Tanin (tanida) ialah sebatian fenolik molekul tinggi tumbuhan yang boleh memendakan protein dan mempunyai rasa astringen.
Istilah "tanin" telah berkembang dari segi sejarah, berkat keupayaan sebatian ini untuk menukar kulit haiwan mentah menjadi kulit tahan lama, tahan terhadap kelembapan dan mikroorganisma. Penggunaan istilah ini secara rasmi dicadangkan pada tahun 1796 oleh Seguin untuk menetapkan bahan dalam ekstrak tumbuhan tertentu yang boleh menjalankan proses penyamakan.
Penyamakan ialah interaksi kimia kompleks tanin dengan molekul kolagen, protein utama tisu penghubung. Sifat penyamakan dimiliki oleh fenol polinuklear yang mengandungi lebih daripada satu hidroksil dalam molekul. Dengan susunan rata tanida pada molekul protein, ikatan hidrogen yang stabil timbul di antara mereka:
Serpihan molekul protein Serpihan molekul tanida
Kekuatan interaksi tanida dengan protein bergantung kepada bilangan ikatan hidrogen dan dihadkan oleh saiz molekul sebatian polifenol. Berat molekul tannin boleh mencapai 20,000. Pada masa yang sama, terdapat 1-2 kumpulan hidroksi fenolik bagi setiap 100 unit berat molekul dalam tanin. Oleh itu, bilangan ikatan hidrogen yang terbentuk adalah banyak dan proses penyamakan tidak dapat dipulihkan. Radikal hidrofobik, berorientasikan kepada persekitaran luaran, menjadikan kulit tidak boleh diakses oleh lembapan dan mikroorganisma.
Tidak semua tanin mampu penyamakan sebenar. Sifat ini membezakan sebatian yang mempunyai berat molekul 1,000 atau lebih. Sebatian polifenol dengan jisim kurang daripada 1,000 tidak mampu menyamak kulit dan hanya mempunyai kesan astringen.
Tannin digunakan secara meluas dalam industri. Cukuplah untuk mengatakan bahawa pengeluaran tanin dunia melebihi 1,500,000 tan setahun, dan bahagian tanin sayuran adalah sehingga 50-60% daripada jumlah keseluruhan.
Taburan dalam dunia tumbuhan dan peranan tanin dalam tumbuhan. Tannin banyak ditemui dalam wakil angiosperma dan gimnosperma, alga, kulat, lichen, dalam lumut kelab dan pakis. Mereka ditemui dalam banyak tumbuhan yang lebih tinggi, terutamanya dikot. Bilangan terbesar mereka ditemui dalam beberapa wakil keluarga Fabaceae, Myrtaceae, Rosaceae, Anacardiaceae, Fagaceae, Polygonaceae.
Tannin dalam tumbuhan terletak dalam vakuol sel dan diserap pada dinding sel semasa penuaan sel. Mereka terkumpul dalam kuantiti yang banyak dalam organ bawah tanah, kulit kayu, tetapi boleh didapati dalam daun dan buah.
Tannin melakukan terutamanya fungsi perlindungan dalam tumbuhan. Dengan kerosakan mekanikal pada tisu, pembentukan peningkatan tanin bermula, disertai dengan pemeluwapan oksidatif mereka di lapisan permukaan, dengan itu melindungi tumbuhan daripada kerosakan selanjutnya dan pengaruh negatif patogen. Oleh kerana jumlah hidroksil fenolik yang besar, tanin telah menyatakan sifat bakteriostatik dan racun kulat, dengan itu melindungi organisma tumbuhan daripada pelbagai penyakit.
Klasifikasi tannin. Pada tahun 1894, G. Procter, mengkaji produk akhir pirolisis tanin, menemui 2 kumpulan sebatian - pyrogallic (pyrogallol terbentuk) dan pyrocatechin (pyrocatechin terbentuk semasa penguraian):
K. Freudenberg pada tahun 1933 menyatakan klasifikasi G. Procter. Dia, seperti Procter, mengklasifikasikan tanin mengikut produk akhir penguraiannya, tetapi tidak di bawah keadaan pirolisis, tetapi di bawah hidrolisis asid. Bergantung kepada keupayaan untuk menghidrolisis, K. Freudenberg mencadangkan untuk membezakan dua kumpulan tanin: boleh hidrolisis dan terkondensasi. Pada masa ini, klasifikasi K. Freudenberg lebih kerap digunakan.
Kepada kumpulan tannin yang boleh dihidrolisiskan termasuk sebatian yang dibina mengikut jenis ester dan terurai semasa hidrolisis asid kepada komponen juzuk. Pautan pusat selalunya glukosa, kurang kerap gula lain atau sebatian alisiklik (contohnya, asid kuinik). Hidroksil alkohol dari sisa pusat boleh terikat eter kepada asid gallik, membentuk kumpulan gallotannin, atau asid ellagic, membentuk kumpulan ellagitannin.
Gallotannins- ester asid gallik, yang paling biasa dalam kumpulan tanin boleh hidrolisis. Terdapat eter mono-, di-, tri-, tetra-, penta- dan poligalo. Wakil eter monogalloyl ialah b-D-glucogallin:
Contoh eter poligalo ialah tanin Cina, yang strukturnya pertama kali ditubuhkan pada tahun 1963 oleh Haworth:
ellagitannin adalah ester gula dan asid elagik atau derivatifnya. Asid ellagic dibentuk oleh pengoksidaan dua molekul asid gallic kepada asid heksaoksidifenik, yang serta-merta membentuk lakton - asid ellagic:
Seperti dalam kes sebelumnya, komponen gula ellagitannin paling kerap adalah glukosa.
Ester bukan gula bagi asid gallik adalah ester asid gallik dan komponen bukan gula, seperti asid kuinik, hidroksisinamik, dsb. Contoh kumpulan bahan ini ialah asid 3,4,5-trigaloylkuinik.
tannin pekat berbeza daripada yang boleh dihidrolisis kerana semasa hidrolisis asid mereka tidak dibahagikan kepada komponen konstituen, tetapi sebaliknya, di bawah tindakan asid mineral, produk pempolimeran merah-coklat padat, flobaphenes, terbentuk.
Tannin pekat dibentuk terutamanya oleh katekin dan leukosianidin, dan, lebih jarang, oleh bentuk flavonoid terkurang lain. Tannin pekat tidak tergolong dalam kumpulan "Glikosida": tiada komponen gula dalam tanin pekat.
Pembentukan tannin pekat boleh berlaku dalam dua cara. K. Freidenberg (30-an abad XX) menetapkan bahawa pembentukan tannin pekat adalah proses bukan enzimatik autokondensasi katekin atau leukocyanidins (atau pemeluwapan silangnya) akibat pendedahan kepada oksigen atmosfera, haba dan persekitaran berasid . Autokondensasi disertai dengan pecahnya cincin piran katekin dan atom karbon C-2 bagi satu molekul disambungkan oleh ikatan karbon-karbon kepada atom karbon C-6 atau C-8 bagi molekul lain. Dalam kes ini, rantaian yang cukup panjang boleh dibentuk:
Menurut saintis lain, D. Hathway, tanin terkondensasi boleh terbentuk hasil daripada pemeluwapan oksidatif enzimatik molekul mengikut jenis "kepala ke ekor" (gelang A ke gelang B) atau "ekor ke ekor" (gelang B ke gelang. B):
Dalam tumbuhan yang mengandungi tanin pekat, semestinya terdapat prekursornya - katekin bebas atau leukosianidin. Selalunya terdapat polimer pekat bercampur yang terdiri daripada katekin dan leukosianidin.
Sebagai peraturan, tanin kedua-dua kumpulan terkondensasi dan boleh hidrolisis hadir secara serentak dalam tumbuhan.
Sifat fizikal dan kimia tanin. Tannin dicirikan oleh berat molekul yang tinggi - sehingga 20,000. Tannin semulajadi, dengan beberapa pengecualian, diketahui sehingga kini hanya dalam keadaan amorf. Sebabnya ialah bahan-bahan ini adalah campuran sebatian yang serupa dalam struktur kimia tetapi berbeza dalam berat molekul.
Tannin ialah sebatian kuning atau coklat yang membentuk larutan koloid dalam air. Larut dalam etanol, aseton, butanol dan tidak larut dalam pelarut dengan hidrofobisiti ketara - kloroform, benzena, dsb.
Gallotannins kurang larut dalam air sejuk dan agak baik dalam air panas.
Tannin mempunyai aktiviti optik dan mudah teroksida di udara.
Oleh kerana kehadiran hidroksil fenolik, ia dimendakkan oleh garam logam berat dan membentuk sebatian berwarna dengan Fe +3.
Pengasingan tanin daripada bahan mentah sayuran. Oleh kerana tanin adalah campuran pelbagai polifenol, pengasingan dan analisisnya menimbulkan kesukaran tertentu.
Selalunya, untuk mendapatkan jumlah tanin, bahan mentah diekstrak dengan air panas (tannin kurang larut dalam air sejuk) dan ekstrak yang disejukkan dirawat dengan pelarut organik (kloroform, benzena, dll.) untuk menghilangkan bahan lipofilik. Kemudian tanin dimendakkan dengan garam logam berat, diikuti dengan pemusnahan kompleks dengan asid sulfurik atau sulfida.
Untuk mendapatkan pecahan tanin yang serupa dalam struktur kimia, adalah mungkin untuk menggunakan pengekstrakan bahan mentah dengan dietil eter, metil atau etil alkohol dengan penyingkiran awal komponen lipofilik menggunakan pelarut dengan hidrofobisiti yang jelas - eter petroleum, benzena, kloroform.
Pengasingan beberapa komponen tanin melalui pemendakan daripada larutan akueus atau air-alkohol dengan garam plumbum adalah meluas. Mendakan yang terhasil kemudiannya dirawat dengan asid sulfurik cair.
Apabila mengasingkan komponen individu tanin, kaedah kromatografi digunakan: kromatografi penjerapan pada selulosa, poliamida; pertukaran ion pada pelbagai penukar kation; pengedaran pada gel silika; penapisan gel pada ayak molekul.
Pengenalpastian komponen individu tannin dijalankan menggunakan kromatografi di atas kertas atau dalam lapisan nipis sorben, menggunakan analisis spektrum, tindak balas kualitatif dan kajian produk belahan.
Analisis kualitatif tanin. Tindak balas kualitatif terhadap tanin boleh dibahagikan kepada dua kumpulan: tindak balas pemendakan dan tindak balas warna. Untuk menjalankan tindak balas kualitatif, bahan mentah paling kerap diekstrak dengan air panas.
Tindak balas pemendakan. 1. Apabila tanin berinteraksi dengan larutan gelatin 1% yang disediakan dalam larutan natrium klorida 10%, mendakan terbentuk atau larutan menjadi keruh. Apabila lebihan gelatin ditambah, kekeruhan hilang.
2. Tanides memberikan pemendakan yang banyak dengan alkaloid (kafein, pachycarpine), serta beberapa asas nitrogen (urotropine, novocaine, dibazol).
3. Apabila berinteraksi dengan larutan 10% plumbum asetat, tanin daripada kumpulan yang boleh dihidrolisiskan membentuk mendakan flokulan.
4. Tannin kumpulan terkondensasi membentuk mendakan flokulan dalam tindak balas dengan air bromin.
tindak balas warna. Tanin kumpulan hidrolisis dengan larutan alum ammonium besi membentuk sebatian berwarna hitam-biru, dan kumpulan pekat - hitam-hijau.
Jika tumbuhan secara serentak mengandungi tanin bagi kedua-dua kumpulan terhidrolisis dan terpeluwap, maka mula-mula tanin yang boleh dihidrolisiskan dimendakkan dengan larutan 10% plumbum asetat, mendakan itu ditapis, dan kemudian turasan itu bertindak balas dengan larutan alum ammonium besi. Penampilan warna hijau gelap menunjukkan kehadiran bahan kumpulan pekat.
Penentuan kuantitatif tanin. Walaupun terdapat kira-kira 100 kaedah berbeza untuk penentuan kuantitatif tanin, analisis kuantitatif yang tepat bagi kumpulan bahan aktif biologi ini adalah sukar.
Antara kaedah yang digunakan secara meluas untuk penentuan kuantitatif tanin, berikut boleh dibezakan.
1. Gravimetrik - berdasarkan pemendakan kuantitatif tanin oleh gelatin, garam logam berat, dsb.
2. Titrimetrik - berdasarkan tindak balas oksidatif, terutamanya dengan kalium permanganat.
3. Photoelectrocolorimetric - berdasarkan keupayaan tanin untuk membentuk hasil tindak balas berwarna yang stabil dengan garam oksida besi, asid fosfotungstik, dsb.
Farmakope Negeri edisi X dan XI mengesyorkan kaedah titrimetri untuk penentuan kuantitatif tanin.
kandungan
OFS.1.5.3.0008.15 Penentuan kandungan tannin dalam bahan mentah herba ubatan dan sediaan herba ubatan
Daripada Seni. GF XI
Penentuan kandungan tanin dalam bahan mentah herba perubatan dan persediaan herba perubatan dijalankan dengan kaedah titrimetri dan/atau spektrofotometri. Kaedah titrimetri terdiri daripada menentukan jumlah tanin dari segi tanin, dan kaedah spektrofotometri membolehkan anda menentukan jumlah tanin dari segi pyrogallol.
Kaedah 1. Penentuan jumlah tannin dari segi tanin
Kira-kira 2 g (ditimbang dengan tepat) bahan mentah herba ubatan yang dihancurkan atau produk ubatan herba, ditapis melalui ayak dengan lubang 3 mm, dimasukkan ke dalam kelalang kon 500 ml, dituangkan ke dalam 250 ml air yang dipanaskan hingga mendidih dan direbus di bawah refluks. di atas dapur elektrik dengan lingkaran tertutup selama 30 minit dengan kacau sekali-sekala. Ekstrak yang terhasil disejukkan pada suhu bilik dan ditapis melalui bulu kapas ke dalam kelalang volumetrik berkapasiti 250 ml supaya zarah bahan mentah/sediaan tidak jatuh ke dalam kelalang, isipadu larutan diselaraskan mengikut tanda. dengan air dan dicampur. 25.0 ml ekstrak akueus yang terhasil dimasukkan ke dalam kelalang kon 1000 ml, 500 ml air, 25 ml larutan asid sulfonik indigo ditambah dan dititrasi dengan kacau berterusan kalium permanganat dengan larutan 0.02 M sehingga warna kuning keemasan.
Pada masa yang sama, eksperimen kawalan dijalankan: 525 ml air, 25 ml larutan asid sulfonik indigo dimasukkan ke dalam kelalang kon berkapasiti 1000 ml dan dititrasi dengan kacau berterusan kalium permanganat dengan larutan 0.02 M sehingga warna kuning keemasan.
1 ml larutan kalium permanganat 0.02 M sepadan dengan 0.004157 g tanin dari segi tanin.
(V – V 1 ) 0.004157 250 100 100
X = ————————————————— ,
a 25 (100 – W)
V ialah isipadu larutan kalium permanganat 0.02 M yang digunakan untuk pentitratan ekstrak akueus, ml;
V 1 ialah isipadu larutan kalium permanganat 0.02 M yang digunakan untuk pentitratan dalam eksperimen kawalan, ml;
0.004157 - jumlah tanin sepadan dengan 1 ml larutan kalium permanganat 0.02 M (dari segi tanin), g;
a- sampel bahan mentah atau produk perubatan herba, g;
W– kelembapan bahan tumbuhan ubatan atau produk tumbuhan ubatan, %;
250 – jumlah isipadu pengekstrakan air, ml;
25 – isipadu ekstrak air yang diambil untuk pentitratan, ml.
Catatan.Penyediaan larutan asid sulfonik indigo. 1 g indigo carmine dilarutkan dalam 25 ml asid sulfurik pekat, kemudian tambahan 25 ml asid sulfurik pekat ditambah dan dicairkan dengan air hingga 1000 ml, dengan berhati-hati menuangkan larutan yang terhasil ke dalam air, dalam kelalang volumetrik dengan kapasiti 1000 ml, kacau.
Kaedah 2. Penentuan jumlah tannindari segi pyrogallol
Kira-kira 0.5 - 1.0 g (ditimbang dengan tepat atau dinyatakan sebaliknya dalam monograf farmakope atau dokumentasi peraturan) bahan tumbuhan ubatan yang dihancurkan atau produk ubatan herba, ditapis melalui ayak dengan lubang 0.18 mm, diletakkan dalam kelalang kon berkapasiti 250 ml , tambah 150 ml air dan rebus pada mandi air di bawah refluks selama 30 minit. Ekstrak akueus yang terhasil dalam kelalang disejukkan pada suhu bilik, ditapis melalui bulu kapas ke dalam kelalang volumetrik dengan kapasiti 250 ml supaya zarah bahan mentah tidak jatuh ke dalam kelalang, isipadu larutan diselaraskan kepada tanda dengan air dan dicampur. Penyelesaian yang terhasil ditapis melalui penapis kertas dengan diameter kira-kira 125 mm, membuang 50 ml turasan pertama.
Penentuan dijalankan di tempat yang terlindung daripada cahaya.
Penentuan jumlah tannin. Masukkan 5.0 ml turasan ke dalam kelalang volumetrik 25 ml, cairkan isipadu larutan dengan air hingga tanda dan gaul. 2.0 ml larutan yang terhasil dimasukkan ke dalam kelalang volumetrik dengan kapasiti 25 ml, 1 ml reagen fosmolibdenum-tungsten, 10 ml air ditambah dan isipadu larutan dilaraskan kepada tanda natrium karbonat dengan larutan. sebanyak 10.6% (penyelesaian ujian). Selepas 30 minit, ukur ketumpatan optik larutan ujian (A 1) pada spektrofotometer pada panjang gelombang 760 nm dalam kuvet dengan ketebalan lapisan 10 mm, menggunakan air sebagai larutan rujukan.
Penentuan jumlah tannin yang tidak diserap oleh serbuk kulit. 0.1 g serbuk kulit ditambah kepada 10.0 ml turasan, campuran yang terhasil dikacau selama 60 minit dan ditapis melalui penapis kertas. 5.0 ml turasan yang terhasil diletakkan dalam kelalang volumetrik dengan kapasiti 25 ml, isipadu larutan dilaraskan kepada tanda dengan air dan dicampur. 2.0 ml larutan yang dihasilkan dimasukkan ke dalam kelalang volumetrik dengan kapasiti 25 ml, 1 ml reagen fosmolibdenum-tungsten, 10 ml air ditambah, isipadu larutan diselaraskan kepada tanda natrium karbonat dengan larutan. sebanyak 10.6% dan bercampur (larutan ujian). Selepas 30 minit, ukur ketumpatan optik larutan ujian (A 2) pada spektrofotometer pada panjang gelombang 760 nm dalam kuvet dengan ketebalan lapisan 10 mm, menggunakan air sebagai larutan rujukan.
Secara selari, ukur ketumpatan optik larutan piawai.
2.0 ml larutan pyrogallol SS dimasukkan ke dalam kelalang volumetrik 25 ml, 1 ml reagen fosmolibdenum-tungsten, 10 ml air ditambah, isipadu larutan dilaraskan kepada tanda natrium karbonat dengan larutan 10.6% dan bercampur (larutan piawai). Selepas 30 minit, ukur ketumpatan optik larutan piawai (A 3) pada spektrofotometer pada panjang gelombang 760 nm dalam kuvet dengan ketebalan lapisan 10 mm, menggunakan air sebagai larutan rujukan.
A 1- ketumpatan optik larutan ujian apabila menentukan jumlah tanin;
A 2 - ketumpatan optik larutan ujian apabila menentukan jumlah tanin yang tidak diserap oleh serbuk kulit, dari segi pyrogallol;
A 3— ketumpatan optik penyelesaian standard;
a- berat bahan tumbuhan ubatan atau penyediaan tumbuhan ubatan, g;
a 0 ialah sampel pyrogallol SS, g;
W– kelembapan bahan tumbuhan ubatan atau produk tumbuhan ubatan, %.
Catatan. Penyediaan larutan pyrogallol RS. 0.05 g (ditimbang dengan tepat) pyrogallol SS diletakkan dalam kelalang volumetrik dengan kapasiti 100 ml, dilarutkan dalam air, isipadu larutan diselaraskan dengan tanda dengan air, dan dicampur. 5.0 ml larutan yang terhasil diletakkan dalam kelalang volumetrik dengan kapasiti 100 ml, isipadu larutan dilaraskan kepada tanda dengan air dan dicampur. Penyelesaiannya digunakan baru disediakan.
pengenalan
Dalam tumbuhan, salah satu kumpulan bahan aktif biologi (BAS) yang paling biasa ialah tanin (tanin), yang mempunyai pelbagai aktiviti farmakologi.Tanninmempunyai kesan hemostatik, astringen, anti-radang, antimikrob, dan juga menunjukkan aktiviti vitamin P yang tinggi, kesan anti-sklerotik dan antihipoksik. Tannin pekat adalah antioksidan dan mempunyai kesan antitumor. Tannindigunakan sebagai penawar untuk keracunan dengan glikosida, alkaloid, garam logam berat. Dalam bidang perubatan, tanin digunakan dalam rawatan penyakit seperti stomatitis, gingivitis, faringitis, tonsillitis, kolitis, enterocolitis, disentri, ia juga digunakan untuk luka bakar, rahim, perut dan pendarahan buasir..
Definisi kandungantannin merupakan komponen penting dalam mewujudkan kualiti bahan tumbuhan yang mengandungi tannin. Terdapat pelbagai kaedah untuk penentuan tanin, tetapi yang paling biasa digunakan ialah kaedah titrimetri dan spektrofotometri.
Objektif- penilaian pengesahan kaedah untuk penentuan kuantitatif tanin dari segi penumpuan, ketepatan, kelinearan.
Bahan dan kaedah penyelidikan
Bahan mentah yang digunakan sebagai objek kajian ialah rumput kering udara.cuff biasa (Alchemilla vulgaris L.) fam. Rosaceae (Rosaceae).
Untuk penilaian pengesahan kaedah untuk penentuan kuantitatif tannin dalam rumput kering udaracuff vulgaris, dua kaedah telah dipilih: pentitratan permanganometrik dan penentuan spektrofotometri berdasarkan tindak balas dengan reagen Folin-Ciocalteu. Pilihan kaedah dibenarkan oleh kekerapan penggunaannya dalam amalan.
rumput kering udaracuff vulgaris dituai dalam September 2015 di daerah Primorsky di rantau Arkhangelsk, yang merupakan bahan mentah untuk kajian dan penentuan kuantitatif tanin (tannin).
Kaedah penentuan permanganometrik adalah kaedah farmakope, yangberdasarkan tindak balas pengoksidaan tanin dengan larutan kalium permanganat.Kira-kira 2 g (ditimbang dengan tepat) bahan mentah yang dihancurkan, diayak melalui ayak dengan saiz lubang 3 mm, dimasukkan ke dalam kelalang kon 500 ml, 250 ml air yang dipanaskan hingga mendidih ditambah dan direbus di bawah refluks di atas dapur elektrik dengan lingkaran tertutup selama 30 minit dengan kacau sekali-sekala. Ekstrak yang terhasil disejukkan pada suhu bilik dan kelalang kon 250 ml ditapis melalui kapas supaya zarah bahan mentah tidak masuk ke dalam kelalang. 25 ml ekstrak yang diperolehi diambil dengan pipet dan dipindahkanke dalam kelalang kon lain berkapasiti 750 ml, tambah 500 ml air, 25 ml larutan asid sulfonik indigo dan titrasi dengan kacau berterusan dengan larutan kaliumpermanganat (0.02 mol/l) sehingga kuning keemasan.
Secara selari, satu eksperimen kawalan telah dijalankan.
1 ml larutan kalium permanganat (0.02 mol/l) sepadan dengan 0.004157 g tanin dari segi tanin.
Kandungan tanin (X), dalam peratus, dari segi bahan mentah kering mutlak, dikira dengan formula (1):
Di mana (1)
V ialah isipadu larutan kalium permanganat (0.02 mol/l) yang digunakan untuk pentitratan ekstrak, ml;
ialah isipadu larutan kalium permanganat (0.02 mol/l) yang digunakan untuk pentitratan dalam eksperimen kawalan, ml;
0.004157 - jumlah tanin sepadan dengan 1 ml larutan kalium permanganat (0.02 mol / l) (dari segi tanin), g;
250 - jumlah isipadu pengekstrakan, ml;
25 – isipadu ekstrak yang diambil untuk pentitratan, ml.
m– jisim bahan mentah, g;
W- kehilangan jisim semasa pengeringan bahan mentah, g;
Untuk penentuan kuantitatif tanin melalui spektrofotometri, kira-kira 1 g (ditimbang dengan tepat) bahan tumbuhan yang dikaji, dihancurkan kepada saiz zarah yang melalui ayak dengan saiz lubang 1 mm, diletakkan di dalam kelalang kon dengan bahagian nipis dengan kapasiti 50 ml, 25 ml campuran air aseton ditambah dalam nisbah 7:3 (larutan aseton 70%). Kelalang ditutup dan dimasukkan ke dalam pembancuh makmal (LAB PU-2, Russia) selama 60 minit. Ekstrak yang diperolehi ditapis ke dalam kelalang volumetrik berkapasiti 50 ml dan isipadu dibawa ke tanda dengan larutan aseton 70% (larutan A).
Dalam kelalang isipadu berkapasiti 10 ml, 1 ml larutan A diletakkan, isipadu larutan dalam kelalang itu dilaraskan dengan air tulen kepada tanda (larutan B).
0.5 ml larutan B dimasukkan ke dalam kelalang volumetrik berkapasiti 10 ml, 2 ml air tulen, 0.25 ml reagen Folin-Ciocalteu, 1.25 ml larutan natrium karbonat 20% ditambah, dan isipadu larutan dibawa ke tanda dengan air. Kelalang dibiarkan selama 40 minit di tempat yang terlindung daripada cahaya. Ketumpatan optik larutan ditentukan pada panjang gelombang 750 nm. Campuran reagen tanpa ekstrak digunakan sebagai penyelesaian rujukan.
Kandungan tanin dalam ekstrak daripada bahan mentah sayuran dikira daripada nilai graf penentukuran untuk pembinaannya, larutan 0.1 mg/ml sampel standard CO tannin digunakan. Untuk tujuan ini, 0.05 g (jisim tepat) tannin CO dimasukkan ke dalam kelalang volumetrik 100 ml, dilarutkan dalam 30 ml air, dan isipadu dalam kelalang dilaraskan kepada tanda dengan pelarut yang sama (larutan A).
1 ml larutan yang terhasil dipindahkan ke dalam kelalang volumetrik 10 ml. Isipadu larutan dalam kelalang dibuat sehingga tanda dengan air (larutan B).
Satu siri penyelesaian yang mengandungi 1; 2; 3; 4; Tannin CO (5 μg/mL) telah disediakan dengan meletakkan bahagian larutan B yang telah ditimbang ke dalam kelalang volumetrik 10-mL, reagen Folin-Ciocalteu dan larutan natrium karbonat berair 20% ditambah, dan isipadu larutan dalam kelalang dibuat. sehingga tanda dengan air.
Larutan dicampurkan, kelalang ditutup dan disimpan pada suhu bilik di tempat yang terlindung daripada cahaya selama 40 minit.
Ketumpatan optik penyelesaian yang terhasil ditentukan secara spektrofotometri dalam kuvet kuarza dengan ketebalan lapisan 1 cm pada panjang gelombang 725 nm berbanding larutan rujukan.
Penyelesaian rujukan ialah campuran reagen tanpa penambahan CO tanin (larutan B).
Berdasarkan hasil kajian, graf pergantungan ketumpatan optik pada kepekatan tanin telah dibina (Rajah 1).
Dengan mengambil kira nilai yang diperoleh, jumlah tanin dikira dari segi tanin mengikut formula:
, di mana
keputusan
Keputusan penentuan kuantitatif tanin secara pentitratan dibentangkan dalam jadual. satu.
Jadual 1. Keputusan penentuan kuantitatif tanin secara permanganatometri
| Berat bahan mentah tumbuhan, g | Isipadu kalium permanganat (0.02 mol/l) yang digunakan untuk pentitratan ekstrak yang diperoleh daripada bahan mentah sayuran, ml | Jumlah tannin, % (X i) | |
|
2,10250 |
15,34892 |
15,72%
|
|
|
2,03255 |
15,21262 |
||
|
2,18345 |
15,84713 |
||
|
2,24350 |
16,24333 |
||
|
2,12465 |
15,85257 |
||
|
2,07055 |
15,80574 |
Purata kandungan tannin dalam bahan mentah ialah 15.7%. Nilai pengiraan sisihan piawai relatif (0.024%), yang tidak melebihi 2%, yang mencirikan penumpuan yang memuaskan bagi keputusan yang diperolehi.
Kaedah penambahan digunakan untuk menentukan ketepatan kaedah tersebut. Untuk tujuan ini, 1 ml 0.05%, 0.1% dan 0.15% tannin CO ditambah ke dalam kelalang pentitratan dan dititrasi tiga kali bagi setiap kes. Hasil kajian dibentangkan dalam jadual. 2.
Jadual 2. Penentuan ketepatan kaedah pentitratan permanganometrik bagi tanin
| Jumlah tambahan CO tannin, g | Jisim bahan mentah, g | Dikira jumlah tannin, g | Jumlah tannin yang ditemui, g | Kadar pembukaan, % | Ciri-ciri metrologi |
|
0,0005 |
2,2435 |
0,0357 |
0,0353 |
98,87 |
99,91%
|
|
2,1247 |
0,0339 |
0,0340 |
100,29 |
||
|
2,0706 |
0,0330 |
0,0337 |
102,12 |
||
|
0,001 |
2,2435 |
0,0362 |
0,0357 |
98,61 |
|
|
2,1247 |
0,0344 |
0,0340 |
98,84 |
||
|
2,0706 |
0,0335 |
0,0336 |
100,51 |
||
|
0,0015 |
2,2435 |
0,0367 |
0,0366 |
99,73 |
|
|
2,1247 |
0,0349 |
0,0353 |
101,14 |
||
|
2,0706 |
0,0340 |
0,0337 |
99,12 |
Keputusan yang diperoleh menunjukkan bahawa pekali Pelajar yang dikira adalah kurang daripada nilai jadual danTeknik ini tidak mengandungi ralat sistematik, yang membolehkan kita membuat kesimpulan bahawa ia betul.
Untuk mengkaji kelinearan, pergantungan nilai didapati kandungan kuantitatif tanin pada berat bahan tumbuhan yang dikaji telah ditentukan. Untuk tujuan ini, kami menjalankan penentuan kuantitatif tanin dalam enam sampel bahan mentah kering udara bagi cuff biasa, berbeza dalam berat (Jadual 3).
Jadual 3
|
|
Isipadu kalium permanganat yang digunakan untuk pentitratan, ml |
|
|
2,0706 |
0,3159 |
|
|
3,0013 |
10,8 |
0,4490 |
|
4,0595 |
13,0 |
0,5404 |
|
5,1180 |
15,3 |
0,6360 |
|
6,1385 |
18,2 |
0,7566 |
Berdasarkan data yang diperoleh dalam perjalanan kajian, graf pergantungan kandungan tanin tertentu pada jisim sampel bahan tumbuhan yang dikaji telah diplotkan (Rajah 2) dan pekali korelasi dikira.
nasi. Rajah 2. Graf pergantungan jumlah tannin yang ditemui pada berat sampel bahan mentah kering udara bagi cuff biasa
Pekali korelasi yang dikira tidak melebihi 0.95, yang menunjukkan kelinearan hasil penentuan kandungan bahan yang dikaji daripada berat sampel bahan tumbuhan yang dianalisis dalam julat kepekatan yang ditunjukkan.
Keputusan penentuan kuantitatif tanin dalam bahan mentah kering udara herba cuff biasa melalui spektrofotometri dibentangkan dalam jadual. 4.
Jadual 4. Keputusan penentuan kuantitatif tanin secara spektrofotometri
|
Berat sampel, g |
Ketumpatan Optik Penyelesaian |
Jumlah tannin yang ditemui, % (X i) |
Ciri-ciri metrologi |
|
|
1,02755 |
0,5957 |
7,30920 |
7,87340 |
7,84%
|
|
0,99745 |
0,6130 |
7,52147 |
8,34656 |
|
|
1,0068 |
0,5678 |
6,96687 |
7,65932 |
|
|
0,99580 |
0,5742 |
7,04539 |
7,83120 |
|
|
1,0060 |
0,5750 |
7,05521 |
7,76261 |
|
|
1,00670 |
0,5617 |
6,89202 |
7,57779 |
Kandungan purata tanin dalam bahan mentah sayuran ialah 7.8% dengan sisihan piawai relatif (0.034%) tidak melebihi 2%, yang mencirikan penumpuan hasil yang memuaskan.
Kaedah penambahan digunakan untuk menentukan ketepatan kaedah tersebut. Untuk tujuan ini, 1 ml larutan CO tanin 0.05%, 0.1% dan 0.15% telah ditambah ke dalam kelalang dengan pengekstrakan aseton primer, dan kemudian tanin dikira tiga kali bagi setiap kepekatan. Hasil kajian dibentangkan dalam jadual. lima.
Pemilik paten RU 2439568:
Ciptaan ini berkaitan dengan bidang farmakologi dan boleh digunakan untuk menentukan tanin dalam bahan tumbuhan. Kaedah untuk menentukan tanin dalam bahan mentah tumbuhan terdiri daripada mengekstrak sampel bahan mentah dengan air semasa mendidih, menyejukkan, menapis, mengukur ketumpatan optik sampel aliquot pada panjang gelombang 277 nm dan mengira kandungan jumlah semua tanin. mengikut formula tertentu, kemudian menambah kepada sampel aliquot turasan Larutan 1% kolagen dalam 1% asid asetik digoncang, ditapis, ketumpatan optik turasan diukur pada panjang gelombang 277 nm dan kandungan termendakan tannin dikira menggunakan formula tertentu. Kaedah ini memungkinkan untuk meningkatkan ketepatan menentukan kandungan tanin dalam bahan mentah sayuran dan secara selektif menentukan tanin termendak dan tidak termendak dalam bahan mentah sayuran.
Ciptaan ini berkaitan dengan industri farmaseutikal, bidang farmakognosi dan kimia farmaseutikal, dan boleh digunakan untuk mengawal kualiti bahan tumbuhan yang mengandungi tanin.
Kaedah yang diketahui untuk penentuan tanin dalam bahan tumbuhan ubatan (MPR) dengan koulometri dari segi tanin (SG Abdullina dan lain-lain. Penentuan koulometrik tanin dalam bahan tumbuhan ubatan. // Farmasi. No. 4. - 2010. - P. 13 -15).
Kelemahan kaedah ini ialah penggunaan peralatan tambahan (coulometer), titrant tertentu (potassium hypoiodide), yang dari segi sifat pengoksidaan mendekati permanganat kalium dan tidak memungkinkan untuk membezakan antara tanin berat molekul tinggi dan rendah.
Terdapat juga kaedah untuk menentukan kandungan tanin dan derivatif asid gallik dalam teh melalui konduktometri (No. Paten 2127878. Kaedah untuk penentuan berasingan tanin dan katekin (dari segi asid gallik) dalam teh. M.: 1999).
Kelemahan kaedah ini ialah penggunaan pelarut organik toksik (isobutil alkohol), serta penggunaan tindak balas warna dengan Fe (III), produk yang merupakan sebatian berwarna yang tidak stabil dalam warna dari semasa ke semasa.
Terdapat juga kaedah untuk penentuan kuantitatif tanin dari segi tanin dalam daun skumpia dan sumac dengan kaedah kompleksometri selepas pemendakan tanin dengan garam zink (GOST 4564-79. Daun skumpia. Spesifikasi; GOST 4565- 79. Daun sumac. Spesifikasi).
Kelemahan kaedah ini ialah tempoh analisis dan kesukaran untuk menentukan titik kesetaraan.
Terdapat juga kaedah untuk penentuan kuantitatif tanin dengan kaedah spektrofotometri selepas tindak balas dengan reagen Folin-Ciocalteu dari segi asid gallik (Garis Panduan untuk kaedah kawalan kualiti dan keselamatan makanan tambahan yang aktif secara biologi. Panduan. R 4.1.1672 -03. - M. - 2004 - hlm.94-95).
Kelemahan kaedah ini adalah ketidakmungkinan penentuan berasingan tannin berat molekul rendah dan tinggi.
Paling hampir dengan kaedah yang dicadangkan ialah tanin ditentukan oleh spektrofotometri dari segi asid gallik (Garis Panduan untuk kaedah kawalan kualiti dan keselamatan suplemen makanan aktif secara biologi. Panduan. R 4.1.1672-03. - M. - 2004 g. - P 120).
Kelemahan kaedah ini adalah pencairan berulang sampel ujian, akibatnya kepekatan tanin dalam larutan kurang ditentukan. Juga dalam kaedah ini, penyelesaian rujukan adalah penyelesaian penampan, yang menjadikan analisis sukar. Di samping itu, kaedah ini tidak memungkinkan untuk menentukan secara berasingan kandungan berat molekul rendah dan tanin berat molekul tinggi.
Objektif ciptaan ini adalah untuk meningkatkan ketepatan penentuan tanin dan kemungkinan penentuan berasingan tanin termendak dan tidak boleh mendakan dalam bahan mentah sayuran.
Masalahnya diselesaikan oleh fakta bahawa sampel bahan mentah diekstrak dengan air semasa mendidih, disejukkan, ditapis, ketumpatan optik sampel aliquot diukur pada panjang gelombang 277 nm dan kandungan jumlah semua tanin dikira. dengan formula
50 - isipadu kelalang, ml,
W - kandungan lembapan bahan mentah, %,
larutan 1% kolagen dalam 1% asid asetik ditambah kepada aliquot turasan, digoncang, ditapis, ketumpatan optik turasan diukur pada panjang gelombang 277 nm dan kandungan tannin termendak dikira dengan formula
D 1 - ketumpatan optik larutan 1,
D 2 - ketumpatan optik larutan 2,
m nav - berat sampel bahan mentah, g,
V a - isipadu sampel aliquot, ml,
250 - jumlah isipadu pengekstrakan, ml,
50 - isipadu kelalang, ml,
508 - indeks penyerapan spesifik asid gallik (ketumpatan optik 1% larutan asid gallik 1 mg / ml),
W - kandungan lembapan bahan mentah, %.
Secara praktikal, kaedah ini dijalankan seperti berikut. Kira-kira 2.0 (ditimbang dengan tepat) bahan mentah yang dihancurkan, ditapis melalui ayak dengan diameter lubang 3 mm, dimasukkan ke dalam kelalang 500 ml, tuangkan 250 ml air yang dipanaskan hingga takat didih dan rebus selama 30 minit di bawah refluks dengan kacau sekali-sekala. Sejukkan ke suhu bilik, cairkan dengan air hingga 250 ml, tapis melalui bulu kapas supaya zarah bahan mentah tidak masuk ke dalam ekstrak akueus. 50 ml pertama turasan dibuang.
1-4 ml ekstrak akueus diletakkan dalam kelalang volumetrik 50 ml, dilaraskan kepada tanda dengan air (larutan 1). Ukur ketumpatan optik larutan 1 pada panjang gelombang 277 nm. Air digunakan sebagai perbandingan.
30 ml ekstrak akueus diletakkan dalam bekas pengukur dengan kapasiti 50 ml, 2-10 ml reagen pemendakan ditambah, digoncang selama 30-60 minit, diselesaikan, ditapis. 1-4 ml turasan yang terhasil dipindahkan ke dalam kelalang dengan kapasiti 50 ml, diselaraskan dengan tanda dengan air (larutan 2). Ukur ketumpatan optik larutan 2 pada panjang gelombang 277 nm. Air digunakan sebagai perbandingan.
Ciptaan ini digambarkan oleh contoh berikut.
Contoh 1. Untuk analisis diambil bahan mentah sayuran - kulit kayu oak.
Kira-kira 2.0 (ditimbang dengan tepat) kulit kayu oak mentah yang dihancurkan, ditapis melalui ayak dengan diameter lubang 3 mm, dimasukkan ke dalam kelalang 500 ml, dituangkan dengan 250 ml air yang dipanaskan hingga mendidih dan direbus selama 30 minit di bawah refluks dengan kacau sekali-sekala . Sejukkan ke suhu bilik, cairkan dengan air hingga 250 ml, tapis melalui bulu kapas supaya zarah bahan mentah tidak masuk ke dalam ekstrak akueus. 50 ml pertama turasan dibuang.
2 ml ekstrak akueus dari kulit kayu oak diletakkan dalam kelalang volumetrik dengan kapasiti 50 ml, diselaraskan dengan air pada tanda (penyelesaian 1). Ukur ketumpatan optik larutan 1 pada panjang gelombang 277 nm. Air digunakan sebagai perbandingan. D 1 untuk kulit kayu oak ialah 0.595.
30 ml ekstrak akueus diletakkan dalam bekas pengukur dengan kapasiti 50 ml, 2 ml reagen pemendakan ditambah, digoncang selama 30 minit, diselesaikan, ditapis. 2 ml turasan yang diperoleh dipindahkan ke dalam kelalang berkapasiti 50 ml, dilaraskan kepada tanda dengan air (larutan 2). Ukur ketumpatan optik larutan 2 pada panjang gelombang 277 nm. Air digunakan sebagai perbandingan. D 2 untuk kulit kayu oak ialah 0.276.
Contoh 2. Untuk analisis, bahan tumbuhan rizom serpentin telah diambil.
Kira-kira 2.0 (ditimbang dengan tepat) bahan mentah yang dihancurkan dari rizom serpentin, diayak melalui ayak dengan diameter lubang 3 mm, dimasukkan ke dalam kelalang berkapasiti 500 ml, tuangkan 250 ml air yang dipanaskan hingga mendidih dan didihkan. selama 30 minit di bawah refluks dengan kacau sekali-sekala. Sejukkan ke suhu bilik, cairkan dengan air hingga 250 ml, tapis melalui bulu kapas supaya zarah bahan mentah tidak masuk ke dalam ekstrak akueus. 50 ml pertama turasan dibuang.
1 ml ekstrak akueus daripada rizom gegelung diletakkan dalam kelalang volumetrik dengan kapasiti 50 ml, dilaraskan dengan air pada tanda (penyelesaian 1). Ukur ketumpatan optik larutan 1 pada panjang gelombang 277 nm. Air digunakan sebagai perbandingan.
30 ml ekstrak akueus diletakkan dalam bekas isipadu 50 ml, 7 ml reagen pemendakan ditambah, digoncang selama 60 minit, diselesaikan, ditapis. 1 ml turasan yang diperoleh dipindahkan ke dalam kelalang berkapasiti 50 ml, dilaraskan kepada tanda dengan air (larutan 2). Ukur ketumpatan optik larutan 2 pada panjang gelombang 277 nm. Air digunakan sebagai perbandingan.
Kaedah yang dicadangkan meningkatkan ketepatan penentuan kandungan tanin dalam bahan mentah sayuran dan secara selektif menentukan tanin termendak dan tidak termendak dalam bahan mentah sayuran.
Kaedah untuk menentukan tanin dalam bahan mentah sayuran dari segi asid gallik, yang terdiri daripada mengekstrak sampel bahan mentah dengan air semasa mendidih, menyejukkan, menapis, mengukur ketumpatan optik sampel aliquot pada panjang gelombang 277 nm dan mengira kandungan jumlah semua tanin mengikut formula: 
di mana x a - kandungan jumlah tannin dari segi asid gallik,%;
50 - isipadu kelalang, ml;
508 - indeks penyerapan spesifik asid gallik (ketumpatan optik 1% larutan asid gallik 1 mg/ml);
W - kandungan lembapan bahan mentah, %,
larutan 1% kolagen dalam 1% asid asetik ditambah kepada aliquot turasan, digoncang, ditapis, ketumpatan optik turasan diukur pada panjang gelombang 277 nm, dan kandungan tanin termendak dikira menggunakan formula : 
di mana X ialah kandungan tanin termendak dari segi asid gallik,%;
D 1 - ketumpatan optik penyelesaian 1;
D 2 - ketumpatan optik penyelesaian 2;
m nav - jisim sampel bahan mentah, g;
V a - isipadu sampel aliquot, ml;
250 - jumlah isipadu pengekstrakan, ml;
50 - isipadu kelalang, ml;
508 - indeks penyerapan spesifik asid gallik (ketumpatan optik larutan 1% asid gallik 1 mg/ml);
W - kandungan lembapan bahan mentah, %.
Paten serupa:
Ciptaan ini berkaitan dengan perubatan, iaitu psikoneurologi, dan menerangkan kaedah untuk meramalkan pemulihan fungsi neurologi pada pesakit dalam tempoh akut strok iskemia dengan menjalankan kajian klinikal dan biokimia ke atas jumlah kepekatan albumin (TAC) dalam serum darah dalam g. /l, di mana tambahan dengan 5-7 Pada hari penyakit, kepekatan berkesan albumin (ECA) ditentukan, rizab pengikat albumin (ARA) dikira, dan jika penunjuk ini kurang daripada satu, hasil negatif daripada pemulihan fungsi neurologi pada pesakit dalam tempoh akut strok iskemia diramalkan.
Ciptaan ini berkaitan dengan perubatan, penyelidikan biologi dalam onkologi, dan boleh digunakan untuk menentukan perkembangan proses malignan dalam tumor otak selepas rawatan pembedahan.
Ciptaan ini berkaitan dengan bidang perubatan, khususnya onkologi, dan menerangkan kaedah untuk menilai keberkesanan kemoterapi neoadjuvant untuk kanser pundi kencing dengan memeriksa pesakit, di mana keamatan maksimum autofluoresensi tisu tumor di kawasan hijau spektrum direkodkan. pada peringkat diagnosis primer dan 1 bulan selepas kemoterapi praoperasi dan dengan peningkatan dalam nilai pesakit keamatan maksimum autofluoresensi tisu tumor sebanyak 15% daripada awal dan lebih banyak lagi, keberkesanan rawatan dinilai sebagai separa. regresi proses tumor, jika tiada perubahan dalam keamatan autofluoresensi tisu tumor daripada yang awal, penstabilan proses ditentukan, dengan penurunan intensiti autofluoresensi tisu tumor sebanyak 15% dan banyak lagi dari nota awal perkembangan proses tumor.
Memuatkan...