1 Tetapkan tugasan
1.1 Kit ini bertujuan untuk pengesanan serentak antibodi kepada virus immunodeficiency manusia jenis pertama dan kedua (HIV-1 dan HIV-2) dan antigen HIV-1 p24 dalam serum manusia dan plasma "in vitro" dengan kaedah enzim tidak langsung -ujian imunosorben berkait.
2 Ciri dan prinsip operasi set
2.1 Set termasuk:
|
Nama komponen |
Kuantiti |
|
Imunosorben |
2 tablet |
|
Kawalan positif AT (K + AT) |
1 botol, 3 ml |
|
Sampel kawalan positif AG (K + AG) |
3 vial, penyediaan lyophilized |
|
Kawalan negatif (KEPADA -) |
2 botol 3 ml |
|
Larutan konjugat No. 1 (RC-1) |
1 botol, 12 ml |
|
Konjugat No. 2 (Kg-2) |
1 botol, 1 ml |
|
Larutan pencairan konjugat No. 2 (RR-K2) |
2 botol 18 ml |
|
Larutan penimbal substrat ( BRS) |
2 botol 18 ml |
|
Chromogen TMB |
1 botol, 1 ml |
|
Tween PBS Concentrate (FSB-T × 25) |
2 botol 50 ml |
|
Hentikan reagen |
1 botol, 12 ml |
|
Kit Dulang Reagen dengan Petua untuk Pipet Berbilang Saluran |
1 set |
|
Filem pelekat |
2.2 Komponen utama kit ELISA-HIV 1,2 AGAT ialah imunosorben, larutan konjugat No. 1 dan konjugat No. 2.
Imunosorben ialah plat polistirena di dalam telaga yang mengandungi campuran antigen HIV-1 (gp41) dan HIV-2 (gp36) rekombinan dan antibodi monoklonal kepada antigen HIV-1 p24 diserap.
Larutan konjugat No. 1 ialah campuran antibodi manusia monoklonal berlabel biotin terhadap antigen HIV-1 p24 dan protein HIV-1 dan HIV-2 rekombinan berlabel biotin.
Konjugat No. 2 adalah streptavidin terkonjugasi dengan lobak pedas peroksidase.
Kawalan positif AT- serum darah manusia yang mengandungi antibodi kepada HIV-1 dan HIV-2, tidak mengandungi antibodi kepada hepatitis C dan Treponema pallidum, antigen HIV-1 p24 dan antigen HBs, dinyahaktifkan dengan pemanasan selama 3 jam pada 56 ºC.
Sampel kawalan positif AG- serum darah manusia yang mengandungi antigen HIV-1 p24 asli, bebas daripada antibodi kepada HIV-1, HIV-2, virus hepatitis C dan Treponema pallidum dan antigen HBs, dinyahaktifkan dengan pemanasan selama 3 jam pada 56 ºC.
Kawalan negatif- serum darah manusia yang tidak mengandungi antibodi kepada HIV-1, HIV-2, HCV, antigen p24 HIV-1 dan antigen HBs, dinyahaktifkan dengan memanaskan selama 3 jam pada suhu 56 ºC.
Prinsip set. Apabila larutan konjugat No. 1 dan sampel serum darah yang dijangkiti ditambah pada telaga plat, antigen p24 mengikat kedua-dua antibodi spesifik pada fasa pepejal dan antibodi anti-p24 terbiotinilasi monoklonal yang merupakan sebahagian daripada larutan konjugat No 1; Antibodi khusus HIV mengikat kedua-dua antigen HIV-1 dan HIV-2 rekombinan, terserap pada fasa pepejal, dan kepada antigen yang termasuk dalam larutan konjugat No. 1, membentuk kompleks antigen-antibodi. Kompleks imun antibodi spesifik anti-p24 dan antigen p24 dikesan oleh konjugat # 2. Selepas membasuh komponen yang tidak terikat, larutan substrat peroksidase (hidrogen peroksida) dan kromogen TMB ditambah ke dalam telaga plat.
Tindak balas peroksidase dihentikan dengan menambahkan reagen henti (larutan asid sulfurik 0.9 M), dan keamatan warna larutan dalam telaga diukur pada spektrofotometer sebagai nilai ketumpatan optik (OD) pada panjang gelombang 450 nm.
Nilai OD adalah berkadar terus dengan kepekatan antibodi spesifik dan/atau antigen p24 dalam serum atau sampel plasma. Semakin tinggi kandungan antibodi dan/atau antigen p24 dalam sampel serum, semakin tinggi keamatan pewarnaan.
2.3 Set direka untuk memegang 24 persembahan ELISA: 1 set - 1 jalur (8 lubang). Jumlah - 192 takrifan termasuk sampel kawalan.
3 Langkah berjaga-jaga semasa mengendalikan kit
3.1 Semua komponen kit adalah tidak toksik dalam kepekatan yang digunakan. Walau bagaimanapun, bekerjasama dengan semua sampel ujian serum darah manusia (plasma), yang harus dianggap sebagai berpotensi berjangkit, mampu menyimpan dan menghantar HIV, virus hepatitis B atau mana-mana agen penyebab jangkitan virus lain, dengan larutan dan cecair sisa, pelbagai peralatan yang mungkin tercemar proses analisis memerlukan langkah keselamatan tertentu apabila menggunakan kit:
Kerja mesti dijalankan di dalam bilik yang dilengkapi khas;
Ia adalah perlu untuk bekerja dengan penggunaan peralatan pelindung diri dan mengambil langkah berjaga-jaga mengikut keperluan,, dan.
3.2 Reagen henti yang mengandungi asid sulfurik merengsakan. Sekiranya terkena kulit dan membran mukus, segera bilas dengan air yang banyak.
3.3 Apabila bekerja dengan set, tempat kerja mesti disediakan dengan bekalan dan pengudaraan ekzos.
3.4 Semua orang yang bekerja di makmal dengan kit mesti menjalani pemeriksaan perubatan mandatori mengikut keperluan.
3.5 Sisa perubatan dan / atau kit yang telah tamat tempoh yang tidak digunakan mesti dilupuskan dengan betul.
4 Peraturan untuk bekerja dengan set
4.1 Untuk mengecualikan keputusan palsu, sampel ujian mesti disediakan dan disimpan dalam keadaan yang menghalang pertumbuhan bakteria. Adalah perlu untuk menjelaskan sampel serum yang mengandungi komponen serum terkumpul atau sedimen secara sentrifugasi selama (5-10) minit pada kelajuan putaran 3000 rpm. Sampel serum boleh disimpan pada suhu (2-8) ° С selama tidak lebih daripada 5 hari. Sampel beku (sebaik-baiknya sehingga suhu sekurang-kurangnya tolak 20 ° C) boleh disimpan tidak lebih daripada 1 tahun. Kitaran beku-cair berulang sampel harus dielakkan.
Harus diingat bahawa sampel dengan hemolisis, hiperlipidemia, pertumbuhan bakteria, serta yang telah disimpan untuk masa yang lama tanpa pembekuan, tidak sesuai untuk analisis.
Kebolehpercayaan keputusan bergantung pada pemenuhan peraturan berikut:
Ia tidak dibenarkan menggunakan kit selepas tarikh tamat tempoh, serta mencampurkan komponen kit siri yang berbeza;
Bekas yang berasingan hendaklah digunakan untuk penyediaan setiap reagen;
Jangan rawat semua peralatan yang digunakan untuk penyediaan reagen dengan disinfektan dan detergen. Jika perlu, bilas dengan air minuman, dan kemudian bilas lima kali dengan air suling;
Untuk bekerja dengan kromogen TMB dan PX, adalah perlu untuk menggunakan bekas yang berasingan untuk penyelesaian, petua pipet dan hidangan.
Ia adalah perlu untuk memberi perhatian kepada pencampuran menyeluruh reagen;
Masa antara mengisi dan mengosongkan telaga plat dengan larutan dan reagen hendaklah sekurang-kurangnya 30 s. Pengeringan telaga tidak dibenarkan pada semua peringkat ELISA;
Apabila menggunakan mesin basuh, pantau keadaan bekas untuk larutan pembilas plat dan hos penyambung: ia tidak sepatutnya menunjukkan tanda-tanda pertumbuhan bakteria atau kulat;
Ia adalah perlu untuk menggunakan pipet automatik dengan petua yang boleh diganti, yang diperakui oleh nilai dos purata dan kebolehulangan hasil pipet (ralat tidak lebih daripada 3%);
Rawat dispenser dan permukaan kerja dengan larutan dengan pecahan isipadu etil alkohol sebanyak 70%. Jangan gunakan kloramine dan bahan lain yang mengandungi klorin;
Petua pipet pakai buang disyorkan untuk mengendalikan sampel ujian dan kawalan. Setiap sampel serum serta reagen kit mesti diambil dengan hujung yang berasingan.
Apabila menambah PK-1 pada telaga, jangan sentuh permukaan plat dan larutan di dalam telaga dengan hujung pipet.
Semasa analisis, elakkan cahaya matahari langsung di permukaan kerja.
4.2 Apabila membuka dan melarutkan komponen lyophilized, adalah perlu untuk memastikan bahawa tiada bahan kering kekal pada penutup dan dinding vial.
5 Peralatan dan bahan yang diperlukan untuk analisis
5.1 Spektrofotometer pengimbasan menegak, yang membolehkan mengukur ketumpatan optik penyelesaian dalam telaga plat pada panjang gelombang 450 nm;
Pencuci pinggan separa atau automatik (pencuci);
Termostat udara kering jenis ТС-80 М2, mengekalkan suhu (37 ± 1) ° С, atau ciri yang serupa;
Pipet automatik saluran tunggal dengan petua yang boleh diganti, membolehkan untuk mengambil isipadu cecair dari 0.01 hingga 5.0 ml;
Pipet automatik 8 saluran dengan petua yang boleh diganti, membolehkan untuk mengambil isipadu cecair sehingga 0.5 ml;
Silinder bergraduat dengan kapasiti 2000 ml;
Kelalang makmal dengan kapasiti 2000 ml;
Botol kaca dengan kapasiti 20 ml;
Dulang untuk reagen atau hidangan Petri (diameter 100 mm);
Bulu kapas penyerap perubatan;
Kertas penapis;
sarung tangan getah pembedahan;
Larutan dengan pecahan isipadu etil alkohol 70%;
Larutan dengan pecahan jisim hidrogen peroksida 6%;
Air ternyahiion atau suling;
Bekas pengumpulan sisa pepejal;
Bekas untuk mengalirkan sisa cecair.
6 Persediaan untuk analisis
6.1 Sebelum analisis, keluarkan kit reagen dari peti sejuk, buka penutup kotak dan simpan komponen kit pada suhu (18-25) ° С selama 30 min.
Campurkan semua sampel serum (plasma) dan reagen dengan teliti sebelum analisis.
Penggunaan reagen untuk set ujian, yang ditentukan oleh bilangan jalur yang digunakan, diberikan dalam Jadual A.1 Lampiran A.
6.2 Menyediakan larutan pencuci pinggan
Perhatian! Sediakan larutan pencuci pinggan 15 minit sebelum permulaan analisis!
Jika botol dengan FSB-T × 25 mengandungi mendakan, ia mesti dipanaskan sebelum digunakan pada suhu (37 ± 1) ° С sehingga mendakan larut sepenuhnya. Tambah kandungan botol dengan FSB-T × 25 ke dalam silinder penyukat berkapasiti 2000 ml, kemudian tambah air suling pada tanda 1250 ml dan campurkan larutan dengan lembut. Larutan boleh disimpan pada suhu (2-8) ° C selama 72 jam.
Dalam kes menggunakan satu atau beberapa jalur, goncangkan kandungan vial dengan FSB-T × 25 dengan kuat selama (20-30) s, masukkan isipadu larutan yang diperlukan (Jadual A.1) ke dalam bikar penyukat atau silinder, masukkan jumlah air suling yang diperlukan dan kacau larutan... FSB-T × 25 yang tidak digunakan boleh disimpan dalam botol tertutup pada suhu (2-8) ° С semasa jangka hayat kit.
6.3 Penyediaan imunosorben
Imunosorben sedia untuk digunakan.
Buka pakej dan pasang bilangan jalur yang diperlukan pada bingkai. Simpan jalur yang tinggal dalam beg tertutup rapat dengan bahan pengering pada (2-8) ° C selama 3 bulan.
6.4 Penyediaan K + AT, K -, RK-1, RR-K2, BRS dan reagen henti
K + AT, K -, RK-1, PP-K2, BRS dan reagen henti sedia untuk digunakan.
Perhatian! Dalam botol dengan RK-1, pemendakan mungkin. Supernatan mesti digunakan untuk analisis.
RK-1, RR-K2, BRS dan reagen henti yang tidak digunakan, selepas membuka botol, boleh disimpan dalam botol tertutup pada suhu (2-8) ° C semasa jangka hayat kit.
Baki K + AT dan K - selepas membuka botol, boleh disimpan dalam botol tertutup pada suhu (2-8) ° C semasa jangka hayat kit.
6.5 Penyediaan larutan K + AG
Perhatian! Sediakan larutan K + AG 15 minit sebelum permulaan analisis!
Untuk memulihkan K + AG yang terliofil, sebelum membuka botol, ketuk perlahan-lahan untuk mengoyak zarah yang melekat pada dinding botol atau gabus. Buka botol dan letakkan penyumbat terbalik pada permukaan yang kering. Tambah 0.8 ml air suling ke dalam botol. Tutup botol dengan penyumbat, inkubasi selama 10 minit pada suhu (18-25) ° C dan perlahan-lahan condongkan dan putar botol, campurkan kandungannya sehingga larut sepenuhnya, mengelakkan pembentukan buih.
K + AG yang disusun semula boleh disimpan dalam botol tertutup pada suhu (2-8) ° С selama satu bulan, pada suhu tolak 20 ° С selama enam bulan. Satu kali pembekuan-pencairan K + AG pulih dibenarkan.
6.6 Penyediaan larutan Kg-2 dalam pencairan kerja
Ambil isipadu yang ditunjukkan dalam Jadual A.1 daripada botol dengan Kg-2 dan pindahkan ke botol dengan PP-K2. Kacau kandungan botol dengan teliti, mengelakkan pembentukan buih.
Jika satu atau lebih jalur digunakan, ambil jumlah PP-K2 yang diperlukan dalam botol bersih, tambah Kg-2 mengikut Jadual A.1 dan campurkan larutan, mengelakkan pembentukan buih.
Perhatian! Larutan Kg-2 dalam pencairan berfungsi disediakan serta-merta sebelum digunakan! Larutan Kg-2 dalam pencairan yang berfungsi boleh disimpan selama 15 minit pada suhu (18-25) ° C. Gunakan hanya mandian reagen baharu dan petua baharu!
Baki Kg-2 boleh disimpan dalam botol tertutup pada suhu (2-8) ° C semasa jangka hayat kit.
6.7 Penyediaan penyelesaian kerja substrat
Vial dengan kromogen TMB mesti dipanaskan sebelum digunakan pada suhu (37 ± 1)° Dari sehingga kristal dibubarkan sepenuhnya.
Ambil isipadu yang ditunjukkan dalam Jadual A.1 daripada vial dengan kromogen TMB dan pindahkannya ke vial dengan BRS. Kacau kandungan botol dengan teliti, mengelakkan pembentukan buih.
Jika satu atau lebih jalur digunakan, ambil jumlah BRS yang diperlukan dalam botol bersih, tambah kromogen TMB mengikut Jadual A.1 dan campurkan larutan, mengelakkan pembentukan buih.
Perhatian! Sediakan penyelesaian kerja substrat dengan segera sebelum digunakan di tempat yang gelap! Penyelesaian boleh disimpan selama 20 minit pada suhu (18-25) ° C di tempat yang gelap.
Penyelesaian mesti dilindungi daripada cahaya dan sentuhan dengan logam atau ion logam. Larutan substrat mestilah tidak berwarna sebelum digunakan. Pinggan mangkuk yang akan bersentuhan dengan larutan substrat semasa tindak balas hendaklah dibasuh tanpa menggunakan detergen sintetik. Gunakan hanya mandian reagen baharu dan petua baharu!
Baki kromogen TMB boleh disimpan dalam botol tertutup pada suhu (2-8) ° С semasa jangka hayat kit.
7 Keperluan untuk pembilasan pinggan
Pada semua peringkat pencucian, adalah perlu untuk mengawal pengisian semua telaga dan penyingkiran lengkap (aspirasi) cecair daripada mereka;
Ia adalah perlu untuk mengisi semua telaga dengan larutan hingga penuh dengan setiap pembilasan (0.30-0.35 ml setiap telaga), tanpa limpahan dan limpahan cecair dari telaga bersebelahan;
Ia adalah perlu untuk mengeram telaga yang diisi dengan larutan pencuci pinggan selama 30 s;
Pada setiap aspirasi, berhati-hati mengeluarkan baki cecair dari telaga dengan mengetuk bingkai dengan jalur dalam kedudukan terbalik pada kertas penapis yang dilipat beberapa kali, diletakkan di atas kepingan polietilena;
Bilasan pinggan yang tidak baik akan mengakibatkan hasil yang salah.
8 Analisis
8.1 Tambah pada mana-mana dua telaga pinggan 0.07 ml(70 μl) K + AT, dalam dua lubang yang lain - setiap satu 0.07 ml(70 μl) K + AG, dalam tiga lubang yang lain - setiap satu 0.07 ml(70 μl) KEPADA - .
Perhatian! Apabila menetapkan ELISA pada satu jalur, ia dibenarkan menggunakan dua telaga untuk K -, satu telaga untuk K + AT, dan satu telaga untuk K + AG.
Tambah ke baki telaga pinggan 0.07 ml(70 μl) daripada sampel serum darah manusia (plasma) yang dikaji.
Perhatian! Setiap sampel mesti diambil dengan tip pakai buang!
8.2 Dalam semua telaga plat di atas sampel kawalan dan ujian serum (plasma) sampel darah terus deposit oleh 0.05 ml(50 μl) RC-1... Campurkan kandungan telaga dengan mengetuk perlahan-lahan tepi pinggan.
8.3 (37 ± 1) ° Dari dalam 60 minit.
Perhatian!(1-2) minit sebelum akhir pengeraman, sediakan larutan Kg-2 dalam pencairan yang berfungsi (bahagian 6.6).
8.4 Keluarkan kandungan telaga menggunakan mesin basuh, kemudian bilas telaga pinggan dengan larutan untuk mencuci pinggan (bahagian 6.2) tujuh kali.
8.5 Tambah ke semua telaga pinggan dengan 0.15 ml(150 μl) larutan Kg-2 dalam pembiakan bekerja (ms 6.6).
8.6 Tutup pinggan dengan kerajang atau tutup dengan penutup dan eramkan dalam termostat pada suhu (37 ± 1) ° Dari dalam 10 min.
8.7 Keluarkan kandungan telaga pinggan menggunakan mesin basuh, kemudian bilas telaga pinggan dengan larutan untuk mencuci pinggan (bahagian 6.2) tujuh kali.
8.8 Tambah ke semua telaga pinggan 0.15 ml(150 μl) penyelesaian kerja substrat(fasal 6.7).
Apabila menyediakan penyelesaian kerja substrat (klausa 6.7) f lakuer dengan kromogen TMB mesti dipanaskan sebelum digunakan selama (3-5) min pada suhu (37± 1) ° C sehingga kristal dibubarkan sepenuhnya.
8.9 Tutup pinggan dengan kerajang atau tutup dengan penutup dan eramkan dalam termostat pada suhu (37 ± 1) ° DENGAN di tempat yang gelap untuk 15 minit.
Perhatian! Pada akhir pengeraman dalam telaga dengan sampel serum yang mengandungi antibodi kepada HIV-1 dan/atau HIV-2, dan/atau antigen HIV-1 p24, warna larutan akan berubah daripada tidak berwarna kepada biru dengan keamatan yang berbeza-beza bergantung kepada kepekatan antibodi dan/atau antigen dalam sampel serum ujian.
8.10 Hentikan tindak balas peroksidase dengan menambah kepada semua telaga 0.05 ml(50 μl) hentikan reagen.
Perhatian! Dalam telaga dengan sampel serum yang mengandungi antibodi kepada HIV-1 dan/atau HIV-2, dan/atau antigen HIV-1 p24, warna larutan akan berubah daripada biru kepada kuning dengan keamatan yang berbeza-beza.
8.11 Tidak lewat daripada (1-2) minit selepas menghentikan tindak balas, tentukan OD dalam telaga dalam mod panjang gelombang tunggal pada panjang gelombang 450 nm.
9 Pemprosesan keputusan analisis
9.2 Pertimbangkan keputusan hanya jika:
Nilai Opsr K - tidak melebihi 0.2 OE;
Setiap nilai individu OD K - tidak boleh menyimpang daripada ODsr K - lebih daripada 30%. Jika salah satu daripada tiga nilai OP K - melebihi had ini, ia harus dikecualikan daripada pengiraan OPsr K -. Jika dua daripada tiga nilai OD K - melebihi had ini, analisis harus diulang pada reagen kit baharu;
Nilai Opsr K + AT adalah lebih daripada 1.0 OE;
Nilai Opsr K + AG adalah lebih daripada 1.0 OU.
9.3 Jika syarat di atas dipenuhi, hitung nilai kritikal (OPcrit.), OE, mengikut formula (1):
OPcrit. = OPsr K - + 0,14 (1).
10 Prestasi analisis dan diagnostik
Sensitiviti kit reagen ELISA-HIV 1,2 AGAT untuk pengesanan antigen p24 HIV-1 -
Kekhususan kit reagen ELISA-HIV 1,2 AGAT- 100% Standard AT (-) HIV. Panel standard sera yang tidak mengandungi antibodi kepada virus kekurangan imun manusia jenis 1 dan 2 (HIV-1,2) dan antigen HIV-1 (p24) .ОСО42-28-214-02P.Kat # INS-20. CJSC MBS.
Borang keluaran 11 Kit
11.1 Set ini tersedia dalam lima pilihan konfigurasi:
1 set 1P - analisis manual. Kit ini direka untuk 12 larian ELISA pada plat boleh lipat: 1 set - 1 jalur (8 lubang). Secara keseluruhan - 96 penentuan, termasuk sampel kawalan;
2 set 2M - analisis manual. Kit ini direka untuk menjalankan 2 set ELISA pada plat monolitik: 1 tetapan - 1 plat. Secara keseluruhan - 192 penentuan, termasuk sampel kawalan;
3 tetapkan 2P- menjalankan analisis dengan tangan. Set direka untuk dibawa 24 persembahan ELISA untuk 2 boleh dilipat x pinggan: 1 set - 1 jalur (8 lubang). Jumlah - 192 takrifan termasuk sampel kawalan;
4 set А2М - analisis pada penganalisis automatik. Kit ini direka untuk menjalankan 2 set ELISA pada plat monolitik: 1 tetapan - 1 plat. Secara keseluruhan - 192 penentuan, termasuk sampel kawalan;
5 set A2P - analisis pada penganalisis automatik. Kit ini direka untuk 24 larian ELISA pada 2 plat boleh lipat: 1 set - 1 jalur (8 telaga). Secara keseluruhan - 192 penentuan, termasuk sampel kawalan.
12 Keadaan penyimpanan dan penggunaan kit
12.1 Kit hendaklah disimpan di dalam bilik bersih yang dilindungi daripada kelembapan dan cahaya pada suhu (2-8) ° С sepanjang hayat simpanan. Jangan bekukan komponen kit.
12.2 Untuk mendapatkan hasil yang boleh dipercayai, pematuhan ketat terhadap arahan penggunaan kit diperlukan.
12.3 tarikh luput kit - 12 bulan.
Lampiran A
Jadual A.1 - Penggunaan reagen untuk kit ELISA
|
reagen, ml |
Bilangan jalur terpakai, pcs. |
|||||||||||
|
Menyediakan larutan pencuci pinggan |
||||||||||||
|
FSB-T × 25 |
||||||||||||
|
disuling air |
||||||||||||
|
Penyediaan larutan Kg-2 dalam pencairan kerja |
||||||||||||
|
RR-K2 |
||||||||||||
|
Penyediaan penyelesaian kerja substrat |
||||||||||||
|
Chromogen TMB |
||||||||||||
Bibliografi
|
Peraturan kebersihan |
Perintah Kementerian Kesihatan Republik Belarus bertarikh 16 Disember 1998 No. 351 Mengenai semakan peraturan jabatan yang mengawal isu berkaitan HIV/AIDS |
|
|
Perintah Kementerian Kesihatan Republik Belarus bertarikh 25 November 2002 No. 165 Mengenai pembasmian kuman dan pensterilan oleh institusi penjagaan kesihatan |
||
|
Resolusi Kementerian Kesihatan Republik Belarus bertarikh 28 April 2010 No. 47 Atas kelulusan Arahan mengenai prosedur untuk menjalankan pemeriksaan perubatan wajib pekerja dan pembatalan beberapa dekri Kementerian Kesihatan Republik Belarus |
||
Nombor kemasukan pendaftaran yang unik
Nombor pendaftaran peranti perubatan
FSR 2011/10182
Tarikh pendaftaran negeri bagi peranti perubatan
Nama peranti perubatan
Satu set reagen "MilaLab-ELISA-HIV-AGAT" ujian imunosorben berkaitan enzim untuk mengesan antibodi kepada virus kekurangan imun manusia jenis 1 dan 2 (HIV-1 dan HIV-2), kumpulan HIV-1 O dan HIV-1 p24 antigen mengikut TU 9398 -187-05941003-2017
yang terdiri daripada: - Imunosorben - plat polistirena 96-telaga boleh dilipat ke jalur (atau ke telaga), di dalam telaga yang antigen tiruan diserap - gp160, gp41, p31 HIV-1, gp41 HIV-1 kumpulan O, gp36 HIV- 2 dan antibodi kepada antigen HIV-1 p24: set 1 (1 plat), set 2 (2 plat), set 3 (5 plat), - Conjugate-1: set 1 (1 fl. 1.2 ml), set 2 (1). fl. 1.2 ml), set 3 (1 vial 3.6 ml atau 3 vial 1.2 ml), - Conjugate-2: set 1 (1 vial 2.0 ml), set 2 (1 vial. 2.0 ml), set 3 (1 vial. 4.0 ml atau 2 vial 2.0 ml), - RRK-1 - larutan pencairan untuk Conjugate-1: set 1 (1 vial 12.0 ml), set 2 (1 vial 12.0 ml), set 3 (3 vial 12.0 ml setiap satu) , - RRK-2 - larutan pencairan untuk Conjugate-2: set 1 (1 vial 20.0 ml), set 2 (1 vial 20.0 ml), set 3 (2 vial 20.0 ml), - K + AT - kawalan sampel positif yang mengandungi antibodi kepada HIV: set 1 (1 vial 2.0 ml), set 2 (1 vial 2.0 ml), set 3 (1 vial 4.0 ml atau 2 vial 2.0 ml), - K + AG - con Sampel positif troll yang mengandungi antigen HIV-1 p24 tiruan: set 1 (1 vial. 2.0 ml), set 2 (1 vial 2.0 ml), set 3 (1 vial 4.0 ml atau 2 vial 2.0 ml setiap satu), - К- - kawalan sampel negatif: set 1 ( 1 vial 2.5 ml), set 2 (1 vial 2.5 ml), set 3 (1 botol 5.0 ml atau 2 botol 2.5 ml setiap satu), - PR - larutan pencuci: set 1 (1 botol 50.0 ml), set 2 (1 botol 120.0 ml), set 3 (2 botol 120.0 ml), - Hentikan reagen: set 1 (1 botol 25.0 ml ), set 2 (2 vial 25.0 ml), set 3 (2 vial 50.0 ml atau 4 vial 25.0 ml), - SB - penampan substrat penyelesaian: set 1 (1 vial 25 , 0 ml), set 2 (1 vial 25.0 ml), set 3 (2 vial 50.0 ml atau 3 vial 25.0 ml), - TMB - larutan yang mengandungi 3.3 ", 5.5" -tetramethylbenzidine : kit 1 (1 vial 2.5 ml), kit 2 (1 vial 2.5 ml), kit 3 (2 vial 3.5 ml atau 3 vial 2.5 ml). Aksesori: - penutup untuk plat polistirena 96-telaga: set 1 (1 pc.), Set 2 (2 pcs.), Set 3 (5 pcs.) Atau - filem pelindung untuk plat ELISA: set 1 (2 pcs.) , set 2 (4 pcs.), set 3 (10 pcs.), - petua pakai buang: set 1 (16 pcs.), set 2 (32 pcs.), set 3 (80 pcs.), - dulang plastik untuk reagen cecair : set 1 (2 pcs.), set 2 (4 pcs.), set 3 (10 pcs.), - beg plastik dengan Zip-Lock: set 1 (1 pcs.), set 2 (2 pcs.) , set 3 (3 pcs.).
Nama organisasi - pemohon peranti perubatan
Lokasi organisasi pemohon peranti perubatan
Alamat sah organisasi pemohon peranti perubatan
603014, Rusia, Nizhny Novgorod, st. Kominterna, 47
Nama pengeluar peranti perubatan atau pengeluar peranti perubatan
Sistem Diagnostik OOO "NPO" "
Lokasi organisasi-pengeluar peranti perubatan atau organisasi - pengeluar peranti perubatan
603093, Rusia, Nizhny Novgorod, st. Yabloneva, 22, Peti Surat 69
Alamat sah pengeluar peranti perubatan atau pengeluar peranti perubatan
Diagnosis jangkitan HIV yang tepat pada masanya menjadi langkah yang sangat penting, kerana permulaan rawatan lebih awal sebahagian besarnya boleh menentukan perkembangan selanjutnya penyakit dan memanjangkan hayat pesakit. Dalam beberapa tahun kebelakangan ini, terdapat kemajuan yang ketara dalam pengesanan penyakit yang dahsyat ini: sistem ujian lama digantikan dengan yang lebih maju, kaedah peperiksaan menjadi lebih mudah diakses, dan ketepatannya meningkat dengan ketara.
Dalam artikel ini, kita akan bercakap tentang kaedah moden untuk mendiagnosis jangkitan HIV, yang berguna untuk mengetahui untuk rawatan tepat pada masanya masalah ini dan mengekalkan kualiti hidup normal orang yang sakit.
Teknik diagnostik HIV
Di Rusia, untuk diagnosis jangkitan HIV, prosedur standard dijalankan, yang merangkumi dua peringkat:
- Sistem ujian ELISA (analisis saringan);
- pembekuan imun (IB).
Juga, kaedah lain boleh digunakan untuk diagnostik:
- ujian ekspres.
Sistem ujian ELISA
Pada peringkat pertama diagnostik, ujian saringan (ELISA) digunakan untuk mengesan jangkitan HIV, yang berdasarkan protein HIV yang dicipta dalam makmal yang memerangkap antibodi khusus yang dihasilkan dalam badan sebagai tindak balas kepada jangkitan. Selepas interaksi mereka dengan reagen (enzim) sistem ujian, warna penunjuk berubah. Selanjutnya, perubahan warna ini diproses pada peralatan khas, yang menentukan hasil analisis yang dilakukan.
Ujian ELISA sedemikian mampu menunjukkan keputusan dalam beberapa minggu selepas pengenalan jangkitan HIV. Analisis ini tidak mengesan kehadiran virus, tetapi mengesan pengeluaran antibodi terhadapnya. Kadang-kadang, dalam tubuh manusia, pengeluaran antibodi kepada HIV bermula selepas 2 minggu selepas jangkitan, tetapi pada kebanyakan orang ia berkembang pada tarikh kemudian, selepas 3-6 minggu.
Terdapat empat generasi ujian ELISA dengan sensitiviti yang berbeza-beza. Dalam beberapa tahun kebelakangan ini, sistem ujian generasi III dan IV, yang dicipta berdasarkan peptida sintetik atau protein rekombinan dan mempunyai kekhususan dan ketepatan yang lebih besar, telah digunakan lebih kerap. Ia boleh digunakan untuk mendiagnosis jangkitan HIV, memantau kelaziman HIV, dan memastikan keselamatan semasa menyaring darah yang didermakan. Ketepatan sistem ujian ELISA generasi III dan IV ialah 93-99% (ujian yang lebih sensitif yang dihasilkan di Eropah Barat ialah 99%).
Untuk melakukan ujian ELISA, 5 ml darah diambil dari vena pesakit. Sekurang-kurangnya 8 jam harus berlalu antara hidangan terakhir dan ujian (biasanya dilakukan pada waktu pagi semasa perut kosong). Adalah disyorkan untuk mengambil ujian sedemikian tidak lebih awal daripada 3 minggu selepas jangkitan yang didakwa (contohnya, selepas hubungan seks tanpa perlindungan dengan pasangan seksual baru).
Keputusan ujian ELISA diperolehi dalam 2-10 hari:
- keputusan negatif: menunjukkan ketiadaan jangkitan HIV dan tidak memerlukan rujukan kepada pakar;
- keputusan negatif palsu: ia boleh diperhatikan pada peringkat awal jangkitan (sehingga 3 minggu), pada peringkat akhir AIDS, dengan penindasan imuniti yang ketara dan dengan penyediaan darah yang tidak betul;
- hasil positif palsu: ia boleh diperhatikan dengan beberapa penyakit dan dengan penyediaan darah yang tidak betul;
- keputusan positif: menunjukkan jangkitan HIV, memerlukan IB dan hubungan pesakit dengan pakar di pusat AIDS.
Mengapakah ujian ELISA boleh memberikan keputusan positif palsu?
Keputusan positif palsu ujian ELISA untuk HIV boleh diperhatikan dengan pemprosesan darah yang tidak betul atau pada pesakit dengan keadaan dan penyakit berikut:
- pelbagai myeloma;
- penyakit berjangkit yang dicetuskan oleh virus Epstein-Barr;
- keadaan selepas;
- penyakit autoimun;
- terhadap latar belakang kehamilan;
- keadaan selepas vaksinasi.
Atas sebab yang dinyatakan di atas, antibodi tindak balas silang tidak spesifik mungkin terdapat dalam darah, yang pengeluarannya tidak dicetuskan oleh jangkitan HIV.
Dalam beberapa tahun kebelakangan ini, kekerapan keputusan positif palsu telah menurun dengan ketara disebabkan oleh penggunaan sistem ujian generasi III dan IV, yang mengandungi lebih sensitif peptida dan protein rekombinan (ia disintesis menggunakan kejuruteraan genetik in vitro). Selepas permulaan penggunaan ujian ELISA sedemikian, kekerapan keputusan positif palsu telah menurun dengan ketara dan kira-kira 0.02-0.5%.
Menemui positif palsu tidak bermakna seseorang itu dijangkiti HIV. Dalam kes sedemikian, WHO mengesyorkan satu lagi ujian ELISA (penjanaan IV mandatori).
Darah pesakit dihantar ke makmal rujukan atau timbang tara bertanda "ulang" dan diuji pada sistem ujian ELISA generasi IV. Jika keputusan analisis baharu adalah negatif, maka keputusan pertama diiktiraf sebagai ralat (positif palsu) dan IB tidak dijalankan. Sekiranya keputusan positif atau meragukan semasa ujian kedua, pesakit mesti diberikan IB dalam 4-6 minggu untuk mengesahkan atau menafikan jangkitan HIV.
Kekebalan imun
Diagnosis muktamad jangkitan HIV boleh dibuat hanya selepas keputusan imunisasi (IB) positif diperolehi. Untuk pelaksanaannya, jalur nitroselulosa digunakan, di mana protein virus digunakan.
Pensampelan darah untuk IB dilakukan dari vena. Kemudian ia menjalani pemprosesan khas dan protein yang terkandung dalam serumnya dipisahkan dalam gel khas mengikut caj dan berat molekulnya (manipulasi dilakukan pada peralatan khas di bawah pengaruh medan elektrik). Jalur nitroselulosa digunakan pada gel serum darah dan blotting ("blotting") dijalankan di dalam ruang khas. Jalur itu diproses dan jika bahan yang digunakan mengandungi antibodi kepada HIV, maka ia mengikat jalur antigen pada IB dan muncul sebagai garisan.
IB dianggap positif jika:
- mengikut kriteria CDC Amerika - terdapat dua atau tiga baris gp41, p24, gp120 / gp160 pada jalur;
- mengikut kriteria FDA Amerika - pada jalur terdapat dua baris p24, p31 dan garis gp41 atau gp120 / gp160.
Dalam 99.9% kes, keputusan IB positif menunjukkan jangkitan HIV.
Sekiranya tiada garis, IB adalah negatif.
Dalam mengenal pasti baris dengan gp160, gp120 dan gp41- IB adalah diragui. Keputusan sedemikian boleh dikesan apabila:
- penyakit onkologi;
- kehamilan;
- pemindahan darah yang kerap.
Dalam kes sedemikian, adalah disyorkan untuk melakukan pemeriksaan semula menggunakan kit dari syarikat lain. Jika, selepas tambahan IB, keputusan masih diragui, maka pemerhatian diperlukan selama enam bulan (IB dijalankan setiap 3 bulan).
Tindak balas rantai polimerase
Ujian PCR boleh mengesan RNA virus. Sensitivitinya agak tinggi dan ia membolehkan anda mengesan jangkitan HIV seawal 10 hari selepas jangkitan. Dalam sesetengah kes, PCR boleh memberikan keputusan positif palsu, kerana kepekaan yang tinggi juga boleh bertindak balas terhadap antibodi kepada jangkitan lain.
Teknik diagnostik ini mahal dan memerlukan peralatan khas dan pakar yang berkelayakan tinggi. Sebab-sebab ini tidak memungkinkan untuk melaksanakannya semasa ujian besar-besaran penduduk.
PCR digunakan dalam kes sedemikian:
- untuk mengesan HIV pada bayi baru lahir yang dilahirkan oleh ibu yang dijangkiti HIV;
- untuk mengesan HIV dalam "tempoh tingkap" atau dalam kes IB yang diragui;
- untuk mengawal kepekatan HIV dalam darah;
- untuk kajian darah penderma.
Hanya dengan ujian PCR, HIV tidak didiagnosis, tetapi dijalankan sebagai kaedah diagnostik tambahan untuk menyelesaikan situasi kontroversi.
Kaedah nyata
Salah satu inovasi dalam diagnostik HIV telah menjadi ujian pantas, yang hasilnya boleh dinilai dalam masa 10-15 minit. Keputusan yang paling berkesan dan tepat diperoleh dengan ujian imunokromatografi berdasarkan prinsip aliran kapilari. Ia adalah jalur khas di mana darah atau cecair lain yang disiasat (air liur, air kencing) digunakan. Dengan kehadiran antibodi kepada HIV, selepas 10-15 minit, jalur berwarna muncul pada ujian dan jalur kawalan - hasil positif. Jika keputusannya negatif, hanya jalur kawalan yang muncul.
Seperti selepas ujian ELISA, keputusan ujian pantas mesti disahkan oleh analisis IB. Hanya selepas itu diagnosis jangkitan HIV boleh dibuat.
Terdapat kit ekspres untuk ujian di rumah. Ujian OraSure Technologies1 (AS) diluluskan oleh FDA, dijual tanpa preskripsi dan boleh digunakan untuk mengesan HIV. Selepas ujian, dalam kes keputusan positif, pesakit disyorkan untuk menjalani pemeriksaan di pusat khusus untuk mengesahkan diagnosis.
Selebihnya ujian untuk kegunaan rumah masih belum diluluskan oleh FDA dan boleh menjadi sangat dipersoalkan.
Walaupun fakta bahawa ujian pantas adalah lebih rendah dalam ketepatan berbanding ujian ELISA generasi IV, ia digunakan secara meluas untuk ujian tambahan terhadap populasi.
Anda boleh mengambil ujian untuk mengesan jangkitan HIV di mana-mana klinik, hospital daerah pusat atau di pusat AIDS khusus. Di wilayah Rusia, mereka dipegang secara sulit, atau tanpa nama. Setiap pesakit boleh mengharapkan untuk menerima nasihat perubatan atau psikologi sebelum atau selepas ujian. Anda perlu membayar untuk ujian HIV hanya di hospital komersial, dan di poliklinik dan hospital negeri, ia dilakukan secara percuma.
Baca tentang cara anda boleh dijangkiti HIV dan apakah mitos yang wujud tentang kemungkinan dijangkiti HIV
Memuatkan...