1 Призначення набору
1.1 Набір призначений для одночасного виявлення антитіл до вірусу імунодефіциту людини першого та другого типів (ВІЛ-1 та ВІЛ-2) та антигену р24 ВІЛ-1 у сироватці та плазмі крові людини “in vitro” методом непрямого твердофазного імуноферментного аналізу.
2 Характеристика та принцип роботи набору
2.1 Склад набору:
|
Найменування компонента |
Кількість |
|
Імуносорбент |
2 планшети |
|
Позитивний контрольний зразок АТ (К+АТ) |
1 флакон, 3 мл |
|
Позитивний контрольний зразок АГ (До + АГ) |
3 флакони, ліофілізований препарат |
|
Негативний контрольний зразок (К -) |
2 флакони по 3 мл |
|
Розчин кон'югату №1 (РК-1) |
1 флакон, 12 мл |
|
Кон'югат №2 (Кг-2) |
1 флакон, 1 мл |
|
Розчин для розведення кон'югату №2 (РР-К2) |
2 флакони по 18 мл |
|
Буферний розчин для субстрату ( БРС) |
2 флакони по 18 мл |
|
Хромоген ТМБ |
1 флакон, 1 мл |
|
Концентрат фосфатно-сольового буферного розчину з твіном (ФСБ-Т×25) |
2 флакони по 50 мл |
|
Стоп-реагент |
1 флакон, 12 мл |
|
Комплект ванни для реагентів з наконечниками для багатоканальних піпеток. |
1 комплект |
|
Клейка плівка |
2.2 Основні компоненти набору "ІФА-HIV 1,2 AGAT" - імуносорбент, розчин кон'югату №1 та кон'югат №2.
Імуносорбентявляє собою полістироловий планшет, у лунках якого сорбована суміш рекомбінантних антигенів ВІЛ-1 (gp41) та ВІЛ-2 (gp36) та моноклональних антитіл до антигену р24 ВІЛ-1.
Розчин кон'югату №1являє собою суміш мічених моноклональних біотином людських антитілпроти антигену р24 ВІЛ-1 та мічених біотином рекомбінантних білків ВІЛ-1 та ВІЛ-2.
Кон'югат №2є стрептавідин, кон'югований з пероксидазою хрону.
Позитивний контрольний зразок АТ– сироватка крові людини, що містить антитіла до ВІЛ-1 та ВІЛ-2, не містить антитіла до вірусу гепатиту С та Treponema pallidum, антиген р24 ВІЛ-1 та НВs-антиген, інактивована прогріванням протягом 3 годин при температурі 56 ºC.
Позитивний контрольний зразок АГ- Сироватка крові людини, що містить нативний антиген р24 ВІЛ-1, не містить антитіла до ВІЛ-1, ВІЛ-2, вірусу гепатиту С і Treponema pallidum і НВs-антиген, інактивована прогріванням протягом 3 годин при температурі 56 ºC.
Негативний контрольний зразок– сироватка крові людини, що не містить антитіла до ВІЛ-1, ВІЛ-2, ВГС, антиген р24 ВІЛ-1 та НВs-антиген, інактивована прогріванням протягом 3 годин при температурі 56 ºC.
Принцип набору.При внесенні в лунки планшета розчину кон'югату №1 та зразків сироваток інфікованої кровіантиген р24 зв'язується як зі специфічними антитілами на твердій фазі, так і з моноклональними біотинільованими анти-р24 антитілами, що входять до складу розчину кон'югату №1; ВІЛ-специфічні антитіла зв'язуються як з рекомбінантними антигенами ВІЛ-1 та ВІЛ-2, сорбованими на твердій фазі, так і з антигенами, що входять до складу розчину кон'югату №1, утворюючи комплекси антиген-антитіло. Імунні комплекси анти-р24 специфічних антитіл та антигену р24 виявляються кон'югатом №2. Після відмивання компонентів, що не зв'язалися в лунки планшета додають розчин субстрату пероксидази (перекис водню) і хромогену ТМБ.
Пероксидазну реакцію зупиняють, додаючи стоп-реагент (0,9 М розчин сірчаної кислоти) і інтенсивність фарбування розчину в лунках вимірюють на спектрофотометрі як величину оптичної щільності (ОП) при довжині хвилі 450 нм.
Величина ВП прямо пропорційна концентрації специфічних антитіл та/або антигену р24 у зразку сироватки або плазми. Чим вище вміст антитіл та/або антигену р24 у зразку сироватки, тим вище інтенсивність фарбування.
2.3 Набір розрахований на проведення на проведення 24 постановокІФА: 1 постановка – 1 стрип (8 лунок). Усього - 192 визначеньвключаючи контрольні зразки.
3 Запобіжні заходи при роботі з набором
3.1 Всі компоненти набору в концентраціях, що використовуються, є нетоксичними. Однак робота з усіма досліджуваними зразками сироватки (плазми) крові людини, які слід розглядати як потенційно інфіковані, здатні зберігати та передавати ВІЛ, вірус гепатиту В або будь-який інший збудник вірусної інфекції, з відпрацьованими розчинами та рідинами, різним обладнанням, яке може бути забруднене в процесі аналізу, вимагає певних заходів безпеки при використанні набору:
Роботу необхідно проводити у спеціально обладнаному приміщенні;
Працювати необхідно із застосуванням засобів індивідуального захистуі з дотриманням запобіжних заходів відповідно до вимог , , і .
3.2 Стоп-реагент, що містить сірчану кислоту, має дратівливою дією. При попаданні на шкіру та слизові оболонки негайно промити великою кількістю води.
3.3 Під час роботи з набором робочі місця мають бути забезпечені припливно-витяжною вентиляцією.
3.4 Усі особи, які працюють у лабораторії з наборами, повинні проходити обов'язковий медичний огляд відповідно до вимог .
3.5 Утилізація медичних відходів та/або невикористаних наборів зі строком придатності, що минув, повинна проводитися відповідно до вимог .
4 Правила роботи з набором
4.1 Для виключення хибних результатів досліджувані зразки необхідно готувати та зберігати в умовах, що запобігають бактеріальному проросту. Необхідно висвітлювати зразки сироваток, що містять агреговані компоненти сироватки або осад, за допомогою центрифугування протягом (5-10) хв при швидкості обертання 3000 об/хв. Зразки сироваток можна зберігати при температурі (2-8) °С трохи більше 5 діб. Заморожені зразки (бажано до температури не менше 20 °С) можна зберігати не більше 1 року. Необхідно уникати повторних циклів заморожування-відтавання зразків.
Необхідно пам'ятати, що зразки з гемолізом, гіперліпідемією, бактеріальним проростом, а також тривалі без заморожування, що зберігалися, не придатні для аналізу.
Надійність результатів залежить від виконання наступних правил:
Не допускається використання набору після закінчення терміну придатності та змішування компонентів наборів різних серій;
Для приготування кожного реагенту має використовуватись окрема ємність;
Весь посуд, що використовується для приготування реагентів, не обробляти дезрозчинами та миючими засобами. У разі потреби промити водою питною проточною, а потім п'ять разів обполоснути дистильованою водою;
Для роботи з хромогеном ТМБ та РХ необхідно використовувати окремі ємності для розчинів, наконечники для піпеток, посуд.
Необхідно звернути увагу на ретельне перемішування реагентів;
Час між заповненням та випорожненням лунок планшета розчинами та реагентами має бути не менше 30 с. Не допускається підсихання лунок всіх етапах постановки ИФА;
При використанні промивача слідкувати за станом ємності для розчину для промивання планшета та сполучних шлангів: у них не повинно бути ознак бактеріального або грибкового росту;
Необхідно використовувати автоматичні піпетки зі змінними наконечниками, атестовані за значенням середньої дози та збіжності результатів піпетування (похибка не більше 3 %);
Дозатори та робочі поверхні обробляти розчином з об'ємною часткою етилового спирту 70 %. Не використовувати хлорамін та інші речовини, що містять хлор;
Для роботи з досліджуваними та контрольними зразками рекомендується використовувати одноразові наконечники для піпеток. Кожен зразок сироватки та реагенти набору необхідно відбирати окремим наконечником.
При внесенні в лунки РК-1 не можна торкатися наконечником піпетки поверхні планшета та розчину, що знаходиться у лунках.
Під час проведення аналізу слід уникати потрапляння прямих сонячних променів на робочу поверхню.
4.2 При розтині та розчиненні ліофілізованих компонентів необхідно стежити, щоб на кришці та стінках флаконів не залишалося сухої речовини.
5 Обладнання та матеріали, необхідні для проведення аналізу
5.1 Спектрофотометр вертикального сканування, що дозволяє проводити вимірювання оптичної густини розчинів у лунках планшета при довжині хвилі 450 нм;
Напів-або автоматичний пристрійдля промивання планшетів (вошер);
Сухоповітряний термостат типу ТС-80 М2, що підтримує температуру (37±1) °С, або аналогічний йому за характеристиками;
Піпетки автоматичні одноканальні зі змінними наконечниками, що дозволяють відбирати обсяги рідини від 0,01 до 5,0 мл;
Піпетки 8-канальні автоматичні зі змінними наконечниками, що дозволяють відбирати обсяги рідини до 0,5 мл;
Мірний циліндр місткістю 2000 мл;
Колба лабораторна місткістю 2000 мл;
Флакони скляні місткістю 20 мл;
Ванни для реагентів або чашки Петрі (діаметр 100 мм);
Вата медична гігроскопічна;
Папір фільтрувальний;
Рукавички гумові хірургічні;
Розчин з об'ємною часткою етилового спирту 70 %;
Розчин з масовою часткоюперекису водню 6%;
Вода деіонізована або дистильована;
Контейнер для збирання твердих відходів;
Контейнер для зливу рідких відходів.
6 Підготовка до проведення аналізу
6.1 Набір реагентів перед проведенням аналізу витягти з холодильника, відкрити кришку коробки та витримати компоненти набору за температури (18-25) °С протягом 30 хв.
Усі зразки сироваток (плазми) та реагенти перед проведенням аналізу ретельно перемішати.
Витрата реагентів набору для постановки аналізу, що визначається кількістю стрипів, що використовуються, наведено в таблиці А.1 Додатка А.
6.2 Приготування розчину для промивання планшета
Увага!Розчин для промивання планшета готувати за 15 хв до початку аналізу!
Якщо флакон ФСБ-Т×25 містить осад, його необхідно прогріти перед використанням при температурі (37±1) °С до повного розчинення осаду. У мірний циліндр місткістю 2000 мл внести вміст флакона з ФСБ-Т×25, потім додати дистильованої води до мітки 1250 млта акуратно перемішати розчин. Розчин можна зберігати за температури (2-8) °С протягом 72 год.
У разі використання одного або декількох стрипів вміст флакона з ФСБ-Т×25 інтенсивно струсити протягом (20-30) с, відібрати необхідний об'єм розчину (таблиця А.1) у мірну склянку або циліндр, додати необхідну кількість дистильованої води та перемішати розчин . Невикористаний ФСБ-Т×25 можна зберігати у закритому флаконі при температурі (2-8) °С протягом терміну придатності набору.
6.3 Підготовка імуносорбенту
Імуносорбент готовий до використання.
Відкрити пакет та встановити на рамку необхідну кількість стрипів. Стрипи, що залишилися, зберігати в щільно закритому пакеті з вологопоглиначем при температурі (2-8) °С протягом 3 місяців.
6.4 Підготовка К + АТ, К – , РК-1, РР-К2, БРС та стоп-реагенту
К + АТ, К - , РК-1, РР-К2, БРС та стоп-реагент готові до використання.
Увага!У флаконі з РК-1 можливе випадання осаду. Для проведення аналізу необхідно використовувати надосадову рідину.
Невикористані РК-1, РР-К2, БРС та стоп-реагент після розкриття флаконів можна зберігати у закритих флаконах при температурі (2-8) °С протягом терміну придатності набору.
Залишок К + АТ і К - після розтину флакона можна зберігати у закритих флаконах при температурі (2-8) °С протягом терміну придатності набору.
6.5 Приготування розчину К+АГ
Увага!Розчин К+АГ готувати за 15 хв до початку проведення аналізу!
Для відновлення ліофілізованого К+АГ перед розкриттям флакона легким постукуванням струсити частинки, що прилипли до стінок флакона або пробки. Відкрити флакон та покласти пробку перевернутою на суху поверхню. Внести у флакон 0,8 мл дистильованої води. Флакон закрити пробкою, витримати протягом 10 хв при температурі (18-25) °С і акуратно нахиляючи і обертаючи флакон, перемішати його до повного розчинення, уникаючи утворення піни.
Відновлений К+АГ можна зберігати в закритому флаконі при температурі (2-8) °С протягом одного місяця, при температурі мінус 20 °С протягом шести місяців. Допускається одноразове заморожування-відтавання відновленого К+АГ.
6.6 Приготування розчину Кг-2 у робочому розведенні
З флакона з Кг-2 відібрати вказаний у таблиці А.1 обсяг і перенести у флакон з РР-К2. Вміст флакона ретельно перемішати, не допускаючи утворення піни.
У разі використання одного або кількох стрипів у чистий флакон відібрати необхідну кількість РР-К2, додати Кг-2 відповідно до таблиці А.1 і перемішати розчин, не допускаючи утворення піни.
Увага!Розчин Кг-2 у робочому розведенні готують безпосередньо перед використанням! Розчин Кг-2 у робочому розведенні можна зберігати протягом 15 хв при температурі (18-25) °С. Використовувати тільки нову ванну для реагентів і нові наконечники!
Залишок Кг-2 можна зберігати у закритому флаконі при температурі (2-8) °С протягом терміну придатності набору.
6.7 Приготування робочого розчину субстрату
Флакон із хромогеном ТМБ необхідно прогріти перед використанням при температурі (37±1)° З до повного розчинення кристалів.
З флакона з хромогеном ТМБ відібрати зазначений у таблиці А.1 обсяг і перенести у флакон з БРС. Вміст флакона ретельно перемішати, не допускаючи утворення піни.
У разі використання одного або декількох стрипів у чистий флакон відібрати необхідну кількість БРС, додати хромогену ТМБ відповідно до таблиці А.1 та перемішати розчин, не допускаючи утворення піни.
Увага!Робочий розчин субстрату готують безпосередньо перед використанням у захищеному від світла місці! Розчин можна зберігати протягом 20 хв при температурі (18-25) °С у захищеному від світла місці.
Розчин необхідно запобігати попаданню світла та контакту з металами або іонами металів. Перед використанням розчин субстрату має бути безбарвним. Посуд, який в ході реакції контактуватиме з розчином субстрату, відмиватиме без застосування синтетичних миючих засобів. Використовувати тільки нову ванну для реагентів і нові наконечники!
Залишок хромогену ТМБ можна зберігати у закритому флаконі при температурі (2-8) °С протягом терміну придатності набору.
7 Вимоги до промивання планшета
На всіх етапах промивання необхідно контролювати заповнення всіх лунок та повне видалення(аспірацію) рідини з них;
Необхідно при кожному промиванні всі лунки заповнити розчином до країв (0,30-0,35 мл у лунку), без переповнення та перетікання рідини із сусідніх лунок;
Необхідно витримувати лунки, заповненими розчином для промивання планшета протягом 30 с;
При кожній аспірації ретельно видаляти залишки рідини з лунок постукуванням рамкою зі стрипами в перевернутому положенні по складеному в кілька разів фільтрувальному папері, покладеному на лист поліетилену;
Неякісне промивання планшета призводить до одержання некоректних результатів.
8 Проведення аналізу
8.1 У будь-які дві лунки планшета внести по 0,07 мл(70 мкл) К+АТ, в дві інші лунки - по 0,07 мл(70 мкл) К+АГ, в три інші лунки - по 0,07 мл(70 мкл) К - .
Увага!При постановці ІФА на одному стрипі допускається використовувати для - дві лунки, для К + АТ - одну лунку, для К + АГ - одну лунку.
В інші лунки планшета внести по 0,07 мл(70 мкл) досліджуваних зразків сироватки (плазми) крові людини.
Увага!Кожен зразок необхідно відбирати одноразовим наконечником!
8.2 У всі лунки планшета поверх контрольних зразків та досліджуваних зразків сироватки (плазми) крові відразувнести по 0,05 мл(50 мкл) РК-1. Вміст лунок перемішати обережним постукуванням по краях планшета.
8.3 (37 ± 1) ° З протягом 60 хв.
Увага!За (1-2) хв до закінчення інкубації приготувати розчин Кг-2 у робочому розведенні (п 6.6).
8.4 Видалити вміст лунок за допомогою промивача, потім промити лунки планшета розчином для промивання планшета (п 6.2) сім разів.
8.5 Внести у всі лунки планшета по 0,15 мл(150 мкл) розчину Кг-2у робочому розведенні (п 6.6).
8.6 Планшет заклеїти плівкою або закрити кришкою та інкубувати в термостаті за температури (37 ± 1) ° З протягом 10 хв.
8.7 Видалити вміст лунок планшета за допомогою промивача, потім промити лунки планшетів розчином для промивання планшета (п 6.2) сім разів.
8.8 У всі лунки планшета внести по 0,15 мл(150 мкл) робочого розчину субстрату(П 6.7).
При приготуванні робочого розчину субстрату (п.6.7)ф лакон із хромогеном ТМБ необхідно прогріти перед використанням протягом (3-5) хв при температурі (37)± 1)° до повного розчинення кристалів.
8.9 Планшет заклеїти плівкою або закрити кришкою та інкубувати в термостаті за температури (37 ± 1) ° З у захищеному від світла місці протягом 15 хв.
Увага!Після закінчення інкубації у лунках із зразками сироваток, що містять антитіла до ВІЛ-1 та/або ВІЛ-2, та/або антиген р24 ВІЛ-1, відбудеться зміна забарвлення розчину від безбарвної до блакитної різної інтенсивності залежно від концентрації антитіл та/або антигену у досліджуваному зразку сироватки.
8.10 Зупинити пероксидазну реакцію шляхом внесення у всі лунки по 0,05 мл(50 мкл) стоп-реагенту.
Увага!У лунках із зразками сироваток, що містять антитіла до ВІЛ-1 та/або ВІЛ-2, та/або антиген р24 ВІЛ-1, відбудеться зміна забарвлення розчину з блакитною на жовту різну інтенсивність.
8.11 Не пізніше ніж через (1-2) хв після зупинки реакції визначити ОП у лунках в однохвильовому режимі при довжині хвилі 450 нм.
9 Обробка результатів аналізу
9.2 Результати враховувати тільки в тому випадку, якщо:
Значення ОПср К - не перевищує 02 ОЕ;
Кожне окреме значення ОП К - повинно відхилятися від ОПср К - більш як 30%. Якщо одне із трьох значень ОП К - виходить за цю межу, його слід виключити з розрахунку ОПср К - . Якщо з трьох значень ВП К - виходять цей ліміт, аналіз слід повторити на реагентах нового набору;
Значення ОПср К + АТ понад 1,0 ОЕ;
Значення ОПср К + АГ понад 1,0 ОЕ.
9.3 При дотриманні перерахованих вище умов обчислити критичне значення (ОПкрит.), ОЕ, за формулою (1):
ОПкрит. = ОПср К - + 0,14 (1).
10 Аналітичні та діагностичні характеристики
Чутливістьнабору реагентів ІФА-HIV 1,2 AGATз виявлення антигену р24 ВІЛ-1 –
Специфіканабору реагентів ІФА-HIV 1,2 AGAT- 100% Стандарт АТ (-) ВІЛ. Стандартна панель сироваток, що не містять антитіла до вірусу імунодефіциту людини першого та другого типів (ВІЛ-1,2) та антиген ВІЛ-1(р24). ОСО42-28-214-02П. ЗАТ "МБС".
11 Форма випуску набору
11.1 Набір випускається у п'яти варіантах комплектації:
1 комплект 1Р - проведення аналізу ручним способом. Набір розрахований для проведення 12 постановок ІФА на розбірному планшеті: 1 постановка – 1 стрип (8 лунок). Усього – 96 визначень, включаючи контрольні зразки;
2 комплект 2М - проведення аналізу ручним способом. Набір розрахований для проведення 2 постановок ІФА на монолітних планшетах: 1 постановка – 1 планшет. Усього – 192 визначень, включаючи контрольні зразки;
3 комплект 2Р- Проведення аналізу ручним способом. Набір розрахований на проведення 24 постановокІФА на 2 розбірніх планшетах: 1 постановка - 1 стрип (8 лунок). Усього - 192 визначень, включаючи контрольні зразки;
4 комплект А2М - проведення аналізу на автоматичному аналізаторі. Набір розрахований для проведення 2 постановок ІФА на монолітних планшетах: 1 постановка – 1 планшет. Усього – 192 визначень, включаючи контрольні зразки;
5 комплект А2Р - проведення аналізу на автоматичному аналізаторі. Набір розрахований для проведення 24 постановок ІФА на 2 розбірних планшетах: 1 постановка – 1 стрип (8 лунок). Усього – 192 визначень, включаючи контрольні зразки.
12 Умови зберігання та застосування набору
12.1 Зберігання набору повинно проводитися в чистому, захищеному від вологи та світла приміщенні при температурі (2-8) ° С протягом усього терміну придатності. Забороняється заморожувати компоненти набору.
12.2 Для отримання надійних результатів необхідно дотримуватися інструкції щодо застосування набору.
12.3 Термін придатності набору 12 місяців.
Додаток А
Таблиця А.1 - Витрата реагентів набору для постановки ІФА
|
реагенту, мл |
Кількість стрипів, що використовуються, шт. |
|||||||||||
|
Приготування розчину для промивання планшета |
||||||||||||
|
ФСБ-Т×25 |
||||||||||||
|
Дистильована вода |
||||||||||||
|
Приготування розчину Кг-2 у робочому розведенні |
||||||||||||
|
РР-К2 |
||||||||||||
|
Приготування робочого розчину субстрату |
||||||||||||
|
Хромоген ТМБ |
||||||||||||
Бібліографія
|
Санітарні правила |
Наказ Міністерства охорони здоров'я Республіки Білорусь у від 16.12.1998 р. № 351 Про перегляд відомчих нормативних актів, які регламентують питання щодо проблеми ВІЛ/СНІД |
|
|
Наказ Міністерства охорони здоров'я Республіки Білорусь у від 25.11.2002 р. № 165 Про проведення дезінфекції та стерилізацію закладами охорони здоров'я |
||
|
Постанова Міністерства охорони здоров'я Республіки Білорусь від 28.04.2010 р. № 47 Про затвердження Інструкції про порядок проведення обов'язкових медичних оглядівпрацюючих та визнання такими, що втратили чинність, деяких постанов Міністерства охорони здоров'я Республіки Білорусь |
||
Унікальний номер реєстрового запису
Реєстраційний номер медичного виробу
ФСР 2011/10182
Дата державної реєстрації медичного виробу
Найменування медичного виробу
Набір реагентів "МілаЛаб-ІФА-ВІЛ-АГАТ" тест-система імуноферментна для виявлення антитіл до вірусів імунодефіциту людини 1 та 2 типів (ВІЛ-1 та ВІЛ-2), ВІЛ-1 групи Про та антигену р24 ВІЛ-1 за ТУ 9398 -187-05941003-2017
у складі: - Імуносорбент - планшет полістироловий 96-лунковий розбірний до стрипів (або до лунок), в лунках якого сорбовані штучні антигени - gp160, gp41, p31 ВІЛ-1, gp41 ВІЛ-1 групи О, gp36 ВІЛ-2 та анти антигену p24 ВІЛ-1: комплект 1 (1 планшет), комплект 2 (2 планшети), комплект 3 (5 планшетів), - Кон'югат-1: комплект 1 (1 фл. 1,2 мл), комплект 2 (1 фл. 1,2 мл), комплект 3 (1 фл. 3,6 мл або 3 фл. по 1,2 мл), - Кон'югат-2: комплект 1 (1 фл. 2,0 мл), комплект 2 (1 фл. 2,0 мл), комплект 3 (1 фл. 4,0 мл або 2 фл. по 2,0 мл), - РРК-1 - розчин для розведення Кон'югату-1: комплект 1 (1 фл. 12,0 мл) , комплект 2 (1 фл. 12,0 мл), комплект 3 (3 фл. по 12,0 мл), - РРК-2 - розчин для розведення Кон'югату-2: комплект 1 (1 фл. 20,0 мл), комплект 2 (1 фл. 20,0 мл), комплект 3 (2 фл. по 20,0 мл) - К+АТ - контрольний позитивний зразок, що містить антитіла до ВІЛ: комплект 1 (1 фл. 2,0 мл), комплект 2 (1 фл. 2,0 мл), комплект 3 (1 фл. 4,0 мл або 2 фл. по 2,0 мл) , - К+АГ - контрольний позитивний зразок, що містить штучний антиген р24 ВІЛ-1: комплект 1 (1 фл. 2,0 мл), комплект 2 (1 фл. 2,0 мл), комплект 3 (1 фл. 4, 0 мл або 2 фл. по 2,0 мл), - К- - контрольний негативний зразок: комплект 1 (1 фл. 2,5 мл), комплект 2 (1 фл. 2,5 мл), комплект 3 (1 фл. 5,0 мл або 2 фл. по 2,5 мл), - ПР - промивний розчин: комплект 1 (1 фл. 50,0 мл), комплект 2 (1 фл. 120,0 мл), комплект 3 (2 фл. по 120,0 мл), - Стоп-реагент: комплект 1 (1 фл. 25,0 мл), комплект 2 (2 фл. по 25,0 мл), комплект 3 (2 фл. по 50,0 мл або 4 фл по 25,0 мл), - СБ - субстратний буферний розчин: комплект 1 ( 1 фл. 25,0 мл), комплект 2 (1 фл. 25,0 мл), комплект 3 (2 фл. по 50,0 мл або 3 фл. ,3",5,5"-тетраметилбензидин: комплект 1 (1 фл. 2,5 мл), комплект 2 (1 фл. 2,5 мл), комплект 3 (2 фл. по 3,5 мл або 3 фл. по 2,5мл). Приладдя: - кришки до полістиролових 96-місячних планшетів: комплект 1 (1 шт.), комплект 2 (2 шт.), комплект 3 (5 шт.) або - захисні плівки для ІФА-планшетів: комплект 1 (2 шт.) , Комплект 2 (4 шт.), Комплект 3 (10 шт.), - Наконечники одноразові: комплект 1 (16 шт.), Комплект 2 (32 шт.), Комплект 3 (80 шт.), - Ванночки пластикові для рідких реагентів: комплект 1 (2 шт.), комплект 2 (4 шт.), комплект 3 (10 шт.) - пакети поліетиленові із замком Zip-Lock: комплект 1 (1 шт.), комплект 2 (2 шт.) , Комплект 3 (3 шт.).
Назва організації - заявника медичного виробу
Місце знаходження організації-заявника медичного виробу
Юридична адреса організації-заявника медичного виробу
603014, Росія, м. Київ Нижній Новгород, вул. Комінтерну, д. 47
Назва організації-виробника медичного виробу або організації-виробника медичного виробу
ТОВ "НВО "Діагностичні системи"
Місце знаходження організації-виробника медичного виробу або організації - виробника медичного виробу
603093, Росія, м. Нижній Новгород, вул. Яблунева, б. 22, а/с 69
Юридична адреса організації-виробника медичного виробу або організації - виробника медичного виробу
Своєчасна діагностика ВІЛ-інфекції стає вкрай важливим заходом, тому що раніше початок лікування може багато в чому визначити подальший розвитокзахворювання та продовжити життя хворого. У Останніми рокамиспостерігається вагомий прогрес у галузі виявлення цієї страшної хвороби: на зміну старим тест-системам приходять досконаліші, методи обстеження стають доступнішими, і їх точність значно підвищується.
У цій статті розповімо про сучасні методи діагностики ВІЛ-інфекції, знати які корисно своєчасного лікуванняданої проблеми та підтримання нормальної якості життя хворого.
Методики діагностики ВІЛ
У Росії для діагностики ВІЛ-інфекції проводиться стандартна процедура, Що включає два рівні:
- ІФА тест-система(скринінговий аналіз);
- імунний блот (ІБ).
Також для діагностики можуть застосовуватись інші методики:
- експрес-тести.
ІФА тест-системи
На першому етапі діагностики для виявлення ВІЛ-інфекції застосовується скринінговий тест (ІФА), який заснований на створених у лабораторіях білках ВІЛ, що уловлюють специфічні антитіла, що виробляються в організмі у відповідь на інфікування. Після їхньої взаємодії з реагентами (ферментами) тест-системи змінюється забарвлення індикатора. Далі ці зміни кольору обробляються на спеціальній апаратурі, яка визначає результат виконаного аналізу.
Такі ІФА-тести здатні показувати результат уже за кілька тижнів після впровадження ВІЛ-інфекції. Цей аналіз визначає не наявність вірусу, а виявляє вироблення антитіл щодо нього. Іноді, в організмі людини вироблення антитіл до ВІЛ починається через 2 тижні на полі зараження, але у більшості людей вони виробляються на більш пізніх термінах, через 3-6 тижнів.
Існує чотири покоління ІФА-тестів із різною чутливістю. В останні роки частіше застосовуються тест-системи III і IV покоління, які створені на основі синтетичних пептидів або рекомбінантних білків і мають більшу специфічність і точність. Вони можуть використовуватися для діагностики ВІЛ-інфекції, моніторингу поширеності ВІЛ та забезпечення безпеки під час перевірки донорської крові. Точність ІФА-тест-систем III та IV покоління складає 93-99% (більш чутливі тести, що випускаються у країнах західної Європи – 99%).
Для виконання ІФА-тесту проводиться забір 5 мл крові із вени пацієнта. між останнім прийомомїжі та аналізом має пройти не менше 8 годин (як правило, він виконується вранці натще). Такий тест рекомендується складати не раніше, ніж через 3 тижні після передбачуваного зараження (наприклад, після незахищеного статевого акту з новим статевим партнером).
Результати ІФА-тесту виходять через 2-10 днів:
- негативний результат: вказує на відсутність інфікування ВІЛ та не вимагає звернення до фахівця;
- помилковонегативний результат: може спостерігатися на ранніх термінахінфікування (до 3 тижнів), при пізніх стадіяхСНІДу при вираженому придушенні імунітету та при неправильно проведеній підготовці крові;
- помилково позитивний результат: може спостерігатися при деяких захворюваннях та при неправильно проведеній підготовці крові;
- позитивний результат: вказує на зараження ВІЛ-інфекцією, вимагає проведення ІБ та звернення пацієнта до спеціаліста до центру СНІДу.
Чому ІФА-тест може давати хибно-позитивні результати?
Хибнопозитивні результати ІФА-тесту на ВІЛ можуть спостерігатися при неправильній обробці крові або у хворих з такими станами та захворюваннями:
- множинна мієлома;
- інфекційні захворювання, спровоковані вірусом Епштейна Барр;
- стан після;
- аутоімунні захворювання;
- на фоні вагітності;
- стан після вакцинації.
При вищеописаних причинах у крові можуть бути неспецифічні перехресно реагують антитіла, вироблення яких було спровоковано не ВІЛ-інфекцією.
В останні роки частота хибнопозитивних результатів суттєво знизилася завдяки застосуванню тест-систем III та IV покоління, які містять більш чутливі пептидні та рекомбінантні білки (вони синтезуються за допомогою генної інженерії in vitro). Після початку застосування таких ІФА-тестів частота хибнопозитивних результатів значно знизилася і становить близько 0,02-0,5%.
Виявлення хибно позитивного результатуне означає, що людина інфікована ВІЛ. У таких випадках ВООЗ рекомендує провести ще один ІФА-тест (обов'язково IV покоління).
Кров пацієнта відправляється в референс або арбітражну лабораторію з позначкою «повторити» та досліджується на ІФА тест-системі IV покоління. Якщо результат нового аналізу негативний, то перший результат визнається помилковим (хибнопозитивним) та ІБ не проводиться. При позитивному чи сумнівному результаті під час другого тесту хворому обов'язково призначається проведення ІБ через 4-6 тижнів на підтвердження чи спростування ВІЛ-інфікування.
Імунний блот
Остаточний діагноз інфікування ВІЛ може встановлюватись тільки після отримання позитивного результату імунного блотингу (ІХ). Для його проведення застосовується нітроцелюлозна смужка, на яку нанесені вірусні білки.
Забір крові для ІБ виконується з вени. Далі вона піддається спеціальної обробки і білки, що містяться в її сироватці, поділяють у спеціальному гелі за їх зарядом і молекулярної маси(Маніпуляція проводиться на спеціальній апаратурі під впливом електричного поля). На гель із сироватки крові накладають нітроцелюлозну смужку та проводять блот («промокування») у спеціальній камері. Смужка обробляється і якщо в матеріалах є антитіла до ВІЛ, то вони зв'язуються з антигенними смугами на ІБ і виявляються у вигляді ліній.
ІБ вважається позитивним якщо:
- за критеріями American CDC – на смужці є дві або три лінії gp41, p24, gp120/gp160;
- за критеріями American FDA – на смужці є дві лінії р24, р31 та лінія gр41 або gр120/gр160.
У 99,9% випадків позитивний результат ІХ вказує на ВІЛ-інфікування.
За відсутності ліній – ІБ негативним.
При виявленні ліній з gр160, gр120 і gр41 ІБ є сумнівним. Такий результат може виявлятися при:
- онкологічні захворювання;
- вагітності;
- частих трансфузіях крові.
У разі рекомендується виконання повторного дослідження з допомогою набору інший фірми. Якщо ж після додаткового ІБ результат залишається сумнівним, необхідно спостереження протягом півроку (через кожні 3 місяці проводяться ІБ).
Полімеразна ланцюгова реакція
Тест на ПЛР може визначати РНК вірусу. Його чутливість досить висока і дозволяє виявляти ВІЛ-інфікування вже через 10 днів після зараження. У деяких випадках ПЛР може давати хибнопозитивні результати, Оскільки його висока чутливість може реагувати і на антитіла до інших інфекцій.
Дана методика діагностики є дорогою, потребує спеціального обладнання та високої кваліфікації спеціалістів. Ці причини не дозволяють проводити її при масовому тестуванні населення.
ПЛР застосовується у таких випадках:
- для виявлення ВІЛ у новонароджених, які народилися від ВІЛ-інфікованих матерів;
- для виявлення ВІЛ у «періоді вікна» або за сумнівного ІБ;
- для контролю концентрації ВІЛ у крові;
- для дослідження донорської крові
Тільки за тестом ПЛР діагноз ВІЛ не ставиться, а проводиться як додаткового методудіагностики для вирішення спірних ситуацій
Експрес-методи
Однією з інновацій у діагностиці ВІЛ стали експрес-тести, результати яких можуть оцінюватися вже за 10-15 хвилин. Найбільш ефективні та точні результативиходять за допомогою імунохроматографічних тестів, заснованих на принципі капілярного потоку. Вони являють собою спеціальні смужки, на які наноситься кров або інші рідини, що досліджуються (слина, сеча). За наявності антитіл до ВІЛ через 10-15 хвилин на тесті з'являються кольорова та контрольна смужка – позитивний результат. При негативному результаті– з'являється лише контрольна смужка.
Як і після тестів ІФА, результати експрес-тестів мають підтверджуватись аналізом ІБ. Тільки після цього може встановлюватися діагноз про ВІЛ-інфікування.
Існують експрес-набори для домашнього тестування. Тест OraSure Technologies1 (США) схвалений FDA, продається без рецепта та може застосовуватись для виявлення ВІЛ. Після проведення тесту, у разі позитивного результату, хворому рекомендується пройти обстеження спеціалізованому центрідля підтвердження діагнозу.
Інші тести для домашнього використанняще не схвалено FDA і їх результат може бути дуже сумнівним.
Незважаючи на те, що експрес-тести за своєю точністю поступаються ІФА-тестам IV покоління, вони широко застосовуються для додаткового тестування населення.
Здати аналізи на виявлення ВІЛ-інфекції можна в будь-якій поліклініці, ЦРЛ або спеціалізованих СНІД-центрах. На території Росії вони проводяться абсолютно конфіденційно або анонімно. Кожен пацієнт може розраховувати отримання медичної чи психологічної консультації до чи після проведення аналізу. Платити за тести на ВІЛ доведеться лише у комерційних лікувальних закладах, а в державних поліклінікахта лікарнях вони виконуються безкоштовно.
Про те, якими шляхами можна заразитися ВІЛ-інфекцією та які міфи існують про можливості заразитися, читайте у
Loading...