Settet med reagenser "Næringsmedium for isolering av gonokokker, tørr" (GNK-agar) er beregnet på mikrobiologiske formål. Det brukes til å isolere gonokokker når man studerer infisert materiale, samt som medium for dyrking og lagring av gonokokker i forskningsarbeid.
Reagenssettet er tilgjengelig som et sett med to lyofiliserte komponenter:

grunnleggende om næringsmediet - lyofilisat fra et volum på 100 ml i en flaske - 1 stk;
tilsetningsstoff til bunnen av næringsmediet - lyofilisat fra et volum på 24 ml i en flaske - 1 stk.

Sammensatt: basis av næringsmediet - kaninkjøttekstrakt, tørr enzymatisk pepton for bakteriologiske formål, natriumklorid, bakegjær autolysat, orotsyre, mikrobiologisk agar. Tilsetning til bunnen av næringsmediet - normal flytende hestemyse for bakteriologiske næringsmedier, bakegjærautolysat, aminopeptid for mikrobiologiske næringsmedier.

Forberedelse: 100 ml sterilt renset vann tilsettes flasken med bunnen av næringsmediet og oppbevares i (30±5) minutter, plasseres deretter i et kokende vannbad til agaren er helt smeltet, etter smelting holdes agaren i en vannbad i ikke mer enn 5 minutter. Tilsett 24 ml sterilt renset vann til flasken med tilsetning av næringsmedium og la stå i (20±2) minutter til fullstendig oppløsning ved en temperatur på 20-25°C. Det oppløste tilsetningsstoffet overføres til en oppløst base avkjølt til en temperatur på (50±2)° C. Mediet omrøres, 3 ml helles i sterile prøverør og klippes. 0,5 ml av en steril løsning av natriumklorid 0,9 % er legges til hvert reagensrør for å fukte mediet. Mediet kan også helles 10-15 ml i sterile petriskåler. Reagensglass eller skåler med næringsmedium plasseres i (24±1) timer i en termostat ved en temperatur på (37±1)°C for å kontrollere steriliteten. Det tilberedte næringsmediet lagres ved en temperatur på (6±2)°C i opptil 7 dager.

Driftsprinsipp: settet med reagenser skal sikre vekst av hver teststamme av Neisseria gonorrhoeae "Loshakov" og Neisseria gonorrhoeae "Denisov" ved inokulering av 0,5 ml mikrobiell suspensjon fra en fortynning på 10"5 etter 24 - 48 timers inkubasjon ved en temperatur på ( 37 ± 1) °C i form av transparente eller gjennomskinnelige fargeløse kolonier som varierer i størrelse fra 0,5 til 2 mm med glatte kanter.

Gjennomføring av analyser: Resultatene av inokulering registreres etter 24, 48 og 72 timers inkubasjon ved en temperatur på (37±1) ° C. Ved inokulering av sekretet fra kjønnsorganene til pasienter med gonoré, bør veksten av gonokokker på næringsmediet være observert etter 24-72 timer. Hvis det ikke er vekst av gonokokker, hold avlingene i en termostat i opptil 7 dager.

Emballasje: 0,25 kg polyetylenglass for tilberedning av 3,6 liter medium.

Holdbarhet - 1 år.

Prisen er oppgitt inkl. mva per 1 kg.

Gonokokker er bønneformede, arrangert i form av diplokokker, omgitt av en mikrokapsel, har ikke flageller, og danner ikke sporer, lik meningokker. Celleveggen har en ytre membran, hvis proteiner er delt inn i tre grupper etter deres funksjonelle betydning. Gonokokker er preget av tilstedeværelsen av pili, som skiller seg fra hverandre i sine antigene egenskaper (16 antigene varianter). Gonokokker dyrkes på næringsmedier som inneholder naturlig protein (blodserum, ascitesvæske). De vokser bedre ved 3-5 % CO2. Gjennomsiktige kolonier med glatte kanter dannes på ascitagarus. Av karbohydrater er det kun glukose som fermenteres, katalase og cytokromoksidase dannes - enzymer som er typiske for Neisseria.

Antigener

Den antigene strukturen til gonokokker er variabel. Dette skyldes tilstedeværelsen av en rekke antigene varianter av pili, som dannes under utviklingen av infeksjon.

Patogenisitet og patogenese

Gonokokker fester seg til det sylindriske epitelet i urinrøret, den vaginale delen av livmorhalsen, endetarmen, øyets konjunktiva, samt sædceller og protozoer (Trichomonas, amøbe). Adhesjon oppstår på grunn av pili og proteiner i den ytre membranen av celleveggen. Et karakteristisk trekk ved gonokokker er deres evne til å penetrere leukocytter og formere seg i dem. Lipooligosakkariddelen av celleveggen har en toksisk effekt. Kapselpolysakkarider hemmer fagocytose. Forbindelse med villi av det sylindriske epitelet i urinrørsslimhinnen, og hos kvinner, den endocervikale kanalen, penetrerer gonokokker inn i cellene med deltakelse av proteiner i den ytre membranen av celleveggen. Dette fører til utvikling av akutt uretritt, cervicitt og skade på livmorhalsen, vedheng (rør, eggstokker) hos kvinner, sædblærer og prostatakjertel hos menn. Med ekstragenital lokalisering kan gonokokker skade endetarmen og mandlene, og også forårsake blenoré (konjunktivitt) hos nyfødte. Infeksjon oppstår under passering av fødselskanalen til en mor med gonoré.

Immunitet

Med gonoré oppstår en humoral immunrespons. De resulterende antibakterielle antistoffene har imidlertid ikke beskyttende egenskaper. I løpet av sykdommen dannes IgA, som undertrykker festingen av patogenets pili til cellene i urinrørets slimhinne. Imidlertid er de ikke i stand til å beskytte slimhinnen fra påfølgende infeksjon av andre generasjoner av gonokokker, som er assosiert med en endring i deres antigene struktur. Dette fører til reinfeksjoner og tilbakefall, samt at sykdommen blir kronisk.

Gonokokinfeksjoner

Årsaken til gonoré og blenoré N.gonorrhoeae (foreløpig klassifisert som gonococcus) tilhører familien Neisseriaceae, slekten Neisseria. I utstryk fra pasientsekret har gonokokker form som kaffebønner, er gramnegative, og befinner seg i par både inne i leukocytter (ufullstendig fagocytose) og utenfor cellene. I henhold til deres morfologiske egenskaper ligner de veldig på meningokokker. Gonokokker er preget av polymorfisme – det er små og store celler, sjelden stavformede.De er veldig kresne med hensyn til næringsmedier. De vokser bedre på medier som inneholder blod, serum og ascitesvæske. Gonokokker inneholder protein- og polysakkaridantigener, ifølge hvilke de er delt inn i 16 serovarer, men de er ennå ikke bestemt i rutinemessige bakteriologiske laboratorier.For mikrobiologisk diagnostikk av gonokokkinfeksjoner brukes bakterioskopiske, bakteriologiske, serologiske og allergiske metoder.

Tar materiale til forskning

For å kunne gjennomføre bakteriologisk og bakterioskopisk diagnostikk med verdighet og god kvalitet er det viktig å ta klinisk materiale korrekt. Som regel bør det utføres av lege Hos menn undersøkes sekresjonene fra urinrøret, paraurethrale kanaler, endetarmen, og, hvis indisert, materiale fra orofarynx, samt sekresjonen av prostatakjertelen etter dens massasje. Du kan også undersøke sedimenter og "tråder" av urin, men gonokokker oppdages mye sjeldnere i dem. Før du tar materiale fra urinrøret, bør pasienten ikke tisse i 4-5 timer og ikke bruke antimikrobielle legemidler og desinfiserende løsninger. Den ytre åpningen av urinrøret tørkes først av med en steril bomullspinne fuktet med en 0,85 % natriumkloridløsning, deretter med en tørr vattpinne. Utstryk er ikke laget av gjødsel, som flyter fritt, men fra materiale tatt ved å skrape fra urinrørets slimhinne med en bakteriologisk løkke eller en spesiell Volkmann-skje. For mindre utflod er det nødvendig å utføre en foreløpig urethral massasje. Hos kvinner tas materiale fra urinrøret, paraurethrale passasjer, livmorhalsen, endetarmen og, hvis indisert, fra orofarynx. Først renses skjeden for sekret, urinrøret masseres, og materialet fjernes ved å skrape med en bakteriologisk løkke eller en Volkmann-skje. Livmorhalsen tørkes først av med en steril bomullspinne for å fjerne slimproppen. Utslipp fra livmorhalskanalen tas med en bakteriologisk løkke eller pinsett. Materiale fra det distale rektum tas med en Volkmann-skje på en blind måte, dvs. uten forberedelse av pasienten, eller ved bruk av et rekoskop eller rektalspekulum. I dette tilfellet tas materialet som studeres direkte fra det synlige stedet for lesjonen Med orofaryngeal gonoré, slim De tas fra orofarynx med sterile bomullspinner på spesielle holdere laget av ståltråd For å diagnostisere lenoré fjernes konjunktivalsekresjonen med en bakteriologisk løkke. I sjeldne tilfeller er gonoré komplisert av gonosepsis, endokarditt eller leddgikt. Da er materialet for juslidzhenya blod eller leddvæske. Med tanke på den høye følsomheten til gonokokker for temperatursvingninger, leveres materialene som studeres til laboratoriet i spesielle termoser eller poser med en varmepute.

Bakterioskopisk undersøkelse

Bakterioskopisk undersøkelse er den vanligste, men mindre følsomme metoden for laboratoriediagnose av gonoré og blenoré sammenlignet med isolering av faktiske kulturer. Dette gjelder spesielt for det kroniske sykdomsforløpet, når testmaterialet inneholder en liten mengde gonokokker. Men med riktig innsamling av materiale, gjentatte undersøkelser av pasienter, bruk av provokasjonsmetoder, og kvalifisert vurdering av utstryk, gjør bakterioskopisk undersøkelse det ganske ofte mulig å raskt og korrekt diagnostisere sykdommen To tynne, ensartede utstrykspreparater lages fra materialet som studeres. Den ene er farget med metylenblått, den andre er farget med Gram-metoden. I fravær av metylenblått kan ett utstryk farges med en 1 % vandig løsning av krystallfiolett eller 0,5 % løsning av briljant grønt i 1 minutt. En konklusjon om tilstedeværelsen av gonokokker er laget basert på deres egenskaper: gram-negativ farge, diplococcal struktur, form på kaffebønner, plassering inne i leukocytter. Under påvirkning av antibiotika og andre kjemoterapimedisiner, så vel som i kronisk gonoré, morfologien og fargen på gonokokker kan endre seg. Individuelle celler får forskjellige former og størrelser (de såkalte Asch-formene). I tillegg kan testmaterialet inneholde gramnegative kokker som ligner på gonokokker fra slekten Veillonella. Dette begrenser til en viss grad den diagnostiske verdien av primærmikroskopimetoden De beste og mest pålitelige resultatene oppnås ved immunfluorescensmetoden. Tynne utstryk fra pasientens sekret festes i brennerflammen. Fluorescein-isotiocyanat-merket anti-gonokokkserum påføres dem i 1 time ved 35 ° C i et fuktig kammer. Etter dette vaskes utstrykene to ganger med en bufferløsning, bufret med glyserol påføres og dekkes med dekkglass. Når gonokokker interagerer med merkede antistoffer, er en karakteristisk glød rundt bakteriecellene synlig under et fluorescerende mikroskop.

Bakteriologisk forskning

Indikasjoner for isolering av rene kulturer av gonokokker er gjentatte negative bakterioskopiresultater, tilstedeværelsen av mikroorganismer som er mistenkelige for gonokokker, men ikke morfologisk identifisert, samt for pålitelig å etablere kuren av sykdommen. Det er veldig viktig å plassere avlingene i termostaten umiddelbart. Hvis det er umulig å utføre kulturer på stedet for innsamling av materialet, kan du henge en bomullspinne i et reagensrør med Stewarts transportmedium, som sikrer bevaring av levedyktigheten til gonokokker under levering til laboratoriet. ut i henhold til standardskjemaet i et av de spesielle næringsmediene i reagensrør eller petriskåler (CDS, Bailey , blod- eller serumagar, tørt næringsmedium fra Kharkov-bedriften "Biolek" for produksjon av bakterielle og medisinske preparater). For diagnostisk dyrking av gonokokker i mange land brukes også "sjokolade"-agar. De beste mediene er de som er basert på kaninkjøttagar eller ferske storfehjerter. Tilsetning av 20 enheter/ml polymyxin og 2 μg/ml linkomycin øker frekvensen av inokulering av gonokokker betydelig, siden disse stoffene hemmer veksten av andre bakterier. Før såing varmes alle medier opp i en termostat i 15-20 minutter. Skåler og prøverør med kulturer plasseres i ekssikkatorer, hvor det skapes en atmosfære på 20 % CO2. Kolonier vokser vanligvis innen 18-24 timer, men sen vekst er også mulig. Deretter holdes avlingene i en termostat (i en ekssikkator!) i opptil 8 dager, og kontrollerer utseendet til vekst daglig.De oppvokste koloniene av gonokokker har en rund, lett konveks form, glatte kanter, en skinnende overflate og en slimete konsistens. De er gjennomsiktige, som duggdråper, nesten fargeløse, selv om det også kan forekomme hvitaktige varianter. De resulterende koloniene undersøkes makroskopisk og mikroskopisk. I utstryk er gonokokker lokalisert i par, tetrader og klynger. Typiske kolonier blir subkulturert på serumagar-skråninger for å isolere en ren kultur. Den endelige identifiseringen utføres under hensyntagen til de morfologiske, kulturelle, enzymatiske og antigene egenskapene. Biokjemisk er gonokokker lite aktive. På mysemedier med 1,5 % av ulike karbohydrater dekomponerer de kun glukose, men ikke maltose og sukrose Oksidaseaktiviteten til isolerte kulturer bestemmes ved å påføre en 1 % løsning av dimetylparafenylendiamin på koloniene (etter mikroskopi). Oksidasepositive kolonier blir først røde og senere svarte.Differensiering av gonokokker fra andre arter av slekten Neisseria er av særlig betydning ved diagnostisering av orofaryngeal gonoré. Som kjent, på slimhinnen i mandlene, munnen og nasofarynx er det alltid et stort antall gram-negative Neisseria - representanter for den normale menneskelige mikrofloraen. Pålitelige metoder for å identifisere gonokokker er immunfluorescens, lateks og koaglutinasjonsreaksjoner, samt bestemmelse av enzymatiske egenskaper. Det er tvingende nødvendig å foreta en kvalitativ bestemmelse av mikroorganismers følsomhet eller resistens mot antibiotika ved bruk av agar-diffusjonsmetoden ved bruk av disker For å øke frekvensen av å finne gonokokker i utstryk under primærmikroskopi og mer pålitelig isolering av renkulturer, spesielt i tilfeller av treg, kronisk sykdomsforløp, metoder for å provosere gonoré brukes , det vil si en kunstig forverring av den patologiske prosessen, som et resultat av at et større antall gonokokker vises i sekretene. De viktigste av disse metodene er: a) kjemisk - instillasjon av en 0,5% løsning av sølvnitrat i urinrøret hos menn, smøring av livmorhalskanalen med en 2-5% løsning av sølvnitrat; b) mekanisk - innsetting av en direkte bougie inn i urinrøret i 10 minutter, eller anterior uretroskopi; c) biologisk - intramuskulær injeksjon av gonovaccine i en mengde på 500 millioner mikrobielle legemer eller pyrogenal 200 MTD; d) ernæringsmessig - inntak av salt, krydret mat; e) termisk - oppvarming av kjønnsorganer med en induktoterm strøm; f) fysiologisk - tar utstryk under menstruasjon. Det er enda bedre å kombinere flere provokasjonsmetoder, for eksempel kjemiske, ernæringsmessige og biologiske. Nylig har polymerasekjedereaksjon blitt brukt for mer pålitelig å identifisere årsaken. av gonoré. Det lar deg identifisere patogenet i tilfeller av kronisk gonoré, når bakterioskopisk og bakteriologisk undersøkelse ikke gir positive resultater.

Serologisk diagnose

Serologisk diagnose av gonoré utføres relativt sjelden, hovedsakelig i dets kroniske forløp, når bakterioskopiske og bakteriologiske studier ikke gir positive resultater. Under moderne forhold utføres enzymimmunoassay, RNGA og Bordet-Gengou-reaksjoner (BRS). Antigenene for disse reaksjonene er: varmedrept polyvalent gonokokkvaksine, ultralyd-inaktivert vaksine, protein- og polysakkaridfraksjoner av gonokokker, samt pyridinantigen. ELISA og RNGA er svært spesifikke og pålitelige serologiske reaksjoner. Sammenlignet med tidligere har RSK noe mistet rollen. Det har ingen praktisk verdi ved diagnostisering av akutt gonoré, siden det behandles før dannelsen av en betydelig mengde antistoffer. Det er generelt uegnet for å fastslå påliteligheten til en kur. Bordet-Gengou-reaksjonen er viktig ved serodiagnose av kronisk gonoré, spesielt i dens kompliserte former (gonosepsis, metritt, leddgikt, prostatitt osv.) Den diagnostiske verdien av allergitester er noe devaluert ved at de er positive for mange år etter gonoré. For å sette dem opp, injiseres 0,1 ml fersk gonokokkvaksine (100 millioner mikrobielle celler i 1 ml) intradermalt. Etter 24 timer observeres hyperemi, noen ganger med hevelse i midten.

Behandling og forebygging

For kjemoterapi av gonoré brukes antibiotika: beta-laktamer (penicilliner, cefalosporiner) og andre antibiotika. Vaksinell forebygging av gonoré utføres ikke på grunn av mangel på effektive vaksiner. For å forhindre blenoré, får alle nyfødte en løsning av en av de listede antibiotika innpodet på øyets bindehinne.

Neisseria gonorrhoeae tilhører familien Neisseriaceae, slekten Neisseria. Gonokokker ble oppdaget av Neisser i 1879 og hele familien ble oppkalt etter ham.

Morfologi. Gonokokker er diplokokker som består av to bønneformede kokker som ligger konkave til hverandre (minner om kaffebønner). Størrelsen på gonokokker er 1,2-1,3 × 0,7-0,8 mikron. De er polymorfe; sammen med store er det veldig små, uregelmessig formede L-formede bakterier. Gonokokker er immobile og sporer ikke. En kapselformet substans finnes i det patologiske materialet (pus). Gram negativ. Under påvirkning av narkotika og andre stoffer endres de raskt: grampositive former vises. I patologisk materiale er de lokalisert intracellulært (i en leukocytt), men kan være utenfor cellen. De kan finnes i form av individuelle kokker (se fig. 4).

Dyrking. Gonokokker er aerobe. Svært krevende på næringsmedier. De vokser på medier som inneholder naturlig protein (menneske) - blod, serum, ved en temperatur på 37 ° C og en pH på 7,2-7,4. Mediene skal være ferske og fuktige. Såing bør gjøres umiddelbart etter inntak av materialet. På et serummedium danner gonokokker små kolonier 1-2 mm, gjennomsiktige, skinnende med glatte kanter, som ligner duggdråper. Det er ingen hemolyse i blodmediet. I mysebuljong gir de en liten turbiditet og en film som legger seg på bunnen av reagensrøret. Hvis veksten er dårlig etter 24 timer, blir avlingene stående i termostaten det andre døgnet.

Enzymatiske egenskaper. Sakkarolytiske egenskaper er svakt uttrykt. Gonokokker bryter bare ned ett sukker - glukose, og produserer syre. De har ikke proteolytiske egenskaper.

Giftstoffdannelse. Celleveggen til gonokokker inneholder et giftig stoff - lipopolysakkarid (lite studert).

Antigen struktur. Den antigene strukturen er heterogen og endres lett under påvirkning av miljøfaktorer. Det er ingen generelt akseptert inndeling av gonokokker i serovarer og serotyper.

Motstand mot miljøfaktorer. I det ytre miljø er gonokokker lite stabile. Ved en temperatur på 56-60° C dør de. Ved en temperatur på 40 ° C avtar deres levedyktighet kraftig. Lave temperaturer og tørking ødelegger dem raskt. Men de forblir i pus i opptil 24 timer Desinfeksjonsløsninger - 1% fenolløsning, kvikksølvklorid 1:1000 dreper gonokokker i løpet av få minutter. Gonokokker er spesielt følsomme for sølvsalter - en 1% sølvnitratløsning dreper dem umiddelbart. UV-stråler dreper dem i løpet av minutter.

Dyrefølsomhet. Dyr er ikke følsomme for gonokokker. Imidlertid forårsaker intraperitoneal injeksjon av gonokokktoksin i hvite mus deres død.

Smittekilder. En person med gonoré.

Overføringsveier. Kontakt husholdningen (seksuell), sjeldnere gjennom forurensede gjenstander (håndkle, svamper, etc.).

Sykdommer hos mennesker. Gonoré og blenoré.

Patogenese. Den naturlige verten av gonokokker er en syk person. Gonokokker trenger gjennom slimhinnene i urinrøret (hos kvinner, urinrøret og livmorhalsen). Patogenisitetsfaktoren til gonokokker er tilstedeværelsen av pili, som, som forbinder med mikrovilli i det sylindriske epitelet, letter penetrasjonen av gonokokken inn i epitelcellen, og forårsaker en akutt inflammatorisk prosess i slimhinnen.

Klinisk manifesteres gonoré ved smerte under vannlating, utslipp av puss fra urinrøret og skjeden. Sykdommen er akutt, men blir noen ganger kronisk. Gonokokker kan forårsake gonoré konjunktivitt - blenoré (purulent betennelse i slimhinnen i øynene hos nyfødte). Gonokokker trenger sjelden gjennom urinrøret til andre organer, men noen ganger kan de forårsake leddgikt, endokarditt, etc.

Immunitet. Det er ingen naturlig resistens mot gonokokker. Den overførte sykdommen skaper heller ikke immunitet. Den observerte fagocytosen er ufullstendig.

Forebygging. Helse utdanning. Øke det kulturelle og hygieniske nivået. Det er ingen spesifikk forebygging. For å forhindre blenoré, må barn injiseres i konjunktivalsekken umiddelbart etter fødselen med 1-2 dråper av en 30 % albucid løsning.

Behandling. Antibiotika (penicillin, bicillin, streptomycin, etc.). Sulfonamidmedisiner brukes også. For den kroniske formen brukes gonokokkvaksine.

Kontrollspørsmål

1. Beskriv de morfologiske egenskapene til gonokokker.

2. Hva er den enzymatiske aktiviteten og toksinproduksjonen til gonokokker?

3. Hva er motstanden til gonokokker. Hvilket medikament er gonokokker spesielt følsomme for?

4. Hvilke sykdommer er forårsaket av gonokokker og deres patogenese.

Mikrobiologisk undersøkelse

Formål med studien: identifikasjon av gonokokker og antigonokokkantistoffer.

Materiale for forskning

1. Utflod fra urinrørsslimhinnen hos menn.

2. Utflod fra slimhinnen i urinrøret og livmorhalsen hos kvinner.

3. Purulent utflod fra øynene.

4. Blod for serum.

Merk. For bakterioskopisk og bakteriologisk undersøkelse tas materiale: 1) før oppstart av antibiotikabehandling: 2) tidligst 10 dager etter avsluttet antibiotikabehandling; 3) ikke tidligere enn 2 timer etter siste vannlating; 4) tidligst 2 timer etter douching.

Grunnleggende forskningsmetoder

1. Mikroskopisk (hovedsakelig brukt til akutte former).

2. Mikrobiologisk.

3. Serologisk.

Studiens fremdrift

Andre dag av studiet

Ta avlingene ut av termostaten og inspiser dem. Studerer kolonier. De lager utstryk. Hvis det er mistenkelige gramnegative diplococci, subkultureres kolonier på skrå medium i reagensglass (mediet må være nylaget og inneholde tilstrekkelig mengde kondensat) og testes for oksidase. For å gjøre dette påføres en dråpe 1% dimetylparafenylendiaminløsning på kolonien med en pipette; koloniene endrer farge fra mørkebrun til svart.

Tredje dag av studiet

Kulturene tas ut av termostaten, utstryk lages av den skrå agaren, farges med Gram og undersøkes mikroskopisk. Inokuler på Hiss-medier (laktose, glukose, mannitol og maltose). Disse karbohydratene bør inneholde 30 % av blodserumet. De inokulerte reagensglassene plasseres i en termostat.

Fjerde dag med forskning

Fjern rørene fra termostaten; hvis det ikke er vekst, la dem ligge i termostaten i ytterligere 1-2 dager. Dersom det er vekst, tas resultatene i betraktning (tabell 28).

Serologisk diagnose

Tredje uke med sykdom. I det kroniske sykdomsforløpet og i tvilsomme tilfeller utføres RSC ved hjelp av pasientens serum (se kapittel 12). En drept kultur av gonokokker, som fremstilles under industrielle forhold, brukes som antigen. Du kan bruke den indirekte hemagglutinasjonsreaksjonen (se kapittel 12).

Kontrollspørsmål

1. Hvilket materiale brukes for å identifisere gonokokker og hvordan fås det?

2. Hvor lenge etter vannlating (eller douching hos kvinner) kan materiale tas til forskning?

3. Hvilken forskningsmetode er den viktigste for den akutte formen og hvilken for den kroniske formen for gonoré?

4. Når og hvilken serologisk test utføres ved mistanke om gonoré?

5. Hvilke mikroorganismer trenger å skille gonokokker fra?

Få medisinen fra læreren din. Studer det og skisser gonokokkene som ligger innenfor og utenfor leukocytten ved hjelp av Gram-farging.

Kulturmedier

Eggeplomme medium. Til 100 ml MPA fra kaninkjøtt tilsett 15 ml eggeplomme (ferskt kyllingegg), 6 ml fenolrød indikator, 1,5 ml sukker oppløst i 1 ml sterilt destillert vann.

Næringsmedium ascites-agar. Til filtratet av buljongen tilberedt fra kaninkjøtt, tilsett 2% agar, 1% pepton og 0,5% natriumklorid. Varm opp til agaren er oppløst, sett pH til 7,4-7,5 og alkaliser med 20 % natriumhydroksid. Mediet bringes til koking, filtreres, helles i sterile hetteglass og steriliseres i en autoklav i 15 minutter ved 115°C.

Oppskrifter for ascites-frie kulturmedier (MPA pH 7,4-7,5).

1) kjøttvann fra kaninkjøtt eller oksehjerter - 100 ml

kaseinhydrolysat - 2 ml

gjær autolysat - 2 ml

storfeblodserum - 20 ml

2) kjøttvann fra kaninkjøtt eller oksehjerter - 100 ml

5% løsning av hemohydrolysat - 2 ml

gjær autolysat - 2 ml

storfeserum - 20 ml

3) kjøttvann fra kaninkjøtt eller oksehjerter - 100 ml

kylling eggeplomme - 10 ml

storfeblodserum - 20 ml

Veksten av gonokokker på disse mediene er rikelig. Gonococcus-kolonier kan påvises ved hjelp av en oksidase-test, der de blir røde, blir svarte.

Årsaken til gonoré er Neisseria gonorrhoeae , forårsaker akutte og kroniske inflammatoriske lesjoner i kjønnsorganene, slimhinnen i orofarynx og øyets konjunktiva.

Materialet for forskning er purulent utflod av kjønnsorganene, rektum eller konjunktiva i øynene (med blenoré), artikulært og peritonealt ekssudat. Strengt regulerte metoder for laboratoriediagnostikk av gonoré er mikroskopisk og bakteriologisk (kulturell) undersøkelse. Metoder for mikrobiologisk diagnose av gonoré er reflektert i skjema 18.

Opplegg 18. Metoder for mikrobiologisk diagnostikk av gonoré

Mikroskopisk metode består av å undersøke utstryk fra testmaterialet, farget med Gram og metylenblått. Ved farging av preparater for gonoré brukes en modifikasjon av Gram-metoden (gentianfiolett fargestoff erstattes med krystallfiolett, og nøytralrødt brukes i stedet for fuchsin; preparatet vaskes etter hvert trinn av farging). Ved utstryk av akutt gonoré finnes et stort antall polymorfonukleære leukocytter, innenfor og utenfor hvilke bønneformede gramnegative diplococci er lokalisert; den medfølgende mikrofloraen er enten minimal eller helt fraværende (fig. 25). Ved kronisk gonoré, i noen tilfeller, er en typisk gonokokk ikke oppdaget i utstryk, eller ser atypisk ut i form av små støvlignende eller store sfæriske formasjoner; ofte er 2 gonokokkceller plassert i en vinkel i forhold til hverandre, og rikelig medfølgende mikroflora , leukocytter, epitelceller og andre celler finnes. IFM kan brukes som en ekspress diagnostisk metode.

Ris. 25. Årsaken til gonoré (Neisseria gonorrhoeae) i utstryk fra urinrøret til en pasient med akutt gonoré. Internt og ekstracellulært lokaliserte grammatiske diplokokker, en overflod av leukocytter.

Bakteriologisk metode. Gonococcus er svært følsom for ulike ugunstige faktorer, så kulturtesting må utføres umiddelbart etter innsamling av materialet. Såing utføres på spesielle næringsmedier. Grunnlaget for disse mediene er MPA fra kaninkjøtt med tilsetning av gjærautolysat, kaseinhydrolysat eller hemohydrolysat og storfemyse. Ascitesvæske og eggeplomme brukes foreløpig ikke som tilsetningsstoffer til kulturmediet for gonokokker. Den andre typen kulturmedier er selektiv og inkluderer, i tillegg til de ovennevnte komponentene, antibiotika (polymyxin, lincomycin og for diagnostisering av faryngeal gonoré - orotsyre). Avlinger dyrkes ved 37 0 C i 24-72 timer i en atmosfære med høyt CO 2 innhold. Kolonier av gonokokker er runde, gjennomsiktige, i form av duggdråper. Kolonier som er typiske for gonokokker blir subkulturert til reagensglass med et gonokokkkulturmedium for å oppnå rene kulturer, som identifiseres ved morfologiske og sakkarolytiske egenskaper på "varierte" medier (halvflytende agar med myse og karbohydrat) eller ved bruk av mikrotestsystemer. I utstryk fra rene kulturer er gonokokker ikke lokalisert i par, men hver for seg. Biokjemisk er gonokokker inaktive og fermenterer bare glukose med dannelse av syre og produserer oksidase. For å oppdage oksidase brukes en test med en 1% vandig løsning av dimetylparafenylendiamin eller dietylparafenylendiamin, som farger gonokokkkolonier først rosa, deretter røde og etter noen minutter - svarte. Gonokokkers følsomhet overfor antibiotika og dens beta-laktamaseaktivitet blir også studert.

Serologisk metode(bestemmelse av antistoffer mot gonokokker i blodet til pasienter som bruker RSK og ELISA) er ikke strengt regulert, har ikke diagnostisk verdi, er ikke en metode for å overvåke effektiviteten av behandlingen, og brukes for tiden ikke i virkelig praksis.

Gendiagnostikk. Den er rettet mot å oppdage spesifikke fragmenter av gonokokk-DNA ved bruk av PCR og kan brukes som en ekstra svært informativ metode for å diagnostisere gonoré.

Selvstendig arbeid av studenter

1. Mikroskopisk metode- undersøkelse av purulent utflod fra urinrøret til en pasient med mistanke om gonoré (demonstrasjonsmikroglass, Gram-farge).

2. Bakteriologisk metode. Studie av kultur . årsaken til gonoré på et næringsmedium for isolering av gonokokker, hvorpå gonokokker danner runde, gjennomsiktige kolonier i form av duggdråper. Enzymatisk er gonococcus inaktiv og fermenterer bare glukose for å danne syre. Ta hensyn til resultatene av å så gonokokker på den "varierte" raden (demonstrasjon).

Diagnose av gonoré

Uten å teste for gonoré, vil ingen moderne lege stille en diagnose. Det spiller ingen rolle hvilke symptomer pasienten har - gonoré, som mange andre infeksjoner, bestemmes først og fremst av laboratoriemetoder. Og rettidig testing, sammen med et kompetent valg av metoden som er best egnet i hvert enkelt tilfelle, spiller en avgjørende rolle for å forhindre alvorlige komplikasjoner.

Flere metoder brukes for laboratoriediagnose av gonoré:

utstryksmikroskopi for Neisser gonococcus (bakterioskopisk metode);
bakteriekultur for gonoré (gonokokker);
serologiske tester (serodiagnose);
enzymimmunoassay (ELISA);
PCR (polymerasekjedereaksjon);
raske tester for gonoré.

De mest nøyaktige og vanlige av dem er tankkultur og PCR. La oss se på hver i detalj for å forstå hvorfor.

Hvordan gjøres en mikroskopisk test for gonoré?

Mikroskopi av et utstryk fra urinrøret eller skjeden (cervix) er den enkleste metoden for foreløpig diagnose av gonoré. Prinsippet for studiet er enkelt. Utstryket farges og undersøkes under et mikroskop. Samtidig rettes oppmerksomheten mot tilstedeværelsen av doble kokker med en kaffebønneformet form som er karakteristisk for gonokokker.

Med enhver betennelse inneholder utstryket et stort antall leukocytter - blodceller som er ansvarlige for å beskytte kroppen. Med gonoré økes også antallet, men dette faktum kan ikke bekrefte diagnosen. Tilstedeværelsen av hvite blodlegemer indikerer bare betennelse, men indikerer ikke hvilken infeksjon som forårsaket det.

Leukocytter og gonokokker ved gonoré kan bestemmes i en generell urinprøve (finnes i sedimentet).

Fordelen med metoden er dens enkelhet og hastighet. Og hovedproblemet er lav nøyaktighet. Du kan gjennomføre analysen på 10-15 minutter, men sannsynligheten for at resultatet er riktig er 50 %. Et lignende utseende er karakteristisk for nesten alle Neisseria, inkludert ikke-patogene. Derfor brukes mikroskopi kun til screening, for å forstå om det er noe fremmed i utstryket. Hvis det oppdages bakterier som ligner gonokokker, utføres andre, mer nøyaktige tester: dyrking, PCR eller blodprøve ved bruk av ELISA.

Hvordan utføres bakteriekultur for gonokokker?

I motsetning til mikroskopisk undersøkelse av et utstryk, er tankkultur en informativ metode. Gonokokker vokser bare på spesielle medier; koloniene deres har et karakteristisk utseende og farge. I tillegg har forskjellige typer bakterier forskjellige evner til å behandle visse stoffer (spesielt sukker). Til sammen bidrar disse egenskapene til å identifisere både arten og underarten til mikroben. Nøyaktigheten av metoden er 90%.

Hvis gonokokker blir funnet, vil følsomheten for antibiotika bli bestemt på de samme koloniene i laboratoriet. Da vil legen vite nøyaktig hvilken medisin som er sterkere i hvert enkelt tilfelle. Derfor er det fornuftig å utføre analysen, selv om en annen metode klart har bestemt tilstedeværelsen av infeksjon.

Ulempen med metoden er dens varighet. Tiden det tar å forberede en slik analyse for gonoré kan variere fra flere dager til flere uker.

I hvilke tilfeller utføres serodiagnose av gonoré?

For å bekjempe sykdommen produserer immunsystemet antistoffer - spesielle beskyttende proteiner. De er spesifikke for hver infeksjon de må bekjempe. Legene gikk fra det motsatte - hvis det er antistoffer (effekt), så må det være bakterier (årsak). Prinsippet for den serologiske metoden er å observere reaksjonen til pasientens blod, som inneholder antistoffer mot gonokokker, med antigener mot disse antistoffene i diagnosesettet. Antistoffer og antigener tiltrekkes av hverandre som polene til en magnet og holder seg sammen. På grunn av dette dannes et bunnfall i løsningen.

Serologiske metoder brukes sjelden for å diagnostisere gonoré. Hovedsakelig av interesse for forskere. Tidligere ble de mye brukt til å oppdage gonoré, men de ble forlatt på grunn av lav nøyaktighet og resultatets avhengighet av subjektive faktorer.

Ventetiden for prøvesvar for gonoré ved bruk av serologiske metoder er flere timer. Informasjonsinnhold - fra 60 til 75%, avhengig av det diagnostiske settet med antigener. Serologiske tester oppdager ikke sykdommen de første ukene etter infeksjon - kroppen trenger tid til å samle antistoffer i blodet.

Hvordan oppdage gonoré ved hjelp av enzymimmunanalyse

Enzym-linked immunosorbent assay eller ELISA er en metode som har erstattet serologiske diagnostiske metoder. På samme måte lar det deg bestemme i blodet visse klasser av antistoffer spesifikke for gonoré, men mer presist. Kan diagnostisere både akutt (flere dager etter infeksjon) og kronisk gonoré. Mye brukt til diagnose og screening.

Fordelene med metoden er tilstrekkelig nøyaktighet (75-85%), rimelig pris. Ulempe: resultatene kan være forvrengt av subjektive (bortskjemte reagenser, menneskelig faktor) og objektive (tilstedeværelse av immunsvikt, immunsykdommer) årsaker. Hvor lang tid det tar å ta en blodprøve for gonoré ved bruk av ELISA avhenger av hvert spesifikke laboratorium og reagenser (fra 1 til 5-6 dager).

Test for gonoré ved hjelp av PCR-metoden

Polymerasekjedereaksjonsmetoden er kronen på verket innen sykdomsdiagnostikk. Han er veldig nøyaktig og spesifikk. Skaperen av metoden, Kary Mullis, mottok Nobelprisen i medisin i 1993. Prinsippet for metoden er basert på påvisning av arvestoffet til patogenet (DNA av neisseria gonorrhoeae) i de studerte prøvene av biologisk materiale. For å gjennomføre studien kan du bruke et hvilket som helst biologisk materiale - blod, serum, sekret fra kjønnsorganene, urinrøret, utstryk og utskraping. Materialet kan være forurenset med puss, ekssudat, urin og sekreter, men dette påvirker ikke analysens effektivitet.

Materialet søkes etter sekvensen av gener som er karakteristiske for patogenet. Hvis funnet, så er dette et tydelig tegn på infeksjon. PCR-testen for gonoré har høyest informasjonsinnhold og spesifisitet. Nøyaktigheten er omtrent 95%. Varigheten av analysen er fra én til flere dager, avhengig av laboratoriet og reagensene.

Ekspressprøver for gonoré hjemme

Den mest populære produsenten av ekspresstester er STD Test Express

Ekspresstester for gonoré er utviklet spesielt for personer som er seksuelt aktive. Den er basert på et prinsipp som ligner på ELISA (reaksjonen av gonokokkantigen med antistoffer fra materiale tatt fra en person med mistenkt sykdom). Blodprøver, sekret fra kjønnsorganene, urinrøret og endetarmen er egnet for testing.

Den største fordelen med ekspresstester er hastighet. Prosedyren tar 10-20 minutter. Ulempen med metoden er hyppige falske positive og falske negative resultater, avhengighet av riktig testing, forvrengning av resultater på grunn av brudd på lagringsregler. Derfor er det bedre å se inn i nærmeste laboratorium.

La oss oppsummere det

I de fleste tilfeller overføres gonokokker sammen med andre seksuelt overførbare infeksjoner. Hvis du mistenker en sykdom, må du testes for alle mulige sykdommer. Derfor er det optimalt å starte med en PCR-analyse – den forberedes raskt, og ett utstryk kan undersøkes samtidig for ulike bakterier og virus.

Det er fornuftig å gjøre en tankkultur hvis gonoré allerede er kjent for å bekrefte diagnosen og bestemme følsomhet for antibiotika.

Kan gonoré ikke vises i prøver? Falske negative resultater forekommer i de mest nøyaktige metodene. Antibiotika og andre medisiner, egenskaper ved pasientens kropp, kronisk infeksjon og andre faktorer kan endre utseendet og formen til gonokokker, og gjøre dem om til såkalte L-former. I vanskelige tilfeller foreskriver legen en gonoré-provokasjon - en bevisst svekkelse av immunsystemet for å stimulere infeksjonen til å manifestere seg. Hjemmemetoden for provokasjon er enkel og hyggelig - drikk øl og ta et varmt bad, og anbefales til alle som skal gjennom en smøreprøve for kultur.

Kultur for gonoré

Gonoré er en seksuelt overførbar sykdom som er en av de vanligste blant befolkningen.

Sykdommen er preget av betennelse i urinsystemet. En vanlig årsak til infeksjon er promiskuitet uten bruk av verneutstyr.

Både menn og kvinner kan bli smittet.

Viktig! Gonoré, uten rettidig behandling, bidrar til utviklingen av infertilitet.

I dag vil vi fortelle deg når og hvordan du skal ta kulturer for gonokokkinfeksjon, og vil hjelpe deg å forstå testresultatene.

Kultur for gonoré: indikasjoner

Fra infeksjonsøyeblikket til de første synlige tegnene tar det vanligvis fra 3 til 15 dager. Kan være asymptomatisk.

Følgende symptomatiske tegn er karakteristiske:

Purulent utslipp;
Rødhet og hevelse i urinrøret;
Brennende og kløe i kjønnsområdet;
Smerter i nedre del av magen;
Mulig økning i kroppstemperatur;
Smertefull vannlating.

Hvis du merker disse symptomene, bør du søke hjelp fra en lege så snart som mulig. Indikasjonen for undersøkelse er gonokokkinfeksjon hos en seksualpartner.

Merk følgende! Overgangen av sykdommen til kronisk kan føre til en rekke komplikasjoner og infertilitet.

Forberedelse: kultur for gonoré

Ethvert biologisk materiale kan brukes til bakteriologisk forskning.

Før studien tas et gjerde:

Hud;
sperm;
Munnslimhinner, mage-tarmkanalen;
Skraping av kjønnsorganene.

Bakteriologisk kultur er foreskrevet av en urolog eller gynekolog.

For å oppnå et pålitelig resultat, bør du kjenne til reglene for forberedelse til bakteriologisk inokulering.

Hvis legen din har foreskrevet en smøreprøve, må du:

Ikke ha samleie to dager før undersøkelsen;
Ikke dusj;
Utfør kjønnshygiene uten intimhygieneprodukter;
2-3 timer før du tar materialet, avstå fra å gå på toalettet;
Slutt å ta medisiner en uke før testen.

Hos kvinner tas et utstryk de første dagene etter slutten av menstruasjonen.

Avlingene plasseres i en termostat ved optimale fuktighets- og temperaturforhold. For gonokokker er det nødvendig å opprettholde en temperatur innenfor 37 grader. Etterpå studeres tvilsomme kolonier.

Artstrekk ved kolonivekst på agar:

Fargeløs eller med en gul fargetone;
Ikke stor;
Overflaten er glatt og skinnende;
Litt konveks.

Denne metoden for forskning er ganske informativ. Ulempen er at det tar mye tid å forske. Ved hjelp av bakteriologisk testing kan følsomheten til en mikroorganisme for antibakterielle legemidler bestemmes. Dette er nødvendig for effektiviteten av videre behandling.

Halskultur for gonoré

Ved mistanke om en gonoréprosess i halsen bør du kontakte ØNH-spesialist eller venerolog. Du bør definitivt ta en vattpinne fra halsen, mandlene eller svelget.

Samtidig tas en test fra kjønnsorganene. En test for gonokokkinfeksjon bør tas før behandlingsstart. Etter behandling bør du gjennomgå en oppfølgingsundersøkelse.

Kultur for gonoré fra øyet

Det berørte øyelokket hovner opp og blir blårødt. I prosessen med stor utslipp av puss, kan øyelokket holde seg sammen.

Sårhet, kløe og svie vises. Utslippet fra øyet tas for analyse. Det gjennomføres en PCR-studie og bakteriologisk dyrking med ytterligere testing for følsomhet for antibiotika.

Kultur av prostatasekresjon for gonoré

Ved hjelp av prostatamassasje samles prostatasekresjoner.

Dette er en klar væske som er inokulert på spesielle næringsmedier. Etter en eller to dager kan kolonier av mikroorganismer identifiseres. Et antibiogram utføres for å bestemme et effektivt medikament for videre behandling.

Kultur for gonoré fra anus

Det brukes flere metoder for å samle inn materiale. I det første tilfellet føres en bomullspinne langs de perianale foldene. Etterpå legges de i en steril beholder. Den andre metoden er å ta en skraping.

Tidsramme for å forberede kulturer for gonoré

Laboratorietester kan ta fra fem til ni dager.

Dette avhenger av typen og metodikken for den utførte analysen. Resultatet av en mikroskopisk analyse kan oppnås på omtrent en halv time.

PCR utføres på ikke mer enn én dag, og ekspressanalyse kan også utføres. PCR-paletten tillater parallell testing for tilstedeværelse av samtidige infeksjoner.

Kultur for gonoré for å bestemme effektiviteten av behandlingen

Fraværet av symptomatiske tegn på gonoré og negative laboratorietester er et naturlig resultat av behandlingen. Kontroll utføres på den 10. dagen etter seponering av antibakterielle legemidler.

Studien inkluderer å undersøke utstryket tre ganger under et mikroskop og inokulere materialet én gang på et næringsmedium.

Menn er pålagt å ta testen én gang, mens kvinner tar den tre ganger. Etter to uker med seponering av behandlingen, under og etter menstruasjon.

Hvis det ikke er symptomer og negative tester oppnås, er personen frisk. Hvis resultatene er positive, men ingen symptomer er observert, indikerer dette en skjult prosess.

Behandlingsforløpet bør gjentas. Negative resultater og tilstedeværelsen av tegn på betennelse indikerer tilstedeværelsen av en annen type patogen i kroppen.

Kultur for gonoré: hvilken lege bør jeg kontakte?

Kulturer for gonoré kan foreskrives av passende spesialister - en gynekolog, urolog, venerolog.

Undersøkelsen kan gjøres ved enhver offentlig eller privat klinikk. Hvis du trenger hasteresultater fra prøvene, anbefaler vi å kontakte et privat laboratorium.

Huske! Hvis de første symptomene vises, kontakt en spesialist umiddelbart.

Kultur for gonoré: pris

Kostnaden for analysene avhenger av metoden for å studere materialet.

Prisene vil variere mellom 150-2000 rubler. Bakteriologisk såing i prispolitikken vil være omtrent 800-1300 rubler.

Hvis du trenger å utføre en kulturtest for gonoré i Moskva, vennligst kontakt vår klinikk. Vårt eget laboratorium lar oss utføre forskning raskt, effektivt og rimelig. Når du mottar resultatene, kan du konsultere en kjønnslege.

For forebyggende formål bør barriereprevensjon brukes. Det er bedre å forhindre utviklingen av sykdommen enn å behandle den senere.

Hvis du mistenker gonoré, kontakt en kompetent venerolog.

Bruk: mikrobiologi, diagnose av gonoré, næringsmedium for isolering og dyrking av gonokokker. Essensen av oppfinnelsen: næringsmediet inneholder som næringsgrunnlag bukspyttkjertelhydrolysat av fiskemel og saltsyrehydrolysat av kasein, som vekststimulerende middel og kilde til vitaminer - autolysat av baker- eller ølgjær, en vekststimulator av hemofile mikroorganismer. Mediet inneholder i tillegg glukose, mikrobiologisk agar, polymyxin-B-sulfat, linkomycinhydroklorid og destillert vann. Mediet sikrer vekst av gonokokker fra museumsstammer og fra materiale fra pasienter med gonoré, og bevarer den typiske morfologien til mikroorganismen, noe som bidrar til dens utbredte bruk i praktisk helsevesen ved diagnostisering og behandling av seksuelt overførbare sykdommer. 3 bord

Oppfinnelsen angår feltet medisinsk mikrobiologi og kan brukes ved diagnostisering av gonoré. Ledende utenlandske selskaper ("Oxoid", "Gibco", "BRL", etc.) produserer næringsmedier for dyrking av gonokokker basert på kjøttfordøyelser og fermentolysater med tilsetning av sterilt naturlig blod. Blant innenlandske preparater er følgende kjent: næringsmedium "Arginine-agar", diagnostisk , tørt, produsert av NPO Nutrient Media, Makhachkala, som består av følgende komponenter, g: pepton 8.0-12.0; arginin 0,07-0,3; cystin 0,007-0,03; glutaminsyre 1,0-1,8; EKD 4,0-7,0; tiaminbromid 0,002-0,007; jernnitrat 0,002-0,01; kaliumklorid 0,07-0,2; natriumklorid 5,0-8,0; ammoniumklorid 0,9-2,0; magnesiumsulfat 0,4-0,9; glukose 4,0-7,0; stivelse 0,5-2,0; Tris buffer 1,0-2,5; agar 13-17,0; bovint serum 153,0-255,0; polymyxin-M sulfat 15000-25000 enheter; lincomycinhydroklorid 0,001-0,003; destillert vann opptil 1 liter. Ulempen med dette mediet er: lav følsomhet, ustabilitet av resultater på intensiteten av gonokokkvekst. Lyofiltørket medium for isolering av gonokokker (produsert av Research Institute of VCA, St. Petersburg) bestående av en medium base og et tilsetningsstoff i følgende forhold mellom komponenter, g; er vist i tabell 1. Ulempen med dette mediet er: ustabiliteten til resultatene på intensiteten av gonokokkvekst og følsomhet. I praksis brukes laboratorietilberedte ascitesfrie medier hovedsakelig fra ekstrakter av ferskt kaninkjøtt og ferske storfehjerter med tilsetning av pepton og 20 % storfeblodserum eller sterilt naturlig blod. Mangelen på nødvendig mengde innenlandske næringsmedier for diagnostisering av gonoré, samt kvaliteten på dem, forårsaker kritikk fra det praktiske helsevesenet. Hensikten med oppfinnelsen er å skape et tørt næringsmedium som sikrer stabile resultater når det gjelder vekstintensitet og økt følsomhet, ikke dårligere enn kommersielle medier for diagnostisering av gonokokker, og å bruke ikke-matprodukter for produksjonen. Problemet løses ved å balansere komponentsammensetningen til mediet som inneholder en næringsrik proteinbase, autolysat av baker- eller ølgjær, agar, natriumklorid, hemmere av fremmed mikroflora lincomycinhydroklorid og polymyxin-B-sulfat; som ernæringsbase inneholder den hydrolysatisk bukspyttkjertel av fiskefôrmel og saltsyrehydrolysat av kasein, i tillegg inneholder det i tillegg en vekststimulator av hemofile mikroorganismer (enzymatisk hydrolysat av svart albumin), glukose, for å øke stabiliteten av resultatene ved undersøkelse av pasienter med kronisk gonoré, er det mulig å tilsett storfeblodserum (5-10)% til mediet med følgende innhold av komponenter, g/l: bukspyttkjertelhydrolysat av fiskemel 22,0-28,0 surt hydrolysat av kasein 2,8-3,2 autolysat av baker- eller ølgjær 0,8-1,2 vekststimulator av hemofile mikroorganismer 2,0-10,0 glukose 9,0 -11,0 natriumklorid 2,9-3,1 mikrobiologisk agar 12,0-15,0 polymyxin-B-sulfat 15000-25000 enheter
lincomycinhydroklorid 0,001-0,003
destillert vann opptil 1 l
pH 7,3+0,2
Det kvantitative forholdet mellom komponentene i næringsmediet og dets pH gir et økt intensitetsnivå for gonokokkvekst og mediets følsomhet. Næringsmediet tilberedes som følger: veide porsjoner av hovedingrediensene tilsettes i en kolbe med destillert vann. Mediet blandes grundig og ved å lukke kolben med en propp av bomullsgas, steriliseres det ved (115-119) o C i 30 minutter. deretter avkjølt til en temperatur på (45-50) o C og steril, etter tidligere oppløst i sterilt saltvann. oppløsning, tilsett veide mengder polymyxin-B-sulfat og linkomycinhydroklorid. Mediet blandes og helles i sterile petriskåler. For biologisk kontroll av kulturmedier ble det brukt en kultur av Neisseria gonorrhoeae museumsstammer og materiale fra gonorépasienter. Alle avlingene ble dyrket ved en temperatur på (37+0,5) o C i en atmosfære på 10 % CO 2 og høy luftfuktighet i 24-48 timer: data i tabell 1. Eksempel 1. Det foreslåtte mediet ble testet ved å dyrke Neisseria gonorrhoeae-stammer og på klinisk materiale på et næringsmedium med følgende sammensetning, g:
bukspyttkjertelhydrolysat av fiskemel 22.0
bakegjær autolysat 0,8
saltsyrehydrolysat av kasein 2.8
vekststimulator av hemofile mikroorganismer 2.0
glukose 9,0
natriumklorid 2,9
mikrobiologisk agar 12.0
polymyxin-B-sulfat 15000 enheter
linkomycinhydroklorid 0,001
destillert vann opptil 1 l
pH 7,3+0,2
Resultatene ble registrert etter 24-48 timers dyrking. Eksempel 2. Det foreslåtte mediet ble testet ved å inokulere Neisseria gonorrhoeae-stammer og bruke klinisk materiale på et næringsmedium med optimalt innhold av komponenter med følgende sammensetning, g:
bukspyttkjertelhydrolysat av fiskemel 25.0
bakegjær autolysat 1.0
saltsyrehydrolysat av kasein 3.0
vekststimulator av hemofile mikroorganismer 5.0
glukose 10,0
natriumklorid 3,0
mikrobiologisk agar 13.0
polymyxin-B-sulfat 20000 enheter
linkomycinhydroklorid 0,002
destillert vann opptil 1 l
pH 7,3+0,2
Resultatene ble registrert etter 24-48 timers dyrking. Eksempel 3. Det foreslåtte mediet ble testet ved å inokulere Neisseria gonorrhoeae-stammer og bruke klinisk materiale på et næringsmedium med maksimalt innhold av komponenter med følgende sammensetning, g:
bukspyttkjertelhydrolysat av fiskemel 28.0
bakegjær autolysat 1.2
saltsyrehydrolysat av kasein 3.2
vekststimulator av hemofile mikroorganismer 10.0
glukose 11,0
natriumklorid 3.1
mikrobiologisk agar 15.0
polymyxin-B-sulfat 25000 enheter
linkomycinhydroklorid 0,003
destillert vann opptil 1 l
pH 7,3+0,2
Resultatene ble registrert etter 24-48 timers dyrking. Eksempel 4. Det foreslåtte mediet ble testet ved å inokulere Neisseria gonorrhoeae-stammer og bruke klinisk materiale på et næringsmedium med et brudd på det kvantitative forholdet mellom komponentene i følgende sammensetning, g:
bukspyttkjertelhydrolysat av fiskemel 31.0
bakegjær autolysat 1.4
saltsyrehydrolysat av kasein 3.4
vekststimulator av hemofile mikroorganismer 15.0
glukose 13,0
natriumklorid 3,5
mikrobiologisk agar 20.0
polymyxin-B-sulfat 30000 enheter
destillert vann opptil 1 l
pH 7,3+0,2
Resultatene ble registrert etter 24-48 timers dyrking. Eksempel 5. Det foreslåtte mediet ble testet ved å inokulere Neisseria gonorrhoeae-stammer og bruke klinisk materiale på et næringsmedium med et brudd på det kvantitative forholdet mellom komponentene i følgende sammensetning, g:
bukspyttkjertelhydrolysat av fiskemel 18.0
bakegjær autolysat 0,5
saltsyrehydrolysat av kasein 2.5
vekststimulator av hemofile mikroorganismer 0,5
glukose 5,0
natriumklorid 2,5
mikrobiologisk agar 10.0
polymyxin-B-sulfat 10000 enheter
linkomycinhydroklorid 0,005
destillert vann opptil 1 l
pH 7,3+0,2
Resultatene ble registrert etter 24-48 timers dyrking. Tabell 2 gir en sammenlignende beskrivelse av veksten av gonokokker fra klinisk materiale og museumsstammer på foreslåtte og kjente medier etter 24-48 timers vekst. Morfologien til kolonier og fargede utstryk på alle testede medier er identisk med den som er typisk for gonokokker. Tabell 2 viser at det foreslåtte mediet er overlegent kommersielle medier når det gjelder gonokokkvekstintensitet og sensitivitet. Brudd på det kvantitative forholdet mellom komponentene i miljøet fører til en kraftig forringelse av de mikrobiologiske indikatorene for kvaliteten på det foreslåtte miljøet. Det foreslåtte mediet gjør det mulig å opprettholde levedyktigheten til Nisseria gonorrhoeae-stammer (både nylig isolert fra pasienter og museumsprøver) under passasje i 9 måneder. Tabell 3 viser data om levedyktigheten til Neisseria gonorrhoeae-kulturen når den dyrkes og lagres på faste medier,
Fra tabell 3 kan man se at det foreslåtte næringsmediet er egnet for diagnostiske formål for å identifisere pasienter med akutt og kronisk gonoré, samt for å skaffe Neisseria gonorrhoeae biomasse for å lage gonovacciner. Informasjonskilder
1. Håndbok Kulturmedier (1982)
2. Håndboken for mikrobiologiske kulturmedier (Gibco BRL 1988)
3. Oxoid-manualen for kulturelle medier, ingredienser og andre laboratorietjenester. (Oxoid Limited 1979)
4. Håndbok for BBL-produkter og laboratoreprosedyrer. 1991. 5. Forfatter. Attest nr. 1451167, født. Gadzhieva et al. "Næringsmedium for isolering av gonokokker." 6. FS 42-146 VS-88 Næringsmedium for isolering av gonokokker, tørr.

Krav

1 Næringsmedium for isolering og dyrking av gonokokker, som inneholder en næringsbase, baker- eller ølgjærautolysat, mikrobiologisk agar, natriumklorid, en hemmer av fremmed mikroflora og destillert vann, karakterisert ved at den som næringsbase inneholder hydrolysat av bukspyttkjertelen mel og saltsyrehydrolysat av kasein, inneholder i tillegg en vekststimulator av hemofile mikroorganismer, glukose, og som en hemmer av fremmed mikroflora polymyxin-B-sulfat og lincomycinhydroklorid i følgende forhold av komponenter, g/l: 3 Pankreashydrolysat av fiskemel7 22 283 Saltsyrehydrolysat av kasein7 2,8 3,23 Bakerautolysat eller ølgjær7 0,8 1,23 Vekststimulator av hemofile mikroorganismer7 2 103 Glukose7 9 113 Natriumklorid7 2,9 3,731-Mikrobiologisk 3,151-sulfat, Uniin-sulfat 15000 250003 Lincomycinhydroklorid7 0,001 0,0033 B Destillert vann7 Opptil 1 l3 pH7 7,3 + 0,2

Lignende patenter:

Oppfinnelsen vedrører medisinsk bioteknologi og angår produksjon av meningokokkadhesin, et preparat av bakteriell opprinnelse, brukt for eksempel for å bestemme graden av adhesjon av meningokokker under deres interaksjon med vertsceller