Дубильними речовинами (танідами) називають рослинні високомолекулярні фенольні сполуки, здатні брати в облогу білки і володіють в'яжучим смаком.
Термін "дубільні речовини" склався історично, завдяки здатності цих сполук перетворювати сиру шкуру тварин на міцну шкіру, стійку до впливу вологи та мікроорганізмів. Використовувати цей термін офіційно запропонував у 1796 р. Сеген для позначення в екстрактах деяких рослин речовин, здатних здійснювати процес дублення.
Дублення – це складна хімічна взаємодія танідів з молекулами колагену – основного білка сполучної тканини. Дублячі властивості мають багатоядерні феноли, що містять в молекулі більше одного гідроксилу. При плоскому розташуванні таніду на білковій молекулі між ними виникають стійкі водневі зв'язки:
Фрагмент молекули білка Фрагмент молекули таніду
Міцність взаємодії таніду з білком залежить від кількості водневих зв'язків та лімітується величиною молекули поліфенольного з'єднання. Молекулярна маса дубильних речовин може становити до 20 000. При цьому на 100 одиниць молекулярної маси в танідах припадає по 1-2 фенольні оксигрупи. Тому кількість водневих зв'язків, що утворюються, численно і процес дублення є незворотним. Гідрофобні радикали, орієнтовані на зовнішнє середовище, роблять шкіру недоступною для вологи та мікроорганізмів.
Не всі дубильні речовини здатні до справжнього дублення. Цією властивістю відрізняються сполуки, що мають молекулярну масу 1000 і більше. Поліфенольні сполуки з масою менше 1 000 не здатні дубити шкіру і мають тільки в'яжучу дію.
Дубильні речовини дуже широко застосовують у промисловості. Досить сказати, що виробництво танідів перевищує 1 500 000 тонн на рік, а частка рослинних танідів становить до 50-60% від загальної кількості.
Поширення у рослинному світі та роль дубильних речовин у рослинах. Дубильні речовини широко зустрічаються у представників покрито-і голонасінних, водоростей, грибів, лишайників, у плаунах та папоротях. Вони містяться у багатьох вищих рослинах, особливо дводольних. Найбільше їх виявлено у низці представників сімейств Fabaceae, Myrtaceae, Rosaceae, Anacardiaceae, Fagaceae, Polygonaceae.
Дубильні речовини у рослині перебувають у клітинних вакуолях і за старінні клітин адсорбуються на клітинних стінках. У великих кількостях накопичуються у підземних органах, корі, але можуть бути у листі та плодах.
Дубильні речовини виконують у рослинах переважно захисні функції. При механічному пошкодженні тканин починається посилене утворення дубильних речовин, що супроводжується їх окислювальною конденсацією в поверхневих шарах, захищаючи тим самим рослину від подальшого пошкодження та негативного впливу хвороботворних мікроорганізмів. Завдяки великій кількості фенольних гідроксилів дубильні речовини мають виражені бактеріостатичні та фунгіцидні властивості, оберігаючи тим самим рослинні організми від різних захворювань.
Класифікація дубильних речовин. У 1894 р. Г. Проктер, вивчаючи кінцеві продукти піролізу дубильних речовин, виявив 2 групи сполук - пирогалловые (утворюється пирогаллол) і пирокатехиновые (при розкладі утворюється пирокатехин):
К. Фрейденберг у 1933 р. уточнив класифікацію Г. Проктера. Він, як і Проктер, класифікував дубильні речовини по кінцевим продуктам їхнього розпаду, але не в умовах піролізу, а при кислотному гідролізі. Залежно від здатності до гідролізу К. Фрейденберг запропонував виділити дві групи дубильних речовин: гідролізовані та конденсовані.Нині найчастіше користуються класифікацією До. Фрейденберга.
До групи гідролізованих дубильних речовинвідносяться сполуки, побудовані на кшталт складних ефірів і розпадаються при кислотному гідролізі на складові компоненти. Центральною ланкою найчастіше буває глюкоза, рідше інші цукру або аліциклічні сполуки (наприклад, хінна кислота). Спиртові гідроксили центрального залишку можуть бути пов'язані ефірним зв'язком з галовою кислотою, утворюючи при цьому групу галотанінів, або елагової кислоти, утворюючи групу елагатанінів.
Галлотаніни- ефіри галової кислоти, що найчастіше зустрічаються в групі гідролізованих дубильних речовин. Існують моно-, ді-, три-, тетра-, пента- та полігалоїльні ефіри. Представником моногалоїльних ефірів є b-D-глюкогаллін:
Прикладом полігалоїльних ефірів може бути китайський танін, структура якого вперше було встановлено 1963 р. Хеуорсом:
Елаготаниниє складними ефірами цукру та еллагової кислоти або її похідними. Елагова кислота утворюється при окисленні двох молекул галової кислоти до гексаоксидифенової, яка відразу ж утворює лактон – еллагову кислоту:
Як і в попередньому випадку, цукровим компонентом елагатанінів найчастіше виступає глюкоза.
Нецукрові ефіри галових кислотявляють собою складні ефіри галової кислоти та нецукрового компонента, такого як хінна кислота, оксикорична та ін. Прикладом цієї групи речовин може служити 3,4,5-тригалоілхінна кислота.
Конденсовані дубильні речовинивідрізняються від гідролізованих тим, що з кислотному гідролізі немає їх розщеплення на складові компоненти, а навпаки, під впливом мінеральних кислот утворюються щільні червоно-коричневі продукти полімеризації - флобафени.
Конденсовані дубильні речовини утворені головним чином катехінами та лейкоціанідинами, і, набагато рідше, іншими відновленими формами флавоноїдів. Конденсовані дубильні речовини не належать до групи «Глікозиди»: у конденсованих дубильних речовинах цукровий компонент відсутній.
Утворення конденсованих дубильних речовин може відбуватися двома шляхами. К. Фрейденберг (30-ті роки XX ст) встановив, що утворення конденсованих дубильних речовин - це неферментативний процес аутоконденсації катехінів або лейкоціанідинів (або їх перехресна конденсація) внаслідок дії кисню повітря, тепла та кислого середовища. Аутоконденсація супроводжується розривом піранового кільця катехінів та С-2 вуглецевий атом однієї молекули з'єднується вуглець-вуглецевим зв'язком з С-6 або С-8 вуглецевим атомом іншої молекули. При цьому може утворюватися досить довгий ланцюг:
На думку іншого вченого - Д. Хатуея, конденсовані дубильні речовини можуть утворюватися в результаті ферментативної окислювальної конденсації молекул за типом "голова до хвоста" (кільце А до кільця В) або "хвіст до хвоста" (кільце В до кільця В):
У рослинах, що містять конденсовані дубильні речовини, обов'язково є їх попередники – вільні катехіни або лейкоціанідини. Часто зустрічаються змішані конденсовані полімери, що складаються з катехінів та лейкоціанідинів.
Як правило, в рослинах одночасно присутні дубильні речовини як конденсованої, так і груп, що гідролізується.
Фізико-хімічні властивості дубильних речовин. Дубильні речовини відрізняються високою молекулярною масою - до 20 000. Природні дубильні речовини, за невеликим винятком, відомі досі лише в аморфному стані. Причина цього полягає в тому, що ці речовини є сумішшю сполук, подібні за хімічною структурою, але розрізняються по молекулярній масі.
Дубильні речовини – це жовті або бурі сполуки, що утворюють у воді колоїдні розчини. Розчинні в етанолі, ацетоні, бутанолі і не розчиняються в розчинниках з вираженою гідрофобністю - хлороформ, бензол і т.п.
Галлотаніни погано розчиняються в холодній воді і відносно добре - у гарячій.
Дубильні речовини мають оптичну активність, легко окислюються на повітрі.
Завдяки наявності фенольних гідроксилів осідають солями важких металів і утворюють пофарбовані сполуки з Fe +3.
Виділення дубильних речовин із рослинної сировини. Оскільки дубильні речовини є сумішшю різних поліфенолів, їх виділення та аналіз становить певну труднощі.
Часто для отримання суми дубильних речовин сировину екстрагують гарячою водою (дубільні речовини погано розчиняються в холодній воді) та охолоджену витяжку обробляють органічним розчинником (хлороформ, бензол та ін) для видалення ліпофільних речовин. Потім дубильні речовини беруть в облогу солями важких металів з подальшим руйнуванням комплексу сірчаною кислотою або сульфідами.
Для отримання фракції дубильних речовин, подібних до хімічної структури, можна використовувати екстракцію сировини діетиловим ефіром, метиловим або етиловим спиртами з попереднім видаленням ліпофільних компонентів за допомогою розчинників з вираженою гідрофобністю - петролейним ефіром, бензолом, хлороформом.
Широко поширене виділення деяких компонентів дубильних речовин осадженням водних або водно-спиртових розчинів солями свинцю. Отримані опади потім обробляють розведеною сірчаною кислотою.
При виділенні індивідуальних компонентів дубильних речовин використовують хроматографічні методи: адсорбційну хроматографію на целюлозі, поліаміді; іонообмінну на різних катіонітах; розподільну на силікагелі; гельфільтрацію на молекулярних ситах.
Ідентифікацію індивідуальних компонентів дубильних речовин проводять за допомогою хроматографії на папері або тонкому шарі сорбенту, за допомогою спектрального аналізу, якісних реакцій та вивчення продуктів розщеплення.
Якісний аналіз дубильних речовин. Якісні реакції на дубильні речовини можна розділити на дві групи: реакції осадження та кольорові реакції. Для проведення якісних реакцій сировину найчастіше екстрагують гарячою водою.
Реакції осадження. 1. При взаємодії дубильних речовин з 1% розчином желатину, приготованому на 10% розчині хлориду натрію, утворюється осад або виникає помутніння розчину. При додаванні надлишку желатину помутніння зникає.
2. Таніди дають рясні опади з алкалоїдами (кофеїн, пахікарпін), а також деякими азотистими основами (уротропін, новокаїн, дибазол).
3. При взаємодії з 10% розчином оцтовокислого свинцю дубильні речовини групи, що гідролізується, утворюють пластівеподібний осад.
4. Дубильні речовини конденсованої групи утворюють пластівеподібний осад реакції з бромною водою.
Кольорові реакції.Дубильні речовини гідролізується з розчином залізоамонійних галунів утворюють чорно-сині забарвлені сполуки, а конденсованої групи - чорно-зелені.
Якщо в рослині одночасно містяться дубильні речовини і гідролізується і конденсованої групи, то спочатку таніди, що гідролізуються, осаджують 10% розчином ацетату свинцю, осад відфільтровують, а потім проводять реакцію фільтрату з розчином залізоамонійних галунів. Поява темно-зеленого забарвлення свідчить про наявність речовин конденсованої групи.
Кількісне визначення дубильних речовин. При тому що існує близько 100 різних способів кількісного визначення дубильних речовин, точний кількісний аналіз цієї групи біологічно активних речовин утруднений.
Серед широко застосовуваних спосіб кількісного визначення дубильних речовин можна назвати такі.
1. Гравіметричні – засновані на кількісному осадженні дубильних речовин желатином, солями важких металів тощо.
2. Титриметричні – засновані на окисних реакціях, насамперед з перманганатом калію.
3. Фотоелектроколориметричні – засновані на здатності дубильних речовин утворювати стійкі забарвлені продукти реакції із солями окисного заліза, фосфорновольфрамовою кислотою тощо.
Державною Фармакопеєю X та XI видань рекомендовано титриметричний спосіб кількісного визначення дубильних речовин.
Вміст (Table of Contents)
ОФС.1.5.3.0008.15 Визначення вмісту дубильних речовин у лікарській рослинній сировині та лікарських рослинних препаратах
Натомість ст. ДФ XI
Визначення вмісту дубильних речовин у лікарській рослинній сировині та лікарських рослинних препаратах проводять титриметричним та/або спектрофотометричним методами. Титриметричний метод полягає у визначенні суми дубильних речовин у перерахунку на танін, а спектрофотометричний метод дозволяє визначати суму дубильних речовин у перерахунку на пирогаллол.
Метод 1. Визначення суми дубильних речовин у перерахунку на танін
Близько 2 г (точна навішування) подрібненої лікарської рослинної сировини або лікарського рослинного препарату, просіяного крізь сито з отворами розміром 3 мм, поміщають у конічну колбу місткістю 500 мл, заливають 250 мл нагрітої до кипіння води і кип'ятять із зворотним спіраллю протягом 30 хв при періодичному перемішуванні. Отриманий витяг охолоджують до кімнатної температури і фільтрують через вату в мірну колбу місткістю 250 мл так, щоб частинки сировини/препарату не потрапили в колбу, доводять об'єм розчину водою до мітки і перемішують. 25,0 мл отриманого водного вилучення поміщають в конічну колбу місткістю 1000 мл, додають 500 мл води, 25 мл розчину індигосульфокислоти і титрують при постійному перемішуванні перманганату калію розчином 0,02 М до золотисто-жовтого фарбування.
Паралельно проводять контрольний досвід: конічну колбу місткістю 1000 мл поміщають 525 мл води, 25 мл розчину індигосульфокислоти і титрують при постійному перемішуванні калію перманганату розчином 0,02 М до золотисто-жовтого фарбування.
1 мл калію перманганату розчину 0,02 М відповідає 0,004157 г дубильних речовин у перерахуванні на танін.
(V – V 1 ) · 0,004157 · 250 · 100 · 100
X = ————————————————— ,
a· 25 · (100 - W)
V- Об'єм калію перманганату розчину 0,02 М, витраченого на титрування водного вилучення, мл;
V 1 - Об'єм калію перманганату розчину 0,02 М, витраченого на титрування в контрольному досвіді, мл;
0,004157 – кількість дубильних речовин, що відповідає 1 мл калію перманганату розчину 0,02 М (у перерахунку на танін), г;
a- навішування сировини або лікарського рослинного препарату, г;
W– вологість лікарської рослинної сировини або лікарського рослинного препарату, %;
250 - загальний обсяг водного вилучення, мл;
25 - обсяг водного вилучення, взятого для титрування, мл.
Примітка.Приготування розчину індигосульфокислоти. 1 г індигокарміну розчиняють у 25 мл сірчаної кислоти концентрованої, потім додатково додають 25 мл сірчаної кислоти концентрованої і розбавляють водою до 1000 мл, обережно вливаючи отриманий розчин у воду, в мірній колбі місткістю 1000 мл, перемішують.
Метод 2. Визначення суми дубильних речовину перерахунку на пирогаллол
Близько 0,5 - 1,0 г (точну навішення або іншу, вказану у фармакопейній статті або нормативної документації) подрібненої лікарської рослинної сировини або лікарського рослинного препарату, просіяного крізь сито з отворами розміром 0,18 мм, поміщають у конічну колбу місткістю , додають 150 мл води і кип'ятять на водяній бані зі зворотним холодильником протягом 30 хв. Отримане водне вилучення в колбі охолоджують до кімнатної температури, фільтрують через вату в мірну колбу місткістю 250 мл так, щоб частинки сировини не потрапили в колбу, об'єм розчину доводять водою до мітки і перемішують. Отриманий розчин фільтрують через паперовий фільтр діаметром близько 125 мм, відкидаючи перші 50 мл фільтрату.
Визначення проводять у захищеному від світла місці.
Визначення суми дубильних речовин. 5,0 мл фільтрату поміщають у мірну колбу місткістю 25 мл, доводять об'єм розчину водою до мітки та перемішують. 2,0 мл отриманого розчину поміщають у мірну колбу місткістю 25 мл, додають 1 мл фосфорномолібденововольфрамового реактиву, 10 мл води і доводять об'єм розчину до мітки карбонату натрію розчином 10,6 % (випробуваний розчин). Через 30 хв вимірюють оптичну щільність випробуваного розчину (А 1) на спектрофотометрі при довжині хвилі 760 нм у кюветі з товщиною шару 10 мм, використовуючи як розчин порівняння воду.
Визначення суми дубильних речовин, які не адсорбуються шкірним порошком.До 10,0 мл фільтрату додають 0,1 г шкірного порошку, отриману суміш перемішують протягом 60 хв і фільтрують через паперовий фільтр. 5,0 мл отриманого фільтрату поміщають у мірну колбу місткістю 25 мл, об'єм розчину доводять водою до мітки і перемішують. 2,0 мл отриманого розчину поміщають у мірну колбу місткістю 25 мл, додають 1 мл фосфорномолибденововольфрамового реактиву, 10 мл води, об'єм розчину доводять до мітки карбонату натрію розчином 10,6 % і перемішують (випробуваний розчин). Через 30 хв вимірюють оптичну щільність випробуваного розчину (А 2) на спектрофотометрі при довжині хвилі 760 нм у кюветі з товщиною шару 10 мм, використовуючи як розчин порівняння воду.
Паралельно вимірюють оптичну густину стандартного розчину.
2,0 мл розчину СО пірогаллола поміщають у мірну колбу місткістю 25 мл, додають 1 мл фосфорномолібденововольфрамового реактиву, 10 мл води, доводять об'єм розчину до мітки натрію карбонату розчином 10,6 % і перемішують (стандартний розчин). Через 30 хв вимірюють оптичну щільність стандартного розчину (А 3) на спектрофотометрі при довжині хвилі 760 нм у кюветі з товщиною шару 10 мм, використовуючи як розчин порівняння воду.
А 1– оптична щільність випробуваного розчину щодо суми дубильних речовин;
А 2 –оптична щільність випробуваного розчину щодо суми дубильних речовин, не адсорбируемых шкірним порошком, у перерахунку на пирогаллол;
А 3— оптична густина стандартного розчину;
a- навішування лікарської рослинної сировини або лікарського рослинного препарату, г;
a 0 - навішування СО пирогаллола, г;
W– вологість лікарської рослинної сировини або лікарського рослинного препарату, %.
Примітка. Приготування розчину СО пірогалолу. 0,05 г (точна навішування) СО пірогалолу поміщають у мірну колбу місткістю 100 мл, розчиняють у воді, доводять об'єм розчину водою до мітки, перемішують. 5,0 мл отриманого розчину поміщають у мірну колбу місткістю 100 мл, об'єм розчину доводять водою до мітки і перемішують. Розчин використовують свіжоприготованим.
Вступ
У рослинах однієї з найбільш поширених груп біологічно активних речовин (БАВ) є дубильні речовини (таніни), які мають широкий спектр фармакологічної активності.Дубильні речовинимають кровоспинну, в'яжучу, протизапальну, антимікробну дію, а також виявляють високу P-вітамінну активність, антисклеротичну та антигіпоксичну дію. Конденсовані дубильні речовини є антиоксидантами, що мають протипухлинний ефект. Танінивикористовують як протиотруту при отруєнні глікозидами, алкалоїдами, солями важких металів. У медицині дубильні речовини застосовуються в терапії таких захворювань як стоматити, гінгівіти, фарингіти, ангіни, коліт, ентероколіти, дизентерії, застосовують їх і при опіках, маткових, шлункових та гемороїдальних кровотечах..
Визначення змістудубильних речовин є важливою складовою у встановленні якості рослинної сировини, що містить таніни. Для визначення дубильних речовин існує різні методи, але найчастіше застосовуються титриметричний та спектрофотометричний методи.
Мета роботи– валідаційна оцінка методик кількісного визначення дубильних речовин за показниками збіжності, правильності, лінійності.
Матеріали та методи дослідження
Як об'єкт дослідження використовувалась сировина – повітряно-суха траваманжетки звичайної (Alchemilla vulgaris L.) сім. Розоцвіті (Rosaceae).
Для валідаційної оцінки методик кількісного визначення дубильних речовин у повітряно-сухій травіманжетки звичайної були обрані два методи: перманганатометричне титрування і спектрофотометрічне визначення на основі реакції з реактивом Фоліна-Чокальтеу. Вибір методик обґрунтований частотою використання їх на практиці.
Повітряно-суху травуманжетки звичайноїзаготовляли в у вересні 2015 року в Приморському районі Архангельської області, яка була сировиною для дослідження та кількісного визначення дубильних речовин (танінів).
Методика перманганатометричного визначення є фармакопейною, яка ізаснована на реакції окислення танінів розчином калію перманганату.Близько 2 г (точна навішування), подрібненої сировини, просіяної крізь сито з розміром отворів 3 мм, поміщали в конічну колбу місткістю 500 мл, додавали 250 мл нагрітої до кипіння води і кип'ятили зі зворотним холодильником на електричній плитці з закритою спіраль при періодичному перемішуванні. Отриманий витяг охолоджували до кімнатної температури і проціджували конічну колбу місткістю 250 мл через вату так, щоб частки сировини не потрапили в колбу. Відбирали піпеткою 25 мл отриманого вилучення та переносилив іншу конічну колбу місткістю 750 мл, додали 500 мл води, 25 мл розчину індигосульфокислоти та титрували при постійному перемішуванні розчином каліюперманганату (0,02 моль/л) до золотаво-жовтого фарбування.
Паралельно проводили контрольний досвід.
1 мл розчину перманганату калію (0,02 моль/л) відповідає 0,004157 г дубильних речовин у перерахуванні на танін.
Вміст дубильних речовин (Х) у відсотках, у перерахунку на абсолютну суху сировину, обчислили за формулою (1):
Де (1)
V – об'єм розчину перманганату калію (0,02 моль/л), витраченого на титрування вилучення, мл;
- Об'єм розчину перманганату калію (0,02 моль/л), витраченого на титрування в контрольному досвіді, мл;
0,004157 – кількість дубильних речовин, що відповідає 1 мл розчину перманганату калію (0,02 моль/л) (у перерахунку на танін), г;
250 - загальний обсяг вилучення, мл;
25 - обсяг вилучення, взятого для титрування, мл.
m- Маса сировини, г;
W- Втрата в масі при висушуванні сировини, г;
Для кількісного визначення дубильних речовин методом спектрофотометрії, близько 1 г (точна навішування) досліджуваної рослинної сировини, подрібненого до розміру частинок, що проходять через сита з розміром отворів 1 мм, поміщали в конічну колбу зі шліфом місткістю 50 мл, додавали 25 мл суміші у співвідношенні 7:3 (70% розчин ацетону). Колбу закривали і поміщали в лабораторний пристрій (ЛАБ ПУ-2, Росія) на 60 хвилин. Отримане вилучення фільтрували в мірну колбу місткістю 50 мл і об'єм доводили до мітки 70% розчином ацетону (розчин А).
У мірну колбу місткістю 10 мл поміщали 1 мл розчину А, об'єм розчину в колбі доводили очищеною водою до мітки (розчин Б).
0,5 мл розчину Б поміщали в мірну колбу місткістю 10 мл, додавали 2 мл очищеної води, 0,25 мл реактиву Фолена-Чокальтеу, 1,25 мл 20% розчину натрію карбонату і доводили об'єм розчину водою до мітки. Колбу залишали на 40 хвилин у захищеному від світла місці. Оптичну густину розчину визначали при довжині хвилі 750 нм. Як розчин порівняння використовували суміш реактивів без додавання вилучення.
Вміст дубильних речовин у витягах з рослинної сировини розраховували за значеннями градуювального графіка для побудови якого використовували 0,1 мг/мл розчин стандартного зразка CO таніну. З цією метою 0,05 г (точна маса) CO таніну поміщали в мірну колбу місткістю 100 мл, розчиняли в 30 мл води і об'єм в колбі доводили тим самим розчинником до мітки (розчин A).
1 мл отриманого розчину переносили у мірну колбу місткістю 10 мл. Об'єм розчину в колбі доводили водою до мітки (розчин Б).
Серію розчинів, що містять 1; 2; 3; 4; 5 мкг/мл CO таніну готували, поміщаючи навішування розчину Б у мірні колби місткістю 10 мл, додавали реактив Фоліна-Чокалтеу і 20% водний розчин карбонату натрію, об'єм розчинів в колбі доводили водою до мітки.
Розчини перемішували, колби укупорювали і витримували при кімнатній температурі в захищеному від світла місці протягом 40 хв.
Оптичну щільність одержаних розчинів визначали спектрофотометрично в кварцових кюветах з товщиною шару 1 см при довжині хвилі 725 нм щодо розчину порівняння.
Розчин порівняння був сумішшю реагентів без додавання CO таніну (розчин B).
За результатами проведених досліджень будували графік залежності оптичної густини від концентрації таніну (рис.1).
З урахуванням отриманих значень розраховували суму дубильних речовин у перерахунку на танін за формулою:
, де
Результати
Результати кількісного визначення дубильних речовин методом титрування наведено в табл. 1.
Таблиця 1. Результати кількісного визначення дубильних речовин методом перманганатометрії
| Маса навішування рослинної сировини, г | Об'єм перманганату калію (0,02 моль/л), витраченого на титрування отриманого вилучення з рослинної сировини, мл | Кількість дубильних речовин, % (X i) | |
|
2,10250 |
15,34892 |
15,72%
|
|
|
2,03255 |
15,21262 |
||
|
2,18345 |
15,84713 |
||
|
2,24350 |
16,24333 |
||
|
2,12465 |
15,85257 |
||
|
2,07055 |
15,80574 |
Середнє значення вмісту дубильних речовин у сировині становило 15,7%. Розраховане значення величини відносного стандартного відхилення (0,024%), що не перевищує 2%, що характеризує задовільну збіжність отриманих результатів.
Для визначення правильності методики використали метод добавки. З цією метою до колби для титрування додавали по 1 мл 0,05%, 0,1% і 0,15% CO таніну і титрували тричі для кожного випадку. Результати проведених досліджень представлені у табл. 2.
Таблиця 2. Визначення правильності методики перманганатометричного титрування дубильних речовин
| Кількість доданого СО таніну, г | Маса сировини, г | Розраховане кількість дубильних речовин, г | Знайдена кількість дубильних речовин, г | Відкриття, % | Метрологічні характеристики |
|
0,0005 |
2,2435 |
0,0357 |
0,0353 |
98,87 |
99,91%
|
|
2,1247 |
0,0339 |
0,0340 |
100,29 |
||
|
2,0706 |
0,0330 |
0,0337 |
102,12 |
||
|
0,001 |
2,2435 |
0,0362 |
0,0357 |
98,61 |
|
|
2,1247 |
0,0344 |
0,0340 |
98,84 |
||
|
2,0706 |
0,0335 |
0,0336 |
100,51 |
||
|
0,0015 |
2,2435 |
0,0367 |
0,0366 |
99,73 |
|
|
2,1247 |
0,0349 |
0,0353 |
101,14 |
||
|
2,0706 |
0,0340 |
0,0337 |
99,12 |
Отримані результати свідчать, що розрахований коефіцієнт Стьюдента менше табличного значення іметодика не містить систематичної помилки, що дозволяє зробити висновок про її правильність.
Для вивчення лінійності визначали залежність знайдених значень кількісного вмісту дубильних речовин від навішення рослинної сировини, що досліджується. З цією метою проводили кількісне визначення танінів у шести наважках повітряно-сухої сировини манжетки звичайної, що відрізняються за масою (табл. 3).
Таблиця 3. Залежність знайденого вмісту дубильних речовин від маси навішування рослинної сировини методом перманганатометрії
|
|
Об'єм калію перманганату, що пішов на титрування, мл |
|
|
2,0706 |
0,3159 |
|
|
3,0013 |
10,8 |
0,4490 |
|
4,0595 |
13,0 |
0,5404 |
|
5,1180 |
15,3 |
0,6360 |
|
6,1385 |
18,2 |
0,7566 |
За отриманими в ході проведених досліджень даними будували графік залежності певного вмісту дубильних речовин від маси навішування рослинної сировини, що досліджується (рис. 2) і розраховували коефіцієнт кореляції.
Мал. 2. Графік залежності знайденої кількості дубильних речовин від маси навішування повітряно-сухої сировини манжетки звичайної
Розрахований коефіцієнт кореляції не перевищував 0,95, що свідчить про лінійність результатів визначення вмісту досліджуваних речовин від маси навішування рослинної сировини, що аналізується, в зазначеному інтервалі концентрацій.
Результати кількісного визначення дубильних речовин у повітряно-сухій сировині трави манжетки звичайною методом спектрофотометрії представлені в табл. 4.
Таблиця 4. Результати кількісного визначення дубильних речовин методом спектрофотометрії
|
Маса навішування, г |
Оптична щільність розчину |
Знайдена кількість дубильних речовин, % (X i) |
Метрологічні характеристики |
|
|
1,02755 |
0,5957 |
7,30920 |
7,87340 |
7,84%
|
|
0,99745 |
0,6130 |
7,52147 |
8,34656 |
|
|
1,0068 |
0,5678 |
6,96687 |
7,65932 |
|
|
0,99580 |
0,5742 |
7,04539 |
7,83120 |
|
|
1,0060 |
0,5750 |
7,05521 |
7,76261 |
|
|
1,00670 |
0,5617 |
6,89202 |
7,57779 |
Середнє значення вмісту дубильних речовин у рослинній сировині становить 7,8% при відносному стандартному відхиленні (0,034%), що не перевищує 2%, що характеризує задовільну збіжність результатів.
Для визначення правильності методики використали метод добавки. З цією метою в колбу з первинним ацетоновим вилученням додавали по 1 мл 0,05%, 0,1% і 0,15% розчину таніну CO і далі проводили кількісне визначення дубильних речовин тричі для кожної концентрації. Результати проведених досліджень представлені у табл. 5.
Власники патенту UA 2439568:
Винахід відноситься до галузі фармакології та може бути використане для визначення дубильних речовин у рослинній сировині. Спосіб визначення дубильних речовин у рослинній сировині полягає в тому, що навішування сировини екстрагують водою при кип'ятінні, охолоджують, фільтрують, вимірюють оптичну щільність аліквотної проби при довжині хвилі 277 нм і розраховують вміст суми всіх дубильних речовин за певною формулою, далі до аліквот. 1% розчин колагену в 1% оцтовій кислоті, збовтують, фільтрують, вимірюють оптичну щільність фільтрату при довжині хвилі 277 нм і розраховують вміст дубильних речовин, що осаджуються, за певною формулою. Спосіб дозволяє підвищити точність визначення вмісту дубильних речовин у рослинній сировині і селективно визначити дубильні речовини, що осаджуються і не осаджуються, в рослинній сировині.
Винахід відноситься до хіміко-фармацевтичної промисловості, галузі фармакогнозії та фармацевтичної хімії і може бути використане для контролю якості рослинної сировини, що містить дубильні речовини.
Відомий спосіб визначення дубильних речовин у лікарській рослинній сировині (ЛРС) методом кулонометрії в перерахунку на танін (С.Г.Абдулліна та ін. Кулонометричне визначення дубильних речовин у лікарській рослинній сировині. // Фармація. №4. - 2010. - С.13 -15).
Недоліком даного способу є використання додаткового обладнання (кулонометра), специфічного титранту (гіпойодид калію), який за окисними властивостями наближається до перманганату калію і не дає змоги диференційовано визначити високо-і низькомолекулярні дубильні речовини.
Відомий також спосіб визначення вмісту таніну і похідних галової кислоти в чаї методом кондуктометрії (Патент №2127878. Спосіб роздільного визначення таніну і катехінів (у перерахунку на галову кислоту) в чаї. М.: 1999).
Недоліком даного способу є застосування токсичних органічних розчинників (ізобутиловий спирт), а також використання кольорової реакції з Fe (III), продуктом якої є нестабільна забарвлення в часі пофарбована сполука.
Відомий також спосіб кількісного визначення дубильних речовин у перерахунку на танін у листі скумпії та сумаха методом комплексонометрії після осадження дубильних речовин солями цинку (ГОСТ 4564-79. Лист скумпії. Технічні умови; ГОСТ 4565-79. Лист сумаха).
Недоліком цього способу є тривалість проведення аналізу та труднощі визначення точки еквівалентності.
Відомий також спосіб кількісного визначення дубильних речовин спектрофотометричним методом після реакції з реактивом Фоліна-Чокальтеу в перерахунку на галову кислоту. .- с.94-95).
Недоліком даного методу є неможливість роздільного визначення низько- та високомолекулярних дубильних речовин.
Найбільш близьким до пропонованого є спосіб, що полягає в тому, що дубильні речовини визначають методом спектрофотометрії в перерахунку на галову кислоту. м. – С.120).
Недоліком даного способу є багаторазове розведення випробуваного зразка, в результаті якого концентрація дубильних речовин у розчині погано визначається. Також у цьому способі розчином порівняння служить буферний розчин, що ускладнює проведення аналізу. Крім того, даний спосіб не дає можливість окремо визначити вміст низькомолекулярних та високомолекулярних дубильних речовин.
Завданням винаходу є підвищення точності визначення дубильних речовин і можливість роздільного визначення дубильних речовин, що осаджуються і не осаджуються в рослинній сировині.
Поставлене завдання вирішується тим, що навішування сировини екстрагують водою при кип'ятінні, охолоджують, фільтрують, вимірюють оптичну щільність аліквотної проби при довжині хвилі 277 нм та розраховують вміст суми всіх дубильних речовин за формулою
50 - обсяг колби, мл,
W - вологість сировини, %,
до аліквотної проби фільтрату додають 1% розчин колагену в 1% оцтовій кислоті, збовтують, фільтрують, вимірюють оптичну щільність фільтрату при довжині хвилі 277 нм і розраховують вміст дубильних речовин, що осаджуються, за формулою
D 1 - оптична щільність розчину 1,
D 2 - оптична щільність розчину 2,
m нав - маса навішування сировини, г,
V a - об'єм аліквотної проби, мл,
250 - загальний обсяг вилучення, мл,
50 - обсяг колби, мл,
508 - питомий показник поглинання галової кислоти (оптична щільність 1% розчину галової кислоти 1 мг/мл),
W – вологість сировини, %.
Практично спосіб здійснюється в такий спосіб. Близько 2,0 (точна навішування) подрібненої сировини, просіяної крізь сито з діаметром отворів 3 мм, поміщають у колбу місткістю 500 мл, заливають 250 мл нагрітої до кипіння води і кип'ятять 30 хв із зворотним холодильником при періодичному помішуванні. Охолоджують до кімнатної температури, доводять водою до 250 мл, проціджують через вату так, щоб частинки сировини не потрапили у витяг. Перші 50 мл фільтрату відкидають.
1-4 мл водного вилучення поміщають у мірну колбу місткістю 50 мл, доводять водою до мітки (розчин 1). Вимірюють оптичну густину розчину 1 при довжині хвилі 277 нм. Як порівняння використовують воду.
30 мл водного вилучення поміщають у мірну ємність місткістю 50 мл, додають 2-10 мл реактиву осадження, збовтують 30-60 хв, відстоюють, фільтрують. 1-4 мл отриманого фільтрату переносять у колбу місткістю 50 мл, доводять водою до мітки (розчин 2). Вимірюють оптичну густину розчину 2 при довжині хвилі 277 нм. Як порівняння використовують воду.
Винахід ілюструється наведеними нижче прикладами.
Приклад 1. Для аналізу взято рослинну сировину – кора дуба.
Близько 2,0 (точна навішування) подрібненої сировини кори дуба, просіяного крізь сито з діаметром отворів 3 мм, поміщають у колбу місткістю 500 мл, заливають 250 мл нагрітої до кипіння води і кип'ятять 30 хв зі зворотним холодильником при періодичному помішуванні. Охолоджують до кімнатної температури, доводять водою до 250 мл, проціджують через вату так, щоб частинки сировини не потрапили у витяг. Перші 50 мл фільтрату відкидають.
2 мл водного вилучення з кори дуба поміщають у мірну колбу місткістю 50 мл, доводять водою до мітки (розчин 1). Вимірюють оптичну густину розчину 1 при довжині хвилі 277 нм. Як порівняння використовують воду. D 1 для кори дуба дорівнює 0,595.
30 мл водного вилучення поміщають у мірну ємність місткістю 50 мл, додають 2 мл реактиву осадження, збовтують 30 хв, відстоюють, фільтрують. 2 мл отриманого фільтрату переносять у колбу місткістю 50 мл, доводять водою до мітки (розчин 2). Вимірюють оптичну густину розчину 2 при довжині хвилі 277 нм. Як порівняння використовують воду. D 2 для кори дуба дорівнює 0,276.
Приклад 2. Для аналізу взято рослинну сировину кореневища змійовика.
Близько 2,0 (точна навішування) подрібненої сировини кореневища змійовика, просіяного крізь сито з діаметром отворів 3 мм, поміщають у колбу місткістю 500 мл, заливають 250 мл нагрітої до кипіння води і кип'ятять 30 хв зі зворотним холодильником. Охолоджують до кімнатної температури, доводять водою до 250 мл, проціджують через вату так, щоб частинки сировини не потрапили у витяг. Перші 50 мл фільтрату відкидають.
1 мл водного вилучення з кореневища змійовика поміщають у мірну колбу місткістю 50 мл, доводять водою до мітки (розчин 1). Вимірюють оптичну густину розчину 1 при довжині хвилі 277 нм. Як порівняння використовують воду.
30 мл водного вилучення поміщають у мірну ємність місткістю 50 мл, додають 7 мл реактиву осадження, збовтують 60 хв, відстоюють, фільтрують. 1 мл отриманого фільтрату переносять у колбу місткістю 50 мл, доводять водою до мітки (розчин 2). Вимірюють оптичну густину розчину 2 при довжині хвилі 277 нм. Як порівняння використовують воду.
Пропонований спосіб дозволяє підвищити точність визначення вмісту дубильних речовин у рослинній сировині і селективно визначити дубильні речовини, що осаджуються і не осаджуються, в рослинній сировині.
Спосіб визначення дубильних речовин у рослинній сировині в перерахунку на галову кислоту, що полягає в тому, що навішування сировини екстрагують водою при кип'ятінні, охолоджують, фільтрують, вимірюють оптичну щільність аліквотної проби при довжині хвилі 277 нм і розраховують вміст суми всіх дубильних речовин за формулою 
де x a - вміст суми дубильних речовин у перерахунку на галову кислоту, %;
50 - об'єм колби, мл;
508 - питомий показник поглинання галової кислоти (оптична густина 1% розчину галової кислоти 1 мг/мл);
W - вологість сировини, %,
до аліквотної проби фільтрату додають 1%-ний розчин колагену в 1%-ній оцтовій кислоті, збовтують, фільтрують, вимірюють оптичну щільність фільтрату при довжині хвилі 277 нм і розраховують вміст дубильних речовин, що осаджуються, за формулою: 
де X - вміст дубильних речовин, що осаджуються в перерахунку на галову кислоту, %;
D 1 - оптична густина розчину 1;
D 2 - оптична густина розчину 2;
m нав - маса навішування сировини, г;
V a - об'єм аліквотної проби, мл;
250 - загальний обсяг вилучення, мл;
50 - об'єм колби, мл;
508 - питомий показник поглинання галової кислоти (оптична щільність 1% розчину галової кислоти 1 мг/мл);
W – вологість сировини, %.
Схожі патенти:
Винахід відноситься до медицини, а саме до психоневрології, та описує спосіб прогнозування відновлення неврологічних функцій у хворих у гострому періоді ішемічного інсульту шляхом проведення клінічних та біохімічних досліджень загальної концентрації альбуміну (ОКА) у сироватці крові у г/л, де додатково на 5-7 день захворювання визначають ефективну концентрацію альбуміну (ЕКА), розраховують резерв зв'язування альбуміну (РСА) і за величиною цього показника менше одиниці прогнозують негативний результат відновлення неврологічних функцій у хворих на гострий період ішемічного інсульту.
Винахід відноситься до медицини, біологічних досліджень в онкології, і може бути використане для визначення розвитку злоякісного процесу при пухлинах головного мозку після оперативного лікування.
Винахід відноситься до галузі медицини, конкретно до онкології, і описує спосіб оцінки ефективності неоад'ювантної хіміотерапії раку сечового міхура шляхом дослідження пацієнта, при якому проводять реєстрацію максимальної інтенсивності аутофлюоресценції пухлинних тканин в зеленій області спектру на етапі первинної діагностики і через 1 місяць після проведення при збільшенні у пацієнта значень максимальної інтенсивності аутофлюоресценції пухлинної тканини на 15% від вихідних і більше ефективність лікування оцінюють як часткову регресію пухлинного процесу, при відсутності змін показників інтенсивності аутофлюоресценції пухлинної тканини від вихідних визначають стабілізацію процесу, при зменшенні показників інтенсивності аут і більше вихідних відзначають прогресування пухлинного процесу.
Loading...