Съдържание
За да се оцени способността на организма да устои на инфекциозни заболявания или да се определи фазата на патологията, се използва кръвен тест. Методът ELISA заема важно място сред лабораторните изследвания, той помага за цялостно изследване на активността на защитната функция на кръвта, определяне на имунодефицит при инфекциозни заболявания, заболявания на кръвта, хормонални, автоимунни процеси.
Какво е ензимен имуноанализ
Този метод се отнася до лабораторни изследвания, определя наличието на защитни кръвни фактори от протеинова природа (антитела) към определени болестотворни агенти (антигени). Имуноензимният анализ на кръвта определя имуноглобулини, които могат да бъдат открити под формата на имунокомплекси. Те се появяват, когато възникнат сложни неврохуморални реакции на човешката имунна защита, които се превръщат в отговор на въвеждането на чужди антигени.
В тялото се произвеждат специфични антитела срещу всеки вид патоген. Освен това възниква свързването на патологичен микроорганизъм или антиген, образува се сложно съединение "антиген-антитяло". След това се неутрализира, настъпва ензимен лизис, реакцията на фагоцитоза и процесът завършва с изтегляне от тялото. Наличието на специфични комплекси, определени чрез ELISA, показва вида на патогена, вредно вещество в пациента.
Класове имуноглобулини
Учените са открили и изследвали 5 вида имуноглобулини: IgE, IgD, IgG, IgM, IgA. Има и други класове, но те все още са на етап проучване и ролята им не е напълно изяснена. В практическата медицина важни са A, M, G. Информативността, точността на определяне се основава на интервалите от време, за които се появяват, достигат максимум и изчезват.
Показания за изследване на кръвта чрез ELISA
С помощта на този анализ е възможно да се оцени ефективността на лечението, да се проведе цялостно проучване преди операции по трансплантация, да се определи състоянието на имунодефицит и антитела към повече от 600 вида алергени. Като допълнителен метод за откриване на ракови клетки се използва кръвен тест с помощта на ELISA. Анализ се предписва, ако е необходимо да се открият антитела срещу микроби, които провокират венерически патологии:
- трихомониаза;
- сифилис;
- токсоплазмоза;
- микоплазмоза;
- уреаплазмоза.
При хелминтни инвазии при анализа на ELISA ще се отбележи увеличение на броя на имуноглобулините. Провеждат се изследвания за потвърждаване на присъствието на пациента:
- вирус на Epstein-Barr;
- херпесни инфекции;
- цитомегаловирус;
- групи вирусни хепатити.
Кръвен тест чрез ELISA
Ензимният имуноанализ не е единствената възможност за определяне на имуноглобулините. Понякога за това изследване се вземат цереброспинална течност, стъкловидна тъкан и околоплодна течност. Когато се използва кръв, тя се събира от кубиталната вена с помощта на инжекционна игла. Необходимо е да се направи анализ на празен стомах, преди ELISA не се препоръчва да се приемат лекарства, които могат да повлияят на резултата. Трябва да се откажете от алкохола, пушенето, употребата на наркотици, преди да дарите биоматериала. Опции за резултатите от теста:
- При отрицателни показатели на имуноглобулините IgG, IgM, IgA лекарите говорят за липса на патология или начален етап. Същият резултат (отрицателен) ще бъде след пълно възстановяване след дълъг период.
- Ако IgG е положителен, но IgM и IgA не са открити, това показва формирането на имунитет след ваксинация или инфекциозно заболяване.
- При високи титри на IgM и отрицателни IgA, IgG се диагностицира остро инфекциозно заболяване.
- При положителен индикатор за IgG, IgM, IgA лекарите говорят за острата фаза на рецидив на съществуващо хронично заболяване.
- При хронична инфекция, която е в стадий на затихване (ремисия), ELISA анализът показва отрицателни IgM титри, а IgA и IgG ще бъдат положителни.
Предимства и недостатъци на ELISA анализа
Основният отрицателен момент на това проучване е възможността за получаване на фалшиво положителни или фалшиво отрицателни резултати. Причината за ненадеждността е прием на лекарства, технически недостатъци на лабораторията. Процесът на метаболитни нарушения в организма може да фалшифицира анализа. Основните предимства на ELISA анализа са:
- точност, диагностична специфичност;
- ниска цена на анализа;
- скоростта на получаване на резултати;
- възможността за динамичен контрол на стадия на патологията, ефективността на лечението;
- лекота на изследване;
- способността за извършване на масови изследвания на огнища на инфекция;
- безболезненост, безопасност за пациента;
- приложение в обработката на информационните технологии.
Видео
Открихте ли грешка в текста?
Изберете го, натиснете Ctrl + Enter и ние ще го поправим!
ELISA анализ (ензимен имуноанализ) е съвременна диагностична процедура, насочена към откриване на специфични антитела срещу патогени на редица заболявания в кръвта, определяне на етапа на развитие на патологията и нейната етиология. Използва се като метод за наблюдение на лечебния процес и неговата ефективност. В хода на изследването се анализират качествени и количествени показатели.
Методът ELISA е много информативен, точността на резултатите е повече от 96%. Диагностиката е достъпна в почти всяка лаборатория и лечебно заведение.
Основни показания
За потвърждаване на наличието на полово предавани инфекциозни заболявания се предписва ензимен имуноанализ:
- трихомониаза;
- хламидия;
- уреаплазмоза;
- сифилис и др.
ELISA се използва и за диагностициране на вирусни заболявания:
- херпес;
- херпес тип 4 (вирус на Epstein-Barr);
- вирусен хепатит;
- цитомегаловирусна инфекция.
Как да се подготвим за изследването
Биологичният материал за изследването е кръв. Няколко дни преди доставката му е изключено приемането на лекарства. За 14 дни употребата на антибиотици, противоглистни и антивирусни средства се спира.
Материалът се приема сутрин на празен стомах. Един час преди процедурата е позволено да се изпие чаша вода без газ, приемът на храна е изключен.
Характеристики на анализа
За изследването се взема венозна кръв в обем най-малко 5 ml. В някои случаи като биоматериал се използва цереброспинална течност, амниотична течност или съдържанието на стъкловидното тяло.
Вземането на кръв се извършва с инжекционна игла, строго на празен стомах, за да се избегнат фалшиво положителни резултати. За 12 часа трябва да спрете да пушите и да пиете алкохолни напитки. При използване на лекарства резултатите от анализа се изкривяват.
Ако в заключението са посочени отрицателни стойности на имуноглобулините G, A, M, това показва началната фаза на развитието на патологичния процес или неговото отсъствие. Такъв резултат се записва с пълно възстановяване на фона на терапията.
Отрицателен IgM и IgA резултат и положителен резултат IgG показват формиране на имунитет след инфекциозно заболяване или ваксинация.
Положителен IgM резултат и отрицателен или положителен IgG, IgA резултат показват наличието на остра инфекциозна патология.
Анализът ELISA се извършва доста бързо, резултатите са готови ден след вземането на материала.
Благодарение на развитието на съвременната медицина лекарят вече не трябва да се фокусира върху непреките прояви на заболявания или да провежда многоетапни лабораторни изследвания при поставяне на диагноза. Достатъчно е да се проведе един анализ, който ще потвърди или отхвърли предполагаемата първоначална диагноза.
Този метод е ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA) - това изследване ви позволява да откриете специфични антитела и антигени, характерни за различни патологии, което значително ускорява диагнозата.
ELISA анализът е лабораторен тест (метод), който помага да се определи наличието или отсъствието на определени антитела в организма за борба с вируса и техния брой.
В основата на изследването е естествената реакция на антиген (обект, вреден за тялото) - антитяло (протеин, който унищожава вредни обекти), което дава възможност да се открие наличието на различни вируси и бактерии.
ELISA е естествен имунен отговор на организма – взаимодействието на антитяло със съответния антиген. Така по време на ELISA, антигени или антитела се добавят един по един към епруветката с материала, след което се открива концентрацията на получените комплекси антиген-антитяло.
Ако се образуват съвпадения, тогава възникват имунни комплекси, тогава възниква ензимна реакция на оцветяващото вещество с комбинираната молекула. Поради промяната на цвета по време на ензимната индикация заболяването се идентифицира след изследване на нивото на аналита.
Видове имуноглобулини
Човешките имуноглобулини са диференцирани в няколко класа, които се различават един от друг по свойствата, структурата и антигенните характеристики на тежките вериги (Н-вериги). При всички бозайници, включително хората, се разграничават пет Н-вериги, които определят принадлежността на имуноглобулините към съответния клас: G, M, A, D, E.
Всеки клас се различава един от друг по биологични свойства и по способността да свързва антигени, както и по скоростта и силата на връзката с молекулата.
Функциите на всеки имуноглобулин (lg) са различни:
| Количество в тялото | Функции | Полуживот (дни) | смисъл | |||||||||||||||||||||||||||
| г | 70% | Формирайте пасивен имунитет при новороденото; необходими за имунен отговор подобряване на фагоцитозата, | 21-24 | осигуряват дългосрочен хуморален имунитет при инфекциозни заболявания | ||||||||||||||||||||||||||
| М | 5-10% | необходими за активиране на фагоцитозата способен да свързва 5 антигенни молекули, | 5 | Осигурява първичен имунен отговор | ||||||||||||||||||||||||||
| А | 10-15 | Неутрализира токсините и вирусите необходими за формирането на ранен имунитет Появата на имуноглобулини се случва в един вид "верига" - lgM lgG, така тялото реагира на появата на антиген в тялото. При лабораторна диагностика се оценява концентрацията на трите основни имуноглобулина – G, M, A. Показания за изследване на имуноглобулинELISA анализът става все по-популярен всяка година. Такова изследване ускорява диагнозата и това е много важно за лечението на такива патологии като:
ELISA е вид маркер за автоимунни патологии и злокачествени новообразувания. Подготовка за предаване на анализаПри подготовката за изследването трябва да се придържате към следните правила: Лекарите също препоръчват да се придържате към специална диета - елиминиране на мазни и пържени храни, а ако изследването се провежда за хепатит, тогава е необходимо да не се ядат никакви портокалови зеленчуци, и особено цитрусови плодове. Дарете кръв сутрин на празен стомах. Фалшиво положителният анализ се дължи на неизпълнени препоръки, особено на употребата на мазни храни, което води до твърде висока концентрация на триглицериди в плазмата, поради което проводимостта на ELISA намалява. Процедура за вземане на пробиКато материал за изследване може да се използва цяла кръв, серум или плазма от венозна кръв. Вземането на проби от материала обикновено се извършва от кубиталната вена, за това се използват игла за еднократна употреба и вакуумна тръба, необходими са 5-10 ml кръв. За точността на резултата е важно да се придържате към правилната техника за вземане на проби - пункцията на самия съд и околните тъкани трябва да се извърши с една манипулация, поради което се използва къса игла с голям диаметър, поради което противоположната стена на вената не е наранена и червените кръвни клетки не са увредени.
По време на съхранение на материала трябва да се избягва евентуалната му йонизация, освен това материалът не трябва да влиза в контакт с остатъците от дезинфектанти, поради което се използва само пластмасова туба за еднократна употреба, маркирана с пълното име на пациента, датата и часа на доставка на материала. Ако е необходимо кратко съхранение на изпитвания материал, тогава се използва хладилник с температура 2-4 ° C, ако е необходимо по-дълго съхранение, тогава материалът се замразява при температура -20 ° C. Как се прави анализътСлед подготовката на тестовия материал лаборантът пристъпва към необходимите манипулации. За това се използват редица специални набори от антигени, които имат способността да провокират реакциите на организма към дразнител, това са различни инфекции, хормони, алергени. Схемата на очакваната реакция антиген-антитяло изглежда така:
В момента са разработени много различни варианти на ELISA, няма ясна класификация за тях. Обикновено методите се разглеждат въз основа на разделянето му на хетеро- и хомогенни - всички фази на анализа протичат с помощта на твърда фаза или само с разтвор. Съвременните клинични диагностични лаборатории обикновено използват хетерогенна (твърда фаза) ELISA, при която твърдата фаза означава абсорбция на антигени или антитела върху твърдата повърхност на специални ямки, разположени върху полистиролова микроплака, методът е разделен на директен и индиректен ELISA. С директен ELISA въведеният антиген се фиксира по време на инкубационния процес върху повърхността на празни ямки, за това тестовите проби се поставят в чисти ямки за 20-25 минути, това е необходимо за прикрепяне на антигена към тяхната повърхност. След това се добавя необходимото антитяло. Освен това материалът остава за известно време за образуване на връзки. Антителата винаги се добавят в излишък, така че дори и да присъстват, несвързаните антигени остават в пробата и ако изобщо няма антигени, тогава няма да има връзки. За отстраняване на "допълнителните" антитела се извършва декантиране, след което остават само онези антитела, които са създали връзка с антигена.
При индиректния ELISA метод, използваните антитела са предварително свързани със субстрата на ензимната реакция; в този случай, свързването на антитела към антигена се случва по време на инкубационния процес, след което връзките се мобилизират на повърхността на ямките и конюгатът и добавеният субстрат-хромогенен реагент след това оцветяват реакцията. По този начин основната разлика между индиректния и директния метод не е залепването на материала към повърхността на чисти ямки, а свързването с имобилизирания върху плаката антиген. Реакцията се спира с помощта на специализирани устройства, след което всяка ямка се подлага на фотометрия, последвана от сравнителна характеристика на резултата, получен с предварително проведени контролни проби. Ако се установи увеличение на оптичната плътност в пробата, тогава концентрацията на специфични антитела в резултата от теста също е надценена. Кога ще бъде готов анализът?Изследването не отнема много време, от вземането на кръв до получаването на резултата отнема от 1 до 10 дни, в зависимост от диагностичните мерки. Резултати от теста и тяхната интерпретацияНа формуляра за диагностичен резултат, получен от пациента, се посочва отрицателен или положителен резултат за определени класове имуноглобулини, както и количествен индикатор за различни класове антитела. Възможни са различни интерпретации на резултатите:
Така например, ако са открити IgG и IgM, тогава пациентът може да има едно от следните заболявания:
Ензимен имуноанализ често се предписва за хормонални изследвания, процентите са показани в таблицата:
Анализът ELISA е диагностично изследване, което ви позволява да оцените вероятността от онкологични патологии. Интерпретацията на резултатите обаче се извършва само от лекуващия лекар. Значение на резултатите от тестаELISA е подходящ за откриване на различни форми на полово предавани инфекции, включително сифилис, и често се използва за скрининг на бременни жени. Благодарение на това проучване можете да разберете преди колко време е възникнала инфекцията и стадия на заболяването към момента на изследването:
По време на анализа ямките на плаката с отрицателен резултат остават безцветни, а положителните стават ярко жълти. Ако цветът на положителните ямки не съвпада с цвета на контролата, тогава резултатът се счита за съмнителен и е необходимо второ изследване. ELISA е първата стъпка в диагностицирането на ХИВ.Невъзможно е анализът да се извърши веднага след предполагаемата инфекция, необходимо е да се изчака края на инкубационния период (от 14 дни до 6 месеца). По време на анализа се определят антитела срещу HIV-1 и HIV-2, търсят се антитела от клас G, които обикновено се появяват на по-късна дата, и антитела от клас A и M, те могат да бъдат определени в ранните етапи (по време на инкубационния период ).
ELISA се използва и като диагностичен тест за туберкулоза, но дори ако пациентът има антитела към тази патология, това не винаги потвърждава наличието на туберкулоза, следователно, ELISA често се използва като техника за изясняване или за диагностициране на латентна извънбелодробна форма . IgG - хроничен стадий на инвазия |
||||||||||||||||||||||||||||
| IgA - инфекцията е настъпила преди повече от 30 дни | ||||||||||||||||||||||||||||||
| IgG - инвазията е в острата фаза | ||||||||||||||||||||||||||||||
| IgG - потвърждава диагнозата и показва ефективността на терапията |
Плюсове и минуси на анализа
ELISA има много предимства, което обяснява популярността му сред лекарите и пациентите, а именно:
- висока точност на резултата,
- достъпна цена,
- бърз резултат,
- идентифициране на стадия на заболяването,
- контрол на болестта във времето.
Въпреки това, наред с предимствата, има и недостатък - в редки случаи анализът е фалшиво положителен или фалшиво отрицателен.
Защо резултатът може да е ненадежден
В резултат на това могат да възникнат грешки поради технически нарушения, както и ненадежден анализ може да има при хора с определени хронични заболявания (ревматоиден фактор), за които е характерно производството на специфични антитела.
Също така, крайният резултат се влияе от употребата на лекарства от пациентите и метаболитните нарушения. Поради тези причини положителен резултат за ХИВ и онкопатология изисква втори тест.
Цената на изследването
Цената на ELISA варира в зависимост от посоката на диагнозата (рубли):
- хепатит 250 -900;
- вируси - 250 -1000;
- ХИВ - 250-350;
- хелминтни инвазии - 280 - 900;
- сифилис -150-250;
- гъбични инфекции 400-500.
Форматиране на статията: Лозински Олег
Видео за ELISA анализ
Как се извършва ELISA:
Как е изследването чрез ELISA
механизъм на реакция
Ензимният имуноанализ се основава на имунната реакция на антиген с антитяло, а прикрепването на ензимен етикет към антителата дава възможност да се вземе предвид резултатът от реакцията антиген-антитяло чрез появата на ензимна активност или чрез промяна в нивото й. В опростена форма механизмът на реакцията може да бъде представен по следния начин:
|
Първата реакция настъпва между открития Ig (Ab) и пречистения патогенен антиген (Ag), фиксиран към повърхността на ямките на имунологичната плоча |
|
|
|
За идентифициране на образуваните имунни комплекси се провежда втора имунологична реакция, при която свързаният специфичен Ig действа като антиген и действа конюгат, представляващ Ig (Ab) към съответния човешки Ig, белязан с ензима -пероксидаза (K). като антитела към него. |
|
|
След това настъпва ензимна реакция, катализирана от ензимната част на молекулата на конюгата.Субстратът на тази реакция е безцветно вещество - хромоген, който по време на реакцията образува оцветено вещество. Интензитетът на цвета в ямката зависи по определен начин от количеството имуноглобулини, съдържащи се в пробата. |
Точкуване
Извършване на ензимен имуноанализ
За серодиагностика се използват 96-ямкови полистиролови плаки, върху чиито клетъчни стени антигенът се адсорбира предварително. Тестовият серум се добавя към клетката на таблетката. В този случай към него са прикрепени антитела, хомоложни на антигена. Неприкрепените антитела се отстраняват чрез промиване. След това в клетките се въвеждат белязани с ензим антитела срещу човешки имуноглобулини (антитела). Ако откриваеми антитела са присъствали в тестовия серум, тогава на този етап те ще действат като антигени, с които белязаните антитела ще реагират. Добавянето на хромогенно вещество (багрило) след измиване ще направи възможно да се вземе предвид реакцията чрез развитие на оцветяване в клетките. В този случай интензитетът на цвета е пропорционален на количеството ензим, а оттам и на количеството антитела.При измерване на оптичната плътност (OD) на течност в клетка и сравняването й с контролна проба се изчислява концентрацията на антитела в единици обем.Най-често използваното изчисляване на резултатите е в единици оптична плътност.Всяка тестова система има свои собствени показатели за отчитане на резултатите и показатели на нормата и патологията, от които трябва да се ръководи при интерпретацията на резултатите.
Какви инфекции могат да бъдат открити чрез ELISA
Използва се основно в съвременната венерология за диагностика на сифилис (в комбинация с други реакции), HIV инфекция, вирусен хепатит. Има ограничено значение за диагностика на хламидиална инфекция, цитомегаловирусна инфекция и други херпесни инфекции. Методът ELISA също е използва се за определяне на антитела при различни инфекциозни заболявания, хормонални нива, автоантитела и различни ракови маркери.
Как да тълкуваме резултатите от ELISA
Изследването на наличието и нивото на антитела от различни класове в някои случаи помага да се определят етапите на инфекциозния процес
|
Стадий на заболяването |
IgM |
IgA |
IgG |
|
Първична фаза |
|||
|
Първична фаза |
|||
|
Първична фаза |
|||
|
Обостряне на хроничната фаза |
|||
|
хронична фаза |
|||
|
Минало (излекувана инфекция) |
|||
|
Възстановяване |
намаляване на титъра с 2-4 пъти след успешно лечение |
намаляване на титъра с 4-8 пъти за 1-1,5 месеца след успешно лечение |
|
|
Отрицателен резултат |
За съжаление, такова важно предимство на ELISA като количественото определяне на антителата не е от голямо значение в практическата работа – т.е. не позволява точна диагноза и не оказва влияние върху дозировката и времето за предписване на лекарства.
Каква е ролята на метода ELISA при диагностицирането на сифилис
Методът ELISA за диагностициране на сифилис е използван за първи път през 1975 г. В момента той се използва широко за серологична диагностика на сифилис в Русия и се използва като потвърждаващ тест за сифилис. Обикновено се провежда изследване, което открива т.н. наричани тотални антитела към антигени на бледа трепонема (IgM и IgG), въпреки че в някои случаи е възможно да се определят само "ранни" антитела от клас М. ELISA за сифилис става положителен след 3 седмици от момента на инфекцията и остава положителен за доста дълго време дори след лечение (понякога за цял живот).Затова като тест, потвърждаващ излекуването от сифилис, ELISA не се използва.В повечето случаи се извършва само качествено определяне на ELISA-т.е. само положителен или отрицателен резултат, въпреки че е възможно и количествено определяне.
Зареждане...