Uvođenje

1. Ukupna karakteristika i klasifikacija citokina.

1.1. Mjerenje akcija.

1.2 Sukcesija citokina.

1.3Rol citokini u regulaciji fizioloških funkcija tijela.

2. Moguće studije citokina.

2.1 Tretirajte citokine u patogenezi upalnih bolesti dece dece.

2.2.Rolo dušični oksid i citokini u razvoju akutnog sindroma oštećenja pluća.

3. Metode za određivanje citokina

3.1. Detalji biološke aktivnosti citokina

3.2. Pridruženi citokini koristeći antitijele

3.3. Određivanje citokina metodom enzimskog imunoasaya.

3.3.1 Faktor nekroze tumor-alfa.

3.3.2Gamma-interferon.

3.3.3 Interlakin-4.

3.3.4 Embrellakin-8.

3.3.5receptor Interleukin-1 antagonist.

3.3.6 Falph interferon.

3.3.7ant i alfa informacije.

4.IMpunotropni lijekovi zasnovani na citokinima.

Lista polovne literature.

Zaključak.

Uvođenje

Od trenutka opisa prvih citokina je prošlo malo vremena. Međutim, njihovo istraživanje dovelo je do raspodjele opsežnog odjeljka znanja - citokinologije, koja je sastavni dio različitih područja znanja i, prije svega, imunologije, koja je dala najmoćniju podsticaj za studiju ovih posrednika. Koknologija prožima sve kliničke discipline, u rasponu od etiologije i patogeneze bolesti i završetka prevencije i liječenju različitih patoloških uvjeta. Shodno tome, naučni istraživači i kliničari moraju biti fokusirani na raznolikost regulatornih molekula i imati jasnu ideju o ulozi svakog od citokina u procesima u studiju. Sve ćelije imunološkog sistema imaju određene funkcije i rade u jasno dosljednoj interakciji, koje pružaju posebne biološki aktivne tvari - citokini - regulatori imunološke reakcije. Citokini nazivaju specifičnim proteinima, sa kojima različite ćelije imunološkog sistema mogu se razmijeniti i koordinirati akcije. Set i količine citokina koje djeluju na receptore za površinu ćelije su "Cytokine medium" - predstavljaju matricu interakcije i često promjenjive signale. Ovi su signali složeni zbog velikih raznolikosti cytokine receptora i zbog činjenice da svaki od citokina može aktivirati ili suzbiti nekoliko procesa, uključujući vlastitu sintezu i sintezu drugih citokina, kao i izgled i izgled citokinskih receptora . Svrha našeg rada je proučavanje citakina, njihovih funkcija i svojstava, kao i moguću upotrebu u medicini. Citokini su mali proteini (MOL. Masa od 8 do 80 kda), vršilačka autokrena (I.E., na ćeliji koja ih proizvodi) ili pakonom (na ćelijama koje se nalaze u blizini). Formiranje i puštanje ovih visoko aktivnih molekula događaju se kratko i čvrsto se podesiva.

Pregled literature.

Opće karakteristike i klasifikacija citokina.

Citokini su grupa polipeptidnih posrednika međukulturalne interakcije uključene uglavnom u formiranje i regulaciju zaštitnih reakcija organizma u uvođenju patogena i kršenja integriteta tkiva, kao i u regulaciji niza normalnih fizioloških funkcija. Citokini se mogu dodijeliti novom neovisnom regulacijskom sistemu koji postoji uz nervni i endokrini sustavi za održavanje homeostaze, a sva tri sustave su usko povezani i međusobno povezani. U protekle dve decenije, geni većine citokina dobijeni su i rekombinantni analognici, u potpunosti ponavljaju biološka svojstva prirodnih molekula. Sada već postoji više od 200 pojedinih tvari koje pripadaju porodici citokine. Istorija studije citokina započela je u 40-ima dvadesetog veka. Tada su bili prvi efekti cachectina - opisani su faktor u serumu u krvi i sposobni keširani ili smanjenje tjelesne težine. Ubuduće je ovaj posrednik uspeo da dodijeli i pokaže svoj identitet faktoru nekroze tumora (FNO). U to vrijeme, studiju citokina održana je na principu otkrivanja jednog biološkog učinka koji je služio kao polazište za ime odgovarajućeg posrednika. Dakle, u 50-ima Interferon (IFN) je imenovao zbog sposobnosti za obrozanje ili povećanje otpora ponovljenom virusnom infekcijom. Interleukin-1 (IL-1) je također prvi put nazvan endogeni pirogen u protutežnim bakterijskim lipopolisaharidima, koji se smatraju egzogenim pirogenima. Sljedeća faza studiranja citokina, koja se odnosi na 60-70 godina, povezana je sa pročišćavanjem prirodnih molekula i sveobuhvatne karakteristike za njihovu biološku akciju. Do ovog trenutka, otvaranje faktora rasta T-ćelija poznato je sada kao IL-2, a niz drugih molekula koji potiču rast i funkcionalnu aktivnost T-, B-limfocita i drugih vrsta leukocita. Godine 1979. godine, pojam "Interleukins" predložen je za njihovu imenu i sistematizaciju, odnosno medijatori koji komuniciraju između leukocita. Međutim, prestalo je da se biološki učinci citokina šire daleko izvan imunološkog sistema, a samim tim i prethodno predloženi pojam "citokin" bio je prihvatljiviji, sačuvan do danas. Revolucionarni zaokret u studiji citokina dogodilo se početkom 1980-ih nakon kloniranja gena miša i ljudskog miša interferona i proizvodnje rekombinantnih molekula koji su u potpunosti ponovili biološka svojstva prirodnih citokina. Nakon toga bilo je moguće klonirati gene i druge posrednike iz ove porodice. Važna prekretnica u istoriji citokina bila je klinička upotreba rekombinantnih interferona, a posebno rekombinantnog IL-2 za liječenje raka. 90-ih su obilježile otkriće subunjske strukture citokinskih receptora i formiranje koncepta "citokinske mreže", te početkom XXI veka - otkriće mnogih novih citokina po genetičkoj analizi. Citokini uključuju interferone, kolonimulirajuće faktore (CSF), hemokine transformišu faktore rasta; Faktor nekroze tumora; Interleukins sa postojećim povijesnim redni brojevima i nekim drugim endogenim posrednicima. Interleukins, koji imaju redoslijed brojeva, počevši od 1, ne pripadaju jednoj podskupini citokina povezanih sa općenitošću funkcija. Oni se zauzvrat mogu podijeliti u pro-upalne citokine, rast i diferencijaciju limfocitnih faktora, zasebne regulatorne citokine. Naziv "Interleukin" dodijeljen je novootvorenom medijatoru u slučaju da su sljedeći kriteriji koji su razvili odbor za nomenklaturu Međunarodne unije imunoloških društava: molekularni kloniranje i izražavanje generiranog faktora, prisustvo jedinstvenog nukleotida i odgovarajućeg Sredstva aminokiselina, dobivanje neutralizacije monoklonskih antitijela. Pored toga, novim molekulom treba proizvesti ćelije imunološkog sustava (limfociti, monociti ili druge vrste leukocita), kako bi imale važnu biološku funkciju u reguliranju imunološkog odgovora, kao i dodatne funkcije, zbog kojih se ne može dobiti funkcionalno ime. Konačno, navedena svojstva novog interleukina moraju biti objavljena u recenziranoj naučnoj publikaciji. Klasifikacija citokina može se izvesti prema njihovim biohemijskim i biološkim svojstvima, kao i prema vrstama receptora, putem kojih citokini vrše svoje biološke funkcije. Klasifikacija citokina u strukturi (Tabela 1) uzima u obzir ne samo aminokiselinu sekvencu, već prije svega tercijarne strukture proteina, što preciznije odražava evolucijsko porijeklo molekula.

Tabela 1. Klasifikacija citokina u strukturi.

Kloniranje gena i analiza konstruktora citokinskih receptora pokazalo je da su i sami citokini, ovi molekuli mogu podijeliti u nekoliko vrsta prema sličnosti aminokiselina nizova i osobina organizacije vanćelijskih domena ( Tabela 2). Jedna od najvećih porodica cytokine receptora naziva se porodicom hematopoetinskih receptora ili tipa I tipa cytokine receptora. Značajka strukture ove grupe receptora je prisustvo TRP-SER-X-TRP-SER (WSXWS), smješten na maloj udaljenosti od ćelijske membrane u molekuli Cistein. II Klasa citokinskih receptora komuniciraju sa interferonima i sa IL-10. Obje prve vrste receptora imaju homologiju jedno s drugim. Sljedeće grupe receptora pružaju interakciju s citokinima porodice faktora nekroze tumora i porodice IL-1. Trenutno više od 20 različitih hemokinskih receptora djeluje s različitim stupnjevima od afiniteta s jednim ili više liganda porodice hemokine. Kemokinski receptori pripadaju superfamililiju rodopsin receptora, imaju 7 transmembranskih domena i voditi signal sa sudjelovanjem G-proteina.

Tabela 2. Klasifikacija citokinskih receptora.

Mnogi citokinski receptori sastoje se od 2-3 podjedinice kodiranih različitim genima i izražene nezavisno. Istovremeno, istodobna interakcija svih podjedinica potrebna je za formiranje visokopročišćenog receptora. Primjer takve organizacije citokinskih receptora je struktura kompleksa receptora IL-2. Iznenađujuće je otkriće činjenice da su pojedinačne podjedinice kompleksa receptora IL-2 uobičajene za IL-2 i neke druge citokine. Dakle, β-lanac je istovremeno komponenta receptora za IL-15, a γ-lanac služi kao uobičajena podjedinica receptora za IL-2, IL-4, IL-7 i IL-15 i IL-15 i IL-21. To znači da su svi spomenuti citokini čiji se receptori sastoje od 2-3 pojedinačnih polipeptida, koriste γ-lanac kao komponentu njihovih receptora, a komponenta odgovorna za provođenje signala. U svim slučajevima, specifičnost interakcije za svaku citokinu pružaju ostale podjedinice koje se razlikuju u strukturi. Među citokinskim receptorima postoje još 2 opće subnetove receptora koji se provode nakon interakcije s različitim citokinima. Ovo je ukupni subunit βc (GP140) za receptore IL-3, IL-5 i GM-CSF, kao i podjedinicu GP130, ukupno za članove porodice IL-6. Prisutnost zajedničke podjedinice signalizacije u citokinskim receptorima jedan je od pristupa njihovoj klasifikaciji, jer vam omogućava da pronađete zajednicu kako u strukturi ligandi i u biološkim efektima.

Tablica 3 prikazuje kombinirano strukturno i funkcionalno klasifikaciju, gdje su svi citokini odvojeni u grupe, prije svega uzimajući u obzir njihovu biološku aktivnost, kao i gornje karakteristike strukture molekula citokina i njihovih receptora.

Tabela 3. Strukturna i funkcionalna klasifikacija citokina.

	Porodični citokini	Podgrupe i ligands	Osnovne biološke funkcije
	Interferoni i upišem	IFN A, B, D, K, W, T, IL-28, IL-29 (IFN L)	Antivirusna aktivnost, antiproliferativni, imunomodulatorni učinak
	Faktori rasta hematopoetskih ćelija	Faktor matičnih ćelija (kit-ligand, čelični faktor), FLT-3 ligand, gospodin KSF, M-KSF, IL-7, IL-11 Ligands GP140: IL-3, IL-5, GM-KSF	Stimulacija širenja i diferencijacije različitih vrsta predecerskih ćelija u koštanoj srži, aktiviranjem formiranja krvi Eritropoetin, trombopopoitin
	Super ženska interleukina-1 i frf	Porodica FRF: Kiseli frf, glavni frf, FRF3 - FRF23 Porodica IL-1 (F1-11): Il-1α, IL-1β, IL-1 receptor antagonist, IL-18, IL-33, itd.	Aktivacija širenja fibroblasta i epitelnih ćelija Indirektno djelovanje, aktiviranje specifičnog imuniteta
	Porodica faktora nekroze tumora	FNF, limfotoksini α i β, fas-ligand itd.	Propatno djelovanje, regulacija apoptoze i međućelijske interakcije imunokompetentnih ćelija
	Interleukina-6 porodica	Ligands GP130: IL-6, IL-11, IL-31, onkostatin-m, kardiotropin-1, inhibicijski faktor leukemije, cilijarni neurotrofni faktor	Pravilna i imunoregulacijska akcija
	Chemokina	SS, CXC (IL-8), SHS3S, sa	Regulacija hemotaksija različitih vrsta leukocita
	Interleukina-10 porodica	IL-10,19,20,22,24,26.	Imunosupresivna akcija
	Interleukina-12		Regulacija diferencijacije pomagača T-limfocita
	Citokini klonova T-pomagača i regulirajuće funkcije limfocita	T-pomagači tipa 1: IL-2, IL-15, IL-21, IFNG T-pomagači 2 Tip: IL-4, IL-5, IL-10, IL-13 Ligands γ-Chain IL-2 receptor: IL-7 TSLP	Aktivacija ćelijskog imuniteta Aktivacija humoralnog imuniteta, imunomodulativnog efekta Stimulacija diferencijacije, proliferacija i funkcionalne svojstva različitih vrsta limfocita, DK, NK ćelija, makrofaga itd.
	Interleukin porodica 17.	IL-17A, B, C, D, E, F	Aktivacija sinteze pro-upalnih citokina
	Vrhunski faktori rasta, faktor rasta trombocita i transformiranje faktora rasta	Faktor rasta nerv: FRN, mozak neurotrofični faktor Troominarski faktori rasta (PDGF), angiogeni faktori rasta (VEGF) Porodična trf: TRFB, aktivnosti, inhibicije, nodalni, koštani morfogeni proteini, mulrijska inhibitorna supstanca	Regulacija upale, angiogeneze, funkcioniranja neurona, embrionalnog razvoja i regeneracije tkiva
	Porodica faktora rasta epidermalnog rasta	ERF, Trfα itd.
	Porodica faktora rasta poput inzulina	IRF-I, IRF-II	Stimulacija širenja različitih vrsta ćelija

Prva grupa uključuje tipu I interferonu i najjednostavnija je na organizaciji, jer su svi molekuli uključeni u njemu sličnu strukturu i u velikoj mjeri iste funkcije povezane sa antivirusnom zaštitom. Druga grupa je uključivala faktore rasta i diferencijaciju hematopoetskih ćelija, što podstiču razvoj predecerskih ćelija koje formiraju krv, u rasponu od matične ćelije. Ova grupa uključuje citokine, usko specifične za pojedinu diferencijaciju hematopoetskih ćelija (eritropoetin, trombopoetine, kao i IL-7, koji djeluju na prekursore T-in-limfocite), kao i citokine sa širim rasponom biološke aktivnosti, kao što su IL-3, IL-11, clonski glodalice. Sastav ove grupe citokina istaknuo je GP140 ligands koji imaju zajedničku subvenciju receptora, kao i trombopopoetina i eritropoetin zbog sličnosti strukturne organizacije molekula. Citokini FRF-a i IL-1 superfamilije imaju visok stepen homologije i sličnu strukturu proteina, što potvrđuje općenitost porijekla. Ipak, prema manifestacijama biološke aktivnosti, FRF se u velikoj mjeri razlikuje od agonista porodice IL-1. Porodica Molekula IL-1, pored funkcionalnih naslova, ima oznake F1-F11, gdje F1 odgovara Il-1α, F2 - IL-1 Receptor antagonist, F4 - IL-18 . Preostali članovi porodice otvoreni su kao rezultat genetske analize i imaju dovoljno visoke homologije sa IL-1 molekulama, međutim, njihove biološki funkcije nisu u potpunosti razjašnjene. Sljedeće grupe citokina uključuju IL-6 porodice (ligands općeg receptora subunit GP130), tumor Nekroza i hemokin predstavljaju najveći broj pojedinih ligandi i u potpunosti naveden u odgovarajućim poglavljima. Porodica nekroze faktora tumora formirana je uglavnom na osnovu sličnosti u strukturi ligandi i njihovih receptora koji se sastoje od tri ne-tentalno povezane identične podjedinice koje tvore biološki aktivne molekule. Istovremeno, citokini sa dovoljno različitim aktivnostima uključeni su u biološka svojstva ove porodice. Na primjer, TNF je jedan od najvažnijih pro-upalnih citokina, FAS liganda uzrokuje apoptozu ciljanih ćelija, a CD40 ligand pruža stimulativni signal s međućelijnom interakcijom T-i B-limfocita. Takve razlike u biološkoj aktivnosti strukturno sličnih molekula prvenstveno se određuju prvenstveno karakteristikama izražavanja i strukture njihovih receptora, poput prisustva ili odsustva unutarćelijskog domena "smrti", koji određuju apoptozu stanica. IL-10 i IL-12 porodice posljednjih godina su dopunjeni i novim članovima koji su dobili redoslijed interleukina. Nadalje, prati se vrlo složena grupa citokina, koja su posrednici funkcionalne aktivnosti pomagača T-limfocita. Uključivanje u ovu grupu temelji se na dva osnovna načela: 1) koji pripada citokinima koji sintetizira TX1 ili TX2, koji određuje razvoj pretežno humoralne ili ćelijske vrste imunoloških reakcija, 2) prisutnost zajedničkog subventa receptora - Gamma lanci kompleks receptora IL-2. Među ligandama lanca gama, IL-4 je dodatno izoliran, što ima i opće brojeve receptora sa IL-13, što u velikoj mjeri određuje djelomično preklapaju biološku aktivnost ovih citokina. Slično tome, IL-7 je izoliran, koji ima zajednicu strukture receptora sa TSLP-om. Prednosti navedene klasifikacije povezane su s istovremeno uzimajući u obzir biološka i biohemijska svojstva citokina. Izvodljivost takvog pristupa trenutno je potvrđena otkrićem novih citokina genetska analiza genena i potraga za strukturnim sličnim genima. Zahvaljujući ovoj metodi, IL-1, IL-10, IL-12 Interferon, IL-12, značajno se proširio, pojavila se nova porodica citokina analoga IL-17 koja se već sastoji od 6 članova. Očigledno, u bliskoj budućnosti pojavu novih citokina dogodit će se značajno sporije, jer je analiza ljudskog gena gotovo potpuna. Promjene su najvjerovatnije moguće zbog pojašnjenja opcija za interakcije i biološka svojstva za remetore liganda koja će omogućiti klasifikaciju citokina da osudi konačni oblik.

Akcijski mehanizmi.

B. Cytokine receptori. Citokini su hidrofilne signalne supstance čije akcije posreduju određenim receptorima na vanjskoj strani plazme membrane. Vezivanje citokina sa receptorom (1) vodi kroz brojne posredne faze (2-5) za aktiviranje transkripcije određenih gena (6). Cytokine receptori ne posjeduju aktivnost tirozinskih kinaza (za nekoliko izuzetaka). Nakon vezivanja na citokin (1), molekuli receptora povezani su formiranjem homodimera. Pored toga, oni mogu formirati heterodimere zbog udruživanja sa proteinima signala-nosača [BPS (STP)] ili potaknuti dimenziju samih bps (2). Receptori Class I Cytokine mogu se objediniti s tri vrste BPS-a: proteini GP130, βc ili γc. Ovi pomoćni proteini nisu u stanju da vezuju citokine, ali oni prenose signal tirozin kinazu (3), isti spektar biološke aktivnosti mnogih citokina objašnjava se različitim kompleksima citokina mogu aktivirati iste bps.

Kao primjer prijenosa signala od citokina u dijagramu, prikazan je kao receptor IL-6 (IL-6) nakon obvezanja u ligand (1) stimulira dimenziju GP130 (2). Dimer membranskih proteina GP130 veže i aktivira citoplazmatsku tirozin kinazu porodice YAK (Janus Kinases, ima dva aktivna centra) (3). Janus Kinase fosforilatni receptori, bps i razni citoplazmatski proteini koji vježbaju daljnji prijenos signala; Oni također faktori transkripcije fosforira - nosači signala i aktivatori transkripcije [PSAT (stat, iz engleskog transkripcije signala i aktivatora transformatora)]. Ovi proteini pripadaju porodici BPS-a u strukturi SH3 domene, prepoznajući ostatke fosfotirozina (vidi str. 372). Stoga imaju svojstvo za druženje sa fosforiziranim citokinskim receptorom. Ako se pojavi fosforilacija molekule PSAT-a (4), faktor ulazi u aktivni oblik i oblici dimer (5). Nakon translacije u kernelu, dimer kao faktor transkripcije povezan je s promotorom (vidi C. Domena ulazi u krv, gdje se takmiče za obvezujući na citokin, što u krvi smanjuje koncentraciju citokina. Kombinacija citokina čine regulatornu mrežu (kaskada citokina) sa multifunkcionalnom akcijom. Prepletanje citokina dovodi do činjenice da se u akciji mnogih njih opaža, pridržava se sinergizam, a neki citokini su antagonisti. Često u tijelu možete promatrati cijelu kaskadu citokina sa složenim povratnim informacijama.

Svojstva citokina.

Opća svojstva citokina, zahvaljujući kojima se ovi posrednici mogu kombinirati u nezavisni sistem regulacije.

1. Citokini su polipeptidi ili proteini, često glikozilirani, većina njih ima mm od 5 do 50 kda. Biološki aktivni molekuli citokina mogu se sastojati od jedne, dvije, tri ili više identičnih ili različitih podjedinica.

2. Citokini nemaju antigena specifičnost biološke akcije. Oni utječu na funkcionalnu aktivnost ćelija uključenih u reakcije urođenog i stečenog imuniteta. Ipak, utječući na T- i B limfocite, citokini su u mogućnosti da potaknu procese koje su izazvali antigeni u imunološkom sistemu.

3. Za gene citokina postoje tri mogućnosti za izražavanje: a) izraz specifičan za stadion u određenim fazama embrionalnog razvoja, b) konstitutivni izraz za regulisanje niza normalnih fizioloških funkcija, c) induktivan tip izražavanja karakteristika za većinu citokina . Zaista, većina citokina izvan upalnog odgovora i imunološkog odgovora ne sintetizira se ćelije. Izraz citokinskih gena započinje kao odgovor na prodor u tijelo patogena, antigenskih iritacija ili oštećenja tkiva. Neki od najmoćnijih induktora sinteze pro-upalnih citokina su molekularne strukture povezane sa patogenom. Za pokretanje sinteze T-ćelijskih citokina, aktivacija ćelije zahtijeva određeni antigen sa sudjelovanjem T-ćelijskog antigenskog receptora.

4. Citokini se sintetizira kao odgovor na stimulaciju kratkog vremenskog perioda. Sinteza prestaje zbog različitih mehanizama Autoregumenta, uključujući povećanu nestabilnost RNA, a zbog postojanja negativnih povratnih informacija posredovanih prostaglandinima, kortikosteroidnim hormonima i drugim faktorima.

5. Isti citokin može se drugačije proizvoditi histogenetskim porijeklom ćelija organizma u različitim organima.

6. Citokini se mogu povezati sa membranama sintetizacije njihovih ćelija, u obliku membranskog oblika sa potpunim spektrom biološke aktivnosti i prikazivanje njenog biološkog efekta tijekom interkelularnog kontakta.

7. Biološki efekti citokina posreduju se kroz specifične komplekse za receptore ćelije koje vežu citokine sa vrlo visokim afinitetom, a odvojeni citokini mogu koristiti zajedničke podjedinice receptora. Cytokine receptori mogu postojati u topljivim oblicima, držeći sposobnost vezanja ligandi.

8. Citokini imaju biološki playotrofizam. Isti citokin može djelovati na mnogim vrstama ćelija, uzrokujući različite efekte ovisno o vrsti ciljnih ćelija (Sl. 1). PlayOtropy o citokinskoj akcija osigurava se izrazom citokinskih receptora na različitim vrstama ćelija i funkcijama ćelijskih vrsta i signala koristeći nekoliko različitih intracelularnih glasnika i faktora transkripcije.

9. Za citokine je karakteristična zamenljivost biološke akcije. Nekoliko različitih citokina može uzrokovati isti biološki učinak ili posjedovati sličnu aktivnost. Citokini induciraju ili suzbija sintezu sebe, druge citokine i njihove receptore.

10. Kao odgovor na signal za aktivaciju, sinteza ćelija istovremeno nekoliko citokina uključenih u formiranje citokinske mreže. Biološki učinci u tkivima i na nivou tijela ovise o prisutnosti i koncentraciji drugih citokina sa sinergijskim, aditivnim ili suprotnim efektom.

11. Citokini mogu uticati na širenje, diferencijaciju i funkcionalnu aktivnost ciljnih ćelija.

12. Citokini djeluju na ćelije na različite načine: autorini - na ćeliji, sintetiziranje i tajni ovog citokina; Paronno - na ćelijama koje se nalaze u blizini ćelija proizvođača, na primjer, u fokusu upale ili u limfoidnog organa; Endokrin - udaljen ćelijama bilo kojeg organa i tkiva nakon ulaska u cirkulaciju. U potonjem slučaju radnja citokina podsjeća na djelovanje hormona (Sl. 2).

Sl. 1. Isti citokin može se proizvesti različit u histogenetskim porijeklama ćelija organizma u različitim organima i činiti se na mnogim vrstama ćelija, uzrokujući različite efekte ovisno o vrsti ciljnih ćelija.

Sl. 2. Tri verzije biološkog efekta citokina.

Očigledno je formiranje sistema regulacije citokina bilo evolucijsko zajedno s razvojem višeiklelarnih organizama i nastalo je u obliku formiranja intercellegalnih medijatora za interakciju, na koje se mogu računati hormoni, neuropeptidi, molekule adhezije i neki drugi. Citokini u ovom planu su najnirniji sistem regulacije, jer su u stanju pokazati biološku aktivnost kao udaljeni nakon izlučivanja proizvedene ćelije (lokalno i sistematske) i tokom intercekulOplakalnog kontakta u obliku membranskog oblika. Ovaj citokinski sistem razlikuje se od molekula adhezije koji vrše uže funkcije samo s izravnim kontaktom ćelija. Istovremeno, citokinski sistem razlikuje se od hormona, koji uglavnom sintetizira specijalizovane vlasti i imaju akciju nakon ulaska u cirkulacioni sistem.

Uloga citokina u regulaciji fizioloških funkcija tijela.

Uloga citokina u regulaciji fizioloških funkcija organizma može se podijeliti u 4 glavne komponente:

1. Regulacija embriogeneza, oznaka i razvoja organa, uklj. Organi imunološkog sistema.

2. Regulacija pojedinačnih normalnih fizioloških funkcija.

3. Regulacija zaštitnih reakcija tijela na lokalnom i sistemskom nivou.

4. Regulacija procesa regeneracije tkiva.

Izraz gena pojedinih citokina događa se specifičan za stadion u određenim fazama embrionalnog razvoja. Faktor matičnih ćelija transformišu faktore rasta, citokini porodice FNF-a i hemokinsa reguliraju diferencijaciju i migraciju različitih ćelija i polaganja organa imunološkog sistema. Nakon toga, sinteza nekih citokina ne može se obnavljati, dok druge i dalje regulišu normalne fiziološke procese ili sudjeluju u razvoju zaštitnih reakcija.

Uprkos činjenici da je većina citokina tipična incibilna posrednika, a u postnatalnom periodu ne sintetišu se ćelije izvan upalnog odgovora i imunološkog odgovora, neki citokini ne padaju pod tim pravilom. Kao rezultat ustavnog izražavanja gena, neki od njih se sintetizira stalno i u prilično velikim količinama u opticaju, prilagođavajući širenje i diferencijacija određenih vrsta ćelija u cijelom životu. Primjeri ove vrste fiziološkog regulacije funkcija od citokina mogu biti stalno visok nivo eritropoetina i neki XF za pružanje hemopoezisa. Regulacija zaštitnih reakcija organizma od strane citokina događa se ne samo u okviru imunološkog sustava, već i organiziranjem zaštitnih reakcija na nivou holističkog organizma kroz regulaciju gotovo svih stranaka na razvoj upale i imunološkog odgovora. Ovo je najvažnija funkcija za cijeli citokinski sustav povezan sa dva glavna smjera biološke akcije citokina - zaštitu od zaraznih agenata i obnavljanja oštećenih tkiva. Citokini prvenstveno reguliraju razvoj lokalnih zaštitnih reakcija u tkivima koji uključuju različite vrste krvnih zrnaca, endotelija, vezivnog tkiva i epitela. Zaštita na lokalnom nivou razvija se formiranjem tipičnog upalnog odgovora sa svojim klasičnim manifestacijama: hiperemija, razvoj edema, pojava sindroma o boli i poremećaj funkcije. Sinteza citokina počinje kada prodire patogene ili oštećuju njihov integritet, koji obično teče paralelno. Proizvodnja citokina sastavni je dio ćelijskog odgovora povezanog s prepoznavanjem ćelija milelonocitne serije sličnih strukturnih komponenti raznih patogena, nazvanih molekularnim uzorcima povezanim sa patogenom. Primjeri takvih struktura patogena su lipopolizaharidi gram-negativnih bakterija, peptidoglikana gram-pozitivnih mikroorganizama, flashllin ili DNK, bogat CPolyg sekvenci, koji su karakteristični za DNK svih vrsta bakterija. Leukociti izražavaju odgovarajuće receptore koji prepoznaju uzorak, koji se nazivaju i receptori nalik na naplatu (TLR) i specifični za određene strukturne obrasce mikroorganizama. Nakon interakcije mikroorganizama ili njihovih komponenti s TLR lansiran je intracelularni kaskadni signalni prijenos signala, što dovodi do povećanja funkcionalne aktivnosti leukocita i izraz citokinskih gena.

Aktivacija TLR dovodi do sinteze dviju glavnih grupa citokina: pro-upalni citokini i interferoni tipa I, uglavnom IFN / β tipka za taster događaj je sinteza kompleksa napadnih citokina sa IL-1 porodica, IL-6, FNF i hemokini koji potaknuju većinu sljedećih događaja u razvoju upalnog odgovora i pružajući širenje ventilatora o aktiviranju različitih vrsta ćelija uključenih u održavanje i regulisanje upale, uključujući sve vrste leukocita, dendritic i B-limfociti, NK ćelije, endotelne i epitelne ćelije, fibroblasti i drugi. To osigurava uzastopne faze razvoja upalnog odgovora, koji je glavni mehanizam za provedbu urođenog imuniteta. Pored toga, sinteza dendritičkih ćelija citokina porodice IL-12, poticanje diferencijacije pomagača T-limfocita, koji služi kao osebujni most do početka razvoja specifičnog imuniteta povezanog sa priznanjem konkretnih antigenske strukture mikroorganizama.

Drugi ne manje važan mehanizam povezan sa sintezom IFN-a pruža implementaciju antivirusne zaštite. Tip I interferoni pokazuju 4 osnovna biološka svojstva:

1. Direktno antivirusno djelovanje blokiranjem transkripcije.

2. Suzbijanje širenja ćelija potrebnih za blokiranje širenja virusa.

3. Aktiviranje funkcija NK ćelija sa mogućnošću da se zaraže virus ćelijske ćelije zaražene.

4. Jačanje izraza molekula glavnog nivoa histokompatibilnosti I klase, što je neophodno za povećanje efikasnosti zastupljenosti virusnih antigena sa zaraženim ćelijama citotoksičnih T-limfocita. To dovodi do aktiviranja specifičnog prepoznavanja ćelija zaraženih virusom T-limfocita - prva faza ciljeve zaražene lizom zaražene virusom.

Kao rezultat toga, pored izravne antivirusne akcije, mehanizmi se aktiviraju u konzutarnim (NK ćelijama) i stečeni (T-limfociti) imuniteta. Ovo je primjer kako je jedan mali molekula citokina sa mm 10 puta manji od molekula antitela mm može aktivirati potpuno različite mehanizme zaštitne reakcije usmjerene na obavljanje jednog cilja - uklanjanje virusa probijenog u tijelu.

Na nivou tkiva citokina odgovoran je za razvoj upale, a zatim regeneracija tkiva. Pri izradi sistemskog upalnog odgovora (oštar fazni odgovor), citokini utiču na gotovo sve organe i sisteme tijela koji su uključeni u regulaciju homeostaze. Radnja pro-upalnih citokina na CNS-u dovodi do smanjenja apetita i promjene u cjelokupnom kompleksu reakcija u ponašanju. Privremeno prekidanje pretrage prehrane i smanjenje seksualne aktivnosti korisno je u pogledu uštede energije za jedan zadatak - za borbu protiv imaginarnog patogena. Ovaj signal pruža citokinima, jer njihov poticaj cirkulacije sigurno znači da se lokalna zaštita nije kotirala sa patogenom, a uključivanje sistemskog upalnog odgovora je potrebno. Jedna od prvih manifestacija nantalnog odgovora sistema povezana s djelovanjem citokina na termostat hipotalamus termostata nalazi se u porastu tjelesne temperature. Povećanje temperature je efektivna zaštitna reakcija, jer se na povišenoj temperaturi, sposobnost više bakterija u reprodukciju smanjuje, ali, naprotiv, povećava se širenje limfocita.

U jetri, pod utjecajem citokina, sintezu proteina oštrih faza i komponenti komplementa komplementa, koji su potrebni za borbu protiv patogena, povećanja, ali istovremeno smanjuje sintezu albumina. Drugi primer izborne akcije citokina je promjena jonske kompozicije krvne plazme u razvoju sistemskog upalnog odgovora. Istovremeno, postoji smanjenje razine željeznih jona, ali povećava nivo cinkovih iona, a dobro je poznato da je dobro poznato da bakterijska ćelija željeznih iona znači - da smanji svoj proliferativni potencijal ( Akcija Laktorrrina zasniva se na ovome). S druge strane, povećan nivo cinka potreban je za normalan rad imunološkog sistema, posebno je potrebno za formiranje biološki aktivnog faktora sira timusa - jedan od glavnih timičkih hormona koji osiguravaju diferencijaciju limfocita . Učinak citokina na hematopoetni sistem povezan je sa značajnim aktiviranjem hematopoa. Povećanje broja leukocita potrebno je napuniti gubitke i povećanje broja ćelija, uglavnom neutrofilnih granulocita, u fokusu gnojnog upale. Radnja na sustavu koagulacije krvi ima za cilj poboljšanje koagulacije potrebne za zaustavljanje krvarenja i za izravno blokiranje patogena.

Dakle, u razvoju sistemske upale citokina, postoji ogroman raspon biološke aktivnosti i ometa rad gotovo svih sistema organizma. Međutim, nijedna od tekućih promjena nije slučajna: svi su potrebni za izravno aktiviranje zaštitnih reakcija ili korisnih u pogledu prebacivanja energetskih tokova za jedan zadatak za borbu protiv imaginarnog patogena. U obliku regulacije izražavanja pojedinih gena, hormonalnih pomaka i promjena u reakcijama ponašanja citokina osiguravaju uključivanje i maksimalnu efikasnost tih organizma sistema koji su trenutno potrebni za razvoj zaštitnih reakcija. Na nivou holističkog organizma, citokini komuniciraju između imunološkog, nervnog, endokrinog, hematopoetika i drugih sistema i služe za uključivanje u organizaciju i regulaciju jedinstvene zaštitne reakcije. Citokini samo služe kao organizing sistem koji obrazuje i reguliše cjelokupni kompleks zaštitnih reakcija tijela u uvođenju patogena. Navodno je takav sistem regulacije formiran evolucijski i ima bezuvjetne koristi za najoptimalniji odbrambeni odgovor makrororganizma. Stoga je, očito nemoguće ograničiti koncept zaštitnih reakcija samo sudjelovanjem određenih mehanizama otpora i specifičnog imunološkog odgovora. U jednoj zaštitnoj reakciji, cijelo tijelo i svi sustavi su uključeni, na prvi pogled, nisu povezani sa održavanjem imuniteta.

Posebne studije citokina.

Vrijednost citokina u patogenezi upalnih bolesti dece kod dece.

S.V. Belmer, A. Simprts, O.V. Golovnko, L.V. Bubnova, L.M. Carpina, N.E. Schigolev, T.L. Mikhailova. Rusko državnoj medicinskom univerzitetu u GSC-u, Moskva i gnilli posebno čisti biopreparat, sav. Peterburg vodio rad na proučavanju vrijednosti citokina u patogenezi upalnih bolesti dece u deci. Hronične upalne bolesti gastrointestinalnog trakta trenutno zauzimaju jedna od vodećih mjesta u patologiji probavnih organa kod djece. Od posebnog značaja priložen je upalnim bolestima debelog creva (BIS), učestalosti na kojoj se na celom svetu neprestano povećava. Dug protok sa čestim, i u nekim slučajevima, fatalni relapsi, razvoj lokalnih i sistemskih komplikacija - svi potiče temeljito proučavanje patogeneze bolesti u potrazi za novim pristupima tretmanu BDS-a. Posljednjih desetljeća, učestalost određenog ulceroznog kolitisa (NIAC) iznosila je 510 slučajeva godišnje na 100 hiljada stanovništva, sa Crohnovom bolešću (BC), 16 slučajeva godišnje na 100 hiljada stanovnika. Stope prevalencije u Rusiji, u Moskovskoj regiji odgovaraju podacima srednje ekonomije, ali znatno niže nego u skandinavskim zemljama, Amerikom, Izraelom i Engleskom. Za Nym, rasprostranjenost 19,3 na 100 hiljada, incidencija 1,2 na 100 hiljada ljudi godišnje. Za BC prevalence 3.0 na 100 hiljada, incidencija od 0,2 po 100 hiljada ljudi godišnje. Činjenica da se najveća frekvencija bilježe u visoko razvijenim centrima, ne samo socijalni i ekonomski faktori, već i genetske i imunološke karakteristike pacijenata koji određuju predispoziciju za Bis. Ti su faktori temeljni u imunopatogenetskoj teoriji porijekla bisa. Virusne i / ili bakterijske teorije objašnjavaju samo akutni početak bolesti, a hronizacija procesa je zbog genetske predispozicije i osobitosti imunološkog odgovora, koji su također genetski određeni. Treba napomenuti da se BDS trenutno pripisuje bolestima s genetski heterogenim složenim predispozicijom. Više od 15 navodnog generičkog kandidata otkriveno je iz 2 grupe (imunospecifična i imunoregulacijsko), uzrokujući nasljednu predispoziciju. S najvećom vjerojatnošću predispozicije određena je nekoliko gena koji određuju prirodu imunoloških i upalnih reakcija. Na osnovu rezultata brojnih studija, može se zaključiti da su najvjerovatnija lokalizacija gena povezanih s razvojem BDS-a kromosomi 3, 7, 12 i 16. Trenutno se velika pažnja posvećuje studiji karakteristika funkcije T i u limfocitima, kao i citokinima upalnih medijatora. Uloga Interleukina (IL), Interferon (IFN), faktor nekroze tumora (TNF-A), makrofage i autoantibode na proteine \u200b\u200bproteina debelog ležišta i automatskog metra i auto-sedača aktivno se proučavaju. Otkrivene su značajke njihovih kršenja s BK i NYAK-om, ali ostaje nejasno da li ove promjene nastaju primarne ili sekundarne. Da bismo razumjeli brojne partijske patogeneze, istraživanja izvedena u pretrpanskoj insceniranju BDS-a, kao i rođaci prvog stepena srodstva bilo bi vrlo važno. Među posrednicima upale, posebna uloga pripada citokinima, koja su grupa molekula polipeptida s masom od 5 do 50 KD koji sudjeluju u formiranju i regulaciji zaštitnih reakcija tijela. Na nivou citokinskog organizma postoji veza između imunološkog, nervnog, endokrinog, hematopoetičkog i drugog sistema i služi za uključivanje u organizaciju i regulaciju zaštitnih reakcija. Klasifikacija citokina prikazana je u tablici 2. Većina citokina ne sintetizira se ćelije izvan upalnog odgovora i imunološkog odgovora. Izraz citokinskih gena započinje kao odgovor na prodor u tijelo patogena, antigenskih iritacija ili oštećenja tkiva. Jedan od najmoćnijih induktora sinteze citokina su komponente ćelijskih zidova bakterija: LPS, peptidoglikani i muramildepeptidi. Proizvodi pro-upalnih citokina uglavnom su monociti, makrofagi, t ćelije itd. Ovisno o utjecaju na upalni proces citokina, podijeljen je u dvije grupe: pro-1, IL-6, IL-8 , TNF-A, IFN-G) i protiv upalne (IL-4, IL-10, TGF-B). Interleukin-1 (IL-1) je imunoregulacijski posrednik, izoliran pod upalnim reakcijama, tkivom lezijama i infekcijama (pro-upalni citokin). IL-1 igra važnu ulogu u aktiviranju T-ćelija kada komuniciraju sa antigenom. 2 vrste IL-1 su poznate: IL-1A i IL-1B, proizvodi dva različita genska lokusa smještena na kromosomu od 2 osobe. IL-1A ostaje unutar ćelije ili je možda u membranskom obliku, u manjim iznosu se pojavljuje u vanćelijskom prostoru. Uloga membranskog obrasca IL-1A je prenos aktiviranja signala iz makrofage T-limfocita i drugih ćelija tokom intercekulOlarnog kontakta. IL-1A - glavni posrednik kratkog otpornog akcije. IL-1B, za razliku od IL-1a, aktivno se izlučuje ćelije, djelujući i sistemski i lokalno. Do danas je poznato da je IL-1 jedan od glavnih posrednika upalnih reakcija, poticaje širenje T ćelija, povećava izraz receptora IL-2 i proizvodnju IL-2 na T-ćelijama. IL-2, zajedno sa antigenom, izaziva aktiviranje i prijanjanje neutrofila, potiče formiranje drugih citokina (IL-2, IL-3, IL-6 itd. Ćelije. Sistemski IL-1 djeluje sinergistički sa TNF-A i IL-6. Kada se IL-1 povećava, IL-1 utiče na ćelije hipotalamusa i uzrokuje povećanje tjelesne temperature, groznice, pospanosti, smanjenja apetita i stimulira ćelije jetre u proizvode akutne fazne proteina (CRP, amiloidni a , A-2 makrobulin i fibrinogen). IL4 (hromosom 5). Inhibira aktiviranje makrofaga i blokira mnoge efekte stimulirane od strane IFNG-a, poput IL1 proizvoda, dušika i prostaglandina, igra važnu ulogu u protuupalnim reakcijama, ima imunosupresivni učinak. IL6 (hromosome 7), jedan od glavnih pro-upalnih citokina, glavni je indukter završne faze razlikovanja povećanja i makrofaga, snažnog stimulansa proizvoda akutnih faza ćelija. Jedna od osnovnih funkcija IL6 stimulacije antitijela u vivo i in vitro. IL8 (hromosom 4). Odnosi se na hemokeze posrednicima koji uzrokuju ciljanu migraciju (hemotaksu) leukocite u fokusu upale. Glavna funkcija IL10 inhibicije proizvodnje citokina prvog tipa kolača (TNFB, IFNG) i aktivirane makrofage (TNF-A, IL1, IL12). Trenutno je prepoznato da su vrste imunološkog odgovora povezane s jednom od varijanti aktiviranja limfocita s prevladavajućim sudjelovanjem klona TlioMfocite prvog tipa (TH2) ili drugog tipa ili drugog tipa ili drugog tipa (TH3). T2 i T3 proizvodi negativno utiču na aktiviranje suprotnih klonova. Prekomjerna aktivacija nekih vrsta klonova može poslati imunološki odgovor na jednu od mogućnosti razvoja. Hronična neravnoteža aktivacije TH klonova dovodi do razvoja imunopatoloških uvjeta. Promjene u citokinima tokom BDS-a mogu se proučavati na različite načine s određivanjem njihovog nivoa krvi ili u situ. Nivo IL1 povećava se sa svim upalnim bolestima creva. Razlike između Nika i BC-a su povećati izraz IL2. Ako se u NAP-u otkriva smanjena ili normalna razina IL2, tada je BC otkriven povišen nivo. Sadržaj IL4 povećava se s Nym, dok sa BC ostaje normalan ili čak opada. Razina IL6 posredovanih u oštrim faznim reakcijama također se povećava sa svim oblicima upale. Podaci dobiveni na profil citokina omogućili su izražavanje pretpostavke da dva glavna oblika hroničnih mjenjača karakterizira različita aktivacija i izražavanje citokina. Rezultati studija pokazuju da je citokinski profil primijećen kod pacijenata u skladu s profilom TH3, dok za pacijente s BC-om, profil TH2 treba smatrati više karakterističnijim. Atraktivnost ove hipoteze o ulozi profila TH2 i TH3 sastoji se i u činjenici da upotreba citokina može promijeniti imunološki odgovor na jedan ili drugi smjer i dovesti do remisije sa obnove citokina. To se posebno može potvrditi pomoću IL10. Daljnja istraživanja trebala bi pokazati da li je odgovor citokina sekundaran fenomen kao odgovor na iritaciju ili, naprotiv, izraz odgovarajućih citokina određuje reaktivnost tijela s razvojem naknadnih kliničkih manifestacija. Studija nivoa citokina tokom BDS-a kod djece još nije izvršena. Ovaj je rad prvi dio naučne studije o studiju citokinskog statusa tokom BDS-a kod djece. Svrha ovog rada bila je proučavanje humoralne aktivnosti makrofaga s definiranjem nivoa (IL1A, IL8) u krvi kod djece iz NIAC-a i BC, kao i njihova dinamika protiv pozadine terapije. Od 2000. do 2002. godine, 34 i 19 djece iz BC-a u dobi između 4 i 16 pregledano je od 2000. do 2002. godine u odjelu za gastroenterologiju ruske dječje kliničke bolnice. Dijagnoza je provjerena analogno, endoskopski i morfološki. Studija IL1A pro-upalnih citokina, IL8 izveo je Enzimsku metodu Immunoassay (Elisa). Da bi se utvrdila koncentracija IL1A, IL8 koristio je testsisteme proizvodnje LLC "Tsitokin" (Sveti Peterburg, Rusija). Analiza je provedena u laboratoriji emunofarmakologije Državnog naučnog centra istraživačkog instituta izuzetno čistih biopreparata (šef laboratorija. Rezultati dobiveni tokom studije otkrili su značajan porast nivoa IL1A, IL8 u periodu pogoršavanja, izraženog u većoj mjeri kod djece iz NYM-a, nego djeca sa BC-om. Iz pogotka se razina pro-upalnih citokina smanjuje, ali ne dostižu norme. Na NYM-u, IL-1A nivoa, IL-8 podignute u pogoršanjem u periodu od 76,2% i u 90% djece, a u periodu remisije - 69,2% i 92,3%, odnosno 92,3%. Na BC-u, IL-1A, IL-8 povisi su u pogoršanjem razdoblja u 73,3%, a u 86,6% djece, a tokom perioda remisije - u 50% i u 75%.

Ovisno o težini bolesti, djeca su dobivena terapijom aminoalcilima ili glukokortikoidima. Priroda terapije značajno je utjecala na dinamiku nivoa citokina. Protiv pozadine terapije aminoalcilatima, nivoi pro-upalnih citokina u grupi djece iz NIAC-a i BC značajno su nadmašili one u kontrolnoj grupi. Istovremeno, u grupi djece u grupi djece primijećene su veće stope iz NIAC-a. Sa NYM-om na pozadini terapije aminoalcilatima IL1A, IL8 se povećao u 82,4%, odnosno u 100% djece, dok je s glukokortikoidnom terapijom u 60% djece za oba citokina. S BC IL1A, IL8 se povećava na pozadini terapije aminoalcilatima u svu djecu, a s glukokortikoidnom terapijom u 55,5% i u 77,7% djece, respektivno. Dakle, rezultati ove studije ukazuju na značajnu uključenost u patogenetski proces makrofagealnog elementa imunološkog sustava u većini djece s NIAC-om i BC. Podaci dobiveni u ovoj studiji u osnovi se ne razlikuju od podataka dobivenih tijekom ispitivanja odraslih pacijenata. Razlike u nivou IL1A i IL8 kod pacijenata sa NIAC-u i BC kvantitativno su, ali ne kvalitativno, što sugerira neseffična priroda ovih promjena zbog tečaja hroničnog upalnog procesa. Shodno tome, ovi pokazatelji nemaju dijagnostičku vrijednost. Rezultati dinamičke studije IL1A i IL8 štete opravdani su većom efikasnošću glukokortikoidne terapije lijekovima u usporedbi s terapijom aminoalcylamom. Predstavljeni podaci su rezultat prve faze studije citokinskog statusa djece sa BIS-om. Daljnje proučavanje problema potrebno je uzimajući u obzir pokazatelje drugih pro-upalnih i protuupalnih citokina.

Uloga dušičnog oksida i citokina u razvoju akutnog sindroma oštećenja pluća.

Proučavanje ovog problema bavi se T.A. Shumatova, V.B.Shumatov, e.v. Markelova, L.G.Sukhotepelya: Odeljenje za anesteziologiju i oživljavanje državnog univerziteta Vladivostok. Sindrom akutne štete pluća (respiratorni sindrom za odrasle, RDSV) jedan je od najtežih oblika akutnog respiratornog kvara koji proizlaze iz pacijenata protiv pozadine teških ozljeda, sepse, peritonitisa, pankreatitisa, obilnog gubitka krvi, aspiracija, Nakon opsežnih operativnih intervencija i 50- 60% slučajeva koji vode do smrti. Ove studije patogeneze RDSV-a, razvoj kriterija za ranu dijagnozu i prognozu sindroma su malo, prilično su kontradiktorni, što ne dopušta razvijanje vitkog dijagnostičkog i terapijskog koncepta. Utvrđeno je da se RDSV zasniva na štetu na endotelu plućnih kapilara i epiteliju Alveola, kršenje reoloških svojstava krvi, što dovodi do edema fenomena, atelektone, atelektaza, plućna hipertenzija. Literatura posljednjih godina pojavila se dovoljno informacija o univerzalnom regulatoru metabolizma ćelijskih i tkiva - azot oksid. Interes za dušik oksid (ne) prvenstveno je zbog činjenice da je uključen u regulaciju skupa funkcija, uključujući vaskularni ton, otkucaj srca, agregacije trombocita, sinteze ATP-a i proteina, imunoloških zaštite. Pored toga, ovisno o izboru molekularnih ciljeva i karakteristikama interakcije s tim, nema štetnog efekta. Vjeruje se da je početni mehanizam aktivacije ćelije neuravnotežena citokinemija. Citokini su topljivi peptidi koji obavljaju funkcije medijatora imunološkog sistema i pružaju mobilnu saradnju, pozitivnu i negativnu imunoregulaciju. Pokušali smo sistematizirati informacije dostupne u literaturi o ulozi ne i citokina u razvoju akutnog sindroma oštećenja pluća. Ne nije topljivo u vodama i plinskim mastima. Molekula mu je nestabilna slobodna radikala, lako se difundira u tkivo, apsorbira i uništava tako brzo da može utjecati samo na ćelije najbližeg okruženja. Nijedna molekula nema svojstva svojstvenih klasičnim glasnicima: brzo proizvedene, djeluju u vrlo niskim koncentracijama, nakon zaustavljanja djelovanja vanjskog signala, brzo se pretvara u druge spojeve, oksidirajući stabilnim anorganskim dušidima: nitrit i nitrit. Trajanje neg života u tkivu je, prema različitim izvorima, od 5 do 30 sekundi. Glavne molekularne ciljeve su enzimi koji sadrže željezo i proteini: rastvorljivi guanilati, zapravo nitrooksiitsyntaze (br.), Hemoglobin, mitohondrijski enzimi, Krebs ciklični enzimi, proteina i DNK sinteza. Nikakva sinteza u tijelu ne pojavljuje se enzimnim transformacijama dijela amino kiseline l-arginin koji sadrže amino-kiseline pod utjecajem specifičnih nos enzima i posreduje interakcijom kalcijuma iona sa Commodulin. Enzim je inaktiviran na niskim koncentracijama i najaktivniji je u 1 mikronu besplatnog kalcijuma. Identificirane su dva NOS izoforma: konstitutivni (CNOS) i inducirani (INOS), koji su proizvodi različitih gena. CNOS kalcijum ovisan o Calmodulin-u trajno je prisutan u ćeliji i doprinosi raspodjeli malog iznosa ne kao odgovor na receptor i fizičku stimulaciju. Ne, formirano pod utjecajem ovog Izoforma, djeluje kao prijevoznik u nizu fizioloških odgovora. INOS-ovi ovisni o kalcijumu-Calmodulinnese formirani su u raznim vrstama ćelija kao odgovor na pro-upalne citokine, endotoksine i oksidante. Ovaj br. ISOFORM prepisuje se specifičnim genima 17 hromosoma i promovira sintezu velikog broja br. Enzim je klasificiran i prema tri vrste: br. NOS-I (neuronalni), br. II (makrofagagativan), NOS-III (endoteli). Porodica enzima sintetiziraju ne, nalaze se u mnogim plućnim ćelijama: u bronhijskim epitelocitima, u alveolocitima, u alveolarskim makrofagima, u masnim ćelijama, u endotelocitima bronhija i žila, u nelagodnim neholičnim neuronima. Konstitutivna sposobnost epitelocita Bronchija i alveola i sisara i sisara i sisara potvrđena su u brojnim studijama. Utvrđeno je da su vrh respiratornog trakta osobe, kao i donji odjeli, uključeni u formiranje br. Studije koje su provedene kod pacijenata sa traheostomom pokazale su da u zraku izdiše kroz traheostomiju, količina plina je znatno manja u odnosu na šupljinu nosa i usta. Sinteza endogene ne pati značajno kod pacijenata koji su na umjetnom ventilaciju pluća. Studije potvrđuju da se oslobađanje ne dogodi u trenutku svjetline i kontrolira ga sistem vagus živca. Dobiveni su podaci da se stvaranje ne u epitelu respiratornog trakta neke osobe povećava sa upalnim bolestima disajnih organa. Sinteza plina povećava se zbog aktiviranja NOS izazvanih pod utjecajem citokina, kao i endotoksina i lipopolizaharida.

Trenutno je poznato više od stotinu citokina koje se tradicionalno podijele u nekoliko grupa.

1. Interleukins (IL-1 - IL18) su sekretarnji regulatorni proteini koji pružaju medijske interakcije u imunološkom sustavu i njenu povezanost s drugim sistemima tijela.

2. Interferoni (IFN-Alpha, Beta, Gamma) - antivirusni citokini s teškim imunoregulatorom.

3. Čimbenici nekroze tumora (TNF Alpha, Beta) - citokini sa citotoksičnim i regulatornim akcijama.

4. Kolonistimulirajuće faktore (G-CSF, M-CSF, GM-CSF) - stimulansi rasta i diferencijacija hematopoetskih ćelija koje regulišu hemopove.

5. Hemokine (IL-8, IL-16) - Hemotaktni za leukociti.

6. Faktori rasta - Regulatori rasta, diferencijacija i funkcionalna aktivnost ćelija raznih dodataka za tkivo (faktor rasta fibroblasta, faktor rasta endotelnih ćelija, faktor rasta epiderme) i transformiranje faktora rasta (TGF beta).

Ove bioregulacijske molekule određuju vrstu i trajanje upalnog i imunološkog odgovora, kontroliraju širenje ćelija, hemopova, angiogeneze, zarastanja rana i mnogih drugih procesa. Svi istraživači naglašavaju da su citokini lišeni specifičnosti u odnosu na antigene. Eksperimenti sa kultiviranim pulmonalnim makrofagima i pretilim ćelijama pokazali su formiranje INO-a kao odgovor na Gamma Interferon, Interleukin-1, tumor nekroznog faktora i lipopolisaharida. Izraz INO-a i CNOS-a na pro-upalnim citokinima pronađen je u alveolocitima životinja i ljudi. Dodavanje kulturi faktora rasta epidermalnog rasta, regulator funkcije epitelne ćelije smanjio je aktivnost samo izazvanog enzima. Poznato je da, ovisno o prirodi, čine citokinima Autocerno - na samim ćelijama, Parakrinno - u druge ćelije - ciljeve ili endokrino - u različitim ćelijama izvan mjesta njihovih proizvoda. Istovremeno, oni mogu međusobno komunicirati agonističkim ili antagonističkim principom, promjenom funkcionalnog stanja ciljanih ćelija i formiranje citokinske mreže. Stoga, citokini nisu fragmentirani peptidi, već holistički sustav, čiji su glavne komponente proizvedene ćelije, samo proteina - citokin, receptor je percipiran, a ciljna ćelija. Utvrđeno je da se u razvoju akutne štete pluća, nivo pro-upalnih citokina povećava: IL-1, 6, 8, 12, TNF Alpha, IFN Alpha. Njihov učinak povezan je s produžetkom plovila, povećanje njihove propusnosti i akumulacije tekućine u tkivu pluća. Pored toga, studije pokazuju mogućnost IFN Gamma i TNF Alpha induciraju izraz molekula adhezije - ICAM -1 na ljudskim endoletocitima. Molekuli adhezije, pridržavajući leukocita, trombocita i endotelijskih ćelija, tvore "kotrljanje" (dodirnute) neutrofile i doprinose združivanju čestica fibrina. Ovi procesi doprinose kršenju kapilarnog protoka krvi, povećavaju propusnost kapilara, izazivaju edem lokalnog tkiva. Usporavanje kapilarnog protoka krvi doprinosi aktiviranju ne, što uzrokuje biranje arteriola. Daljnja migracija leukocita u fokusu upale kontroliraju posebni citokini - hemokini, koji se proizvode i izlučuju ne samo aktiviranim makrofagima, već i endotelnim ćelijama, glatkim miocitima. Njihova glavna funkcija je davanje neutrofila u fokus upale i aktiviraju svoju funkcionalnu aktivnost. Glavni hemokin za neutrofil je IL-8. Njegovi najjači induktori služe bakterijskim lipopolisaharidima, IL-1 i Tnfalf-u. R. Bahra i sur. Vjeruje se da je svaki korak trans-edenjske migracije neutrofila reguliran poticajnim koncentracijama TNF Alpha. Prilikom razvijanja akutne štete na endoteociti pluća plovila, epitelociti bronhija i alveolarskih makrofaga aktiviraju se i uključuju u faznu interakciju. Kao rezultat toga, na jednoj ruci postoji njihova mobilizacija i jačanje zaštitnih svojstava, a s druge strane, može doći do oštećenja samih ćelija i okolnih tkiva. U višem radu, pokazuje da je proizvod djelomičnog smanjenja kisika u stanju da se nakuplja u fokusu upale - superoksid, hladnije inaktivira vazoaktivni efekat br. Ne i superoksid anion podvrgava se brzoj interakciji s formiranjem peroksinitrita, oštećenom ćelijom. Ova reakcija pomaže u uklanjanju ne s vaskularnog i bronhijalnog zida, kao i iz površine alveolocita. Predstavlja interesovanje studije, što je pokazalo da se tradicionalno smatra posrednikom ne-toksičnosti, peroksinitrit može imati fiziološki učinak i uzrokovati vaskularnu opuštenost putem ne-posredovanog CGMF-a u vakularnom endotelijumu. Zauzvrat, peroksinitrit je moćan oksidant koji može oštetiti alveolarni epitel i plućnu površinu. Izaziva uništavanje proteina i membrana lipida, šteta endotelijuma, povećava agregiranje trombocita, sudjeluje u endotoksimijskim procesima. Njegovo povećano obrazovanje primijećeno je u sindromu akutne štete pluća. Istraživači smatraju da je aktiviranje intimne enzima izazvanog enzima namijenjeno nesecifičnoj zaštiti organizma iz širokog spektra patogenih agenata, usporava agregaciju trombocita i poboljšava lokalnu cirkulaciju krvi. Utvrđeno je da višak izlaza ne potiskuje aktivnosti CNO-a u ćelijama zbog interakcije sa superoksidom i, možda, kao rezultat desenzibilizacije guanillatcyclazesa, što dovodi do smanjenja CGMF-a u ćeliji i povećanju u intracelularnom kalcijumu. Brett et al. Analizirajući važnost nitrooksidergičnih mehanizama u patogenezi RDSV-a, INOS-a, peroksinitrit može se igrati ključna uloga u razvoju sindroma, a nitorozin je glavni proizvod izvora peroksinitrita na protein . Cuthbertson i dr. Vjeruje se da je osnova oštećenja akutne pluća učinak ne i peroksintrita na elastazu i interleukin-8. Kobayashi C i sur. Također je ukorijenio povećanje sadržaja INO-a, Interleukin-1, Interleukin-6, Interleukin-8 u bronhoalveolaru tekućinu kod pacijenata sa akutnim sindrom oštećenja pluća. Meldrum C Auto. Pokazali su smanjenje proizvodnje upalnih citokina sa plućnim makrofagama s RDSV pod utjecajem supstrata lokalnih proizvoda L-arginin. Utvrđeno je da u genezi sindroma akutne štete na pluća, vaskularna propusnost, zbog efekta citokina - TNF Alpha, IL-2, GM-CSF, monoklonski antitijela na endotelne ćelije na endotelnim ćelijama Pluća i imunociti se postavljaju. Brzo i snažno povećanje propusnosti plućnih plovila dovodi do migracije neutrofila u tkivo pluća i oslobađanje citotoksičnih posrednika, što vode u razvoju patološke izmjene pluća. U procesu razvoja akutne štete pluća, TNF Alpha povećava adheziju neutrofila na vaskularni zid, poboljšava njihovu migraciju u tkivu, doprinosi strukturnim i metaboličkim promjenama endotelocita, sruši propusnost staničnih membrana, aktivira stvaranje drugih citokina i eikosanoidi, uzrokuju apoptozu i nekrozu pluća. Dobiveni podaci koji su naznačili da su makrofage inducirani uvođenjem LP-a u velikoj mjeri povezani s IFN Gamom i smanjuje se pod djelovanjem IL-4, IL-10, TGF beta. Međutim, Kobayashi i sur. Primljeni podaci koji ukazuju na to da IFN Gamma može biti uključena u procese popravljanja epitela sluznice respiratornih puteva. U studijama, Hagimoto sadrži informacije koje su epiteliske ćelije bronhija i alveola kao odgovor na TNF Alpha ili FAS ligand izoliranu IL-8, IL-12. Ovaj proces je povezan sa aktivacijom nuklearnog faktora Carrian u FAS liganu.

Vjeruje se da je IL-8 jedan od najvažnijih citokina u patofiziologiji akutne pulmorna šteta. Miller i sur. U istraživanju bronho-alveolarne tekućine kod pacijenata sa RDSV-om, na pozadini SESPSIS-a, značajno povećanje nivoa IL-8 uspoređeno je u usporedbi s pacijentima sa kardiogenim plućima. Predloženo je da je primarni izvor IL-8 lagan, a ovaj kriterij se može koristiti u diferencijalnoj dijagnostici sindroma. Grau i sur. Vjeruje se da endotelliociti plućnih kapilara služe kao važan izvor citokina - IL-6, IL-8 s razvojem akutne štete na plućima. Goodman i dr. Prilikom proučavanja dinamike citokina u tekućim bronho-alveolara u pacijentima sa RDSV-om, značajno povećanje IL-1BET-a, IL-8, monocitni hemotaktički peptid-1, epitelni ćelijski aktivator neutrofila, makrofag je uspostavljen na upalni peptid -1 Alpha . Istovremeno, autori vjeruju da povećanje sadržaja IL-1 Beta može poslužiti kao marker neželjenog ishoda sindroma. Bauer et al. Pokazano je da se kontrola nad sadržajem u bronhoalveolarnoj tečnosti kod pacijenata s RDSV IL-8 može koristiti za nadzor, smanjenje nivoa IL-8 označava nepovoljan postupak. Brojni istraživanje sadrži i informacije da nivo citokinskih proizvoda endotelija pluća pluća utiče na razvoj akutne plućne štete i kontrole nad kojim se može koristiti u kliničkoj praksi za ranu dijagnozu. Po mogućim negativnim posljedicama povećanja nivoa pro-upalnih citokina kod pacijenata sa RDSV-om svjedoči o istraživanju Martina i sur., Warner et al. Aktivirani citokinima i bakterijskim endotoksini alveolara poboljšavaju sintezu br. Nivo proizvodnje bez epiteliocita bronhija i alveola, neutrofila, masne ćelije, endoteliocita i glatkih miocita plućnih plovila takođe je verovatno kroz aktiviranje nuklearnog faktora Carra. Autori vjeruju da NOS izazvane NOS izazvane brojevima namijenjene prvenstveno je prvenstveno za nesednu zaštitu organizma. Isticanje iz makrofaga, br. Brzo prodire u bakterije, gljive, gdje inhibira tri vitalne enzimske grupe: H-elektro-transport, Krebs ciklus i DNK sintezu. Ne uključuje se u odbranu tijela u posljednjim fazama imunološkog odgovora i formalno se smatra "kažnjavanjem mača" imunološkog sistema. Međutim, akumulirajući u ćeliji u neadekvatno velikim količinama, nema štetnog efekta. Dakle, kada se sindrom akutne štete i ne pokrene sekvencijalni lanac reakcija izraženih u oslabljenoj mikrocirkulaciji, pojavu hipoksije, alveolarnog i intersticijskog edema, oštećenja metaboličke funkcije pluća. Stoga se može izjaviti da je proučavanje fizioloških i patofizioloških mehanizama citokina i ne predviđajući smjer za istraživanje i dalje neće samo proširiti ideje o patogenezi RDSV-a, već i za određivanje dijagnostičkih i prognostičkih markera sindrom, razvijaju utjelovljenje patogenetički potkrepljenih terapije čiji je cilj smanjenje smrtnosti.

Metode određivanja citokina.

Pregled je posvećen osnovnim metodama proučavanja citokina koji se trenutno koriste. Ukratko su okarakterizirale mogućnosti i svrhu metoda. Prednosti i nedostaci različitih metoda pristupa analizi izražavanja citokinskih gena na nivou nukleinskih kiselina i na nivou proteinskih proizvoda. (Citokini i upala. 2005. T. 4, br. 1. str. 22-27.)

Citokini su regulatorni proteini koji čine univerzalnu mrežu posrednika, karakterističnih za imunološki sustav i za ćelije drugih organa i tkiva. Kontrola ove klase regulatornih proteina postupi sav ćelijski događaji: širenje, diferencijacija, apoptoza, specijalizirana funkcionalna aktivnost ćelija. Efekti svakog citokina na ćelije karakteriše PlayOtropy, spektar efekata različitih posrednika preklapa i, uglavnom, konačno funkcionalno stanje ćelije ovisi o učinku nekoliko citokina koji djeluju sinergistički. Dakle, citokinski sistem je univerzalna, polimorfna regulatorna mreža posrednika namijenjena kontroli procesa širenja, diferencijacije, apoptoze i funkcionalne aktivnosti ćelijskih elemenata u hematopoetičkom, imunom i drugom homeostatskom sistemu tijela. Metode za određivanje citokina za 20 godina njihove intenzivne studije prošlo je vrlo brzu evoluciju i danas predstavljaju čitavu oblast naučnog znanja. Ispred istraživača u citokinologiji na početku rada postoji pitanje o odabiru metode. A ovdje istraživač mora znati tačno koje su informacije potrebne za postizanje cilja. Trenutno su razvijene stotine različitih metoda za ocjenu citokinskog sistema, koje daju različite informacije o ovom sistemu. Procjena citokina u raznim biološkim medijima mogu se koristiti specifičnom biološkom aktivnošću. Moguće ih je kvantitativno odrediti koristeći brojne metode imunoashay koristeći poli i monoklonska antitijela. Pored proučavanja sekretornih oblika citokina, njihov unutarćelijski sadržaj i proizvodi u načinima citofluorimetrije protoka mogu se proučavati zapadnjačka i imunohistohemija u situ. Vrlo važne informacije mogu se dobiti proučavanjem izražavanja MRNA od citokina, stabilnosti MRNA-e, prisustvo MRNA Isoforma citokina, prirodnih antisenzivnih nukleotidnih nizova. Studija alelnih varijanti citokinskih gena može pružiti važne informacije o genetski programiranim visokim ili niskim proizvodima određenog posrednika. Svaka metoda ima svoje nedostatke i njihove prednosti, rezoluciju i tačnost odlučnosti. Neznanje i nerazumijevanje istraživača ovih nijansa može ga dovesti do lažnih zaključaka.

Određivanje biološke aktivnosti citokina.

Istorija otkrivanja i prvih koraka u studiji citokina bila je usko povezana s uzgojem imunokompetentnih ćelija i mobilnih linija. Tada su regulatorni efekti (biološka aktivnost) broja topivih faktora prirode proteina prikazani na proliferativnom djelovanju limfocita, na sintezu imunoglobulina, na razvoju imunoloških reakcija u in vitro modelima. Jedna od prvih metoda za utvrđivanje biološke aktivnosti posrednika je utvrđivanje migracijskog faktora ljudskih limfocita i njenog faktora inhibicije. Kao biološki efekti citokina pojavili su se razne metode procjene njihove biološke aktivnosti. Dakle, IL-1 je određen procjenom mišljenja miša Timociti in vitro, IL-2 - po sposobnostima da potakne proliferativnu aktivnost limfoblasta, IL-3 - za rast hematopoetskih kolonija in vitro, IL-4 - na učinak punjenja, ojačati izraz IA proteina, na indukciji obrazovanja IGG1 i IGE itd. Popis ovih metoda može se nastaviti, konstantno se ažurira jer se otkriva nova biološka aktivnost topivih faktora. Glavni nedostatak su ne-standardne tehnike, nemogućnost njihovog ujedinjenja. Daljnji razvoj tehnika za utvrđivanje biološke aktivnosti citokina dovelo je do stvaranja velikog broja ćelijskih linija osjetljivih na određeni citokin ili višehmisivne linije. Sada se većina ovih citokinchsten ćelija može otkriti na popisima komercijalno distribuiranih ćelijskih linija. Na primjer, za testiranje IL-1A i B, stanična linija D10S koristi se za IL-2 i IL-15 - CTLL-2 Cell liniju, za IL-3, IL-4, IL-5, IL-9, IL-9, IL-9 -13, IL-13, GM-CSF - TF-1 Cell Line, za IL-6 - Cell Line B9, za IL-7 - Cell Line 2E8, za TNFA i TNFB - L929 ćelijsku liniju, za IFNG - Widr stanična linija , za IL-18 - Cellular Line kg-1. Međutim, takav pristup u proučavanju imunoaktivnih proteina, zajedno sa poznatim prednostima, poput mjerenja stvarne biološke aktivnosti zrelih i aktivnih proteina, visoka reproducibilnost u standardiziranim uvjetima, ima svoje nedostatke. Oni uključuju, na prvom mjestu, osjetljivost ćelijskih linija nije jedan citokin, već i nekoliko povezanih citokina čiji se biološki efekti preklapaju. Pored toga, nemoguće je isključiti mogućnost indukcije proizvoda drugih citokina prema ciljanim ćelijama koje mogu iskriviti testni parametar (u pravilu, proliferacija, citotoksičnost, hemotaksi). Još uvijek ne znamo sve citokine, a ne svi njihovi učinci, stoga ne svjedoči samo citokin, već ukupna specifična biološka aktivnost. Dakle, procjena biološke aktivnosti kao ukupne aktivnosti različitih posrednika (nedovoljna specifičnost) jedna je od nedostataka ove metode. Pored toga, koristeći citokinching linije, nemoguće je otkriti neaktivne molekule i srodne proteine. Dakle, takve tehnike ne odražavaju stvarne proizvode za brojne citokine. Drugi važan nedostatak korištenja ćelijskih linija je potreba za laboratorijom za staničnu kulturu. Pored toga, svi postupci sve veće ćelije inkubiraju ih sa proučavanim proteinima i medijima zahtijevaju velike troškove vremena. Također treba napomenuti da ćelijske linije tijekom njihove dugoročne upotrebe zahtijevaju ažuriranja ili ponovnu potvrdu, jer kao rezultat kultivacije mogu mutirati i modificirati, što može dovesti do promjene u njihovoj osjetljivosti na medijatore i smanjenje tačnosti definicija biološke aktivnosti. Ipak, ova metoda je idealna za testiranje specifične biološke aktivnosti rekombinantnih medijatora.

Kvantitativno određivanje citokina sa antitijevima.

Citokin - proizveden imunokompetentnim i drugim vrstama citokinskih ćelija oslobađaju se u međućelijski prostor za implementaciju padokrioda i autokriniranih signalizacijskih interakcija. U koncentraciji tih proteina u serumu ili u uslovom mediju, može prosuditi prirodu patološkog procesa i o višku ili nedostatku određenih funkcija ćelije u pacijentu. Metode za određivanje citokina sa specifičnim antitijelima danas su najčešći sustavi za otkrivanje ovih proteina. Ove metode su prolazile kroz čitavu nizu modifikacija pomoću različitih naljepnica (radioizotopa, fluorescentna, električna superimizola, enzim itd.). Ako se radioizotopske metode imaju niz nepovoljnosti povezanih s upotrebom radioaktivne etikete i vremenom ograničenom vremenom, mogućnost korištenja označenih reagenata (poluživota), tada su Imunoassima metode pronašle širu raspodjelu. Oni se temelje na vizualizaciji nerastvorljivih proizvoda enzimske reakcije, upijajući svjetlost iz poznate talasne dužine, u količinama ekvivalentnim koncentraciji utvrđene supstance. Antitela koja se primjenjuju na čvrstu polimernu bazu koriste se za povezivanje izmjerenih tvari, a za vizualizaciju - antitijela konjugirana enzimima, u pravilu, alkalne fosfataze ili poroksida. Prednosti metode su očigledne: Ovo je velika tačnost određivanja sa standardiziranim uvjetima za pohranu reagensa i postupaka, kvantitativne analize, reproducibilnosti. Nedostaci uključuju ograničen raspon definiranih koncentracija, kao rezultat čija su sve koncentracije koje prelaze određeni prag smatraju jednakim njoj. Treba napomenuti da je vrijeme provedeno na izvršenju metode varira ovisno o preporukama proizvođača. Međutim, u svakom slučaju govorimo o nekoliko sati potrebnih za ispiranje i ispiranje reagensa. Pored toga, određuje se latentni i srodni oblik citokina, koji u koncentraciji mogu značajno prelaziti besplatne oblike, uglavnom odgovorne za biološku aktivnost posrednika. Stoga je ova metoda poželjna koristiti zajedno s metodama za procjenu biološke aktivnosti posrednika. Druga izmjena metode ImunoasAy, koja se široko koristi - ElectrochemyLuminectcentna metoda (EHL) Definicija proteina od strane antitijela, označena rutenijum i biotin. Ova metoda ima sljedeće prednosti u usporedbi sa radioizotopom i imuno-immimenzionalnom: Jednostavnost izvršenja, kratko vrijeme izvršenja tehnike, bez procedura pranja, malog raspona koncentracija seruma i u uslovom srednjom, visokom osjetljivošću metode i njegove obnovljivosti. Metoda koja se razmatra je prihvatljiva za korištenje i u istraživanjima i kliničkoj. Sledeća metoda evaluacije citokina u biološkom okruženju zasnovana je na fluorimetrijskoj tehnologiji protoka. Omogućuje vam istovremeno procijeniti u uzorku do stotina proteina. Trenutno su stvoreni komercijalni setovi za određivanje do 17 citokina. Ipak, prednosti ove metode određuju se njenim nedostacima. Prvo, ovo je složenost odabira optimalnih uvjeta za određivanje nekoliko proteina, drugo, citokinski proizvodi su kaskade sa vrhovima proizvoda u različitim vremenima. Stoga, definicija velikog broja proteina istovremeno nije uvijek informativan. Ukupni zahtjev metodama imuneasa koji koriste takozvani Sendvič, temeljit je izbor antitijela, što omogućava određivanje slobodnog ili vezanog oblika analiziranog proteina, koji nameće ovim metodom ograničenja, a to bi trebalo uzeti u obzir pri tumačenju dobivenih podataka . Ove metode određuju ukupnu proizvodnju citokina sa različitim ćelijama, istovremeno o antigensijskim proizvodima citokina po imunokompetentnim ćelijama mogu se suditi samo navodno. Trenutno je razvijen Elispot sistem (enzim-vole imunospot), što uvelike eliminira ove nedostatke. Metoda omogućava snažno procijeniti proizvodnju citokina na nivou pojedinih ćelija. Visoka rezolucija ove metode omogućava procijeniti citokinske proizvode koji stimulirani na antigen, što je vrlo važno za procjenu specifičnog imunološkog odgovora. Sljedeće, široko korišteno u naučne svrhe, je intracelularna definicija citokina prema cytofluorimettriju. Prednosti su očigledne. Možemo fenotipno karakterizirati populaciju citokinskih ćelija i / ili odrediti spektar citokine koji proizlaze po pojedinim ćelijama, dok je moguće relativne kvantitativne karakteristike ovog proizvoda. Istovremeno, opisana metoda je prilično komplicirana i zahtijeva skupu opremu. Sljedeći niz metoda, koji se uglavnom koriste u naučne svrhe su imunohistohemijske metode pomoću označene monoklonske antitijele. Prednosti su očigledne - određivanje citokinskih proizvoda direktno u tkivima (u situ), gdje se javljaju razne imunološke reakcije. Međutim, metode koje se razmatraju su vrlo naporne i ne daju tačne kvantitativne podatke.

Određivanje citokina metodom enzimskog imunoasaya.

CJSC "Best" pod vodstvom ovog Ryabicheva, N.A. Varaksin, N.V. Timofeeva, M.YU. Muzici aktivno rade u smjeru određivanja citokina. Citokini su grupa polipeptidnih medijatora, često glikozila, s molekularne težine od 8 do 80 CD-a. Citokini su uključeni u formiranje i regulaciju zaštitnih reakcija organizma i njegove homeostaze. Oni su uključeni u sve veze humoralnog i staničnog imunološkog odgovora, uključujući diferencijaciju imunokompetentnih precesorskih ćelija, zastupanje antigena, aktivacije i proliferacije ćelije, izraz molekula adhezije i reakciju adhezije. Neki od njih su u mogućnosti da pokažu mnogo bioloških efekata u odnosu na različite ciljne ćelije. Učinak citokina na ćelije vrši se na sljedeće načine: autorini - na ćeliji, sintetiziranje i tajni ovog citokina; Parakrinno - na ćelijama koje se nalaze u blizini ćelija proizvođača, na primjer, u fokusu upale ili u limfoidni organ; Endokrino - na daljinu - na ćelijama bilo kojeg organa i tkiva nakon citokina koji ulaze u cirkulaciju krvi. Obrazovanje i puštanje citokina obično se pojavljuju nakratko i teški regulirani. Citokini utiču na ćeliju, obvezujući se na određene receptore na citoplazmatskoj membrani, uzrokujući ovu kaskadu reakcija koje vode do indukcije, jačanja ili suzbijanja aktivnosti niza gena podesivih gena. Za citokine karakteriše složena mrežna priroda funkcioniranja u kojoj proizvodi od njih utječu na formiranje ili manifestaciju aktivnosti niza drugih. Citokini su lokalni posrednici, pa je preporučljivo izmeriti njihove razine u odgovarajućim tkivima nakon vađenja proteina tkiva iz biopsija odgovarajućih organa ili u prirodnim tekućinama: mokraćnica, džepova za divljenje, bronhoalveolarna lava, ejakulat , pere iz šupljina, kičmenskih ili sinovijskih tekućina i više. Dodatne informacije o stanju imunološkog sistema tijela mogu se dobiti prilikom proučavanja sposobnosti krvnih zrnaca na citokinske proizvode u vitro. Nivo citokina u plazmi odražavaju trenutno stanje imunološkog sistema i razvoj u vivo zaštitnim reakcijama. Spontani proizvodi citokina kulture mononuklearnih perioda periferne krvi omogućavaju nam da procijenimo stanje odgovarajućih ćelija. Povećana spontana proizvodnja citokina sugerira da su ćelije već aktiviraju u vivo antigenu. Indudjelirani citokinski proizvodi omogućavaju procjenu potencijalne sposobnosti odgovarajućih ćelija da odgovore na antigenska stimulacija. Smanjena indukcija in vitro citokina, na primjer, može poslužiti kao jedan od znakova imunodeficity stanja. Stoga su i utjelovljeni nivoi citokina i u kružnom krvlju i tokom njihove proizvodnje kulturama ćelija važni su sa stanovišta karakteristika imunoreaktivnosti cijelog tijela i funkcija pojedinačnih neuključnih jedinica. Donedavno su se u proučavanju citokina u Rusiji bavilo nekoliko grupa istraživača, jer su biološke metode istraživanja vrlo naporne i uvezene imunohemijske setove vrlo skupih načina. Uz pojavu dostupnih domaćih kompleta ImunoasAy, ljekari praktičara pokazuju sve više interesa za učenje citokinskog profila. Trenutno je dijagnostički značaj procjene nivoa citokina utvrditi činjenicu povećanja ili smanjenja koncentracije u datom pacijentu sa specifičnom bolešću. Štaviše, preporučljivo je utvrditi koncentraciju i suprotnih i pro-upalnih citokina u dinamiku razvoja patologije. Na primjer, sadržaj citokina u perifernoj krvi određuje se razdobljima pogoršanja, odražava dinamiku patološkog procesa sa ulceroznam bolešću i drugim bolestima gastrointestinalnog trakta. U najranijem pogoršanju, povećanje sadržaja Interleukin-1Bet (IL-1BET), Interleukin-8 (IL-8), tada se povećava koncentracija Interleukin-6 (IL-6), gama interferon (gama inf) , Faktor nekroze tumora -Alph (alfa fnf). Koncentracija Interleukin-12 (IL-12), gamma, Alfa-Fno dostigla je maksimum u sredini bolesti, dok je sadržaj oštrih faza u ovom periodu pristupio normalnim vrijednostima. Na vrhuncu pogoršanja, nivo Alpha-TNF značajno prelazi sadržaj Interleukin-4 (IL-4), kako u serumu i direktno u pogođenoj tkanini u blizini skoro-nestale zone, nakon čega je počeo postepeno smanjuje. Kao akutno fazne pojave, povećanje procesa reparacije povećao je porast koncentracije IL-4. Promjenom citokinskog profila može se prosuditi o efikasnosti i izvodljivosti hemoterapije. Prilikom provođenja citokinoterapije, na primjer, s terapijom alfa interferona (Alpha-inf) potrebno je kontrolirati i nivo svog sadržaja u cirkulaciji krvi i radu antitijela na alfa inf. Poznato je da kada postoji veliki broj ovih antitijela, interferonoterapija ne samo prestaje biti efikasna, ali može dovesti i do autoimunih bolesti. Nedavno su razvijeni i implementirani novi lijekovi i implementirani u praksi, na ovaj ili drugi ili drugi promjenjivi citokinski status tijela. Na primjer, za liječenje reumatoidnog artritisa predlaže se lijek na bazi antitijela na alfa-flops, dizajniran za uklanjanje alfa-papuca koje sudjeluju u uništavanju vezivnog tkiva. Međutim, i našim podacima i o književnim, daleko od svih bolesnika sa hroničnim reumatoidnim artritisom, visina Alpha-FNF-a povišena je za ovu grupu pacijenata, smanjenje nivoa alfa-fP-a može još više pogoršati neravnoteža imunološkog sistema. Dakle, tačna citokinoterapija podrazumijeva kontrolu citokinskog statusa tijela tokom liječenja. Zaštitna uloga pro-upalnog citokina manifestuje se lokalno u fokusu upale, međutim, njihovi sistemski proizvodi ne vode do razvoja anti-infektivnog imuniteta i ne sprečava razvoj bakterijskog toksičnog šoka, što uzrokuje ranu smrtnost Hirurški pacijenti sa pustom septičkim komplikacijama. Osnova patogeneze hirurških infekcija je lansiranje cytokine kaskade, koji uključuje, s jedne strane, zabrambene, i na ostalim - protuupalnim citokinima. Ravnoteža između ove dvije suprotnosti u velikoj mjeri određuje prirodu protoka i ishod gnojnih septičkih bolesti. Međutim, određivanje koncentracije krvi u jednom citokinu iz ovih grupa (na primjer, Alpha-TnF ili IL-4) neće adekvatno odražavati stanje čitavog ravnoteže citokina. Stoga je potrebno simultanizirati nivo nekoliko medijatora (najmanje 2-3 suprotnih podskupina). U "Vector-Best" CJSC-u su setovi reagensa za kvantitativni odlučnost trenutno razvijeni i serijski proizvedeni: faktor nekroze tumora (osjetljivost - 2 pg / ml, 0-250 pg / ml); Gamma Interferon (osjetljivost - 5 pg / ml, 0-2000 pg / ml); Interleukin-4 (osjetljivost - 2 pg / ml, 0-400 pg / ml); Interleukin-8 (osjetljivost - 2 pg / ml, 0-250 pg / ml); Antagonist receptora Interleukin-1 (IL-1R) (osjetljivost - 20 pg / ml, 0-2500 pg / ml); alfa interferon (osjetljivost - 10 pg / ml, 0-1000 pg / ml); Autoimuna antitijela na alfa interferon (osjetljivost - 2 ng / ml, 0-500 ng / ml). Svi skupovi su namijenjeni utvrđivanju koncentracije tih citokina u ljudskim biološkim tekućinama, u supernatantima u kulturi prilikom proučavanja sposobnosti kultura ljudskih ćelija na vitro citokine. Načelo analize je "sendvič" - varariant solid-fazne trostepenice (vreme inkubacije - 4 h) ili dvostepeno (vrijeme inkubacije - 3,5 h) analize imuneasaya na tablete. Analiza zahtijeva 100 μl biološke tečnosti ili kulturu supernatant za jednu rupu. Računovodstveni rezultati - spektrofotometrijski na talasnoj dužini od 450 Nm. U svim setovima kromogena - tetrametilbenzidine. Rok trajanja naših setova povećava se na 18 mjeseci od datuma puštanja i 1 mjesec nakon početka korištenja. Analiza podataka o literaturi pokazala su da sadržaj citokina u krvnoj plazmi zdravih ljudi ovisi i iz skupova koji se koriste za njihovu definiciju i iz regije u kojoj žive ovi ljudi. Stoga su saznali vrijednosti normalnih koncentracija citokina, analizirane nasumične uzorke plazme (od 80 do 400 uzoraka) praktički zdravih krvnih davalaca, predstavnika različitih društvenih grupa u dobi od 18 do 60 godina bez kliničkih manifestacija grube somatske patologije i odsustvo HBSAG-a, antitijela na HIV, hepatitis viruse B i C.

Faktor nekroze tumor-alfa.

Alpha-FLN je igralitropski pro-upalni citokin koji se sastoji od dva izdužena b-lanca sa molekularne težine 17 CD-a i izvode regulatorne i poslovne funkcije u imunološkom odgovoru i upalu. Glavni proizvođači Alpha-FNF su monociti i makrofagi. Ovaj citokin pušta i limfociti i krvne granulocite, prirodne ubojice, T-limfocitne stanične linije. Glavni induktori jeseni Alfa su virusi, mikroorganizmi i njihovi metabolički proizvodi, uključujući bakterijski lipopolisaharide. Pored toga, neki citokini, poput IL-1, IL-2, granulocita-makrofage kolonistimulirajući faktor, alfa i beta verzija, također mogu izvesti ulogu induktora. Glavni pravci biološke aktivnosti Alfa pada: manifestuje selektivnom citotoksičnošću za neke tumorske stanice; Aktivira granulocite, makrofage, endotelne ćelije, hepatocite (začinjeni fazni proteini), osteoclasti i hondrocite (resorpcija kostiju i hartilažnog tkiva), sinteza drugih pro-upalnih citokina; Stimulira širenje i diferencijaciju: neutrofili, fibroblasti, endotelne ćelije (angiogeneza), hematopoički ćelije, T- i B-limfociti; poboljšava protok neutrofila iz koštane srži u krvi; Ima antitumor i antivirusnu aktivnost u Vivo i in vitro; Sudjeluje ne samo u zaštitnim reakcijama, već i u procesima uništenja i odštetama povezanih sa upalom; Služi kao jedan od posrednika uništavanja tkiva, uobičajeno sa dugom, hroničnom upalom.

Sl. 1. Distribucija nivoa alfa-flo

u plazmi zdravih donatora.

Povišena razina Alpha-FFO-a primijećena je u serumu tokom post-traumatskog stanja, s plućnim disfunkcijama, kršenjima normalnog toka trudnoće, onkoloških bolesti, bronhijalne astme. Nivo alfa-putovanja 5-10 puta veći od norme primećen je u pogoršanju hroničnog oblika virusnog hepatitisa C. Tokom pogoršanja bolesti gastrointestinalnog trakta, koncentracija alfa-fotografije u serumu prelazi normu na Prosječno 10 puta, a u pojedinim pacijentima - u 75-80 puta. Visoke koncentracije Alpha-FNF-a nalaze se u cerebrospinalnoj tečnosti kod pacijenata s višestrukim sklerozom i cerebrospinalnim meningitisom, a kod pacijenata sa reumatoidnim artritisom - u sinovijskoj tečnosti. To omogućava pretpostaviti učešće Alpha-FP-a u patogenezi broja autoimunih bolesti. Učestalost otkrivanja alfa-flopa u serumu, čak i s jakim upalom, ne prelazi 50%, sa induciranim i spontanim proizvodima - do 100%. Raspon koncentracije Alpha-Flo iznosio je 0-6 pg / ml, znači - 1,5 pg / ml (Sl. 1).

Gamma interferon.

Sl. 2. Distribucija nivoa gama informacija

u plazmi zdravih donatora.

Interleukin-4.

IL-4 - glikoprotein sa molekularne težine od 18-20 KD, prirodni inhibitor upale. Uz gama-info il-4 je ključni citokin proizvedeni t-ćelijama (uglavnom TN-2-limfociti). Podržava ravnotežu TH-1 / TH-2. Glavni pravci biološke aktivnosti IL-4 poboljšava eozinofiliju, akumulaciju masnih ćelija, izlučivanje IgG4, posredovane od humoralnog imunološkog odgovora TN-2-ćelija; Ima lokalnu antitumorsku aktivnost, podstičući populaciju citotoksičnih T-limfocita i tumora infiltracije eozinofilima; Suzbija izdanje citokina upale (Alph-Tnn, IL-1, IL-8) i prostaglandina iz aktiviranih monocita, citokinskih proizvoda TN-1-limfocita (IL-2, gama infracrveni, itd.).

Sl. 3. Distribucija nivoa IL-4 u plazmi

zdravi donatori.

Povišena razina sadržaja IL-4 u oba u serumu i u poticajnim limfocitima može se primijetiti u alergijskim bolestima (posebno u vrijeme pogoršanja), poput bronhijalne astme, alergijskog rinitisa, polinone, atopijskog dermatitisa, u bolestima gastrointestinalnog trakta. Nivo IL-4 također se primjetno raste kod pacijenata sa hroničnim hepatitisom C (HGS). Tokom razdoblja pogoršanja HSS-a, njen se broj povećava gotovo 3 puta u odnosu na norma i za vrijeme rešenja HGS-a, nivo IL-4 smanjuje se, posebno na pozadini liječenja koje provodi rekombinantna IL-2. Raspon koncentracije IL-4 iznosio je 0-162 pg / ml, prosjek - 6,9 pg / ml, raspon je normalan - 0-20 pg / ml (Sl. 3).

Interleukin-8.

IL-8 se odnosi na kemokse, protein je molekularne težine od 8 CD-a. IL-8 proizvodi mononuklearni fagociti, polimorfoidni leukociti, endotelne ćelije i druge vrste ćelija kao odgovor na različite poticaje, uključujući bakterije i viruse i proizvode njihovog metabolizma (na primjer, IL-1, alp- Fno). Glavna uloga Interleukin-8 je povećanje hemotaksije leukocita. Igra važnu ulogu u akutnom i hroničnom upalu. Povišena razina IL-8 primijećena je kod pacijenata s bakterijskim infesima, hroničnim bolestima pluća, bolesti gastrointestinalnog trakta. Nivo IL-8 u plazmi povećan je kod pacijenata sa sepsom, a njegove visoke koncentracije koreliraju sa povećanom smrtnošću. Rezultati mjerenja sadržaja IL-8 mogu se koristiti za kontrolu napretka liječenja i predviđanja bolesti. Stoga je povećani sadržaj IL-8 otkriven u tekućim tekućinom u svim pacijentima s povoljnim tijekom Corneal čira. U svim pacijentima sa kompliciranim tečajem čir Cornea, koncentracija IL-8 bila je 8 puta veća nego kod pacijenata s povoljnim tokom bolesti. Dakle, sadržaj pro-upalnih citokina (posebno IL-8) u suzanju pod tekućinom ispod čira korneje može se koristiti kao prognostički kriterij za tok ove bolesti.

Sl. 4. Distribucija nivoa IL-8 u

plazma zdravih donatora (Novosibirsk).

Prema našim i književnim podacima, zdravi ljudi u krvnom serumu IL-8 su izuzetno rijetki; Spontani proizvodi IL-8 mononuklearne krv primijećen je u 62%, a inducirani - 100% zdravih donatora. Raspon koncentracije IL-8 iznosio je 0-34 pg / ml, srednja - 2 pg / ml, raspon je normalan - 0-10 pg / ml (Sl. 4).

Sl. 5. Distribucija nivoa IL-8 u plazmi

zdravi donatori (Serbitsovsk).

Receptor Interleukin-1 antagonist.

IL-1R se odnosi na citokine, je oligopeptid s molekularne mase od 18-22 KD. Il-1 je endogeni IL-1 inhibitor, proizvedeni makrofagima, monocitima, neutrofilima, fibroblastima i epitelnim ćelijama. IL-1R potiskuje biološku aktivnost IL-1alph Interleukina i IL-1Bet, koji se takmiče s njima za obvezujući na mobilni receptor.

Sl. 6. Distribucija nivoa IL-1

u plazmi zdravih donatora

IL-1R proizvodi potiču mnoge citokine, virusne proizvode i proteine \u200b\u200bakutnih faza. IL-1R se može aktivno izraziti u upalnom žarištu s mnogim hroničnim bolestima: s reumatoidnim i maloljetničkim hroničnim artritisom, sistemskim crvenim lupusom, ishemijskim lezijama mozga, bronhijalne astme, pyelonefritis, pseoriasis i drugi. U Sepsiju se u nekim slučajevima bilježe najveći porast IL-1R - do 55 ng / ml, a utvrđeno je da povišene koncentracije IL-1R korelacije s povoljnom prognozom. Visok nivo IL-1 primećuje se kod žena koje pate od visokog stepena pretilosti, a ta se nivo značajno smanjila u roku od 6 meseci nakon liposukcije. Raspon koncentracije IL-1ra bio je 0-3070 pg / ml, srednja vrijednost - 316 pg / ml. Raspon je normalan - 50-1000 pg / ml (Sl. 6).

Alfa interferon.

Alfa-inf je monomerni kredalni protein s molekularne težine 18 CD-a, koji se uglavnom sintetizira leukocitima (u limfocitima, monocitima). Ovaj citokin može se proizvesti i u stvari bilo koje vrste ćelija kao odgovor na odgovarajuće uzbuđenje, moćne virusne infekcije mogu biti u moćnim stimulansima alfa inflacije. Alpha informisanja uključuju: viruse i njihove proizvode, među kojima je vodeće mjesto zauzeto dvostrana RNAS proizvedena tokom virusne replikacije, kao i bakterije, mikoplazme i protozoa, citokini i faktori rasta (kao što su IL-1, IL-2, Alpha -Furnish, Colony Pozitivni faktori itd.). Početna zaštitna reakcija nespecifičnog antibakterijskog imunološkog odgovora tijela uključuje indukciju alfa i beta informacija. U ovom slučaju, proizvode se antigen koji predstavljaju ćelije (makrofage) koji su zabilježili bakterije. Interferoni (uključujući alfa inf) igraju važnu ulogu u nesecifičnoj vezi antivirutnog imunološkog odgovora. Oni poboljšavaju antivirusni otpor, inducirani sintezom enzima koji su inhibirali formiranje nukleinskih kiselina i virusnih proteina. Pored toga, oni imaju imunomodulacijski učinak, poboljšavaju se u ćelijskom izrazu antigena glavnog histokompatibilnog kompleksa. Promjena sadržaja alfa-informacija otkrivena je u hepatitisu i cirozi virusne etiologije. U trenutku pogoršanja virusnih infekcija koncentracija ovog citokina značajno se povećava u većini pacijenata, a tokom perioda obnove pada na normalan nivo. Prikazuje se ovisnost između nivoa seruma i stupnja gravitacije i trajanje infekcije gripama.

Sl. 7. Distribucija alfa podataka

u plazmi zdravih donatora.

Povećanje koncentracije alfa-informacija primijećeno je u serumu većine pacijenata koji pate od autoimunih bolesti, poput poliartritisa, reumatoidnog artritisa, spondiloze, psorijatskog artritisa, reumatskog polimalgije i skleroderma, sistemskog crvenog lupusa i sistemskog vaskulitisa. Visok nivo ovog interferona uočen je i u pojedinim pacijentima tokom pogoršanja ulceratske i žučne bolesti. Raspon koncentracije ALPHA iznosio je 0-93 pg / ml, prosječno 20 pg / ml. Raspon je normalan - do 45 pg / ml (Sl. 7).

Antitela na alfa inf.

Antitela na alfa infrakcije mogu se otkriti u serumu sa somatskom eritematoznom lupusu. Spontana indukcija antitijela u Alpha Infrane također se primjećuje u serumima pacijenata s različitim oblicima tumora raka. U nekim slučajevima, antitijela na alfa infrakcije pronađena su u serumima ljudi zaraženih HIV-om, kao i u cerebrospinalnoj tečnosti i serumu sa meningitisom u periodu akutne faze, u seruskom poliartritisu u hroničnom obliku.

Sl. 8. Raspodjela nivoa antitijela na alfa infra

u plazmi zdravih donatora.

Alfa Info jedan je od učinkovitih antivirutskih i antitumorskih terapijskih lijekova, ali njegova dugoročna upotreba može dovesti do proizvoda specifičnih antitijela na alfa inf. To smanjuje efikasnost liječenja, a u nekim slučajevima uzrokuje različite nuspojave: od gripe u razvoju autoimunih bolesti. S obzirom na to, s info terapijom važno je kontrolirati nivo antitela na alfa informacije u pacijentovom tijelu. Njihovo obrazovanje ovisi o vrsti lijeka koji se koristi u terapiji, trajanju liječenja i vrsti bolesti. Raspon koncentracija antitijela na alfa-informacije iznosio je 0-126 NG / ml, srednja - 6,2 ng / ml. Raspon je normalan - do 15 ng / ml (Sl. 8). Evaluacija nivoa citokina koji koriste serijski serijski serijski, serijski proizvedeni u CJSC-u "Vector-Best", omogućava novi način za proučavanje stanja imunološkog sistema tela u kliničkoj praksi.

Imunotropni lijekovi na bazi citokina.

Zanimljiv posao. SS Simbirtseva, GNII posebno čistih bioloških priprema Ministarstva zdravlja Rusije, Sveti Peterburg). Thetitini se mogu dodijeliti novom neovisnom regulacijskom sistemu osnovnih funkcija tijela, koji postoji uz nervozne i endokrine Uredba i prvenstveno je povezana sa održavanjem homeostaze u uvođenju patogena i poremećaja integriteta tkiva. Ova nova klasa regulatornih molekula stvorena je prirodom tokom milijuna godina evolucije i ima neograničene mogućnosti za upotrebu kao drogu. Prema imunološkom sistemu citokina, odnos između nespecifičnih zaštitnih reakcija i određenog imuniteta, djelujući u oba smjera. Na nivou citokinskog organizma postoji veza između imunološkog, nervnog, endokrinog, hematopoetičkog i drugog sistema i služi za uključivanje u organizaciju i regulaciju zaštitnih reakcija. Pokretačka snaga intenzivne studije citokina uvijek je bila obećavajuća izgledi za njihovu kliničku upotrebu za liječenje raširenih bolesti, uključujući rak, zarazne i imunodefiktivne bolesti. U Rusiji se registruje nekoliko citokinskih preparata, uključujući interferone, pozitivne faktore, interleukins i njihove antagoniste, faktor nekroze tumora. Svi lijekovi citokina mogu se podijeliti u prirodno i rekombinantno. Prirodne su pripreme različitih stupnjeva pročišćavanja izvedenih iz kulturnog medija poticanih eukariotskih stanica, uglavnom ljudskih ćelija. Glavni nedostaci su niski stupanj pročišćavanja, nemogućnost standardizacije zbog velikog broja komponenti, upotreba komponenti krvi u proizvodnji krvnih komponenti. Očigledno, budućnost terapije citokinom povezana je sa genen-inženjerskim pripravcima dobivenim korištenjem najnovijih biotehnoloških dostignuća. U protekle dve decenije, geni većine citokina dobijeni su i rekombinantni analognici, u potpunosti ponavljaju biološka svojstva prirodnih molekula. U kliničkoj praksi postoje tri glavna područja korištenja citokina:

1) Citokinska terapija za aktiviranje zaštitnih reakcija organizma, imunomodulacije ili nadopunjavanja nedostatka endogenih citokina,

2) anticinsku imunosupresivnu terapiju namijenjenu blokiranju biološkog djelovanja citokina i njihovih receptora,

3) Citokinska genoterapija radi poboljšanja imuniteta za protuumore ili korekciju genetskih oštećenja u citokinom sistemu.

U klinici za sistemske i lokalne aplikacije može se koristiti brojni citokini. Sistemska uprava opravdava se u slučajevima kada je potrebno osigurati radnju citokina u nekoliko organa za efikasnije aktiviranje imuniteta ili aktivirati ciljane ćelije smještene u različitim dijelovima tijela. U drugim slučajevima, lokalna aplikacija ima niz prednosti, jer vam omogućava da postignete visoku lokalnu koncentraciju trenutnog starta, namjerno utječe na ciljni organ i izbjegavajte neželjene sistemske manifestacije. Trenutno se citokini smatraju jednim od najperspektivnijih lijekova za upotrebu u kliničkoj praksi.

Zaključak.

Dakle, trenutno nema sumnje da su citokini bitni faktori imunopatogeneze. Studija nivoa citokina omogućava pribavljanje informacija o funkcionalnoj aktivnosti različitih vrsta imunokompetentnih ćelija, omjera aktivacijskih procesa T-pomagača I i II tipa, koji su vrlo važni u diferencijalnoj dijagnostici broja zaraznih i imunopatoloških procesa. Citokini su specifični proteini pomoću kojih ćelije imunološkog sistema mogu razmijeniti jedni druge i implementirati interakciju. Danas je pronađeno više od stotinu različitih citokina, što se obično podijeljeno u pro-upalno (izazivajuće upale) i protuupalno (sprječavanje razvoja upale). Dakle, raznolikost bioloških funkcija citokina podijeljena su u tri grupe: oni kontroliraju razvoj i homeostazu imunološkog sustava, nadgledaju rast i diferencijaciju krvnih zrnaca (sustava hematopowera) i sudjeluju u određenim zaštitnim reakcijama tijela , imajući utjecaj na upalne procese, koagulaciju krvi, krvni pritisak.

Lista polovne literature.

S.V. Belmer, A. Simprts, O.V. Golovnko, L.V. Bubnova, L.M. Carpina, N.E. Schigolev, T.L. Mikhailova. / Rusko državno Medicinsko univerzitet GSC Koloproctologije, Moskva i gnili posebno čisti bioprepara, Sankt Peterburg.

S.V. Sennikov, A.n. Silkov // magazin "Citokini i upala", 2005., br. 1, br. 1, br. 1. str. 21-27.

T.G. Ryabicheva, N.A. Varaksin, N.V. Timofeeva, M.YU. Musknikov, materijali rada CJSC "Best".

SVEDOK ŠEŠELJ - ODGOVOR: S. S. Simbirstev, gnilli posebno čistih bioloških proizvoda Ministarstva zdravlja Rusije, Sankt Peterburg.

Ketlinsky S.A., Simbirtsev A. Gosposnia Posebno čisti biopreparat, Sankt Peterburg.

T.A. Shumatova, V.B.Shumatov, e.v. Markelova, L.G.SukHotepelya. Odjel za anesteziologiju i oživljavanje državnog univerziteta Vladivostok.

Rad rabljeni materijali sa stranice http://humbio.ru/humbio/spid/000402c2.htm

određeni uzročni agensi zaraznih bolesti. Dakle, Norsulfazole ...

1. Antiviralni molekularni molekularni ćelijski mehanizmi, obrasci razvoja i Imuneto

   Sažeci \u003e\u003e Medicina, zdravlje

   ... "stranica" označavaju određeno područje definitivan Polipeptid (antigen), sa kojim ... njegove rane faze. Citokini i hemokin. Drugi citokini, pored interferona, ... proizveli su ih po jedinici vremena citokini Određuje intenzitet širenja i ...

2. Istražite razloge razvoja fibroze koštane srži u mineloliferativnim bolestima analizom utjecaja faktora trombocita na mesennhimymalne matične stanice

   Domaći zadatak \u003e\u003e Medicina, zdravlje

   Različite koncentracije; - kvantitativni definicija Protein u eksperimentalnim sistemima, ... dovode do dugotrajnih akcija citokinOno što poboljšava proces fibroze ... trombocita. Takođe povećan sadržaj citokin Otkriveno je u urinu ...

3. Patogeneza tuberkuloze u čovjeku

   Sažeci \u003e\u003e Medicina, zdravlje

   Ali moguća je hidratna. Izvjestan Uloga u aerogenoj infekciji igra ... Igra, izlučuju makrofage i monociti citokin - Faktor nekroze tumora (TNF). ... Ioni, svaka ćelija ima definitivan Sistem koji pruža transportne supstance ...

). Zbog činjenice da su aktivirali ili modulirali proliferativna svojstva ćelija ove klase, bili su nazvani imunocitini. Nakon što je postalo poznato da ovi spojevi ne komuniciraju ne samo sa ćelijama imunološkog sustava, njihovo ime se smanjilo na citokine, uključujući kolonimulirajuće faktor (CSF) i mnoge druge (vidi vazoaktivne agense i upale).

Citokini [Grčki. Kytos. - Ovde plovilo - ćelija i Kineo. - Kretanje, ohrabrujuće] - velika i raznolika skupina male veličine (molekularna težina od 8 do 80 kda) proteinskih medijatora prirode - posredni molekuli ("komunikacijski proteini") koji sudjeluju u međuvremenom prijenosu signala uglavnom u imunološkom sustavu. Citokini uključuju faktor nekroze tumora, interferone, brojne interkleukine i druge citokine, koji se sintrati limfocitima i regulatori su proliferacije i diferencijacije, posebno hematopoektičke ćelije i ćelije imunološkog sistema, nazivaju se limfocinima. Izraz "citokin" predlaže S. Kenom i sur. 1974. godine

Sve ćelije imunološkog sistema imaju određene funkcije i rade u jasno dosljednoj interakciji, koje pružaju posebne biološki aktivne tvari - citokini - regulatori imunološke reakcije. Citokini su specifični proteini pomoću kojih razne ćelije imunološkog sistema mogu razmijeniti jedni druge i koordinirati akcije. Set i količine citokina koje djeluju na receptore za površinu ćelije su "Cytokine medium" - predstavljaju matricu interakcije i često promjenjive signale. Ovi su signali složeni zbog velikih raznolikosti cytokine receptora i zbog činjenice da svaki od citokina može aktivirati ili suzbiti nekoliko procesa, uključujući vlastitu sintezu i sintezu drugih citokina, kao i izgled i izgled citokinskih receptora . Za razne tkanine karakteristično je njen zdrav "citokinski okruženje". Otkriveno je više od stotinu različitih citokina.

Citokini su važan element u interakciji različitih limfocita među sobom i sa fagocitima (Sl. 4). Kroz Cytokines T-pomagača pomažu koordiniranju rada različitih ćelija koje su uključene u imunološki odgovor.

Od otvaranja 1970-ih otkriveno je više od stotinu biološki aktivnih tvari. Različiti citokini reguliraju širenje i diferencijaciju imunokompetentnih ćelija. A ako se utjecaj citokina na navedene procese prilično dobro proučava, tada se podaci o djelovanju citokina na apoptozi pojavili relativno nedavno. Treba ih uzeti u obzir tokom kliničke upotrebe citokina.

Interkelulalni alarm u imunološkom sustavu vrši se direktnom kontaktnom interakcijom ćelije ili koristeći medijatore međućelijskih interakcija. Prilikom proučavanja diferencijacije imunokompetentnih i hematopoetskih ćelija, kao i mehanizme međućelijske interakcije, formiranje imunološkog odgovora i velike i raznolike skupine rastvorljivih medijatora proteinskih prirode - posredni molekuli) koji sudjeluju u međuvremenom prijenosu Signali - otvoreni su citokini. Hormoni se obično isključuju iz ove kategorije na temelju endokrinog (i ne parakry ili autokrinog) karaktera njihove akcije. (Pogledajte citokine: hormonski mehanizmi signala). Zajedno sa hormonima i neurotijarima, oni čine osnovu jezika hemijskog alarma, kojom se morfogeneza i regeneracija tkiva reguliraju u višećelijskom organizmu. U pozitivnoj i negativnoj regulaciji imunološkog odgovora posjeduju središnju ulogu. Do danas je osoba pronađena i proučena u jednu stepenu ili drugu, kao što je već spomenuto, više od stotinu citokina, a stalno se pojavljuju poruke o otvaranju novih. Za neke se dobivaju genetski inženjerski analozi. Citokini čine aktiviranjem citokinskih receptora.

Često se podjela citokina do mnogih porodica izvrši, već po prirodi trodimenzionalne strukture, koji odražavaju sličnost intragroh na konformaciji i aminokiselinom nizom specifičnih receptora citokinih stanica (vidi ") receptori citokinima "). Neki od njih proizvodi T ćelije (vidi "Citokine koje proizvode T-ćelije"). Glavna biološka aktivnost citokina je regulacija imunološkog odgovora u svim fazama svog razvoja u kojoj igraju središnju ulogu. Općenito, ova cijela velika grupa endogenih regulatora pruža širok izbor procesa, kao što su:

Indukcija citotoksičnosti iz makrofaga,

Mnoge teške bolesti dovode do značajnog povećanja nivoa IL-1 i FNO Alpha. Ovi citokini doprinose aktiviranju fagocita, njihovoj migraciji u mesto upale, kao i puštanje upalnih medijatora - lipidni derivati, odnosno prostaglandin e2, prekrivači i faktor aktiviranja trombocita. Pored toga, oni direktno ili indirektno uzrokuju širenje arteriola, sintezu ljepljivih glikoproteina, aktiviraju T- i B limfocite. IL-1 lansira sintezu IL-8, što doprinosi hemotaksiji monocita i neutrofila i izlazom enzima iz neutrofila. Jetra smanjuje sintezu albumina i poboljšana je sinteza proteina akutne faze upale, uključujući inhibitore proteaze, kompletne komponente, fibrinogen, cerululzmin, ferritin i haptoglobin. Nivo C-JET proteina, koji se veže na oštećene i mrtve ćelije, kao i neke mikroorganizme, mogu povećati 1000 puta. Također je moguće značajno povećati koncentraciju amiloida A u serumu i njegovog odlaganja u raznim organima koji vode do sekundarne amiloidoze. Najvažniji posrednik akutne faze upale je IL-6, iako IL-1 i FNF Alpha također mogu nazvati opisane promjene u funkciji jetre. IL-1 i FNA Alpha ojačavaju jedan drugi utjecaj na lokalne i opće manifestacije upale, stoga kombinacija ova dva citokina čak i u malim dozama može prouzrokovati polikatsku nedostatku i trajnu arterijsku hipotenziju. Suzbijanje aktivnosti bilo koje od njih eliminira ovu interakciju i značajno poboljšava stanje pacijenta. IL-1 aktivira T- i B-limfocite na 39 * sa 37 * s. IL-1 i TNF Alpha uzrokuju smanjenje beživotne mase tijela i gubitka apetita, što dovodi do cachexia s dugačkom groznicom. Ti citokini padaju u krvotok samo na kratko vrijeme, ali pokaže se da je dovoljno za pokretanje IL-6 proizvoda. IL-6 je stalno prisutan u krvi, tako da je njegova koncentracija u skladu sa ozbiljnosti groznice i drugim manifestacijama infekcije. Ipak, IL-6, za razliku od IL-1 i FNF Alpha, ne smatraju se smrtonosnim citokinom.

Sažetak. Citokini su mali proteini koji vršuju autokrine (I.E., na ćeliju koja ih stvara) ili pakonom (na ćelijama koje se nalaze u blizini). Formiranje i puštanje ovih visoko aktivnih molekula događaju se kratko i čvrsto se podesiva. Citokini koji su sintetizirani limfocitima i regulatori su proliferacije i diferencijacije, posebno, hematopoetičke ćelije i ćelije imunološkog sistema također se nazivaju i limfocini i

Ovo poglavlje će razmotriti integrirani pristup u evaluaciji citokinskog sistema koristeći moderne metode opisanih istraživanja opisanim ranijem.

U početku ćemo predstaviti glavne ideje o citokinom sistemu.

Citokini se trenutno smatraju proteinopeptidnim molekulama proizvedenim od strane različitih ćelija tijela i provođenje intevremenih i intersejtovanih interakcija. Citokini su univerzalni regulatori životnog ciklusa ćelije, oni kontroliraju procese diferencijacije, proliferacije, funkcionalne aktivacije i apoptoze potonjeg.

Citokini proizvedeni od ćelija imunološkog sistema nazivaju se imunociti; Oni su klasa topljivih peptidnih medijatora imunološkog sistema neophodnog za njegov razvoj, rad i interakciju s drugim sistemima tijela (Kovalčuk L.V. et al., 1999).

Kao regulatorni molekuli, citokini igraju važnu ulogu u provođenju reakcija urođenog i adaptivnog imuniteta, osigurati njihov odnos, kontroliraju hemopove, upalu, formiranje novih krvnih sudova (angiogeneze) i mnoge druge vitalne procese.

Trenutno postoji nekoliko različitih klasifikacija citokina koje uzimaju u obzir njihovu strukturu, funkcionalnu aktivnost, porijeklo, vrstu citokinskih receptora. Tradicionalno, u skladu s biološkim efektima, napravljene su sljedeće grupe citokina.

1. Interleukins(IL-1-IL-33) - Sekretorni regulatorni proteini imunološkog sistema, pružajući medijske interakcije u imunološkom sustavu i njegovu povezanost s drugim sistemima tijela. Interleukini su odvojeni funkcionalnim aktivnostima na protu i protuupalnim citokinima, faktorima rasta limfocita, regulatornim citokinima itd.

3. Faktori nekroze tumora (FLN)- Citokini sa citotoksičnim i regulatornim akcijama: FNO i limfotoksini (LT).

4. Faktori rasta hematopoetskih ćelija- Faktor rasta matičnih ćelija (Kit - ligand), IL-3, IL-7, IL-11, Eritropoetin, Trubopoetin, granulocitni-makrofagealni kolonijackindilament faktor - GM-CSF, granulocitni BSK - Mr. KSF, makrofagal

kSF - M-KSF).

5. Chemokina- C, SS, CXC (IL-8), SH3C - regulatori hemotaksije različitih tipova ćelija.

6. Nelmfoidni faktori rasta- Regulatori rasta, diferencijacija i funkcionalna aktivnost ćelija raznih tkiva (faktor rasta fibroblasta - FRF, faktor za rast endotelija, faktor rasta epiderma - Epidermis EEF) i transformišu faktore rasta (TFRβ, TFRα).

Između ostalog, posljednjih godina aktivno se proučava faktor koji inhibiraju migracije makrofaga (mitlac - mit), koji se smatra neurogonjom sa aktivnošću citokina i enzima (Suslov A.P., 2003; Kovalčuk L.V. i dr.,

Citokini se razlikuju u strukturi, biološkoj aktivnosti i drugim nekretninama. Međutim, zajedno sa razlikama u citokinima posjeduju uobičajena svojstvakarakteristično za ovu klasu bioregulacijskih molekula.

1. Citokini su u pravilu, glikozilirani polipeptidi srednjeg molekularne težine (manje od 30 KD).

2. Citokini se proizvode imunološkim sustavom i drugim ćelijama (na primjer, endotelijum, fibroblasti itd.) Kao odgovor na aktiviranje podražaja (patogene molekularne strukture, antigeni, citokini itd.) I sudjeluju u reakcijama urođenom i Prilagodljivi imunitet, reguliranje snage i trajanja. Neki citokini su sintetizirani konstitutivno.

3. Izlučivanje citokina je kratko vreme. Citokini nisu spremljeni kao informirani molekuli i njihovi

sinteza počinje uvijek s transkripcijom gena. Ćelije proizvode citokine u niskoj koncentraciji (pikogrami po mililitru).

4. U većini slučajeva citokini se proizvode i rade na ciljnim ćelijama smještenim u neposrednoj blizini (kratkotrajna akcija). Glavno mjesto citokina - međućelijske sinape.

5. Suvišnostcitokinski sistemi manifestuju se u činjenici da svaka vrsta ćelija može proizvesti nekoliko citokina, a svaki citokin može izdati razne ćelije.

6. Za sve citokine su karakteristične pleotropy,ili polfunkcionalnost akcije. Dakle, manifestacija znakova upale nastaje zbog uticaja IL-1, Fnoul, IL-6, IL-8. Dupliranje funkcija osigurava pouzdanost sistema citokina.

7. Učinak citokina na ciljne ćelije posreduju se visoko specifičnim točanim membranskim receptorima, koji predstavljaju prijembrane glikoproteine, koji se sastoje, u pravilu, više od jedne podjedinice. Entrastelijski dio receptora odgovoran je za obvezujući citokin. Postoje receptori koji u patološkom fokusu eliminiraju višak citokina. Ovo su takozvani zamke receptora. Rastvorljivi receptori su vanćelijska membranska receptorska domena odvojena enzimom. Topivni receptori mogu neutralizirati citokine, sudjelovati u transportu u fokus upale i eliminacije iz tijela.

8. Citokini radite na principu mreže.Mogu se ponašati koordinirano. Mnoge funkcije pripisane originalnom jednom citokinu, jer se ispostavilo, posljedica dogovorenog djelovanja nekoliko citokina. (sinergizamakcije). Primjeri sinergističke interakcije citokina su stimulacija upalnih reakcija (IL-1, IL-6 i FNO), kao i IGE sinteza

(IL-4, IL-5 i IL-13).

Neki citokinici izazivaju sintezu drugih citokina (kaskada).Kaskada djelovanja citokina potrebna je za razvoj upalnih i imunoloških reakcija. Sposobnost nekih citokina da ojačaju ili otpuštaju proizvode drugih određuju važne pozitivne i negativne regulatorne mehanizme.

Antagonistički efekat citokina, poput IL-6 proizvoda, kao odgovor na povećanje koncentracije FNO može biti

negativni regulatorni mehanizam za nadgledanje razvoja ovog posrednika tokom upale.

Regulacija citokina s funkcijama ciljnih ćelija vrši se pomoću autokrina, parakrina ili endokrinih mehanizama. Neki citokini (IL-1, IL-6, FNFα itd.) Mogu sudjelovati u implementaciji svih navedenih mehanizama.

Odgovor ćelije na učinak citokina ovisi o nekoliko faktora:

Iz vrste ćelija i njihove početne funkcionalne aktivnosti;

Iz lokalne koncentracije citokina;

Iz prisustva drugih medijatorskih molekula.

Dakle, proizvodne ćelije, citokini i njih specifični receptori na ciljnim ćelijama čine jednu medijsku mrežu. To je skup regulatornih peptida, a ne pojedinih citokina, određuju konačni odgovor ćelije. Trenutno se citokinski sistem smatra univerzalnim sistemom regulacije na nivou holističkog organizma, što osigurava razvoj zaštitnih reakcija (na primjer, u infekciji).

Posljednjih godina postojala je ideja o ujedinjenju citokinskog sistema:

1) proizvodne ćelije;

2) rastvorljivi citokini i njihovi antagonisti;

3) ciljane ćelije i njihovi receptori (Sl. 7.1).

Kršenja različitih komponenti citokinskog sistema dovode do razvoja brojnih patoloških procesa, a samim tim, identificiranje nedostataka u ovom regulatornom sustavu važno je za ispravnu formulaciju dijagnoze i imenovanja odgovarajuće terapije.

U početku razmotrite glavne komponente citokinskog sistema.

Producenti ćelija citokina

I. Glavna grupa proizvođača citokina u adaptivnom imunološkom odgovoru su limfociti. Stanice ljudi ne izlučuju citokini. Kada se prepoznati antigen i sa sudjelovanjem remeptora (CD28-CD80 / 86 za T-limfocite i CD40-CD40L za B-limfocite), aktiviraju se ćelije koje vode do transkripcije citokinskih gena, emitovanja i izlučivanja glikozilanih peptida u međućelijski prostor.

Sl. 7.1.Citokinski sistem

CD4 T-pomagače predstavljaju podpolaci: th0, TH1, TH2, TH17, TFH, koji se razlikuju u spektru tajnih citokina kao odgovor na različite antigene.

Th0 proizvodi širok spektar citokina u vrlo niskim koncentracijama.

Smjer diferencijacije Th0.određuje razvoj dva oblika imunološkog odgovora s prevladavanjem humoralnih ili staničnih mehanizama.

Priroda antigena, njegova koncentracija, lokalizacija u ćeliji, vrstu ćelija za prezentaciju antigena i određeni set citokina regulira smjer diferencijacije th0.

Dendritičke ćelije nakon hvatanja i prerade antigena su antigenski peptidi th0 ćelije i proizvode citokine koji reguliraju smjer njihove diferencijacije u efektore. Uloga pojedinih citokina u ovom procesu ogleda se na slici. 7.2. IL-12 indukuje sintezu IFNγ T-limfocita i] CHGK. IFNU pruža diferencijaciju od vas1, koji počinju tajne citokina (IL-2, IFNU, IL-3, FNO, limfotoksini), regulišući razvoj reakcija na unutarćelijski patogeni

(Slobodna hipersenzivnost (GZT) i razne vrste citotoksičnosti ćelije).

IL-4 pruža razlikovanje t0 u TH2. Aktivirani TH2 proizvode citokine (IL-4, IL-5, IL-6, IL-13 itd.) Koji određuju širenje B-limfocita, njihovu daljnju diferencijaciju u ćelije u plazmi i razvoju reakcija protiv zraka , uglavnom na vanćelijski patogeni.

IFNA negativno prilagođava funkciju TH2 ćelija i, naprotiv, IL-4, IL-10, izlučuje T2, pritisnite funkciju TH1 (Sl. 7.3). Molekularni mehanizam ove regulacije povezan je s faktorima transkripcije. T-opklada i status4 izraz, determiniran IFNA, usmjerava diferencijaciju T ćelija duž staze TH1 i suzbija razvoj TH2. IL-4 izaziva izraz GATA-3 i STAT6, koji u skladu s tim osigurava konverziju naivne tebi u ćelijama TH2 (Sl. 7.2).

Posljednjih godina opisana je posebna subpopulacija pomagačkih T-stanica (TH17) koja proizvodi IL-17. Članovi porodice IL-17 mogu se izraziti aktiviranim memorijskim ćelijama (CD4CD45RO), U5T ćelijama, NKT ćelijama, neutrofilima, monocitima pod utjecajem IL-23, IL-6, TFRβ proizvedene makrofagima i dendritičkim ćelijama. Glavni faktor diferencijacije kod ljudi je ROR-C, u miševima - ROR-γ l. Prikazana je kardinalna uloga IL-17 u razvoju hronične upale i autoimune patologije (vidi Sl. 7.2).

Pored toga, T-limfociti u timusu mogu se razlikovati u prirodne ćelije-regulatore (Treg), izražavanje površinskih markera CD4 + CD25 + i faktor transkripcije Foxp3. Te ćelije su u stanju suzbiti imunološki odgovor, posredovanja od strane TH1 i TH2 ćelije, direktnim međućelijskim kontaktom i sintezom TFRβ i IL-10.

Sheme diferencijacije klonova th0 i citokina koji su izlučuju ih su zastupljene na slici. 7.2 i 7.3 (vidi takođe CV. Plac).

T-citotoksične ćelije (CD8 +), prirodne ubojice - slaba proizvodnja citokina, poput interferona, fno i limfotoksina.

Prekomjerna aktivacija jedne od subpopulacija th može odrediti razvoj jednog od osvajanja imunološkog odgovora. Hronična neravnoteža aktivacije TH može dovesti do stvaranja imunopatoloških uvjeta vezanih za manifestacije

alergije, autoimuna patologija, hronični upalni procesi itd.

Sl. 7.2.Različite subpopulacije T-limfocita koje proizvode citokine

II. U sistemu urođenog imuniteta glavni proizvođači citokina su ćelije mijeloidne serije. Koristeći receptore za naplatu cijena (TLRS), oni prepoznaju slične molekularne strukture različitih patogena, takozvanih patogene molekularnih paternesa (rampa), poput lipopolisaharide (LPS) gram-negativnih bakterija, peptidoglikana gram-pozitivnih mikroorganizama , Flagllin, DNK, bogat nerežiranim RGG ponavljanjima, a drugi kao rezultat

ova interakcija s TLR lansirana je intracelularnim kaskadom mjenjača signala, što dovodi do izražavanja gena dvije glavne grupe citokina: pro-upalni i IFN tip 1 (Sl. 7.4, vidi i pukovnik). Uglavnom, ovi citokini (IL-1, -6, -8, -12, FNO, GM-CSF, IFN, Chemokina itd.) Inducirati upale i sudjeluju u zaštiti tijela od bakterijskih i virusnih infekcija.

Sl. 7.3.Spektar citokina koji izlučuju You1 i You2 ćelije

III. Ćelije koje nisu povezane sa imunološkim sustavom (vezivne tkivo, epiteli, endotelijum), konstitutivno izlučuju autokrine faktore rasta (FRF, EPR, TFRR itd.). i citokini koji podržavaju širenje hematopoetskih ćelija.

Citokini i njihovi antagonistidetaljno opisano u velikom broju monografija (Kovalčuk L.V. et al., 2000; Ketlinssky S.A., simbirts A.S.,

Sl. 7.4.TLR-indirektno indukcija proizvodnje citokine po ćelijama urođenog imuniteta

Prekomjerni izraz citokina je nesiguran za tijelo i može dovesti do izrade pretjeranog upalnog odgovora, oštrih faza. U reguliranju proizvodnje pro-upalnih citokina sudjeluju razni inhibitori. Stoga je određeno brojne tvari opisane da nespecifično povezuje citokin IL-1 i sprječavaju manifestaciju svoje biološke akcije (A2-macroglobulin, C3 komponentu komplementa, uromodulina). Specifični IL-1 inhibitori mogu biti topljivi receptori-zamke, antitijela i receptor antagonist IL-1 (IL-1RA). U razvoju upale povećana je porast izražavanja gena IL-1R. Ali sami, ovaj antagonist prisutan je u krvi u velikoj koncentraciji (do 1 ng / ml ili više), blokirajući učinak endogenog IL-1.

Mishenia ćelije

Radnja citokina na ciljnim ćelijama posreduje se putem određenih receptora koji vežu citokine sa vrlo visokim afinitetom, a pojedine citokine mogu koristiti

opće podjedinice receptora. Svaki citokin povezan je sa svojim specifičnim receptorom.

Cytokine receptori su transmembranski proteini i podijeljeni su u 5 glavnih tipova. Najčešći takozvani hemopoetin tip receptora koji imaju dva vanselularna domena, od kojih jedan sadrži ukupni niz aminokiselinskih ostataka dva ponavljanja triptofana i serizma, odvojene bilo koje aminokiseline (WSXWS-motiv). Druga vrsta receptora može imati dva vanselularna domena sa velikim brojem konzervativnih cisteina. Ovo su receptori porodice IL-10 i IFN. Vrsta tipa predstavljaju cytokine receptori koji pripadaju grupi FNF. Četvrti tip receptora citokina pripada superfamilijskim imunoglobulinskim receptorima koji imaju ekstracellularne domene koji nalikuju strukturi domena molekula imunoglobulina. Peti tip receptora koji povezuju molekule porodice hemokine predstavljaju transmembrani proteini koji prelaze staničnu membranu na 7 mjesta. Cytokine receptori mogu postojati u topljivim obrascem, zadržavajući mogućnost vezanja za vezanje ligandi (Ketlinssky S.a. et al., 2008).

Citokini sposobni su utjecati na širenje, diferencijaciju, funkcionalnu aktivnost i apoptozu ciljnih ćelija (vidi Sliku 7.1). Manifestacija biološke aktivnosti citokina u ciljanim ćelijama ovisi o sudjelovanju različitih unutarćelijskih sustava u prijenosu signala iz receptora, koji je povezan sa značajkama ciljnih ćelija. Signal za apoptozu se vrši uključujući pomoć određenog odjeljka porodice FNF receptora, takozvanog domena "smrti" (Sl. 7.5, vidi pukovnicu). Diferencijal i aktiviranje signala prenose se pomoću intracelularnih proteina jak-stat - signalni transduktori i aktiviranje transkripcije (Sl. 7.6, pogledajte Col. Parcela). G-proteini su uključeni u prijenos hemokinskog signala koji dovodi do povećane migracijske i lepljenice.

Sveobuhvatna analiza citokinskog sistema uključuje sljedeće.

I. Evaluacija proizvodnih stanica.

1. Definicija izražavanja:

Receptori koji prepoznaju patogen ili antigen TKR, TLR) na nivou gena i proteinskih molekula (PCR, metoda cytofluorimetrije protoka);

Molekuli adaptera koji provode signal koji radi transkripcija gena citokina (PCR i sur.);

Sl. 7.5.Prijenos signala sa FPF receptorom

Sl. 7.6.Jak-Stat - Signalna staza sa tipom 1 citokinskim receptorima

Geni citokina (PCR); Molekuli proteina citokina (procijenjene cytokinsint-osjetljive na ljudske mononuklearne ćelije).

2. Kvantitativno određivanje ćelijskih subpopulacija koje sadrže te ili druge citokine: TH1, th2 Th17 (metoda unutarćelijskog bojenja citokina); Utvrđivanje broja ćelija koji se izlučuju određenim citokinima (Elispot metoda, vidi Ch. 4).

II. Evaluacija citokina i njihovih antagonista u biološkom okruženju tijela.

1. Ispitivanje biološke aktivnosti citokina.

2. Kvantitativno određivanje citokina pomoću Elise.

3. Imunohistohemijsko bojenje citokina u tkivima.

4. Određivanje omjera suprotnih citokina (pro-i protuupalnog), citokina i antagonista citokinskih receptora.

III. Procjena ciljnih ćelija.

1. Određivanje izraza citokinskih receptora na nivou gena i molekula proteina (PCR, metoda citofluorimetrije protoka).

2. Određivanje molekula signala u unutarćelijskom sadržaju.

3. Određivanje funkcionalne aktivnosti ciljnih ćelija.

Trenutno su razvijene brojne metode za procjenu citokinskih sistema koji pružaju različite informacije. Među njima se razlikuju:

1) molekularne biološke metode;

2) metode za kvantificiranje citokina pomoću imunoasaya;

3) testiranje biološke aktivnosti citokina;

4) unutarćelijsko bojenje citokina;

5) metoda Elispot, omogućavajući identifikaciju citokina oko jedne citokinske ćelije za proizvodnju;

6) imunofluorescencija.

Donosimo kratak opis ovih metoda.

Preko molekularne biološke metodemoguće je istražiti izraz citokinskih gena, njihovih receptora, molekula signala, proučavaju polimorfizam ovih gena. Posljednjih godina obavljen je veliki broj radova koji su otkrili udruženja između varijanti alela gena molekula citokinskog sistema i predispozicije

na brojne bolesti. Studija alelnih varijanti citokinskih gena može pružiti informacije o genetski programiranim proizvodima ovog ili drugog citokina. Najosjetljivija je lančana reakcija polimeraze u realnom vremenu - PCR-RV (vidi CH. 6). Metoda hibridizacije in situ.omogućuje vam razjašnjenje lokalizacije tkiva i ćelije izražavanja citokinskih gena.

Kvantitativno određivanje citokina u biološkim tekućinama i u kulturama mononuklearnih ćelija periferne krvi pomoću metode IFA može se opisati na sljedeći način. Budući da su citokini lokalni posrednici, on je savjetniji za mjerenje njihovih nivoa u odgovarajućim tkivima nakon vađenja proteina tkiva ili u prirodnim tekućinama, na primjer, u suza, pranje iz šupljina, anijsko tekućine, kičmene tekućine, itd. Razina citokina seruma ili druge biološke tečnosti odražavaju trenutno stanje imunološkog sistema, I.E. Sinteza citokina po ćelijama tela u vivo.

Određivanje nivoa proizvodnje citokina perifernom krvnom mononuklearom (MNC) prikazuje funkcionalno stanje ćelija. Spontani proizvodi MNC citokina u kulturi pokazuju da su ćelije već aktivirane u vivo.Inducirano (razni stimulansi, mitogen) sinteza citokina odražava potencijal, sposobnost sigurnosne kopije ćelije da odgovori na antigen podražaj (posebno učinak lijekova). Snižena indukovana proizvodnja citokina može poslužiti kao jedan od znakova države imunodeficijencije. Citokini nisu specifični za određeni antigen. Stoga je specifična dijagnoza zarazne, autoimune i alergijske bolesti određivanjem nivoa određenih citokina nemoguće. Istovremeno, procjena nivoa citokina omogućava pribavljanje podataka o težini upalnog procesa, njegovom prelasku na nivo sistema i prognozu, funkcionalnu aktivnost ćelija imunološke sustave, na omjeru th1- i Th2 ćelije, koje su vrlo važne s diferencijalnom dijagnozom više zaraznih i imunopatoloških procesa.

U biološkom okruženju moguće je kvantativno odrediti citokine s nizom metode imunoanalizekorištenje poliklona i monoklonskih antitijela (vidi Ch. 4). IFA vam omogućuje da saznate koje tačne koncentracije citokina u biografiju

lOGINSKE TIJELE FLUIDS. Envunophersum Detekcija citokina ima nekoliko prednosti u odnosu na druge metode (visoka osjetljivost, specifičnost, neovisnost od prisutnosti antagonista, mogućnost preciznog automatiziranog računovodstva, računovodstvene standardizacije). Međutim, ova metoda ima vlastitu ograničenju: IFA ne karakterizira biološku aktivnost citokina, može dati lažne rezultate po kriznim reaktivnim epitopima.

Biološko ispitivanjeoni se izvode na osnovu znanja o osnovnim svojstvima citokina, njihovih akcija na ciljne ćelije. Studija bioloških učinaka citokina omogućila je razvoj četiri vrste testiranja citokina:

1) o indukciji širenja ciljanih ćelija;

2) citotoksičnim efektom;

3) o indukciji diferencijacije ventilatora za kostiju brak;

4) Prema antivirusnoj akciji.

IL-1 određuje stimulativni učinak na širenje miša Timociti aktivirajući mitogen in vitro;IL-2 - mogućnost poticanja proliferativne aktivnosti limfoblasta; Prema citotoksičnom učinku na miš fibroblast (L929), Tnos i limfotoksini testiraju se. Čimbenici kolonimulacije ocjenjuju se njihovom mogućnošću održavanja rasta koštanih marginalnih prekursora u obliku kolonija u Agaru. Antiviralna aktivnost IFN-a otkrivaju ugnjetavanje citopatskih efekata virusa u kulturu diploidnih fibroblasta osobe i tumorske linije fibroblasta miševa L-929.

Stvorena su ćelijske linije, čiji rast ovisi o prisutnosti određenih citokina. U kartici. 7.1 predstavio je popis ćelijskih linija koji se koriste za testiranje citokina. Po sposobnostima da se izaziva širenje osjetljivih ciljnih ćelija, biostestiranja IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-15 itd. Međutim, ove metode ispitivanja se odlikuju nedovoljnom osjetljivošću i Informativnost. Molekuli inhibitora i antagonista mogu maskirati biološku aktivnost citokina. Neki citokini pokazuju opću biološku aktivnost. Ipak, ove su metode idealne za testiranje specifične aktivnosti rekombinantnih citokina.

Tabela 7.1.Stanične linije koje se koriste za testiranje biološke aktivnosti citokina

Krajnja tablica. 7.1

Laboratorijski rad 7-1

Određivanje biološke aktivnosti IL-1 na komedogenom učinku na širenje timocita miševa

Osnova metode biološkog ispitivanja IL-1 je sposobnost citokina da potakne širenje miša timocita.

IL-1 se može definirati u kulturi monocita, poticati LPS, kao i u bilo kojem telu za biološko tekućinu.Potrebno je obratiti pažnju na broj dijelova.

1. Za testiranje koriste se timociti miševa C3H / Hej line, potaknuli do proliferacije mitogena (Confanavalin A - Kona i Phytohemaglutinin - FGA). Tymociti C3N / HEJ nisu odabrani slučajno: miševi ove inbred linije ne odgovara na LPS, što može biti u sastavu materijala koji se testira i uzrokuje IL-1 proizvode.

2. Timociti su odgovorni za IL-2 i Mitogene, stoga bi se prisustvo IL-2 i Mitogen trebalo odrediti i u pripremama testiranim na IL-1.

Operativni postupak

1. Timodocyte ovjes dobiva se u koncentraciji od 12 × 10 6 / ml RRMI 1640 srednje sadrže 10% serum kravljeg embriona i 2-mercaptoetanol (5 × 10 -5 m).

2. Pripremite niz uzastopnih dvostrukog razrjeda eksperimentalnih (bioloških tekućina tijela) i kontrolnih uzoraka. Kao kontrola, biološka tekućina koja sadrže il-1 ili uzorke dobivene inkubirajući mononuklearne ćelije bez LPS-a, i laboratorijskim standardom koji sadrže drogu IL-1. U 96-dobro okruglo dno ploče iz svakog razrjeđivanja prenosi se 50 μl od 6 rupa.

3. U tri rupe svakog razblaživanja dodaje se 50 μl pročišćenog FGA (welcome) u koncentraciji od 3 μg / ml, a na ostale 3 μl od 3 μl srednjeg.

4. 50 μl ovjesa Timocit-a dodaje se svakom dobro i inkubira se 48 sati na 37 ° C.

6. Prije završetka kultivacije u bunarima, 50 μl rješenja (1 mkki / ml) ["3 h] --timidin se uvodi i inkubira još 20 sati.

7. Da biste odredili nivo radioaktivnosti, kulturna ćelija se prenosi na filtriranje papira pomoću automatskog sakupljanja ćelija, filtri su osušeni i određuju uključivanje nalepnice sa pultom za tekućim sažimanjem.

8. Rezultati se izražavaju u obliku koeficijenta stimulacije.

gdje je m cp prosječni broj impulsa u 3 rupe.

Ako Tymocites odgovori na stimulaciju sa standardom IL-1, indeks stimulacije studiranog uzorka koji prelazi 3 pouzdano ukazuje na IL-1-aktivnost.

Bioanaliza je jedina metoda za procjenu funkcioniranja citokina, ali ova metoda mora biti dopunjena različitim vrstama odgovarajuće kontrole na specifičnosti koristeći monoklonske antitijele. Dodavanje određenih monoklonskih antitela na Cytokine u kulturu blokira biološku aktivnost citokina, koja se pokazuje: signal na proliferaciju ćelijske linije je određeni citokin.

Koristeći bioanalizu za identifikaciju interferona.Princip procjene biološke aktivnosti IFN-a zasnovan je na njegovoj antivirusnoj akciji, što je određeno stupnjem inhibicije reprodukcije testnog virusa u staničnoj kulturi.

U radu se mogu koristiti ćelije koje su osjetljive na djelovanje IFN-a: primarne tripsinizirane ćelije filoplasta od pilića, prevedene ćelije diploidnih fibroblasta osobe i kulture miša (L929).

U procjeni antivirusne akcije IFN-a, preporučljivo je koristiti viruse s kratkim ciklusom reprodukcije, visoke osjetljivosti na djelovanje IFN-a: encefalomijelitis virus miševa, itd.

Laboratorijski rad 7-2.

Određivanje aktivnosti interferona

1. Suspenzija diploidnih fibroblasta od strane osobe na medije sa 10% serumom krava embriona (koncentracija ćelije - 15-20 × 10 6 / ml) izli se u sterilne ploče s ravnim dnom od 96 i rupe od 100 μL u dobro i postavljen u CO 2-Encumbater na temperaturama 37 ° C.

2. Nakon formiranja kompletnog monolaja iz rupa uklonite srednji rast i 100 μl potpornog medija dodaje se u svake bunar.

3. Titriranje aktivnosti IFN-a u proučavanim uzorcima vrši se metodom dvostruke uzgoja na monolayer fibroblastima.

Istovremeno sa uzorcima u bunarima, encefalomijelitis miševa (VEM) uvodi se u dozu od 100% oštećenja ćelija nakon 48 sati nakon infekcije.

4. Za kontrolu, koristite bunare s netaknutim (neobrađenim) ćelijama zaraženim virusom.

U svakoj studiji referenca IFN uzorci s poznatom djelatnošću koriste se kao referentni pripravci.

5. Ploče za razrjeđivanje uzoraka inkubiraju se za 24 sata na temperaturi od 37 ° C u atmosferi sa 5% sadržajem CO 2.

6. Nivo aktivnosti IFN-a određuje se inverznam vrijednosti maksimalnog razrjeđivanja testnog uzorka, koji odgađa citopatski učinak virusa za 50%, te izrazi u 1 ml jedinicama aktivnosti.

7. Da biste odredili vrstu IFN-a, antiserum protiv IFNα, IFNβ ili IFNγ dodaje se u sustav. Anti-Vortex otkazuje radnju odgovarajućeg citokina, što vam omogućava identifikaciju vrste IFN-a.

Određivanje biološke aktivnosti migracije inhibitornog faktora.Trenutno se potpuno nove ideje o prirodi i svojstvima mita otvorile u 60-ima prošlog stoljeća kao posrednik ćelijskog imuniteta i već dugi niz godina bez odgovarajuće pažnje (Bloom Br, Bennet V., 1966; David Jr, 1966). Tek u posljednjih 10-15 godina postalo je jasno: mit je jedan od najvažnijih bioloških posrednika u tijelu sa širokim spektrom citokinskih bioloških funkcija, hormona, enzima. Radnja mita o ciljnim ćelijama se implementira putem CD74 - -Receptora ili kroz ne-klasični put endocitoze.

Mit se smatra važnim posrednikom u upalu koji aktivira funkciju makrofaga (proizvodnja citokina, fagocitoze, citotoksičnosti itd.), Kao i endogeni imunoregulacijski hormon, moduliranje glukokortikoidne aktivnosti.

Nakupljeno je sve više informacija o ulozi mita u patogenezi mnogih upalnih bolesti, uključujući sepsu, reumatoidni artritis (RA), glomerulonefritis, itd. Koncentracija mita u tekućinu pogođenih zglobova značajno se povećava, korelaciranje sa ozbiljnost bolesti. Pod utjecajem mita, povećava se proizvodnja pro-upalnih citokina kao makrofage i sinovijskih stanica.

Razne metode ispitivanja aktivnosti mita poznate su kada se migrantne ćelije (ciljane ćelije za mito) postavljaju u staklenu kapilariju (kapilarni test), automobil agaroze ili agarozne dobro.

Predstavljamo relativno jednostavan metod skrininga zasnovan na formiranju ploče s ravnim dnom od 96 rupa (leukocita ili makrofaga), standarda u području i broju ćelija, nakon čega slijedi njihovo uzgoj u hranjivim medijima i određivanje promjene Na području ovih mikrokultura pod djelovanjem mita (Suslov A.P., 1989).

Laboratorijski rad 7-3.

Definicija mitske aktivnosti

Definicija biološke aktivnosti mit izvrši se uz pomoć uređaja za formiranje mobilnih mikrokultura (Sl. 7.7) - Migrosurin (istraživački institut epidemiologije i mikrobiologije. N.F. gamalei rams).

1. U rupi 96-bunar tableta (protok, ujedinjeno kraljevstvo ili slično) Dodajte 100 μl uzorkoj kulturnog sredstva podijeljen sa kulturom medija, u kojem se utvrđuje mit aktivnost (svaki uzgoj u 4 paralele). Kulturna sredstva uključuje RPMI 1640, 2 mm l-glutamin, 5% kravju embrio serum, 40 μg / ml gentamicin.

2. Kulturni medij dodaje se u kontrolne bušotine (u 4 paralele) od 100 μl.

3. Pripremljena je ćelijska suspenzija peritonealnih makrofaga za koja 2 miševa-hibrid (Swachs57v1 / 6) F1 intraperitonealno daju u 10 ml Henksa otopine sa heparinom (10 jedinica / ml), pažljivo masirajući trbuh 2-3 minute . Tada se životinja začepljena ublažavanju, pažljivo probije trbušni zid na području prepona i kroz iglu špric sisa eksudat. Stanice peritonealnog eksudata su pranje rješenjem Henks-a, centrifugiranjem 10-15 minuta u 200 g. Zatim pripremite suspenziju ćelija sa koncentracijom od 10 ± 1 milion / ml RPMI 1640 okruženja. Brojanje se vrši u vrućoj komori.

4. Prikupite minoserin sistem koji predstavlja stativ za usmjereno i standardno fiksiranje saveta sa staničnim kulturama u strogo vertikalnom položaju na datoj visini iznad središta kućnog tableta iz 166 i sa 92 savjeta za automatsko pipice Kompanija "Transmar", SAD (riža. 7.7).

Zalijepite noge stativ u uglate bušotine tableta. Stanična ovjes je stečena automatskom pipetom u savjetima - 5 μL u svakom, ispere se iz viška ćelija pomoću jednokratnog spuštanja u srijedu i umetnute vertikalno u sistemski utora za statide. Završeni statiov sa savjetima čuva se na sobnoj temperaturi 1 sat na strogo vodoravnoj površini. Za to vrijeme nalaze se ćelije ovjesa na dnu bunara, gdje se formiraju standardne ćelije-mikrokulture.

5. Starobod sa savjetima pažljivo se uklanja iz tableta. Tablet sa mikrokultom ćelija postavlja se u strogo horizontalni položaj u CO 2-zatvorenom, gde se kulturi 20 sati. Tokom kulture ćelije migrira duž dna bunara.

6. Kvantitativno računovodstvo rezultata nakon inkubacije se vrši na dvoličnom lounu, vizualno procjenjujući veličinu kolonije na skali unutar okulara. Mikrokulturi imaju oblik kruga. Istraživači zatim određuju prosječnu vrijednost promjera kolonija prema rezultatima mjerenja kolonija u 4 eksperimentalne ili kontrolne rupe. Greška mjerenja je ± 1 mm.

Indeks migracije izračunavaju se formulom:

Uzorak ima mitsku aktivnost ako su vrijednosti izjednačene

Iza uvjetne jedinice (jedinice) mitske aktivnosti vrši obrnutu vrijednost jednaku vrijednosti najvećeg razrjeđivanja uzorka (uzorka) u kojem je indeks migracije 0,6 ± 0,2.

Feo biološka aktivnostTo je α na citotoksični učinak na L-929 transformiranu fibroblastu. Kao pozitivna kontrola koristi se rekombinantno FNO, a ćelije u kulturnoj mediju koriste kao negativnu kontrolu.

Izračunajte citotoksični indeks (QI):

gde sVEDOK JOVANOVIĆ - ODGOVOR:- broj živih ćelija u kontroli; b.- Broj živih ćelija u iskustvu.

Sl. 7.7.Mikrozinska šema - uređaji za kvantificiranje migracija ćelijskih kultura

Stanice su obojene bojom (metilen plava), koja je uključena samo u preminute ćelije.

Iza uvjetne jedinice aktivnosti TNF preuzme vrijednost obrnutog razrjeđivanja uzorka potrebnog za proizvodnju 50% citotoksičnosti ćelije. Specifična aktivnost uzorka je omjer aktivnosti u konvencionalnim jedinicama na 1 ml do koncentracije proteina sadržanih u uzorku.

Intracelularno bojenje citokina.Promjena omjera ćelija koje proizvode različite citokine mogu odražavati patogenezu bolesti i posluži kao kriterij za prognozu bolesti i evaluaciju terapije.

Metoda unutarćelijskog bojenja određuje izraz citokina na nivou jedne ćelije. CyTofluorimetrija protoka omogućava vam izračunavanje broja ćelija koje izražavaju jedan ili drugi citokin.

Navodimo glavne faze definicije unutarćelijskih citokina.

Prekomjerne ćelije proizvode male količine citokina, što, u pravilu se, u pravilu ne deponuju, stoga važan korak u procjeni unutarćelijskih citokina stimulacija limfocita i blokade izlaza ovih proizvoda iz ćelija.

Kao indukter citokina, aktivator proteina Kinaza sa Folubo-12-Myrisstat-13-acetatom (FMA) u kombinaciji sa ionofore kalcijumom koristi se u kombinaciji sa ionofore kalcijumom. Upotreba takve kombinacije uzrokuje sintezu širokog spektra citokina: IFNU, IL-4, IL-2, FNUΑ. Nedostatak upotrebe FMA-in - Problem otkrivanja molekula CD4 na površini limfocita nakon takve aktivacije. Takođe, proizvodi citokina T-limfocita izazvani su mitogen (FGA). B ćelije i monociti potiču

Mononuklearne ćelije se inkubiraju u prisustvu induktora citokinskih proizvoda i blokatora njihovog intracellularnog prevoza Brefeldin A ili Monencina za 2-6 sati.

Stanice su tada resuspendirane u pufernom rješenju. Za fiksaciju se dodaje 2% formaldehid, inkubira se 10-15 minuta na sobnoj temperaturi.

Tada se stanice tretiraju sa Saponinom, što povećava propusnost ćelijskog membrane, a obojena je monoklonskim antitijelima specifičnim za određene citokine. Pred-bojenje površinskih markera (CD4, CD8) povećava broj primljenih informacija o ćeliji i omogućava vam da tačno odredite njegovu pripadnost stanovništvu.

Postoje neka ograničenja u primjeni gore opisanih metoda. Pomoću, nemoguće je analizirati sintezu citokina jednom ćelijom, nemoguće je odrediti broj citokinskih ćelija u subpopulaciji, nemoguće je utvrditi da li citokinprodukcijske ćelije izražavaju jedinstvene markere, bilo da su različite Citokini se sintetišu sa različitim ćelijama ili sami i isti. Odgovor na ta pitanja dobiva se pomoću drugih istraživačkih metoda. Da bi se utvrdila frekvencija ćelija koje proizvode citokine u populaciji, koriste se metoda ograničavanja razrjeđivanja i elispot varijante za analizu imunode (vidi Ch. 4).

U metodi hibridizacije situ.Metoda uključuje:

2) fiksacija paraformaldehida;

3) Otkrivanje MRNA koristeći oznaku CDNA. U nekim slučajevima citokin MRNA određuje se na odjeljcima sa radioisotopom PCR-om.

Imunofluorescencija.Metoda uključuje:

1) zamrzavanje organa i pripreme presjeka Cryostat-a;

2) fiksacija;

3) tretman odjeljaka s oznakom fluorescenske anticicinske antitela;

4) verovatno promatranje fluorescencije.

Ove tehnike (hibridizacija in situ.i imunofluorescencija) Brzi i neovisni o koncentracijama praga izlučenog proizvoda. Međutim, ne određuju iznos izlučenog citokina i može biti složeno tehnički. Potrebna je različita temeljna kontrola nesektivnih reakcija.

Uz pomoć predstavljenih metoda procjene citokina, identificirani su patološki procesi koji se odnose na kršenje u citokinom na raznim nivoima.

Dakle, evaluacija citokinskog sistema izuzetno je važna za karakteristike stanja imunološkog sistema tijela. Studija raznih nivoa citokinskog sistema omogućava vam da pribavite informacije o funkcionalnoj aktivnosti različitih vrsta imunokompetentnih ćelija, ozbiljnosti upalnog procesa, o njegovom prelasku na nivo sistema i prognozu bolesti.

Pitanja i zadaci

1. Navedite opća svojstva citokina.

2. Dajte klasifikaciju citokina.

3. Navedite glavne komponente citokinskog sistema.

4. Navedite proizvođače citokina ćelija.

5. Opišite porodicu Cytokine receptora.

6. Koji su mehanizmi za funkcioniranje citokinske mreže?

7. Recite nam o razvoju citokina u sistemu urođenog imuniteta.

8. Koji su glavni pristupi sveobuhvatnoj procjeni citokinskog sistema?

9. Koje su metode testiranja citokina u biološkim tekućinama tijela?

10. Koje su nedostatke u citokinom sistemu sa različitim patologijama?

11. Koje su glavne metode biološkog ispitivanja IL-1, IFN, mit, Flo u biološkim tekućinama?

12. Opišite postupak određivanja unutarćelijskog sadržaja citokina.

13. Opišite postupak određivanja citokina koji se izlučuje jedna jedina ćelija.

14. Opišite redoslijed metoda otkrivanja oštećenja na nivou receptora citokine.

15. Opišite redoslijed metoda koji se koriste za otkrivanje nedostatka na nivou proizvođača citokina.

16. Koje se informacije mogu dobiti istraživanjem proizvodnje citokina u kulturi mononuklearnih ćelija, u serumu?

Uvođenje

Opći

Klasifikacija citokina

Cytokine receptori

Citokini i regulacija odgovora imunista

Zaključak

Literatura

Uvođenje

Citokini su jedan od najvažnijih dijelova imunološkog sistema. Imunološki sustav zahtijeva sistem upozorenja iz ćelija tijela, kao krik pomoć. Ovo je možda najbolje određivanje citokina. Kada će se ćelija oštetiti ili zadiviti patogenim organizmom, makrofagi i oštećene ćelije odlikuju se citokinima. To uključuje faktore kao što su Interleukin, Interferon i tumor-alfa nekroza. Potonji se takođe dokazuje da uništavanje tumorskih tkiva kontrolira imunološki sistem. Kada se puštaju citokini, na primjer, pozivaju na posebne imunološke ćelije, na primjer leukocite i T- i B ćelije.

Citokini takođe daju signal o određenoj civilnoj svrsi da se podaci ćelija moraju izvršiti. Citokini i antitijela su apsolutno različite, jer su antitela nešto što je povezano s antigenima, oni omogućavaju imunološkom sistemu da identificira invaziju stranih organizama. Dakle, može se izvesti analogija: citokini su glavni alarm za osvajače i antitela - izviđači. Proces analize citokina naziva se definicija citokina.

Opći

Citokini [Grčki. Kytos - plovilo, ovdje - Ćelija i Kineo - kretanje, ohrabrujući] - velika i raznolika skupina male veličine (molekularna težina od 8 do 80 kda) proteinskih medijatora - posredni molekuli) koji sudjeluju u međukelijskom signalu Prijenos signala uglavnom u imunološkom sustavu.

Citokini uključuju faktor nekroze tumora, interferone, brojne interkleukine i druge citokine, koji se sintrati limfocitima i regulatori su proliferacije i diferencijacije, posebno hematopoektičke ćelije i ćelije imunološkog sistema, nazivaju se limfocinima.

Sve ćelije imunološkog sistema imaju određene funkcije i rade u jasno dosljednoj interakciji, koje pružaju posebne biološki aktivne tvari - citokini - regulatori imunološke reakcije. Citokini su specifični proteini pomoću kojih razne ćelije imunološkog sistema mogu razmijeniti jedni druge i koordinirati akcije.

Set i količine citokina koje djeluju na receptore za površinu ćelije su "Cytokine medium" - predstavljaju matricu interakcije i često promjenjive signale. Ovi su signali složeni zbog velikih raznolikosti cytokine receptora i zbog činjenice da svaki od citokina može aktivirati ili suzbiti nekoliko procesa, uključujući vlastitu sintezu i sintezu drugih citokina, kao i izgled i izgled citokinskih receptora .

Interkelulalni alarm u imunološkom sustavu vrši se direktnom kontaktnom interakcijom ćelije ili koristeći medijatore međućelijskih interakcija. Prilikom proučavanja diferencijacije imunokompetentnih i hematopoetskih ćelija, kao i mehanizme međućelijske interakcije, formiranje imunološkog odgovora i velike i raznolike skupine rastvorljivih medijatora proteinskih prirode - posredni molekuli) koji sudjeluju u međuvremenom prijenosu Signali - otvoreni su citokini.

Hormoni se obično isključuju iz ove kategorije na temelju endokrinog (i ne parakry ili autokrinog) karaktera njihove akcije. (Pogledajte citokine: hormonski mehanizmi signala). Zajedno sa hormonima i neurotijarima, oni čine osnovu jezika hemijskog alarma, kojom se morfogeneza i regeneracija tkiva reguliraju u višećelijskom organizmu.

U pozitivnoj i negativnoj regulaciji imunološkog odgovora posjeduju središnju ulogu. Do danas je osoba pronađena i proučena u jednu stepenu ili drugu, kao što je već spomenuto, više od stotinu citokina, a stalno se pojavljuju poruke o otvaranju novih. Za neke se dobivaju genetski inženjerski analozi. Citokini čine aktiviranjem citokinskih receptora.

A. Interferoni (IFN)):

1. PrirodnoIFN (1 generacija):

2. Recombonnate IFN (2 generacija):

a) Kratka akcija:

IFN A2B: Intron-a

IFN β: avonex i drugi.

(Pagilirano IFN): Paginterferon

B. Induktorski interferon (Interferonogens):

1. Sintetički - Cikloron, Tiloron, Dibazole itd.

2. Prirodno- Podosti i drugi.

U. Interleukins : Rekombinantni interleukin-2 (Roncolekin, Aldesleikin, Proleikin, ) , rekombinantno interleukin 1-beta (betalekin).

G. Kolontessulacioni faktori (argrafeworks itd.)

Peptide lijekovi

Pripravci timunskih peptida .

Peptidni spojevi proizvedeni vilicom, stimulirajte sazrijevanje T-limfocita(Timopoetins).

Sa početnim smanjenim pokazateljima, pripreme tipičnih peptida povećavaju broj T ćelija i njihovu funkcionalnu aktivnost.

Dvije generacije timičkih lijekova prvog stvaranja u Rusiji postalo je Tabuti, što je kompleks peptida izvučenih iz timusa goveda. Priprema koje sadrže kompleks timičkih peptida takođe su povezane Timalin, Timopin i drugi, i na ekstrakte timusa - Thorusulin i Vilozen.

Pripravci peptida od timusa goveda timalin, Tistibamulinubrizgava intramuskularno i tabuti, Timoptin- Pod kožom uglavnom u insuficijenciji ćelijskog imuniteta:

Sa T-imunodeficijencijom

Virusne infekcije

Za sprečavanje infekcija tokom zračenja i hemoterapije tumora.

Klinička efikasnost timičkih lijekova prve generacije nije sumnja, ali imaju jedan nedostatak: oni su neuzvraćena mješavina biološki aktivnih peptida, prilično teška za standardizaciju.

Napredak u oblasti droga od timičkog porijekla prošao je kroz stvaranje priprema II i III generacija - sintetički analozi prirodnih hormona timusa ili fragmenata ovih hormona sa biološkom aktivnošću.

Moderan lijek Imunofan -heksapeptid, sintetički analog Aktivnog centra Thymopoetina, koristi se za imunodeficijencije, tumore. Lijek stimulira stvaranje IL-2 imunokompetentnih ćelija, povećava osjetljivost limfoidnih ćelija na ovaj limfocin, smanjuje proizvode FNF-a (faktor nekroz tumora), ima regulaciju medijatora imuniteta (upale) i imunoglobulina i imunoglobulina .

Pripravci za peptide koštane srži

Melopid Dođite iz kulture ćelija koštane srži sisara (teladi, svinja). Mehanizam djelovanja lijeka povezan je s podradom širenja i funkcionalne aktivnosti V- i T-stanica.

U tijelu se uzima u obzir meta ovog lijeka U limfocitima. U slučaju umanjenja imuna ili hematopoede, uvođenje mitotika dovodi do povećanja ukupne mitotske aktivnosti ćelija koštane srži i smjera njihove razlikovanja prema zreli u limfocitima.

Myopid se koristi u složenoj terapiji sekundarnih imunodefinacija s poželjnim lezijama humoralnog imuniteta, za sprečavanje zaraznih komplikacija nakon hirurških intervencija, povrede prebačeni u osteomijelitis, u nesedljivim plućnim bolestima, hroničnim piroderima. Nuspojave lijeka - vrtoglavica, slabost, mučnina, hiperemija i bol u mjestu primjene.

Svi lijekovi ove grupe su kontraindicirana trudna, mijeloksid i imunofan kontraindicirani su u prisustvu sukoba za majku i fetusa rezusa.

Pripreme imunoglobulinov

Imunoglobulini čoveka

a) imunoglobulini za intramuskularnu upravu

Nespecifična: ljudski imunoglobulin normalan

Specifično: Imunoglobulin protiv hepatitisa u čovjeku, ljudski imunoglobulin antistafokokokokokokokok, imunoglobulin čovjek protiv perla, imunoglobulin čovjek protiv krpećeg encefalitisa, imunoglobulin čovjeka protiv bjesnoće protiv virusa itd.

b) imunoglobulini za intravensku administraciju

Nespecifična:imunoglobulin MAN normalan za intravensku administraciju (Gabriglobin, Immunovin, Intraglobin, Humaglobin)

Specifično: Imunoglobulin protiv hepatitisa po osobi (neparnički), pentaglobin (sadrži antibakterijsku IGM, IGG, IGA), imunoglobulin protiv citomegalovirusa (citotekt), imunoglobulin čovek protiv krpećeg encefalitisa, anti-biblioteke ig i više.

c) imunoglobulins za usmenu administraciju:imunoglobulin kompleks lijek (instrumentacija) za enteralnu upotrebu u akutnim crevnim infekcijama; Anthytavirus imunoglobulin za oralnu administraciju.

Heterološki imunoglobulins:

imunoglobulin Anti-biblioteka iz konjskog seruma, serum je antikangrenski polivalentni konj, itd.

Pripravci nesedivih imunoglobulina koriste se za primarna i sekundarna imunodeficijencija, pripreme specifičnih imunoglobulina - s odgovarajućim infekcijama (s terapijskim ili preventivnim svrhom).

Citokini i preparati zasnovani na njima

Regulacija razvoja imunološkog odgovora provode citokini - složen kompleks endogenih imunoregulacijskih molekulakoja su osnova za stvaranje velike grupe i prirodnih i rekombinantnih imunomodulacijskih lijekova.

Interferoni (IFN):

1. PrirodnoIFN (1 generacija):

Alpha Niferons: Ljudska leukocitarija IFN i drugi.

Betaferoni: Ljudski fibroblastični IFN, itd.

2. Recombonnate IFN (2 generacija):

a) Kratka akcija:

IFN A2A: Refaferon, Viferon itd.

IFN A2B: Intron-a

IFN β: avonex i drugi.

b) produžena akcija (Pagilirano IFN): Paginterferon (IFN A2B + polietilen glikol), itd.

Glavni fokus efekata lijekova IFN - T-limfociti (prirodni ubici i citotoksični T-limfociti).

Prirodni interferoni dobivaju se u kulturi ćelija donatorskih leukocita u krvi (u kulturi limfoblastoida i drugih ćelija) pod utjecajem induktora virusa.

Rekombinantni interferoni dobivaju genetski inženjering metoda - uzgajajući bakterijske sojeve koji se sadrže u njihovom genetskom aparatu ugrađeni rekombinantni plazmid gena ljudskog interferona.

Interferoni imaju antivirusni, antitumor i imunomodulacijski učinak.

Kako su antivirusni agensi preparati najučinkovitije u liječenju herpetičkih bolesti očnih očnih bolesti (lokalno u obliku kapljica, subconmentunctive), jednostavnosti s lokalizacijom na koži, sluzokom membranama i genitalijama (lokalno u obliku masti na hidrogelu - usađen), akutni i hronični virusni hepatitis B i C (parenteralno, rektivno u supozitorijima), u liječenju i prevenciji gripa i ARVI (intranazalno u obliku kapi). U HIV infekciji, pripreme rekombinantnog interferona normaliziraju imunološke parametre, smanjuju oštrinu tijek bolesti u više od 50% slučajeva, uzrokuju smanjenje nivoa viremije i sadržaj serumskih markera bolesti. AIDS se vrši kombinirana terapija sa azidotimidin.

Entitumorski učinak preparata interferona povezan je s antiprolas-faratskim učinkom i stimulacijom prirodne aktivnosti ubojice. Kao agenti protiv antitumorskih agenata, IFN-Alpha 2A koriste se IFN-Alpha-2B, IFN-Alpha-N1, IFN-beta se koriste.

IFN BETA-LB koristi se kao imunomodulator s više sklerozom.

Droga interferona uzrokuju slično nuspojave. Karakteristično - uticaj na sindrom; Promjene iz CNS-a: vrtoglavica, kršenje vida, zbrke, depresije, nesanice, Parrestzia, tremor. Iz gastrointestinalnog trakta: gubitak apetita, mučnina; Iz kardiovaskularnog sistema mogući su simptomi zatajenja srca; iz mokraćnog sistema - proteinurija; Sa strane formiranja krvi - prolazna leukopenija. Takođe se može iscrpiti, svrbež, alopecija, privremena impotencija, krvarenje nosa.

Induktorski interferon (Interferonogens):

1. Sintetički - Cycoferon, Tiloron, Halfd itd.

2. Prirodno - Podosti i drugi.

Induktori interferona su pripreme koji poboljšavaju sintezu endogenog interferona. Ovi lijekovi imaju niz prednosti u odnosu na rekombinantne interferone. Nemaju antigena aktivnost. Stimulirana sinteza endogenog interferona ne uzrokuje hipertentra.

Tilororon(Amixin) odnosi se na sintetičke spojeve male molekularne težine, je oralni induktori interferon. Ima širok spektar antivirusne aktivnosti protiv DNK i RNA virusa koji sadrže. Kao antivirusni i imunomodularni agent koristi se za prevenciju i liječenje gripe, Arvi, hepatitis A, za liječenje virusnog hepatitisa, herpes jednostavnog (uključujući urogenitalnog) i konjuktiva, sa složenom terapijom klamidijalnih infekcija, neurovirala i infektivne alergijske bolesti, za vrijeme sekundarnih imunodeficijencija. Lijek je dobro toleriran. Dispeptične pojave, kratkotrajna hladnjaka, povećavaju ukupni ton, koji ne zahtijeva otkazivanje lijeka.

Nalutan To je biosintetski kompleks poliyribonukleotida od poliadenilnih i poliuridilnih kiselina (u ekvimolarnim omjerima). Lijek ima izražen inhibicijski učinak na viruse jednostavnih herpesa. Koristi se u obliku kapi za oči i injekcije ispod konjuktivacije. Lijek je propisan odraslima za liječenje virusnih očnih bolesti: Herpetic i adenovirusni konjuktiviranje, keratokonjunovivotitis, keratis i kerato-chirosoclite (keratovets), iridocikli, horiretini, neuriti, neuriti, neuritivni nerv.

Nuspojave Rijetko se i manifestuju sa razvojem alergijskih reakcija: svrbež i osjećaj strane tijela u oku.

Cikloferon - Niska molekularna induktora težine interferon. Ima antivirusni, imunomodulacijsko i protiv upalnog efekta. Cycloferon je efikasan za viruse krpelji prenošenja encefalitisa, herpesa, citomegalovirusa, HIV-a itd. Ima hilakski efekat. Efikasan sa sistemskim bolestima vezivnog tkiva. Instalirana radio zaštita i protuupalni učinak lijeka.

Arbidolpropisano iznutra za prevenciju i liječenje gripe i drugih ARVI, kao i na herpetskim bolestima.

Interleukins:

rekombinantna il-2 (Aldesleikin, Proleikin, Roncolekin ) , rekombinantna il-1bet ( betalekin.).

Za citokine pripreme prirodnog porijekla sadrže dovoljno velik set citokina upale i prve faze imunološkog odgovora, okarakterizira se višestruki učinak na ljudsko tijelo. Ovi lijekovi djeluju na ćelije koje su uključene u upale, regeneraciju i imunološke procese.

Aldeslakin - Rekombinantni analog IL-2. Ima imunomodulacijski i antitumorski efekat. Aktivira imunitet ćelije. Pojačava širenje T-limfocita i populacije ćelije zavisnih za IL-2. Povećava citotoksičnost limfocita i ćelija - ubica, koji prepoznaju i uništavaju tumorske stanice. Poboljšava proizvode Gamma Interferon, FNF, IL-1. Koristi se za rak bubrega.

Betalekin - Rekombinantna ljudska IL-1 beta. Stimulira leukopoee i imunološku zaštitu. Injektiramo se ispod kože ili intravenski s gnojnim procesima s imunodeficijencijom, za vrijeme leukopenije kao rezultat hemoterapije, za vrijeme tumora.

Roncolekin- Rekombinantni interleukin-2 lijek se primjenjuje intravenski za vrijeme sepse s imunodeficijencijom, kao i sa rakom bubrega.

Kolontesivni faktori:

MrRagragragras. (Lekukoxa) je rekombinantna lijeka ljudskog granulocitarskog-makrofagealnog kolonimulirajućeg faktora. Stimulira Leukeopoese, ima imunotropnu aktivnost. Poboljšava širenje i diferencijaciju prekursora, povećava sadržaj zrelih ćelija u perifernom krvlju, rastu granulocita, monocita, makrofaga. Povećava funkcionalnu aktivnost zrelih neutrofila, poboljšava fagocitozu i oksidativni metabolizam, pružajući mehanizme fagocitoze, povećava citotoksičnost za maligne stanice.

Philgrastim (Neapogen) je rekombinantna lijeka ljudskog granulocita kolonimulirajućeg faktora. Philgrantim regulira proizvode neutrofila i njihov protok u krv koštana srž.

Lenograstim - rekombinantni lijek ljudskog granulocita kolonistimulirajućeg faktora. To je vrlo pročišćeni protein. To je imunomodulator i leukeopoetski stimulator.

Sintetički imunostimulansi: Levamizol, izoproza \u200b\u200bpolioksida, galavit.

Levamizol(Decaris), derivati \u200b\u200bimidazola, koriste se kao imunostimulator, kao i kao anti-zhilantiv lijek za vrijeme Ascariasis. Imunostimulirajuća svojstva Levamizola povezana su s porastom aktivnosti makrofaga i T-limfocita.

Levamizol je propisan iznutra s ponavljajućih herpetskih infekcija, hroničnim virusnim hepatitisom, autoimunim bolestima (reumatoidni artritis, sistemski crveni lupus, kruna). Lijek se koristi i u tumorima velikog crijeva nakon hirurškog, zračenja ili terapije lijekovima tumora.

Izoproza- Lijek koji sadrži inozin. Stimulira aktivnost makrofaga, proizvoda Interleukina, širenje T-limfocita.

Propisano iznutra virusne infekcije, hronične infekcije respiratornih i mokraćnih puteva, imunodeficijencije.

Polioksidonijum - sintetički polimerni spoj topljivog vodopunja. Lijek ima imunostimulirajuće i detoksikantne efekte, povećava imuni otpor tijela u odnosu na lokalne i generalizirane infekcije. Polioksidonij aktivira sve faktore prirodnog otpora: ćelije monocitijum-makrofage sustava, neutrofila i prirodnih ubica, povećavajući njihovu funkcionalnu aktivnost s početnim smanjenim pokazateljima.

Galavit - Derivat ftthadzide. Posebnost ovog lijeka leži u prisustvu ne samo imunomodulacije, već i izrečene protuupalnih svojstava.

Pripreme drugih farmakoloških razreda sa imunostimulirajućom aktivnošću

1. Adaptogeni i pripreme biljnog porijekla (fitopreparacije): Pripreme ehinaceje (imunala), Eleutherokoccus, Ginseng, Rhodiola Pink itd.

2. Vitamini: Akurbinska kiselina (vitamin C), tokoferol acetat (vitamin e), retinol acetat (vitamin a) (vidi odjeljak "Vitamini").

Pripravci Echinacea Posjeduju imunostimulirajula i protuupalna svojstva. Prilikom dodavanja, ovi lijekovi povećavaju fagocitnu aktivnost makrofaga i neutrofila, podstiču proizvode Interleukin-1, aktivnosti T-pomagača, diferencijaciju u limfocita.

Koriste se pripreme ehinacea za imunodeficijencije i hronične upalne bolesti. Posebno, imunalanpropisano unutar kapi za prevenciju i liječenje akutnih respiratornih infekcija, kao i zajedno sa antibakterijskim sredstvima u infekcijama kože, respiratorni i mokraćni trakt.

Opći principi primjene imunostimulansa kod pacijenata sa sekundarnom imunodeficijencijom

Najugroženija upotreba imunostimulatora predstavljena je imunodeficijenci koja se manifestuju povećanu zaraznu incidenciju. Glavna meta imunostimulirajućeg lijeka i dalje je sekundarna imunodeficijencija koja se očituje čestam ponavljajućom, teškim za liječenje zaraznih i upalnih bolesti svih lokalizacija i bilo koje etiologije. U srcu svakog hroničnog zaraznog inflamentalnog postupka postoje promjene u imunološkom sustavu, koji su jedan od uzroka upornosti ovog procesa.

· Imunomodulatori su propisan u slomnu terapiju istovremeno sa antibioticima, antifungalnim, anti-pondozojskim ili antiirusnim sredstvima.

· Prilikom obavljanja imunorelyabitation mjera, posebno sa nepotpunim oporavkom nakon što podvrgnute akutnu zaraznu bolest, imunomodulatori se mogu primijeniti kao monoterapija.

· Primjena imunomodulatora ubrzano na pozadinu imunološkog nadzora, koje bi trebalo provesti bez obzira na prisustvo ili nepostojanje izvora promjena u imunološkom sustavu.

· Imunomodulatori koji se ponašaju na fagocitni imunitet mogu se propisati pacijentima s identificiranim i neosjećenim umanjenjem imunološkog statusa, I.E. Osnova za njihovu primjenu je klinička slika.

Smanjenje bilo kojeg parametra imuniteta otkriveno u imunodiagnostičkoj studiji u praktično zdravoj osobi, ne Prije Osnova je za imenovanje imunomodulacijske terapije na njega.

Kontrolna pitanja:

1. Šta su imunostimulansi, koji su svjedočanstvo za imunoterapiju, koje vrste podijeljene imunodeficity stanja?

2. Klasifikacija imunomodulatora za preferencijalne izborne akcije?

3. Imunostimulansi mikrobnog porijekla i njihovih sintetičkih analoga, njihova farmakološka svojstva, indikacije za upotrebu, kontraindikacije, nuspojave?

4. Endogeni imunostimulansi i njihovi sintetički analozi, njihova farmakološka svojstva, indikacije za upotrebu, kontraindikacije, nuspojave?

5. Pripravci timičnih peptida i peptida koštane srži od svojih farmakoloških svojstava, naznake za upotrebu, kontraindikacije, nuspojave?

6. Imunoglobulin Pripreme i interferoni (IFNS), njihova farmakološka svojstva, naznake za upotrebu, kontraindikacije, nuspojave?

7. Interferon induktorske pripreme (interferonogeni), njihova farmakološka svojstva, indikacije za upotrebu, kontraindikacije, nuspojave?

8. Interleukins i faktori kolonija, njihova farmakološka svojstva, indikacije za upotrebu, kontraindikacije, nuspojave?

9. Sintetički imunostimulansi njihovih farmakoloških svojstava, naznake za upotrebu, kontraindikacije, nuspojave?

10. Pripreme drugih farmakoloških razreda sa imunostimulirajućom aktivnošću i općim principima za upotrebu imunostimulansa u pacijentima sa sekundarnim imunodeficijama?