Набір реагентів «Поживне середовище для виділення гонокока сухе» (ГНК агар) призначений для мікробіологічних цілей. Застосовується для виділення гонокока при дослідженні інфікованого матеріалу, а також як середовище для культивування та зберігання гонокока у науково-дослідній роботі.
Набір реагентів випускається у вигляді комплекту з двох ліофілізованих компонентів:

основи живильного середовища - ліофілізат з об'єму 100 мл у пляшці-1 шт;
добавка до основи живильного середовища - ліофілізат з об'єму 24 мл у пляшці - 1 шт.

склад: основа живильного середовища - екстракт кролячого м'яса, сухий пептон ферментативний для бактеріологічних цілей, натрій хлористий, аутолізат хлібопекарських дріжджів, кислота оротова, агар мікробіологічний. Добавка до основи живильного середовища - сироватка кінська нормальна для бактеріологічних поживних середовищ рідка, аутолізат хлібопекарських дріжджів, амінопептид для мікробіологічних живильних середовищ.

Приготування:в пляшку з основою живильного середовища додають 100 мл очищеної стерильної води і витримують (30±5) хв, потім поміщають на киплячу водяну баню до повного розплавлення агару, після розплавлення агару витримують на водяній бані не більше 5 хв. У пляшку з добавкою живильного середовища додають 24 мл очищеної стерильної води і витримати (20±2) хв до повного розчинення при температурі 20-25°С. Розчинену добавку переносять у розчинену та охолоджену до температури (50±2)°С основу Середовище розмішують, розливають по 3 мл у стерильні пробірки і скошують У кожну пробірку додають по 0,5 мл стерильного розчину натрію хлориду 0,9% для зволоження середовища. Середовище можна розливати по 10-15 мл в стерильні чашки Петрі. Пробірки або чашки з живильним середовищем поміщають на (24±1) год термостаті при температурі (37±1)°З контролю на стерильність. Готове живильне середовище зберігають при температурі (6±2)°С до 7 діб.

Принцип дії:набір реагентів повинен забезпечувати зростання кожного тест-штаму Neisseria gonorrhoeae "Лошаків" та Neisseria gonorrhoeae "Денисів" при сівбі 0,5 мл мікробної суспензії з розведення 10"5 через 24 - 48 годин інкубації при температурі (37 ± 1) прозорих або напівпрозорих безбарвних колоній розміром від 0,5 до 2 мм із рівними краями.

Проведення аналізу: облік результатів посіву проводять через 24, 48 і 72 год інкубації при температурі (37±1)°С При посіві сечостатевих органів хворих на гонорею, що відокремлюється, зростання гонокока на живильному середовищі має бути через 24-72 години. За відсутності зростання гонококу витримати посіви в термостаті до 7 діб.

Упаковка: поліетиленові банки по 0,25 кг для виготовлення 3,6 л середовища.

Термін придатності-1 року.

Ціна дана з урахуванням ПДВ за 1кг.

Гонококи мають бобоподібну форму, розташовуються у вигляді диплококів, оточені мікрокапсулою, джгутиків не мають, спір не утворюють, аналогічно менінгококам. У клітинній стінці є зовнішня мембрана, білки якої поділяють на групи по їх функціональному значенню. Для гонококів характерна наявність пилок, які відрізняються один від одного за своїми антигенними властивостями (16 антигенних варіантів). Гонококи культивують на живильних середовищах, що містять нативний білок (сироватка крові, асцитична рідина). Краще ростуть при вмісті 3-5% СО2. На асцитагар утворюють прозорі колонії з рівними краями. З вуглеводів ферментують лише глюкозу, утворюють каталазу та цитохромоксидазу – типові для нейссерій ферменти.

Антигени

Антигенна структура гонококів мінлива. Це з наявністю численних антигенних варіантів пилок, які формуються у процесі розвитку інфекції.

Патогенність та патогенез

Гонококи прикріплюються до циліндричного епітелію уретри, вагінальної частини шийки матки, прямої кишки, кон'юнктиви ока, а також сперматозоїдів та найпростіших (трихомонади, амеба). Адгезія відбувається за рахунок пилок та білків зовнішньої мембрани клітинної стінки. Характерною особливістю гонококів є їхня здатність проникати в лейкоцити і розмножуватися в них. Ліпоолігосахаридна частина клітинної стінки має токсичну дію. Капсулярні полісахариди пригнічують фагоцитоз. З'єднуючись з ворсинками циліндричного епітелію слизової оболонки уретри, а у жінок і ендоцервікального каналу, гонококи проникають усередину клітин за участю білків зовнішньої мембрани клітинної стінки. Це призводить до розвитку гострого уретриту, цервіциту та ураження у жінок шийки матки, придатків (труби, яєчники), у чоловіків насінних бульбашок, передміхурової залози. При екстрагенітальній локалізації гонококи можуть пошкоджувати пряму кишку та мигдалики, а також викликати бленорею (кон'юнктивіт) у новонароджених. Зараження відбувається під час проходження родових шляхів матері, хворої на гонорею.

Імунітет

При гонореї має місце гуморальна імунна відповідь. Однак антибактеріальні антитіла, що утворюються, не мають протективних властивостей. Протягом захворювання утворюються IgA, що пригнічують прикріплення пилок збудника до клітин слизової оболонки уретри. Однак вони не здатні захистити слизову оболонку від подальшого зараження іншими генераціями гонококів, що пов'язано зі зміною їх антигенної структури. Це призводить до реінфекцій та рецидивів, а також до переходу захворювання в хронічну форму.

Гонококові інфекції

Збудник гонореї та бленореї N.gonorrhoeae (за попередньою класифікацією гонокок) належить до сімейства Neisseriaceae, роду Neisseria. У мазках із виділень хворих гонококи мають форму кавових зерен, грамнегативні, розташовуються парами як усередині лейкоцитів (незавершений фагоцитоз), так і поза клітинами. За своїми морфологічними ознаками вони дуже схожі на менінгококи. Для гонококів властивий поліморфізм – зустрічаються дрібні та великі клітини, рідко паличкоподібної форми. До поживних середовищ дуже примхливі. Найкраще ростуть на середовищах, що містять кров, сироватку, асцитичну рідину. Гонококи містять протеїнові та полісахаридні антигени, за якими розділені на 16 сероварів, але в рутинних баклабораторіях їх поки не визначають. Для мікробіологічної діагностики гонококових інфекцій використовують бактеріоскопічний, бактеріологічний, серологічний та алергічний методи.

Взяття матеріалу для дослідження

Щоб гідно та доброякісно провести бактеріологічну та бактеріоскопічну діагностику, важливо правильно взяти клінічний матеріал. Його, як правило, повинен проводити лікар. У чоловіків досліджують виділення сечівника, парауретральних ходів, прямої кишки, при показаннях – матеріал з ротоглотки, а також секрет передміхурової залози після її масажу. Можна також дослідити осад і нитки сечі, але в них гонококи виявляються значно рідше. Перед взяттям матеріалу з уретри хворий не повинен помочитися протягом 4-5 годин, не вживати антимікробних препаратів та дезінфікуючих розчинів. Зовнішнє отвір уретри спочатку протирають стерильним ватним тампоном, змоченим 0,85% розчином хлориду натрію, потім сухим тампоном. Мазки виготовляють не з гною, вільно витікає, а з матеріалу, взятого шляхом зіскрібку зі слизової уретри бактеріологічною петлею або спеціальною ложечкою Фолькмана. При незначних виділеннях необхідно зробити попередній масаж уретри. У жінок матеріал беруть із уретри, парауретральних ходів, шийки матки, прямої кишки, а за показаннями – і з ротоглотки. Спочатку очищають піхву від виділень, проводять масаж уретри і шляхом зішкрібання бактеріологічною петлею або ложечкою Фолькмана забирають матеріал. Шийку матки спочатку протирають сукиним стерильним ватним тампоном для видалення слизової пробки. Виділення з каналу шийки матки беруть бактеріологічною петлею або пінцетом. Матеріал з дистального відділу прямої кишки беруть за допомогою ложечки Фолькмана сліпим методом", тобто без будь-якої підготовки хворого, або за допомогою рекоскопа або ректального дзеркала. У цьому випадку матеріал, що вивчається, забирають безпосередньо з видимого місця ураження. При орофарингеальному гонореї слиз з ротоглотки беруть стерильними ватними тампонами на спеціальних тримачах із сталевого дроту.Для діагностики "ленореї виділення кон'юнктиви знімають бактеріологічною петлею. Рідко гонорея ускладнюється гоносепсисом, ендокардитом, артритом. Тоді матеріалом для юслідження служить кров чи синовіальна рідина. Зважаючи на високу - V тливість гонококів до коливань температури, досліджувані матеріали доставляють до лабораторії у спеціальних термосах або сумках з грілкою.

Бактеріоскопічне дослідження

Бактеріоскопічне дослідження є найпоширенішим, хоча й менш чутливим методом лабораторної діагностики гонореї та бленнореї порівняно з виділенням істих культур. Це особливо стосується хронічного перебігу хвороби, коли в досліджуваному матеріалі міститься незначна кількість гонококів. Однак при правильному взятті матеріалу, повторних обстеженнях пацієнтів, застосуванні методів провокації, кваліфікованій оцінці мазків бактеріоскопічне дослідження досить часто дає можливість швидко та правильно діагностувати захворювання. З досліджуваного матеріалу виготовляють два тонкі рівномірні препарати-мазки. Один фарбують метиленової синькою, другий-за методом Грама. За відсутності метиленового синього можна фарбувати один мазок 1% водним розчином кристалічного фіолетового або 0,5% розчином зеленого діамантового протягом 1 хв. Висновок про наявність гонококів роблять, ґрунтуючись на таких їх властивостях: грамнегативне забарвлення, диплококова структура, форма кавових зерен, розташування всередині лейкоцитів. Окремі клітини набувають різної форми та величини (так звані форми Аша). Крім того, в досліджуваному матеріалі можуть знаходитися подібні гонококків грамнегативні коки з роду Veillonella. Це певною мірою обмежує діагностичну цінність методу первинної мікроскопії. Кращі та надійні результати дає метод імунофлюоресценції. Тонкі мазки із виділень хворих фіксують у полум'ї пальника. На них наносять мічену ізотіоціанатом флуоресцеїну антигонококову сироватку на 1 годину при 35 ° С у вологій камері. Після цього мазки двічі промивають буферним розчином, наносять забуферений гліцерин і покривають покривним склом. При взаємодії гонококів із міченими антитілами під люмінесцентним мікроскопом видно характерне світіння навколо бактеріальних клітин.

Бактеріологічне дослідження

Показаннями до виділення чистих культур гонококів є неодноразові негативні результати бактеріоскопії, наявність підозрілих щодо гонококів, але не ідентифікованих морфологічно мікроорганізмів, а також для достовірного встановлення вилікуваності захворювання. Дуже важливо негайно помістити посіви у термостат. При неможливості проведення посівів на місці взяття матеріалу можна висів ватним тампоном в пробірку з транспортним середовищем Стюарта, яке забезпечує збереження життєздатності гонококів під час доставки в лабораторію. , кров'яне або сироватковий агар, сухе живильне середовище Харківського підприємства "Біолік" з виробництва бактеріальних та лікарських препаратів). Для діагностичного культивування гонококів у багатьох країнах використовують ще "шоколадний" агар. Найкращими є середовища, виготовлені на основі агару з кролячого м'яса або свіжих бичачих сердець. Додавання до них 20 ОД/мл поліміксину та 2 мкг/мл лінкоміцину значно підвищує частоту висіву гонококів, оскільки зазначені препарати пригнічують зростання інших бактерій. Усі середовища перед посівом підігрівають у термостаті протягом 15-20 хв. Чашки та пробірки з посівами поміщають в ексікатори, де створюють атмосферу з 20% С02. Колонії, як правило, виростають через 18-24 год, проте можливе і пізнє зростання. Тоді посіви витримують у термостаті (в ексикаторі!) до 8 діб, щодня перевіряючи появу росту. Колонії гонококів, що виросли мають круглу, злегка опуклу форму, рівні краї, блискучу поверхню, слизову консистенцію. Вони прозорі, як крапельки роси, майже безбарвні, хоча можуть траплятися й білуваті варіанти. Отримані колонії досліджують макро- та мікроскопічно. У мазках гонококи розташовуються парно, зошитами та скупченнями. Типові колонії пересівають на скошений агар сироватковий для виділення чистої культури. Остаточну ідентифікацію проводять, враховуючи морфологічні, культуральні, ферментативні та антигенні властивості. Біохімічно гонококи мало активні. На сироваткових середовищах з 1,5% різних вуглеводів вони розкладають тільки глюкозу, але не мальтозу та сахарозу. Оксидазну активність виділених культур визначають шляхом нанесення на колонії (після мікроскопії) 1% розчину диметилпарафенілендіаміну. Диференціація гонококів від інших видів роду Neisseria має особливе значення при діагностиці орофарингеальної гонореї. Як відомо, на слизовій мигдалині, рото- та носоглотці постійно знаходиться велика кількість грамнегативних нейссерій – представників нормальної мікрофлори людини. Надійними методами ідентифікації гонококів є реакції імунофлюоресценції, латекс- та коаглютинації, а також визначення ферментативних властивостей. Обов'язково проводять якісне визначення чутливості або резистентності мікроорганізмів до антибіотиків за допомогою методу дифузії в агар з використанням дисків. , тобто штучного загострення патологічного процесу, внаслідок чого у виділеннях з'являється більша кількість гонококів. Основними з цих методів є: а) хімічний - інстиляція в уретру 0,5% розчину нітрату срібла у чоловіків, змазування каналу шийки матки 2-5% розчином нітрату срібла; б) механічне - введення прямого бужу в уретру на 10 хв, або проведення передньої уретроскопії; в) біологічний - внутрішньом'язове введення гоновакцини в кількості 500 млн. мікробних тіл або пірогеналу 200 МПД; г) аліментарний - вживання солоної, гострої їжі; менструацій. Ще краще комбінувати кілька методів провокації, наприклад, хімічний, аліментарний та біологічний. Останнім часом для більш надійного виявлення збудника гонореї приймають полімеразну ланцюгову реакцію. Вона дозволяє виявити збудника у випадках хронічної гонореї, коли бактеріоскопічне та бактеріологічне дослідження не дає позитивних результатів.

Серологічна діагностика

Серологічну діагностику гонореї здійснюють порівняно рідко, в основному, при її хронічному перебігу, коли бактеріоскопічне та бактеріологічні дослідження не дають позитивних результатів. У сучасних умовах проводять імуноферментний аналіз, РНГА та реакції Борде-Жангу (РСК). Антигенами для цих реакцій є: вбита нагріванням полівалентна гонококова вакцина, вакцина, інактивована ультразвуком, протеїнові та полісахаридні фракції гонококів, а також піридиновий антиген. ІФА та РНГА є високоспецифічними та достовірними серологічними реакціями. Порівняно з минулим РСК дещо втратила свою роль. Вона не має практичного значення при діагностиці гострої гонореї, оскільки її лікують ще до утворення значної кількості антитіл. Для встановлення достовірності лікування вона взагалі непридатна. Реакція Борде-Жангу має важливе значення при серодіагностиці хронічної гонореї, особливо при ускладнених його формах (гоносепсис, метрит, артрит простатит та ін.). Діагностичне значення алергічних проб дещо знецінюється тим, що вони позитивні протягом багатьох років після перенесеної гонореї. Для їх постановки внутрішньошкірно вводять 0,1 мл свіжої гонококової вакцини (100 млн мікробних клітин на 1 мл). Через 24 години спостерігають гіперемію, іноді з набряком у центрі.

Лікування та профілактика

Для хіміотерапії гонореї використовують антибіотики: бета-лактами (пеніциліни, цефалоспорини) та інші антибіотики. Вакцинопрофілактика гонореї не проводиться через відсутність ефективних вакцин. Для попередження бленорії всім новонародженим закопують на кон'юнктиву ока розчин одного з перерахованих антибіотиків.

Neisseria gonorrhoeae входять до сімейства Neisseriaceae, рід Neisseria. Гонококки виявлені Нейссером у 1879 р. і на честь його названо всю родину.

Морфологія. Гонококи - це диплококи, що складаються з двох бобовидних коків, що лежать увігнутими сторонами один до одного (нагадують кавові зерна). Розмір гонококів 1,2-1,3×0,7-0,8 мкм. Вони поліморфні, поруч із великими зустрічаються дуже дрібні, неправильної форми L-форми бактерій. Гонококи нерухомі, суперечка не мають. У патологічному матеріалі (гное) виявляють капсулоподібну речовину. Грамнегативні. Під впливом лікарських та інших речовин швидко змінюються: з'являються грампозитивні форми. У патологічному матеріалі розташовуються внутрішньоклітинно (у лейкоциті), але можуть бути поза клітиною. Можуть бути у вигляді окремих коків (див. рис. 4).

Культивування. Гонококки – аероби. Дуже вимогливі до живильних середовищ. Зростають на середовищах, що містять нативний білок (людський) - кров, сироватку, при температурі 37° З рН середовища 7,2-7,4. Середовища повинні бути свіжоприготовленими та вологими. Посів слід проводити відразу після взяття матеріалу. На сироватковому середовищі гонококи утворюють дрібні колонії 1-2 мм, прозорі, блискучі з рівними краями, що нагадують краплинки роси. На кров'яному середовищі гемолізу не дають. У сироватковому бульйоні вони дають слабке помутніння та плівку, яка осідає на дно пробірки. При мізерному зростанні через 24 години посіви залишають у термостаті на другу добу.

Ферментативні властивості. Сахаролітичні властивості слабо виражені. Гонококи розщеплюють лише один цукор – глюкозу з утворенням кислоти. Протеолітичні властивості не мають.

Токсиноутворення. У клітинній стінці гонококів є токсична субстанція - ліпополісахарид (мало вивчений).

Антигенна структура. Антигенна структура неоднорідна і легко змінюється під впливом факторів довкілля. Загальноприйнятого поділу гонококів на серовари та серотипи поки що немає.

Стійкість до факторів довкілля. У зовнішньому середовищі гонококи мало стійкі. При температурі 56-60 ° С вони гинуть. При температурі 40° їх життєздатність різко знижується. Низькі температури та висушування їх швидко гублять. Але в гної вони зберігаються до 24 год. Дезінфікуючі розчини - 1% розчин фенолу, сулема 1:1000 вбивають гонококи протягом декількох хвилин. Особливо гонококи чутливі до солей срібла - 1% розчин срібла нітрату губить їх відразу. УФ-промені вбивають їх протягом кількох хвилин.

Сприйнятливість тварин. Тварини не чутливі до гонококу. Однак внутрішньочеревне введення білим мишам гонококового токсину викликає їх загибель.

Джерела інфекції. Хвора на гонорею людина.

Шляхи передачі. Контактно-побутовий (статевий), рідше через заражені предмети (рушник, губки та ін.).

Захворювання у людини. Гонорея та бленорея.

Патогенез. Природним господарем гонококів є хвора людина. Гонококи проникають через слизові оболонки уретри (у жінок – уретри та шийки матки). Фактором патогенності гонококів є наявність у них пилок, які, з'єднуючись з мікроворсинками циліндричного епітелію, сприяють проникненню гонококу всередину клітини епітелію, обумовлюючи в слизовій оболонці гострий запальний процес.

Клінічно гонорея проявляється болями при сечовипусканні, виділеннями гною з уретри та піхви. Захворювання протікає гостро, але іноді перетворюється на хронічну форму. Гонококи можуть спричинити гонорейний кон'юнктивіт – бленорею (гнійне запалення слизової оболонки очей у новонароджених). Гонококки рідко проникають з уретри до інших органів, але іноді можуть бути причиною артритів, ендокардитів тощо.

Імунітет. Природної резистентності до гонококів немає. Перенесене захворювання також створює імунітету. Спостерігається фагоцитоз має незавершений характер.

Профілактика. Санітарна освіта. Підвищення культурно-гігієнічного рівня. Специфічної профілактики немає. Для профілактики бленнореи дітям відразу після народження обов'язково вводять у кон'юнктивальний мішок 1-2 краплі 30% розчину альбуциду.

Лікування. Антибіотики (пеніцилін, біцилін, стрептоміцин та ін). Застосовують також сульфаніламідні препарати. При хронічній формі використовують гонококову вакцину.

Контрольні питання

1. Опишіть морфологічні властивості гонококів.

2. Які ферментативна активність та токсиноутворення гонококів?

3. Яка стійкість гонококів. До якого препарату гонококи особливо чутливі?

4. Які захворювання викликають гонококи та їх патогенез.

Мікробіологічне дослідження

Мета дослідження: виявлення гонококів та протигонококових антитіл.

Матеріал для дослідження

1. Відокремлюване слизової оболонки уретри у чоловіків.

2. Відокремлюване слизової оболонки уретри та шийки матки у жінок.

3. Гнійні виділення із очей.

4. Кров для отримання сироватки.

Примітка. Для бактеріоскопічного та бактеріологічного дослідження матеріал беруть: 1) до початку лікування антибіотиками: 2) не раніше як через 10 днів після закінчення лікування антибіотиками; 3) не раніше ніж через 2 години після останнього сечовипускання; 4) не раніше ніж через 2 години після спринцювання.

Основні методи дослідження

1. Мікроскопічний (переважно використовується при гострих формах).

2. Мікробіологічний.

3. Серологічний.

Хід дослідження

Другий день дослідження

Виймають посіви з термостату та переглядають їх. Вивчають колонії. Роблять мазки. За наявності підозрілих грамнегативних диплококів колонії пересівають на скошене середовище в пробірках (середовище повинне бути свіжоприготовленим і містити достатню кількість конденсату) і ставлять пробу на оксидазу. Для цього піпеткою на колонію наносять краплю 1% розчину диметилпарафенілендіаміну, колонії змінюють колір від темно-коричневого до чорного.

Третій день дослідження

Виймають посіви з термостата, роблять мазки зі скошеного агару, фарбують за Грамом та мікроскопують. Засівають на середовищі Гісса (лактозу, глюкозу, маніт та мальтозу). Ці вуглеводи повинні мати 30% сироватки крові. Засіяні пробірки ставлять у термостат.

Четвертий день дослідження

Виймають пробірки з термостата, за відсутності зростання залишають їх у термостаті ще на 1-2 дні. За наявності зростання враховують результати (табл. 28).

Серологічна діагностика

Третій тиждень захворювання. При хронічному перебігу захворювання та у сумнівних випадках ставлять РСК із сироваткою хворого (див. розділ 12). Як антиген використовують убиту культуру гонококів, яку готують у виробничих умовах. Можна застосувати реакцію непрямої гемаглютинації (див. Розділ 12).

Контрольні питання

1. Який матеріал служить для виявлення гонококів і яким способом його одержують?

2. Через скільки часу після сечовипускання (або спринцювання у жінок) можна брати матеріал для дослідження?

3. Який метод дослідження є основним при гострій формі та який – при хронічній формі гонореї?

4. Коли і яку серологічну реакцію ставлять за підозри на гонорею?

5. Від яких мікроорганізмів необхідно диференціювати гонококи?

Отримайте у викладача препарат. Вивчіть його і замалюйте гонококи, розташовані всередині лейкоциту і поза ним при забарвленні за Грамом.

Поживні середовища

Жовткове середовище. До 100 мл МПА з кролячого м'яса додають 15 мл жовтка (свіжого курячого яйця), 6 мл індикатора червоного фенолового, 1,5 мл цукру, розчиненого в 1 мл стерильної дистильованої води.

Поживне середовище асцит-агар. До фільтрату бульйону, приготованого з кролячого м'яса, додають 2% агар, 1% пептон та 0,5% хлорид натрію. Нагрівають до розчинення агару, встановлюють рН 7,4-7,5, підлужують 20% гідроксидом натрію. Середовище доводять до кипіння, фільтрують, розливають у стерильні флакони та стерилізують в автоклаві 15 хв при 115°С.

Рецепти безасцитного живильного середовища (МПА рН 7,4-7,5).

1) м'ясної води з кролячого м'яса або бичачих сердець – 100 мл

гідролізату казеїну – 2 мл

дріжджового аутолізату – 2 мл

сироватки крові великої рогатої худоби - 20 мл

2) м'ясної води з кролячого м'яса або бичачих сердець – 100 мл

5% розчин гемогідролізату - 2 мл

дріжджового аутолізату – 2 мл

сироватки рогатої худоби – 20 мл

3) м'ясної води з кролячого м'яса або бичачих сердець – 100 мл

жовтка курячого яйця - 10 мл

сироватки крові рогатої худоби – 20 мл

Зростання гонококів на цих середовищах рясно. Колонії гонокока можуть бути виявлені за допомогою проби на оксидазу, при якій вони фарбуються в червоний колір, що переходить у чорний.

Збудником гонореї є Neisseria gonorrhoeaе , що викликає гострі та хронічні запальні ураження сечостатевих органів, слизової оболонки ротоглотки та кон'юнктиви ока.

Матеріалом для дослідження є гнійне відділення сечостатевих органів, прямої кишки або кон'юнктиви очей (при бленореї), суглобовий та перитонеальний ексудат. Строго регламентованими методами лабораторної діагностики гонореї є мікроскопічне та бактеріологічне (культуральне) дослідження. Методи мікробіологічної діагностики гонореї відображені у схемі 18 .

Схема 18. Методи мікробіологічної діагностики гонореї

Мікроскопічний методполягає в дослідженні мазків з досліджуваного матеріалу, пофарбованих за Грамом та метиленовим синім. При фарбуванні препаратів на гонорею використовують модифікацію методу Грама (барвник генціан-віолет замінюють кристал-віолетом, а замість фуксину застосовують нейтральний червоний; промивання препарату здійснюють після кожного етапу забарвлення). У мазках при гострій гонореї виявляють велику кількість поліморфноядерних лейкоцитів, усередині та поза якими розташовані бобоподібні грамнегативні диплококи; супутня мікрофлора або мінімальна, або зовсім відсутня (рис. 25). При хронічній гонореї у ряді випадків типовий гонокок в мазках не виявляється, або виглядає нетипово у вигляді дрібних пилоподібних або великих кулястих утворень, нерідко 2 клітини гонокока розташовуються під кутом один до одного, при цьому виявляється рясна супутня мікрофлора, лейкоцити, епітеліальні. Як експрес-метод діагностики може використовуватися ІФМ.

Мал. 25. Збудник гонореї (Neisseria gonorrhoeaе) у мазках з уретри хворого на гостру гонорею. Усередині і позаклітинно розташовані грамотні диплококи, велика кількість лейкоцитів.

Бактеріологічний метод.Гонокок відрізняється високою чутливістю до різних несприятливих факторів, тому культуральне дослідження необхідно проводити відразу після відбору матеріалу. Посів виробляють на спеціальні живильні середовища. Основою цих середовищ є МПА з кролячого м'яса з додаванням дріжджового аутолізату, казеїну гідролізату або гемогідралізату і сироватки великої рогатої худоби. Асцитична рідина і яєчний жовток як добавки до середовища для культивування гонокока в даний час не застосовуються. Другий тип поживних середовищ є селективним і включає до свого складу, крім вищезгаданих компонентів, антибіотики (поліміксин, лінкоміцин, а для діагностики фарингеальної гонореї – ротову кислоту). Посіви вирощують при 37°С протягом 24-72 годин в атмосфері з підвищеним вмістом СО2. Колонії гонококів круглі, прозорі, у вигляді крапель роси. Типові для гонококів колонії пересівають у пробірки з середовищем для культивування гонокока для одержання чистих культур, які ідентифікують за морфологічними та сахаролітичними властивостями на середовищах «строкатого» ряду (напіврідкий агар із сироваткою та вуглеводом) або за допомогою мікротест-систем. У мазках із чистих культур гонококи розташовуються не попарно, а окремо. У біохімічному відношенні гонококи малоактивні та ферментують лише глюкозу з утворенням кислоти, виробляють оксидазу. Для виявлення оксидази застосовують пробу з 1% водним розчином диметилпарафенілендіаміну або діетилпарафенілендіаміну, які забарвлюють колонії гонококу спочатку в рожевий, потім в червоний, а через кілька хвилин - в чорний колір. Досліджують також чутливість гонококів до антибіотиків та його бета-лактамазну активність.

Серологічний метод(Визначення антитіл до гонококу в крові пацієнтів за допомогою РСК та ІФА) не є строго регламентованим, не представляє діагностичної цінності, не є методом контролю ефективності лікування, що проводиться, і в реальній практиці в даний час не використовується.

Генодіагностика.Спрямована на виявлення специфічних фрагментів ДНК гонококу за допомогою ПЛР і може бути використана як додатковий високоінформативний метод діагностики гонореї.

Самостійна робота студентів

1. Мікроскопічний метод- дослідження гнійного хворого, що відділяється з уретри, з підозрою на гонорею (демонстраційний мікропрепарат, забарвлення за Грамом).

2. Бактеріологічний метод.Вивчення культуральних . збудника гонореї на живильному середовищі для виділення гонокока, на якій гонококи утворюють круглі, прозорі колонії у вигляді крапель роси. У ферментативному відношенні гонокок малоактивний і ферментує лише глюкозу з утворенням кислоти. Врахувати результати посіву гонокока на «строкатий» ряд (демонстрація).

Діагностика гонореї

Без аналізу на гонорею жодного сучасного лікаря діагноз не поставить. Не має значення, які симптоми присутні у пацієнта - гонорея, як і багато інших інфекцій, визначається переважно лабораторними методами. І своєчасна здавання аналізів разом із грамотним вибором методу, який найкраще підійде у кожному конкретному випадку, відіграють вирішальну роль у попередженні грізних ускладнень.

Для лабораторної діагностики гонореї застосовується кілька методів:

мікроскопія мазка на гонококи нейсеру (бактеріоскопічний метод);
бактеріальний посів на гонорею (гонококо);
серологічні тести (серодіагностика);
імуноферментний аналіз (ІФА);
ПЛР (полімеразна ланцюгова реакція);
експрес випробування на гонорею.

Найточніші та найпоширеніші з них - бак посів та ПЛР. Зупинимося докладно на кожному, щоб зрозуміти чому.

Як робиться мікроскопічний аналіз на гонорею

Мікроскопія мазка із сечівника або піхви (шийки матки) – найпростіший метод попередньої діагностики гонореї. Принцип проведення дослідження простий. Мазок фарбується та розглядається під мікроскопом. При цьому звертають увагу на наявність подвійних коків з характерною для гонококів формою у вигляді кавових зерен.

При будь-якому запаленні в мазку міститься багато лейкоцитів – кров'яних клітин, відповідальних за захист організму. При гонореї їх кількість також підвищена, але цей факт не може бути підтвердженням діагнозу. Наявність білих кров'яних клітин лише свідчить про запалення, але не вказує, яка його інфекція викликала.

Лейкоцити і гонококи при гонореї можуть визначатися у загальному аналізі сечі (перебувають у осаді).

Перевага методу – у його простоті та швидкості. А головна проблема – у низькій точності. Виконати аналіз можна за 10-15 хвилин, тільки ймовірність того, що результат вірний - 50%. Такий зовнішній вигляд характерний майже всім нейссерії, зокрема непатогенних. Тому використовують мікроскопію тільки для скринінгу, щоб зрозуміти, чи є в мазку щось чужорідне. При виявленні схожих на гонококи бактерій проводяться інші, точніші аналізи: посів, ПЛР або аналіз крові методом ІФА.

Як проводиться бактеріальний посів на гонококи

На відміну від мікроскопічного дослідження мазка, бак посів – інформативний метод. Гонококи ростуть лише на спеціальних середовищах, їх колонії мають характерний вигляд, колір. Крім того, різні види бактерій мають різну здатність переробляти ті чи інші речовини (зокрема, цукру). У сукупності ці властивості допомагають виявити і вигляд, і підвид мікроба. Точність методу – 90%.

Якщо гонококи знайшлися, то в лабораторії на цих колоніях визначать чутливість до антибіотиків. Тоді лікар точно знатиме, які ліки сильніші у кожному конкретному випадку. Тому проводити аналіз має сенс навіть якщо інший метод однозначно визначив наявність інфекції.

Мінус методу – у його тривалості. Час, який готується такий аналіз на гонорею, може становити від кількох днів за кілька тижнів.

У яких випадках проводиться серодіагностика гонореї

Щоб боротися із хворобою, імунна система виробляє антитіла – особливі білки-захисники. Вони специфічні кожної інфекції, з якою повинні боротися. Медики пішли від зворотного – якщо є антитіла (наслідок), то має бути бактерія (причина). Принцип серологічного методу – у спостереженні реакції крові хворого, що містить антитіла до гонококів, з антигенами до цих антитіл, які містяться в діагностичному наборі. Антитіла та антигени притягуються один до одного, як полюси магніту, і злипаються. Через це у розчині випадає осад.

Для діагностики гонореї серологічні методи застосовують рідко. В основному цікаві для вчених. Раніше вони досить широко застосовувалися для виявлення гонореї, але від них відмовилися через низьку точність та залежність результату від суб'єктивних факторів.

Термін очікування на результати дослідження на гонорею серологічними методами – кілька годин. Інформативність – від 60 до 75% залежно від діагностичного набору антигенів. Серологічні реакції не виявляють захворювання у перші тижні після зараження – організму потрібен час для накопичення антитіл у крові.

Як виявити гонорею за допомогою імуноферментного аналізу

Імуноферментний аналіз або ІФА - метод, що змінив собою серологічні методи діагностики. Так само, дозволяє визначати в крові окремі класи антитіл, специфічних для гонореї, але точніше. Здатний діагностувати як гостру (кілька днів після зараження), і хронічну гонорею. Широко застосовується для діагностики та скринінгу.

Плюси методу – достатня точність (75–85%), прийнятна вартість. Мінус - можливе спотворення результатів з суб'єктивних (зіпсовані реактиви, людський фактор) та об'єктивних (наявність імунодефіциту, імунні захворювання) причин. Скільки часу проводиться аналіз крові на гонорею методом ІФА, залежить від кожної конкретної лабораторії та реактивів (від 1 до 5-6 днів).

Аналіз на гонорею методом ПЛР

Метод полімеразної ланцюгової реакції – вінець досягнень у галузі діагностики захворювань. Він дуже точний та специфічний. Автор методу Кері Мулліс отримав Нобелівську Премію з медицини в 1993 році. Принцип методу заснований на виявленні генетичного матеріалу збудника (ДНК neisseria gonorrhoeae) у досліджуваних зразках біологічного матеріалу. Для проведення дослідження можна використовувати будь-який біологічний матеріал – кров, сироватку, виділення зі статевих шляхів, сечівника, мазки та зіскрібки. Матеріал може бути забруднений гноєм, ексудатом, сечею та виділеннями, на ефективність аналізу це не впливає.

У матеріалі шукають послідовність генів, притаманних збудника. Якщо знаходять, це однозначний ознака інфекції. Дослідження методом ПЛР на гонорею має найвищу інформативність і специфічність. Його точність – близько 95%. Тривалість проведення аналізу – від одного до кількох днів, залежно від лабораторії та реактивів.

Експрес тести на гонорею в домашніх умовах

Найпопулярнішим виробником експрес-тестів є компанія STD Test Express

Спеціально для людей, які живуть активним статевим життям, розроблені експрес-тести на гонорею. В основі принцип, схожий на ІФА (реакція гонококового антигену з антитілами з матеріалу, взятого у людини з підозрою на хворобу). Для дослідження підійдуть зразки крові, виділень із статевих шляхів, сечівника, прямої кишки.

Головна перевага експрес-тестів – швидкість. Процедура займає 10-20 хвилин. Мінус методу – часті хибнопозитивні та хибнонегативні результати, залежність від правильності проведення тестування, спотворення результатів через порушення правил зберігання. Тому краще все ж таки заглянути до найближчої лабораторії.

Підведемо підсумки

У більшості випадків гонококи передаються разом з іншими статевими інфекціями. При підозрі на хворобу перевірятись потрібно на всі можливі захворювання. Тому оптимально почати з аналізу ПЛР - він готується швидко, і один мазок можна одночасно досліджувати різні бактерії і віруси.

Бак посів має сенс робити, якщо про гонорею вже відомо, щоб підтвердити діагноз та визначити чутливість до антибіотиків.

Чи може гонорея не виявлятися в аналізах? Хибнонегативні результати зустрічаються в найточніших методах. Антибіотики та інші ліки, особливості організму хворого, хронічна інфекція та інші фактори можуть змінювати вид і форму гонококів, перетворювати їх на так звані L-форми. У складних випадках лікар призначає провокацію гонореї – навмисне ослаблення імунітету, щоби простимулювати інфекцію проявитися. Домашній метод провокації простий і приємний - випити пива і прийняти гарячу ванну, і рекомендується всім, хто має здати мазок на бак посів.

Посів на гонорею

Гонорея - це захворювання, що передається статевим шляхом, яке є одним із найпоширеніших серед населення.

Хвороба характеризується запаленням органів сечовидільної системи. Частою причиною зараження вважаються безладні статеві зв'язки без використання засобів захисту.

Інфікуватись можуть і чоловіки, і жінки.

Важливо! Гонорея, без своєчасного лікування, сприяє розвитку безплідності.

Сьогодні ми розповімо вам, коли і як слід здавати посіви на гонококову інфекцію, і допоможемо розібратися в результатах аналізу.

Посів на гонорею: показання

Від моменту зараження до перших видимих ознак зазвичай минає від 3 до 15 днів. Може протікати безсимптомно.

Характерні такі симптоматичні ознаки:

Виділення гнійного характеру;
Почервоніння та відтік уретри;
Печіння та свербіж у сфері статевих органів;
Болючість внизу живота;
Можливе підвищення температури тіла;
Болюче сечовипускання.

У тому випадку, якщо ви виявили у себе ці симптоми, слід якнайшвидше звернутися за допомогою до лікаря. Показанням для обстеження є гонококова інфекція у статевого партнера.

Увага! Перехід хвороби до хронічної може призвести до ряду ускладнень та безпліддя.

Підготовка: посів на гонорею

Для бактеріологічного дослідження можна використовувати будь-який біологічний матеріал.

Перед дослідженням роблять паркан:

Шкіри;
Сперми;
Слизових рота, ШКТ;
Зішкріб сечостатевих шляхів.

Бактеріологічний посів призначає уролог чи гінеколог.

Для отримання достовірного результату слід знати правила підготовки до бактеріологічного посіву.

Якщо лікар призначив проведення мазка, необхідно:

Не вступати у статеві зв'язки за два дні до обстеження;
Чи не спринцюватися;
Гігієну статевих органів проводити без засобів інтимної гігієни;
За 2-3 години до взяття матері утриматися від походу в туалет;
Припинити прийом лікарських засобів за тиждень до дослідження.

У жінок мазок береться перші дні після закінчення менструації.

Посів поміщається в термостат за оптимальної вологості та температурних умов. Для гонокока необхідно дотримуватись температурного режиму в межах 37 градусів. Після цього проводять вивчення сумнівних колоній.

Видові особливості зростання колоній на агарі:

Безбарвні чи з жовтим відтінком;
Невеликі;
Поверхня гладка із блиском;
Трохи опуклі.

Цей метод дослідження досить інформативний. Мінусом є велика витрата часу на дослідження. За допомогою бактеріологічного дослідження можна визначити чутливість мікроорганізму до антибактеріальних препаратів. Це необхідне ефективності подальшого лікування.

Посів на гонорею з горла

У разі підозри на гонорейний процес у горлі, необхідно звернутися до лору чи венеролога. Обов'язково слід здати мазок із зіва, мигдалин чи глотки.

Паралельно здається аналіз із сечостатевих органів. Аналіз на гонококову інфекцію слід здавати на початок курсу лікування. Після лікування слід пройти контрольне обстеження.

Посів на гонорею з ока

Уражена повіка набрякає і стає синюшно - червоною. У процесі великого виділення гною, повіка може злипатися.

З'являється болючість, свербіж та печіння. На аналіз беруть відокремлюване з ока. Проводять дослідження методом ПЛР та бактеріологічний посів з подальшою постановкою на чутливість до антибіотиків.

Посів на гонорею секрету простати

Використовуючи масаж передміхурової залози, проводять забір секрету простати.

Це прозора рідина, яку засівають на спеціальні живильні середовища. Через один-два дні можна ідентифікувати колонії мікроорганізмів. Ставлять антибіотикограму, щоби визначити ефективний препарат для подальшого лікування.

Посів на гонорею з ануса

Використовують кілька методів для забору матеріалу. У першому випадку ватну паличку проводять за періанальними складками. Після цього кладуть у стерильну ємність. Другий спосіб - це взяття зіскрібка.

Термін виготовлення посіву на гонорею

Лабораторні дослідження за тривалістю можуть тривати від п'яти до дев'яти днів.

Це залежить від виду та методики проведеного аналізу. Результат мікроскопічного аналізу можна отримати приблизно за півгодини.

ПЛР виконується не більше одного дня, можна виконати та експрес аналіз. Палітра ПЛР дозволяє паралельно досліджувати наявність супутніх інфекцій.

Посів на гонорею для визначення ефективності лікування

Відсутність симптоматичних ознак гонореї та негативні лабораторні дослідження – закономірний результат лікування. Контроль проводять на 10 день після відміни прийому антибактеріальних препаратів.

Дослідження включає проведення триразового вивчення мазка під мікроскопом та одноразовий посів матеріалу на живильне середовище.

Чоловікам показано проведення контролю раз, жінки здають його тричі. Через два тижні відміни лікування, під час місячних та після них.

У разі відсутності симптоматики, отримання негативних аналізів – людина здорова. Якщо результати позитивні, а симптомів немає - це свідчить про прихований процес.

Курс лікування слід повторити. Негативні результати та наявність ознак запалення свідчить про присутність в організмі іншого виду збудника.

Посів на гонорею: до якого лікаря звернутися

Посіви на гонорею можуть призначити відповідні фахівці – гінеколог, уролог, венеролог.

Обстеження можна пройти у будь-якій державній чи приватній клініці. Якщо вам потрібно отримати термінові результати аналізів, рекомендуємо звернутися до приватної лабораторії.

Запам'ятайте! У разі появи перших симптомів терміново зверніться до лікаря-фахівця.

Посів на гонорею: ціна

Вартість аналізів залежить від методу дослідження матеріалу.

Ціни варіюватимуться в межах 150-2000 рублів. Бактеріологічний посів у ціновій політиці становитиме приблизно від 800-1300 рублів.

Якщо вам потрібно виконати посів на гонорею в Москві, звертайтесь до нашої клініки. Власна лабораторія дозволяє нам проводити дослідження швидко, якісно і недорого. При отриманні результатів ви можете проконсультуватися у лікаря венеролога.

З профілактичною метою слід використовувати засоби бар'єрної контрацепції. Краще запобігти розвитку хвороби, ніж потім займатися лікуванням.

За підозри на гонорею звертайтеся до грамотних венерологів.

Використання: мікробіологія, діагностика гонореї, живильне середовище для виділення та культивування гонококу. Сутність винаходу: живильне середовище містить як поживну основу панкреатичний гідролізат рибного борошна і солянокислотний гідролізат казеїну, як стимулятор росту і джерела вітамінів - автолізат пекарних або пивних дріжджів, стимулятор росту гемофільних мікроорганізмів. Середовище додатково містить глюкозу, мікробіологічний агар, поліміксину-В сульфат, лінкоміцину гідрохлорид і воду дистильовану. Середовище забезпечує зростання гонококу музейних штамів та з матеріалу від хворих на гонорею, зберігаючи типову морфологію мікроорганізму, що сприяє широкому застосуванню в практичній охороні здоров'я при діагностиці та лікуванні венеричних захворювань. 3 табл.

Винахід відноситься до галузі медичної мікробіології та може бути використане при діагностиці гонореї. Провідними зарубіжними фірмами ("Oxoid", "Gibco", "BRL" та ін.) випускаються живильні середовища для культивування гонококу на основі м'ясних переварів та ферментолізатів з додаванням стерильної нативної крові. З вітчизняних препаратів відомі: живильне середовище "Аргінін-агар", діагност , суха, виробництва НВО "Поживні середовища" м. Махачкала, яка складається з наступних компонентів, г: пептон 8,0-12,0; аргінін 0,07-0,3; цистин 0,007-0,03; глутамінова кислота 1,0-1,8; ЕКД 4,0-7,0; тіамін бромід 0,002-0,007; нітрат заліза 0,002-0,01; калій хлористий 0,07-0,2; натрій хлористий 5,0-8,0; хлористий амоній 0,9-2,0; магній сірчанокислий 0,4-0,9; глюкоза 4,0-7,0; крохмаль 0,5-2,0; трис-буфер 1,0-2,5; агар 13-17,0; бичача сироватка 153,0-255,0; поліміксину-М сульфат 15000-25000 Од; лінкоміцину гідрохлорид 0,001-0,003; вода дистильована до 1 л. Недоліком цього середовища є: низька чутливість, нестабільність результатів інтенсивності росту гонокока. Ліофільновисушене середовище для виділення гонококу (виробництва НДІ ВСа, м. С.-Петербург) що складається з основи середовища та добавки при наступному співвідношенні компонентів, г; наведена в таблиці 1. Недоліком цього середовища є: нестабільність результатів інтенсивності росту гонокока і чутливості. На практиці ж, в основному, застосовуються лабораторно приготовлені безасцитні середовища з екстрактів свіжого м'яса кроликів та свіжих бичачих сердець з додаванням пептону та 20% сироватки великої рогатої худоби або стерильної нативної крові. Відсутність необхідної кількості вітчизняних поживних середовищ для діагностики гонореї, а також якість їх викликає нарікання практичної служби охорони здоров'я. Завданням винаходу є створення сухого живильного середовища, що забезпечує стабільність результатів інтенсивності росту і підвищену чутливість, не поступається комерційним середовищам для діагностики гонокока, і використовувати для її виробництва нехарчові продукти. Поставлене завдання вирішується збалансованістю компонентного складу середовища, що містить поживну білкову основу, автолізат пекарних або пивних дріжджів, агар, хлористий натрій, інгібітори сторонньої мікрофлори лінкоміцину гідрохлорид і поліміксину-В сульфат, в якості поживної основи казеїну , крім того вона додатково містить стимулятор росту гемофільних мікроорганізмів (ферментативний гідролізат чорного альбуміну), глюкозу, для підвищення стабільності результатів при обстеженні хворих на хронічну гонорею можлива добавка до середовища сироватки крові великої рогатої худоби (5-10)% при наступному вмісті л: панкреатичний гідролізат рибного борошна 22,0-28,0 кислотний гідролізат казеїну 2,8-3,2 автолізат пекарних або пивних дріжджів 0,8-1,2 стимулятор росту гемофільних мікроорганізмів 2,0-10,0 глюкоза 9,0 -11,0 натрій хлористий 2,9-3,1 агар мікробіологічний 12,0-15,0 поліміксину-В сульфат 15000-25000 Од
лінкоміцину гідрохлорид 0,001-0,003
вода дистильована до 1 л
pH 7,3+0,2
Кількісне співвідношення компонентів живильного середовища та його рН забезпечують підвищений рівень інтенсивності росту гонококу та чутливості середовища. Поживне середовище готують наступним чином: навішування основних інгредієнтів вносять у колбу з дистильованою водою. Середовище ретельно перемішують і, закривши колбу ватно-марлевою пробкою, стерилізують при (115-119) o C протягом 30 хв. потім охолоджують до температури (45-50) o C і стерильно, попередньо розчинивши в стерильному фіз. розчині, вносять навішування поліміксину-В сульфату та лінкоміцину гідрохлориду. Середовище перемішують та розливають у стерильні чашки Петрі. Для біологічного контролю поживних середовищ використовували культуру Neisseria gonorrhoeae музейних штамів та матеріал від хворих на гонорею. Всі посіви культивували при температурі (37+0,5) o C в атмосфері 10% 2 і підвищеної вологості протягом 24-48 год: дані в таблиці 1. Приклад 1. Перевірка пропонованого середовища проводилася посівом штамів Neisseria gonorrhoeae і на клінічному матеріалі на живильне середовище наступного складу, г:
панкреатичний гідролізат рибного борошна 22,0
автолізат пекарних дріжджів 0,8
солянокислотний гідролізат казеїну 2,8
стимулятор росту гемофільних мікроорганізмів 2,0
глюкоза 9,0
натрій хлористий 2,9
агар мікробіологічний 12,0
поліміксину-В сульфат 15000 Од
лінкоміцину гідрохлорид 0,001
вода дистильована до 1 л
рН 7,3+0,2
Облік результатів проводили через 24-48 год культивування. Приклад 2. Перевірка пропонованого середовища проводилася посівом штамів Neisseria gonorrhoeae та на клінічному матеріалі на живильне середовище з оптимальним вмістом компонентів наступного складу, г:
панкреатичний гідролізат рибного борошна 25,0
автолізат пекарних дріжджів 1,0
солянокислотний гідролізат казеїну 3,0
стимулятор росту гемофільних мікроорганізмів 5,0
глюкоза 10,0
натрій хлористий 3,0
агар мікробіологічний 13,0
поліміксину-В сульфат 20000 Од
лінкоміцину гідрохлорид 0,002
вода дистильована до 1 л
pH 7,3+0,2
Облік результатів проводили через 24-48 год культивування. Приклад 3. Перевірка пропонованого середовища проводилася посівом штамів Neisseria gonorrhoeae та на клінічному матеріалі на живильне середовище з максимальним вмістом компонентів наступного складу, г:
панкреатичний гідролізат рибного борошна 28,0
автолізат пекарних дріжджів 1,2
солянокислотний гідролізат казеїну 3,2
стимулятор росту гемофільних мікроорганізмів 10,0
глюкоза 11,0
натрій хлористий 3,1
агар мікробіологічний 15,0
поліміксину-В сульфат 25000 Од
лінкоміцину гідрохлорид 0,003
вода дистильована до 1 л
pH 7,3+0,2
Облік результатів проводили через 24-48 год культивування. Приклад 4. Перевірка пропонованого середовища проводилася посівом штамів Neisseria gonorrhoeae та на клінічному матеріалі на живильне середовище з порушенням кількісного співвідношення компонентів наступного складу, г:
панкреатичний гідролізат рибного борошна 31,0
автолізат пекарних дріжджів 1,4
солянокислотний гідролізат казеїну 3,4
стимулятор росту гемофільних мікроорганізмів 15,0
глюкоза 13,0
натрій хлористий 3,5
агар мікробіологічний 20,0
поліміксину-В сульфат 30000 Од
вода дистильована до 1 л
pH 7,3+0,2
Облік результатів проводили через 24-48 год культивування. Приклад 5. Перевірка пропонованого середовища проводилася посівом штамів Neisseria gonorrhoeae та на клінічному матеріалі на живильне середовище з порушенням кількісного співвідношення компонентів наступного складу, г:
панкреатичний гідролізат рибного борошна 18,0
автолізат пекарних дріжджів 0,5
солянокислотний гідролізат казеїну 2,5
стимулятор росту гемофільних мікроорганізмів 0,5
глюкоза 5,0
натрій хлористий 2,5
агар мікробіологічний 10,0
поліміксину-В сульфат 10000 Од
лінкоміцину гідрохлорид 0,005
вода дистильована до 1 л
pH 7,3+0,2
Облік результатів проводили через 24-48 год культивування. У таблиці 2 дана порівняльна характеристика зростання гонококів з клінічного матеріалу та музейних штамів на пропонованій та відомих середовищах через 24-48 год зростання. Морфологія колоній та пофарбованих мазків на всіх випробуваних середовищах ідентична типова для гонокока. З таблиці 2 видно, що запропонована середовище інтенсивності зростання гонокока і чутливості перевищує комерційні середовища. Порушення кількісного співвідношення компонентів середовища призводить до різкого погіршення мікробіологічних показників якості запропонованого середовища. Запропоноване середовище дозволяє підтримувати життєздатність штамів Nisseria gonorrhoeae (як свіжовиділених від хворих, так і музейних) під час пасування протягом 9 місяців. У таблиці 3 представлені дані життєздатності культури Neisseria gonorrhoeae при культивуванні та зберіганні на щільних середовищах,
З таблиці 3 видно, що пропонована живильне середовище придатна для діагностичних цілей при виявленні хворих на гостру і хронічну гонорею, а також при отриманні біомаси Neisseria gonorrhoeae для створення гоновакцин. Джерела інформації
1. Handbook Culture Media (1982)
2. The manual of microbiological culture media (Gibco BRL 1988)
3. Оксидні матеріали для медичної культури, інгредієнти та інші laboratory services. (Oxoid Limited 1979)
4. Manual of BBL product and laboratoru procedures. 1991. 5. Авт. свідоцтво N 1451167 р.н. Гаджієва та ін. "Поживне середовище для виділення гонококів". 6. ФС 42-146 ВС-88 Поживне середовище для виділення гонокока, суха.

формула винаходу

1 Поживне середовище для виділення і культивування гонококу, що містить поживну основу, автолізат пекарних або пивних дріжджів, агар мікробіологічний, натрій хлористий, інгібітор сторонньої мікрофлори і воду дистильовану, що відрізняється тим, що в якості поживної основи іна , додатково містить стимулятор росту гемофільних мікроорганізмів, глюкозу, а в якості інгібітора сторонньої мікрофлори поліміксину-В сульфат і лінкоміцину гідрохлорид при наступному співвідношенні компонентів, г/л:3 Панкреатичний гідролізат рибного борошна7 22 283 або пивних дріжджів7 0,8 1,23 Стимулятор росту гемофільних мікроорганізмів7 2 103 Глюкоза7 9 113 Натрій хлористий7 2,9 3,13 Агар мікробіологічний7 12 - 153 Поліміксину-В сульфат, Ед7 100 00 ,0033 Вода дистильована7 До 1 л3 pH7 7,3 + 0,2

Схожі патенти:

Винахід відноситься до медичної біотехнології та стосується отримання менінгококового адгезину препарату бактеріального походження, що використовується, наприклад, для визначення ступеня адгезії менінгококів при їх взаємодії з клітинами макроорганізму