Setul de reactivi „Mediu nutritiv pentru izolarea gonococilor, uscat” (agar GNK) este destinat scopului microbiologic. Este folosit pentru izolarea gonococului atunci când se studiază materialul infectat, precum și ca mediu pentru cultivarea și depozitarea gonococului în munca de cercetare.
Setul de reactivi este disponibil ca un set de două componente liofilizate:

• bazele mediului nutritiv - liofilizat dintr-un volum de 100 ml într-o sticlă - 1 bucată;
• aditiv la baza mediului nutritiv - liofilizat dintr-un volum de 24 ml într-o sticlă - 1 buc.

Compus: baza mediului nutritiv - extract de carne de iepure, peptonă enzimatică uscată în scop bacteriologic, clorură de sodiu, autolizat de drojdie de panificație, acid orotic, agar microbiologic. Aditiv la baza mediului nutritiv - zer lichid normal de cal pentru medii nutritive bacteriologice, autolizat de drojdie de panificație, aminopeptidă pentru medii nutritive microbiologice.

Preparare: Se adaugă 100 ml apă purificată sterilă în sticla cu baza mediului nutritiv și se păstrează timp de (30±5) minute, apoi se pun într-o baie de apă clocotită până când agar-ul este complet topit, după topire agar-ul se păstrează într-un baie de apă pentru cel mult 5 minute. Adăugați 24 ml de apă purificată sterilă în sticlă cu adaos de mediu nutritiv și lăsați timp de (20±2) minute până la dizolvarea completă la o temperatură de 20-25°C. Aditivul dizolvat este transferat într-o bază dizolvată răcită la o temperatură de (50±2)°C. Mediul este agitat, 3 ml se toarnă în eprubete sterile și se cosi.. 0,5 ml soluție sterilă de clorură de sodiu 0,9% este adăugat în fiecare eprubetă pentru a umezi mediul. Mediul poate fi turnat și 10-15 ml în vase Petri sterile. Eprubete sau vase cu mediu nutritiv sunt plasate timp de (24±1) ore într-un termostat la o temperatură de (37±1)°C pentru a controla sterilitatea. Mediul nutritiv preparat este păstrat la o temperatură de (6±2)°C timp de până la 7 zile.

Principiul de funcționare: setul de reactivi trebuie să asigure creșterea fiecărei tulpini de testare de Neisseria gonorrhoeae „Loshakov” și Neisseria gonorrhoeae „Denisov” atunci când se inoculează 0,5 ml suspensie microbiană dintr-o diluție de 10”5 după 24 - 48 de ore de incubare la o temperatură de ( 37 ± 1) °C sub formă de colonii incolore transparente sau translucide, cu dimensiuni cuprinse între 0,5 și 2 mm, cu margini netede.

Efectuarea analizei: Rezultatele inoculării se înregistrează după 24, 48 și 72 de ore de incubație la o temperatură de (37±1) ° C. La inocularea secrețiilor organelor genito-urinale ale pacienților cu gonoree, creșterea gonococului pe mediul nutritiv trebuie să fie observată după 24-72 ore. Dacă nu există o creștere a gonococului, păstrați culturile într-un termostat timp de până la 7 zile.

Ambalare: borcane din polietilena de 0,25 kg pentru prepararea a 3,6 litri de mediu.

Perioada de valabilitate - 1 an.

Pretul este dat cu TVA pentru 1 kg.

Gonococii sunt în formă de fasole, aranjați sub formă de diplococi, înconjurați de o microcapsulă, nu au flageli și nu formează spori, asemănător meningocilor. Peretele celular are o membrană exterioară, ale cărei proteine ​​sunt împărțite în trei grupuri în funcție de semnificația lor funcțională. Gonococii se caracterizează prin prezența pili, care diferă unul de celălalt prin proprietățile lor antigenice (16 variante antigenice). Gonococii sunt cultivați pe medii nutritive care conțin proteine ​​native (ser de sânge, lichid ascitic). Ele cresc mai bine la 3-5% CO2. Pe ascitagar se formează colonii transparente cu margini netede. Dintre carbohidrați, doar glucoza este fermentată, se formează catalaza și citocrom oxidaza - enzime tipice Neisseria.

Antigene

Structura antigenică a gonococilor este variabilă. Acest lucru se datorează prezenței numeroaselor variante antigenice de pili, care se formează în timpul dezvoltării infecției.

Patogenitate și patogeneză

Gonococii se atașează la epiteliul cilindric al uretrei, partea vaginală a colului uterin, rect, conjunctiva ochiului, precum și spermatozoizii și protozoarele (Trichomonas, amoeba). Aderența are loc datorită piliului și proteinelor membranei exterioare a peretelui celular. O trăsătură caracteristică a gonococilor este capacitatea lor de a pătrunde în leucocite și de a se multiplica în ele. Partea lipooligosaharidă a peretelui celular are un efect toxic. Polizaharidele capsulare inhibă fagocitoza. Conectându-se cu vilozitățile epiteliului cilindric al mucoasei uretrei, iar la femei, canalul endocervical, gonococii pătrund în celule cu participarea proteinelor membranei exterioare a peretelui celular. Acest lucru duce la dezvoltarea uretritei acute, a cervicitei și a leziunilor colului uterin, a anexelor (tuburi, ovare) la femei, veziculelor seminale și a glandei prostatei la bărbați. Cu localizare extragenitală, gonococii pot afecta rectul și amigdalele și, de asemenea, pot provoca blenoree (conjunctivită) la nou-născuți. Infecția apare în timpul trecerii canalului de naștere a unei mame cu gonoree.

Imunitate

Cu gonoree, apare un răspuns imun umoral. Cu toate acestea, anticorpii antibacterieni rezultați nu au proprietăți protectoare. În cursul bolii, se formează IgA, care suprimă atașarea piliului agentului patogen de celulele mucoasei uretrei. Cu toate acestea, ei nu sunt capabili să protejeze mucoasa de infecția ulterioară de către alte generații de gonococi, care este asociată cu o schimbare a structurii lor antigenice. Acest lucru duce la reinfecții și recăderi, precum și la cronicizarea bolii.

Infecții gonococice

Agentul cauzal al gonoreei și blenoreei N.gonorrhoeae (clasificat în mod preliminar ca gonococ) aparține familiei Neisseriaceae, genul Neisseria. În frotiurile din secrețiile pacientului, gonococii au forma boabelor de cafea, sunt gram-negativi și sunt localizați în perechi atât în ​​interiorul leucocitelor (fagocitoză incompletă), cât și în exteriorul celulelor. După caracteristicile lor morfologice, ele sunt foarte asemănătoare cu meningococii. Gonococii se caracterizează prin polimorfism - există celule mici și mari, rareori în formă de baston, sunt foarte pretențioși în ceea ce privește mediile nutritive. Ele cresc mai bine pe medii care conțin sânge, ser și lichid ascitic. Gonococii conțin antigene proteice și polizaharide, conform cărora sunt împărțiți în 16 serovare, dar nu sunt încă determinate în laboratoarele bacteriologice de rutină.Pentru diagnosticul microbiologic al infecțiilor gonococice se folosesc metode bacterioscopice, bacteriologice, serologice și alergice.

Luarea de material pentru cercetare

Pentru a efectua diagnostice bacteriologice și bacterioscopice cu demnitate și calitate, este important să luați corect materialul clinic. De regulă, ar trebui efectuată de un medic.La bărbați, se examinează secrețiile uretrei, canalelor parauretrale, rectului și, dacă este indicat, materialul din orofaringe, precum și secreția glandei prostatei după aceasta. masaj. De asemenea, puteți examina sedimentul și „firele” de urină, dar gonococii sunt detectați mult mai rar în ele. Înainte de a lua material din uretră, pacientul nu trebuie să urineze timp de 4-5 ore și să nu folosească medicamente antimicrobiene și soluții dezinfectante. Deschiderea externă a uretrei se șterge mai întâi cu un tampon de bumbac steril umezit cu o soluție de clorură de sodiu 0,85%, apoi cu un tampon uscat. Frotiurile sunt făcute nu din gunoi de grajd, care curge liber, ci din material luat prin răzuire de pe mucoasa uretrală cu o ansă bacteriologică sau o lingură specială Volkmann. Pentru scurgeri minore, este necesar să se efectueze un masaj uretral preliminar. La femei, materialul este prelevat din uretră, pasaje parauretrale, col uterin, rect și, dacă este indicat, din orofaringe. În primul rând, vaginul este curățat de secreții, uretra este masată, iar materialul este îndepărtat prin răzuire cu o buclă bacteriologică sau cu o lingură Volkmann. Colul uterin este mai întâi șters cu un tampon de bumbac steril pentru a îndepărta dopul de mucus. Evacuarea din canalul cervical se preia cu o ansă bacteriologică sau o pensetă. Materialul din rectul distal se prelevează folosind o lingură Volkmann în mod orb, adică fără nicio pregătire a pacientului, sau folosind un recoscop sau un speculum rectal.În acest caz, materialul studiat este preluat direct de la locul vizibil al leziunii. .Cu gonoree orofaringiană, mucus Se prelevează din orofaringe cu tampoane sterile de vată pe suporturi speciale din sârmă de oțel.Pentru a diagnostica lenoreea se îndepărtează secreția conjunctivală cu o ansă bacteriologică. Rareori, gonoreea este complicată de gonosepsie, endocardită sau artrită. Apoi, materialul pentru juslidzhenya este sânge sau lichid sinovial. Ținând cont de sensibilitatea ridicată a gonococilor la fluctuațiile de temperatură, materialele supuse studiului sunt livrate laboratorului în termosuri speciale sau pungi cu pernă de încălzire.

Examen bacterioscopic

Examenul bacterioscopic este metoda cea mai frecventă, deși mai puțin sensibilă, de diagnostic de laborator al gonoreei și blenoreei în comparație cu izolarea culturilor reale. Acest lucru este valabil mai ales pentru evoluția cronică a bolii, când materialul de testat conține o cantitate mică de gonococi. Cu toate acestea, cu colectarea corectă a materialului, examinările repetate ale pacienților, utilizarea metodelor de provocare și evaluarea calificată a frotiurilor, examenul bacterioscopic face destul de des posibilă diagnosticarea rapidă și corectă a bolii. Două preparate subțiri și uniforme pentru frotiuri sunt făcute din materialul studiat. Unul este colorat cu albastru de metilen, al doilea este colorat folosind metoda Gram. În absența albastrului de metilen, un frotiu poate fi colorat cu o soluție apoasă 1% de violet cristal sau soluție 0,5% de verde strălucitor timp de 1 minut. O concluzie despre prezența gonococilor se face pe baza proprietăților acestora: culoarea gram-negativă, structura diplococică, forma boabelor de cafea, localizarea în interiorul leucocitelor.Sub influența antibioticelor și a altor medicamente pentru chimioterapie, precum și în gonoreea cronică, morfologia iar culoarea gonococilor se poate schimba. Celulele individuale capătă diferite forme și dimensiuni (așa-numitele forme Asch). În plus, materialul de testat poate conține coci gram-negativi similari gonococilor din genul Veillonella. Acest lucru limitează într-o oarecare măsură valoarea diagnostică a metodei de microscopie primară. Cele mai bune și mai fiabile rezultate sunt obținute prin metoda imunofluorescenței. Frotiurile subțiri din secrețiile pacientului sunt fixate în flacăra arzătorului. Ser anti-gonococic marcat cu izotiocianat de fluoresceină li se aplică timp de 1 oră la 35 ° C într-o cameră umedă. După aceasta, frotiurile se spală de două ori cu o soluție tampon, se aplică tampon cu glicerol și se acoperă cu lame de acoperire. Când gonococii interacționează cu anticorpii marcați, o strălucire caracteristică în jurul celulelor bacteriene este vizibilă la un microscop fluorescent.

Cercetări bacteriologice

Indicațiile pentru izolarea culturilor pure de gonococi sunt rezultatele bacterioscopiei negative repetate, prezența microorganismelor suspecte pentru gonococi, dar neidentificate morfologic, precum și pentru stabilirea sigură a vindecării bolii. Este foarte important să plasați imediat recoltele în termostat. Dacă este imposibil să se efectueze culturi la locul de colectare a materialului, puteți agăța un tampon de bumbac într-o eprubetă cu mediu de transport Stewart, care asigură păstrarea viabilității gonococilor în timpul livrării la laborator. în conformitate cu schema standard într-unul dintre mediile nutritive speciale în eprubete sau vase Petri (CDS, Bailey , agar cu sânge sau ser, mediu nutritiv uscat al întreprinderii Harkov "Biolek" pentru producția de preparate bacteriene și medicinale). Pentru cultivarea diagnostică a gonococilor în multe țări, se folosește și agar „ciocolată”. Cele mai bune medii sunt cele pe bază de agar din carne de iepure sau inimioare proaspete de bovine. Adăugarea a 20 de unități/ml de polimixină și 2 μg/ml de lincomicină la acestea crește semnificativ frecvența de inoculare a gonococilor, deoarece aceste medicamente inhibă creșterea altor bacterii. Înainte de însămânțare, toate mediile sunt încălzite într-un termostat timp de 15-20 de minute. Vasele și eprubetele cu culturi sunt plasate în desicatoare, unde se creează o atmosferă de 20% CO2. Coloniile cresc de obicei în 18-24 de ore, dar este posibilă și creșterea târzie. Apoi, recoltele se țin într-un termostat (în esicator!) până la 8 zile, verificându-se zilnic aspectul creșterii.Coloniile de gonococi cultivate au o formă rotundă, ușor convexă, margini netede, o suprafață lucioasă și o mucoasă. consistenta. Sunt transparente, ca picăturile de rouă, aproape incolore, deși pot apărea și variante albicioase. Coloniile rezultate sunt examinate macroscopic și microscopic. În frotiuri, gonococii sunt localizați în perechi, tetrade și ciorchini. Coloniile tipice sunt subcultivate pe agar-agar seric pentru a izola o cultură pură. Identificarea finală se realizează ținând cont de proprietățile morfologice, culturale, enzimatice și antigenice. Biochimic, gonococii sunt puțin activi. Pe medii de zer cu 1,5% din diverși carbohidrați, acestea descompun numai glucoza, dar nu și maltoza și zaharoza.Activitatea oxidazică a culturilor izolate se determină prin aplicarea unei soluții 1% de dimetilparafenilendiamină pe colonii (după microscopie). Coloniile oxidază pozitive devin mai întâi roșii și mai târziu devin negre.Diferențiarea gonococilor de alte specii din genul Neisseria are o importanță deosebită în diagnosticul gonoreei orofaringiene. După cum se știe, pe membrana mucoasă a amigdalelor, a gurii și a nazofaringelui există întotdeauna un număr mare de Neisseria gram-negative - reprezentanți ai microflorei umane normale. Metodele de încredere pentru identificarea gonococilor sunt reacțiile de imunofluorescență, latex și coaglutinare, precum și determinarea proprietăților enzimatice. Este imperativ să se efectueze o determinare calitativă a sensibilității sau rezistenței microorganismelor la antibiotice folosind metoda difuziei agar folosind discuri.Pentru a crește frecvența depistarii gonococilor în frotiuri în timpul microscopiei primare și a izolarii mai fiabile a culturilor pure, în special în se folosesc cazuri de evoluție lentă, cronică a bolii, metode de provocare a gonoreei, adică o exacerbare artificială a procesului patologic, în urma căreia în secreții apar un număr mai mare de gonococi. Principalele dintre aceste metode sunt: ​​a) chimice - instilarea unei soluții 0,5% de azotat de argint în uretra la bărbați, lubrifierea canalului cervical cu o soluție de 2-5% de azotat de argint; b) mecanică - introducerea unei soluții directe. bougie în uretra timp de 10 minute, sau uretroscopie anterioară; c) biologic - injectare intramusculară de gonovaccină în cantitate de 500 de milioane de corpi microbieni sau pirogenal 200 MTD; d) nutrițional - consumul de alimente sărate, condimentate; e) termic - încălzirea organele genitale cu curent inductotermic;f) fiziologic - luarea frotiurilor în timpul menstruației.Este chiar mai bine să combinați mai multe metode de provocare, de exemplu, chimică, nutrițională și biologică.Recent, reacția în lanț a polimerazei a fost folosită pentru a identifica mai fiabil agentul cauzal de gonoree. Vă permite să identificați agentul patogen în cazurile de gonoree cronică, când examenul bacterioscopic și bacteriologic nu dă rezultate pozitive.

Diagnosticul serologic

Diagnosticul serologic al gonoreei se realizează relativ rar, în principal în cursul cronic, când studiile bacterioscopice și bacteriologice nu dau rezultate pozitive. În condiții moderne, se efectuează imunotestul enzimatic, RNGA și reacțiile Bordet-Gengou (BRS). Antigenii pentru aceste reacții sunt: ​​vaccinul gonococic polivalent ucis termic, vaccinul inactivat cu ultrasunete, fracțiile proteice și polizaharidice ale gonococilor, precum și antigenul piridinic. ELISA și RNGA sunt reacții serologice extrem de specifice și de încredere. În comparație cu trecutul, RSK și-a pierdut oarecum rolul. Nu are valoare practică în diagnosticul gonoreei acute, deoarece este tratată înainte de formarea unei cantități semnificative de anticorpi. În general, este nepotrivit pentru stabilirea fiabilității unei cure. Reacția Bordet-Gengou este importantă în serodiagnosticul gonoreei cronice, mai ales în formele sale complicate (gonosepsie, metrită, artrită, prostatita etc.) Valoarea diagnostică a testelor alergice este oarecum devalorizată de faptul că sunt pozitive pentru mulți. ani după gonoree. Pentru a le configura, se injectează intradermic 0,1 ml de vaccin gonococic proaspăt (100 de milioane de celule microbiene în 1 ml). După 24 de ore se observă hiperemie, uneori cu umflături în centru.

Tratament și prevenire

Pentru chimioterapia gonoreei se folosesc antibiotice: beta-lactamine (peniciline, cefalosporine) si alte antibiotice. Prevenirea gonoreei prin vaccinare nu se realizează din cauza lipsei de vaccinuri eficiente. Pentru a preveni blenoreea, tuturor nou-născuților li se administrează o soluție dintr-unul dintre antibioticele enumerate, instilată pe conjunctiva ochiului.

Neisseria gonorrhoeae aparține familiei Neisseriaceae, genul Neisseria. Gonococii au fost descoperiți de Neisser în 1879 și întreaga familie a fost numită după el.

Morfologie. Gonococii sunt diplococi alcătuiți din doi coci în formă de boabe care se află concavi unul față de celălalt (amintesc de boabele de cafea). Dimensiunea gonococilor este de 1,2-1,3 × 0,7-0,8 microni. Sunt polimorfe; alături de cele mari, există bacterii în formă de L foarte mici, cu formă neregulată. Gonococii sunt imobili și nu sporesc. În materialul patologic (puroi) se găsește o substanță în formă de capsulă. Gram negativ. Sub influența medicamentelor și a altor substanțe, acestea se schimbă rapid: apar forme gram-pozitive. În material patologic ele sunt localizate intracelular (într-un leucocit), dar pot fi în afara celulei. Ele pot fi găsite sub formă de coci individuali (vezi Fig. 4).

Cultivare. Gonococii sunt aerobi. Foarte solicitant cu mediile nutritive. Ele cresc pe medii care conțin proteine ​​native (umane) - sânge, ser, la o temperatură de 37 ° C și un pH de 7,2-7,4. Suporturile trebuie să fie proaspăt preparate și umede. Semănatul trebuie făcut imediat după preluarea materialului. Pe un mediu seric, gonococii formează colonii mici de 1-2 mm, transparente, strălucitoare cu margini netede, asemănătoare cu picăturile de rouă. Nu există hemoliză în mediul sanguin. În bulionul de zer dau o ușoară turbiditate și o peliculă care se așează pe fundul eprubetei. Dacă creșterea este slabă după 24 de ore, recoltele sunt lăsate în termostat pentru a doua zi.

Proprietăți enzimatice. Proprietățile zaharolitice sunt slab exprimate. Gonococii descompun un singur zahăr - glucoza, producând acid. Nu au proprietăți proteolitice.

Formarea toxinelor. Peretele celular al gonococilor conține o substanță toxică - lipopolizaharidă (puțin studiată).

Structura antigenică. Structura antigenică este eterogenă și se modifică ușor sub influența factorilor de mediu. Nu există o împărțire general acceptată a gonococilor în serovariuri și serotipuri.

Rezistenta la factorii de mediu. În mediul extern, gonococii nu sunt foarte stabili. La o temperatură de 56-60° C ei mor. La o temperatură de 40° C, viabilitatea lor scade brusc. Temperaturile scăzute și uscarea le distrug rapid. Dar rămân în puroi până la 24 de ore.Soluțiile dezinfectante - soluție de fenol 1%, clorură de mercurică 1:1000 ucid gonococii în câteva minute. Gonococii sunt deosebit de sensibili la sărurile de argint - o soluție de azotat de argint 1% îi ucide imediat. Razele UV îi distrug în câteva minute.

Susceptibilitatea animalelor. Animalele nu sunt sensibile la gonococ. Cu toate acestea, injectarea intraperitoneală a toxinei gonococice la șoarecii albi provoacă moartea acestora.

Surse de infecție. O persoană cu gonoree.

Căi de transmisie. Contactați gospodăria (sexuală), mai rar prin obiecte contaminate (prosop, bureți etc.).

Boli la oameni. Gonoree și blenoree.

Patogeneza. Gazda naturală a gonococilor este o persoană bolnavă. Gonococii pătrund prin membranele mucoase ale uretrei (la femei, uretra și colul uterin). Factorul de patogenitate al gonococilor este prezența pili, care, conectându-se cu microvilozitățile epiteliului cilindric, facilitează pătrunderea gonococului în celula epitelială, provocând un proces inflamator acut în membrana mucoasă.

Din punct de vedere clinic, gonoreea se manifesta prin durere in timpul urinarii, evacuare de puroi din uretra si vagin. Boala este acută, dar uneori devine cronică. Gonococii pot provoca conjunctivită gonoreică - blenoree (inflamația purulentă a mucoasei oculare la nou-născuți). Gonococii patrund rar din uretra in alte organe, dar uneori pot provoca artrita, endocardita etc.

Imunitate. Nu există rezistență naturală la gonococi. De asemenea, boala transferată nu creează imunitate. Fagocitoza observată este incompletă.

Prevenirea. Educație sanitară. Creșterea nivelului cultural și igienic. Nu există o prevenire specifică. Pentru a preveni blenoreea, copiii trebuie injectati in sacul conjunctival imediat dupa nastere cu 1-2 picaturi de solutie de albucid 30%.

Tratament. Antibiotice (penicilină, bicilină, streptomicina etc.). Se mai folosesc medicamente sulfonamide. Pentru forma cronică se utilizează vaccinul gonococic.

Întrebări de control

1. Descrieți proprietățile morfologice ale gonococilor.

2. Care sunt activitatea enzimatică și producția de toxine a gonococilor?

3. Care este rezistența gonococilor. La ce medicament sunt gonococii deosebit de sensibili?

4. Ce boli sunt cauzate de gonococi și patogeneza lor.

Examen microbiologic

Scopul studiului: identificarea gonococilor și a anticorpilor antigonococici.

Material pentru cercetare

1. Secreția din mucoasa uretrală la bărbați.

2. Secreția din membrana mucoasă a uretrei și a colului uterin la femei.

3. Secreții purulente din ochi.

4. Sânge pentru ser.

Notă. Pentru examenul bacterioscopic și bacteriologic se prelevează material: 1) înainte de începerea tratamentului cu antibiotice: 2) nu mai devreme de 10 zile de la terminarea tratamentului cu antibiotice; 3) nu mai devreme de 2 ore de la ultima urinare; 4) nu mai devreme de 2 ore după dus.

Metode de cercetare de bază

1. Microscopic (folosit în principal pentru formele acute).

2. Microbiologic.

3. Serologic.

Progresul studiului

A doua zi de studiu

Scoateți recoltele din termostat și inspectați-le. Studierea coloniilor. Ei fac frotiuri. Dacă există diplococi gram negativi suspecti, coloniile sunt subcultivate pe mediu înclinat în eprubete (mediul trebuie să fie proaspăt preparat și să conțină o cantitate suficientă de condensat) și testate pentru oxidază. Pentru a face acest lucru, o picătură de soluție de dimetilparafenilendiamină 1% este aplicată pe colonie cu o pipetă; coloniile își schimbă culoarea de la maro închis la negru.

A treia zi de studiu

Culturile se scot din termostat, se fac frotiuri din agar înclinat, se colorează cu Gram și se examinează microscopic. Se inoculează pe mediu Hiss (lactoză, glucoză, manitol și maltoză). Acești carbohidrați ar trebui să conțină 30% din ser din sânge. Eprubetele inoculate sunt plasate într-un termostat.

A patra zi de cercetare

Scoateți tuburile din termostat; dacă nu există creștere, lăsați-le în termostat încă 1-2 zile. Dacă există creștere, se iau în considerare rezultatele (Tabelul 28).

Diagnosticul serologic

A treia săptămână de boală. În cursul cronic al bolii și în cazurile îndoielnice, RSC se efectuează folosind serul pacientului (vezi capitolul 12). O cultură ucisă de gonococi, care este preparată în condiții industriale, este utilizată ca antigen. Puteți utiliza reacția indirectă de hemaglutinare (vezi capitolul 12).

Întrebări de control

1. Ce material este folosit pentru identificarea gonococilor și cum se obține?

2. Cât timp după urinare (sau dusuri la femei) poate fi luat material pentru cercetare?

3. Care metoda de cercetare este principala pentru forma acuta si care pentru forma cronica de gonoree?

4. Când și ce test serologic se efectuează dacă se suspectează gonoree?

5. De ce microorganisme au nevoie pentru a diferenția gonococii?

Ia medicamentul de la profesorul tău. Studiați-l și schițați gonococii localizați în interiorul și în exteriorul leucocitelor folosind colorația Gram.

Medii de cultură

Gălbenuș mediu. La 100 ml de MPA din carne de iepure adăugați 15 ml gălbenuș (ou proaspăt de pui), 6 ml indicator roșu fenol, 1,5 ml zahăr dizolvat în 1 ml apă distilată sterilă.

Mediu nutritiv ascita-agar. La filtratul bulionului preparat din carne de iepure se adaugă 2% agar, 1% peptonă și 0,5% clorură de sodiu. Se încălzește până când agarul se dizolvă, se stabilește pH-ul la 7,4-7,5 și se alcalinizează cu hidroxid de sodiu 20%. Mediul este adus la fierbere, filtrat, turnat în flacoane sterile și sterilizat într-o autoclavă timp de 15 minute la 115°C.

Rețete pentru medii de cultură fără ascită (MPA pH 7,4-7,5).

1) apă de carne din carne de iepure sau inimioare de bou - 100 ml

hidrolizat de cazeină - 2 ml

autolizat de drojdie - 2 ml

ser de sânge de bovine - 20 ml

2) apă de carne din carne de iepure sau inimioare de bou - 100 ml

soluție 5% de hemohidrolizat - 2 ml

autolizat de drojdie - 2 ml

ser de bovine - 20 ml

3) apă de carne din carne de iepure sau inimioare de bou - 100 ml

gălbenuș de ou de pui - 10 ml

ser de sânge de bovine - 20 ml

Creșterea gonococilor pe aceste medii este abundentă. Coloniile de gonococ pot fi detectate folosind un test de oxidază, în care acestea devin roșii, devenind negre.

Agentul cauzal al gonoreei este Neisseria gonorrhoeae , provocând leziuni inflamatorii acute și cronice ale organelor genito-urinale, mucoasei orofaringelui și conjunctivei oculare.

Materialul pentru cercetare este scurgerea purulentă a organelor genito-urinale, rectului sau conjunctivei ochilor (cu blenoree), exudatul articular și peritoneal. Metodele strict reglementate pentru diagnosticul de laborator al gonoreei sunt examenul microscopic și bacteriologic (cultural). Metodele de diagnostic microbiologic al gonoreei sunt reflectate în schema 18.

Schema 18. Metode de diagnostic microbiologic al gonoreei

Metoda microscopică constă în examinarea frotiurilor din materialul de testat, colorate cu Gram și albastru de metilen. La colorarea preparatelor pentru gonoree, se folosește o modificare a metodei Gram (colorantul violet de gențiană este înlocuit cu violet cristal, iar în locul fuchsinului se folosește roșu neutru; preparatul este spălat după fiecare etapă de colorare). În frotiurile de gonoree acută se găsesc un număr mare de leucocite polimorfonucleare, în interiorul și exteriorul cărora se află diplococi gram negativi în formă de fasole; microflora însoțitoare este fie minimă, fie absentă cu totul (Fig. 25). În gonoreea cronică, în unele cazuri, un gonococ tipic nu este detectat în frotiuri sau arată atipic sub formă de formațiuni mici asemănătoare prafului sau formațiuni sferice mari; adesea 2 celule de gonococ sunt situate într-un unghi una față de alta și o microfloră abundentă însoțitoare. , se găsesc leucocite, celule epiteliale și alte celule. IFM poate fi utilizat ca metodă de diagnosticare expresă.

Orez. 25. Agentul cauzal al gonoreei (Neisseria gonorrhoeae) în frotiurile din uretra unui pacient cu gonoree acută. Diplococi gramaticali localizați intern și extracelular, o abundență de leucocite.

Metoda bacteriologică. Gonococul este foarte sensibil la diverși factori nefavorabili, astfel încât testarea culturală trebuie efectuată imediat după colectarea materialului. Semănatul se efectuează pe medii nutritive speciale. Baza acestor medii este MPA din carne de iepure cu adaos de autolizat de drojdie, hidrolizat de cazeină sau hemohidrolizat și zer de bovină. Lichidul ascitic și gălbenușul de ou nu sunt utilizate în prezent ca aditivi la mediul de cultură pentru gonococ. Al doilea tip de mediu de cultură este selectiv și include, pe lângă componentele de mai sus, antibiotice (polimixină, lincomicină, iar pentru diagnosticul gonoreei faringiene - acid orotic). Culturile se cultivă la 37 0 C timp de 24-72 ore într-o atmosferă cu un conţinut ridicat de CO2. Coloniile de gonococi sunt rotunde, transparente, sub formă de picături de rouă. Coloniile tipice pentru gonococi sunt subcultivate în eprubete cu mediu de cultură de gonococ pentru a obține culturi pure, care sunt identificate prin proprietăți morfologice și zaharolitice pe medii „pestrite” (agar semi-lichid cu zer și carbohidrați) sau folosind sisteme de microtestare. În frotiurile din culturi pure, gonococii nu sunt localizați în perechi, ci separat. Biochimic, gonococii sunt inactivi și fermentează doar glucoza cu formarea de acid și produc oxidază. Pentru detectarea oxidazei se folosește un test cu o soluție apoasă 1% de dimetilparafenilendiamină sau dietilparafenilendiamină, care colorează coloniile de gonococ mai întâi în roz, apoi în roșu, iar după câteva minute - în negru. Se studiază, de asemenea, sensibilitatea gonococilor la antibiotice și activitatea sa beta-lactamazei.

Metoda serologică(determinarea anticorpilor împotriva gonococului în sângele pacienților care utilizează RSK și ELISA) nu este strict reglementată, nu are valoare diagnostică, nu este o metodă de monitorizare a eficacității tratamentului și nu este utilizată în prezent în practică reală.

Diagnosticul genetic. Acesta are ca scop detectarea fragmentelor specifice de ADN gonococic folosind PCR și poate fi folosit ca o metodă suplimentară foarte informativă pentru diagnosticarea gonoreei.

Munca independentă a elevilor

1. Metoda microscopică- examinarea scurgerii purulente din uretra unui pacient cu suspiciune de gonoree (microdiapozitiv demonstrativ, colorație Gram).

2. Metoda bacteriologică. Studiul cultural . agentul cauzator al gonoreei pe un mediu nutritiv pentru izolarea gonococilor, pe care gonococii formează colonii rotunde, transparente sub formă de picături de rouă. Din punct de vedere enzimatic, gonococul este inactiv și doar fermentează glucoza pentru a forma acid. Luați în considerare rezultatele semănării gonococului pe rândul „pestriț” (demonstrație).

Diagnosticul de gonoree

Fără testare pentru gonoree, niciun medic modern nu va pune un diagnostic. Nu contează ce simptome are pacientul - gonoreea, ca multe alte infecții, este determinată în primul rând de metode de laborator. Și testarea în timp util, împreună cu o alegere competentă a metodei care se potrivește cel mai bine în fiecare caz specific, joacă un rol decisiv în prevenirea complicațiilor grave.

Mai multe metode sunt utilizate pentru diagnosticul de laborator al gonoreei:

• microscopie cu frotiu pentru gonococul Neisser (metoda bacterioscopică);
• cultura bacteriana pentru gonoree (gonococi);
• teste serologice (serodiagnostic);
• imunotestul enzimatic (ELISA);
• PCR (reacție în lanț a polimerazei);
• teste rapide pentru gonoree.

Cele mai precise și comune dintre ele sunt cultura în rezervor și PCR. Să ne uităm la fiecare în detaliu pentru a înțelege de ce.

Cum se face un test microscopic pentru gonoree?

Microscopia unui frotiu din uretra sau vagin (colul uterin) este cea mai simplă metodă de diagnostic preliminar al gonoreei. Principiul studiului este simplu. Frotiul este colorat și examinat la microscop. În același timp, se acordă atenție prezenței cocilor dubli cu o formă de boabe de cafea caracteristică gonococilor.

Cu orice inflamație, frotiul conține un număr mare de leucocite - celule sanguine responsabile de protejarea organismului. În cazul gonoreei, numărul lor crește, dar acest fapt nu poate confirma diagnosticul. Prezența globulelor albe indică doar inflamație, dar nu indică ce infecție a provocat-o.

Leucocitele și gonococii din gonoree pot fi determinate printr-un test general de urină (găsit în sediment).

Avantajul metodei este simplitatea și viteza. Și principala problemă este precizia scăzută. Puteți finaliza analiza în 10-15 minute, dar probabilitatea ca rezultatul să fie corect este de 50%. Un aspect similar este caracteristic aproape tuturor Neisseria, inclusiv celor nepatogene. Prin urmare, microscopia este utilizată numai pentru screening, pentru a înțelege dacă există ceva străin în frotiu. Dacă sunt detectate bacterii asemănătoare gonococilor, se efectuează alte teste, mai precise: cultură, PCR sau test de sânge folosind ELISA.

Cum se efectuează cultura bacteriană pentru gonococi?

Spre deosebire de examinarea microscopică a unui frotiu, cultura în rezervor este o metodă informativă. Gonococii cresc numai pe medii speciale; coloniile lor au un aspect și culoare caracteristice. În plus, diferite tipuri de bacterii au abilități diferite de a procesa anumite substanțe (în special, zaharuri). Luate împreună, aceste caracteristici ajută la identificarea atât a speciilor, cât și a subspeciilor microbilor. Precizia metodei este de 90%.

Dacă se găsesc gonococi, atunci în laborator se va determina sensibilitatea la antibiotice pe aceleași colonii. Apoi medicul va ști exact care medicament este mai puternic în fiecare caz specific. Prin urmare, are sens să se efectueze analiza, chiar dacă o altă metodă a determinat în mod clar prezența infecției.

Dezavantajul metodei este durata acesteia. Timpul necesar pregătirii unei astfel de analize pentru gonoree poate varia de la câteva zile la câteva săptămâni.

În ce cazuri se efectuează serodiagnosticul gonoreei?

Pentru a lupta împotriva bolii, sistemul imunitar produce anticorpi - proteine ​​speciale de protecție. Sunt specifice fiecărei infecții cu care trebuie să lupte. Medicii au mers de la opus - dacă există anticorpi (efect), atunci trebuie să existe bacterii (cauză). Principiul metodei serologice este de a observa reacția sângelui pacientului, care conține anticorpi la gonococi, cu antigene la acești anticorpi conținute în trusa de diagnostic. Anticorpii și antigenii sunt atrași unul de celălalt ca polii unui magnet și se lipesc împreună. Din această cauză, în soluție se formează un precipitat.

Metodele serologice sunt rareori folosite pentru a diagnostica gonoreea. De interes în principal pentru oamenii de știință. Anterior, au fost utilizate pe scară largă pentru a detecta gonoreea, dar au fost abandonate din cauza acurateței scăzute și a dependenței rezultatului de factori subiectivi.

Perioada de așteptare pentru rezultatele testelor pentru gonoree folosind metode serologice este de câteva ore. Conținutul de informații – de la 60 la 75%, în funcție de setul de diagnosticare de antigene. Testele serologice nu depistează boala în primele săptămâni după infecție - organismul are nevoie de timp pentru a acumula anticorpi în sânge.

Cum se detectează gonoreea folosind imunotestul enzimatic

Testul imunosorbent legat de enzime sau ELISA este o metodă care a înlocuit metodele de diagnostic serologic. În același mod, vă permite să determinați în sânge anumite clase de anticorpi specifici pentru gonoree, dar mai precis. Capabil să diagnosticheze atât gonoreea acută (la câteva zile după infecție) cât și gonoreea cronică. Folosit pe scară largă pentru diagnostic și screening.

Avantajele metodei sunt precizia suficientă (75-85%), costul rezonabil. Dezavantaj: rezultatele pot fi distorsionate din motive subiective (reactivi deteriorați, factor uman) și obiective (prezența imunodeficienței, boli imunitare). Cât timp durează pentru a face un test de sânge pentru gonoree folosind ELISA depinde de fiecare laborator specific și de reactivi (de la 1 la 5-6 zile).

Testați pentru gonoree folosind metoda PCR

Metoda reacției în lanț a polimerazei este realizarea de vârf în domeniul diagnosticului bolii. Este foarte precis și specific. Creatorul metodei, Kary Mullis, a primit Premiul Nobel pentru Medicină în 1993. Principiul metodei se bazează pe detectarea materialului genetic al agentului patogen (ADN de neisseria gonorrhoeae) în probele de material biologic studiate. Pentru a efectua studiul, puteți utiliza orice material biologic - sânge, ser, secreții din tractul genital, uretră, frotiuri și răzuire. Materialul poate fi contaminat cu puroi, exudat, urină și secreții, dar acest lucru nu afectează eficacitatea analizei.

Materialul este căutat pentru secvența de gene caracteristică agentului patogen. Dacă este găsit, acesta este un semn clar de infecție. Testul PCR pentru gonoree are cel mai mare conținut de informații și specificitate. Precizia sa este de aproximativ 95%. Durata analizei este de la una la câteva zile, în funcție de laborator și reactivi.

Teste rapide pentru gonoree la domiciliu

Cel mai popular producător de teste expres este STD Test Express

Testele expres pentru gonoree au fost dezvoltate special pentru persoanele care sunt active sexual. Se bazează pe un principiu similar cu ELISA (reacția antigenului gonococic cu anticorpii din material prelevat de la o persoană cu suspiciune de boală). Probele de sânge, secreții din tractul genital, uretră și rect sunt potrivite pentru testare.

Principalul avantaj al testelor expres este viteza. Procedura durează 10-20 de minute. Dezavantajul metodei este frecvente rezultate fals-pozitive și fals-negative, dependența de testarea corectă, denaturarea rezultatelor din cauza încălcării regulilor de stocare. Prin urmare, este mai bine să te uiți în cel mai apropiat laborator.

Să rezumam

În cele mai multe cazuri, gonococii se transmit împreună cu alte infecții cu transmitere sexuală. Dacă bănuiți o boală, trebuie să fiți testat pentru toate bolile posibile. Prin urmare, este optim să începeți cu o analiză PCR - este pregătită rapid și un frotiu poate fi examinat simultan pentru diferite bacterii și viruși.

Este logic să faceți o cultură în rezervor dacă gonoreea este deja cunoscută pentru a confirma diagnosticul și a determina sensibilitatea la antibiotice.

Poate gonoreea să nu apară în teste? Rezultate fals negative apar în cele mai precise metode. Antibioticele și alte medicamente, caracteristicile corpului pacientului, infecția cronică și alți factori pot schimba aspectul și forma gonococilor, transformându-i în așa-numitele forme L. În cazuri dificile, medicul prescrie o provocare de gonoree - o slăbire deliberată a sistemului imunitar pentru a stimula infecția să se manifeste. Metoda casnică de provocare este simplă și plăcută - beți bere și faceți o baie fierbinte și este recomandată tuturor celor care urmează să fie supuși unui test de frotiu pentru cultură.

Cultură pentru gonoree

Gonoreea este o boală cu transmitere sexuală care este una dintre cele mai frecvente în rândul populației.

Boala se caracterizează prin inflamarea sistemului urinar. O cauză comună a infecției este promiscuitatea fără utilizarea echipamentului de protecție.

Atât bărbații, cât și femeile se pot infecta.

Important! Gonoreea, fără tratament în timp util, contribuie la dezvoltarea infertilității.

Astăzi vă vom spune când și cum să luați culturi pentru infecția gonococică și vă vom ajuta să înțelegeți rezultatele testelor.

Cultura pentru gonoree: indicații

Din momentul infectării până la primele semne vizibile, durează de obicei de la 3 până la 15 zile. Poate fi asimptomatică.

Următoarele semne simptomatice sunt caracteristice:

• scurgeri purulente;
• Înroșirea și umflarea uretrei;
• Arsuri și mâncărimi în zona genitală;
• Durere în abdomenul inferior;
• Posibilă creștere a temperaturii corpului;
• Urinarea dureroasă.

Dacă observați aceste simptome, ar trebui să solicitați ajutor de la un medic cât mai curând posibil. Indicația pentru examinare este infecția gonococică la un partener sexual.

Atenţie! Tranziția bolii la cronică poate duce la o serie de complicații și infertilitate.

Preparare: cultură pentru gonoree

Orice material biologic poate fi folosit pentru cercetarea bacteriologică.

Înainte de studiu, se ia un gard:

• Piele;
• Spermatozoizi;
• Mucoasa bucală, tractul gastrointestinal;
• Razuirea tractului genito-urinar.

Cultura bacteriologică este prescrisă de un medic urolog sau ginecolog.

Pentru a obține un rezultat fiabil, ar trebui să cunoașteți regulile de pregătire pentru inocularea bacteriologică.

Dacă medicul dumneavoastră v-a prescris un test de frotiu, trebuie să:

• Nu întreține relații sexuale cu două zile înainte de examinare;
• Nu face duș;
• Efectuați igiena genitală fără produse de igienă intimă;
• Cu 2-3 ore înainte de a lua materialul, abține-te să mergi la toaletă;
• Nu mai luați medicamente cu o săptămână înainte de test.

La femei, un frotiu este luat în primele zile după sfârșitul menstruației.

Culturile sunt plasate într-un termostat în condiții optime de umiditate și temperatură. Pentru gonococ, este necesar să se mențină o temperatură în termen de 37 de grade. Ulterior sunt studiate coloniile discutabile.

Caracteristicile speciilor ale creșterii coloniilor pe agar:

• Incolor sau cu o nuanță galbenă;
• Nu mare;
• Suprafața este netedă și strălucitoare;
• Puțin convex.

Această metodă de cercetare este destul de informativă. Dezavantajul este că este nevoie de mult timp pentru a face cercetări. Cu ajutorul testelor bacteriologice, se poate determina sensibilitatea unui microorganism la medicamentele antibacteriene. Acest lucru este necesar pentru eficacitatea tratamentului suplimentar.

Cultura gâtului pentru gonoree

Dacă bănuiți un proces gonoreic în gât, trebuie să contactați un specialist ORL sau venereolog. Cu siguranță ar trebui să luați un tampon din gât, amigdale sau faringe.

În același timp, se face un test de la organele genito-urinale. Înainte de începerea tratamentului trebuie efectuat un test pentru infecția gonococică. După tratament, trebuie să treceți la o examinare ulterioară.

Cultură pentru gonoree din ochi

Pleoapa afectată se umflă și devine roșu-albăstruie. În procesul de descărcare mare de puroi, pleoapa se poate lipi.

Apar durere, mâncărime și arsură. Secreția din ochi este luată pentru analiză. Se efectuează un studiu PCR și o cultură bacteriologică cu teste suplimentare pentru sensibilitatea la antibiotice.

Cultura secreției prostatei pentru gonoree

Folosind masajul prostatei, se colectează secrețiile de prostată.

Acesta este un lichid limpede care este inoculat pe medii nutritive speciale. După una sau două zile, pot fi identificate colonii de microorganisme. Se efectuează o antibiogramă pentru a determina un medicament eficient pentru un tratament suplimentar.

Cultură pentru gonoree din anus

Pentru colectarea materialului sunt folosite mai multe metode. În primul caz, un tampon de bumbac este trecut de-a lungul pliurilor perianale. După aceea, acestea sunt puse într-un recipient steril. A doua metodă este să luați o răzuire.

Perioada de timp pentru pregătirea culturilor pentru gonoree

Testele de laborator pot dura de la cinci la nouă zile.

Aceasta depinde de tipul și metodologia analizei efectuate. Rezultatul unei analize microscopice poate fi obținut în aproximativ o jumătate de oră.

PCR se efectuează în cel mult o zi și poate fi efectuată și analiza expresă. Paleta PCR permite testarea paralelă pentru prezența infecțiilor concomitente.

Cultură pentru gonoree pentru a determina eficacitatea tratamentului

Absența semnelor simptomatice de gonoree și a testelor de laborator negative este un rezultat natural al tratamentului. Controlul se efectuează în a 10-a zi după întreruperea medicamentelor antibacteriene.

Studiul include examinarea frotiului de trei ori la microscop și inocularea materialului o dată pe un mediu nutritiv.

Bărbații trebuie să facă testul o dată, în timp ce femeile îl fac de trei ori. După două săptămâni de întreruperea tratamentului, în timpul și după menstruație.

Dacă nu există simptome și se obțin teste negative, persoana este sănătoasă. Dacă rezultatele sunt pozitive, dar nu sunt observate simptome, aceasta indică un proces ascuns.

Cursul de tratament trebuie repetat. Rezultatele negative și prezența semnelor de inflamație indică prezența unui alt tip de agent patogen în organism.

Cultură pentru gonoree: la ce medic ar trebui să mă adresez?

Culturile pentru gonoree pot fi prescrise de specialiști corespunzători - ginecolog, urolog, venereolog.

Examinarea se poate face la orice clinică publică sau privată. Dacă aveți nevoie de rezultate urgente ale testelor, vă recomandăm să contactați un laborator privat.

Tine minte! Dacă apar primele simptome, consultați imediat un medic specialist.

Cultură pentru gonoree: preț

Costul analizelor depinde de metoda de studiu a materialului.

Prețurile vor varia între 150-2000 de ruble. Semănatul bacteriologic în politica de prețuri va fi de aproximativ 800-1300 de ruble.

Dacă trebuie să efectuați un test de cultură pentru gonoree la Moscova, vă rugăm să contactați clinica noastră. Propriul nostru laborator ne permite să efectuăm cercetări rapid, eficient și ieftin. Când primiți rezultatele, puteți consulta un venereolog.

În scopuri preventive, trebuie utilizată contracepția de barieră. Este mai bine să preveniți dezvoltarea bolii decât să o tratați mai târziu.

Dacă bănuiți gonoree, contactați un venereolog competent.

Utilizare: microbiologie, diagnosticul gonoreei, mediu nutritiv pentru izolarea și cultivarea gonococului. Esența invenției: mediul nutritiv conține ca bază nutritivă hidrolizat pancreatic din făină de pește și acid clorhidric hidrolizat de cazeină, ca stimulent de creștere și sursă de vitamine - autolizat al drojdiei de pancreație sau de bere, un stimulator de creștere a microorganismelor hemofile. Mediul conține în plus glucoză, agar microbiologic, sulfat de polimixin-B, clorhidrat de lincomicină și apă distilată. Mediul asigură creșterea gonococului din tulpini de muzeu și din material de la pacienții cu gonoree, păstrând morfologia tipică a microorganismului, ceea ce contribuie la utilizarea pe scară largă în asistența medicală practică în diagnosticul și tratamentul bolilor cu transmitere sexuală. 3 mese

Invenția se referă la domeniul microbiologiei medicale și poate fi utilizată în diagnosticul gonoreei. Companiile străine de top („Oxoid”, „Gibco”, „BRL”, etc.) produc medii nutritive pentru cultivarea gonococului pe bază de digerări de carne și fermentolizate cu adaos de sânge nativ steril. Dintre preparatele autohtone, se cunosc următoarele: mediu nutritiv „Arginine-agar”, diagnostic, uscat, produs de NPO Nutrient Media, Makhachkala, care constă din următoarele componente, g: peptonă 8,0-12,0; arginină 0,07-0,3; cistina 0,007-0,03; acid glutamic 1,0-1,8; EKD 4,0-7,0; bromură de tiamină 0,002-0,007; azotat de fier 0,002-0,01; clorură de potasiu 0,07-0,2; clorură de sodiu 5,0-8,0; clorură de amoniu 0,9-2,0; sulfat de magneziu 0,4-0,9; glucoză 4,0-7,0; amidon 0,5-2,0; tampon Tris 1,0-2,5; agar 13-17,0; ser bovin 153,0-255,0; sulfat de polimixin-M 15000-25000 unități; clorhidrat de lincomicină 0,001-0,003; apă distilată până la 1 litru. Dezavantajul acestui mediu este: sensibilitatea scăzută, instabilitatea rezultatelor asupra intensității creșterii gonococului. Mediu uscat cu liofil pentru izolarea gonococului (produs de Institutul de Cercetare din VCA, Sankt Petersburg) constând dintr-o bază de mediu și un aditiv în următorul raport de componente, g; este prezentată în Tabelul 1. Dezavantajul acestui mediu este: instabilitatea rezultatelor asupra intensității creșterii și sensibilității gonococului. În practică, mediile fără ascită preparate în laborator sunt utilizate în principal din extracte de carne proaspătă de iepure și inimi proaspete de bovine cu adaos de peptonă și 20% ser din sânge de bovine sau sânge nativ steril. Lipsa cantității necesare de medii nutritive domestice pentru diagnosticarea gonoreei, precum și calitatea acestora, provoacă critici din partea serviciului de sănătate practic. Obiectivul invenției este de a crea un mediu nutritiv uscat care să asigure rezultate stabile în ceea ce privește intensitatea creșterii și sensibilitatea crescută, nu inferior mediilor comerciale pentru diagnosticarea gonococului, și de a utiliza produse nealimentare pentru producerea acestuia. Problema se rezolvă prin echilibrarea compoziției componentelor mediului care conține o bază proteică nutritivă, autolizat de drojdie de panificație sau de bere, agar, clorură de sodiu, inhibitori ai microflorei străine clorhidrat de lincomicină și sulfat de polimixin-B; ca bază nutritivă conține hidrolizat pancreatic de făină de hrană pentru pește și hidrolizat de cazeină cu acid clorhidric , în plus, conține în plus un stimulator de creștere a microorganismelor hemofile (hidrolizat enzimatic de albumină neagră), glucoză, pentru a crește stabilitatea rezultatelor la examinarea pacienților cu gonoree cronică, este posibil să se adaugă ser din sânge de bovine (5-10)% la mediu cu următorul conținut de componente, g/l: hidrolizat pancreatic din făină de pește 22,0-28,0 hidrolizat acid de cazeină 2,8-3,2 autolizat de drojdie de pancreație sau de bere 0,8-1,2 stimulator de creștere de microorganisme hemofile 2,0-10,0 glucoză 9,0 -11,0 clorură de sodiu 2,9-3,1 agar microbiologic 12,0-15,0 sulfat de polimixin-B 15000-25000 unități
clorhidrat de lincomicină 0,001-0,003
apă distilată până la 1 l
pH 7,3+0,2
Raportul cantitativ dintre componentele mediului nutritiv și pH-ul acestuia asigură un nivel crescut de intensitate a creșterii gonococului și sensibilitatea mediului. Mediul nutritiv se prepară astfel: porțiuni cântărite din ingredientele principale se adaugă într-un balon cu apă distilată. Mediul se amestecă bine și, închizând balonul cu un dop din tifon de bumbac, se sterilizează la (115-119) o C timp de 30 de minute. apoi răcit la o temperatură de (45-50) o C și steril, dizolvat în prealabil în soluție salină sterilă. soluție, adăugați cantități cântărite de sulfat de polimixin-B și clorhidrat de lincomicină. Mediul se amestecă și se toarnă în vase Petri sterile. Pentru controlul biologic al mediilor de cultură, s-a folosit o cultură de tulpini de muzeu de Neisseria gonorrhoeae și material de la pacienții cu gonoree. Toate culturile au fost cultivate la o temperatură de (37+0,5) o C într-o atmosferă de 10% CO 2 și umiditate ridicată timp de 24-48 ore: date din tabelul 1. Exemplul 1. Mediul propus a fost testat prin cultivarea tulpinilor de Neisseria gonorrhoeae și pe material clinic pe un mediu nutritiv cu următoarea compoziție, g:
hidrolizat pancreatic din făină de pește 22,0
autolizat de drojdie de panificație 0,8
acid clorhidric hidrolizat de cazeină 2.8
stimulator de creștere al microorganismelor hemofile 2.0
glucoză 9,0
clorură de sodiu 2.9
agar microbiologic 12.0
sulfat de polimixin-B 15000 unități
clorhidrat de lincomicină 0,001
apă distilată până la 1 l
pH 7,3+0,2
Rezultatele au fost înregistrate după 24-48 de ore de cultivare. Exemplul 2. Mediul propus a fost testat prin inocularea tulpinilor de Neisseria gonorrhoeae și utilizarea materialului clinic pe un mediu nutritiv cu conținutul optim de componente din următoarea compoziție, g:
hidrolizat pancreatic din făină de pește 25,0
autolizat de drojdie de panificație 1.0
acid clorhidric hidrolizat de cazeină 3.0
stimulator de creștere al microorganismelor hemofile 5.0
glucoză 10,0
clorură de sodiu 3,0
agar microbiologic 13.0
sulfat de polimixin-B 20000 unități
clorhidrat de lincomicină 0,002
apă distilată până la 1 l
pH 7,3+0,2
Rezultatele au fost înregistrate după 24-48 de ore de cultivare. Exemplul 3. Mediul propus a fost testat prin inocularea tulpinilor de Neisseria gonorrhoeae și utilizarea materialului clinic pe un mediu nutritiv cu conținutul maxim de componente din următoarea compoziție, g:
hidrolizat pancreatic din făină de pește 28,0
autolizat de drojdie de panificație 1.2
acid clorhidric hidrolizat de cazeină 3.2
stimulator de creștere al microorganismelor hemofile 10.0
glucoză 11,0
clorură de sodiu 3.1
agar microbiologic 15.0
sulfat de polimixină-B 25000 unități
clorhidrat de lincomicină 0,003
apă distilată până la 1 l
pH 7,3+0,2
Rezultatele au fost înregistrate după 24-48 de ore de cultivare. Exemplul 4. Mediul propus a fost testat prin inocularea tulpinilor de Neisseria gonorrhoeae și utilizarea materialului clinic pe un mediu nutritiv cu o încălcare a raportului cantitativ al componentelor următoarei compoziții, g:
hidrolizat pancreatic din făină de pește 31,0
autolizat de drojdie de panificație 1.4
acid clorhidric hidrolizat de cazeină 3.4
stimulator de creștere al microorganismelor hemofile 15.0
glucoză 13,0
clorură de sodiu 3,5
agar microbiologic 20,0
sulfat de polimixin-B 30000 unități
apă distilată până la 1 l
pH 7,3+0,2
Rezultatele au fost înregistrate după 24-48 de ore de cultivare. Exemplul 5. Mediul propus a fost testat prin inocularea tulpinilor de Neisseria gonorrhoeae și utilizarea materialului clinic pe un mediu nutritiv cu o încălcare a raportului cantitativ al componentelor următoarei compoziții, g:
hidrolizat pancreatic din făină de pește 18,0
autolizat de drojdie de panificație 0,5
acid clorhidric hidrolizat de cazeină 2.5
stimulator de creștere al microorganismelor hemofile 0,5
glucoză 5,0
clorură de sodiu 2,5
agar microbiologic 10.0
sulfat de polimixină B 10000 unități
clorhidrat de lincomicină 0,005
apă distilată până la 1 l
pH 7,3+0,2
Rezultatele au fost înregistrate după 24-48 de ore de cultivare. Tabelul 2 oferă o descriere comparativă a creșterii gonococilor din material clinic și tulpini de muzeu pe mediile propuse și cunoscute după 24-48 de ore de creștere. Morfologia coloniilor și frotiurilor colorate pe toate mediile testate este identică cu cea tipică pentru gonococ. Tabelul 2 arată că mediul propus este superior mediilor comerciale în ceea ce privește intensitatea și sensibilitatea creșterii gonococului. Încălcarea raportului cantitativ al componentelor mediului duce la o deteriorare accentuată a indicatorilor microbiologici ai calității mediului propus. Mediul propus face posibilă menținerea viabilității tulpinilor de Nisseria gonorrhoeae (atât proaspăt izolate de la pacienți, cât și specimene de muzeu) în timpul trecerii timp de 9 luni. Tabelul 3 prezintă date privind viabilitatea culturii de Neisseria gonorrhoeae atunci când este cultivată și depozitată pe medii solide,
Din Tabelul 3 se poate observa că mediul nutritiv propus este adecvat în scopuri de diagnostic în identificarea pacienților cu gonoree acută și cronică, precum și pentru obținerea biomasei de Neisseria gonorrhoeae pentru crearea de gonovaccin. Surse de informare
1. Manual Culture Media (1982)
2. Manualul mediilor de cultură microbiologice (Gibco BRL 1988)
3. Manualul Oxoid de medii culturale, ingrediente și alte servicii de laborator. (Oxoid Limited 1979)
4. Manualul produselor BBL și procedurilor de laborator. 1991. 5. Autor. Certificat Nr. 1451167, nascut. Gadzhieva și colab. „Mediu nutritiv pentru izolarea gonococilor”. 6. FS 42-146 VS-88 Mediu nutritiv pentru izolarea gonococului, uscat.

Revendicare

1 Mediu nutritiv pentru izolarea și cultivarea gonococului, care conține o bază nutritivă, autolizat de drojdie de panificație sau de bere, agar microbiologic, clorură de sodiu, un inhibitor al microflorei străine și apă distilată, caracterizat prin aceea că, ca bază nutritivă, conține hidrolizat pancreatic de pește făină și acid clorhidric hidrolizat de cazeină, conține în plus un stimulator de creștere a microorganismelor hemofile, glucoză și ca inhibitor al microflorei străine sulfat de polimixin-B și clorhidrat de lincomicină în următorul raport de componente, g/l: 3 Hidrolizat pancreatic de făină de pește7 22 283 Acid clorhidric hidrolizat de cazeină7 2,8 3,23 Autolizat de panificație sau drojdie de bere7 0,8 1,23 Stimulator de creștere a microorganismelor hemofile7 2 103 Glucoză7 9 113 Clorura de sodiu7 2,912 - sulfata polimicologică7 2,9 ,-B-1713 2,9 1,2 1,23 2,9 2,9 2,9 1,3 Unit7 15000 250003 Lincomicină clorhidrat7 0,001 0,003 3 Apă distilată7 Până la 1 l3 pH7 7,3 + 0,2

Brevete similare:

Invenția se referă la biotehnologia medicală și se referă la producerea adezinei meningococice, un preparat de origine bacteriană, utilizat, de exemplu, pentru a determina gradul de aderență a meningococilor în timpul interacțiunii lor cu celulele gazdă.