Рак молочної залози є найбільш поширеною формою онкологічної патології у жінок. Захворюваність на рак молочної залози в Росії на кінець 2011 року склала 45,2 випадки на 100 тисяч жінок, займаючи 20,4% у структурі загальної онкологічної захворюваності. Щороку у Росії виявляється понад 57 тис. нових випадків РМЗ. Коректний вибір пре-і постопераційної терапії, прогноз розвитку пухлини, оцінка ймовірності рецидиву багато в чому спираються на дослідження прогностичних і передбачуваних маркерів.
20,4% у структурі загальної онкологічної захворюваності займає рак 20,4% у структурі загальної онкологічної захворюваності займає рак молочної залози.
Що таке HER2?
Рецептор HER2 – один із найбільш значущих молекулярних маркерів при раку молочної залози (РМЗ). У нормальному станірецептор HER2 розташовується лежить на поверхні багатьох клітин організму. Приблизно у кожної четвертої жінки, хворої на РМЗ, кількість цього білка в клітинах пухлини підвищена в порівнянні з нормою. В основі збільшеної експресії лежить ампліфікація гена HER2/neu. Надмірна кількість цього рецептора на поверхні ракових клітинсвідчить про високоагресивну форму РМЗ.
Що таке високоагресивна форма РМЗ?
Злоякісне новоутворення у молочній залозі з ампліфікацією та збільшеною експресією гена HER2/neu. Пухлина даного типу веде себе вкрай агресивно та швидко метастазує до інших органів. Хворі на РМЗ з позитивним HER2-статусом мають поганий прогноз і низьку виживаність (1-2 роки з моменту постановки діагнозу). Захворювання схильні жінки в репродуктивному віці. Пухлина із позитивним HER2-статусом не реагує на традиційні лінії хіміотерапії.
Кількість хворих на РМЗ з HER2-позитивним статусом: HER2-позитивний статус пухлини виявляється у 25-30% всіх пацієнтів з РМЗ (близько 15 тис. нових випадків на рік). У Росії близько 90 000 тис. жінок з РМЗ із позитивним HER2-статусом. З них виявлено та перебуває на обліку лише 3 425 пацієнток.
Хто має пройти процедуру обстеження?
Усі жінки з виявленим РМЗ повинні пройти перевірку на визначення HER2-статусу в клітинах пухлини, оскільки цей статус вкрай важливий як для прогнозу, так і для вибору адекватного лікування. Перевірка статусу дозволяє лікарю з більшою точністю визначити, до якого з типів раку відноситься дана конкретна пухлина, уточнити діагноз і підібрати в індивідуальному порядку найбільше відповідне лікування. На сьогоднішній день аналіз дози гена HER2/neu при метастатичному ракумолочної залози рекомендовано Європейським суспільствомонкологів як необхідний елемент дослідження хворого
Чому важливо знати HER2-статус пухлини РМЗ?
Позитивний HER2-статус пухлини важливий відразу з кількох точок зору:
Дозволяє лікарю оцінити схильність до прогресування пухлини;
Визначити реакцію організму запропоноване лікування.
Показано, що для пацієнтів з позитивним HER2-статусом пухлин при хіміотерапії неефективне використання Метатрексату та Тамоксифену, а використання антрациклінів та платинових препаратів навпаки ефективніше, таксани та інгібітори ароматази однаково ефективні, незалежно від HER2-статусу пухлини. Аналіз дози гена HER2 дозволяє дізнатися, чи є сенс призначати лікування Герцептином.
Що таке герцептін?
Герцептин (Roche, Швейцарія) є яскравим представником класу таргетних препаратів на основі моноклональних антитіл, які з високим ступенем вибірковості зв'язуються з позаклітинною частиною рецептора HER2. Завдяки цій дії ураження ракових клітин стає більш спрямованим, адресним і щадним по відношенню до здорових клітин організму. Після того, як Герцептин блокує HER2-рецептори на поверхні ракової клітини, її подальше зростання припиняється і в ряді випадків спостерігається зменшення пухлини. Крім прямої антипроліферативної дії, Герцептин здатний викликати знищення пухлинних клітин за рахунок реакції антитіло-залежної клітинної цитотоксичності. Використання Герцептину дозволяє збільшити час до прогресування та загальне виживання хворих з гіперекспресією HER2/neu, подолати резистентність пухлини до цитостатичних препаратів та зменшити дозу хіміотерапії, і, як наслідок, дає шанс продовжити відпущені хворобою роки життя.
Встановлення HER2 статусу
У переважній більшості випадків в основі збільшеної експресії лежить ампліфікація гена HER2/neu, визначення HER2-статуса пухлини ми пропонуємо аналіз дози гена HER2/neu в клітинах пухлини за допомогою ПЛР в реальному часі. Ця технологія має хорошу кореляцію з імуногістохімічним (ІГХ) методом діагностики HER2-статусу пухлин (1). Крім того, ПЛР у реальному часі є чудовою альтернативою тест-системи на основі флуоресцентної гібридизації in situ (FISH), яка була рекомендована Управлінням з контролю якості харчових продуктіві лікарських засобів(США) як стандартний методдіагностики HER2-статусу пухлин при прогнозуванні перебігу РМЗ (2, 3)
Матеріал для дослідження
Для аналізу використовується ДНК із тканини пухлини РМЗ, отриманих під час біопсії або операції. Крім того, для аналізу може бути використана ДНК, виділена з архівних зразків тканини пухлини РМЗ ув'язнених у парафінових блоках.
Рецептор HER 2 - це білкова молекула або так званий білок HER 2, який необхідний нормального розвиткуклітин. Через рецептори НЕR 2 організм здійснює контроль процесу росту, розподілу, а також самовідновлення здорових клітин молочної залози. Однак ракові клітини грудей мають підвищена кількістьрецепторів HER2, стимуляція яких сприяє прискоренню росту клітин. У результаті приблизно у 25% пацієнтів з раком молочної залози клітини після отримання помилкової команди починають посилено ділитися і безконтрольно розростатися.
Негативний та позитивний рак молочної залози HER 2
Рак молочної залози з показником нормального, не підвищеного вмісту гена HER2 та рецептора HER2 має назву HER 2 – негативний. Цей видраку визначається у 75% пацієнтів із захворюванням на рак молочної залози.
Рак молочної залози з показником підвищеного вмісту (ампліфікацією) гена HER 2 або прискореним виробленням (оверекспресією) рецептора HER2 має назву HER 2-позитивний. Він визнаний особливо агресивним. Його діагностують лише у 25% випадках раку молочної залози. Зростання HER 2-позитивних злоякісних пухлин набагато швидше, ніж HER 2-негативних. Однак, HER 2 -позитивний рак молочної залози піддається лікуванню спеціальними препаратами Герцептин та Лапатініб, які не мають ефекту при лікуванні HER2-негативного раку.
Крім того, варто пам'ятати, що в 30% випадків HER 2-позитивний рак молочної залози з часом перетворюється на HER2-негативний.
Герцептин та ранній рак грудей
Проведене дослідження довело ефективність Герцептину для зниження ризику рецидиву захворювання у жінок із раннім раком грудей. Нещодавно для запобігання рецидиву застосовувалася хімічна терапія та гормональна терапія, проте не завжди успішно. Після того, як разом з хімічною терапією почали застосовувати Герцептін, ризик виникнення рецидиву скоротився вдвічі.
Ліцензування Герцептину відбулося у 2006 році у Великій Британії. Цей препаратзарекомендував себе як можливий варіантлікування після проведення хірургічного втручаннята додатково хіміо-радіотерапії.
HER 2 та гормональна терапія
Застосування гормонотерапії сприяє уповільненню чи блокуванню зростання злоякісних клітин молочної залози. Ефект гормональної терапіїдосягається за рахунок зміни рівня жіночих гормонів, що виробляються власним організмом, та запобігання знищенню гормонів злоякісними клітинами пухлини.
Гормональна терапія застосовна у тих випадках, коли у ракових клітин присутні естроген-або прогестерон-позитивні рецептори. Крім того, для визначення ефективності гормонотерапії необхідно визначити статус HER2, показник якого також є значущим при виборі методу лікування.
Визначення HER 2 статусу
Для визначення HER2 статусу раку молочної залози, а саме для виявлення підвищеного рівняГену HER 2 у пухлинних клітинах застосовуються спеціальні тести з тканини пухлини, взятого при біопсії. Тести можуть проводитись і одночасно з початковим етапом хірургічного втручання.
Варіанти тестів:
1. Імуногістохімічне дослідження (ІГХ) є недорогим, а й порівняно точним методом визначення HER 2 статусу. Дане дослідження дозволяє за гістологічним матеріалом визначити показник HER 2 протеїну в пухлинних клітинах молочної залози з використанням спеціального забарвлення. Чим вище показник кількості рецепторів HER2, тим яскравіше забарвлення. Результат залежить від показника інтенсивності фарбування та повноти фарбування клітинної мембрани та визначається за шкалою від 0 до 3+. Фарбування, що повністю оточує контур клітинної мембрани, визначається як 2+ або 3+. Часткове, неповне – як 1+. За показника 0 ампліфікація (накопичення) гена HER 2 відсутня. При показниках 1+ та 2+ рекомендовано FISH-дослідження для уточнення HER2 статусу.
2. тест FISH (флуоресцентна гібридизація) FISH - найточніше дослідження виявлення підвищеного рівня гена HER 2 в пухлинних клітинах молочної залози.
Показники FISH тесту поділяють рак молочної залози на:
HER2 – позитивний рак (за наявності ампліфікації гена HER2);
HER2 – негативний (за відсутності ампліфікації гена HER2).
3. тест SPOT-LIGHT HER 2 CISH
Тест під назвою SPoT-Light HER2 CISH також виявляє підвищений зміст(ампліфікацію) гена HER2 у пухлинних клітинах молочної залози. Тест введений у практику з 2008 року та використовується дотепер.
Показники проведеного SPoT-Light HER 2 CISH тесту поділяються на:
HER2 – позитивний рак молочної залози (за наявності ампліфікації гена HER2)
HER2 – негативний рак молочної залози (за відсутності ампліфікації гена HER2)
4. тест INFORM HER 2 DUAL ISH
Найновіший тест Inform HER2 Dual ISH, схвалений у США, використовується з червня 2011 року.
Показники результатів тесту SPoT-Light HER2 Inform HER2 Dual ISH аналогічні вищезгаданим тестам і також поділяються на позитивний та негативний рак молочної залози.
Злоякісні утворення молочної залози відноситься до самих частим хворобамз летальним кінцем серед жіночого населення в усьому світі. Вони лідирують серед ракових захворювань і становлять близько 11% від загальної кількості діагностованих онкологічних новоутворень.
На щастя, сучасний рівень розвитку медицини дозволив знизити рівень смертності жінок, які страждають від раку молочної залози, через відкриття сучасних препаратівдля хіміотерапії та покращеного скринінгу з можливістю більш ранньої діагностики.
Перед тим як поставити точний діагнозта розпочати необхідну терапію раку молочної залози, потрібно з'ясувати біологічний портрет пухлини. До комплексу цього опису має входити:
- Стадія пухлини;
- наявність метастаз;
- Індекс проліферативної активності ki-67;
- Статус HER2.
HER 2 це ген, (Human Epidermal Growth Factor Receptor 2) – людський рецептор епідермального фактора росту 2. Є трансмембранний білок, який має величезну роль у процесах руху сигналів росту на клітинному рівні. HER2 відноситься до сімейства HER-білків, які складаються з рецепторів фактора росту 4 видів: HER1, HER2, HER3, HER4.
У нормальній фізіології, HER2 сприяє передачі сигналів, які регулюють поділ і життєвий циклклітин, але його гіперекспресія може спричинити злоякісну мутацію. Зв'язок гіперекспресії HER2 і канцерогенезу добре вивчений на прикладі раку грудей у жінок (приблизно 30% жінок хворих на рак грудей, мають HER2 позитивний тип), так само, даний тип онкологічного процесу відноситься до головних маркерів раку ШКТ (близько 15-20% випадків ураження шлунка або стравоходу відносяться до HER2 – позитивним).
Сьогоднішнє діагностування раку, обов'язковому порядкувключає визначення HER2 статусу, спираючись на отримані результати діагностики, лікарі роблять прогноз на подальше лікуваннята виживання пацієнтки. відмінною рисою HER2 позитивного раку молочної залози вважається його підвищена агресивність(Він росте і поширюється набагато швидше, ніж HER2 негативний тип). Але, незважаючи на це, HER2 позитивний рак показує відмінні показники ефективності терапії специфічними препаратами Герцептин і Лапатініб, які не допоможуть при діагнозі HER2 негативний рак молочної залози.
Діагностика
Найкращим методом дослідження HER2 типу раку вважається патологоанатомічне дослідження, яке проводиться двома способами (імуногістохімія та гібридизація in situ). Ці методики допомагають побачити максимально повну картину патологічного процесу, розрахувати морфологічну характеристику та інтерпретувати кількісну експресію HER2
Імуногістохімія– є методом мікроскопічного дослідженняіз застосуванням світлого поля, при якому проводять паралельне визначення HER2-статусу, і оцінюють морфологію тканин. ІГГ досить простий метод, проводиться швидко і не вимагає великих фінансових витрат(Чим користуються багато патологоанатомічних лабораторій).
Але покладатися на результати цього методу нерозумно, оскільки критерії оцінювання ІГХ переважно суб'єктивні і напівкількісні, що у деяких випадках призводить до отримання неправильних результатів.
Матеріал, який був оцінений як ІГГ-2 позитивний, необхідно повторно протестувати з використанням методу гібридизації in situ, щоб отримати більш достовірний результат.
Гібридизація in situ (FISH) – ця методика мікроскопічного дослідження, але вже у темному полі, для якого використовують ДНК зонди, які пов'язані з флуоресцентною міткою для кількісного визначеннярівня ампліфікації гена HER2 Методика проведення полягає у зв'язуванні HER2 зонду та локусом гена HER2 на 17 хромосомі, тоді як зонд CEP17 зв'язується з центромірною ділянкою 17 хромосоми.
Отриману відповідь дослідження оцінюють як пропорції числа копій гена HER2 до копій 17 хромосоми. FISH-позитивним вважається зразок, в якому співвідношення HER2: CEP17 більше або дорівнює 2,0.
У більшості випадків in situ застосовують для підтвердження невизначених результатів ІГХ, але він може бути використаний у ролі початкового та основного методу.
Ті пацієнтки, які користувалися методом гібридизації як первинним діагностичним методом, та їх зразки оцінені як позитивні, відразу ж спрямовуються на анти-HER2-терапію. Якщо ж як основний метод було застосовано ІГХ, гібридизація in situ повинна виконуватися при всіх ІГХ 2 + результатах для підтвердження статусу HER2 і визначення кількісної оцінкиампліфікації гена HER2 Цільове лікуванняпухлини є ефективним для хворих жінок з гіперекспресією HER2 (тобто позитивний HER2 тип раку).
Зроблено висновки щодо хворих з результатами ІГХ3+, які мають позитивний HER2 статус, але на ІГХ 0/1+ — був негативний. У такому разі ІГХ2+ зразки вважаються невизначеними та підлягають повторному тестуванню методом гібридизації in situ. Зразок ІГГ 2+/ISH – позитивний, розцінюються як HER2 позитивний.
Якщо у лікаря виникають сумніви щодо результату ИГХ3+, він вирішує провести повторне визначення HER2 статусу, але з використання іншого методу.
Лікування
Збільшена активність рецептора HER2 відзначається приблизно у 1/3 всіх хворих жінок з діагнозом рак молочної залози, що взаємопов'язано з негативними прогнозами щодо перебігу процесу та реакцією новоутворення на хіміо та гормонотерапію. Гіперекспресія даних рецепторів робить рак більшою мірою агресивним. Це дозволяє робити прогноз щодо прогресування процесу і представляє можливість визначити цілі для націленої дії на злоякісні клітини, які містять даний рецептор.
Ген HER2, впливає на продукцію білка HER2, відноситься до протоонкогенів, тобто, незважаючи на те, що білок в нормі має регулюючу функцію, будь-яке відхилення в генах HER2 може стати фактором, що спричиняє виникнення раку, ось чому в діагностиці раку важливий показник статусу HER2.
Близько 30% хворих на рак грудей мають підвищену кількість білка HER2. Якщо порівнювати таких пацієнтів із жінками, які мають HER2 негативний тип, можна з'ясувати, що перша група піддається більш складному перебігу онкологічного процесу та швидкому розвитку, а методи лікування за типом хіміотерапії здатні лише посилити їхній стан.
Особливості раку HER2+:
- Існує значний відсоток того, що він рецидивує після лікування.
- Практика показує, що HER2+ рак реагує на лікування протипухлинними препаратами, якими проводять стандартне лікування раку молочної залози. Також доведено негативні наслідкизастосування стандартних прийомів хіміотерапії для лікування даного типу раку, вони виражаються у вигляді збільшення вироблення білка, та збільшення швидкості зростання пухлини.
Початок ранньої таргетної терапії препаратом Герцептин дозволяє попередити ранню прогресію утворення шляхом блокування HER2 рецепторів. Сучасні спеціалістив галузі онкології, користуються передовими методиками терапії, які показують відмінні результати, з допомогою прямого на змінені клітини – мішені. Зроблено висновки щодо прийому препарату Герцептин (пацієнти, які почали лікування цим препаратом на ранніх стадіях, мають на 50% нижчий прогноз щодо рецидиву, ніж ті пацієнти, які не лікувалися цим засобом).
Під час використання Герцептину паралельно з хіміотерапією у половини пацієнтів спостерігають повне зникнення пухлини. Якщо залишаються невеликі частинки, хірурги легко виробляють їх видалення. Виживання після такого курсу лікування збільшується в рази, а метастази не виявляються багато років.
Препарат Герцептин призначають хворим на HER2 позитивний тип пухлини, що можна визначити завдяки методам, описаним вище, їх повинні проводити в лабораторіях онкологічних диспансерів. Препарат призначається при ІГХ3+, у разі 1+ або 2+ необхідно використовувати ще один метод — FISH.
Лікування Герцептин доречно використовувати, виключно для пацієнток з позитивною експресією HER-2.
Прогноз
Наявність HER2-позитивного раку відноситься до групи з несприятливим прогнозом, і ця форма гірше піддається хіміо-і гормональній терапії. Але використання прицільного методу лікування та комбінування його з традиційними, що можливе лише при даному типі, суттєво підвищило шанси на виживання та прогноз на успішне лікуванняцієї хвороби останні 10 років.
Відео на тему
Якщо вам чи близькому діагностовано рак молочної залози, вам може бути цікаво, що таке HER2. Вам також може бути цікаво, що означає мати HER2-позитивний або HER2-негативний рак молочної залози.
Цей акронім, який виступає за рецептор 2 людського епідермального фактора росту, є одним із показників. Гормони естрогену та прогестерону також можуть визначати патологію вашого конкретного раку молочної залози. Ваш статус HER2 може допомогти визначити наскільки це агресивний рак. Ваш лікар буде використовувати цю інформацію для оцінки ваших варіантів лікування.
В останні роки відбулися значні зміни у лікуванні тих, хто має HER2-позитивний рак молочної залози, що призвело до кращого прогнозу для людей із цим станом.
Що таке HER2?
HER2 - це білок, створений HER2 ge північний схід Білки HER2 є рецепторами на клітинах молочної залози. Вони беруть участь у нормальному зростанні клітин. HER2 з'являється на деяких ракових клітинах, особливо для раку молочної залози та яєчників.
Іноді білок HER2 працює неправильно. Це може призвести до надто швидкого множення осередків. Надмірне розмноження може викликати рак молочної залози, що швидко росте. Якщо утворюється ракова пухлина, то частіше, ніж HER2-негативний рак, рецидивує.
Що означає HER2-позитивний?
Якщо HER2 є у ваших клітинах раку молочної залози, він відомий як HER2-позитивний рак молочної залози. HER2-позитивний рак молочної залози зустрічається приблизно у 25 відсотках випадків раку молочної залози.
Тестування HER2: що означає ваш результат тесту
HER2 було виявлено у 1980-х роках. У цей час дослідники зрозуміли, що присутність HER2 білка може призвести до швидкого поширення раку в інші частини тіла. Це відкриття призвело до дослідження того, як уповільнити чи змінити процес зростання цих ракових клітин. За останні 20 років було розроблено значні варіанти лікування, спрямовані на лікування HER2-позитивного раку молочної залози.
Що означає HER2-негативний?
Якщо клітини раку молочної залози не містять HER2, цей стан називається HER2-негативним раком молочної залози. Якщо у вас є HER2-негативний рак молочної залози, ваш лікар розгляне групи раку молочної залози 1 та 4 при визначенні плану лікування. Група 1 або просвіт A, рак молочної залози, ймовірно, виграють від гормональної терапії та хіміотерапії. Група 4 або базальноподібні рак молочної залози, ймовірно, виграють від хіміотерапії.
Тестування на HER2
Існує кілька тестів, які можуть визначати ваш статус HER2, у тому числі:
- тест на імуногістохімію (IHC)
- тест на флуоресценцію in situ гібридизації (FISH)
- Технологія зондів субтракції Хромогенний сингонізм in situ (тест SPOT-Light HER2 CISH)
- тест з високим ступенемгібридизації INFORM HER2 (INFORM HER2 Dual ISH)
Важливо знати, що використовується тест HER2, оскільки він визначатиме, чи будете ви відповідати на деякі ліки для HER2-позитивного раку молочної залози.Як правило, лікарі спочатку використовують тест IHC. Тести FISH вважаються точнішими, але вони дорожчими, і результати можуть зайняти більше часу.
Лікування HER2-позитивного раку молочної залози
Понад 30 років дослідники вивчають HER2 та способи лікування. Успішні цілеспрямовані методи лікування тепер змінили прогноз розвитку раку від 1 до 3 від бідних до добрих.
Оцінка генетики: HER2-позитивний рак молочної залози спадковий?
Гуманізоване моноклональне антитіло трастузумаб, також відоме як Герцептин, покращило перспективи пацієнтів з HER2-позитивним раком молочної залози при використанні в тандемі з хіміотерапією. Дослідження 1998 показало, що ця комбінація лікування сповільнила зростання HER2-позитивного раку молочної залози в порівнянні з лікуванням тільки однією хіміотерапією. Для деяких застосування трастузумабу з хіміотерапією призвело до тривалих ремісій.
Інші методи лікування HER2-позитивного раку молочної залози включають лапатініб (Tykerb). Цей препарат можна використовувати у поєднанні з капецитабіном (Xeloda), типом хіміотерапії або летрозолом (Femara), типом гормональної терапії.
2013 року дебютував новий препарат- ado-trastuzumab emtansine (Kadcyla). Цей препарат показує, що він може бути ефективним початковим лікуванням із меншою кількістю побічних ефектів, ніж трастузумаб.
Клініка Клівленда зараз проводить випробування, щоб визначити ефективність двох потужних цільових препаратів. Мета дослідження – «розробити оптимальний протокол довгострокового лікування» з мінімальними побічними ефектами, які також не потребують хіміотерапії.
Розмова з вашим лікарем
Якщо у вас діагностовано інвазивний рак молочної залози, переконайтеся, що ваш лікар перевірив вас на ваш статус HER2. Результати тесту визначить найкращі варіантилікування вашого раку.
Нові розробки у лікуванні HER2-позитивного раку молочної залози покращили перспективи для людей із цим захворюванням. Лікування може уповільнювати зростання білків HER2 у ракових клітинах.
Вибір редакції
В даний час для вибору оптимальної лікувальної тактикивибору адекватного лікарського лікування(антиестрогени, антроциклінові антибіотики, герцептин тощо) слід встановити не тільки стадію раку (включаючи систему TNM), гістологічний варіант та ступінь злоякісності, а й обов'язково – фенотип. При раку молочної залози найбільш важливими прогностичними показниками є проліферативна активність, експресія естрогенів та прогестеронів та, безумовно, експресія білка HER2/neu (c-erbB-2). Остання характеристика, за даними багатьох дослідників, не тільки дозволяє оцінити прогноз хвороби, особливо за наявності метастазів у регіонарних лімфатичних вузлах, але і, що особливо важливо, включити в лікувальний комплексновий патогенетичний препарат «Герцептин» (транстузамаб) – високоефективний препарат спрямованої дії. Цей препарат є рекомбінантним гуманізованим моноклональним антитілом, що зв'язується з рецептором HER2/neu на поверхні пухлинних клітин. Висока ефективність Герцептину обумовлена лише імуноопосередкованою цитотоксичністю, а й безпосереднім блокуванням проліферації, стимуляцією апоптозу, антиангіогенною активністю.
HER2/neu - тирозинкіназний трансмембранний рецептор із сімейства ERBB, що складається з чотирьох функціонально пов'язаних рецепторних молекул, що відіграють важливу роль у клітинному диференціюванні, проліферації, апоптозі. Під дією лігандів HER2/neu утворює гетеродимери з іншими рецепторами даного сімейства та регулює роботу відповідних сигнальних каскадів. HER2/neu експресується у невеликій кількості та в клітинах нормальних тканин. Однак у процесі злоякісного зростання відбувається його гіперекспресія та/або ампліфікація кодуючого його гена, що доводиться лише спеціальними методами дослідження. Встановлено, що онкопротеїн c-erbB-2 суперекспресовано у 20-30% випадків інвазивного раку молочної залози.
Однак для використання Герцептину необхідно достовірно підтвердити наявність гіперекспресії або ампліфікації цього гена у кожної конкретної хворої, оскільки в іншому випадку застосування дорогого препарату виявляється марним.
Основним методом визначення гіперекспресії HER2/neu в даний час є імуногістохімічний. Проведення імуногістохімічних досліджень висуває високі вимоги до відділення патологічної анатомії. Необхідно мати обладнання (провідні апарати, станції заливки, мікротоми високого класу та ін.), що дозволяє отримувати якісний вихідний матеріал і виготовляти тонкі парафінові зрізи, придатні для імуногістохімічного дослідження. Неякісний вихідний матеріал та неправильна постановка імуногістохімічних реакцій ведуть до неправильної оцінки результатів і тим самим – до неадекватного призначення або непризначення препарату.
Імуногістохімічне дослідження проводиться на біопсійному та операційному матеріалі, фіксованому 10% нейтральним формаліном, забуференим фосфатним буфером, протягом 24 годин. Адекватність фіксації та проведення матеріалу є найважливішим факторомотримання достовірного результатуімуногістохімічного дослідження. Гістологічна проводка матеріалу може здійснюватися в ручному або автоматичному режиміз використанням провідних апаратів. Після гістологічного проведення матеріал заливається в парафін і потім готуються зрізи товщиною 4 мкм. Зрізи монтуються на спеціальне високоадгезивне скло (Polysine, Histobond, Sialinised Slaid DAKO) і висушуються протягом 18 годин при температурі 37°С.
Проведення дослідження на цитологічному матеріалі заборонена, т.к. кількості матеріалу недостатньо для правильної оцінки. Слід наголосити, що оцінка результатів проводиться тільки в інвазивному раку, т.к. структури раку in situ, незважаючи на виражену гіперекспресію білка, не підлягають обліку. Бажано використовувати на гістологічний матеріал пухлини, які не піддані передопераційній променевій та/або хіміотерапії, тому при плануванні лікування з передопераційною терапією необхідна товстоїгла трепанобіопсія та проведення імуногістохімічного дослідження на цьому матеріалі. У разі відсутності матеріалу первинної пухлини можлива оцінка гіперекспресії метастатичних лімфатичних вузлах, т.к. у метастазах герцепт-статус пухлини зазвичай зберігається.
Імуногістохімічне дослідження (ІГХ) в ручному режимі або з використанням імуногістостейнера рекомендується проводити з набором реактивів, готових до вживання - DAKO HerceptTest. Можливе застосування концентрованих антитіл до білка HER2/neu (c-erbB2) і детекційної системи EnVision (DAKO).
Для ІГХ визначення гіперекспресії HER2/neu при використанні антитіл як у робочому розведенні, так і концентрованих антитіл, необхідним етапом є демаскування антигену. Відновлення антигенної активності за допомогою набору HercepTest проводиться у водяній бані, в розчині Epitope Retrieval Solution (DAKO), pH 6,0 при температурі 95-99°С. Депарафіновані та регідратовані зрізи занурюють у чашку Копліна з підігрітим буфером, поміщають у водяну банюпри температурі 95-99°З інкубують протягом 40 хв. Потім остуджують скло в буфері до кімнатної температурипротягом 20 хв. і промивають буфером для промивання 2 хв.
Демаскування антитіл можна проводити в спеціалізованому міні-автоклаві Retrival 2000 (Pick Cell) або в спеціальній каструлі під тиском (DAKO) відповідно до інструкції до цих приладів протягом 20 хв. при температурі 121 ° С або в мікрохвильовій печі - 20 хв. за потужності 500-750 W.
Після демаскування антигену приступають безпосередньо до постановки ІГХ реакції, детально описаної в ряді методичних рекомендацій. Стандартизація підготовки матеріалу та самого імуногістохімічного дослідження стає найважливішим фактором, що визначає достовірність отриманого результату та адекватність призначення або непризначення препарату.
При використанні для дослідження концентрованих антитіл застосовується та сама методика, тільки попередньо готується робоче розведення первинних антитіліз застосуванням спеціального розріджувача антитіл (DAKO).
Дослідження завжди проводиться з обов'язковим використанням контрольного скла з уже відомим результатом для контролю правильності реакції та якості реагентів.
При оцінці результатів реакції враховується експресія лише інвазивному компоненті пухлини. Оцінка результатів реакції проводиться за допомогою бальної шкали оцінки - 0, 1+, 2+, 3+, розробленої виробником тесту та схваленої FDA.
0 - при повній відсутностіпродукту реакції або виявленні його на мембранах менш ніж 10% клітин пухлини (рис. 1),
1+ - при незначній кількості продукту реакції на частини мембрани більш ніж 10% клітин пухлини (рис. 2),
2+ - при помірній кількостіпродукту реакції на мембранах більш ніж 10% клітин пухлини (рис. 3),
3+ - за наявності яскраво вираженого продукту реакції протягом усієї мембрани клітини при фарбуванні більш ніж 10% клітин пухлини (рис. 4).
Оцінка проводиться з використанням світлового мікроскопа, в основному при збільшенні об'єктиву 10х і лише у прикордонних випадках 1+/2+ – об'єктиву 20х. Якщо ми відзначаємо реакцію більш ніж 10% клітин зі збільшенням 20х, такий результат оцінюється як 1+.
Враховується тільки мембранне фарбування, і ніколи не враховується наявність забарвленої цитоплазми. Цитоплазматичне фарбування може бути пов'язане як з помилками у підготовці матеріалу або постановки реакції, так і порушенням процесів транспорту та формування рецепторів на клітинній мембрані пухлинної клітини. Хоча в цьому випадку наявність цитоплазматичної реакції є безперечним. науковий інтересДля призначення лікування герцептином ця реакція не повинна враховуватися.
Герцепт-статус, оцінений як 0 і один, слід вважати негативним, тобто. гіперекспресія білка та ампліфікація гена Her-2 відсутні. Герцепт-статус, оцінений як 3+, є позитивним, тобто. гіперекспресія білка та ампліфікація гена є. При герцепт-статусі 2+ за експресією білка на підставі імуногістохімічної реакції не можна впевнено судити про ампліфікацію гена, тому потрібне дослідження, що прямо виявляє наявність або відсутність ампліфікації. Таким методом є in situ гібридизація: при використанні флуоресцентної мітки – FISH (флуоресцентна in situ гібридизація) та при використанні хромогенної мітки – СІШ (хромогенна in situ гібридизація). Обидва методи виконуються на зрізах з того ж зразка (блоку), на якому проводилося імуногістохімічне дослідження. Ці методи також чутливі до умов фіксації та проведення матеріалу. При використанні FISH методу потрібно спеціалізоване дороге обладнання та набори реагентів, що випускаються фірмами Dako та Vysis. Оцінка наявності ампліфікації гена HER2/neu проводиться шляхом підрахунку сигналів, якими позначено центромірну ділянку хромосоми 17, і сигналів, що мітять ген HER/neu. Якщо їхнє співвідношення більше 2, це свідчить про наявність ампліфікації (рис. 5,6). При використанні методу CISH (тест-набір фірми Zymed) використовується зонд тільки до гена HER2/neu і проводиться підрахунок сигналів, що мітять лише кількість копій ампліфікованого гена. При кількості сигналів більш як 6 результат оцінюється як позитивний (рис. 7). При прикордонних станах (3-5 сигналів) застосовується додатково ще й FISH метод, що дозволяє визначити кількість хромосом, оскільки в пухлинних клітинах можлива як анеуплоїдія, так і поліплоїдія.
Таким чином, для ефективного призначення Герцептину хворим на рак молочної залози необхідне визначення герцепт-статусу пухлини імуногістохімічним методом та застосування методів in situ гібридизації за наявності статусу 2+. Використання цих методів потребує відповідного оснащення патологоанатомічних відділень та навчання лікарів-патологоанатомів методиці проведення та оцінки результатів дослідження. Імуногістохімічне визначення герцепт-статусу можливе лише у великих сертифікованих онкологічних установах, а застосування методів in situ гібридизації – лише у регіональних центрах.
Автори висловлюють подяку Представництву та фармацевтичної компанії Hoffmann - La Roche у Росії за допомогу у проведенні цієї роботи.
Література
1. Завалішина Л.Е., Франк Г.А.Морфологічне дослідження HER2 статусу. Методика та атлас.// М.Media Medica. – 2006. 98с.
2. Dowsett M., Cooket., Ellis I. Et al. Asstssment of HER2/neu status in breast cancer: why, when and who?// Eur. J. Cancer.-2000.- Vol.36.-.P.170-176.
3. Harari D., Yarden Y.Molecular mechanism underlaying ErbB/HER2 action in breast cancer //Oncogene. - 2000-Vol.19. - P.6102-6114
4. Jacobs TM, Gown AM, Yazjji H. et al. Comparison of Fluorescence в положенні hybridization and immunohistochemistry for the evaluation of HER2/neu in breast cancer. // J. Clin. Oncol. - 1999. - Vol.17, №7. - P.1974-1982
5. Mass R. Роль HER-2 expression в predicting response to therapy in breast cancer // Semin.Oncol. - 2000 - Vol.27, Suppl.11. - P.46-52.
6. Slamon DJ, Clark GM, Wong SG. et al Human breast cancer.Correlanion of replase and survival with amplification of HER2/neu oncogene. // Science.- 1987.-Vol.235. – P.177-182.
7. Walker R.A., Harris A.L., Balslev E. Immunohistochemistry and Breast Cancer. Diagnosis, Therapy and Prognosis.// Corporate Headquartes Denmark. - 2004. - 23p
Loading...