Tanenler (tanitler), proteinleri çökeltebilen ve buruk bir tada sahip olan yüksek moleküllü bitki fenolik bileşikleridir.

"Tanin" terimi tarihsel olarak, bu bileşiklerin ham hayvan derisini neme ve mikroorganizmalara karşı dayanıklı, dayanıklı deriye dönüştürme yeteneğinden dolayı geliştirilmiştir. Bu terimin kullanımı, 1796 yılında Seguin tarafından, tabaklama işlemini gerçekleştirebilen belirli bitkilerin ekstraktlarındaki maddeleri belirtmek için resmi olarak önerilmiştir.

Bronzlaşma, tanenlerin bağ dokusunun ana proteini olan kollajen molekülleri ile karmaşık bir kimyasal etkileşimidir. Molekül başına birden fazla hidroksil içeren polinükleer fenoller bronzlaştırıcı özelliklere sahiptir. Tanit protein molekülü üzerinde düz bir şekilde konumlandığında aralarında kararlı hidrojen bağları oluşur:

Bir protein molekülünün parçası Bir tanit molekülünün parçası

Bir tanitin bir protein ile etkileşiminin gücü, hidrojen bağlarının sayısına bağlıdır ve polifenolik bileşiğin molekülünün boyutuyla sınırlıdır. Tanenlerin molekül ağırlığı 20.000'e kadar çıkabilir.Aynı zamanda tanenlerde 100 birim molekül ağırlığı başına 1-2 fenolik hidroksi grubu bulunur. Bu nedenle oluşan hidrojen bağlarının sayısı çoktur ve tabaklama işlemi geri döndürülemez. Dış ortama yönelik hidrofobik radikaller, cildi neme ve mikroorganizmalara erişilemez hale getirir.

Tüm tanenler gerçek bronzlaşma yeteneğine sahip değildir. Bu özellik, molekül ağırlığı 1000 veya daha fazla olan bileşiklerin karakteristik özelliğidir. Kütlesi 1000'den az olan polifenolik bileşikler deriyi tabaklama yeteneğine sahip değildir ve yalnızca büzücü bir etkiye sahiptir.

Tanenler endüstride yaygın olarak kullanılmaktadır. Dünya tanen üretiminin yılda 1.500.000 tonu aştığını ve bitki tanenlerinin payının toplamın %50-60'ına kadar çıktığını söylemek yeterli.

Bitki dünyasındaki dağılım ve tanenlerin bitkilerdeki rolü. Tanenler, kapalı tohumlular ve açık tohumlular, algler, mantarlar, likenler, yosunlar ve eğrelti otlarının temsilcilerinde yaygın olarak bulunur. Birçok yüksek bitkide, özellikle dikotiledonlarda bulunurlar. Bunların en büyük sayısı Fabaceae, Myrtaceae, Rosaceae, Anacardiaceae, Fagaceae, Polygonaceae familyalarının bir dizi temsilcisinde tespit edildi.

Bitkideki tanenler hücre vakuollerinde bulunur ve hücre yaşlanması sırasında hücre duvarlarına adsorbe edilir. Yer altı organlarında, ağaç kabuğunda büyük miktarlarda birikirler, fakat aynı zamanda yaprak ve meyvelerde de bulunabilirler.

Tanenler bitkilerde esas olarak koruyucu işlevler yerine getirir. Dokulara mekanik hasar verildiğinde, yüzey katmanlarında oksidatif yoğunlaşma ile birlikte artan tanen oluşumu başlar, böylece bitki daha fazla hasardan ve patojenlerin olumsuz etkisinden korunur. Çok miktarda fenolik hidroksil nedeniyle tanenler belirgin bakteriyostatik ve fungisit özelliklere sahiptir, böylece bitki organizmalarını çeşitli hastalıklardan korur.

Tanenlerin sınıflandırılması. 1894 yılında G. Procter, tanenlerin pirolizinin son ürünlerini incelerken 2 grup bileşik keşfetti - pirogallikler (pirogallol oluşur) ve pirokatekol bileşikleri (ayrışma sırasında pirokatekol oluşur):

K. Freudenberg 1933'te G. Procter'in sınıflandırmasını netleştirdi. Procter gibi o da tanenleri ayrışmanın son ürünlerine göre sınıflandırdı, ancak piroliz koşullarında değil, asit hidrolizi sırasında. Hidroliz yeteneğine bağlı olarak K. Freudenberg, iki tanen grubunu ayırt etmeyi önerdi: hidrolize edilebilir ve yoğunlaştırılabilir.Şu anda K. Freudenberg'in sınıflandırması daha sık kullanılmaktadır.

Gruba hidrolize edilebilir tanenler Bunlar, esterler gibi oluşturulan ve asit hidrolizi sırasında bileşen bileşenlerine ayrışan bileşikleri içerir. Merkezi birim çoğunlukla glikozdur, daha az sıklıkla diğer şekerler veya alisiklik bileşiklerdir (örneğin kinik asit). Merkezi kalıntının alkol hidroksilleri, bir ester bağıyla gallik asitle bağlanabilir, böylece bir grup oluşturulabilir. gallo tanenler veya ellagik asit, bir grup oluşturur ellagitanninler.

Gallotanenler- hidrolize edilebilir tanenler grubunda en yaygın olanı gallik asit esterleri. Mono-, di-, tri-, tetra-, penta- ve poligalloil eterler vardır. Monogalloil eterlerin bir temsilcisi b-D-glukogallindir:

Polihaloil eterlerin bir örneği, yapısı ilk kez 1963 yılında Haworth tarafından kurulan Çin tanenidir:

Ellagotanenlerşeker ve ellagik asit esterleri veya türevleridir. Ellagik asit, iki molekül gallik asidin heksaoksidifenik asite oksidasyonu ile oluşur ve bu da hemen bir lakton - ellagik asit oluşturur:

Önceki durumda olduğu gibi, ellagitanninlerin şeker bileşeni çoğunlukla glikozdur.

Gallik asitlerin şekersiz esterleri gallik asit ve kinik asit, hidroksisinamik asit vb. gibi şeker olmayan bir bileşenin esterleridir. Bu madde grubunun bir örneği 3,4,5-trigalloilkinik asittir.

Yoğunlaştırılmış tanenler Hidrolize edilebilir olanlardan farklıdırlar, çünkü asit hidrolizi sırasında kurucu bileşenlerine bölünmezler, aksine mineral asitlerin etkisi altında yoğun kırmızı-kahverengi polimerizasyon ürünleri oluşur - flobafenler.

Yoğunlaştırılmış tanenler esas olarak kateşinler ve lökosiyanidinler tarafından ve çok daha az sıklıkla flavonoidlerin diğer indirgenmiş formları tarafından oluşturulur. Yoğunlaştırılmış tanenler “Glikozitler” grubuna ait değildir: yoğunlaştırılmış tanenler şeker bileşeni içermez.

Yoğunlaştırılmış tanenlerin oluşumu iki şekilde gerçekleşebilir. K. Freudenberg (XX yüzyılın 30'ları), yoğunlaştırılmış tanen oluşumunun, atmosferik oksijene, ısıya ve maruz kalmanın bir sonucu olarak kateşinlerin veya lökosiyanidinlerin (veya bunların çapraz yoğunlaşmasının) enzimatik olmayan bir otomatik yoğunlaşma süreci olduğunu tespit etti. asidik ortam. Kendi kendine yoğunlaşmaya, kateşinlerin piran halkasının kopması eşlik eder ve bir molekülün C-2 karbon atomu, başka bir molekülün C-6 veya C-8 karbon atomuna bir karbon-karbon bağı ile bağlanır. Bu durumda oldukça uzun bir zincir oluşturulabilir:

Başka bir bilim adamı olan D. Hatuey'e göre, yoğunlaştırılmış tanenler, "baştan kuyruğa" (A halkasından B halkasına) veya "kuyruktan kuyruğa" (B halkasından B halkasına) gibi moleküllerin enzimatik oksidatif yoğunlaşması sonucu oluşabilmektedir:

Yoğunlaştırılmış tanenler içeren bitkiler mutlaka öncüllerini (serbest kateşinler veya lökosiyanidinler) içerir. Kateşinler ve lökosiyanidinlerden oluşan karışık yoğunlaştırılmış polimerler sıklıkla bulunur.

Kural olarak, hem yoğunlaştırılmış hem de hidrolize edilebilir gruplardan gelen tanenler bitkilerde aynı anda mevcuttur.

Tanenlerin fiziko-kimyasal özellikleri. Tanenlerin yüksek bir moleküler ağırlığı vardır - 20.000'e kadar.Doğal tanenler, birkaç istisna dışında, şu ana kadar yalnızca amorf bir halde bilinmektedir. Bunun nedeni, bu maddelerin kimyasal yapı olarak benzer fakat molekül ağırlıkları farklı olan bileşiklerin karışımları olmasıdır.

Tanenler, suda koloidal çözeltiler oluşturan sarı veya kahverengi bileşiklerdir. Etanol, aseton, bütanolde çözünür ve belirgin hidrofobikliğe sahip çözücülerde çözünmez - kloroform, benzen vb.

Gallotanninler soğuk suda az çözünür, sıcak suda ise nispeten iyi çözünür.

Tanenler optik aktiviteye sahiptir ve havada kolayca oksitlenir.

Fenolik hidroksillerin varlığı nedeniyle ağır metal tuzları ile çökeltilerek Fe+3 ile renkli bileşikler oluştururlar.

Tanenlerin bitki materyallerinden izolasyonu. Tanenler farklı polifenollerin bir karışımı olduğundan izolasyonları ve analizleri zordur.

Çoğu zaman, tanen miktarını elde etmek için, ham madde sıcak su ile ekstrakte edilir (tanenler soğuk suda az çözünür) ve soğutulmuş ekstrakt, lipofilik maddeleri uzaklaştırmak için organik bir solvent (kloroform, benzen, vb.) ile işlenir. Tanenler daha sonra ağır metal tuzları ile çökeltilir ve ardından kompleksin sülfürik asit veya sülfürlerle yok edilmesi sağlanır.

Kimyasal yapıya benzer bir tanen fraksiyonu elde etmek için, ham maddelerin dietil eter, metil veya etil alkollerle ekstraksiyonunu, belirgin hidrofobikliğe sahip çözücüler (petrol eteri, benzen, kloroform) kullanılarak lipofilik bileşenlerin ön uzaklaştırılmasıyla kullanabilirsiniz.

Tanenlerin bazı bileşenlerinin sulu veya sulu alkollü çözeltilerden kurşun tuzları ile çökeltilmesi yoluyla izole edilmesi yaygındır. Elde edilen çökeltiler daha sonra seyreltik sülfürik asit ile işlenir.

Tanenlerin ayrı ayrı bileşenleri izole edilirken kromatografik yöntemler kullanılır: selüloz, poliamid üzerinde adsorpsiyon kromatografisi; çeşitli katyon değiştiricilerde iyon değişimi; silika jel üzerinde dağılım; moleküler eleklerde jel filtrasyonu.

Tanenlerin ayrı ayrı bileşenlerinin tanımlanması, kağıt üzerinde veya ince bir sorbent tabakasında kromatografi kullanılarak, spektral analiz, niteliksel reaksiyonlar kullanılarak ve bozunma ürünlerinin incelenmesiyle gerçekleştirilir.

Tanenlerin kalitatif analizi. Tanenlere verilen kalitatif reaksiyonlar iki gruba ayrılabilir: çökelme reaksiyonları ve renk reaksiyonları. Yüksek kaliteli reaksiyonları gerçekleştirmek için ham maddeler çoğunlukla sıcak su ile ekstrakte edilir.

Yağış reaksiyonları. 1. Tanenler, %10'luk sodyum klorür çözeltisi içinde hazırlanan %1'lik jelatin çözeltisiyle etkileşime girdiğinde bir çökelti oluşur veya çözelti bulanık hale gelir. Fazla jelatin ilave edildiğinde bulanıklık kaybolur.

2. Tanitler, alkaloitler (kafein, pakikarpin) ve ayrıca bazı azotlu bazlar (urotropin, novokain, dibazol) ile bol miktarda çökelme sağlar.

3. % 10'luk bir kurşun asetat çözeltisi ile etkileşime girdiğinde, hidrolize edilebilir grubun tanenleri topaklayıcı bir çökelti oluşturur.

4. Yoğunlaştırılmış grubun tanenleri, bromlu su ile reaksiyona girerek topaklayıcı bir çökelti oluşturur.

Renk reaksiyonları. Hidrolize edilebilir grubun tanenleri, ferrik amonyum şap çözeltisi ile siyah-mavi renkli bileşikler ve yoğunlaşmış grubun siyah-yeşil renkli bileşiklerini oluşturur.

Bitki aynı anda tanenler ve hidrolize edilebilir ve yoğunlaştırılmış gruplar içeriyorsa, önce hidrolize edilebilir tanenler% 10'luk bir kurşun asetat çözeltisi ile çökeltilir, çökelti filtrelenir ve ardından süzüntü bir ferroamonyum şap çözeltisi ile reaksiyona sokulur. Koyu yeşil rengin görünümü, yoğunlaştırılmış grubun maddelerinin varlığını gösterir.

Tanenlerin kantitatif tayini. Tanenlerin kantitatif tayini için yaklaşık 100 farklı yöntem olmasına rağmen, biyolojik olarak aktif maddelerin bu grubunun doğru kantitatif analizi zordur.

Tanenlerin kantitatif tayini için yaygın olarak kullanılan yöntemler arasında aşağıdakiler ayırt edilebilir.

1. Gravimetrik - tanenlerin jelatin, ağır metal tuzları vb. ile kantitatif çökelmesine dayanır.

2. Titrimetrik - öncelikle potasyum permanganat ile oksidatif reaksiyonlara dayanır.

3. Fotoelektrokolorimetrik - tanenlerin demir oksit tuzları, fosfotungstik asit vb. ile stabil renkli reaksiyon ürünleri oluşturma yeteneğine dayanmaktadır.

X ve XI baskılarının Devlet Farmakopesi, tanenlerin kantitatif tayini için titrimetrik bir yöntem önermektedir.

İçindekiler

GPM.1.5.3.0008.15 Tıbbi bitki hammaddelerinde ve şifalı bitkisel preparatlarda tanen içeriğinin belirlenmesi

Sanat yerine. GF XI

Tıbbi bitki hammaddelerinde ve tıbbi bitkisel preparatlarda tanen içeriğinin belirlenmesi titrimetrik ve/veya spektrofotometrik yöntemlerle gerçekleştirilir. Titrimetrik yöntem tanen miktarının tanen cinsinden belirlenmesidir ve spektrofotometrik yöntem ise tanen miktarının pirogallol cinsinden belirlenmesine olanak sağlar.

Yöntem 1. Tanen cinsinden tanen miktarının belirlenmesi

3 mm delikli bir elek ile elenen yaklaşık 2 g (tam olarak tartılmış) ezilmiş şifalı bitki hammaddesi veya şifalı bitkisel preparat, 500 ml kapasiteli konik bir şişeye yerleştirilir, kaynama noktasına kadar ısıtılan 250 ml su ile dökülür. kapalı spiralli elektrikli ocakta ara sıra karıştırarak 30 dakika geri akıtıldı. Elde edilen ekstrakt oda sıcaklığına kadar soğutulur ve pamuk yünü aracılığıyla 250 ml'lik bir ölçülü şişeye süzülür, böylece ham madde/preparasyon parçacıkları şişeye girmez, çözeltinin hacmi su ile işarete ayarlanır ve karıştırılır. Elde edilen sulu ekstraktın 25,0 ml'si 1000 ml kapasiteli konik bir şişeye konulur, 500 ml su, 25 ml indigo sülfonik asit çözeltisi ilave edilir ve potasyum permanganatın 0,02 M'lik bir çözelti ile sürekli karıştırılmasıyla altın sarısı rengine kadar titre edilir. .

Aynı zamanda bir kontrol deneyi gerçekleştirilir: 525 ml su, 25 ml indigosülfonik asit çözeltisi, 1000 ml kapasiteli konik bir şişeye yerleştirilir ve potasyum permanganatın 0,02 M'lik bir çözelti ile sürekli karıştırılmasıyla titre edilir. altın sarısına döner.

1 ml potasyum permanganat çözeltisi 0,02 M, tanen açısından 0,004157 g tanene karşılık gelir.

(V – V 1 ) · 0,004157 · 250 · 100 · 100

X = ————————————————— ,

A· 25 · (100 – K)

V– sulu ekstraktın titrasyonu için kullanılan potasyum permanganat çözeltisinin hacmi 0,02 M, ml;

V 1 - kontrol deneyinde titrasyon için kullanılan 0,02 M potasyum permanganat çözeltisinin hacmi, ml;

0,004157 - 1 ml potasyum permanganat çözeltisine karşılık gelen tanen miktarı 0,02 M (tanen açısından), g;

A- Hammaddelerin veya tıbbi bitkisel preparatların tartılmış kısmı, g;

K- şifalı bitki hammaddelerinin veya şifalı bitkisel preparatların nemi, %;

250 – toplam sulu ekstraksiyon hacmi, ml;

25 – titrasyon için alınan sulu ekstraktın hacmi, ml.

Not.İndigosülfonik asit çözeltisinin hazırlanması. 1 g indigo karmin, 25 ml konsantre sülfürik asit içerisinde eritilir, daha sonra ilave 25 ml konsantre sülfürik asit ilave edilir ve suyla 1000 ml'ye kadar seyreltilir, elde edilen çözelti, karıştırılarak 1000 ml'lik bir ölçülü şişede dikkatlice suya dökülür.

Yöntem 2. Tanen miktarının belirlenmesipirogallol açısından

Yaklaşık 0,5 - 1,0 g (tam olarak tartılmış veya farmakope monografisinde veya düzenleyici belgelerde başka şekilde belirtilmiş) ezilmiş şifalı bitki hammaddeleri veya şifalı bitkisel preparat, 0,18 mm delikli bir elekten elenmiş, kapasitesi 100 ml olan konik bir şişeye yerleştirilir. 250 ml, 150 ml su ilave edip geri akışlı su banyosunda 30 dakika kaynatın. Şişede elde edilen sulu ekstrakt oda sıcaklığına kadar soğutulur, pamuk yünü ile 250 ml'lik balon jojeye süzülür, böylece hammadde parçacıkları balona girmez, çözeltinin hacmi su ile işarete ayarlanır ve karıştırılır. . Ortaya çıkan çözelti, yaklaşık 125 mm çapında bir kağıt filtreden süzülür ve filtratın ilk 50 ml'si atılır.

Belirleme ışıktan korunan bir yerde gerçekleştirilir.

Tanen miktarının belirlenmesi. Süzüntüden 5,0 ml, 25 ml'lik balon jojeye konulur, çözeltinin hacmi su ile işarete kadar ayarlanır ve karıştırılır. Elde edilen çözeltinin 2,0 ml'si 25 ml'lik balon jojeye konulur, 1 ml fosfomolibden tungsten reaktifi, 10 ml su eklenir ve çözeltinin hacmi %10,6'lık sodyum karbonat çözeltisi (test çözeltisi) ile işarete ayarlanır. . 30 dakika sonra, test çözeltisinin (A 1) optik yoğunluğunu, referans çözeltisi olarak su kullanarak, 10 mm katman kalınlığına sahip bir küvet içinde 760 nm dalga boyunda bir spektrofotometre üzerinde ölçün.

Deri tozu tarafından adsorbe edilmeyen tanen miktarının belirlenmesi. 10,0 ml süzüntüye 0,1 g cilt tozu ekleyin, elde edilen karışımı 60 dakika karıştırın ve bir kağıt filtreden süzün. Elde edilen süzüntünün 5,0 ml'si 25 ml'lik balon jojeye konulur, çözeltinin hacmi su ile işarete kadar ayarlanır ve karıştırılır. Elde edilen çözeltinin 2,0 ml'si 25 ml'lik ölçülü bir şişeye konulur, 1 ml fosfomolibden tungsten reaktifi ve 10 ml su eklenir, çözeltinin hacmi %10,6'lık bir çözelti ile sodyum karbonat işaretine ayarlanır ve karıştırılır (test) çözüm). 30 dakika sonra, test çözeltisinin (A2) optik yoğunluğunu, referans çözeltisi olarak su kullanarak, 10 mm katman kalınlığına sahip bir küvet içinde 760 nm dalga boyunda bir spektrofotometre üzerinde ölçün.

Paralel olarak standart çözeltinin optik yoğunluğu ölçülür.

25 ml'lik balon jojeye 2,0 ml CO pirogallol çözeltisi konulur, 1 ml fosfomolibden tungsten reaktifi ve 10 ml su eklenir, çözeltinin hacmi %10,6'lık sodyum karbonat ile işarete ayarlanır ve karıştırılır ( standart çözüm). 30 dakika sonra, standart çözeltinin (A3) optik yoğunluğunu, referans çözelti olarak su kullanarak, 10 mm katman kalınlığına sahip bir küvet içinde 760 nm dalga boyunda bir spektrofotometre üzerinde ölçün.

1– tanen miktarını belirlerken test çözeltisinin optik yoğunluğu;

bir 2 – Pirogallol olarak ifade edilen, cilt tozu tarafından emilmeyen tanen miktarının belirlenmesinde test çözeltisinin optik yoğunluğu;

bir 3— standart çözeltinin optik yoğunluğu;

A- Tıbbi bitki hammaddelerinin veya şifalı bitkisel preparatların tartılmış kısmı, g;

A 0 - CO pirogallol örneği, g;

K- şifalı bitki hammaddelerinin veya şifalı bitkisel preparatların nemi, %.

Not. CO pirogallol çözeltisinin hazırlanması. 0,05 g (tam olarak tartılmış) CO2 pirogallol, 100 ml'lik balon jojeye konulur, suda eritilir, çözeltinin hacmi su ile işarete kadar ayarlanır ve karıştırılır. Elde edilen çözeltinin 5,0 ml'si 100 ml'lik balon jojeye konulur, çözeltinin hacmi su ile işarete kadar ayarlanır ve karıştırılır. Çözelti taze hazırlanmış olarak kullanılır.

giriiş
Bitkilerde biyolojik olarak aktif maddelerin (BAS) en yaygın gruplarından biri, geniş bir farmakolojik aktiviteye sahip olan tanenlerdir (tanenler).tanenlerhemostatik, büzücü, anti-inflamatuar, antimikrobiyal etkilere sahiptir ve ayrıca yüksek P-vitamin aktivitesi, anti-sklerotik ve anti-hipoksik etkiler sergiler. Yoğunlaştırılmış tanenler antioksidandır ve antitümör etkisine sahiptir. tanenlerGlikozitler, alkaloitler ve ağır metal tuzları ile zehirlenmelerde panzehir olarak kullanılır. Tıpta tanenler stomatit, diş eti iltihabı, farenjit, bademcik iltihabı, kolit, enterokolit, dizanteri gibi hastalıkların tedavisinde kullanıldığı gibi yanıklar, rahim, mide ve hemoroidal kanamalarda da kullanılmaktadır..
İçerik TanımıTanenler, tanen içeren bitki materyallerinin kalitesinin belirlenmesinde önemli bir bileşendir. Tanenlerin belirlenmesi için çeşitli yöntemler vardır ancak en yaygın kullanılanları titrimetrik ve spektrofotometrik yöntemlerdir.
İşin amacı– yakınsama, doğruluk ve doğrusallık açısından tanenlerin kantitatif belirlenmesine yönelik yöntemlerin validasyon değerlendirmesi.
Malzemeler ve araştırma yöntemleri
Çalışmanın amacı olarak kullanılan hammadde, havada kurutulmuş çimdi.ortak manşet (Alchemilla vulgaris L.) familyası. Rosaceae (Rosaceae).
Havayla kurutulmuş otlardaki tanenlerin kantitatif tayinine yönelik yöntemlerin validasyon değerlendirmesi içinManşet vulgarisi için iki yöntem seçilmiştir: permanganatometrik titrasyon ve Folin-Ciocalteu reaktifi ile reaksiyona dayalı spektrofotometrik belirleme. Yöntemlerin seçimi, pratikte kullanım sıklığı ile doğrulanmaktadır.
Havayla kurutulmuş çimmanşet vulgaris içinde hazırlandı Eylül 2015, tanenlerin (tanenlerin) araştırılması ve kantitatif belirlenmesi için hammadde olan Arkhangelsk bölgesinin Primorsky bölgesinde.
Permanganatometrik belirleme yöntemi farmakopedir;tanenlerin bir potasyum permanganat çözeltisi ile oksidasyon reaksiyonuna dayanmaktadır.3 mm delikli bir elekten elenen yaklaşık 2 g (tam olarak tartılmış) kırılmış hammadde, 500 ml kapasiteli konik bir şişeye yerleştirildi, kaynama noktasına kadar ısıtılan 250 ml su ilave edildi ve geri akıtıldı. periyodik olarak karıştırılarak 30 dakika boyunca kapalı spiralli bir elektrikli ocak. Ortaya çıkan ekstrakt oda sıcaklığına kadar soğutuldu ve 250 ml'lik konik bir şişe, ham madde parçacıklarının şişeye girmemesi için pamuk yünü içinden süzüldü. Elde edilen ekstraktın 25 ml'si pipetlendi ve aktarıldı.750 ml kapasiteli başka bir konik şişeye 500 ml su, 25 ml indigosülfonik asit çözeltisi ilave edildi ve bir potasyum çözeltisi ile sürekli karıştırılarak titre edildi.altın sarısı oluncaya kadar permanganat (0,02 mol/l).
Paralel olarak bir kontrol deneyi gerçekleştirildi.
1 ml potasyum permanganat çözeltisi (0,02 mol/l), tanen açısından 0,004157 g tanene karşılık gelir.
Tanen içeriği (X), mutlak kuru hammadde cinsinden yüzde olarak formül (1) kullanılarak hesaplandı:

Nerede (1)

V – ekstraktın titrasyonu için kullanılan potasyum permanganat çözeltisinin hacmi (0,02 mol/l), ml;
- kontrol deneyinde titrasyon için kullanılan potasyum permanganat çözeltisinin hacmi (0,02 mol/l), ml;
0,004157 – 1 ml potasyum permanganat çözeltisine (0,02 mol/l) karşılık gelen tanen miktarı (tanen cinsinden), g;
250 – toplam ekstraksiyon hacmi, ml;
25 – titrasyon için alınan ekstraktın hacmi, ml.
M– hammadde kütlesi, g;
K– Hammaddelerin kurutulması sırasındaki ağırlık kaybı, g;
Tanenlerin spektrofotometri ile kantitatif olarak belirlenmesi için, incelenen bitki materyalinin yaklaşık 1 g'ı (tam olarak tartılmış), 1 mm'lik delik boyutuna sahip eleklerden geçen parçacık boyutuna kadar ezilmiş, öğütülmüş bölümü olan konik bir şişeye yerleştirilmiştir. 50 ml kapasiteli, 7:3 oranında (%70 aseton çözeltisi) 25 ml aseton-su karışımı ilave edildi. Şişe kapatıldı ve 60 dakika boyunca bir laboratuvar karıştırma cihazına (LAB PU-2, Rusya) yerleştirildi. Ortaya çıkan ekstrakt 50 ml'lik bir ölçülü şişeye süzüldü ve hacim, %70'lik bir aseton çözeltisi (çözelti A) ile işarete ayarlandı.
1 ml çözelti A, 10 ml'lik ölçülü bir şişeye yerleştirildi, şişedeki çözeltinin hacmi, saf su (çözelti B) ile işarete ayarlandı.
10 ml’lik balon jojeye 0,5 ml Solüsyon B konuldu, 2 ml saf su, 0,25 ml Folen-Ciocalteu reaktifi, 1,25 ml %20’lik sodyum karbonat solüsyonu ilave edildi ve solüsyonun hacmi ile işarete ayarlandı. su. Şişe ışıktan korunan bir yerde 40 dakika bekletildi. Çözeltinin optik yoğunluğu 750 nm dalga boyunda belirlendi. Ekstrakt eklenmeyen bir reaktif karışımı referans solüsyonu olarak kullanıldı.
Bitkisel hammaddelerden elde edilen ekstraktlardaki tanenlerin içeriği, yapımı için standart bir CO tanen numunesinin 0,1 mg / ml'lik bir çözeltisinin kullanıldığı kalibrasyon grafiğinin değerlerinden hesaplandı. Bu amaçla 0,05 g (tam kütle) CO tanen 100 ml'lik balon jojeye konuldu, 30 ml su içerisinde çözüldü ve balonun hacmi aynı solvent (çözelti A) ile işarete ayarlandı.
Elde edilen çözeltinin 1 ml'si 10 ml'lik balon jojeye aktarıldı. Şişedeki çözeltinin hacmi su ile işarete kadar ayarlandı (çözelti B).
1 içeren bir dizi çözüm; 2; 3; 4; 5 µg/ml CO tanen, B çözeltisinin porsiyonlarının 10 ml'lik balon jojelere yerleştirilmesi, Folin-Ciocalteu reaktifinin ve %20 sulu sodyum karbonat çözeltisinin eklenmesi ve şişedeki çözeltilerin hacminin su ile işarete ayarlanmasıyla hazırlandı. .
Çözeltiler karıştırılıp şişeler ağzı kapatılarak oda sıcaklığında, ışıktan korunan bir yerde 40 dakika bekletildi.
Elde edilen çözeltilerin optik yoğunluğu, referans çözeltiye göre 725 nm dalga boyunda, 1 cm katman kalınlığına sahip kuvars küvetlerde spektrofotometrik olarak belirlendi.
Referans çözeltisi, tanen CO eklenmeyen bir reaktifler karışımıydı (çözelti B).
Çalışmaların sonuçlarına dayanarak, optik yoğunluğun tanen konsantrasyonuna bağımlılığının bir grafiği oluşturuldu (Şekil 1).

Elde edilen değerler dikkate alınarak tanen cinsinden tanen miktarı aşağıdaki formül kullanılarak hesaplandı:

, Nerede

sonuçlar
Tanenlerin titrasyonla kantitatif tayininin sonuçları tabloda sunulmaktadır. 1.

Tablo 1. Tanenlerin permanganatometri ile kantitatif tayininin sonuçları

Bitkisel hammadde numunesinin ağırlığı, g	Bitkisel hammaddelerden elde edilen ekstraktın titrasyonu için kullanılan potasyum permanganatın hacmi (0,02 mol/l), ml	Tanen miktarı, % (X Ben)
2,10250		15,34892	15,72% 0,154 Δ = 0,395 ε = %2,52 S r = 0,024
2,03255		15,21262
2,18345		15,84713
2,24350		16,24333
2,12465		15,85257
2,07055		15,80574

Hammaddelerdeki ortalama tanen içeriği %15,7 idi. Elde edilen sonuçların tatmin edici yakınsamasını karakterize eden, %2'yi aşmayan göreceli standart sapmanın (%0,024) hesaplanan değeri.
İşlemin doğruluğunu belirlemek için ekleme yöntemi kullanıldı. Bu amaçla titrasyon şişesine 1 ml %0,05, %0,1 ve %0,15 CO tanen ilave edildi ve her durum için üç kez titre edildi. Çalışmaların sonuçları tabloda sunulmaktadır. 2.

Tablo 2. Tanenlerin permanganatometrik titrasyonu yönteminin doğruluğunun belirlenmesi

Eklenen CO tanen miktarı, g	Hammadde ağırlığı, g	Hesaplanmış tanen miktarı, g	Bulunan tanen miktarı, g	Açık oran, %	Metrolojik özellikler
0,0005	2,2435	0,0357	0,0353	98,87	99,91% 1,198 0,399 hesaplandı. =0,23 t masası =2,31
	2,1247	0,0339	0,0340	100,29
	2,0706	0,0330	0,0337	102,12
0,001	2,2435	0,0362	0,0357	98,61
	2,1247	0,0344	0,0340	98,84
	2,0706	0,0335	0,0336	100,51
0,0015	2,2435	0,0367	0,0366	99,73
	2,1247	0,0349	0,0353	101,14
	2,0706	0,0340	0,0337	99,12

Elde edilen sonuçlar hesaplanan Öğrenci katsayısının tablo değerinden küçük olduğunu veteknik, doğruluğu hakkında bir sonuca varmamızı sağlayan sistematik bir hata içermiyor.
Doğrusallığı incelemek için, tanenlerin kantitatif içeriğinin bulunan değerlerinin, incelenen bitki materyalinin tartılan kısmına bağımlılığını belirledik. Bu amaçla, havayla kurutulmuş, ağırlıkları farklı olan altı ham manto örneğinde tanenlerin kantitatif tayini yapıldı (Tablo 3).

Tablo 3. Permanganatometri kullanılarak bulunan tanen içeriğinin bitki hammaddesi numunesinin kütlesine bağımlılığı

Hammadde ağırlığı, g	Titrasyon için kullanılan potasyum permanganatın hacmi, ml
2,0706		0,3159
3,0013	10,8	0,4490
4,0595	13,0	0,5404
5,1180	15,3	0,6360
6,1385	18,2	0,7566

Araştırma sırasında elde edilen verilere dayanarak, belirli bir tanen içeriğinin, incelenen bitki materyali numunesinin ağırlığına bağımlılığının bir grafiği çizildi (Şekil 2) ve korelasyon katsayısı hesaplandı.

Pirinç. 2. Bulunan tanen miktarının, ortak manşetin havayla kurutulmuş hammadde numunesinin kütlesine bağımlılığının grafiği

Hesaplanan korelasyon katsayısı 0,95'i aşmadı; bu, incelenen maddelerin içeriğini, belirlenen konsantrasyon aralığında analiz edilen bitki materyali numunesinin kütlesinden belirleme sonuçlarının doğrusallığını gösterir.
Adi manto otunun havayla kurutulmuş hammaddelerindeki tanenlerin spektrofotometrik yöntem kullanılarak kantitatif olarak belirlenmesinin sonuçları tabloda sunulmaktadır. 4.

Tablo 4. Tanenlerin spektrofotometri ile kantitatif tayininin sonuçları

Numune ağırlığı, g	Çözeltinin optik yoğunluğu		Bulunan tanen miktarı, % (X Ben)	Metrolojik özellikler
1,02755	0,5957	7,30920	7,87340	7,84% 0,11 Δ = 0,28 ε = %3,61 S r =%0,034
0,99745	0,6130	7,52147	8,34656
1,0068	0,5678	6,96687	7,65932
0,99580	0,5742	7,04539	7,83120
1,0060	0,5750	7,05521	7,76261
1,00670	0,5617	6,89202	7,57779

Bitkisel hammaddelerdeki ortalama tanen içeriği %7,8'dir ve bağıl standart sapma (%0,034) %2'yi aşmaz, bu da sonuçların tatmin edici yakınlaşmasını karakterize eder.
İşlemin doğruluğunu belirlemek için ekleme yöntemi kullanıldı. Bu amaçla primer aseton ekstraksiyonu yapılan şişeye 1 ml %0,05, %0,1 ve %0,15 CO tanen çözeltisi eklenmiş ve daha sonra her konsantrasyon için üç kez tanenlerin kantitatif tayini yapılmıştır. Çalışmaların sonuçları tabloda sunulmaktadır. 5.

RU 2439568 patentinin sahipleri:

Buluş farmakoloji alanıyla ilgilidir ve bitkisel materyallerdeki tanenlerin belirlenmesinde kullanılabilir. Bitkisel hammaddelerdeki tanenleri belirleme yöntemi, bir hammadde numunesinin kaynar su ile ekstrakte edilmesi, soğutulması, filtrelenmesi, bir kısım numunenin optik yoğunluğunun 277 nm dalga boyunda ölçülmesi ve tüm bunların toplamının içeriğinin ölçülmesidir. tanenler belirli bir formül kullanılarak hesaplanır, daha sonra süzüntü numuneye eklenir. %1 asetik asit içindeki %1 kollajen çözeltisi çalkalanır, filtrelenir, süzüntünün optik yoğunluğu 277 nm dalga boyunda ölçülür ve içerik çökeltilmiş tanenlerin miktarı belirli bir formül kullanılarak hesaplanır. Yöntem, bitkisel materyallerdeki tanen içeriğini belirleme doğruluğunun arttırılmasını ve bitkisel materyallerdeki çökelmiş ve çökelmemiş tanenlerin seçici olarak belirlenmesini mümkün kılar.

Buluş kimya ve farmasötik endüstrisi, farmakognozi ve farmasötik kimya alanı ile ilgilidir ve tanen içeren bitkisel hammaddelerin kalitesini kontrol etmek için kullanılabilir.

Tıbbi bitki hammaddelerindeki (MPS) tanenleri tanen açısından kulometri ile belirlemek için bilinen bir yöntem vardır (S.G. Abdullina ve diğerleri. Tıbbi bitki hammaddelerinde tanenlerin kulometrik tespiti. // Eczacılık. No. 4. - 2010. - S.13 -15).

Bu yöntemin dezavantajı, oksitleyici özellikleri bakımından potasyum permanganata yakın olan ve yüksek ve düşük moleküler ağırlıklı tanenler arasında ayrım yapmayı mümkün kılmayan özel bir titrant (potasyum hipoiyodür) olan ek ekipmanın (kulometre) kullanılmasıdır.

Çaydaki tanen ve gallik asit türevlerinin içeriğini kondüktometri kullanarak belirlemek için bilinen bir yöntem de vardır (Patent No. 2127878. Çaydaki tanen ve kateşinlerin (galik asit açısından) ayrı ayrı belirlenmesine yönelik yöntem. M.: 1999).

Bu yöntemin dezavantajı, toksik organik çözücülerin (izobütil alkol) kullanılmasının yanı sıra, ürünü zamanla rengi kararsız olan renkli bir bileşik olan Fe (III) ile bir renk reaksiyonunun kullanılmasıdır.

Tanenlerin çinko tuzları ile çökeltilmesinden sonra kompleksometri ile uskumru ve sumak yapraklarındaki tanen cinsinden tanenlerin kantitatif olarak belirlenmesi için bilinen bir yöntem vardır (GOST 4564-79. Uskumru yaprağı. Teknik koşullar; GOST 4565-79. Sumak yaprağı). Teknik koşullar).

Bu yöntemin dezavantajı analizin süresi ve eşdeğerlik noktasının belirlenmesinin zorluğudur.

Ayrıca, gallik asit açısından Folin-Ciocalteu reaktifi ile reaksiyondan sonra spektrofotometrik yöntemle tanenlerin kantitatif tayini için bilinen bir yöntem vardır (Biyolojik olarak aktif gıda katkı maddelerinin kalite kontrolü ve güvenliği yöntemleri kılavuzu. El Kitabı. R 4.1.1672). -03. - M. - 2004. - s.94-95).

Bu yöntemin dezavantajı, düşük ve yüksek moleküllü tanenlerin ayrı ayrı belirlenmesinin imkansız olmasıdır.

Önerilen yönteme en yakın olanı, tanenlerin gallik asit açısından spektrofotometri ile belirlenmesidir (Biyolojik olarak aktif gıda katkı maddelerinin kalite kontrol ve güvenliği yöntemleri kılavuzu. El Kitabı. R 4.1.1672-03. - M. - 2004 g. - S.120).

Bu yöntemin dezavantajı, test numunesinin tekrar tekrar seyreltilmesidir, bunun sonucunda çözeltideki tanen konsantrasyonunun belirlenmesi zordur. Ayrıca bu yöntemde referans çözüm, analizi zorlaştıran bir tampon çözümdür. Ayrıca bu yöntem, düşük moleküler ve yüksek moleküler tanenlerin içeriğinin ayrı ayrı belirlenmesini mümkün kılmaz.

Buluşun amacı, tanenlerin belirlenmesinin doğruluğunun arttırılması ve bitkisel hammaddelerdeki çökelmiş ve çökelmemiş tanenlerin ayrı ayrı belirlenmesi olasılığının arttırılmasıdır.

Sorun, bir hammadde numunesinin kaynar su ile ekstraksiyonu, soğutulması, filtrelenmesi, bir kısım numunenin optik yoğunluğunun 277 nm dalga boyunda ölçülmesi ve aşağıdaki formül kullanılarak tüm tanenlerin toplamının içeriğinin hesaplanmasıyla çözülür.

50 - şişe hacmi, ml,

W - hammadde nemi, %,

%1 asetik asit içindeki %1'lik kollajen çözeltisi, filtreden alınan numunenin bir kısmına eklenir, çalkalanır, filtrelenir, filtrenin optik yoğunluğu 277 nm dalga boyunda ölçülür ve çökelmiş tanenlerin içeriği aşağıdaki formül kullanılarak hesaplanır:

D 1 - çözelti 1'in optik yoğunluğu,

D 2 - çözelti 2'nin optik yoğunluğu,

m nav - hammadde kütlesi, g,

V a - kısım numunesinin hacmi, ml,

250 - toplam ekstraksiyon hacmi, ml,

50 - şişe hacmi, ml,

508 - gallik asidin spesifik absorpsiyon oranı (%1 gallik asit çözeltisinin optik yoğunluğu 1 mg/ml),

W - hammaddelerin nem içeriği, %.

Uygulamada yöntem şu şekilde gerçekleştirilir. 3 mm delik çapına sahip bir elekten elenen yaklaşık 2,0 (tam olarak tartılmış) ezilmiş hammadde, 500 ml kapasiteli bir şişeye yerleştirilir, kaynama noktasına kadar ısıtılan 250 ml su ile dökülür ve 30 dakika kaynatılır. ara sıra karıştırarak geri akış. Oda sıcaklığına soğutun, 250 ml'ye kadar su ekleyin, ham madde parçacıklarının sulu ekstraktın içine girmemesi için pamuk yünü ile süzün. Süzüntünün ilk 50 ml'si atılır.

1-4 ml sulu ekstraktı 50 ml'lik balon jojeye koyun ve işarete kadar suyla seyreltin (çözelti 1). Çözelti 1'in optik yoğunluğu 277 nm dalga boyunda ölçülür. Su bir karşılaştırma olarak kullanılmıştır.

30 ml sulu ekstrakt, 50 ml kapasiteli bir ölçüm kabına konulur, 2-10 ml çökeltme reaktifi eklenir, 30-60 dakika çalkalanır, çökeltilir, süzülür. Elde edilen süzüntünün 1-4 ml'si 50 ml'lik bir şişeye aktarılır ve suyla işarete kadar seyreltilir (çözelti 2). Çözelti 2'nin optik yoğunluğu 277 nm dalga boyunda ölçülür. Su bir karşılaştırma olarak kullanılmıştır.

Buluş aşağıdaki örneklerle açıklanmaktadır.

Örnek 1. Analiz için bir bitki materyali alındı - meşe kabuğu.

3 mm delik çapına sahip bir elekten elenmiş yaklaşık 2,0 (tam olarak tartılmış) ezilmiş ham meşe kabuğu, 500 ml kapasiteli bir şişeye konur, üzerine 250 ml su dökülür, kaynatılır ve 30 dakika kaynatılır. ara sıra karıştırarak geri akışta. Oda sıcaklığına soğutun, 250 ml'ye kadar su ekleyin, ham madde parçacıklarının sulu ekstraktın içine girmemesi için pamuk yünü ile süzün. Süzüntünün ilk 50 ml'si atılır.

Meşe kabuğundan elde edilen 2 ml sulu ekstrakt, 50 ml'lik ölçülü bir şişeye konulur ve su ile işarete kadar ayarlanır (çözelti 1). Çözelti 1'in optik yoğunluğu 277 nm dalga boyunda ölçülür. Su bir karşılaştırma olarak kullanılmıştır. Meşe kabuğu için D 1 0,595'tir.

30 ml sulu ekstrakt, 50 ml kapasiteli bir ölçüm kabına konulur, 2 ml çökeltme reaktifi eklenir, 30 dakika çalkalanır, çökeltilir, süzülür. Elde edilen süzüntünün 2 ml'si 50 ml'lik bir şişeye aktarılır ve su ile işarete kadar seyreltilir (çözelti 2). Çözelti 2'nin optik yoğunluğu 277 nm dalga boyunda ölçülür. Su bir karşılaştırma olarak kullanılmıştır. Meşe kabuğu için D2 0,276'dır.

Örnek 2. Analiz için serpantin bitkisinin rizomundan bitki hammaddeleri alındı.

Yaklaşık 2,0 (tam olarak tartılmış) serpantin rizomunun ezilmiş hammaddesi, delik çapı 3 mm olan bir elekten elenmiş, 500 ml kapasiteli bir şişeye konur, 250 ml su ile dökülür, 3 mm'ye kadar ısıtılır. kaynatın ve ara sıra karıştırarak geri akışta 30 dakika kaynatın. Oda sıcaklığına soğutun, 250 ml'ye kadar su ekleyin, ham madde parçacıklarının sulu ekstraktın içine girmemesi için pamuk yünü ile süzün. Süzüntünün ilk 50 ml'si atılır.

Serpantin rizomundan elde edilen 1 ml sulu ekstrakt, 50 ml'lik balon jojeye konulur ve su ile işarete kadar ayarlanır (çözelti 1). Çözelti 1'in optik yoğunluğu 277 nm dalga boyunda ölçülür. Su bir karşılaştırma olarak kullanılmıştır.

30 ml sulu ekstrakt, 50 ml kapasiteli bir ölçüm kabına konulur, 7 ml çökeltme reaktifi eklenir, 60 dakika çalkalanır, çökeltilir, süzülür. Elde edilen süzüntünün 1 ml'si 50 ml'lik bir şişeye aktarılır ve suyla işarete kadar seyreltilir (çözelti 2). Çözelti 2'nin optik yoğunluğu 277 nm dalga boyunda ölçülür. Su bir karşılaştırma olarak kullanılmıştır.

Önerilen yöntem, bitkisel materyallerdeki tanen içeriğini belirleme doğruluğunun arttırılmasını ve bitkisel materyallerdeki çökelmiş ve çökelmemiş tanenlerin seçici olarak belirlenmesini mümkün kılar.

Bitkisel hammaddelerdeki tanenleri gallik asit açısından belirlemek için bir yöntem; bu yöntem, bir hammadde numunesinin kaynar su ile ekstrakte edilmesini, soğutulmasını, filtrelenmesini, bir kısım numunenin optik yoğunluğunun 277 nm dalga boyunda ölçülmesini ve içeriğin hesaplanmasını içerir. formülü kullanarak tüm tanenlerin toplamı:

burada xa, gallik asit cinsinden toplam tanenlerin içeriğidir, %;

50 - şişe hacmi, ml;
508 - gallik asidin spesifik absorpsiyon oranı (%1 gallik asit çözeltisinin optik yoğunluğu 1 mg/ml);
W - hammadde nemi, %,
%1 asetik asit içindeki %1'lik kollajen çözeltisi, filtreden alınan numunenin bir kısmına eklenir, çalkalanır, filtrelenir, filtrenin optik yoğunluğu 277 nm dalga boyunda ölçülür ve çökelmiş tanenlerin içeriği aşağıdaki formül kullanılarak hesaplanır: :

burada X, gallik asit cinsinden çökelmiş tanenlerin içeriğidir, %;
D 1 - çözelti 1'in optik yoğunluğu;
D 2 - çözelti 2'nin optik yoğunluğu;
m nav - hammadde kütlesi, g;
V a - bölüntü örneğinin hacmi, ml;
250 - toplam ekstraksiyon hacmi, ml;
50 - şişe hacmi, ml;
508 - gallik asidin spesifik absorpsiyon oranı (%1'lik gallik asit çözeltisinin optik yoğunluğu 1 mg/ml);
W - hammaddelerin nem içeriği, %.

Benzer patentler:

Buluş tıpla, yani psikonörolojiyle ilgilidir ve kan serumundaki toplam albümin (TAC) konsantrasyonunun g cinsinden klinik ve biyokimyasal çalışmalarını yürüterek, iskemik felcin akut dönemindeki hastalarda nörolojik fonksiyonların iyileşmesini tahmin etmeye yönelik bir yöntemi açıklar. /l, burada ek 5-7 Hastalık gününde etkin albümin konsantrasyonu (ECA) belirlenir, albümin bağlama rezervi (ABR) hesaplanır ve bu gösterge birden azsa restorasyonda olumsuz sonuç İskemik inmenin akut döneminde hastalarda nörolojik fonksiyonların bozulacağı öngörülmektedir.

Buluş tıpla ve onkolojideki biyolojik araştırmalarla ilgilidir ve cerrahi tedaviden sonra beyin tümörlerinde kötü huylu bir sürecin gelişimini belirlemek için kullanılabilir.

Buluş tıp alanıyla, özellikle onkolojiyle ilgilidir ve bir hastayı muayene ederek mesane kanseri için neoadjuvan kemoterapinin etkinliğini değerlendirmek için bir yöntemi açıklar; burada tümör dokularının otofloresansının maksimum yoğunluğu spektrumun yeşil bölgesindedir. Primer tanı aşamasında ve ameliyat öncesi kemoterapiden 1 ay sonra kaydedilen ve hastada tümör dokusunun otofloresansının maksimum yoğunluğu başlangıç değerlerinden %15 veya daha fazla arttığında, tedavinin etkinliği kısmi gerileme olarak değerlendirilir. Tümör süreci; tümör dokusunun otofloresans yoğunluğunda başlangıç değerlerinden değişiklik olmaması durumunda, sürecin stabilizasyonu belirlenir; tümör dokusunun otofloresan yoğunluğu başlangıçtaki değerlerden %15 ve daha fazla azaldığında, sürecin ilerlemesi belirlenir. tümör süreci not edilir.