Антиген кардіоліпіновий для реакції мікропреципітації. Неспецифічна серологічна діагностика сифілісу Мікрореакція преципітації з кардіоліпіновим антигеном (РМП). Діагностичні підтверджуючі серологічні реакції

Аналіз крові на РМП – що це таке? Про що говорить це абревіатура? Наскільки цей аналіз є повноцінним для діагностики сифілісу?

Як діагностують сифіліс?

Збудник сифілісу чи бліда трепонема виробляє кілька видів агресивних чужорідних людині білків, які називають антигенами. Це білковий антиген, який добре розпізнається імунною системою, полісахаридний антиген, який не використовується в діагностиці та дуже важливий ліпідний антиген. Саме ця речовина має значну схожість із фосфоліпідами, які входять до складу мембран людських клітин.

Цей антиген становить близько 30% від усієї маси збудника сифілісу і саме до нього вже на початку другого місяця після зараження напрацьовуються спеціальні антитіла, які називаються реагінами. Забігаючи вперед, можна сказати, що саме ця схожість антигену з фосфоліпідами людських мембран і обумовлює можливі хибно-позитивні реакції, особливо в тому випадку, якщо у пацієнта існує аутоімуна патологія, так званий антифосфоліпідний синдром

Діагностика сифілісу ґрунтується на двох великих групах методів. У першому випадку безпосередньо шукають збудника під мікроскопом, об'єктом дослідження служать різні відокремлюване - з виразок, ерозій, з гуми, з елементів висипу. По-друге, виявляє антитіла, які з'являються у сироватці або плазмі у пацієнта до вищезгаданих антигенів.

У цьому методи серологічної (від латів. serum – сироватка) діагностики діляться дві групи. У першій їх використовують специфічні трепонемні антигени, які отримані з чистих культур сифілітичних мікроорганізмів. А неспецифічні серологічні реакціївикористовують схожі антигени, але тільки отримані не збудників і схожі на них - так званий кардіоліпіновий антиген, який отримують з бичачих сердець. Він дуже схожий на ліпідний антиген збудника сифілісу і може спровокувати імунну відповідь за наявності в крові у пацієнта антитіл.

Ці нетрепонемні тести (у яких реагенти не є «справжніми») не вимагають дорогих специфічних антигенівтому вони є дешевими, доступними і швидкими. Їх призначення – скринінгове, первинне дослідження чи відбіркова реакції. До таких нетрепонемних тестів відноситься реакція мікропреципітації або РМП.

Щоб остаточно встановити діагноз одних нетрепонемних тестів мало. Якщо у пацієнта виникає позитивна відповідь, у такому разі застосовується весь арсенал досліджень на сифіліс – починаючи від і закінчуючи спеціальними методами дослідження – це реакція пасивної гемаглютинації та метод імуноблоту. До них також належать методи непрямої імунофлюоресценції, а також реакція іммобілізації трепонем.

Два останні способи застосовуються фахівцями в профільних установах, оскільки як антиген вже використовується не речовина з бичачого серця, а живі сифілітичні мікроорганізми, спеціально вирощені в організмах кроликів для цих цілей. Розглянемо докладніше, що таке реакція мікропреципітації чи мікрореакції.

Аналіз крові на мікрореакцію – що це таке?

У Рунеті існує велика кількістьзапитів, зміст яких зводиться до такого: аналіз крові РМП – що це таке? Відповідаємо на поставлене запитання. Реакція преципітації ставиться як дослідження сифілісу, вона служить мікробіології та імунології вже багато десятків років. У перекладі з латинської це означає реакція осадження.

У процесі дослідження поєднуються антигени, які заздалегідь вводяться в розчин. У даному випадкуйдеться про кардіоліпіновий антиген. Потім до цього розчину додається сироватка крові, взята у пацієнта. І якщо в цій крові знаходяться антитіла, які виробилися до схожого антигену збудника сифілісу, то вони як ключик до замочка підійдуть до активних центрів молекул антигену. В результаті з'являються великі, пов'язані між собою структури імунних комплексів, які називаються преципітатом. Це молекули антигену, «обвішані» антитілами. Вони більші і важчі і в результаті буде помітне або помутніння прозорих розчинів, або випадання їх в осад.

У конкретному випадку при проведенні реакції мікропреципітації на сифіліс помітно появи білих пластівців. Існує найрізноманітніші різновиди реакції преципітації, які можуть проводитися не тільки в пробірці, але також у напіврідкому гелі, в різних поживних середовищах, та іншими способами.

RPR – модифікація

також в сучасних лабораторіяхможна зіткнутися з іншою схожою назвою - тест RPR. Це вже сучасна модифікація преципітації, де виявляються швидкі плазмові реагіни. Такими реагентами називають антитіла, що належать до класів імуноглобулінів G та M.

Саме RPR тест (його друга назва - неспецифічний антифосфоліпідний або реагіновий тест) рекомендується наказом МОЗ Російської Федераціїдля скринінгу чи первинного дослідження на сифіліс. Тому, якщо у вас є вибір: зробити РМП або виконати RPR, то краще прийняти рішення на користь другого методу.

RPR - метод дослідження дозволяє виявити практично 80% осіб з перебігом первинної інфекції та майже 100% осіб, які хворіють на вторинний сифіліс або латентні (приховані) форми. RPR - реакція здатна виявити сифіліс вже через 7 днів після появи первинної сифіломи, наприклад, твердого шанкеру. Зазвичай це можна зробити за місяць після зараження.

Показання до дослідження та правила забору крові

Як здавати кров при РМП – дослідженні на сифіліс? Як готуватись до дослідження? Як і в більшості випадків здачі крові, жодних особливих підготовчих заходівпроводити пацієнту не потрібно. Найголовніше, щоб кров була взята натще, що робиться зазвичай рано-вранці. Якщо це правило дотриматися неможливо, то кров можна здавати через 4 години після легкого прийому їжі. Пиття рідини допускається, якщо вона чиста, негазована і не є мінеральною водою. Всі інші види рідин, такі як соки, кава і чай небажані, щоб уникнути виникнення помилкових реакцій.

Показано проведення реакції мікропреципітації та її більш досконалий аналог RPR при первинній підозрі на сифіліс. Також ці реакції потрібні для проведення в першу чергу для діагностики прихованого сифілісу. Як скринінговий метод, ці тести використовуються для обстеження донорів і просто при первинному обігу. Обов'язково слід наголосити, що позитивне значення цих тестів у жодному разі не рівнозначне постановці діагнозу сифіліс, адже антиген використовувався не сифілітичний, а просто «схожий». Ці результати мають бути підтверджені трепонемними тестами чи іншими способами сучасної діагностикинаприклад.

Інтерпретація та розшифрування результатів

Розшифровка аналізу крові на РМП передбачає видачу не кількісного, а якісного результату: "позитивно" або "негативно" - антитіла виявлені або не виявлені.

В разі первинного сифілісуця реакція може бути позитивною вже у 60% випадків і вищою. У разі вторинного сифілісу, коли антитіл в організмі багато, реакція стає достовірно стовідсотковою. Якщо сифіліс протікає приховано чи латентно, але вже достатньо довгий час, то реакція мікропреципітації буде достовірною у 80% випадків.

При третинному сифілісі розкид значень може коливатися від 37% до 94%. Адже якщо сифіліс протікає дуже довгий час, буквально роки, то антитіла по різних причинможуть зникати з крові або переставати напрацьовуватися.

Оскільки реакція мікропреципітації є скринінговим методом, необхідно враховувати таку дуже важливу обставину. Ця реакція проявляється утворенням імунних комплексів-преципітатів тільки в тому випадку, якщо антитіла та антиген перебувають у крові у суворих співвідношеннях, їх має бути рівно стільки, щоб антитіла повністю зв'язалися з усією кількістю антигену і не виявилося надлишку в розчині жодного з реагентів.

Якщо антитіл значно більше, у разі реакція взагалі може статися. Цей феномен став відомий щодо вродженого сифілісу. У малюків із вродженою інфекцією настільки багато антитіл у крові, що реакція просто не відбувається.

Саме тому до інтерпретації результатів РМП у немовлят слід підходити дуже обережно.

За яких захворювань можуть виникати хибно позитивні результати? Їхній перелік досить великий:

  • системні захворювання сполучної тканинита ревматичні поразки;
  • вагітність (нечасто);
  • подагра та гіперурикемія;
  • хронічний алкоголізм;
  • цукровий діабет;
  • оскільки мікобактерії та бліді трепонеми мають схожі антигени;
  • внутрішньовенна наркоманія;
  • лімфоцитарна ангіна або;
  • інші вірусні та бактеріальні інфекції(вірусні гепатити або ентеровірусна діарея, скарлатина, кір);
  • вірусна чи бактеріальна пневмонія;
  • аутоімунний тиреоідит;
  • літній та старечий вік.

Також ця реакція може бути хибнопозитивною після різних щеплень та вакцинацій.

Однак, якщо реакція мікропреципітації або її більш досконалий аналог – RPR – негативні, то це не може однозначно свідчити про відсутність сифілітичної інфекції. Пацієнт може заразитися сифілісом буквально за два-три дні, за тиждень або за два до проведення обстеження, і тоді антитіла в крові просто ще не встигну з'явитися. Такий стан називається серонегативним раннім сифілісом. Можлива і повністю зворотна ситуація, коли пацієнт хворіє вже 10 або 20 років і у нього пізній третинний сифілісз відсутністю антитіл у плазмі крові.

Якщо РМП або RPR позитивна

Звичайно, найбільше людей непокоїть, якщо РМП є позитивною.

У цьому випадку необхідно проводити додаткові тести, що підтверджують, про які йшлося вище. Якщо предметом вибору буде і , то їх специфічність набагато вища і становлять 100% при чутливості до 95%. Але навіть ці додаткові методиможуть також дати помилковий позитивний результат, особливо у випадку супутніх запальних захворювань, а також аутоімунних процесів. Саме тому в клінічній практиціобов'язково підтверджують діагноз сифілісу за допомогою двох додаткових способів. Це може бути реакція імунофлюоресценції або іммобілізації збудників сифілісу (РІБТ). Але ці дослідження дорогі і використовуються нечасто.

Можливо застосовувати реакцію зв'язування комплементу (РЗК), у якій використовується специфічний трепонемний антиген. Показано проведення імунного блоту, який допомагає у сумнівних випадках при неясних клінічній картині. Зрештою, на допомогу приходить полімеразна ланцюгова реакція, за допомогою якої можна визначити наявність ДНК блідої спірохети в організмі пацієнта

За підозри на сифіліс лікарі призначають дослідження крові на антитіла до кардіоліпінового антигену. Цей аналіз є удосконаленим варіантом реакції Вассермана (RW). У класичному виглядіТест на RW не використовується вже близько 30 років. У наш час це дослідження проводять виключно імунологічними методами. Які нормальні показникицієї проби? І як правильно розшифрувати її результати? Ці питання ми розглянемо у статті.

Що це таке?

Кардіоліпіновий антигенє ліпідоподібною речовиною. За своїм складом воно схоже на білки збудника сифілісу – блідої трепонеми. Такий препарат використовують для ранньої діагностикицього небезпечного венеричного захворювання. Він дозволяє виявити патологію на ранніх стадіях.

На дослідження беруть венозну кров і змішують із кардіоліпіновим антигеном. Реакція взаємодії біоматеріалу та препарату називається Якщо людина здорова, то її кров не виробляє антитіла до антигену. Якщо ж пацієнт страждає на сифіліс, то в його організмі активно утворюються імуноглобуліни класу M і G. У цьому випадку в суміші крові та препарату з'являються пластівці. Цей осад є скупчення комплексів "антиген-антитіло" (преципітат).

Утворення імуноглобулінів у зараженої людини починається через 7-10 днів після появи шанкеру (безболісної виразки) на шкірі або слизовій оболонці. Це ранній симптомсифілісу. Зазвичай, вироблення антитіл спостерігається через 2-3 тижні після інфікування.

Для проведення тесту використовують набір "Кардіоліпіновий антиген". Його одержують із бичачого серця. Екстракт органу змішують з холестерином та лецитином. Отримана речовина має схожі властивості з протеїнами блідої трепонеми. Воно здатне викликати утворення імуноглобулінів при реакції з кров'ю хворого на сифіліс.

Показання

Аналіз з кардіоліпіновим антигеном призначають у наступних випадках:

  • за наявності незахищених статевих контактів пацієнта з випадковими партнерами;
  • при побутових контактах з хворими на сифіліс;
  • при симптомах первинної та вторинної стадії сифілісу (шанкре, висипання на тілі);
  • при підозрі на нейросифіліс (психічні та неврологічні порушення);
  • дітям, народженим інфікованими жінками;
  • контролю ефективності протисифілітичної терапії.

Цей тест не завжди буває інформативним при запущених (третинних) формах патології. на пізніх стадіяхсифілісу вироблення антитіл суттєво знижено.

Пробу з кардіоліпіновим антигеном обов'язково здають під час вагітності. Крім цього, таке дослідження потрібно пройти донорам та людям, які оформляють медичну книжку.

Як проводиться дослідження?

Дуже важливо ретельно підготуватись до аналізу. Цей тест досить часто дає хибнопозитивні результати. За дві доби до здачі крові потрібно повністю виключити:

  • вживання спиртних напоїв (навіть слабоалкогольних);
  • прийом препаратів із наперстянкою;
  • жирну їжу.

Аналіз потрібно здавати вранці натще. На дослідження беруть 8-10 мл венозної крові. Результати тесту зазвичай готові через 1-2 дні.

Норма

Якщо пацієнт не страждає на сифіліс, то його кров не вступає в реакцію з кардіоліпіновим антигеном. Негативний результат аналізу в більшості випадків означає, що людина здорова. У розшифровці тесту це означає знак "-" або "RW-". Це вважається нормою.

Однак навіть при негативних результатах тесту не можна повністю виключати, що людина інфікована блідою трепонемою. Адже антитіла не виробляються в Інкубаційний періодпатології. Дуже слабке продукування імуноглобулінів відзначається і за третинної форми сифілісу. Тому якщо у людини при негативної реакціїВассерман є ознаки патології, то аналіз призначають повторно.

Можливі відхилення

Розглянемо розшифровку аналізу. Виразність позитивної реакції позначена у бланку з результатами проби знаками "+". Відхиленнями від норми вважаються такі дані тесту:

  • "+" - сумнівний результат (рекомендується перездати аналіз).
  • "++" - слабо позитивна реакція.
  • "+++" - Позитивний результат.
  • "++++" - різко позитивна проба.

Що робити, якщо проба з кардіоліпіном дала позитивні результати? Діагноз "сифіліс" зазвичай не ставиться тільки по реакції Вассермана. У цьому випадку лікарі завжди призначають додаткові дослідження.

Цей тест у 70% випадків дозволяє виявити первинну стадію сифілісу, і у 100% випадків показує вторинну формухвороби. Однак позитивні результати дослідження не завжди свідчать про інфікування блідою трепонемою. На дані цього аналізу можуть вплинути багато чинників. Вони будуть розглянуті далі.

Помилкові результати

Нерідко бувають випадки, коли проба Вассермана показує утворення антитіл, проте при цьому людина не страждає на сифіліс. Хибна позитивна реакція відзначається при наступних захворюваннях та станах:

Можна дійти невтішного висновку, що перелік захворювань, і станів, у яких відзначаються помилкові результати тесту, досить великий. Тому для постановки точного діагнозупризначають імунофлюоресцентний аналіз крові. Він дозволяє достовірніше виявити наявність імуноглобулінів G до блідої трепонеми. Проводять аналіз крові методом ПЛР-діагностики. Він показує наявність у пацієнта фрагментів ДНК блідої трепонеми. Остаточний діагноз лікар ставить лише на підставі комплексного дослідження.

Остання актуалізація опису виробником 31.07.1996

Фільтрований список

Склад та форма випуску

Комплект з 5 ампул кардіоліпінового антигену, що містять по 2 мл препарату, і одного флакона розчину холіну хлориду, що містить 5 мл препарату; в упаковці 2 комплекти. 1 комплект розрахований на 200-240 визначень.

Характеристика

Розчин трьох високоочищених ліпідів: кардіоліпіну, лецитину, холестерину в спирті етиловому абсолютизованому. Прозорий безбарвний розчин із специфічним запахом спирту.

Фармакологічна дія

Фармакологічна дія- Діагностичне.

Виявлення антитіл до збудника сифілісу.

Антиген кардіоліпіновий для реакції мікропреципітації (РМП).

Діагностика сифілісу (дослідження активної плазми або інактивованої сироватки реакції мікропреципітації).

Антиген кардіоліпіновий для реакції мікропреципітації (РМП)

У захищеному від світла місці при температурі 6-22 °C.

Зберігати у недоступному для дітей місці.

Термін придатності Антиген кардіоліпіновий для реакції мікропреципітації (РМП)

1 рік.

Не застосовувати після закінчення терміну придатності, вказаного на упаковці.

Є відбірним тестом при масовому обстеженні населення сифіліс.

Постановка:плазма або інактивована сироватка крові + спеціальний кардіоліпіновий антиген (екстракт бичачого серця, збагачений холестерином та лецитином). Утворюється преципітат (комплекс антиген - антитіло), що випадає в осад у вигляді пластівців білого кольору.

РМП можна проводити і за кількісною методикою із розведенням сироватки крові.

Переваги експрес-методу:

    швидкість відповіді (30-40 хвилин),

    невеликий обсяг необхідної для аналізу крові (2-3 краплі плазми чи сироватки).

Джерела помилок при постановці РМП:

    неправильне взяття крові з пальця (наявність бульбашок повітря в капілярі піпеток);

    нерівномірна концентрація антигену в емульсії внаслідок недостатнього перемішування перед використанням;

    бактеріальне забруднення емульсії;

    порушення термінів та умов зберігання плазми та сироватки крові, антигену та його емульсії, розчинів;

    використання при постановці реакцій забруднених пробірок, піпеток, пластин, розчинів.

Вищезазначені помилки можуть призводити до появи як хибнонегативних, так і хибнопозитивних результатів реакції.

Після закінчення терапії ставиться РМП і за зниженням титру судять про динаміку інфекційного процесу та ефективність терапії.

Підтвердженням ефективності проведеної терапії вважається зниження титру в 4 та більше разів протягом 1 року; після закінчення цього терміну здійснюється постановка тієї ж специфічної реакції, що й за первинного обстеження.

Діагностичні підтверджуючі серологічні реакції

ІФА, РІФ та РПГА є високочутливими та високоспецифічними реакціями на сифіліс.

Зважаючи на різну чутливість при різних формах сифілісу, специфічності та складності постановки кожна із зазначених реакцій має своє призначення.

Профілактичне обстеження населення на сифіліс можна проводити за допомогою РМП, ІФА та РПГА.

При отриманні позитивного результату РМП пацієнт повинен обстежитись дерматовенерологом із повторним дослідженням крові у будь-якому діагностичному тесті на сифіліс.

При профілактичному обстеженні на сифіліс хворих на очні, психоневрологічні, кардіологічні стаціонари, вагітні повинні використовуватися ІФА або РПГА.

При обстеженні донорів необхідно застосовувати ІФА або РПГА, але обов'язково у поєднанні з РМП. Постановка двох реакцій одночасно зумовлена ​​високою відповідальністю цього дослідження.

Вищевказані специфічні тести служать для діагностики всіх форм сифілісу, зокрема, прихованого, а також для розпізнавання хибно-позитивних результатів, отриманих у РМП.

Слід враховувати, що специфічні трепонемні тести можуть залишатися позитивними (не негативувати) протягом кількох років, а окремих випадках залишаються позитивними протягом усього життя.

Імуноферментний аналіз для сіро- та ліквородіагностики сифілісу

"■); // U! £//-

Принцип: - шшшаТ. pallidum сенсибілізується до поверхні твердофазового носія (лунки панелей). Додається досліджувана сироватка. За наявності антитіл проти Т. pallidum утворюється комплекс антиген-антитіло, пов'язаний з поверхнею носія. На наступному етапі в лунки наливають антивидову сироватку (проти імуноглобулінів людини), мічену ферментом (пероксидазою або лужною фосфатазою). Мічені антитіла взаємодіють із комплексом антиген-антитіло, утворюючи новий комплекс. Для виявлення в лунки наливають розчин субстрату (5-аминосалициовая кислота). Під дією ферменту субстрат змінює колір, що свідчить про позитивний результат.

Оптимальним у разі використання ІФА вважається одночасне застосування трьох його варіантів:

    виявлення сумарних AT (CAT)

    подальше диференційоване визначення трепонемоспецифічних IgM та IgG.

Поява протисифілітичних антитіл відбувається відповідно до загальних закономірностей імунної відповіді. Спочатку з'являються IgM на 2-4 тижні після зараження і зникають у нелікованих хворих приблизно через 18 місяців; при лікуванні раннього сифілісу через 3-6 місяців; пізнього – через рік. У міру розвитку хвороби починає переважати синтез IgG, які з'являються на 4 тижні після зараження, досягають більш високих титрів і тривалий час зберігаються навіть після клінічного лікування.

Джерела виникнення помилок при використанні ІФА-тест-систем:

    порушення техніки взяття крові, умов транспортування та зберігання тест-систем та проб.

    неякісна робота лаборантів,

    будь-які відхилення від інструкції із застосування тест-системи,

    несправність інструментів та приладів,

Loading...Loading...