содржина
За да се процени способноста на телото да се спротивстави на заразни болести или да се одреди фазата на патологија, се користи тест на крвта. Методот ELISA зазема важно место меѓу лабораториските тестови, помага сеопфатно да се проучува активноста на заштитната функција на крвта, да се утврди имунодефициенција кај заразни болести, крвни заболувања, хормонални и автоимуни процеси.
Што е ензимски имуноесеј на крвен тест?
Овој метод се однесува на лабораториски истражувања кои одредуваат присуство на заштитни крвни фактори од протеинска природа (антитела) на одредени патогени агенси (антигени). Ензимски имуносорбентен тест открива имуноглобулини, кои можат да се најдат во форма на имунокомплекси. Тие се појавуваат кога се случуваат сложени неврохуморални реакции на човечката имунолошка одбрана, кои стануваат одговор на воведувањето на странски антигени.
Телото произведува специфични антитела против секој тип на патоген. Следно, патолошкиот микроорганизам или антиген се врзува и се формира сложено соединение „антиген-антитело“. Потоа се неутрализира, настанува ензимска лиза, се јавува реакција на фагоцитоза, а процесот завршува со отстранување од телото. Присуството на специфични комплекси, утврдени со ELISA, укажува на видот на патогенот или штетната супстанција кај пациентот.
Класи на имуноглобулин
Научниците откриле и проучувале 5 типа на имуноглобулини: IgE, IgD, IgG, IgM, IgA. Има и други паралелки, но тие се уште се во фаза на истражување, а нивната улога не е целосно разбрана. Во практичната медицина важни се А, М, Г. Информациската содржина и точноста на определувањето се заснова на временските интервали во кои тие се појавуваат, достигнуваат максимум и исчезнуваат.
Индикации за тестирање на крвта со помош на ELISA
Користејќи ја оваа анализа, можете да ја оцените ефективноста на третманот, да спроведете сеопфатна студија пред операциите за трансплантација, да ја одредите состојбата на имунодефициенција и антителата на повеќе од 600 видови алергени. Тестирањето на крвта со помош на ELISA се користи како дополнителен начин за откривање на клетките на ракот. Анализата е пропишана ако е неопходно да се откријат антитела на микроби кои предизвикуваат сексуално преносливи патологии:
- трихомонијаза;
- сифилис;
- токсоплазмоза;
- микоплазмоза;
- уреаплазмоза.
Во случај на хелминтични инфестации, ELISA анализата ќе укаже на зголемување на количината на имуноглобулини. Се спроведуваат студии за да се потврди дали пациентот има:
- Епштајн-Бар вирусот;
- херпетични инфекции;
- цитомегаловирус;
- група на вирусен хепатитис.
Тест на крвта со методот ELISA
Тестирањето на крвта со ензимски имуноесеј не е единствената опција за одредување на имуноглобулините. Понекогаш за оваа студија се собираат цереброспиналната течност, стаклестото ткиво и плодовата вода. Кога се користи крв, таа се собира од антекубиталната вена со помош на игла за инјектирање. Тестот мора да се направи на празен стомак; пред ELISA, не се препорачува земање лекови кои би можеле да влијаат на резултатот. Треба да се откажете од алкохол, пушење и употреба на дрога пред да донирате биоматеријал. Опции за резултат од тестот:
- Доколку имуноглобулините IgG, IgM, IgA се негативни, лекарите велат дека нема патологија или почетна фаза. Истиот резултат (негативен) ќе биде по целосно закрепнување по долг период.
- Ако IgG е позитивен, но IgM и IgA не се откриени, тоа укажува на формирање на имунитет по вакцинација или заразна болест.
- Со високи титри на IgM и негативни IgA, IgG, се поставува дијагноза на акутна инфективна болест.
- Ако IgG, IgM, IgA се позитивни, лекарите зборуваат за акутната фаза на релапс на постоечка хронична болест.
- За хронична инфекција која е во фаза на намалување (ремисија), ELISA тестот покажува негативни IgM титри, додека IgA и IgG ќе бидат позитивни.
Предности и недостатоци на ELISA анализата
Главниот негативен аспект на оваа студија е можноста за добивање лажно позитивни или лажно негативни резултати. Причината за несигурноста е употребата на лекови и технички дефекти во лабораторијата. Процесот на метаболички нарушувања во телото може да ја фалсификува анализата. Главните предности на ELISA анализата се:
- точност, дијагностичка специфичност;
- ниски трошоци за анализа;
- брзина на добивање резултати;
- можноста за динамично следење на фазата на патологија и ефективноста на третманот;
- леснотија на истражување;
- способност за масовни прегледи на фокуси на инфекција;
- безболност, безбедност за пациентот;
- примена во обработката на информатичката технологија.
Видео
Најдовте грешка во текстот?
Изберете го, притиснете Ctrl + Enter и ние ќе поправиме сè!
ELISA анализата (ензимски поврзана имуносорбентна анализа) е модерна дијагностичка процедура насочена кон идентификување на специфични антитела во крвта на патогени на голем број болести, одредување на фазата на развој на патологијата и нејзината етиологија. Се користи како метод за следење на процесот на лекување и неговата ефикасност. Во текот на истражувачкиот процес се анализираат квалитативни и квантитативни показатели.
Методот ELISA е многу информативен, точноста на резултатите е повеќе од 96%. Дијагностика е достапна во речиси секоја лабораторија и медицинска установа.
Главни индикации
Ензимска имуноанализа е пропишана за да се потврди присуството на сексуално преносливи заразни болести:
- трихомонијаза;
- кламидија;
- уреаплазмоза;
- сифилис, итн.
ELISA исто така се користи за дијагностицирање на вирусни заболувања:
- херпес;
- херпес тип 4 (Епштајн-Бар вирус);
- вирусен хепатитис;
- цитомегаловирусна инфекција.
Како да се подготвите за истражување
Биолошки материјал за истражување е крвта. Неколку дена пред тестот, не треба да земате лекови. Антибиотици, антихелминти и антивирусни лекови се прекинуваат во рок од 14 дена.
Материјалот се собира наутро на празен стомак. Еден час пред постапката, дозволено е да се напиете чаша негазирана вода; внесувањето храна е исклучено.
Карактеристики на анализата
За да се спроведе студијата, се зема венска крв во волумен од најмалку 5 ml. Во некои случаи, цереброспиналната течност, амнионската течност или содржината на стаклестото тело се користат како биоматеријал.
Земањето крв се врши со помош на игла за инјектирање, строго на празен стомак, со цел да се избегнат лажни позитивни резултати. Треба да престанете да пушите и да пиете алкохолни пијалоци 12 часа пред тоа. При употреба на наркотични супстанции, резултатите од анализата се искривени.
Ако заклучокот укажува на негативни вредности на имуноглобулините G, A, M, тоа укажува на почетната фаза на развојот на патолошкиот процес или неговото отсуство. Овој резултат се евидентира по целосно закрепнување по терапијата.
Негативниот резултат на IgM и IgA и позитивен резултат на IgG укажуваат на формирање на имунитет по заразна болест или вакцинација.
Позитивен IgM резултат и негативен или позитивен IgG, IgA резултат укажуваат на присуство на акутна инфективна патологија.
Анализата ELISA се изведува доста брзо, резултатите се готови во рок од еден ден по собирањето на материјалот.
Благодарение на развојот на модерната медицина, при поставувањето на дијагнозата, лекарот повеќе не треба да се фокусира на индиректни манифестации на болести или да спроведува повеќестепени лабораториски тестови. Доволно е да се спроведе една анализа која ќе ја потврди или побие наводната првична дијагноза.
Овој метод е ензимски имуносорбентен тест (ELISA) - оваа студија ви овозможува да откриете специфични антитела и антигени карактеристични за различни патологии, што во голема мера ја забрзува дијагнозата.
ELISA анализата е лабораториски тест (метод) кој помага да се утврди присуството или отсуството на одредени антитела во телото за борба против вирусот и нивната количина.
Основата на студијата е антигенот на природна реакција (објект штетен за телото) - антитело (протеин кој уништува штетни предмети), што овозможува да се открие присуството на разни вируси и бактерии.
ELISA е природен имунолошки одговор на телото - интеракција на антитело со соодветниот антиген. Значи, за време на ELISA, антигени или антитела се додаваат еден по еден во епрувета со материјалот, по што се одредува концентрацијата на добиените комплекси антиген-антитела.
Ако се формираат натпревари, тогаш се појавуваат имуни комплекси, тогаш се јавува ензимска реакција на бојата со комбинираната молекула. Благодарение на промената на бојата при ензимска индикација, болеста се идентификува по испитувањето на нивото на утврденото соединение.
Видови имуноглобулини
Човечките имуноглобулини се диференцираат во неколку класи кои се разликуваат една од друга по својствата, структурата и антигенските карактеристики на тешките синџири (Н синџир). Сите цицачи, вклучително и луѓето, имаат пет H-синџири, кои ја одредуваат припадноста на имуноглобулините во соодветната класа: G, M, A, D, E.
Секоја класа се разликува една од друга по биолошките својства и способноста за врзување на антигени и брзината и силата на врската со молекулата.
Функциите на секој имуноглобулин (Ig) се различни:
| Количина во телото | Функции | Полуживот (денови) | Значење | |||||||||||||||||||||||||||
| Г | 70% | Формирајте пасивен имунитет кај новороденчето; неопходни за имунолошки одговор подобрување на фагоцитозата, | 21-24 | обезбедуваат долгорочен хуморален имунитет против заразни болести | ||||||||||||||||||||||||||
| М | 5-10% | потребни за активирање на фагоцитозата, способен да врзе 5 антигенски молекули, | 5 | Обезбедува примарен имунолошки одговор | ||||||||||||||||||||||||||
| А | 10-15 | Ги неутрализира токсините и вирусите потребни за формирање на ран имунитет Појавата на имуноглобулини се јавува по необичен „синџир“ - lgM lgG, вака телото реагира на појавата на антиген во телото. При лабораториска дијагностика се проценува концентрацијата на три главни имуноглобулини - G, M, A. Индикации за имуноглобулинско тестирањеАнализата ELISA станува се попопуларна секоја година. Таквата студија ја забрзува дијагнозата, а тоа е многу важно за третман на патологии како што се:
ELISA е единствен маркер за автоимуни патологии и малигни неоплазми. Подготовка за тестотКога се подготвувате за студијата, треба да се придржувате до следниве правила: Лекарите препорачуваат и да се придржувате до посебен режим на исхрана - исклучување на мрсна и пржена храна, а ако се направи тест за хепатитис, тогаш неопходно е да не се јаде никаков портокалов зеленчук, а особено цитрусно овошје. Треба да донирате крв наутро на празен стомак. Лажно-позитивна анализа се јавува поради неисполнети препораки, особено конзумирање на масна храна, што доведува до превисока концентрација на триглицериди во плазмата, поради што се намалува спроводливоста на ELISA. Постапка за собирање примероциЦелата крв, серум или венска крвна плазма може да се користи како материјал за испитување. Материјалот се собира, најчесто од улнарната вена, со помош на игла за еднократна употреба и вакуум цевка, потребни се 5-10 ml крв. За да се обезбеди точност на резултатот, важно е да се придржувате до правилната техника на земање примероци - пункција на самиот сад и околните ткива мора да се изврши во една манипулација, затоа се користи кратка игла со голем дијаметар, така што спротивниот ѕид на вената не е повреден и црвените крвни зрнца не се оштетени.
За време на складирањето на материјалот, треба да се избегнува можна јонизација, освен тоа, материјалот не треба да дојде во контакт со резидуални средства за дезинфекција, затоа се користи само пластична цевка за еднократна употреба, означена со името на пациентот, датумот и времето на испорака на материјалот. Доколку е неопходно краткотрајно складирање на испитниот материјал, тогаш се користи комора за ладење со температура од 2-4 o C, доколку е потребно подолго складирање, тогаш материјалот се замрзнува на температура од -20 o C. Како се прави анализатаПо подготовката на материјалот што се проучува, лабораторискиот асистент ги започнува потребните манипулации. За таа цел, се користат голем број специјални групи на антигени, кои имаат способност да предизвикаат одговор на телото на иритант, тоа се разни инфекции, хормони и алергени. Очекуваната реакција на антиген-антитела изгледа вака:
Во моментов, развиени се многу различни опции за ELISA, но не постои јасна класификација на нив. Вообичаено, методите се разгледуваат врз основа на нивната поделба на хетеро- и хомогени - сите фази на анализа се случуваат со користење на цврста фаза или со користење само на раствор. Современите клинички дијагностички лаборатории обично користат хетерогена (цврста фаза) ELISA, во која цврстата фаза значи апсорпција на антигени или антитела на цврстата површина на специјални бунари лоцирани на микроплоча од полистирен; методот е поделен на директна и индиректна ELISA. Со директна ELISA, внесениот антиген се фиксира за време на процесот на инкубација на површината на празните бунари; за ова, материјалот за тестирање се става во чисти бунари 20-25 минути, ова е неопходно за антигенот да се закачи на нивната површина. По ова се додава потребното антитело. Следно, материјалот останува одредено време за да формира врски. Антителата секогаш се додаваат во вишок, па дури и да се присутни, неврзаните антигени остануваат во примерокот, а ако воопшто нема антигени, тогаш нема да има врски. За да се отстранат „дополнителните“ антитела, се врши декантација, по што остануваат само оние антитела кои создале врска со антигенот.
Во индиректната метода ELISA се користат антитела кои се претходно комбинирани со супстратот на ензимската реакција; во овој случај, поврзувањето на антителата со антигенот се случува за време на процесот на инкубација, по што доаѓа до мобилизирање на врските на површината на бунарите, а потоа додадениот конјугат и супстрат-хрогениот реагенс ја обои реакцијата. Така, главната разлика помеѓу индиректните и директните методи не е адхезијата на материјалот на површината на чистите бунари, туку врзувањето за антигенот имобилизиран на плочата. Реакцијата се прекинува со помош на специјализирани уреди, а потоа секоја буна е подложена на фотометриски процес, проследен со компаративен опис на резултатот добиен со претходно спроведените контролни примероци. Ако во примерокот се открие зголемување на оптичката густина, тогаш концентрацијата на специфични антитела во резултатот од тестот исто така е преценета. Кога ќе биде готова анализата?Студијата не одзема многу време, од земање крв до добивање на резултатот, потребни се од 1 до 10 дена, во зависност од дијагностичките мерки. Резултати од тестот и нивно толкувањеФормата за дијагностички резултат што ја добил пациентот укажува на негативен или позитивен резултат за одредени класи на имуноглобулини, а исто така е индициран квантитативен индикатор за различни класи на антитела. Можни се различни толкувања на резултатите:
Така, на пример, ако се откриени IgG и IgM, тогаш пациентот може да има една од следниве болести:
Ензимскиот имуноанализа често се пропишува за хормонални студии; нормите се прикажани во табелата:
Анализата ELISA е дијагностички тест кој ви овозможува да ја процените веројатноста за формирање на онколошки патологии. Сепак, толкувањето на резултатите го врши само лекарот што посетува. Значењето на резултатите од тестотELISA е погодна за откривање на различни форми на сексуално преносливи инфекции, вклучително и сифилис, и често се користи за скрининг на бремени жени. Благодарение на оваа студија, можете да дознаете пред колку време се појавила инфекцијата и стадиумот на болеста во времето на студијата:
За време на студијата, бунарите на плочата со негативен индикатор остануваат безбојни, а позитивните стануваат светло жолти. Ако бојата на позитивните бунари не се совпаѓа со бојата на контролата, тогаш резултатот се смета за сомнителен и неопходно е да се повтори тестот. Ензимската имуноанализа е првиот чекор во дијагностицирањето на ХИВ.Анализата не може да се изврши веднаш по сомнителна инфекција, потребно е да се почека до крајот на периодот на инкубација (од 14 дена до 6 месеци). При анализата се одредуваат антитела на ХИВ-1 и ХИВ-2, се бараат антитела од класа Г, кои обично се појавуваат во подоцнежна фаза, а антителата од класа А и М се откриваат во раните фази (во периодот на инкубација).
ELISA исто така се користи како дијагностички тест за туберкулоза, но дури и ако пациентот има антитела за оваа патологија, тоа не секогаш го потврдува присуството на туберкулоза, па ELISA често се користи како техника за разјаснување или за дијагностицирање на латентна екстрапулмонална форма. IgG - хронична фаза на инвазија |
||||||||||||||||||||||||||||
| IgA – инфекција се појавила пред повеќе од 30 дена | ||||||||||||||||||||||||||||||
| IgG – инвазијата е во акутната фаза | ||||||||||||||||||||||||||||||
| IgG – ја потврдува дијагнозата и ја покажува ефективноста на терапијата |
Добрите и лошите страни на анализата
ELISA има многу предности, што ја објаснува нејзината популарност меѓу лекарите и пациентите, а тоа се:
- висока точност на резултатите,
- прифатлива цена,
- брз резултат,
- идентификување на стадиумот на болеста,
- контрола на болеста со текот на времето.
Сепак, заедно со предностите, постои и недостаток - во ретки случаи, анализата може да биде лажно позитивна или лажно негативна.
Зошто резултатот може да биде несигурен
Грешки како резултат може да се појават поради технички прекршувања, а анализата може да биде неверодостојна и кај луѓе со одредени хронични заболувања (ревматоиден фактор) кои се карактеризираат со производство на специфични антитела.
Конечниот резултат е исто така под влијание на употребата на лекови од страна на пациентот и метаболичките нарушувања. Поради овие причини, позитивен резултат за ХИВ и онкопатологија бара повторени примероци.
Трошоци за студијата
Цената на ELISA варира во зависност од насоката на дијагнозата (RUB):
- хепатитис 250 -900;
- вируси – 250 -1000;
- ХИВ – 250-350;
- хелминтични инфестации – 280 – 900;
- сифилис -150-250;
- габични инфекции 400-500.
Формат на статија: Лозински Олег
Видео за ELISA анализа
Како се изведува ELISA анализата:
Како се спроведува студијата ELISA?
Механизам на реакција
Имуносорбентната анализа поврзана со ензимот се заснова на имунолошката реакција на антигенот со антитела, а прикачувањето на ензимската ознака за антителата овозможува да се земе предвид резултатот од реакцијата антиген-антитело со појавата на ензимска активност или со промена на неговото ниво.Во поедноставена форма механизмот на реакција може да се претстави на следниов начин:
|
Првата реакција се јавува помеѓу откриениот Ig (Ab) и прочистениот патоген антиген (Ag), фиксиран на површината на бунарите на имунолошкиот таблет. |
|
|
|
За да се идентификуваат формираните имуни комплекси, се спроведува втора имунолошка реакција, во која врзаната специфична Ig делува како антиген, и конјугат што претставува Ig (Ab) на соодветната човечка Ig, означена со ензимот -пероксидаза (K) , се користи како антитела кон него. |
|
|
Следно, настанува ензимска реакција, катализирана од ензимскиот дел од коњугираната молекула.Подлогата за оваа реакција е безбојна супстанција - хромоген, кој во текот на реакцијата формира обоена супстанција. Интензитетот на бојата во бунарот на одреден начин зависи од количината на имуноглобулини содржани во примерокот. |
Пресметка на резултатите
Спроведување на ензимска имуноанализа
За серодијагноза, се користат полистиренски плочи од 96 бунари, на ѕидовите на клетките од кои антигенот е претходно адсорбиран. Тестниот серум се додава во ќелијата на таблетата. Во овој случај, на него се прикачени антитела хомологни на антигенот. Неприкачените антитела се отстрануваат со миење. Потоа, во клетките се додаваат антитела против човечки имуноглобулини (антитела) означени со ензим. Доколку во серумот за тестирање биле присутни антитела што може да се детектираат, тогаш во оваа фаза тие ќе дејствуваат како антигени со кои ќе реагираат означените антитела. Додавањето на хромогена супстанција (боја) по миењето ќе ни овозможи да ја земеме предвид реакцијата на бојата во развој во клетките. Интензитетот на бојата е пропорционален на количината на ензимот, а со тоа и на количината на антитела.При мерење на оптичката густина (ОД) на течност во клетка и споредување со контролен примерок, концентрацијата на антителата се пресметува во единици на волумен.Најчесто се користи за пресметување на резултатите во единици на оптичка густина.. Мора да се земе предвид дека секој тест систем има свои индикатори за запишување на резултатите и индикатори за нормалност и патологија според кои треба да се води при толкувањето на резултати.
Кои инфекции може да се детектираат со ELISA?
Главно во современата венерологија се користи за дијагноза на сифилис (во комбинација со други реакции), ХИВ инфекција, вирусен хепатитис. Има ограничена вредност за дијагноза на хламидијална инфекција, цитомегаловирусна инфекција и други херпетични инфекции. Се користи и методот ELISA за одредување на антитела кај разни заразни болести, нивоа на хормони, автоантитела и разни маркери на рак.
Како да се интерпретираат резултатите од ELISA
Проучувањето на присуството и нивото на антитела од различни класи во некои случаи помага да се одредат фазите на инфективниот процес
|
Фаза на болеста |
IgM |
IgA |
IgG |
|
Примарна фаза |
|||
|
Примарна фаза |
|||
|
Примарна фаза |
|||
|
Егзацербација на хроничната фаза |
|||
|
Хронична фаза |
|||
|
Минато (излечена инфекција) |
|||
|
Закрепнување |
титарот се намалува за 2-4 пати по успешен третман |
титарот се намалува за 4-8 пати 1-1,5 месеци по успешното лекување |
|
|
Негативен резултат |
За жал, таквата важна предност на ELISA како квантитативното определување на антителата не е од големо значење во практичната работа - т.е. не дозволува точна дијагноза и не влијае на дозата и времето на лековите.
Која е улогата на методот ELISA во дијагнозата на сифилис
Методот ELISA во дијагнозата на сифилис првпат е користен во 1975 година. Во моментов, тој е широко користен за серолошка дијагноза на сифилис во Русија и се користи како потврден тест за сифилис. Обично се спроведува студија која ги идентификува т.н. вкупни антитела на антигени Treponema pallidum (IgM и IgG), иако во некои случаи е можно да се утврдат само „рани“ антитела од класата M. ELISA за сифилис станува позитивна по 3 недели од моментот на инфекцијата и останува позитивна за доста долго време дури и по третманот (понекогаш и доживотно).Затоа, како тест кој го потврдува излекувањето на сифилисот, ELISA не се користи.Во повеќето случаи се врши само квалитативно определување на ELISA - т.е. само позитивен или негативен резултат, иако е можно и квантитативно определување.
Се вчитува...