilmes šūnu piesaisti augļa aknām turpmākai diferenciācijai. Ito šūnu uzkrātie retinoīdi ir arī svarīgs hematopoētisko šūnu un epitēlija morfoģenēzes faktors. Nevar nepieminēt Ito šūnu ietekmi uz mezenhimālajām cilmes šūnām. Ito šūnas, kas izolētas no žurku aknām un pilnībā aktivizētas, modulē kaulu smadzeņu mezenhimālo cilmes šūnu (multipotentu mezenhimālo stromas šūnu) diferenciāciju hepatocītiem līdzīgās šūnās (akumulē glikogēnu un ekspresē tetāzi un fosfoenolpiruvāta karboksikināzi) pēc 2 nedēļām. kopaudzēšana.

Tādējādi uzkrātie zinātniskie pierādījumi ļauj secināt, ka Ito šūnas ir viens no svarīgākajiem šūnu veidiem, kas nepieciešami aknu attīstībai un atjaunošanai. Tieši šīs šūnas veido mikrovidi gan augļa aknu hematopoēzei, gan hepatocītu diferenciācijai pirmsdzemdību attīstības laikā, kā arī epitēlija un mezenhimālo cilmes šūnu diferenciācijai par hepatocītiem in vitro. Pašlaik šie dati nav apšaubāmi, un tos pieņem visi aknu pētnieki. Kas tad kalpoja par sākumpunktu raksta nosaukumā izvirzītās hipotēzes rašanās brīdim?

Pirmkārt, tā parādīšanos veicināja šūnu identificēšana aknās, kas ekspresē gan hepatocītu epitēlija marķierus, gan Ito šūnu mezenhimālos marķierus. Pirmais darbs šajā jomā tika veikts, pētot zīdītāju aknu pirmsdzemdību histo- un organoģenēzi. Tieši attīstības process ir galvenais notikums, kura izpēte ļauj izsekot dabas apstākļi dažādu orgānu šūnu tipu galīgā fenotipa primārās veidošanās dinamika, izmantojot specifiskus marķierus. Pašlaik šādu marķieru klāsts ir diezgan plašs. Darbos, kas veltīti šī jautājuma izpētei, tika izmantoti dažādi mezenhimālo un epitēlija šūnu marķieri, atsevišķas aknu šūnu populācijas un cilmes (ieskaitot asinsrades) šūnas.

Veiktajos pētījumos tika konstatēts, ka žurku augļu desmīna pozitīvas Ito šūnas īslaicīgi 14.-15. dienā. gestācijas izsaka hepatoblastiem raksturīgos epitēlija marķierus, piemēram, citokeratīnus 8 un 18. No otras puses, hepatoblasti attīstības laikā izsaka Ito šūnu marķieri desmīnu. Tas ļāva izdarīt pieņēmumu, ka aknās intrauterīnās attīstības laikā ir šūnas ar pārejas fenotipu, kas ekspresē gan mezenhimālos, gan epitēlija marķierus, un tāpēc apsvērt iespēju attīstīt Ito šūnas un hepatocītus no viena avota un (vai) uzskatīt šīs šūnas par vienu un to pašu šūnu tipu dažādās attīstības stadijās. Turpmākie histoģenēzes pētījumi, kas veikti ar cilvēka embrija aknu materiālu, parādīja, ka 4-8 nedēļu laikā. cilvēka aknu intrauterīnā attīstība, Ito šūnas ekspresēja citokeratīnus 18 un 19, ko apstiprināja dubultā imūnhistoķīmiskā krāsošana, un hepatoblastos tika konstatēta vāja pozitīva desmīna krāsošana.

Tomēr 2000. gadā publicētajā pētījumā autori nespēja noteikt desmīna ekspresiju hepatoblastos peļu augļu aknās un E-kadherīnu un citokeratīnus Ito šūnās. Autori ieguva pozitīvu citokeratīnu krāsojumu Ito šūnās tikai nelielā daļā gadījumu, ko viņi saistīja ar primāro antivielu nespecifisku krustenisku reakciju. Šo antivielu izvēle ir nedaudz mulsinoša - darbā tika izmantotas antivielas pret vistas desmīnu un liellopu citokeratīniem 8 un 18.

Papildus desmīnam un citokeratīniem kopīgs Ito šūnu un peļu un žurku augļa hepatoblastu marķieris ir vēl viens mezenhimālais marķieris - asinsvadu šūnu adhēzijas molekula VCAM-1. VCAM-1 ir unikāls virsmas marķieris, kas atšķir Ito šūnas no miofibroblastiem pieaugušo žurku aknās un atrodas arī uz dažām citām mezenhimālas izcelsmes aknu šūnām, piemēram, endotēlija šūnām vai miogēnām šūnām.

Vēl viens pierādījums par labu aplūkotajai hipotēzei ir mezenhimāli epitēlija transdiferenciācijas (pārveidošanas) iespēja Ito šūnām, kas izolētas no pieaugušo žurku aknām. Jāatzīmē, ka literatūrā galvenokārt tiek apspriesta epitēlija-mezenhimālā, nevis mezenhimālā-epitēlija transdiferenciācija, lai gan abi virzieni tiek atzīti par iespējamiem, un bieži vien pats termins "epitēlija-mezenhimālā transdiferenciācija" tiek lietots, lai apzīmētu transdiferenciāciju jebkurā virzienā. Analizējot m-RNS un atbilstošo proteīnu ekspresijas profilu Ito šūnās, kas izolētas no pieaugušo žurku aknām pēc oglekļa tetrahlorīda (CTC) iedarbības, autori tajās atrada gan mezenhimālos, gan epitēlija marķierus. Starp mezenhimālajiem marķieriem tika identificēts nestīns, --GMA un matricas metaloproteināze-2 (MMP-2), bet no epitēlija marķieriem - muskuļu piruvāta kināze (MPK), kas raksturīga ovālajām šūnām, citokeratīns 19, α-FP, E. -kadherīns, kā arī transkripcijas faktors Hepatocītu kodolfaktors 4- (HNF-4-), kas raksturīgs šūnām, kurām ir lemts kļūt par hepatocītiem. Tāpat tika konstatēts, ka cilvēka epitēlija aknu cilmes šūnu primārajā kultūrā notiek Ito šūnu marķieru m-RNS ekspresija - nestin, GFAP - epitēlija priekšteči koekspresē gan epitēlija, gan mezenhimālo marķieru. Mezenhimālas-epitēlija transdiferenciācijas iespējamību apstiprina ar integrīnu saistītās kināzes (ILK) parādīšanās Ito šūnās, kas ir enzīms, kas nepieciešams šādai transdiferenciācijai.

Mezenhimālā-epitēlija transdiferenciācija tika atklāta arī mūsu in vitro eksperimentos, kur tika izmantota oriģināla pieeja, lai kultivētu tīru Ito šūnu populāciju, kas izolēta no žurku aknām, līdz izveidojās blīvs viens šūnu slānis. Pēc tam šūnas pārtrauca ekspresēt desmīnu un citus mezenhimālos marķierus, ieguva epitēlija šūnu morfoloģiju un sāka ekspresēt hepatocītiem raksturīgos marķierus, jo īpaši citokeratīnus 8 un 18. Līdzīgi rezultāti tika iegūti, organotipiski kultivējot žurku augļa aknas.

Pēdējā gada laikā ir publicēti divi raksti, kuros Ito šūnas tiek uzskatītas par ovālu šūnu apakštipu vai to atvasinājumiem. Ovālas šūnas ir mazas ovālas formas šūnas ar šauru citoplazmas malu, kas dažos toksisko aknu bojājumu modeļos parādās aknās un pašlaik tiek uzskatītas par bi-potentām cilmes šūnām, kas spēj diferencēties gan hepatocītos, gan holangiocītos. Pamatojoties uz faktu, ka gēni, ko ekspresē izolētas Ito šūnas, sakrīt ar gēniem, ko ekspresē ovālas šūnas, un noteiktos Ito šūnu kultivēšanas apstākļos parādās hepatocīti un žultsvadu šūnas, autori pārbaudīja hipotēzi, saskaņā ar kuru Ito šūnas ir ovālu šūnu veids, kas spēj radīt hepatocītus, lai atjaunotu bojātas aknas. Transgēnās GFAP-Cre / GFP (zaļās fluorescējošās olbaltumvielas) peles tika barotas ar metionīna holīna deficītu / ar etionīnu bagātinātu diētu, lai aktivizētu Ito šūnas un ovālas šūnas. Klusajām Ito šūnām bija GFAP+ fenotips. Pēc Ito šūnu aktivizēšanas ar traumu vai kultūru, to GFAP ekspresija samazinājās un viņi sāka ekspresēt ovālu un mezenhimālo šūnu marķierus. Ovālās šūnas pazuda, kad parādījās GFP+ hepatocīti, kas sāka ekspresēt albumīnu un galu galā aizstāja lielus aknu parenhīmas apgabalus. Pamatojoties uz saviem atklājumiem, autori izvirzīja hipotēzi, ka Ito šūnas ir ovālu šūnu apakštips, kas "mezenhimālā" fāzē diferencējas hepatocītos.

Eksperimentos, kas veikti ar to pašu ovālo šūnu aktivācijas modeli, kad pēdējās tika izolētas no žurku aknām, tika konstatēts, ka ovālās šūnas in vitro ekspresē ne tikai tradicionālos marķierus 0V-6, BD-1/BD-2 un M2RK un ekstracelulārās matricas marķieri, tostarp kolagēni, matricas metaloproteināzes un metaloproteināžu audu inhibitori - Ito šūnu marķieru pazīmes. Pēc šūnu pakļaušanas TGF-pl iedarbībai papildus augšanas un morfoloģisko izmaiņu nomākšanai, šo gēnu, kā arī desmīna un GFAP gēnu ekspresijas palielināšanās, transkripcijas faktora Gliemeža ekspresijas parādīšanās, kas atbild par epitēlija Tika atzīmēta mezenhimālā transdiferenciācija un E-kadherīna ekspresijas pārtraukšana, kas norāda uz ovālu šūnu “reversās” transdiferenciācijas iespēju Ito šūnās.

Tā kā ovālas šūnas tradicionāli tiek uzskatītas par hepatocītu un holangiocītu bipotentiem prekursoriem, ir mēģināts noskaidrot pārejas formu pastāvēšanas iespēju starp intrahepatisko žultsvadu epitēlija šūnām un Ito šūnām. Līdz ar to tika pierādīts, ka normālās un bojātās aknās mazās ductal tipa struktūras iekrāsojās pozitīvi Ito šūnu marķierim – GMA, tomēr rakstā sniegtajās fotogrāfijās, kas atspoguļo imunofluorescējošās krāsošanas rezultātus, ir iespējams noteikt, kas šīs - GMA+ kanālu struktūras - žultsvadi vai asinsvadi - nav iespējamas. Tomēr ir publicēti citi rezultāti, kas norāda uz Ito šūnu marķieru ekspresiju holangiocītos. Jau minētajā L. Yang darbā tika parādīta Ito šūnu marķiera GFAP ekspresija ar žultsvadu šūnām. Citoskeleta starpprodukta pavedienu proteīna sinemīns, kas atrodas normālos aknās Ito šūnās un asinsvadu šūnās, parādījās kanāla šūnās, kas bija iesaistītas ductular reakcijas attīstībā; tas tika izteikts arī holangiokarcinomas šūnās. Tātad, ja ir diezgan daudz dažādu pierādījumu par Ito šūnu un hepatocītu savstarpējas transdiferenciācijas iespējamību, tad ar holangiocītiem šādi novērojumi joprojām ir sporādiski un ne vienmēr viennozīmīgi.

Rezumējot, mēs varam teikt, ka mezenhimālo un epitēlija marķieru ekspresijas modeļi gan aknu histo- un organoģenēzes laikā, gan dažādos eksperimentālos apstākļos gan in vivo, gan in vitro norāda uz iespējamību gan mezenhimāli-epitēlija, gan epitēlija-mezenhīmas nelielas pārejas starp Ito šūnām/ovālajām šūnām/hepatocītiem, un tādējādi ļauj Ito šūnas uzskatīt par vienu no hepatocītu attīstības avotiem. Iepriekš minētie fakti neapšaubāmi norāda uz nesaraujamu saikni starp šiem šūnu veidiem, kā arī norāda uz ievērojamu Ito šūnu fenotipisko plastiskumu. Par šo šūnu fenomenālo plastiskumu liecina vairāku nervu proteīnu ekspresija, piemēram, jau pieminētais GFAP, nestīns, neirotrofīni un to receptori, neironu šūnu adhēzijas molekula (N-CAM), sinaptofizīns, nervu augšanas faktors (Neural). augšanas faktors, NGF), smadzeņu atvasinātais neirotrofiskais faktors (BDNF), uz kura pamata vairāki autori apspriež iespēju attīstīt Ito šūnas no nervu cekulas. Tomēr pēdējās desmitgades laikā milzīgu pētnieku uzmanību ir piesaistījusi cita versija - proti, hepatocītu un Ito šūnu attīstības iespēja no hematopoētiskām un mezenhimālajām cilmes šūnām.

Pirmo darbu, kurā šī iespēja tika pierādīta, publicēja V.E. Petersen et al., kuri parādīja, ka hepatocīti spēj attīstīties no hematopoētiskās cilmes šūnas. Pēc tam šis fakts tika atkārtoti apstiprināts citu zinātnieku darbos, un nedaudz vēlāk tika parādīta mezenhimālo cilmes šūnu diferenciācijas iespēja hepatocītos. Joprojām nav skaidrs, kā tas notiek - saplūstot donora šūnām ar recipienta aknu šūnām vai ar to transdiferenciāciju. Tomēr mēs arī atklājām, ka cilvēka nabassaites asiņu hematopoētiskās cilmes šūnas, kad tās tiek transplantētas daļējas hepatektomijas žurku liesā, kolonizē aknas un spēj diferencēties hepatocītos un aknu sinusoidālās šūnās, par ko liecina cilvēka šūnu marķieru klātbūtne šajās šūnās. veidi. Turklāt mēs bijām pirmie, kas parādījām, ka provizoriska nabassaites asins šūnu ģenētiskā modifikācija būtiski neietekmē to izplatību un diferenciācijas spējas recipienta aknās pēc transplantācijas. Runājot par hepatocītu attīstības iespēju no hematopoētiskajām cilmes šūnām pirmsdzemdību histoģenēzes laikā, lai gan šo iespēju nevar pilnībā izslēgt, tā tomēr šķiet maz ticama, jo šo šūnu morfoloģija, lokalizācija un fenotips būtiski atšķiras no līdzīgiem aknu šūnu rādītājiem. Acīmredzot, ja šāds ceļš pastāv, tam nav būtiskas nozīmes epitēlija un sinusoidālo šūnu veidošanā ontoģenēzes laikā. Jaunāko pētījumu rezultāti, kas veikti gan in vivo, gan in vitro, ir radījuši šaubas par iedibināto teoriju par hepatocītu attīstību tikai no priekšējās zarnas endodermālā epitēlija, un tāpēc dabiski radās pieņēmums, ka aknu reģionālā cilmes šūna var atrodas starp tās mezenhimālajām šūnām. Vai šādas šūnas varētu būt Ito šūnas?

Ņemot vērā šo šūnu unikālās īpašības, to fenomenālo plastiskumu un šūnu esamību ar pārejas fenotipu no Ito šūnām uz hepatocītiem, mēs pieņemam, ka šīs šūnas ir galvenās kandidātes šai lomai. Papildu argumenti par labu šai iespējai ir tādi, ka šīs šūnas, tāpat kā hepatocīti, var veidoties no hematopoētiskām cilmes šūnām, un tās ir vienīgās aknu sinusoidālās šūnas, kas spēj ekspresēt cilmes (cilmes) šūnu marķierus.

2004. gadā tika noskaidrots, ka Ito šūnas var attīstīties arī no hematopoētiskās cilmes šūnas. Pēc kaulu smadzeņu šūnu transplantācijas no GFP pelēm recipientu peļu aknās parādījās GFP+ šūnas, kas ekspresē Ito šūnu marķieri GFAP, un šo šūnu procesi iekļuva starp hepatocītiem. Ja recipienta aknas bija bojātas ar CCU, transplantētās šūnas ekspresēja arī Ito blastām līdzīgas šūnas. Izdalot neparenhīmas šūnu frakciju no recipienta peļu aknām, GFP+ šūnas ar lipīdu pilieniem veidoja 33,4+2,3% no izolētajām šūnām; viņi izteica desmīnu un GFAP, un pēc 7 dienām. audzēšana

Savukārt kaulu smadzeņu šūnu transplantācijas rezultātā veidojas ne tikai Ito šūnas, bet arī I tipa kolagēna gēns, uz kā pamata secināts, ka šāda transplantācija veicina fibrozes attīstību. Tomēr ir arī darbi, kuros ir pierādīta aknu fibrozes samazināšanās sakarā ar transplantēto šūnu migrāciju šķiedru starpsienās un matricas metaloproteināzes-9 (Matrix Metalloproteinase-9, MMP-9) ražošanu šajās šūnās, kas ir viena no svarīgākās Ito šūnu īpašības. Mūsu provizoriskie dati arī parādīja miofibroblastu skaita samazināšanos un fibrozes līmeņa samazināšanos pēc perifēro asiņu mononukleāro šūnu daļas autotransplantācijas pacientiem ar hronisku hepatītu ar smagu aknu fibrozi. Turklāt hematopoētisko cilmes šūnu transplantācijas rezultātā saņēmēja aknās var parādīties citi šūnu veidi, kas spēj ražot ārpusšūnu matricu. Tādējādi aknu bojājuma gadījumā, ko izraisa žultsvadu ligēšana, transplantētās šūnas ir diferencēti fibrocīti, kas ekspresē kolagēnu, un tikai tad, ja tie tiek kultivēti TGF-pl klātbūtnē, tie ir diferencēti miofibroblasti, kas potenciāli veicina fibrozi. Tādējādi autori saistīja aknu fibrozes draudus pēc kaulu smadzeņu šūnu transplantācijas nevis ar Ito šūnām, bet ar "unikālu fibrocītu populāciju". Iegūto datu nekonsekvences dēļ radās diskusija par citu jautājumu - vai Ito šūnas, kas parādījās transplantēto asinsrades cilmes šūnu diferenciācijas rezultātā, veicinās fibrozes attīstību, vai arī tās nodrošinās pilnīgu aknu audu atjaunošanos. un fibrozes samazināšana. Pēdējos gados ir kļuvis acīmredzams (arī no iepriekš minētajiem datiem), ka miofibroblastu izcelsme aknās var būt atšķirīga - no Ito šūnām, no portāla trakta fibroblastiem un pat no hepatocītiem. Ir arī konstatēts, ka dažādas izcelsmes miofibroblasti atšķiras pēc vairākām īpašībām. Tādējādi aktivētās Ito šūnas atšķiras no portāla trakta miofibroblastiem ar vitamīnu saturu, saraušanās aktivitāti, reakciju uz citokīniem, īpaši TGF-p, un spēju iziet spontānu apoptozi. Turklāt šīs šūnu populācijas ir atšķirīgas un var izteikt asinsvadu šūnu adhēzijas molekulu VCAM-1, kas atrodas uz Ito šūnām un nav uz miofibroblastiem. Jāpiebilst arī, ka papildus starpšūnu matricas proteīnu ražošanai aktivētās Ito šūnas ražo arī matricas metaloproteināzes, kas šo matricu iznīcina. Tādējādi Ito šūnu, tostarp to, kas veidojas no hematopoētiskajām cilmes šūnām, loma fibrozes attīstībā nebūt nav tik skaidra, kā tika uzskatīts iepriekš. Acīmredzot tie ne tik daudz veicina fibrozi, cik pārveido starpšūnu matricu aknu atjaunošanas procesā pēc bojājumiem, tādējādi nodrošinot saistaudu karkasu parenhīmas aknu šūnu atjaunošanai.

normālas un bojātas žurku aknas. Žurku Ito šūnas ekspresē arī citu cilmes (cilmes) šūnu marķieri - CD133, un demonstrē cilmes šūnu īpašības, kas atkarībā no apstākļiem spēj diferencēties dažādos - 2) ar citokīnu pievienošanu, kas veicina diferenciāciju endotēlija šūnās, veido. sazarotas cauruļveida struktūras ar marķiera ekspresijas indukciju endotēlija šūnām - endotēlija NO sintāze un asinsvadu endotēlija kadherīns; 3) lietojot citokīnus, kas veicina cilmes šūnu diferenciāciju hepatocītos - apaļās šūnās, kas ekspresē hepatocītu marķierus - FP un albumīnu. Žurku Ito šūnas arī ekspresē 0ct4, kas ir raksturīgs pluripotentām cilmes šūnām. Interesanti, ka tikai daļu no Ito šūnu populācijas varēja izolēt ar magnētisko šķirotāju, izmantojot anti-CD133 antivielas, bet pēc standarta (pronāzes / kolagenāzes) izolācijas visas plastmasas pielipušās šūnas ekspresēja CD133 un 0kt4. Cits cilmes šūnu marķieris Bcl-2 tiek ekspresēts ar desmin+ šūnām cilvēka aknu pirmsdzemdību attīstības laikā.

Tādējādi dažādi pētnieki ir parādījuši iespēju, ka Ito šūnas ekspresē noteiktus cilmes (cilmes) šūnu marķierus. Turklāt nesen tika publicēts raksts, kurā pirmo reizi tika izvirzīta hipotēze, ka Disse telpa, ko veido bazālās membrānas proteīni, endotēlija šūnas un hepatocīti, kurā atrodas Ito šūnas, var veidot pēdējiem mikrovidi, kas darbojas kā “ niša” cilmes šūnu. Par to liecina vairākas pazīmes, kas raksturīgas tabulas šūnu nišai un identificētas Ito šūnu mikrovides komponentos. Tādējādi šūnām, kas atrodas tiešā cilmes šūnas tuvumā, ir jārada šķīstošie faktori, kā arī jāveic tieša mijiedarbība, kas notur cilmes šūnu nediferencētā stāvoklī un nosprosto to nišā, kas bieži atrodas uz bazālās membrānas. Patiešām, aknu sinusoidālo kapilāru endotēlija šūnas sintezē šķīstošo SDF-1, kas īpaši saistās ar Ito šūnu receptoru CXR4 un stimulē šo šūnu migrāciju in vitro . Šai mijiedarbībai ir galvenā loma hematopoētisko cilmes šūnu migrācijā uz to galīgo nišu kaulu smadzenēs un pastāvīgā dzīvesvietā ontoģenēzes laikā, kā arī to mobilizēšanā perifērās asinis. Ir loģiski pieņemt, ka šādai mijiedarbībai var būt līdzīga loma aknās, saglabājot Ito šūnas Disse telpā. Aknu reģenerācijas sākumposmā palielināta SDF-1 ekspresija var arī veicināt papildu cilmes šūnu nodalījumu piesaisti organismā. Nišas šūnu inervācijā jāiesaista simpātiskā nervu sistēma, kas ir iesaistīta hematopoētisko cilmes šūnu piesaistes regulēšanā. Simpātiskās nervu sistēmas noradrenerģiskajiem signāliem ir izšķiroša nozīme GCSF (Granulocītu koloniju stimulējošā faktora izraisītā hematopoētisko cilmes šūnu mobilizācija no kaulu smadzenēm. Nervu galu atrašanās vieta tiešā Ito šūnu tuvumā ir apstiprināta vairākos pētījumos. Ir arī atklāts, ka, reaģējot uz simpātisko stimulāciju, Ito šūnas izdala prostaglandīnus F2a un D, ​​kas aktivizē glikogenolīzi tuvējās parenhīmas šūnās. Šie fakti liecina, ka simpātiskā nervu sistēma var ietekmēt Ito šūnu nišu. Vēl viena cilmes šūnas funkcija. niša ir "lēna" šūnu cikla un nediferencēta cilmes šūnu stāvokļa uzturēšana Ito šūnu nediferencēta stāvokļa saglabāšanu in vitro veicina parenhīmas aknu šūnas - kultivējot šīs divas ar membrānu atdalītas šūnu populācijas, Ito šūnas. saglabā cilmes šūnu marķieru CD133 un 0kt4 ekspresiju, savukārt, ja nav hepatocītu, Ito šūnas iegūst miofibroblastu fenotipu un zaudē cilmes šūnu marķierus. Tādējādi cilmes šūnu marķieru ekspresija nepārprotami ir kluso Ito šūnu pazīme. Ir arī noskaidrots, ka parenhīmas šūnu ietekme uz Ito šūnām var būt balstīta uz hepatocītu sintezēto parakrīno faktoru Wnt un Jag1 mijiedarbību ar atbilstošajiem receptoriem (Myc, Notchl) uz Ito šūnu virsmas. Wnt/b-catenin un Notch signalizācijas ceļi atbalsta cilmes šūnu spēju pašatjaunoties, izmantojot lēnu simetrisku dalīšanos bez turpmākas diferenciācijas. Vēl vienu svarīga sastāvdaļa Nišas ir bazālās membrānas proteīni, laminīns un kolagēns IV, kas uztur Ito šūnu mierīgo stāvokli un nomāc to diferenciāciju. Līdzīga situācija rodas muskuļu šķiedrās un vītņotās sēklu kanāliņos, kur satelītšūnas (muskuļu cilmes šūnas) un nediferencētas spermatogonijas atrodas ciešā saskarē ar attiecīgi muskuļu šķiedras bazālo membrānu vai “spermatogēno epitēliju”. Ir acīmredzams, ka cilmes šūnu mijiedarbība ar ārpusšūnu matricas proteīniem nomāc to galīgās diferenciācijas sākšanos. Tādējādi iegūtie dati ļauj uzskatīt Ito šūnas par cilmes šūnām, kuru niša var būt Disse telpa.

Mūsu dati par Ito šūnu cilmes potenciālu un hepatocītu veidošanās iespēju no šīm šūnām tika apstiprināti eksperimentos, kuros pētīja aknu reģenerāciju in vivo, izmantojot daļējas hepatektomijas un toksisku aknu bojājumu modeļus ar svina nitrātu. Tradicionāli tiek uzskatīts, ka šajos aknu reģenerācijas modeļos cilmes nodalījums neaktivizējas un nav ovālu šūnu. Tomēr varējām konstatēt, ka abos gadījumos var novērot ne tikai Ito šūnu aktivāciju, bet arī cita cilmes šūnu marķiera, proti, cilmes šūnu faktora C komplekta receptora, ekspresiju tajās. Tā kā C-kit ekspresija tika novērota arī atsevišķos hepatocītos (tajos tā bija mazāk intensīva), kas galvenokārt atrodas saskarē ar C-kit pozitīvām Ito šūnām, var pieņemt, ka šie hepatocīti diferencējās no C-kit+ Ito šūnām. Ir acīmredzams, ka šis šūnu tips ne tikai rada apstākļus hepatocītu populācijas atjaunošanai, bet arī aizņem cilmes šūnu nišu. reģionālās šūnas aknas.

Tādējādi tagad ir noskaidrots, ka Ito šūnas ekspresē vismaz piecus cilmes šūnu marķierus dažādos attīstības, reģenerācijas un kultūras apstākļos. Visi līdz šim uzkrātie dati liecina, ka Ito šūnas var darboties kā aknu reģionālās cilmes šūnas, kas ir viens no hepatocītu (un, iespējams, arī holangiocītu) attīstības avotiem, kā arī ir vissvarīgākā mikrovides sastāvdaļa aknu morfoģenēzei un aknu hematopoēze. Tomēr acīmredzot ir pāragri izdarīt galīgus secinājumus par to, vai šīs šūnas pieder pie aknu cilmes (cilmes) šūnu populācijas. Tomēr ir acīmredzama nepieciešamība pēc jauniem pētījumiem šajā virzienā, kas veiksmes gadījumā pavērs perspektīvas efektīvu aknu slimību ārstēšanas metožu izstrādei, pamatojoties uz cilmes šūnu transplantāciju.

Šajā gadījumā šīs šūnas reaģē, vairojoties uz citokīnu, augšanas faktoru un kemokīnu (iekaisuma citokīnu) ietekmi, ko ražo bojātās aknas. Zvaigžņu šūnu hroniska aktivizēšana, reaģējot uz replikācijas izraisītu oksidatīvo stresu HBV vīruss un HCV, var veicināt fibroģenēzi un palielinātu hepatocītu proliferāciju, kas hroniski inficēti ar HBV un HCV.

Tādējādi zvaigžņu šūnas piedalās hepatocītu augšanas, diferenciācijas un apgrozījuma regulēšanā, kas kopā ar MAP kināžu aktivāciju var izraisīt aknu vēža attīstību [Block, 2003].

Saites:

Izlases zīmējums

Uzmanību! Informācija mājaslapā

paredzēts tikai izglītības nolūkiem

Aknu Ito šūnu ietekmes uz cilmes šūnām izpēte

Starpšūnu komunikāciju var realizēt, izmantojot parakrīno sekrēciju un tiešus šūnu-šūnu kontaktus. Ir zināms, ka aknu perisinusoidālās šūnas (HPC) izveido reģionālo cilmes šūnu nišu un nosaka to diferenciāciju. Tajā pašā laikā HPC joprojām ir slikti raksturots molekulārā un šūnu līmenī.

Šafigulļina A.K., Trondins A.A., Šaikhutdinova A.R., Kaligins M.S., Gazizovs I.M., Rizvanovs A.A., Gumerova A.A., Kijasovs A.P.

Valsts augstākās profesionālās izglītības iestāde "Federālās veselības un sociālās attīstības aģentūras Kazaņas Valsts medicīnas universitāte"

Rekombinantā kaula morfoģenētiskā proteīna osteoinduktivitātes eksperimentāls novērtējums

Šūnu tehnoloģijas kaulu un locītavu deģeneratīvo slimību ārstēšanā

Ito būris

mierīgs Un aktivizēts. Aktivizētas Ito šūnas

mierīgs stāvoklis

perisinusoidāls(subendoteliāls) un starphepatocelulāri. Pirmie atstāj šūnas ķermeni un stiepjas gar sinusoidālā kapilāra virsmu, pārklājot to ar plāniem pirkstiem līdzīgiem zariem. Perisinusoidālie izvirzījumi ir pārklāti ar īsām bārkstiņām, un tiem ir raksturīgi gari mikrodzinumi, kas stiepjas vēl tālāk gar kapilārās endotēlija caurules virsmu. Starphepatocelulārās projekcijas, pārvarot hepatocītu plāksni un sasniedzot blakus esošo sinusoīdu, tiek sadalītas vairākās perisinusoidālās projekcijās. Tādējādi vidēji Ito šūna aptver nedaudz vairāk par diviem blakus esošajiem sinusoīdiem.

aktivizēts stāvoklis

Aknu šūnas

Cilvēka aknas, tāpat kā jebkurš organisks audi, sastāv no šūnām. Daba to ir izveidojusi tā, lai šis orgāns pilda svarīgākās funkcijas: attīra organismu, ražo žulti, uzkrāj un nogulsnē glikogēnu, sintezē plazmas olbaltumvielas, vada vielmaiņas procesus, piedalās holesterīna un citu nepieciešamo komponentu daudzuma normalizēšanā. organisma funkcionēšanai.

Lai izpildītu savu mērķi, aknu šūnām jābūt veselām, ar stabilu struktūru, un katrai personai tās ir jāaizsargā no iznīcināšanas.

Par aknu lobulu uzbūvi un veidiem

Orgānu šūnu sastāvu raksturo daudzveidība. Aknu šūnas veido lobulas, un segmentus veido daivas. Orgāna struktūra ir tāda, ka hepatocīti (galvenās aknu šūnas) atrodas ap centrālo vēnu, atzarojas no tās, savienojas viens ar otru, veidojot sinusoīdus, tas ir, spraugas, kas piepildītas ar asinīm. Asinis pa tiem pārvietojas it kā pa kapilāriem. Aknas tiek apgādātas ar asinīm no portāla vēnas un artērijas, kas atrodas orgānā. Aknu lobulas ražo žulti un izvada to plūsmas kanālos.

Cita veida aknu šūnas un to mērķis

1. Endotēlija – šūnas, kas klāj sinusoīdus un satur fenestras. Pēdējie ir paredzēti, lai izveidotu pakāpienu barjeru starp sinusoīdu un Disse telpu.
2. Pati Disse telpa ir piepildīta ar zvaigžņu šūnām, kas nodrošina audu šķidruma aizplūšanu portālu zonu limfas traukos.
3. Kupfera šūnas ir saistītas ar endotēliju, tās ir tam piesaistītas, to funkcija ir aizsargāt aknas, kad organismā nonāk ģeneralizēta infekcija, vai traumas laikā.
4. Bedres šūnas ir vīrusa ietekmēto hepatocītu slepkavas, turklāt tām ir citotoksicitāte pret audzēja šūnām.

Cilvēka aknas sastāv no 60% hepatocītu un 40% cita veida šūnu savienojumu. Hepatocītiem ir daudzskaldnis, un to ir vismaz 250 miljardi. Normāla darbība hepatocīti ir saistīts ar komponentu spektru, ko izdala sinusoidālās šūnas, kas aizpilda sinusoidālo nodalījumu. Tas ir, iepriekš uzskaitītās Kupfera šūnas, zvaigžņu un bedres šūnas (intrahepatiskie limfocīti).

Endotēlijs ir filtrs starp asinīm sinusoidālajā telpā un plazmu Disse telpā. Šis bioloģiskais filtrs atdala lielus savienojumus, kas ir pārmērīgi bagāti ar retinolu un holesterīnu, un neļauj tiem iziet cauri, kas ir labvēlīgi ķermenim. Turklāt to funkcija ir aizsargāt aknas (proti, hepatocītus) no asins šūnu mehāniskiem bojājumiem.

Mūsu pastāvīgais lasītājs ieteica efektīvu metodi! Jauns atklājums! Novosibirskas zinātnieki atklājuši labākais līdzeklis lai attīrītu aknas. 5 gadu pētījumi. Pašārstēšanās mājās! Rūpīgi pārskatot to, mēs nolēmām to piedāvāt jūsu uzmanībai.

Orgānu elementu mijiedarbības process

Starp visām orgāna daļiņām notiek mijiedarbība, kurai ir diezgan sarežģīts modelis. Veselām aknām raksturīga šūnu savienojumu stabilitāte, patoloģiskos procesos ārpusšūnu matricu var izsekot mikroskopā.

Orgānu audos notiek izmaiņas toksīnu, piemēram, alkohola, vīrusu izraisītāju ietekmē. Tie ir šādi:

• vielmaiņas traucējumu dēļ izveidoto produktu nogulsnēšanās orgānā;
• šūnu deģenerācija;
• hepatocītu nekroze;
• aknu audu fibroze;
• aknu iekaisuma process;
• holestāze.

Par orgānu patoloģijas ārstēšanu

Katram pacientam ir lietderīgi zināt, ko nozīmē orgānā piedzīvotās izmaiņas. Ne visi no tiem ir katastrofāli. Piemēram, distrofija var būt viegla vai smaga. Abi šie procesi ir atgriezeniski. Pašlaik ir zāles, kas atjauno šūnas un veselus aknu segmentus.

Holestāzi var izārstēt pat ar tautas līdzekļiem – novārījumiem un uzlējumiem. Tie palīdz normalizēt bilirubīna sintēzi un novērš traucējumus žults aizplūšanā divpadsmitpirkstu zarnā.

Ar cirozi sākuma stadijaārstēšana sākas ar diētu, pēc tam tiek nozīmēta hepatoprotektoru terapija. Visefektīvākais veids cirozes un fibrozes ārstēšanā ir cilmes šūnas, kuras injicē nabas vēnā vai intravenozi, tās atjauno dažādu aģentu bojātos hepatocītus.

Galvenie aknu šūnu nāves cēloņi ir pārmērīga alkohola lietošana un narkotiku, tostarp narkotiku un medikamentu, iedarbība. Jebkurš toksīns, kas nonāk organismā, ir aknu iznīcinātājs. Tāpēc jums vajadzētu atteikties no sliktiem ieradumiem, lai jums būtu veselīgas aknas.

Kurš teica, ka nav iespējams izārstēt smagas aknu slimības?

• Ir izmēģinātas daudzas metodes, bet nekas nepalīdz.
• Un tagad esat gatavs izmantot jebkuru iespēju, kas sniegs jums ilgi gaidīto labsajūtu!

Efektīva aknu ārstēšana pastāv. Sekojiet saitei un uzziniet, ko ārsti iesaka!

Lasi arī:

Izglītība: Rostovas Valsts medicīnas universitāte (RostSMU), Gastroenteroloģijas un endoskopijas nodaļa.

ENDOTĒLIĀLĀS ŠŪNAS, KUPFER ŠŪNAS UN ITO

Mēs apskatīsim endotēlija šūnu, Kupfera un Ito šūnu struktūru, izmantojot divu zīmējumu piemēru.

Attēlā pa labi no teksta parādīti aknu sinusoidālie kapilāri (SC) - sinusoidāla tipa intralobulārie kapilāri, kas palielinās no ieejas venulām uz centrālo vēnu. Aknu sinusoidālie kapilāri veido anastomotisku tīklu starp aknu plāksnēm. Sinusoidālo kapilāru oderi veido endotēlija šūnas un Kupfera šūnas.

Attēlā pa kreisi no teksta aknu plāksne (LP) un divi aknu sinusoidālie kapilāri (SC) ir sagriezti vertikāli un horizontāli, lai parādītu perisinusoidālās Ito šūnas (Ito šūnas). Attēlā ir atzīmēti arī nogrieztie žults kanāliņi (BC).

ENDOTĒLIĀLĀS ŠŪNAS

Endotēlija šūnas (EC) ir ļoti saplacinātas plakanšūnas ar iegarenu mazu kodolu, vāji attīstītām organellām un lielu skaitu mikropinocitotisko pūslīšu. Citomembrāna ir izraibināta ar neregulārām atverēm (O) un fenesterām, kas bieži vien ir sagrupētas cribriform plāksnēs (RP). Šie caurumi ļauj iziet cauri asins plazmai, bet ne asins šūnām, ļaujot tai piekļūt hepatocītiem (D). Endotēlija šūnām nav bazālās membrānas, un tām nav fagocitozes. Tie ir savienoti viens ar otru, izmantojot mazus savienojošos kompleksus (nav parādīts). Kopā ar Kupfera šūnām endotēlija šūnas veido Disse telpas iekšējo robežu (PD); tās ārējo robežu veido hepatocīti.

KUPFER ŠŪNAS

Kupfera šūnas (KC) ir lielas, nenoturīgas zvaigžņu šūnas aknu sinusoidālajos kapilāros, daļēji to bifurkācijās.

Kupfera šūnu procesi iziet bez savienojošām ierīcēm starp endotēlija šūnām un bieži šķērso sinusoīdu lūmenu. Kupfera šūnās ir ovāls kodols, daudz mitohondriju, labi attīstīts Golgi komplekss, īsas granulēta endoplazmatiskā tīkla cisternas, daudzas lizosomas (L), atlikušie ķermeņi un retas gredzenveida plāksnes. Kupfera šūnās ir arī lielas fagolizosomas (PL), kas bieži satur novecojušas sarkanās asins šūnas un svešas vielas. Var noteikt arī hemosiderīna vai dzelzs ieslēgumus, īpaši ar supravitālu krāsošanu.

Kupfera šūnu virsmā ir redzamas mainīgas, saplacinātas citoplazmas krokas, ko sauc par lamellipodijām (LP) - lamelārajiem kātiem, kā arī procesi, ko sauc par filopodijām (F) un mikrovilli (MV), kas pārklāti ar glikokaliksu. Plazmalemma veido vermiformus ķermeņus (VB) ar centrāli novietotu blīvu līniju. Šīs struktūras var attēlot kondensētu glikokaliksu.

Kupfera šūnas ir makrofāgi, kas, ļoti iespējams, veido neatkarīgu šūnu ģints. Tās parasti rodas no citām Kupfera šūnām, pateicoties to mitotiskajai dalīšanai, bet var rasties arī no kaulu smadzenēm. Daži autori uzskata, ka tās ir aktivizētas endotēlija šūnas.

Reizēm neregulāra autonomā nervu šķiedra (ANF) iet caur Disse telpu. Dažos gadījumos šķiedras saskaras ar hepatocītiem. Hepatocītu malas ierobežo starphepatocītu padziļinājumi (MU), kas izraibināti ar mikrovillītēm.

ITO ŠŪNAS

Tās ir zvaigžņu šūnas, kas lokalizētas Disse (SD) telpās. To kodoli ir bagāti ar kondensētu hromatīnu, un tos parasti deformē lieli lipīdu pilieni (LD). Pēdējie atrodas ne tikai perikarionā, bet arī šūnas procesos un ir redzami no ārpuses kā sfēriski izvirzījumi. Organelli ir vāji attīstīti. Perisinusoidālajām šūnām ir vāja endocitotiskā aktivitāte, bet tām nav fagosomu. Šūnām ir vairāki gari procesi (O), kas saskaras ar blakus esošajiem hepatocītiem, bet neveido savienojošus kompleksus.

Procesi aptver aknu sinusoidālos kapilārus un dažos gadījumos iziet cauri aknu plāksnēm, nonākot saskarē ar blakus esošajiem aknu sinusoīdiem. Procesi nav nemainīgi, sazaroti un plāni; tos var arī saplacināt. Uzkrājot lipīdu pilienu grupas, tie pagarinās un iegūst vīnogu ķekara izskatu.

Tiek uzskatīts, ka perisinusoidālās Ito šūnas ir slikti diferencētas mezenhimālās šūnas, kuras var uzskatīt par hematopoētiskām cilmes šūnām, jo ​​tās var pārveidoties par tauku šūnas, aktīvas asins cilmes šūnas vai fibroblasti.

Normālos apstākļos Ito šūnas ir iesaistītas tauku un A vitamīna uzkrāšanā, kā arī intralobulāro retikulāro un kolagēna šķiedru (KB) ražošanā.

Psiholoģija un psihoterapija

Šajā sadaļā tiks iekļauti raksti par pētniecības metodēm, medikamentiem un citiem komponentiem, kas saistīti ar medicīnas tēmām.

Neliela vietnes sadaļa, kurā ir raksti par oriģināliem priekšmetiem. Pulksteņi, mēbeles, dekoratīvie elementi - to visu varat atrast šajā sadaļā. Sadaļa nav vietnes galvenā, un drīzāk kalpo kā interesants papildinājums cilvēka anatomijas un fizioloģijas pasaulei.

Ito aknu šūnas

Universālā populārzinātniskā tiešsaistes enciklopēdija

AKNAS

Aknas, lielākais dziedzeris mugurkaulnieku ķermenī. Cilvēkiem tas veido aptuveni 2,5% no ķermeņa svara, vidēji 1,5 kg pieaugušiem vīriešiem un 1,2 kg sievietēm. Aknas atrodas vēdera dobuma augšējā labajā daļā; tas ar saitēm piestiprināts pie diafragmas, vēdera sienas, kuņģa un zarnām un pārklāts ar plānu šķiedru membrānu – Glisona kapsulu. Aknas ir mīksts, bet blīvs sarkanbrūnas krāsas orgāns, un tas parasti sastāv no četrām daivām: lielas labās daivas, mazākas kreisās daivas un daudz mazākas astes un kvadrātveida daivas, kas veido aknu aizmugurējo apakšējo virsmu.

Funkcijas.

Aknas ir dzīvībai būtisks orgāns ar daudzām dažādām funkcijām. Viens no galvenajiem ir žults veidošanās un sekrēcija, caurspīdīgs oranžas vai dzeltenas krāsas šķidrums. Žults satur skābes, sāļus, fosfolipīdus (taukus, kas satur fosfātu grupu), holesterīnu un pigmentus. Žults sāļi un brīvās žultsskābes emulģē taukus (t.i., sadala tos mazos pilienos), padarot tos vieglāk sagremojamus; pārvērš taukskābes ūdenī šķīstošās formās (kas nepieciešamas gan pašu taukskābju, gan taukos šķīstošie vitamīni A, D, E un K); piemīt antibakteriāla iedarbība.

Visas barības vielas, kas no gremošanas trakta uzsūcas asinīs - ogļhidrātu, olbaltumvielu un tauku, minerālvielu un vitamīnu sagremošanas produkti - iziet cauri aknām un tiek tajās pārstrādāti. Tajā pašā laikā dažas aminoskābes (olbaltumvielu fragmenti) un daži tauki tiek pārvērsti ogļhidrātos, tāpēc aknas ir lielākā glikogēna “depo” organismā. Tas sintezē asins plazmas olbaltumvielas - globulīnus un albumīnus, kā arī iziet aminoskābju konversijas reakcijas (deaminēšana un transaminēšana). Deaminēšana – slāpekli saturošu aminogrupu atdalīšana no aminoskābēm – ļauj pēdējās izmantot, piemēram, ogļhidrātu un tauku sintēzei. Transaminācija ir aminogrupas pārnešana no aminoskābes uz keto skābi, veidojot citu aminoskābi ( cm. VIELMAIŅA). Aknas sintezē arī ketonvielas (taukskābju metabolisma produktus) un holesterīnu.

Aknas ir iesaistītas glikozes (cukura) līmeņa regulēšanā asinīs. Ja šis līmenis palielinās, aknu šūnas pārvērš glikozi par glikogēnu (cietei līdzīgu vielu) un uzglabā to. Ja glikozes līmenis asinīs nokrītas zem normas, glikogēns tiek sadalīts un glikoze nonāk asinsritē. Turklāt aknas spēj sintezēt glikozi no citām vielām, piemēram, aminoskābēm; šo procesu sauc par glikoneoģenēzi.

Vēl viena aknu funkcija ir detoksikācija. Zāles un citi potenciāli toksiski savienojumi aknu šūnās var pārvērsties ūdenī šķīstošā formā, kas ļauj tiem izdalīties ar žulti; tos var arī iznīcināt vai konjugēt (kombinēt) ar citām vielām, veidojot nekaitīgus produktus, kas viegli izdalās no organisma. Dažas vielas īslaicīgi nogulsnējas Kupfera šūnās (īpašās šūnās, kas absorbē svešas daļiņas) vai citās aknu šūnās. Kupfera šūnas ir īpaši efektīvas baktēriju un citu svešķermeņu daļiņu noņemšanai un iznīcināšanai. Pateicoties tiem, aknām ir svarīga loma organisma imūnās aizsardzībā. Pateicoties blīvam asinsvadu tīklam, aknas kalpo arī kā asins rezervuārs (tās pastāvīgi satur apmēram 0,5 litrus asiņu) un ir iesaistītas asins tilpuma un asinsrites regulēšanā organismā.

Kopumā aknas veic vairāk nekā 500 dažādas funkcijas, un to darbību vēl nevar mākslīgi atveidot. Šī orgāna izņemšana neizbēgami izraisa nāvi 1–5 dienu laikā. Tomēr aknām ir milzīga iekšējā rezerve; tā ir pārsteidzoša spēja atgūties no bojājumiem, tāpēc cilvēki un citi zīdītāji var izdzīvot pat pēc 70% aknu audu noņemšanas.

Struktūra.

Aknu sarežģītā struktūra ir lieliski pielāgota savu unikālo funkciju veikšanai. Lobas sastāv no nelielām struktūrvienībām - daivas. Cilvēka aknās to ir aptuveni simts tūkstoši, katrs 1,5–2 mm garš un 1–1,2 mm plats. Lobula sastāv no aknu šūnām - hepatocītiem, kas atrodas ap centrālo vēnu. Hepatocīti ir apvienoti vienas šūnas biezos slāņos – tā sauktajos. aknu plāksnes. Tie radiāli atšķiras no centrālās vēnas, sazarojas un savienojas viens ar otru, veidojot sarežģītu sienu sistēmu; šaurās spraugas starp tām, piepildītas ar asinīm, ir pazīstamas kā sinusoīdi. Sinusoīdi ir līdzvērtīgi kapilāriem; pārejot viens otrā, tie veido nepārtrauktu labirintu. Aknu daivas tiek apgādātas ar asinīm no vārtu vēnas un aknu artērijas zariem, un lobulās izveidojusies žults nonāk cauruļveida sistēmā, no tām - žultsvados un tiek izvadīta no aknām.

Aknu vārtu vēna un aknu artērija nodrošina aknām neparastu, dubultu asins piegādi. Uzturvielām bagātās asinis no kuņģa, zarnu un vairāku citu orgānu kapilāriem tiek savāktas vārtu vēnā, kas tā vietā, lai asinis nogādātu sirdī, tāpat kā vairums citu vēnu, nes tās uz aknām. Aknu lobulās portāla vēna sadalās kapilāru tīklā (sinusoīdos). Termins "portāla vēna" norāda uz neparastu asins transportēšanas virzienu no viena orgāna kapilāriem uz cita orgāna kapilāriem (nierēm un hipofīzei ir līdzīga asinsrites sistēma).

Otrs asins piegādes avots aknām, aknu artērija, transportē ar skābekli bagātinātas asinis no sirds uz daivu ārējām virsmām. Portāla vēna nodrošina 75–80%, bet aknu artērija 20–25% no kopējās asins piegādes aknām. Kopumā minūtē caur aknām iziet aptuveni 1500 ml asiņu, t.i. ceturtā daļa no sirds izsviedes. Asinis no abiem avotiem galu galā nonāk sinusoīdos, kur tās sajaucas un plūst uz centrālo vēnu. No centrālās vēnas asiņu aizplūšana uz sirdi sākas caur lobārajām vēnām aknu vēnā (nejaukt ar aknu vārtu vēnu).

Žults tiek izdalīts ar aknu šūnām mazākajos kanāliņos starp šūnām - žults kapilāros. Tas tiek savākts caur iekšējo kanāliņu un kanālu sistēmu žults ceļā. Daļa žults nonāk tieši kopējā žultsvadā un izdalās tievajā zarnā, bet lielākā daļa no tās pārvietojas pa cistisko kanālu atpakaļ, lai to uzglabātu žultspūslī, mazā maisiņā ar muskuļu sienām, kas pievienots aknām. Kad pārtika nonāk zarnās, žultspūslis saraujas un izdala saturu kopējā žults ceļā, kas atveras divpadsmitpirkstu zarnā. Cilvēka aknas saražo apmēram 600 ml žults dienā.

Portāla triāde un acini.

Portāla vēnas, aknu artērijas un žultsvada zari atrodas netālu, pie daivas ārējās robežas un veido portāla triādi. Katras lobulas perifērijā ir vairākas šādas portāla triādes.

Aknu funkcionālā vienība ir acinus. Šī ir audu daļa, kas ieskauj portāla triādi un ietver limfas asinsvadus, nervu šķiedras un blakus esošos divu vai vairāku lobulu sektorus. Viens acini satur apmēram 20 aknu šūnas, kas atrodas starp portāla triādi un katras daivas centrālo vēnu. Divdimensiju attēlā vienkāršs acinuss izskatās kā asinsvadu grupa, ko ieskauj blakus esošās daivu sekcijas, un trīsdimensiju attēlā tas izskatās kā oga (acinus - lat. oga), kas karājas uz asiņu un žults kātiņa. kuģiem. Acinus, kura mikrovaskulārais karkass sastāv no iepriekšminētajiem asinsrites un limfātiskie asinsvadi, sinusoīdi un nervi, ir aknu mikrocirkulācijas vienība.

Aknu šūnas

(hepatocīti) ir daudzskaldņu forma, bet tiem ir trīs galvenās funkcionālās virsmas: sinusoidāla, vērsta pret sinusoidālo kanālu; cauruļveida - iesaistīts žults kapilāra sienas veidošanā (tam nav savas sienas); un starpšūnu - tieši blakus blakus esošajām aknu šūnām.

Ito būris

Ito šūnas (sinonīmi: aknu zvaigžņu šūna, taukus uzkrājoša šūna, lipocīts, angļu. Aknu zvaigžņu šūna, HSC, Ito šūna, Ito šūna) - pericīti, kas atrodas aknu daivas perisinusoidālajā telpā, kas spēj funkcionēt divos dažādos stāvokļos - mierīgs Un aktivizēts. Aktivizētas Ito šūnas spēlē lielu lomu fibroģenēzē - rētaudu veidošanā aknu bojājumu gadījumā.

Neskartās aknās zvaigžņu šūnas ir atrodamas mierīgs stāvoklis. Šajā stāvoklī šūnām ir vairākas projekcijas, kas aptver sinusoidālo kapilāru. Cits atšķirīga iezīmešūnas ir A vitamīna (retinoīda) rezervju klātbūtne to citoplazmā tauku pilienu veidā. Klusās Ito šūnas veido 5-8% no visām aknu šūnām.

Ito šūnu izaugumi iedala divos veidos: perisinusoidāls(subendoteliāls) un starphepatocelulāri. Pirmie atstāj šūnas ķermeni un stiepjas gar sinusoidālā kapilāra virsmu, pārklājot to ar plāniem pirkstiem līdzīgiem zariem. Perisinusoidālie izvirzījumi ir pārklāti ar īsām bārkstiņām, un tiem ir raksturīgi gari mikrodzinumi, kas stiepjas vēl tālāk gar kapilārās endotēlija caurules virsmu. Starphepatocelulārās projekcijas, pārvarot hepatocītu plāksni un sasniedzot blakus esošo sinusoīdu, tiek sadalītas vairākās perisinusoidālās projekcijās. Tādējādi vidēji Ito šūna aptver nedaudz vairāk par diviem blakus esošajiem sinusoīdiem.

Kad aknas ir bojātas, Ito šūnas kļūst aktivizēts stāvoklis. Aktivizētajam fenotipam raksturīga proliferācija, ķemotakss, kontraktilitāte, retinoīdu krājumu zudums un miofibroblastiem līdzīgu šūnu veidošanās. Aktivētām aknu zvaigžņu šūnām ir arī paaugstināts jaunu gēnu līmenis, piemēram, α-SMA, ICAM-1, kemokīni un citokīni. Aktivizācija norāda uz fibroģenēzes agrīnās stadijas sākumu un notiek pirms palielinātas ECM proteīnu ražošanas. Aknu dziedināšanas beigu stadijai raksturīga pastiprināta aktivēto Ito šūnu apoptoze, kā rezultātā to skaits krasi samazinās.

Krāsošanu ar zelta hlorīdu izmanto Ito šūnu vizualizācijai mikroskopijā. Ir arī konstatēts, ka uzticams marķieris šo šūnu diferencēšanai no citiem miofibroblastiem ir to Reelin proteīna ekspresija.

Stāsts

1876. gadā Karls fon Kupfers aprakstīja šūnas, kuras viņš sauca par "Sternzellen" (zvaigžņu šūnas). Krāsojot ar zelta oksīdu, šūnu citoplazmā bija redzami ieslēgumi. Kļūdaini uzskatot tos par fagocitozes notverto sarkano asins šūnu fragmentiem, Kupfers 1898. gadā pārskatīja savus uzskatus par “zvaigžņu šūnu” kā atsevišķu šūnu tipu un klasificēja tos kā fagocītus. Tomēr turpmākajos gados regulāri parādījās Kupfera “zvaigžņu šūnām” līdzīgu šūnu apraksti. Viņiem tika doti dažādi nosaukumi: intersticiālas šūnas, parasinoīdu šūnas, lipocīti, pericīti. Šo šūnu loma palika noslēpums 75 gadus, līdz profesors Tošio Ito atklāja noteiktas šūnas, kas satur tauku ieslēgumus cilvēka aknu perisinusoidālajā telpā. Ito tās sauca par "shibo-sesshu saibo" - taukus absorbējošām šūnām. Saprotot, ka ieslēgumi ir tauki, ko ražo šūnas no glikogēna, viņš nomainīja nosaukumu uz "shibo-chozo saibo" - taukus uzkrājošās šūnas. 1971. gadā Kenjiro Wake pierādīja Kupfera Sternzelenas un Ito taukus uzkrājošo šūnu identitāti. Vake arī atklāja, ka šīm šūnām ir svarīga loma A vitamīna uzglabāšanā (pirms tam tika uzskatīts, ka A vitamīns tiek uzglabāts Kupfera šūnās). Neilgi pēc tam Kents un Popers demonstrēja ciešo Ito šūnu saistību ar aknu fibrozi. Šie atklājumi sāka detalizētu Ito šūnu izpētes procesu.

Skatīt arī

Uzrakstiet atsauksmi par rakstu “Ito šūna”

Saites

• Young-O Queon, Zachary D. Goodman, Jules L. Dienstag, Eugene R. Schiff, Nathaniel A. Brown, Elmar Burkhardt, Robert Schoonhoven, David A. Brenner, Michael W. Fried (2001). Journal of Haepotology 35; 749-755. - raksta tulkojums žurnālā “Infekcijas un antimikrobiālā terapija”, sējums 04/N 3/2002, Consilium-Medicum tīmekļa vietnē.
• Popper H: A vitamīna sadalījums audos, ko atklāj fluorescences mikroskopija. Physiol Rev 1944, 24:.

Piezīmes

1. Gērts A. (2001) Mierīgu aknu zvaigžņu šūnu vēsture, neviendabīgums, attīstības bioloģija un funkcijas. Semin Liver Dis. 21(3):311-35. PMID
2. Veik, K. (1988) Aknu perivaskulārās šūnas, kas atklātas ar zelta un sudraba impregnēšanas metodi un elektronu mikroskopiju. Grāmatā “Aknu biopatoloģija. Ultrastrukturāla pieeja” (Motta, P. M., ed) lpp. 23-36, Kluwer Academic Publishers, Dordrehta, Nīderlande
3. Stanciu A, Cotutiu C, Amalinei C. (2002) Jauni dati par ITO šūnām. Rev Med Chir Soc Med Nat Iasi. 107(2):235-9. PMID
4. Džons P. Iredale (2001) Aknu zvaigžņu šūnu uzvedība aknu traumas risināšanas laikā. Seminars in Liver Disease, 21(3):PMID- (angļu valodā) vietnē Medscape.
5. Kobold D, Grundmann A, Piscaglia F, Eisenbach C, Neubauer K, Steffgen J, Ramadori G, Knittel T. (2002) Reelīna ekspresija aknu zvaigžņu šūnās un aknu audu remonta laikā: jauns marķieris HSC diferenciācijai no citiem aknu miofibroblastiem. J Hepatols. 36(5):607-13. PMID
6. Adrians Rūbens (2002) Hepatoloģija. 35. sējums, 2. izdevums, 503.–504. lpp. (angļu valodā)
7. Suematsu M, Aiso S. (2001) Profesors Tošio Ito: gaišreģis pericītu bioloģijā. Keio J Med. 50(2):66-71. PMID (angļu valodā)
8. Querner F: Der mikroskopische Nachweis von Vitamin A im animalen Gewebe. Zur Kenntnis der paraplasmatischen Leberzellen-einschlüsse. Dritte Mitteilung. Klin Wschr 1935, 14:.

Ito šūnu raksturojošs fragments

Pēc pusstundas Kutuzovs devās uz Tatarinovu, un Benigsens un viņa svīta, ieskaitot Pjēru, devās pa līniju.

Benigsens devās lejā no Gorkiem augsts ceļš uz tiltu, kuru Pjēram no pilskalna norādīja kā pozīcijas centru un kura krastā gulēja nopļautas zāles rindas, kas smaržoja pēc siena. Viņi brauca pāri tiltam uz Borodino ciematu, no turienes pagriezās pa kreisi un garām milzīgam karaspēka un lielgabalu skaitam izbrauca uz augstu pilskalnu, uz kura rakās milicija. Tas bija reduts, kuram vēl nebija nosaukuma, bet vēlāk tas saņēma nosaukumu Raevsky redoubt jeb ķerru baterija.

Pjērs nepievērsa lielu uzmanību šim redutam. Viņš nezināja, ka šī vieta viņam paliks atmiņā vairāk nekā visas vietas Borodino laukā. Tad viņi brauca caur gravu uz Semenovski, kurā karavīri veda prom pēdējos būdiņu un šķūņu baļķus. Tad, lejup un kalnā, viņi brauca uz priekšu cauri šķeltiem rudziem, kas izsisti kā krusa, pa artilērijas tikko ierīkotu ceļu gar aramzemes grēdām uz viļņiem [nocietinājuma veids. (L.N. Tolstoja piezīme.) ], arī tolaik vēl tika rakts.

Benigsens apstājās pie pietvīkumiem un sāka skatīties uz priekšu uz Ševardinska redutu (kas bija mūsu tikai vakar), uz kura varēja redzēt vairākus jātniekus. Virsnieki teica, ka tur ir Napoleons vai Murats. Un visi kāri skatījās uz šo jātnieku baru. Arī Pjērs paskatījās uz turieni, mēģinot uzminēt, kurš no šiem tikko pamanāmajiem cilvēkiem ir Napoleons. Beidzot jātnieki nobrauca no pilskalna un pazuda.

Benigsens pagriezās pret ģenerāli, kas viņam tuvojās, un sāka skaidrot visu mūsu karaspēka stāvokli. Pjērs klausījās Benigsena vārdos, sasprindzinot visus savus garīgos spēkus, lai saprastu gaidāmās kaujas būtību, taču ar skumjām juta, ka garīgās spējas ar to bija par maz. Viņš neko nesaprata. Benigsens pārtrauca runāt un, pamanījis Pjēra figūru, kas klausījās, pēkšņi sacīja, pagriezies pret viņu:

– Man šķiet, ka jūs neinteresē?

"Ak, gluži pretēji, tas ir ļoti interesanti," Pjērs atkārtoja ne gluži patiesi.

No līdzenuma viņi brauca vēl tālāk pa kreisi pa ceļu, kas vijas cauri blīvam, zemam bērzu mežam. Tam pa vidu

mežs, priekšā uz ceļa izlēca brūns zaķis ar baltām kājām un, nobiedēts no liela skaita zirgu klaboņas, bija tik apmulsis, ka ilgi leca pa ceļu viņiem priekšā, aizraujoši. vispārēja uzmanība un smiekli, un tikai tad, kad vairākas balsis uz viņu kliedza, viņš metās malā un pazuda biezoknī. Nobraukuši apmēram divas jūdzes pa mežu, viņi nokļuva izcirtumā, kur atradās Tučkova korpusa karaspēks, kam vajadzēja aizsargāt kreiso flangu.

Šeit, galējā kreisajā flangā, Benigsens runāja daudz un kaislīgi un izteica, kā Pjēram šķita, svarīgu militāru pasūtījumu. Tučkova karaspēka priekšā bija kalns. Šo kalnu karaspēks neieņēma. Benigsens skaļi kritizēja šo kļūdu, sakot, ka ir traki atstāt teritoriju komandējošo augstumu neaizņemtu un novietot zem tā karaspēku. Daži ģenerāļi pauda tādu pašu viedokli. Viens īpaši ar militāru degsmi runāja par to, ka viņus šeit ievietoja nokaušanai. Benigsens savā vārdā pavēlēja pārvietot karaspēku uz augstumiem.

Šī pavēle ​​kreisajā flangā lika Pjēram vēl vairāk šaubīties par viņa spēju izprast militārās lietas. Klausoties Benigsenā un ģenerāļos, kas nosodīja karaspēka stāvokli zem kalna, Pjērs viņus pilnībā saprata un dalījās viņu viedoklī; bet tieši tāpēc viņš nevarēja saprast, kā tas, kurš tos nolika šeit zem kalna, varēja pieļaut tik acīmredzamu un rupju kļūdu.

Pjērs nezināja, ka šie karaspēki netika novietoti pozīcijas aizstāvēšanai, kā domāja Benigsens, bet gan tika novietoti slēptā vietā slazdam, tas ir, lai paliktu nepamanīti un pēkšņi uzbruktu tuvojošajam ienaidniekam. Benigsens to nezināja un īpašu iemeslu dēļ virzīja karaspēku uz priekšu, par to nepaziņojot virspavēlniekam.

Šajā skaidrajā augusta vakarā, 25. datumā, kņazs Andrejs gulēja, atspiedies uz rokas, salauztā šķūnī Kņazkovas ciemā, sava pulka atrašanās vietas malā. Caur caurumu nolauztajā sienā viņš skatījās uz trīsdesmit gadus vecu bērzu joslu ar nogrieztiem apakšējiem zariem, kas slejas gar žogu, uz aramzemi, uz kuras bija nolauztas auzu kaudzes, un uz krūmiem, caur kuriem bija redzami ugunsgrēku dūmi — karavīru virtuves.

Lai cik saspiesta un nevienam nebūtu vajadzīga, un lai cik grūta viņa dzīve tagad šķita princim Andrejam, viņš, tāpat kā pirms septiņiem gadiem Austerlicā kaujas priekšvakarā, jutās satraukts un aizkaitināts.

Viņš deva un saņēma pavēles rītdienas kaujai. Neko citu viņš nevarēja darīt. Taču visvienkāršākās, skaidrākās domas un līdz ar to arī briesmīgās domas viņu nelika mierā. Viņš zināja, ka rītdienas cīņa būs visbriesmīgākā no visām tām, kurās viņš piedalījās, un nāves iespēja pirmo reizi mūžā, neņemot vērā ikdienas dzīvi, nedomājot par to, kā tā ietekmēs citus, bet tikai attiecībā pret sevi, ar savu dvēseli, spilgti, gandrīz droši, vienkārši un šausmīgi, tas viņam parādījās. Un no šīs idejas augstuma visu, kas viņu iepriekš mocīja un nodarbināja, pēkšņi apspīdēja auksta balta gaisma, bez ēnām, bez perspektīvas, bez kontūru atšķirības. Visa viņa dzīve viņam šķita kā burvju laterna, kurā viņš ilgu laiku skatījās caur stiklu un mākslīgā apgaismojumā. Tagad viņš spilgtā dienas gaismā bez stikla pēkšņi ieraudzīja šos slikti krāsotos attēlus. "Jā, jā, tie ir viltus tēli, kas mani satrauca, iepriecināja un mocīja," viņš sev sacīja, iztēlē apgriezdams savas burvju dzīves laternas galvenos attēlus, tagad skatoties uz tiem šajā aukstajā, baltajā dienas gaismā. - skaidra doma par nāvi. “Šeit viņi ir, šīs rupji uzgleznotās figūras, kas šķita kaut kas skaists un noslēpumains. Slava, sabiedriskais labums, mīlestība pret sievieti, pašu tēvzemi - cik lieliskas man likās šīs bildes, ar kādu dziļu jēgu tās šķita piepildītas! Un tas viss ir tik vienkārši, bāli un raupji tā rīta aukstajā baltajā gaismā, kas, man liekas, man paceļas. Viņa uzmanību īpaši pievērsa trīs galvenās viņa dzīves bēdas. Viņa mīlestība pret sievieti, tēva nāve un franču iebrukums, kas sagrāba pusi Krievijas. "Mīlestība. Šī meitene man šķita noslēpumainu spēku pilna. Kā es viņu mīlēju! Es veidoju poētiskus plānus par mīlestību, par laimi ar to. Ak mīļais zēns! – viņš dusmīgi teica skaļi. - Protams! Es ticēju kaut kādai ideālai mīlestībai, kurai bija jāpaliek man uzticīgai visu prombūtnes gadu! Kā maigajai pasakas balodijai viņai vajadzēja novīst no manis. Un tas viss ir daudz vienkāršāk... Tas viss ir šausmīgi vienkārši, pretīgi!

Starpšūnu komunikāciju var realizēt, izmantojot parakrīno sekrēciju un tiešus šūnu-šūnu kontaktus. Ir zināms, ka aknu perisinusoidālās šūnas (HPC) izveido reģionālo cilmes šūnu nišu un nosaka to diferenciāciju. Tajā pašā laikā HPC joprojām ir slikti raksturots molekulārā un šūnu līmenī.

Projekta mērķis bija izpētīt mijiedarbību starp žurku aknu perisinusoidālajām šūnām un dažādām cilmes šūnām, piemēram, cilvēka nabassaites asiņu mononukleāro šūnu frakciju (UCB-MC) un žurku kaulu smadzenēm iegūtām multipotenciālām mezenhimālajām stromas šūnām (BM-MMSC).

Materiāli un metodes. Žurku BM-MSC un HPC, cilvēka UCB-MC šūnas tika iegūtas, izmantojot standarta metodes. Lai pētītu HPC parakrīna regulējumu, mēs kopā kultivējām UCB-MC vai BM-MMSC šūnas ar HPC, izmantojot Boyden kameras un kondicionētu HPC šūnu barotni. Atšķirīgi marķētas šūnas tika kopīgi kultivētas, un to mijiedarbība tika novērota ar fāzes kontrasta fluorescējošu mikroskopiju un imūncitoķīmiju.

Rezultāti. Pirmajā kultivēšanas nedēļā tika novērota A vitamīna autofluorescence PHC tauku uzglabāšanas spējas dēļ. BM-MMSC demonstrēja augstu dzīvotspēju visos kopkultūras modeļos. Pēc 2 dienu inkubācijas kondicionētā barotnē BM-MMSC kopkultūrā ar HPC mēs novērojām izmaiņas MMSC morfoloģijā - to izmērs samazinājās un to asni kļuva īsāki. α-Smooth Muscle Actin un desmīna ekspresija bija līdzīga miofibroblastam - Ito šūnu kultūras starpposma formai in vitro. Šīs izmaiņas varētu būt saistītas ar parakrīno stimulāciju ar HPC. Visdziļākā HPC ietekme uz UCB-MC šūnām tika novērota kontaktu kopkultūrā, tāpēc UCB-MC šūnām ir svarīgi izveidot tiešus šūnu-šūnu kontaktus, lai saglabātu to dzīvotspēju. Mēs nenovērojām nekādu šūnu saplūšanu starp HPC / UCB un HPC / BM-MMSC šūnām kopkultūrās. Turpmākajos eksperimentos mēs plānojam pētīt augšanas faktorus, ko ražo HPC cilmes šūnu diferenciācijai aknās.

Ievads.

Īpaša interese starp aknu šūnu daudzveidību ir aknu perisinusoidālās šūnas (Ito šūnas). Pateicoties augšanas faktoru un starpšūnu matricas komponentu sekrēcijai, tie veido hepatocītu mikrovidi, un vairāki zinātniski pētījumi ir pierādījuši aknu zvaigžņu šūnu spēju veidot mikrovidi priekšteču šūnām (tostarp asinsrades šūnām) un ietekmēt to darbību. diferenciācija hepatocītos. Šo šūnu populāciju mijiedarbība starp šūnām var notikt, izdalot augšanas faktorus parakrīnās sekrēcijas rezultātā vai veidojot tiešus kontaktus starp šūnām, taču šo procesu molekulārā un šūnu bāze joprojām ir slikti saprotama.

Pētījuma mērķis.

Mijiedarbības mehānismu izpēte Ito šūnas ar hematopoētiskām (HSC) un mezenhimālajām (MMSC) cilmes šūnām in vitro apstākļos.

Materiāli un metodes.

Žurku aknu Ito šūnas tika izolētas ar divām dažādām fermentatīvām metodēm. Tajā pašā laikā stromas MMSC tika iegūti no žurku kaulu smadzenēm. Hematopoētisko cilmes šūnu mononukleārā frakcija tika izolēta no cilvēka nabassaites asinīm. Ito šūnu parakrīnās ietekmes tika pētītas, kultivējot MMSC un HSC vidē, kurā auga Ito šūnas, un kopīgi kultivējot šūnas, kas atdalītas ar puscaurlaidīgu membrānu. Starpšūnu kontaktu ietekme tika pētīta šūnu kopkultūras laikā. Labākai vizualizācijai katra populācija tika marķēta ar atsevišķu fluorescējošu marķējumu. Šūnu morfoloģija tika novērtēta ar fāzes kontrasta un fluorescences mikroskopiju. Kultivēto šūnu fenotipiskās īpašības tika pētītas, izmantojot imūncitoķīmisko analīzi.

Rezultāti.

Nedēļas laikā pēc perisinusoidālo šūnu izolēšanas mēs atzīmējām to spēju autofluorescēt tauku uzkrāšanās spējas dēļ. Pēc tam šūnas iekļuva to augšanas starpfāzē un ieguva zvaigžņu formu. Sākotnējās Ito šūnu kopas kultivēšanas stadijās ar žurku kaulu smadzeņu MMSC, MMSC dzīvotspēja tika saglabāta visās kultivēšanas iespējās. Otrajā dienā, kad MMSC tika kultivēti Ito šūnu barotnē, notika izmaiņas MMSC morfoloģijā - to izmērs samazinājās, un to procesi saīsinājās. Alfa-gludo muskuļu aktīna un desmīna ekspresija MMSC palielinājās, norādot uz to fenotipisko līdzību ar miofibroblastiem, kas ir aktivēto Ito šūnu augšanas starpposms in vitro. Mūsu dati liecina par Ito šūnu izdalīto parakrīno faktoru ietekmi uz MMSC īpašībām kultūrā.

Pamatojoties uz hematopoētisko cilmes šūnu kopīgu kultivēšanu ar Ito šūnām, tika pierādīts, ka asinsrades cilmes šūnas saglabā dzīvotspēju tikai saskarē ar Ito šūnām. Saskaņā ar jauktu kultūru fluorescējošu analīzi dažādu populāciju šūnu saplūšanas fenomens netika atklāts.

Secinājumi. Lai saglabātu hematopoētisko cilmes šūnu dzīvotspēju, tiešo starpšūnu kontaktu klātbūtne ar Ito šūnām ir izšķirošs faktors. Parakrīna regulēšana tika novērota tikai tad, kad MMSC tika kultivēti uzturvielu barotnē, kurā auga Ito šūnas. Ito šūnu radīto specifisko faktoru ietekmi uz HSC un MMSC diferenciāciju šūnu kultūrā plānots pētīt turpmākajos pētījumos.

Šafigulļina A.K., Trondins A.A., Šaikhutdinova A.R., Kaligins M.S., Gazizovs I.M., Rizvanovs A.A., Gumerova A.A., Kijasovs A.P.
Valsts augstākās profesionālās izglītības iestāde "Federālās veselības un sociālās attīstības aģentūras Kazaņas Valsts medicīnas universitāte"

Galvenais endotoksīna avots organismāir gramnegatīva zarnu flora. Pašlaik nav šaubu, ka aknas ir galvenais orgāns veicot endotoksīnu attīrīšanu. Endotoksīnu galvenokārt uzņem šūnas kami Kupffer (KK), mijiedarbojoties ar membrānas receptoru CD 14. Var saistīties ar pašu receptoru lipopolisaharīds(LPS), un tā komplekss ar lipīdu A saistošo proteīnu com plazma. LPS mijiedarbība ar aknu makrofāgiem izraisa reakciju kaskādi, kuras pamatā ir aknu veidošanās un atbrīvošanās. citokīnu un citu bioloģiski aktīvo vielu samazināšana starpnieki.

Ir daudz publikāciju par makrofa lomuaknu darbība (LC) baktēriju LPS uzņemšanā un klīrensā, bet endotēlija mijiedarbība ar citām mezenhimālsšūnas, jo īpaši ar perisinusoidāls Ito šūnas praktiski nav pētītas.

PĒTĪJUMA METODOLOĢIJA

Baltie žurku tēviņi, kas sver 200 g intraperitoneāli 1 ml sterilā sāls šķīdums ieviests ļoti attīrīts liofilizēts LPS E. coli celms 0111 devās 0,5,2,5, 10, 25 un 50 mg/kg. 0,5, 1, 3, 6, 12, 24, 72 stundu un 1 nedēļas laikā iekšējie orgāni tika izņemti anestēzijā un ievietoti buferētā 10% formalīnā. Materiāls tika iebērts parafīna blokos. Tika iekrāsotas 5 µm biezas sekcijas imūnhistoķīmiskistreptavidīns-biotīns anti-desmīna antivielu metode, α - gluda- muskuļu aktīns (A-GMA) un kodola antigēns labi proliferējošas šūnas ( PCNA, " Dako"). Desmins tika izmantots kā marķieris perisinusoidālsIto šūnas, A-GMA - kā ve marķieris miofibroblasti, PCNA - proliferējošās šūnas. Lai noteiktu endotoksīnu aknu šūnās, attīrīts anti-Re-glikolipīdsantivielas (Vispārējās un klīniskās patoloģijas institūts KDO, Maskava).

PĒTĪJUMA REZULTĀTI

Lietojot 25 mg/kg un lielāku devu, letāls šoks tika novērots 6 stundas pēc LPS ievadīšanas. Akūta LPS iedarbība uz aknu audiem izraisīja Ito šūnu aktivāciju, kas izpaudās kā to skaita palielināšanās. Numurs desmin pozitīvsšūnas palielinājās no 6 stundām pēc LPS injekcijas un sasniedza maksimumu ma par 48-72 stundām (1. att., a, b).

Rīsi. 1. Jumta aknu sekcijas pūces, apstrādātas LSAB -es- vērtīgsantivielas pret des mans(grupa α - gluda dzemdes kakla aktīns (c), x400 (A, b), x200 (collas).

a - pirms endotoksīna ievadīšanasieslēgts, viens desminpozitīvsIto šūnas periportālajā zonā; b- 72 stundaspēc endotoksīna ievadīšanas uz: daudzi desminpozitīvs Ito šūnas; V- 120 stundas pēc en ievadīšanas dotoksīns: α - gluds muskulis ir tikai aktīvais aktīnsgludām muskuļu šūnām kah kuģi.

1 nedēļas numurs desmin pozitīvsšūnas samazinājās, betbija augstāks par kontroles rādītājiem. Plkst Šajā gadījumā mēs nekādā gadījumā neievērojām izskatu A-GMA pozitīvsšūnas sinusā dod aknas. Iekšēji pozitīvi kontrole, kad iekrāso ar antivielām pret A-GMA kalpoja asins gludo muskuļu šūnu identificēšanaiportāla trakta vēnu asinsvadi, kas satur A-GMA (1. att., V). Tāpēc, neskatoties uz Ito šūnu skaita pieaugumu, vienreizējs LPS iedarbība neizraisa transformāciju ( transdiferenciācija) tos miofibroblastos.

Rīsi. 2. Aknu sekcijasapstrādātas žurkas LSAB - iezīmētas antivielas pret PCNA. a - pirms en ieviešanas dotoksīns: viensproliferējoši gēni patocīti, x200; b - 72 stundas pēc endotoksīna ievadīšanas: daudzi proliferējoši hepatocīti, x400.

Daudzuma palielināšanās desmin pozitīvsšūnas sākās portāla zonā. No 6 stundām līdz 24 stundām pēc LPS ievadīšanas perisinusoidālsšūnas tika atrastas tikai ap portāla traktiem, t.i. ACI 1. zonā noosa. 48-72 stundās, kad tika novērota magonemaksimālais daudzums desmin pozitīvs līmi strāva, tie parādījās arī citās acinusa zonās; tomēr lielākā daļa Ito šūnu joprojām atradās periportāli.

Varbūt tas ir saistīts ar faktu, ka periportālsatrodas pirmie CC endotoksīns, kas nāk no zarnas caur vārtu vēnu vai no sistēmiskās asinsrites. Ak aktivētie CC rada plašu spektru citokīni, kas, domājams, izraisa Ito šūnu aktivāciju un transdiferenciācija tos miofibroblastos. Acīmredzot tieši tāpēc Ito šūnas, kas atrodas netālu no aktivizētiem aknu makrofāgiem (acinus 1. zonā), ir pirmās, kas reaģē uz citokīnu izdalīšanos. Tomēr mēs savā pētījumā tos neievērojām. transdiferenciācija V miofibroblasti, un tas liek domāt, ka citokīni, ko izdala CC un hepatocīti, var kalpot kā faktors, kas atbalsta procesu, kas jau ir sācies. transdiferenciācija, bet viņi, iespējams, nespēj to izraisīt, vienreiz pakļaujot aknas LPS.

Šūnu proliferatīvās aktivitātes palielināšanās tika novērota arī galvenokārt acinusa 1. zonā. Tas, iespējams, liecina, ka visi (vai gandrīz visi) procesi ir vērsti uz out O- un starpšūnu mijiedarbības parakrīna regulēšana notiek periportālajās zonās. Proliferējošo šūnu skaita pieaugums tika novērots 24 stundas pēc LPS ievadīšanas; pozitīvo šūnu skaits palielinājās līdz 72 stundām (maksimālā proliferatīvā aktivitāte, 2. att., a, b). Vairojās gan hepatocīti, gan sinusoidālās šūnas. Tomēr krāsojums uz PCNA nedod spēja noteikt proliferācijas veidu atgremojošās sinusoidālās šūnas. Saskaņā ar literatūru, endotoksīna iedarbība palielina atkarībā no CC apjoma. Viņi domā, ka runa ir par nāk gan no aknu makrofāgu proliferācijas, gan no monocītu migrācijas no citiem orgāniem. Citokīni, ko izdala CK, var palielināt Ito šūnu proliferācijas spēju. Tāpēc ir loģiski pieņemt, ka ir pārstāvētas proliferējošās šūnas perisinusoidāls Ito šūnas. To skaita pieaugums, ko mēs reģistrējām, acīmredzot ir nepieciešams, lai palielinātu augšanas faktoru sintēzi un atjaunotu starpšūnu matricu bojājumu apstākļos. Tā var būt viena no saitēm aknu kompensējošajās-atjaunojošajās reakcijās, jo Ito šūnas ir galvenais starpšūnu matricas komponentu avots, cilmes šūnu faktors un hepatocītu augšanas faktors, kas ir iesaistīti labošanā un diferenciācijā. aknu epitēlija šūnu veidošanās. Nav klāt vie Ito šūnu transformācija par miofibroblasti norāda, ka ar vienu endotoksīna agresijas epizodi nepietiek, lai attīstītos aknu fibroze.

Tādējādi endotok akūtās sekas syna izraisa skaita pieaugumu desmin pozitīvs Ito šūnas, kas ir netieša aknu bojājuma pazīme. Daudzums perisinusoidālsšūnu skaits palielinās, acīmredzot to proliferācijas rezultātā. Viena endotoksīna agresijas epizode izraisa reversu mana aktivizēšana perisinusoidāls Ito šūnas un nenoved pie tiem transdiferenciācija miofibroblastos. Šajā sakarā var pieņemt, ka aktivizēšanas mehānismos un transdiferenciācija Ito šūnas ietver ne tikai endotoksīnu un citokīnus, bet arī dažus citus starpšūnu mijiedarbības faktorus.

LITERATŪRA

1. Majanskis D.N., Wisse E., Decker K. // Jaunas robežas hepatoloģija. Novosibirska, 1992.

2. Salahovs I.M., Ipatovs A.I., Koņevs Ju.V., Jakovļevs M.Ju. // Mēs progresēsim, biol. 1998. T. 118, izdevums. 1. 33.-49.lpp.

3. Jakovļevs M.Ju. // Kazaņa . m vienības žurnāls 1988. Nr.5. 353.-358.lpp.

4. Freidenbergs N., Piotraschke Dž., Galanos C. et al. // Virchows Arch. [B]. 1992. gads. Vol. 61.P. 343-349.

5. Gresners A. M. // Hepatogastronteroloģija. 1996. sēj. 43. P. 92-103.

6. Šmits C, Bladt F., Goedecke S. et al. // Daba. 1995. sēj. 373, N 6516. P. 699-702.

7. Wisse E., Braet F., Luo D. et al. // Toksikols. Pathol. 1996. gads. Vol. 24, N 1. P. 100-111.

Atslēgvārdi

Aknas / STELLATE CELLS ITO/ MORFOLOĢIJA / RAKSTUROJUMS / A VITAMĪNS / FIBROZE / Aknas / AKNU ZVAIGŽŅU ŠŪNAS / MORFOLOĢIJA / RAKSTUROJUMS / A VITAMĪNS / FIBROZE

anotācija zinātniskais raksts par fundamentālo medicīnu, zinātniskā darba autors - Tsyrkunovs V.M., Andrejevs V.P., Kravčuks R.I., Kondratovičs I.A.

Ievads. Ito stellate šūnu (ISC) loma ir noteikta kā viena no vadošajām aknu fibrozes attīstībā, tomēr klīniskajā praksē ISC struktūras intravitālā vizualizācija tiek izmantota minimāli. Darba mērķis: prezentēt PCI strukturālās un funkcionālās īpašības, pamatojoties uz intravitālo aknu biopsiju citoloģiskās identifikācijas rezultātiem. Materiāli un metodes. Tika izmantotas klasiskās biopsijas paraugu gaismas un elektronu mikroskopijas metodes un oriģinālās metodes, izmantojot ultraplānas sekcijas, fiksāciju un krāsošanu. Rezultāti. Fotoattēlu ilustrācijas aknu biopsiju gaismas un elektronu mikroskopijai no pacientiem ar hronisks hepatīts C parāda HSC strukturālās īpašības dažādos posmos (atpūta, aktivācija) un transformācijas procesā par miofibroblastiem. Secinājumi. Oriģinālo klīniskās morfoloģiskās identifikācijas un novērtēšanas metožu pielietošana funkcionālais stāvoklis ZCI uzlabos aknu fibrozes diagnostikas un prognozes kvalitāti.

Saistītās tēmas zinātniskie darbi par fundamentālo medicīnu, zinātniskā darba autors - Tsyrkunovs V.M., Andrejevs V.P., Kravčuks R.I., Kondratovičs I.A.

• Klīniskā aknu citoloģija: Kupfera šūnas

  2017 / Tsyrkunov V.M., Andreev V.P., Kravchuk R.I., Prokopchik N.I.

• Aknās pārstādīto autologo mezenhimālo cilmes šūnu morfoloģiskās ietekmes uzraudzība vīrusu cirozes gadījumā (klīniskais novērojums)

  2018 / Aukashnk S.P., Alenikova O.V., Tsyrkunov V.M., Isaykina Ya.I., Kravchuk R.I.

• Aknu klīniskā morfoloģija: nekroze

  2017 / Tsyrkunov V.M., Prokopchik N.I., Andreev V.P., Kravchuk R.I.

• Aknu zvaigžņu šūnu polimorfisms un to loma fibroģenēzē

  2008 / Aidagulova S.V., Kapustina V.I.

• Aknu sinusoidālo šūnu struktūra pacientiem ar HIV/C hepatīta vīrusa koinfekciju

  2013 / Matievskaya N.V., Tsyrkunov V.M., Kravchuk R.I., Andreev V.P.

• Mezenhimālās cilmes šūnas kā daudzsološa metode aknu fibrozes/cirozes ārstēšanai

  2013 / Lukašiks S.P., Aļeņikova O.V., Cirkunovs V.M., Isajkina Ja.I., Romanova O.N., Šimanskis A.T., Kravčuks R.I.

• Žurku aknu miofibroblastu izolēšana un kultivēšana ar eksplantācijas metodi

  2012 / Miyanovic O., Shafigullina A.K., Rizvanov A.A., Kiyasov A.P.

• Aknu fibrozes veidošanās patomorfoloģiskie aspekti HCV infekcijas un citu aknu bojājumu laikā: mūsdienu koncepcijas

  2009 / Lukašiks S. P., Cirkunovs V. M.

• Žurku miofibroblastu analīze, kas iegūta no aknu portāla trakta struktūrām, izmantojot eksplantācijas metodi

  2013 / Miyanovic O., Katina M. N., Rizvanov A. A., Kiyasov A. P.

• Pārstādītas aknu zvaigžņu šūnas piedalās orgānu reģenerācijā pēc daļējas hepatektomijas bez aknu fibrozes attīstības riska

  2012 / Shafigullina A.K., Gumerova A.A., Trondin A.A., Titova M.A., Gazizov I.M., Burganova G.R., Kaligin M.S., Andreeva D.I., Rizvanov A. A., Mukhamedov A. R., Kiyasov A. P.

Ievads. Ito stellate šūnu (Hepatic Stellate Cells, HSC) loma ir noteikta kā viena no vadošajām aknu fibrozes attīstībā, taču HSC struktūru intravitālās vizualizācijas izmantošana klīniskajā praksē ir minimāla. Darba mērķis ir prezentēt HSC strukturālās un funkcionālās īpašības, pamatojoties uz intravitālo aknu biopsijas paraugu citoloģiskās identifikācijas konstatējumiem. Materiāli un metodes. Tika pielietotas klasiskās biopsijas paraugu gaismas un elektronu mikroskopijas metodes oriģinālā ultraplānu griezumu, fiksācijas un krāsošanas tehnikas ietvaros. Rezultāti. Aknu biopsijas paraugu HSC strukturālās īpašības pacientiem ar hronisku C hepatītu ir parādītas gaismas un elektronu mikroskopijas fotoattēlu ilustrācijās. HSC tiek attēloti dažādos posmos (atpūta, aktivācija) un pārveidošanas procesā par miofibroblastiem. Secinājumi. Oriģinālo HSC klīniskās un morfoloģiskās identificēšanas un funkcionālā stāvokļa novērtēšanas metožu izmantošana ļauj uzlabot aknu fibrozes diagnostikas un prognozes kvalitāti.

Zinātniskā darba teksts par tēmu “Klīniskā aknu citoloģija: Ito stellate šūnas”

UDC 616.36-076.5

AKNU KLĪNISKĀ CITOLOĢIJA: ZVAIGŽŅU ŠŪNAS

Cirkunovs V. M. ( [aizsargāts ar e-pastu]), Andrejevs V. P. ( [aizsargāts ar e-pastu]), Kravčuks R. I. ( [aizsargāts ar e-pastu]), Kondratovičs I. A. ( [aizsargāts ar e-pastu]) EE "Grodņas Valsts medicīnas universitāte", Grodņa, Baltkrievija

Ievads. Ito stellate šūnu (ISC) loma ir noteikta kā viena no vadošajām aknu fibrozes attīstībā, tomēr klīniskajā praksē ISC struktūras intravitālā vizualizācija tiek izmantota minimāli.

Darba mērķis: prezentēt PCI strukturālās un funkcionālās īpašības, pamatojoties uz intravitālo aknu biopsiju citoloģiskās identifikācijas rezultātiem.

Materiāli un metodes. Tika izmantotas klasiskās biopsijas paraugu gaismas un elektronu mikroskopijas metodes un oriģinālās metodes, izmantojot ultraplānas sekcijas, fiksāciju un krāsošanu.

Rezultāti. Pacientu ar hronisku C hepatītu aknu biopsiju gaismas un elektronu mikroskopijas foto ilustrācijas parāda PCI strukturālās īpašības dažādos posmos (atpūta, aktivācija) un transformācijas procesā par miofibroblastiem.

Secinājumi. Oriģinālo metožu izmantošana klīniski morfoloģiskai identificēšanai un aknu funkcionālā stāvokļa novērtēšanai uzlabos aknu fibrozes diagnostikas un prognozes kvalitāti.

Atslēgas vārdi: aknas, Ito stellate šūnas, morfoloģija, īpašības, A vitamīns, fibroze.

Ievads

Nelabvēlīgs iznākums lielākajai daļai dažādu etioloģiju hronisku difūzu aknu bojājumu, tostarp hroniskā C hepatīta (CHC), ir aknu fibroze, kuras attīstībā galvenie dalībnieki ir aktivētie fibroblasti, kuru galvenais avots ir aktivētās Ito stellate šūnas (Ito stellate). šūnas).

Aknu zvaigžņu šūna, HSC, Ito šūna, Ito šūna. Pirmo reizi ZCI 1876. gadā aprakstīja K. Kupfers, un viņš tos nosauca par zvaigžņu šūnām (“Stemzellen”). T. Ito, atklājot tajos tauku pilienus, vispirms tos apzīmēja par taukus absorbējošiem (“shibo-sesshusaibo”), bet pēc tam, konstatējot, ka taukus pašas šūnas ražo no glikogēna, taukus glabājošām šūnām (“shibo-sesshusaibo”). chososaibo”). 1971. gadā K. Veiks pierādīja Kupfera zvaigžņu šūnu un Ito taukus uzkrājošo šūnu identitāti un to, ka šīs šūnas “uzglabā” A vitamīnu.

Apmēram 80% no A vitamīna organismā uzkrājas aknās, un līdz 80% no visiem aknu retinoīdiem nogulsnējas aknu tauku pilienos. Hilomikronu sastāvā esošie retinola esteri nonāk hepatocītos, kur tie pārvēršas par retinolu, veidojot A vitamīna kompleksu ar retinolu saistošo proteīnu (RBP), kas tiek izdalīts perisinusoidālajā telpā, no kurienes to nogulsnējas šūnas.

K. Popera konstatētā ciešā saikne starp PCI un aknu fibrozi demonstrēja to nevis statisko, bet dinamisko funkciju – spēju tieši piedalīties intralobulārās perihepatocelulārās matricas pārveidošanā.

Galvenā aknu morfoloģiskās izmeklēšanas metode, ko veic, lai novērtētu izmaiņas intravitālajās biopsijās, ir gaismas mikroskopija, kas klīniskajā praksē ļauj noteikt aknu darbību.

degšana un hroniskuma stadija. Metodes trūkums ir tās zemā izšķirtspēja, kas neļauj novērtēt šūnu strukturālās īpatnības, intracelulāro organellu, ieslēgumu un funkcionālās īpašības. Aknu ultrastrukturālo izmaiņu intravitālā elektronmikroskopiskā izmeklēšana dod iespēju papildināt gaismas mikroskopijas datus un palielināt to diagnostisko vērtību.

Šajā sakarā aknu HCI identificēšana, to fenotipa izpēte transdiferenciācijas procesā un to proliferācijas intensitātes noteikšana ir vissvarīgākais ieguldījums aknu slimību iznākumu prognozēšanā, kā arī patomorfoloģijā un fibroģenēzes patofizioloģija.

Mērķis ir prezentēt PCI strukturālās un funkcionālās īpašības, pamatojoties uz intravitālo aknu biopsiju citoloģiskās identifikācijas rezultātiem.

materiāli un metodes

Intravitāla aknu biopsija tika iegūta ar aspirācijas biopsija pacientiem ar CHC (HCV RNS+), no kuriem tika saņemta rakstiska informēta piekrišana.

Pusplāno griezumu gaismas mikroskopijai pacientiem ar dubultās fiksācijas metodi tika fiksēti aknu biopsijas paraugi ar izmēru 0,5-2 mm: vispirms - pēc Sato Taizan metodes, pēc tam audu paraugi tika papildus fiksēti 1 stundu 1% osmija fiksatorā. sagatavots 0,1 M fosfāta Sorensena buferšķīdumā, pH 7,4. Lai labāk identificētu intracelulārās struktūras un intersticiālas vielas uz pusplānām sekcijām, 1% osmija tetroksīdam tika pievienoti kālija dihromāts (K2Cr2O7) vai hromanhidrīda kristāli (1 mg/ml). Pēc sērijveida paraugu dehidratācijas spirta šķīdumi palielinot koncentrāciju un acetonu, tos ievietoja prepolimerizētā butilmetakrilāta un stirola maisījumā un polimerizēja 550C temperatūrā. Pusplānas sekcijas (1 µm biezas) tika secīgi iekrāsotas

debeszils II-bāzes fuksīns. Mikrofotogrāfijas tika uzņemtas, izmantojot digitālo videokameru (Leica FC 320, Vācija).

Elektronmikroskopiskā izmeklēšana veikta aknu biopsijas paraugos ar izmēru 0,5x1,0 mm, fiksētiem ar 1% osmija tetroksīda šķīdumu 0,1 M Milloniga buferšķīdumā, pH 7,4, +40C 2 stundas. Pēc dehidratācijas augošajos spirtos un acetonā paraugi tika iestrādāti araldītā. No iegūtajiem blokiem, izmantojot Leica EM VC7 ultramikrotomu (Vācija), tika sagatavotas daļēji plānas sekcijas (400 nm) un iekrāsotas ar metilēnzilu. Preparāti tika izmeklēti gaismas mikroskopā un tika izvēlēta līdzīga zona tālākai ultrastrukturālo izmaiņu izpētei. Īpaši plānas sekcijas (35 nm) tika iekrāsotas ar 2% uranilacetātu 50% metanolā un svina citrātu saskaņā ar E. S. Reinoldsu. Elektronu mikroskopiskie preparāti tika pētīti JEM-1011 elektronu mikroskopā (JEOL, Japāna) ar palielinājumu 10 000-60 000 un paātrinājuma spriegumu 80 kW. Attēlu iegūšanai tika izmantots komplekss, kas sastāv no Olympus MegaViewIII digitālās kameras (Vācija) un iTEM attēlu apstrādes programmatūras (Olympus, Vācija).

rezultāti un diskusija

PCI atrodas perisinusoidālajā telpā (Disse) kabatās starp hepatocītiem un endotēlija šūnām. garie dzinumi, dziļi iekļūstot starp hepatocītiem. Lielākajā daļā publikāciju, kas veltītas šai KRN populācijai, ir sniegts to shematisks attēlojums, kas ļauj tikai norādīt uz KRN “teritoriālo” piederību aknās un attiecībā pret apkārtējiem “kaimiņiem” (1. attēls).

PCI ir ciešs kontakts ar endotēlija šūnām, izmantojot nepilnīgās bazālās membrānas komponentus un intersticiālās kolagēna šķiedras. Nervu gali iekļūst starp PCI un parenhīmas šūnām, tāpēc Disse telpa tiek definēta kā telpa starp parenhīmas šūnu plāksnēm un

HCl un endotēlija šūnu komplekss.

Tiek uzskatīts, ka PCI rodas no slikti diferencētām mezenhimālajām šūnām jaunattīstības aknu šķērseniskajā starpsienā. Eksperimentā tika noskaidrots, ka hematopoētiskās cilmes šūnas piedalās HCl veidošanā un šo procesu neizraisa šūnu saplūšana.

Sinusoidālajām šūnām (SC), galvenokārt HSC, ir vadošā loma visu veidu aknu atjaunošanā. Fibrozējošā aknu reģenerācija notiek aknu un kaulu smadzeņu cilmes šūnu cilmes funkciju kavēšanas rezultātā. Cilvēka aknās HSC veido 5–15%, kas ir viens no 4 mezenhimālas izcelsmes SC veidiem: Kupfera šūnas, endotēlija šūnas, Pd šūnas. SC baseinā ir arī 20-25% leikocītu.

HCl citoplazmā ir tauku ieslēgumi ar retinolu, triglicerīdiem, fosfolipīdiem, holesterīnu, brīvajām taukskābēm, α-aktīniem un desmīnu. Zelta hlorīda krāsošana tiek izmantota, lai vizualizētu PCI. Eksperiments atklāja, ka HCI diferenciācijas marķieris no citiem miofibroblastiem ir to Reelin proteīna ekspresija.

HSC pastāv klusā (“neaktīvs HSC”), pārejošos un ilgstoši aktivizētos stāvokļos, no kuriem katru raksturo gēnu ekspresija un fenotips (α-MA, ICAM-1, ķīmokīni un citokīni).

Neaktīvā stāvoklī HCI ir apaļa, nedaudz iegarena vai neregulāra forma, liels kodols un skaidra vizuāla iezīme - lipīdu ieslēgumi (pilieni), kas satur retinolu (2. attēls).

Lipīdu pilienu skaits neaktīvajā HCI sasniedz 30 vai vairāk; tie ir tuvu izmēriem, blakus viens otram, iespiežas kodolā un nospiež to uz perifēriju (2. attēls). Starp lieliem pilieniem var atrasties nelieli ieslēgumi. Pilienu krāsa ir atkarīga no fiksatora un materiāla krāsas. Vienā gadījumā tie ir gaiši (2.a attēls), otrā – tumši zaļā krāsā (2.b attēls).

1. attēls. PCI (stellatecell, perisinusoidal lipocyte) atrašanās vietas shēma Diss perisinusoidālajā telpā (Dise telpa), interneta resurss

2. attēls - ZKI neaktīvā stāvoklī

a - apaļas formas HCI ar augstu lipīdu pilienu saturu ar gaišu krāsu (baltas bultiņas), hepatocītu (Hz) ar izpostītu citoplazmu (melna bultiņa); b - HCl ar tumšas krāsas lipīdu pilieniem, ciešā saskarē ar makrofāgu (Mph); a-b - daļēji plānas sekcijas. Azure II krāsa ir pamata fuksīna. Mikrofotogrāfijas. Palielināts 1000; c - ZCI ar lipīdu pilienu pārpilnību (vairāk nekā 30), kam ir neregulāra forma (lielums 6000); ICI d-ultrastrukturālie komponenti: l-lipīdu pilieni, mitohondriji (oranžas bultiņas), GRES (zaļās bultiņas), Golgi komplekss (sarkanā bultiņa), uv. 15 000; v-d - elektronu difrakcijas modeļi

Ar elektronu mikroskopiju uz gaiša lipīdu substrāta fona veidojas osmiofīlāks malas apmale (5.a attēls). Lielākajā daļā “atpūtas” HCI kopā ar lieliem lipīdu ieslēgumiem ir ievērojami mazs citoplazmatiskās matricas daudzums, kurā ir maz mitohondriju (Mx) un granulētā endoplazmatiskā tīkla (GRE). Šajā gadījumā labi redzami vidēji attīstīta Golgi kompleksa nodalījumi 3-4 saplacinātu cisternu kaudzes veidā ar nedaudz paplašinātiem galiem (2.d attēls).

Plkst noteiktiem nosacījumiem aktivizējot HSC, iegūst jauktu vai pārejas fenotipu, apvienojot gan lipīdus saturošu, gan fibroblastiem līdzīgu šūnu morfoloģiskās īpašības (3. attēls).

PCI pārejas fenotipam ir arī savas morfoloģiskās īpašības. Šūna iegūst iegarenu formu, samazinās lipīdu ieslēgumu skaits un samazinās nukleolemmas invagināciju skaits. Citoplazmas tilpums palielinās, un tajā ir daudz GES cisternu ar saistītām ribosomām un brīvām ribosomām, Mx. Tiek novērota lamelārā Golgi kompleksa komponentu hiperplāzija, ko attēlo vairākas 3-8 saplacinātu cisternu kaudzes, palielinās degradācijā iesaistīto lizosomu skaits.

3. attēls. ZKI pārejas stāvoklī

a - ZKI (baltas bultiņas). Pusplāna šķēle. Azure II krāsa ir pamata fuksīna. Mikrofotografēšana. Palielināts 1000; b - ZCI ar iegarenu formu un ar nelielu skaitu lipīdu pilienu; uv. 8000; c - ZCI saskarē ar Kupfera šūnām (KC) un limfocītiem (Lc), uv. 6 000. (Hz - hepatocīts, l - lipīdu pilieni, E - eritrocīts); d - mitohondriji (oranžas bultiņas), GRES (zaļās bultiņas), Golgi šūna (sarkanā bultiņa), lizosomas (zilās bultiņas), līmenis 20 000; b, c, d - elektronu difrakcijas modeļi

lipīdu pilienu (3.d attēls). GRES un Golgi kompleksa komponentu hiperplāzija ir saistīta ar fibroblastu spēju sintezēt kolagēna molekulas, kā arī modelēt tās, izmantojot pēctranslācijas hidroksilāciju un glikozilāciju endoplazmatiskajā retikulā un Golgi kompleksa elementos.

Nebojātās aknās PCI, būdams mierīgā stāvoklī, ar saviem procesiem pārklāj sinusoidālo kapilāru. PCI procesi ir sadalīti 2 veidos: perisinusoidāls (subendoteliāls) un starphepatocelulārs (4. attēls).

Pirmie atstāj šūnas ķermeni un stiepjas gar sinusoidālā kapilāra virsmu, pārklājot to ar plāniem pirkstiem līdzīgiem zariem. Tie ir pārklāti ar īsām bārkstiņām un tiem ir raksturīgi gari mikroizgrūdumi, kas stiepjas vēl tālāk gar kapilāra endotēlija caurulītes virsmu. Starphepatocelulārās projekcijas, pārvarot hepatocītu plāksni un sasniedzot blakus esošo sinusoīdu, tiek sadalītas vairākās perisinusoidālās projekcijās. Tādējādi ZKI vidēji aptver vairāk nekā divus blakus esošos sinusoīdus.

Ar aknu bojājumiem notiek PCI aktivācija un fibroģenēzes process, kurā izšķir 3 fāzes. Tie ir apzīmēti kā iniciācija, pagarināšana un izšķiršana (šķiedru audu izšķiršana). Šo “atpūtas” HSC pārvēršanas procesu fibrozējošos miofibroblastos ierosina citokīni (^-1, ^-6,

4. attēls. PCI perisinusoidālie (subendoteliālie) un starphepatocelulārie procesi (izaugumi)

a - process, kurā PCI (dzeltenās bultiņas) izplūst no šūnas ķermeņa, uv. 30 000; b - ZCI pagarinājums, kas atrodas gar sinusoidālā kapilāra virsmu, satur lipīdu pilienu, uv. 30 000; c - PCI subendoteliāli izvietoti procesi. Endotēlija šūnu procesi (rozā bultiņas); d - PCI starphepatocelulārais process; HCl un hepatocītu membrānu iznīcināšanas zona (melnas bultiņas), uv. 10 000. Elektronu difrakcijas modeļi

TOT-a), nepietiekami oksidēti vielmaiņas produkti, reaktīvās skābekļa sugas, slāpekļa oksīds, endotelīns, trombocītu aktivējošais faktors (PDGF), plazminogēna aktivators, transformējošais augšanas faktors (TGF-1), acetaldehīds un daudzi citi. Tiešie aktivatori ir hepatocīti oksidatīvā stresa stāvoklī, Kupfera šūnas, endoteliocīti, leikocīti, trombocīti, kas ražo citokīnus (parakrīna signālus) un paši PCI (autokrīna stimulācija). Aktivizāciju pavada jaunu gēnu ekspresija (iekļaušana darbā), citokīnu un ekstracelulārās matricas proteīnu sintēze (I, III, U tipa kolagēni).

Šajā posmā PCI aktivācijas procesu var pabeigt, stimulējot pretiekaisuma citokīnu veidošanos PCI, kavējot makrofāgu TOT-a veidošanos bojājuma zonā. Rezultātā krasi samazinās HCI skaits, tajos notiek apoptoze un fibrozes procesi aknās neattīstās.

Otrajā fāzē (ilgstoša) ar ilgstošu konstantu parakrīna un autokrīna iedarbību uz aktivizējošiem stimuliem PCI tiek “saglabāts” aktivizētais fenotips, ko raksturo PCI transformācija kontraktilās miofibroblastiem līdzīgās šūnās, kas veic ārpusšūnu sintēzi. fibrilārais kolagēns.

Aktivizētajam fenotipam raksturīga proliferācija, ķemotakss, kontraktilitāte, retinoīdu krājumu zudums un miofibroblastiem līdzīgu šūnu veidošanās. Aktivizētie HSC uzrāda arī palielinātu jaunu gēnu, piemēram, a-SMA, ICAM-1, chemokīnu un citokīnu, pārpilnību. Šūnu aktivācija norāda uz fibroģenēzes agrīnās stadijas sākšanos un notiek pirms palielinātas ECM proteīnu ražošanas. Veidojas šķiedru audi tiek pakļauti remodelēšanai matricas sadalīšanās dēļ ar matricas metaloproteināžu (MMP) palīdzību. Savukārt matricas sadalīšanos regulē matricesmetaloproteināžu (TIMP) audu inhibitori. MMP un TIMP ir no cinka atkarīgo enzīmu saimes locekļi. MMP tiek sintezēti HCl neaktīvu proenzīmu veidā, kas tiek aktivizēti pēc propeptīda šķelšanās, bet tiek inhibēti mijiedarbībā ar endogēniem TIMP - TIMP-1 un TIMP-2. HCl ražo 4 veidu membrānas tipa MMP, kurus aktivizē IL-1β. Starp MMP īpaša nozīme tiek piešķirta MMP-9, neitrālai matricas metaloproteināzei, kurai ir aktivitāte pret 4. tipa kolagēnu, kas ir daļa no bazālās membrānas, kā arī pret daļēji denaturētu 1. un 5. tipa kolagēnu.

PCI populācijas pieaugums dažāda veida aknu bojājumu gadījumā tiek vērtēts pēc ievērojama skaita mitogēno faktoru aktivitātes, saistīto tirozīna kināzes receptoru un citu identificētu mitogēnu, kas izraisa visizteiktāko PCI proliferāciju: endotelīns-1, trombīns, FGF - fibroblastu augšanas faktors, PDGF – endotēlija augšanas faktora asinsvadi, IGF – insulīnam līdzīgais augšanas faktors. HCl uzkrāšanās aknu bojājumu zonās notiek ne tikai šo šūnu proliferācijas dēļ, bet arī to virzītas migrācijas dēļ šajās zonās caur ķemotaksiju, piedaloties tādiem ķīmijatraktantiem kā PDGF un leikocītu ķīmijatraktants-MCP (monocītu ķīmotaktiskais proteīns). -1).

Aktivētos HSC lipīdu pilienu skaits tiek samazināts līdz 1-3 ar to atrašanās vietu šūnas pretējos polos (5. attēls).

Aktivizētie HSC iegūst iegarenu formu, ievērojamas citoplazmas zonas aizņem Golgi komplekss, un tiek atklātas diezgan daudzas GRES cisternas (olbaltumvielu sintēzes indikators eksportam). Pārējo organellu skaits ir samazināts: tiek konstatēts maz brīvo ribosomu un polisomu, atsevišķi mitohondriji un neregulāras lizosomas (6. attēls).

2007. gadā HSC pirmo reizi sauca par aknu cilmes šūnām, jo ​​tās ekspresē vienu no hematopoētisko mezenhimālo cilmes šūnu marķieriem - CD133.

5. attēls - ZKI aktivizētā stāvoklī

a, b - HCI (zilas bultiņas) ar atsevišķiem lipīdu ieslēgumiem, kas lokalizēti kodola pretējos polios. Perisinusoidālie saistaudi (6.a attēlā) un starpšūnu matricas slānis ap hepatocītu (6.b attēlā) ir krāsoti sarkanā krāsā. Citotoksiskie limfocīti (purpursarkanās bultiņas). Endotēlija šūna (balta bultiņa). Ciešs kontakts starp plazmas šūnu (sarkanā bultiņa) un hepatocītu. Pusplānas sekcijas. Azure II krāsa ir pamata fuksīna. Mikrofotogrāfijas. Palielināts 1000 ; c, d - HCI ultrastrukturālie komponenti: mitohondriji (oranžas bultiņas), Golgi komplekss (sarkanā bultiņa), tā osmiofīlākās cis-puses cisternas, kas vērstas pret granulētā endoplazmatiskā tīkla paplašinātajiem elementiem (zaļas bultiņas), lizosoma (zilā bultiņa) (attiecīgi 10 000 un 20 000 magnitūdas); c, d - elektronu difrakcijas modeļi

Miofibroblastiem, kuru normālās aknās nav, ir trīs iespējamie avoti: pirmkārt, aknu intrauterīnās attīstības laikā portāla traktos miofibroblasti ieskauj asinsvadus un žultsvadus to nobriešanas laikā, un pēc pilnīgas aknu attīstības tie izzūd. un portāla traktātos tiek aizstāti ar portāla fibroblastiem; otrkārt, kad aknas ir bojātas, tās veidojas portāla mezenhimālo šūnu un miera stāvoklī esošas HCI, retāk pārejas epitēlija-mezenhimālo šūnu dēļ. Tos raksturo CD45-, CD34-, Desmin+, glial fibrillary-associated protein (GFAP)+ un Thy-1+ klātbūtne.

Jaunākie pētījumi ir parādījuši, ka hepatocīti, holangiocīti un endotēlija šūnas var kļūt par miofibroblastiem, izmantojot epitēlija vai endotēlija pāreju uz mezenhimālo pāreju (EMT). Šīs šūnas ietver tādus marķierus kā CD45-, albumīns+ (ti, hepatocīti), CD45-, CK19+ (ti, holangiocīti) vai Tie-2+ (endotēlija šūnas).

6. attēls. Augsta HCl fibrotiskā aktivitāte

a, b - miofibroblasts (MFB), šūnā ir liels kodols, GRES elementi (sarkanās bultiņas), daudzas brīvas ribosomas, polimorfas pūslīši un granulas, atsevišķi mitohondriji un spilgta vizualizācijas zīme - aktīna pavedienu saišķis citoplazmā (dzeltenas bultiņas); paņēma 12 000 un 40 000; c, d, e, f - augsta HCI fibrotiskā aktivitāte, kamēr citoplazmā saglabājas retinoīdus saturoši lipīdu pilieni. Daudzi kolagēna fibrilu saišķi (baltas bultiņas), kas saglabā (a) un zaudē (d, e, f) specifiskas šķērssvītras; paņēma 25 000, 15 000, 8 000, 15 000. Elektronu difrakcijas modeļi

Turklāt kaulu smadzeņu šūnas, kas sastāv no fibrocītiem un cirkulējošām mezenhimālajām šūnām, var pārveidoties par miofibroblastiem. Tās ir CD45+ šūnas (fibrocīti), CD45+/- (cirkulējošās mezenhimālās šūnas), kolagēna tips 1+, CD11d+ un MHC klase 11+ (7. attēls).

Literatūras dati apstiprina ne tikai ciešo saistību starp ovālo šūnu proliferāciju un sinusoidālo šūnu proliferāciju, bet arī datus par iespējamo HCI diferenciāciju aknu epitēlijā, ko sauca par perisinusoidālo šūnu mezenhimāl-epitēlija transformāciju.

Fibrogēnas aktivācijas stāvoklī miofibroblastiem līdzīgos PCI, kā arī lipīdu pilienu skaita samazināšanos un sekojošu izzušanu, raksturo fokusa proliferācija (8. attēls), fibroblastiem līdzīgu marķieru, tostarp gludās muskulatūras α-aktīna, imūnhistoķīmiskā ekspresija. , un pericelulāro kolagēna fibrilu veidošanās Disse telpās.

Fibrozes attīstības fāzē pieaugošā aknu audu hipoksija kļūst par faktoru papildu pārmērīgai pro-iekaisuma adhēzijas molekulu ekspresijai cilmes šūnās - 1CAM-1, 1CAM-2, VEGF, proinflammatoriskais.

Aknu kanālu cilmes šūnu mijiedarbība ar aknu miofibroblastiem

Miofibroblastiem līdzīgi HSC fibrogēnas aktivācijas stāvoklī.

7. attēls. PCI miofibroblastiskās aktivācijas dalībnieki

lītiskie ķīmijatraktanti - M-CSF, MCP-1 (monocītu ķīmotaktiskais proteīns-1) un SGS (citokīnu mediēts neitrofilu ķīmijatraktants) un citi, kas stimulē pro-iekaisuma citokīnu veidošanos (TGF-b, PDGF, FGF, PAF, SCF, ET-1) un uzlabo fibroģenēzes procesus aknās, radot apstākļus nepārtrauktai PCI un fibroģenēzes procesu aktivizēšanai.

Uz mikroskopiskiem preparātiem perikapilārā fibroze izpaužas kā perisinusoidālo saistaudu un starpšūnu matricas slāņa intensīva sarkana krāsošanās ap hepatocītiem (bieži mirst). Uz elektronu mikroskopiskiem preparātiem fibrotiskās izmaiņas tiek vizualizētas vai nu kā izveidoti lieli kolagēna šķiedru šķiedru kūlīši, kas ir saglabājuši šķērseniskas svītras, vai arī masveida

nogulsnes šķiedru masas Disse telpā, kas ir pietūkušas kolagēna šķiedras, kuras ir zaudējušas periodiskas svītras (9. attēls).

Saskaņā ar mūsdienu koncepcijām fibroze ir dinamisks process, kas var progresēt un regresēt (10. attēls).

Nesen tika ierosināti vairāki specifiski PCI marķieri: A vitamīns (VA) zied lipīdu pilienos, GFAP, p75 NGF receptors un sinaptofizīns. Tiek veikti pētījumi par aknu HCI līdzdalību aknu cilmes šūnu proliferācijā un diferenciācijā.

Pētījām retinolu saistošā proteīna (RSB-4) saturu, kas veido kompleksu ar VA, kura koncentrācija asins plazmā normāli korelē ar organisma apgādi ar VA, no kura 80% ir atrodami PCI.

Starp saturu ir izveidota saistība

8. attēls. PCI fokusa proliferācija fibrogēnas aktivācijas stāvoklī

a - PCI hiperplāzija (baltas bultiņas) paplašināto sinusoīdu lūmenā; b - transdiferencēta HSC (baltas bultiņas), endotēlija šūnu (rozā bultiņa) proliferācija. Pusplānas sekcijas. Azure II krāsa ir pamata fuksīna. Mikrofotogrāfijas. Palielināts 1000

9. attēls. PCI miofibroblastiskās aktivācijas pēdējais posms

a, b - perisinusoidāla fibroze (baltas bultiņas). Peri-sinusoidālie saistaudi un starpšūnu matricas slānis ap hepatocītiem (b) tiek iekrāsoti ar pamata fuksīna sarkanu krāsu. HCI tiek aktivizēti un pārveidoti fibroblastos (zilās bultiņas). Hz attēlā. a - hepatocīts ar izpostītu citoplazmu. Pusplānas sekcijas. Azure II krāsa ir pamata fuksīna. Mikrofotogrāfijas. Palielināts 1000; c, d - perisinusoidāla un perihepatocelulāra fibroze aknu daivā, palielināts kolagēna šķiedru fibrilu elektronu blīvums; mitohondriju matricas kondensācija hepatocītos (oranža bultiņa). UV.8000 un 15000 attiecīgi. Elektronu difrakcijas modeļi

1. tabula. RSB-4 satura rādītāji pacientiem ar dažādu etioloģiju aknu cirozi (LC) un hronisku hepatītu (CH), ng/ml (M±t)

Grupa n M±m р

Aknu ciroze 17 23,6±2,29<0,05

CG, AST normāls 16 36,9±2,05* >0,05

CG, AST >2 normas 13 33,0±3,04* >0,05

CG, ALT normāls 13 37,5±3,02* >0,05

CG, ALT >2 normas 21 35,9±2,25* >0,05

Kontrole 15 31,2±2,82

Piezīme: p - būtiskas atšķirības ar kontroli (lpp<0,05); * - достоверные различия между ЦП и ХГ (р<0,05)

Viltus daivas, ko ieskauj šķiedraina starpsiena. Masseau krāsojums - viltus daivas aplis. Glezniecība pēc Nu.Uv.x50 Masson. UV.x200

10. attēls. Notikumu dinamika viltus daivas pacientam ar vīrusu cirozi 6 mēnešus pēc autologo mezenhimālo cilmes šūnu transplantācijas aknās

Mēs ēdam RSB-4 un fibrozes (cirozes) 4. stadiju, atšķirībā no hroniskā hepatīta, kurā šāda atkarība netika novērota, neatkarīgi no aknu iekaisuma aktivitātes bioķīmiskajiem marķieriem.

Šis fakts ir jāņem vērā, pamatojot aizstājterapiju, lai novērstu VA deficītu organismā, kas var būt saistīts ar PCI potenciāla izsīkumu, ko izraisa fibrozes progresēšana aknās.

1. PCI strukturālā un funkcionālā stāvokļa novērtēšanas maksimālu efektivitāti nodrošina intravitālās biopsijas morfoloģiskā izpēte, vienlaikus izmantojot šūnu vizualizācijas metožu komplektu (gaismas, ultraplānu griezumu elektronmikroskopiju un oriģinālās fiksācijas metodes un metodes). krāsošana).

2. PCI morfoloģiskā pētījuma rezultāti ļauj uzlabot fibrozes intravitālās diagnostikas kvalitāti, to monitorēt un prognozēt hronisku difūzu aknu bojājumu iznākumus mūsdienīgākā līmenī.

3. Morfoloģisko slēdzienu rezultāti ļaus klīnicistam galīgās diagnozes formulējumā papildus iekļaut aktualizētos datus par hroniskuma stadiju (fibrozes stabilizāciju, progresēšanu vai izzušanu) terapijas laikā.

Literatūra

1. Ivaškins, V. T. Prefibrotisko izmaiņu klīniskie simptomi: Viskrievijas interneta iekšējās medicīnas speciālistu kongresa lekcijas stenogramma / V. T. Ivaškins, A. O. Bueverovs // INTERNISTS: Nacionālā iekšējās medicīnas speciālistu interneta biedrība. - 2013. - Piekļuves režīms: http://internists. ru/publications/detail/6569/. - Piekļuves datums: 21.11.2016.

2. Kiyasov, A.P. Ovālās šūnas — iespējamās aknu cilmes šūnas vai hepatoblasti? / A. P. Kijasovs, A. A. Gumerova, M. A. Titova // Šūnu transplantoloģija un audu inženierija. - 2006. - T. 2, Nr. 4. - P. 55-58.

1. Ivashkin, V. T. Klinicheskaya simptomatika dofibroticheskih izmenenij: stenogramma lekcii Vserossijskogo Internet-Kongressa specialistov for vnutrennim boleznyam / V. T. Ivashkin, A. O. Bueverov // INTERNIST: National "vboleznyt renni 3 . - Rezhim dostupa: http: //internist.ru/publications/detail/6569/ - Piekļuve datiem: 21.11.2016.

2. Kiyasov, A. P. Ovāls "nie kletki - predpolagaemye stvolovye kletki aknas vai hepatoblasty? / A. P. Kiyasov, A. A. Gumerova, M. A. Titova // Kletochnaya transplantologiya i tkanevaya inzheneriya. - Nē. .. 4 . - 58.

3. Par sinusoidālo aknu šūnu un kaulu smadzeņu šūnu lomu veselīgu un bojātu aknu atjaunošanās stratēģijas nodrošināšanā / A. V. Lundup [et al.] // Transplantoloģijas un mākslīgo orgānu biļetens. -2010. - T. XII, Nr.1. - P. 78-85.

4. Serovs, V.V. Morfoloģiskie kritēriji vīrusa hroniskā B un C hepatīta etioloģijas, aktivitātes pakāpes un procesa stadijas novērtēšanai / V.V. Serovs, L.O. Severgina // Patoloģijas arhīvs. - 1996. - Nr.4. - P. 61-64.

5. Aknu zvaigžņu šūnu strukturālās un funkcionālās īpašības fibrozes dinamikā / O. A. Postņikova [et al.] // Fundamentālie pētījumi. - 2011. - Nr.10.

6. Aknu zvaigžņu šūnu ultrastrukturālā un imūnhistoķīmiskā izpēte infekciozās vīrusu izcelsmes aknu fibrozes un cirozes dinamikā / G. I. Nepomnyashchikh [et al.] // Eksperimentālās bioloģijas un medicīnas biļetens. - 2006. - T. 142, Nr. 12. - P. 681-686.

7. Ščegļevs, A. I. Aknu sinusoidālo šūnu strukturālās un vielmaiņas īpašības / A. I. Shcheglev, O. D. Mišņevs // Mūsdienu bioloģijas sasniegumi. - 1991. - T. 3, Nr.1. - P. 73-82.

10. Diētiskā retinoīda un triglicerīda ietekme uz žurku aknu zvaigžņu šūnu un zvaigžņu šūnu lipīdu pilienu lipīdu sastāvu / H. Moriwaki // J. Lipid. Res. - 1988. - Sēj. 29. - R. 1523-1534.

13. Frīdmens, S. Aknu fibroze 2006: Trešās AASLD vienas tēmas konferences ziņojums / S. Friedman, D. Rockey, B. Montgomery // Hepatoloģija. - 2006. - Sēj. 45(1). - R. 242-249.

18. Iredale, J. P. Aknu zvaigžņu šūnu uzvedība aknu bojājumu novēršanas laikā / J. P. Iredale // Semin. Live Dis. -2001. - Vol. 21(3). - R. 427-436.

19. Kobold, D. Reelīna ekspresija aknu zvaigžņu šūnās un aknu audu remonta laikā: jauns marķieris HSC diferenciācijai no citiem aknu miofibroblastiem / D. Kobolds // J. Hepatols. - 2002. - Sēj. 36(5). - R. 607-613.

20. Lepreux, S. Cilvēka aknu miofibroblasti attīstības laikā un slimības, koncentrējoties uz portālu (mio)

3. O roli sinusoidāls "nyh kletok pecheni i kletok kostnogo mozga v obespechenii regeneratornoj strategii zdorovoj i povrezhdennoj pecheni / A. V. Lyundup // Vestnik transplantologii i iskusstvennyh organov. - 2010. g. - . 7. 8. .

4. Serov, V. V. Morfologicheskie kriterii ocenki ehtiologii, stepeni aktivnosti i stadii processa pri virusnyh hronicheskih gepatitah V i S / V. V. Serov, L. O. Severgina // Arhiv patologii.

1996. - Nr.4. - S. 61-64.

5. Strukturno-funkcionalitāte "naya harakteristika zvezdchatyh kletok pecheni v dinamike fibroza / O. A. Postnikova // Fundamental"nye issledovaniya. - 2011. - Nr.10. - P. 359-362.

6. Ul "trastrukturnoe i immunogistohimicheskoe issledovanie zvezdchatyh kletok pecheni v dinamike fibroza i cirroza aknu infekcionno-virusnogo geneza / G. I. Nepomnyashchih // Byulleten" ehksperimental "noj biologii i mediciny. - - 2 681 -686.

7. SHCHeglev, A. I. Strukturno-metabolicheskaya harakteristika sinusoidal "nyh kletok pecheni / A. I. SHCHeglev, O. D. Mishnev // Uspekhi sovremennoj biologii. - 1991. - T. 3, Nr. 1. - S. 8.

8. CD34 aknu zvaigžņu šūnas ir cilmes šūnas / C. Kordes // Biochem., Biophys. Res. Bieži. - 2007. -Sēj. 352(2). - 410.-417. lpp.

9. Matricas proteīnu degradācija aknu fibrozē / M. J. Arthur // Pathol. Res. Prakse. - 1994. - Sēj. 190 (9-10).

10. Diētiskā retinoīda un triglicerīda ietekme uz žurku aknu zvaigžņu šūnu un zvaigžņu šūnu lipīdu pilienu lipīdu sastāvu / H. Moriwaki // J. Lipid. Res. - 1988. - Sēj. 29. - R. 1523-1534.

11. Augļa aknas sastāv no šūnām epitēlija-mezenhimālajā pārejā / J. Chagraoni // Blood. - 2003. - Sēj. 101. - P. 2973-2982.

12. Bioloģisko paraugu fiksācija, dehidratācija un iegulšana / A. M. Glauert // Praktiskās metodes elektronu mikroskopijā. - Ņujorka: Am. Elsevier, 1975. - Vol. 3, 1. daļa.

13. Frīdmens, S. Aknu fibroze 2006: Trešās AASLD vienas tēmas konferences ziņojums / S. Friedman, D. Rockey, B. Montgomery // Hepatoloģija. - 2006. - Sēj. 45(1). - R. 242-249.

14. Gaga, M. D. Cilvēka un rathepatiskās zvaigžņu šūnas ražo cilmes šūnu faktoru: iespējamais tuklo šūnu piesaistes mehānisms aknu fibrozes gadījumā / M. D. Gaga // J. Hepatols. - 1999. - Sēj. 30, Nr.5. - P. 850-858.

15. Glauert, A. M. Araldite as embedding medium for electronic microscopy / A. M. Glauert, R. H. Glauert // J. Biophys. Biochem. Cytol. - 1958. - Sēj. 4. - P. 409-414.

16. Aknu zvaigžņu šūnas un portāla fibroblasti ir galvenie šūnu kolagēnu un liziloksidāžu avoti normālās aknās un agri pēc traumas / M. Perepelyuk // Am. J. Physiol. Kuņģa-zarnu trakts. Aknu fiziol. - 2013. - Sēj. 304(6). - P. 605614.

17. C hepatīta vīrusa kodols un nestrukturālie proteīni izraisa fibrogēnu iedarbību aknu zvaigžņu šūnās / R. Bataller // Gastroenteroloģija. - 2004. - Sēj. 126, iss. 2. - P. 529-540.

18. Iredale, J. P. Aknu zvaigžņu šūnu uzvedība aknu bojājumu novēršanas laikā / J. P. Iredale // Semin. Live Dis. -2001. - Vol. 21(3). - R. 427-436.

19. Kobold, D. Reelīna ekspresija aknu zvaigžņu šūnās un aknu audu remonta laikā: jauns marķieris HSC diferenciācijai no citiem aknu miofibroblastiem / D. Kobolds // J. Hepatols. - 2002. - Sēj. 36(5). - R. 607-613.

20. Lepreux, S. Human aknu miofibroblasti attīstības laikā un slimības ar fokusu uz portāla (mio) fibroblastiem / S. Lepreux, A. Desmouliére

fibroblasti / S. Lepreux, A. Desmouliere // Priekšpuse. Fiziol. - 2015. - Piekļuves veids: http://dx.doi. org/10.3389/fphys.2015.00173. - Piekļuves datums: 31.10.2016.

22. Mezenhimālo kaulu smadzenēs iegūto cilmes šūnu transplantācija pacientiem ar HCV saistītu aknu cirozi / S. Lukashyk // J. Clin. Tulk. Hepatols. - 2014. - Sēj. 2, iss. 4. - P. 217-221.

23. Millonig, G. A. Fosfāta bufera priekšrocības osmija tetroksīda šķīdumiem fiksācijā / G. A. Millonig // J. Appl. Fizika. - 1961. - sēj. 32. - P. 1637-1643.

Vol. 158. - P. 1313-1323.

Vol. 24. - 205.-224.lpp.

29. Querner, F. Der mikroskopische Nachweis von Vitamin Aimanimalen Gewebe. Zur Kenntnis der paraplasmatischen Leberzellen-einschlüsse. Dritte Mitteilung / F. Querner // Klin. Wschr. - 1935. - sēj. 14. - P. 1213-1217.

30. Jaunākie notikumi miofibroblastu bioloģijā: saistaudu remodelācijas paradigmas / B. Hincs // Am. J. Pathols. - 2012. - Sēj. 180. - P. 1340-1355.

35. No starpsienas transversum iegūts mezotelis rada aknu zvaigžņu šūnas un perivaskulāras mezenhimālās šūnas jaunattīstības peles aknās / K. Asahina // Hepatoloģija. -2011. - Vol. 53. - P. 983-995.

Vol. 50. - 66.-71. lpp.

38. Thabut, D. Intrahepatiskā angioģenēze un sinusoidālā remodelācija hroniskas aknu slimības gadījumā: jauni mērķi portāla hipertensijas ārstēšanai? / D. Tabuts, V. Šahs // J. Hepatols. - 2010. - Sēj. 53. - P. 976-980.

39. Wake, K. Aknu zvaigžņu šūnas: trīsdimensiju struktūra, lokalizācija, neviendabīgums un attīstība / K.

//Priekšpuse. Fiziol. - 2015. - Piekļuves veids: http://dx.doi. org/10.3389/fphys.2015.00173. - Piekļuves datums: 31.10.2016.

21. Peroksisomu proliferatora aktivēto receptoru gamma moduļa-profibrogēnās un proinflammatoriskās darbības ligandi aknu zvaigžņu šūnās / F. Marra // Gastroenteroloģija. -2000. - Vol. 119. - P. 466-478.

22. Mezenhimālo kaulu smadzenēs iegūto cilmes šūnu transplantācija pacientiem ar HCV saistītu aknu cirozi / S. Lukashyk // J. Clin. Tulk. Hepatols. - 2014. - Sēj. 2, iss. 4. - R. 217-221.

23. Millonig, G. A. Fosfāta bufera priekšrocības osmija tetroksīda šķīdumiem fiksācijā / G. A. Millonig // J. Appl. Rizika. - 1961. - sēj. 32. - P. 1637-1643.

24. Agri proliferējošo ovālo šūnu izcelsme un strukturālā attīstība žurku aknās / S. Paku // Am. J. Hepatols. - 2001. gads.

Vol. 158. - P. 1313-1323.

25. Miofibroblastu izcelsme aknu fibrozē / D. A. Brenner // Fibrogenesis Tissue Repair. - 2012. - Sēj. 5, suppl. 1. - S. 17.

26. Aknu miofibroblastu izcelsme un funkcijas / S. Lemoinne // Biochim. Biophys. Acta. - 2013. - Sēj. 1832 (7). - P. 948-954.

27. Pinzani, M. PDGF un signālu pārraide aknu zvaigžņu šūnās / M. Pinzani // Front. Biosci. - 2002. - Sēj. 7. - P. 1720-1726.

28. Popper, H. A vitamīna sadalījums audos, ko atklāj fluorescences mikroskopija / H. Popper // Physiol. Rev. - 1944. gads.

Vol. 24. - R. 205-224.

29. Querner, F. Der mikroskopische Nachweis von Vitamin Aimanimalen Gewebe. Zur Kenntnis der paraplasmatischen Leberzellen-einschlüsse. Dritte Mitteilung / F. Querner // Klin. Wschr. - 1935. - sēj. 14. - R. 1213-1217.

30. Jaunākie notikumi miofibroblastu bioloģijā: saistaudu remodelācijas paradigmas / B. Hincs // Am. J. Pathols. - 2012. - Sēj. 180. - R. 1340-1355.

31. Reinoldss, E. S. Svina citrāta izmantošana augstā pH līmenī kā elektronu necaurlaidīgs traips elektronu mikroskopijā / E. S. Reinoldss // J. Cell. Biol. - 1963. - sēj. 17. - P. 208-212.

32. Safadi, R. Aknu fibroģenēzes imūnstimulācija ar CD8 šūnām un transgēna interleikīna-10 vājināšana no hepatocītiem / R. Safadi // Gastroenteroloģija. - 2004. - Sēj. 127(3). - P. 870-882.

33. Sato, T. An electron microscopic study of specimen-fixed for long periods in phosphate buffered formalin / T. Sato, I. Takagi // J. Electron Microsc. - 1982. - Sēj. 31, Nr.4. - P. 423-428.

34. Senoo, H. A vitamīna uzglabāšanas šūnas (zvaigžņu šūnas) / H. Senoo, N. Kojima, M. Sato // Vitam. Horm. - 2007. - Sēj. 75.

35. No starpsienas transversum iegūts mezotelis rada aknu zvaigžņu šūnas un perivaskulāras mezenhimālās šūnas jaunattīstības peles aknās / K. Asahina // Hepatoloģija. -2011. - Vol. 53. - R. 983-995.

36. Stanciu, A. Jauni dati par ITO šūnām / A. Stanciu, C. Cotutiu, C. Amalinei // Rev. Med. Čīr. Soc. Med. Nat. Iasi. -2002. - Vol. 107, Nr.2. - P. 235-239.

37. Suematsu, M. Profesors Tošio Ito: gaišreģis pericītu bioloģijā / M. Suematsu, S. Aiso // Keio J. Med. -2000.

Vol. 50. - R. 66-71.

38. Thabut, D. Intrahepatiskā angioģenēze un sinusoidālā remodelācija hroniskas aknu slimības gadījumā: jauni mērķi portāla hipertensijas ārstēšanai? / D. Tabuts, V. Šahs // J. Hepatols. - 2010. - Sēj. 53. - R. 976-980.

39. Veik, K. Aknu zvaigžņu šūnas: trīsdimensiju struktūra, lokalizācija, neviendabīgums un attīstība / K. Wake // Proc. Jpn. Akad. Ser. B. Fiz. Biol. Sci. - 2006. - Sēj.

Wake // Proc. Jpn. Akad. Ser. B. Fiz. Biol. Sci. - 2006. - Sēj. 82(4). - 155.-164.lpp.

82(4). - 155.-164.lpp.

40. Wake, K. In Cells of the Hepatic sinusoid / K. Wake, H. Senoo // Kupffer Cell Foundation (Rijswijk, Nīderlande). - 1986. - Sēj. 1. - P. 215-220.

41. Watson, M. L. Audu sekciju krāsošana elektronu mikroskopijai ar smagajiem metāliem / M. L. Watson // J. Biophys. Biochem. Cyt. - 1958. - Sēj. 4. - P. 475-478.

AKNU KLĪNISKĀ CITOLOĢIJA: STELĀTU ŠŪNAS (AKNU ZVAIGŽŅU ŠŪNAS)

Tsirkunovs V. M., Andrejevs V. P., Kravčuks R. I., Kandratovičs I. A. Izglītības iestāde "Grodņas Valsts medicīnas universitāte", Grodņa, Baltkrievija

Ievads. Ito stellate šūnu (Hepatic Stellate Cells, HSC) loma ir noteikta kā viena no vadošajām aknu fibrozes attīstībā, taču HSC struktūru intravitālās vizualizācijas izmantošana klīniskajā praksē ir minimāla.

Darba mērķis ir prezentēt HSC strukturālās un funkcionālās īpašības, pamatojoties uz intravitālo aknu biopsijas paraugu citoloģiskās identifikācijas konstatējumiem.

Materiāli un metodes. Tika pielietotas klasiskās biopsijas paraugu gaismas un elektronu mikroskopijas metodes oriģinālā ultraplānu griezumu, fiksācijas un krāsošanas tehnikas ietvaros.

Rezultāti. Aknu biopsijas paraugu HSC strukturālās īpašības pacientiem ar hronisku C hepatītu ir parādītas gaismas un elektronu mikroskopijas fotoattēlu ilustrācijās. HSC tiek attēloti dažādos posmos (atpūta, aktivācija) un pārveidošanas procesā par miofibroblastiem.

Secinājumi. Oriģinālo HSC klīniskās un morfoloģiskās identificēšanas un funkcionālā stāvokļa novērtēšanas metožu izmantošana ļauj uzlabot aknu fibrozes diagnostikas un prognozes kvalitāti.