Mogu li perisinusoidne ćelije biti regionalne matične ćelije jetre? Proučavanje uticaja ito ćelija jetre na matične ćelije Stelatne ćelije

Geni i ćelije: svezak V, br. 1, 2010, str.: 33-40

Autori

Gumerova A.A., Kiyasov A.P.

Regenerativna medicina je jedno od najbrže razvijajućih i najperspektivnijih područja medicine, koje se temelji na fundamentalno novom pristupu obnavljanju oštećenog organa stimulacijom i (ili) upotrebom za ubrzavanje regeneracije matičnih (progenitorskih) stanica. Da biste ovaj pristup implementirali u praksu, morate znati šta su matične ćelije, a posebno regionalne matične ćelije, kakav je njihov fenotip i moć. Za brojna tkiva i organe, poput epiderme i skeletnih mišića, matične ćelije su već identificirane i njihove niše su opisane. Međutim, jetra, organ čije su regenerativne sposobnosti poznate od davnina, još nije otkrila svoju glavnu tajnu – misteriju matične ćelije. U ovom pregledu, na osnovu naših i objavljenih podataka, razmatramo postavljenu hipotezu da perisinusoidne zvjezdane stanice mogu preuzeti ulogu matične stanice jetre.

Perisinusoidne ćelije jetre (Ito ćelije, zvezdaste ćelije, lipociti, ćelije koje skladište masnoće, ćelije koje skladište vitamin A) su jedna od najmisterioznijih vrsta ćelija jetre. Povijest proučavanja ovih stanica ima više od 130 godina, a još uvijek postoji mnogo više pitanja u vezi s njihovim fenotipom i funkcijama nego odgovora. Ćelije je 1876. opisao Kupffer, nazvao ih zvjezdanim ćelijama i nazvao ih makrofagima. Kasnije je ime Kupffer dato pravim sedentarnim makrofagima jetre.

Općenito je prihvaćeno da se Ito ćelije nalaze u Disseovom prostoru u direktnom kontaktu s hepatocitima, akumuliraju vitamin A i sposobne su proizvoditi makromolekule međustanične tvari, a također, s kontraktilnom aktivnošću, reguliraju protok krvi u sinusoidnim kapilarama poput pericita. Zlatni standard za identifikaciju Ito ćelija kod životinja je detekcija proteina intermedijarnih filamenata citoskeleta, karakterističnog za mišićno tkivo, desmin. Drugi prilično česti markeri ovih ćelija su markeri neuronske diferencijacije - protein glijalne fibrilarne kiseline (GFAP) i nestin.

Dugi niz godina Ito ćelije su razmatrane samo sa stanovišta njihovog učešća u nastanku fibroze i ciroze jetre. To je zbog činjenice da kada je jetra oštećena, ove stanice se uvijek aktiviraju, što se sastoji u povećanju ekspresije desmina, proliferaciji i transdiferencijaciji u ćelije poput miofibroblasta (ćelijska transformacija nalik miofibroblastima), koji eksprimiraju -aktin glatkih mišića. (-SMA) i sintetiziraju značajne količine međustanične supstance, posebno kolagena tipa I. Upravo aktivnost tako aktiviranih Ito ćelija dovodi, prema mnogim istraživačima, do razvoja fibroze i ciroze jetre.

S druge strane, postepeno se gomilaju činjenice koje omogućavaju da se Ito ćelije sagledaju sa potpuno neočekivanih pozicija, naime, kao najvažnije komponente mikrookruženja za razvoj hepatocita, holangiocita i krvnih zrnaca u jetrenoj fazi hematopoeze, i, štoviše, kao moguće matične (progenitorske) ćelije jetre. Svrha ovog pregleda je analiza aktuelnih podataka i stavova o prirodi i funkcionalnom značaju ovih ćelija uz procjenu njihove moguće pripadnosti populaciji matičnih (progenitornih) ćelija jetre.

Ito ćelije su važan učesnik u obnavljanju parenhima tokom regeneracije jetre zbog makromolekula ekstracelularnog matriksa koje one proizvode i njegovog remodeliranja, kao i proizvodnje faktora rasta. Prve sumnje u valjanost ustaljene teorije, koja smatra da su Ito ćelije isključivo glavni krivci fibroze jetre, pojavile su se kada je ustanovljeno da te stanice proizvode značajan broj morfogenih citokina. Među njima značajnu grupu čine citokini, koji su potencijalni mitogeni za hepatocite.

Najvažniji u ovoj grupi je faktor rasta hepatocita - mitogen hepatocita, koji je neophodan za proliferaciju, preživljavanje i pokretljivost ćelija (poznat je i kao faktor raspršivanja. Defekt ovog faktora rasta i (ili) njegovog C-met receptora kod miševa dovodi do hipoplazije jetre i uništavanja njenog parenhima kao rezultat supresije proliferacije hepatoblasta, povećane apoptoze i nedovoljne stanične adhezije.

Pored faktora rasta hepatocita, Ito ćelije proizvode faktor matičnih ćelija. Ovo je pokazano na modelu regeneracije jetre nakon parcijalne hepatektomije i izlaganja 2-acetaminofluorenu. Također je utvrđeno da Ito stanice luče transformirajući faktor rasta - i epidermalni faktor rasta, koji igraju važnu ulogu kako u proliferaciji hepatocita tokom regeneracije, tako i stimulišu mitozu samih Ito ćelija. Proliferaciju hepatocita pokreću i mezenhimski morfogeni protein epimorfin eksprimiran Ito ćelijama, koji se u njima pojavljuje nakon parcijalne hepatektomije, i pleiotrofin.

Pored parakrinih mehanizama interakcije između hepatocita i Ito ćelija, ulogu igraju i direktni međućelijski kontakti ovih ćelija sa hepatocitima. Važnost međućelijskih kontakata između Ito ćelija i epitelnih progenitornih ćelija pokazala se in vitro, kada se kultivacija u mešovitoj kulturi pokazala efikasnijom za diferencijaciju potonjih u hepatocite koji proizvode albumin nego kultivisanje ćelija odvojenih membranom, kada su mogle da razmenjuju samo rastvorljivi faktori kroz kulturno okruženje. Izolirano iz fetalne jetre miševa nakon 13,5 dana. gestacije, mezenhimske ćelije sa fenotipom Thy-1 + / S049!± / vimentin + / desmin + / --GMA + nakon uspostavljanja direktnih međućelijskih kontakata stimulisale su diferencijaciju populacije primitivnih jetrenih endodermalnih ćelija - u hepatocite (sadrže glikogen, eksprimiraju m-RNA tirozin aminotransferaza i triptofosfat -ime). Populacija Thy-1 + / desmin + mezenhimskih ćelija nije eksprimirala markere hepatocita, endotela i Kupfferovih ćelija, i najvjerovatnije je bila predstavljena Ito ćelijama. Visoka gustoća desmin-pozitivnih Ito ćelija i njihova lokacija u bliskom kontaktu sa diferencirajućim hepatocitima zabilježeni su in vivo u prenatalnim jetri pacova i ljudi. Dakle, sve ove činjenice nam omogućavaju da zaključimo da je ovaj tip ćelije najvažnija komponenta mikrookruženja neophodna za normalan razvoj hepatocita u ontogenezi i njihovu obnovu u procesu reparativne regeneracije.

Poslednjih godina dobijeni su podaci koji ukazuju na značajan uticaj Ito ćelija na diferencijaciju hematopoetskih matičnih ćelija. Dakle, Ito ćelije proizvode eritropoetin i neurotrofin, koji utiču na diferencijaciju ne samo epitelnih ćelija jetre, već i hematopoetskih matičnih ćelija. Proučavanje fetalne hematopoeze kod pacova i ljudi pokazalo je da ove ćelije čine mikrookruženje otočića hematopoeze u jetri. Ito ćelije eksprimiraju adhezioni molekul vaskularnih ćelija-1 (VCAM-1), ključni molekul za održavanje adhezije hematopoetskih progenitora na stromalne ćelije koštane srži. Osim toga, eksprimiraju i stromalni faktor-1 - (Stromalni izvedeni faktor-1 -, SDF-1 -) - potencijalni hemoatraktant za hematopoetske matične stanice, stimulirajući njihovu migraciju na mjesto hematopoeze interakcijom sa specifičnim receptorom Cystein-X - Cystein receptor 4 (CXR4), kao i homeobox protein Hlx, u slučaju defekta kod kojeg je poremećen i razvoj same jetre i hematopoeza jetre. Najvjerovatnije je ekspresija VCAM-1 i SDF-1 a na Itoovim fetalnim stanicama okidač za privlačenje hematopoetskih progenitornih stanica u fetalnu jetru radi dalje diferencijacije. Retinoidi akumulirani u Ito ćelijama su takođe važan morfogenetski faktor za hematopoetske ćelije i epitel. Treba reći o uticaju Ito ćelija na mezenhimske matične ćelije. Ito ćelije, izolovane iz jetre štakora i potpuno aktivirane, moduliraju diferencijaciju mezenhimalnih matičnih ćelija (multipotentne mezenhimalne stromalne ćelije) koštane srži u ćelije kao što su hepatociti (akumuliraju glikogen i eksprimiraju tetazu i fosfoenolpiruvat karboksikinazu) nakon 2 nedelje. kokultivacija.

Dakle, akumulirane naučne činjenice nam omogućavaju da zaključimo da su Ito ćelije jedan od najvažnijih tipova ćelija potrebnih za razvoj i regeneraciju jetre. Upravo te ćelije stvaraju mikrookruženje kako za fetalnu hepatičnu hematopoezu, tako i za diferencijaciju hepatocita tokom prenatalnog razvoja, kao i za diferencijaciju epitelnih i mezenhimskih progenitor ćelija u hepatocite in vitro. Trenutno, ovi podaci nisu upitni i priznaju ih svi istraživači jetre. Šta je onda poslužilo kao polazna tačka za nastanak hipoteze iznesene u naslovu članka?

Prije svega, njegovu pojavu olakšala je identifikacija u jetri stanica koje istovremeno eksprimiraju i epitelne markere hepatocita i mezenhimske markere Ito stanica. Prvi rad u ovoj oblasti obavljen je u proučavanju prenatalne histo- i organogeneze jetre sisara. Upravo je razvojni proces ključni događaj, čije proučavanje omogućava da se u prirodnim uslovima prati dinamika primarnog formiranja konačnog fenotipa različitih ćelijskih tipova organa uz pomoć specifičnih markera. Trenutno je raspon takvih markera prilično širok. U radovima posvećenim proučavanju ove problematike korišćeni su različiti markeri mezenhimalnih i epitelnih ćelija, pojedinačne stanične populacije jetre, matične (uključujući hematopoetske) ćelije.

U sprovedenim istraživanjima utvrđeno je da su desmin-pozitivne Ito ćelije fetusa pacova prolazne 14-15 dana. gestacije izražavaju epitelne markere karakteristične za hepatoblaste, kao što su citokeratini 8 i 18. S druge strane, hepatoblasti u isto vrijeme razvoja izražavaju Ito desmin ćelijski marker. To je omogućilo da se napravi pretpostavka o postojanju u jetri tokom intrauterinog razvoja ćelija sa prelaznim fenotipom koji eksprimiraju i mezenhimalne i epitelne markere, te da se stoga razmotri mogućnost razvoja Ito ćelija i hepatocita iz jedne izvor i (ili) da se ove ćelije smatraju jednim te istim tipom ćelije u različitim fazama razvoja. Daljnje studije o proučavanju histogeneze, sprovedene na materijalu ljudske embrionalne jetre, pokazale su da u 4-8 sedmici. U utero razvoju ljudske jetre, Ito ćelije su eksprimirale citokeratine 18 i 19, što je potvrđeno dvostrukim imunohistohemijskim bojenjem, a slabo pozitivno bojenje na desmin je zabilježeno u hepatoblastima.

Međutim, u radu objavljenom 2000. godine, autori nisu uspjeli otkriti ekspresiju desmina u hepatoblastima u jetri fetusa miša, te E-kadherina i citokeratina u Ito stanicama. Autori su samo u malom broju slučajeva dobili pozitivno bojenje na citokeratine u Ito ćelijama, što su povezivali sa nespecifičnom unakrsnom reaktivnošću primarnih antitijela. Izbor ovih antitela izaziva izvesnu nedoumicu – u radu su korišćena antitela na pileći desmin i goveđi citokeratine 8 i 18.

Pored desmina i citokeratina, zajednički marker za Ito ćelije i fetalne hepatoblaste miša i pacova je još jedan mezenhimski marker - adhezioni molekul vaskularnih ćelija VCAM-1. VCAM-1 je jedinstveni površinski marker koji razlikuje Ito ćelije od miofibroblasta u jetri odraslih pacova, a prisutan je i na nekoliko drugih ćelija jetre mezenhimskog porekla, kao što su endoteliociti ili miogene ćelije.

Još jedan dokaz u prilog hipotezi koja se razmatra je mogućnost mezenhimsko-epitelne transdiferencijacije (konverzije) Ito ćelija izolovanih iz jetre odraslih pacova. Treba napomenuti da se u literaturi uglavnom govori o epitelno-mezenhimskoj, a ne o mezenhimsko-epitelnoj transdiferencijaciji, iako su oba smjera prepoznata kao moguća, a termin "epitelno-mezenhimalna transdiferencijacija" se često koristi za označavanje transdiferencijacije u bilo kojem od smjerova. Nakon analize profila ekspresije mRNA i odgovarajućih proteina u Ito ćelijama izolovanim iz jetre odraslih pacova nakon izlaganja ugljen-tetrahloridu (CTC), autori su u njima pronašli i mezenhimalne i epitelne markere. Među mezenhimskim markerima identifikovani su nestin, --GMA, matriksna metaloproteinaza-2 (Matrix Metalloproteinase-2, MMP-2), a među epitelnim markerima - mišićna piruvat kinaza (MPK), karakteristična za ovalne ćelije, citokeratin 19, a -FP, E-kadherin, kao i hepatocitni nuklearni faktor 4-(HNF-4-) transkripcijski faktor, specifičan za ćelije koje su predodređene da postanu hepatociti. Utvrđeno je i da su u primarnoj kulturi humanih epitelnih hepatičnih progenitor ćelija eksprimirani mRNA markeri Ito nestin ćelija, GFAP - epitelni progenitori koeksprimiraju i epitelne i mezenhimske markere. Mogućnost mezenhimsko-epitelne transdiferencijacije potvrđuje pojava u Ito ćelijama integrin-vezane kinaze (ILK), enzima neophodnog za takvu transdiferencijaciju.

Mezenhimsko-epitelna transdiferencijacija je također otkrivena u našim in vitro eksperimentima, gdje je uzet originalan pristup kultiviranju čiste populacije Ito ćelija izolovanih iz jetre štakora dok se ne formira gusti monosloj ćelija. Nakon toga, stanice su prestale da eksprimiraju dezmin i druge mezenhimske markere, poprimile su morfologiju epitelnih stanica i počele eksprimirati markere karakteristične za hepatocite, posebno citokeratine 8 i 18. Slični rezultati dobijeni su i tokom organotipske kultivacije embrionalne jetre pacova.

Tokom prošle godine objavljena su dva članka u kojima se Ito ćelije smatraju podvrstom ovalnih ćelija, odnosno njihovim derivatima. Ovalne ćelije su male ovalne ćelije sa uskim rubom citoplazme koje se pojavljuju u jetri u nekim modelima toksičnog oštećenja jetre i trenutno se smatraju biopotentnim progenitorskim ćelijama sposobnim da se diferenciraju i u hepatocite i u holangiocite. Polazeći od činjenice da se geni koje eksprimiraju izolovane Ito ćelije poklapaju sa genima koje eksprimiraju ovalne ćelije, a pod određenim uslovima uzgoja Ito ćelija pojavljuju se hepatociti i ćelije žučnih kanala, autori su testirali hipotezu prema kojoj Ito ćelije su vrsta ovalnih stanica koje su sposobne stvarati hepatocite za regeneraciju oštećene jetre. Transgenični GFAP-Cre / GFP (Green fluorescent protein) miševi su hranjeni ishranom sa nedostatkom metionin-holina / etioninom obogaćenom kako bi se aktivirale Ito ćelije i ovalne ćelije. Itove ćelije u mirovanju imale su GFAP + fenotip. Nakon aktivacije Ito ćelija oštećenjem ili kultivacijom, ekspresija GFAP-a u njima se smanjila i počele su da eksprimiraju markere ovalnih i mezenhimskih ćelija. Ovalne ćelije su nestale kada su se pojavili GFP + hepatociti, počevši da eksprimiraju albumin i na kraju zamenjujući velike površine jetrenog parenhima. Na osnovu dobijenih podataka, autori su sugerisali da su Ito ćelije podtip ovalnih ćelija koje se diferenciraju u hepatocite kroz "mezenhimsku" fazu.

U eksperimentima izvedenim na istom modelu aktivacije ovalnih ćelija, kada su potonje izolovane iz jetre štakora, ustanovljeno je da ovalne ćelije in vitro eksprimiraju ne samo svoje tradicionalne markere 0V-6, BD-1/BD-2 i M2PK i markere stabla ekstracelularnog matriksa, uključujući kolagene, matriksne metaloproteinaze i tkivne inhibitore metaloproteinaza - markere Ito ćelija. Nakon izlaganja TGF-pl ćelijama, pored supresije rasta i morfoloških promena, dolazi do povećanja ekspresije ovih gena, kao i gena desmin i GFAP, pojava ekspresije transkripcionog faktora Puževa odgovornog za epitelno-mezenhimalne transdiferencijacije, kao i prestanak ekspresije E-kadherina, što ukazuje na mogućnost "obrnute" transdiferencijacije ovalnih ćelija u Ito ćelije.

Budući da se ovalne ćelije tradicionalno smatraju bipotentnim prekursorima i hepatocita i holangiocita, pokušava se utvrditi mogućnost postojanja prijelaznih oblika između epitelnih ćelija intrahepatičnih žučnih kanala i Ito ćelija. Tako se pokazalo da je u normalnoj i oštećenoj jetri malih struktura tipa kanala obojenih pozitivno na Ito ćelijski marker - GMA, međutim, na fotografijama predstavljenim u članku, koje odražavaju rezultate imunofluorescentnog bojenja, moguće je odrediti šta ove - GMA + strukture kanala - žučni kanali ili krvni sudovi - nije moguće. Međutim, objavljeni su i drugi rezultati koji ukazuju na ekspresiju markera Ito ćelija u holangiocitima. U već pomenutom radu L. Yanga prikazana je ekspresija Ito ćelijskog markera GFAP ćelijama žučnih kanala. Protein srednjeg filamenta citoskeleta cinemin, koji je prisutan u normalnoj jetri u Ito stanicama i vaskularnim stanicama, pojavljuje se u stanicama kanala uključenih u razvoj dukularne reakcije; takođe je izražen u ćelijama holangi-okarcinoma. Dakle, ako postoji mnogo različitih dokaza o mogućnosti međusobne transdiferencijacije Ito ćelija i hepatocita, onda su kod kolangiocita takva zapažanja još rijetka i ne uvijek jednoznačna.

Sumirajući, možemo reći da obrasci ekspresije mezenhimalnih i epitelnih markera, kako tokom histo- i organogeneze jetre, tako iu različitim eksperimentalnim uslovima kako in vivo tako i in vitro, ukazuju na mogućnost i mezenhimsko-epitelnih i epitelno-mezenhimalnih minimalnih tranzicija. između Ito ćelija / ovalnih ćelija / hepatocita, te stoga omogućavaju razmatranje Ito ćelija kao jednog od izvora razvoja hepatocita. Ove činjenice nesumnjivo ukazuju na neraskidivu vezu između ovih tipova ćelija, a takođe ukazuju na značajnu fenotipsku plastičnost Ito ćelija. O fenomenalnoj plastičnosti ovih ćelija svjedoči i njihova ekspresija niza neuralnih proteina, kao što su već spomenuti GFAP, nestin, neurotrofini i njihovi receptori, molekula adhezije neuronskih stanica (N-CAM), sinaptofizin, faktor rasta živaca (Neural faktor rasta, NGF), neurotrofni faktor iz mozga (BDNF), na osnovu kojeg brojni autori raspravljaju o mogućnosti razvoja Ito ćelija iz neuralnog grebena. Međutim, u posljednjoj deceniji veliku pažnju istraživača je privukla još jedna verzija – naime, mogućnost razvoja hepatocita i Ito stanica iz hematopoetskih i mezenhimalnih matičnih stanica.

Prvi rad u kojem je takva mogućnost dokazana objavio je V.E. Petersen et al., koji su pokazali da se hepatociti mogu razviti iz hematopoetskih matičnih stanica. Kasnije je ova činjenica više puta potvrđivana u radovima drugih naučnika, a nešto kasnije pokazala se mogućnost diferencijacije u hepatocite za mezenhimske matične ćelije. Kako se to događa - fuzijom ćelija donora sa ćelijama jetre primaoca, ili njihovom transdiferencijacijom - još uvijek nije jasno. Međutim, također smo otkrili da se hematopoetske matične ćelije ljudske krvi iz pupčane vrpce, kada se transplantiraju u slezenu štakora koji su podvrgnuti djelomičnoj hepatektomiji, koloniziraju u jetri i mogu se diferencirati u hepatocite i sinusoidne ćelije jetre, o čemu svjedoči prisustvo markera ljudskih ćelija u ovim tipovima ćelija. Osim toga, po prvi put smo pokazali da preliminarna genetska modifikacija krvnih stanica pupčane vrpce ne utiče značajno na njihovu distribuciju i mogućnost diferencijacije u jetri primaoca nakon transplantacije. Što se tiče vjerojatnosti razvoja hepatocita iz hematopoetskih matičnih stanica tijekom prenatalne histogeneze, iako se ta mogućnost ne može u potpunosti isključiti, ona se ipak čini malo vjerojatnom, budući da se morfologija, lokalizacija i fenotip ovih stanica značajno razlikuju od onih za ćelije jetre. Očigledno, čak i ako takav put postoji, on ne igra značajnu ulogu u formiranju epitelnih i sinusoidnih ćelija tokom ontogeneze. Rezultati nedavnih studija, provedenih i in vivo i in vitro, doveli su u sumnju dobro utvrđenu teoriju o razvoju hepatocita samo iz endodermalnog epitela prednjeg crijeva, u vezi s čime se prirodno pojavila pretpostavka da je regionalno stablo ćelija jetre može se naći među njenim mezenhimskim ćelijama. Da li bi ove ćelije mogle biti Ito ćelije?

S obzirom na jedinstvena svojstva ovih ćelija, njihovu fenomenalnu plastičnost i postojanje ćelija sa prelaznim fenotipom od Ito ćelija do hepatocita, pretpostavljamo da su ove ćelije glavni kandidati za ovu ulogu. Dodatni argument u prilog ovoj mogućnosti je da se ove ćelije, kao i hepatociti, mogu formirati iz hematopoetskih matičnih ćelija, i one su jedine sinusoidne ćelije jetre koje su sposobne da eksprimiraju markere matičnih (progenitornih) ćelija.

2004. godine otkriveno je da se Ito ćelije mogu razviti i iz hematopoetskih matičnih ćelija. Nakon transplantacije ćelija koštane srži od GFP miševa, GFP + ćelije su se pojavile u jetri miševa primaoca, eksprimirajući Ito ćelijski marker GFAP, a procesi ovih ćelija su prodirali između hepatocita. Ako je jetra primaoca bila oštećena CCU, transplantirane ćelije su takođe eksprimirale - Itove ćelije slične blastu. Kada je frakcija neparenhimskih ćelija izolovana iz jetre miševa primaoca, GFP + ćelije sa lipidnim kapljicama su činile 33,4 + 2,3% izolovanih ćelija; izrazili su desmin i GFAP, a nakon 7 dana. uzgoj

S druge strane, transplantacija ćelija koštane srži dovodi do formiranja ne samo Ito ćelija, već i gena za kolagen tipa I, na osnovu čega je zaključeno da ovakva transplantacija pospješuje razvoj fibroze. Međutim, postoje studije koje su pokazale smanjenje fibroze jetre zbog migracije transplantiranih ćelija u fibrozne septe i proizvodnje matriks metaloproteinaze-9 (Matrix Metalloproteinase-9, MMP-9) od strane ovih ćelija, koja je jedna od najvažnije karakteristike Ito ćelija. Naši preliminarni podaci su također pokazali smanjenje broja miofibroblasta i smanjenje nivoa fibroze nakon autotransplantacije frakcije mononuklearnih ćelija periferne krvi kod bolesnika s kroničnim hepatitisom s teškom fibrozom jetre. Osim toga, kao rezultat transplantacije hematopoetskih matičnih stanica, u jetri primatelja mogu se pojaviti drugi tipovi stanica sposobne za proizvodnju ekstracelularnog matriksa. Dakle, kod oštećenja jetre izazvanih ligacijom žučnog kanala, presađene ćelije diferenciranih fibrocita koji eksprimiraju kolagen, a samo kada se uzgajaju u prisustvu TGF-pl, one su diferencirani miofibroblasti, potencijalno promovišući fibrozu. Stoga su autori povezivali opasnost od fibroze jetre nakon transplantacije stanica koštane srži ne s Ito stanicama, već s “jedinstvenom populacijom fibrocita”. Zbog nekonzistentnosti dobijenih podataka, rasprava se razvila i o još jednom pitanju - da li će Ito ćelije, koje su nastale kao rezultat diferencijacije transplantiranih hematopoetskih matičnih ćelija, doprinijeti razvoju fibroze, ili će omogućiti potpunu regeneraciju tkiva jetre i smanjenje fibroze. Posljednjih godina postalo je očito (uključujući i iz gornjih podataka) da porijeklo miofibroblasta u jetri može biti različito - od Ito ćelija, od fibroblasta portalnih trakta, pa čak i od hepatocita. Također je utvrđeno da se miofibroblasti različitog porijekla razlikuju po brojnim svojstvima. Tako se aktivirane Ito ćelije razlikuju od miofibroblasta portalnih trakta po sadržaju vitamina, kontraktilnoj aktivnosti, odgovoru na citokine, posebno TGF-p, i sposobnosti spontane apoptoze. Pored toga, ove populacije ćelija se razlikuju i, ako je moguće, eksprimiraju adhezioni molekul vaskularnih ćelija VCAM-1, koji je prisutan na Ito ćelijama, a odsutan na miofibroblastima. Takođe treba reći da pored proizvodnje proteina ekstracelularnog matriksa, aktivirane Ito ćelije proizvode i matriks metaloproteinaze koje uništavaju ovaj matriks. Dakle, uloga Ito ćelija, uključujući i one formirane iz hematopoetskih matičnih ćelija, u razvoju fibroze daleko je od toga da bude tako jednoznačna kao što se ranije mislilo. Očigledno, oni ne pospješuju toliko fibrozu koliko remodeliraju ekstracelularni matriks u procesu oporavka jetre nakon oštećenja, stvarajući na taj način okvir vezivnog tkiva za regeneraciju parenhimskih stanica jetre.

normalna i oštećena jetra pacova. Ito ćelije štakora takođe eksprimiraju još jedan marker matičnih (progenitornih) ćelija - CD133, i pokazuju svojstva progenitorskih ćelija sposobne da se, u zavisnosti od uslova, razlikuju u različitim - 2) kada se dodaju citokini koji olakšavaju diferencijaciju u endotelne ćelije, formiraju razgranate tubularne strukture sa indukcija ekspresije markera endotelnih ćelija - endotelne NO sintaze i vaskularnog endotelnog kadherina; 3) kada se koriste citokini koji potiču diferencijaciju matičnih ćelija u hepatocite - u zaobljene ćelije koje eksprimiraju hepatocitne markere - FP i albumin. Takođe, Ito ćelije pacova izražavaju 0ct4, što je karakteristično za pluripotentne matične ćelije. Zanimljivo je da se samo dio populacije Ito ćelija može izolovati magnetnim sorterom koristeći antitijela na CD133; međutim, nakon standardne (pronaze/kolagenaze) izolacije, sve ćelije vezane za plastiku eksprimiraju CD133 i 0kt4. Drugi marker za progenitorne ćelije, Bcl-2, eksprimiraju desmin + ćelije tokom prenatalnog razvoja ljudske jetre.

Tako su različiti istraživači pokazali mogućnost ekspresije Ito ćelijama određenih markera matičnih (progenitornih) ćelija. Štoviše, nedavno je objavljen članak u kojem je po prvi put iznesena hipoteza da Disseov prostor, formiran od proteina bazalne membrane, endotelnih stanica i hepatocita, u kojem se nalaze Ito stanice, može predstavljati mikrookruženje za potonje. , igrajući ulogu "niše" matičnih ćelija. O tome svjedoči nekoliko karakteristika karakterističnih za nišu matičnih ćelija i identifikovanih u komponentama mikrookruženja Ito ćelija. Dakle, ćelije koje se nalaze u neposrednoj blizini matične ćelije moraju da razvijaju rastvorljive faktore, kao i da vrše direktne interakcije koje održavaju matičnu ćeliju u nediferenciranom stanju i zadržavaju je u niši, često smeštenoj na bazalnoj membrani. Zaista, endotelne ćelije sinusoidnih kapilara jetre sintetišu rastvorljivi SDF-1, koji se specifično vezuje za Ito ćelijski receptor CXR4 i stimuliše migraciju ovih ćelija in vitro. Ova interakcija igra ključnu ulogu u migraciji hematopoetskih matičnih ćelija do njihove konačne niše u koštanoj srži tokom ontogeneze i njihovog stalnog boravka u njoj, kao i u njihovoj mobilizaciji u perifernu krv. Logično je pretpostaviti da takva interakcija može igrati sličnu ulogu u jetri, zadržavajući Ito ćelije u Disseovom prostoru. Tokom ranih faza regeneracije jetre, povećanje ekspresije SDF-1 može također promovirati regrutaciju dodatnih odjeljaka matičnih ćelija tijela. Inervacija niša ćelija treba da uključi simpatički nervni sistem, koji je uključen u regulaciju regrutacije hematopoetskih matičnih ćelija. Noradrenergički signali iz simpatičkog nervnog sistema igraju ključnu ulogu u GCSF-u (mobilizacija hematopoetskih matičnih ćelija iz koštane srži izazvana faktorom stimulacije kolonije granulocita. Lokacija nervnih završetaka u neposrednoj blizini Ito ćelija je potvrđena u nekoliko studija. Takođe je utvrđeno da kao odgovor na simpatičku stimulaciju Ito ćelije luče prostaglandine F2a i D, koji aktiviraju glikogenolizu u obližnjim parenhimskim ćelijama.Ove činjenice ukazuju na to da simpatički nervni sistem može uticati na nišu Ito ćelija. Druga funkcija stabljike ćelijska niša je održavanje "sporog" ćelijskog ciklusa i nediferenciranog stanja matičnih ćelija. Održavanje nediferenciranog stanja Ito ćelija u in vitro uslovima olakšavaju parenhimske ćelije jetre – tokom kultivacije ove dve populacije ćelija odvojenih membranom, u Ito ćelijama se zadržava ekspresija markera matičnih ćelija CD133 i 0kt4, dok se u u odsustvu hepatocita, Ito ćelije dobijaju fenotip miofibroblasta i gube markere matičnih ćelija. Dakle, ekspresija markera matičnih ćelija je nesumnjivo znak uspavanih Ito ćelija. Takođe je utvrđeno da se dejstvo parenhimskih ćelija na Ito ćelije može zasnivati ​​na interakciji parakrinih faktora Wnt i Jag1 koje sintetišu hepatociti sa odgovarajućim receptorima (Myc, Notchl) na površini Ito ćelija. Wnt/b-katenin i Notch signalni putevi podržavaju sposobnost matičnih ćelija da se samoobnavljaju sporom simetričnom podjelom bez naknadne diferencijacije. Druga važna komponenta niše su proteini bazalne membrane, laminin i kolagen IV, koji podržavaju stanje mirovanja Ito ćelija i potiskuju njihovu diferencijaciju. Slična situacija se događa u mišićnim vlaknima i uvijenim sjemenim tubulima, gdje su satelitske stanice (mišićne matične stanice) i nediferencirane spermatogonije u bliskom kontaktu s bazalnom membranom mišićnog vlakna odnosno "spermatogenim epitelom". Očigledno je da interakcija matičnih ćelija sa proteinima ekstracelularnog matriksa inhibira početak njihove konačne diferencijacije. Dobijeni podaci nam, dakle, omogućavaju da Ito ćelije posmatramo kao matične ćelije, za koje Disseov prostor može poslužiti kao niša.

Naši podaci o matičnoj potenciji Ito stanica i o mogućnosti formiranja hepatocita iz ovih stanica potvrđeni su u eksperimentima proučavanja regeneracije jetre in vivo korištenjem modela djelomične hepatektomije i toksičnog oštećenja jetre olovnim nitratom. Tradicionalno se vjeruje da u ovim modelima regeneracije jetre ne dolazi do aktivacije stabljike i da nema ovalnih stanica. Uspjeli smo, međutim, utvrditi da je u oba slučaja moguće uočiti ne samo aktivaciju Ito stanica, već i ekspresiju u njima drugog markera matičnih stanica, odnosno receptora za faktor C-kit matičnih stanica. . Budući da je ekspresija C-kit-a zabilježena i u pojedinačnim hepatocitima (kod njih je bila manje intenzivna), uglavnom smještenim u kontaktu sa C-kit-pozitivnim Ito ćelijama, može se pretpostaviti da su ovi hepatociti diferencirani od C-kit + Ito ćelije. Očigledno, ovaj tip ćelije ne samo da stvara uslove za obnovu populacije hepatocita, već zauzima i nišu regionalnih matičnih ćelija jetre.

Tako je sada utvrđeno da Ito ćelije eksprimiraju najmanje pet markera matičnih ćelija u različitim uslovima razvoja, regeneracije i kultivacije. Svi do sada prikupljeni podaci sugeriraju da Ito stanice mogu igrati ulogu regionalnih matičnih stanica jetre, kao jedan od izvora razvoja hepatocita (a možda i holangiocita), a ujedno su i najvažnija komponenta mikrookruženja za morfogenezu jetre i hepatična hematopoeza. Ipak, čini se da je preuranjeno donositi nedvosmislene zaključke o pripadnosti ovih ćelija populaciji matičnih (progenitornih) ćelija jetre. Međutim, postoji očigledna potreba za novim istraživanjima u ovom pravcu, koja će, ako budu uspješna, otvoriti izglede za razvoj učinkovitih metoda liječenja bolesti jetre zasnovanih na transplantaciji matičnih stanica.

U ovom slučaju, ove ćelije se umnožavaju pod dejstvom citokina, faktora rasta i hemokina (proinflamatornih citokina) koje proizvodi oštećena jetra. Hronična aktivacija zvjezdastih stanica kao odgovor na oksidativni stres uzrokovan replikacijom virusa HBV i HCV može doprinijeti fibrogenezi i povećanoj proliferaciji hepatocita kronično inficiranih HBV i HCV.

Dakle, zvezdaste ćelije su uključene u regulaciju rasta, diferencijacije i cirkulacije hepatocita, što, zajedno sa aktivacijom MAP kinaza, može dovesti do raka jetre [Block, 2003].

Linkovi:

Nasumično crtanje

Pažnja! Informacije na sajtu

namenjen isključivo edukativnom

Proučavanje uticaja Ito ćelija jetre na matične ćelije

Međućelijska komunikacija se može ostvariti parakrinom sekrecijom i direktnim kontaktima između stanica. Poznato je da perisinusoidne ćelije jetre (HPC) uspostavljaju regionalnu nišu matičnih ćelija i određuju njihovu diferencijaciju. U isto vrijeme HPC ostaju slabo okarakterizirani na molekularnom i ćelijskom nivou.

Shafigullina A.K., Trondin A.A., Shaikhutdinova A.R., Kaligin M.S., Gazizov I.M., Rizvanov A.A., Gumerova A.A., Kiyasov A.P.

GOU VPO "Kazanski državni medicinski univerzitet Federalne agencije za zdravstvenu zaštitu i društveni razvoj"

Eksperimentalna procjena osteoindukcije rekombinantnog koštanog morfogenetskog proteina

Ćelijske tehnologije u liječenju degenerativno-distrofičnih bolesti kostiju i zglobova

Itov kavez

miran i aktiviran. Aktivirane Ito ćelije

mirno stanje

perisinusoidalni(subendotelni) i interhepatocelularni... Prvi napuštaju tijelo ćelije i prostiru se duž površine sinusne kapilare, prekrivajući je tankim prstastim granama. Perisinusoidni izrasline prekrivene su kratkim resicama i imaju karakteristične duge mikro-izbacivanja koja se protežu i dalje duž površine kapilarne endotelne cijevi. Interhepatocelularne izrasline, nakon što su prevladale ploču hepatocita i dosegnule susjednu sinusoidu, podijeljene su u nekoliko perisinusoidnih izraslina. Dakle, Itova ćelija u prosjeku pokriva nešto više od dvije susjedne sinusoide.

aktivirano stanje

Ćelije jetre

Ljudska jetra se sastoji od ćelija, kao i svako organsko tkivo. Priroda je uređena tako da ovaj organ obavlja najvažnije funkcije, čisti organizam, proizvodi žuč, akumulira i skladišti glikogen, sintetizira proteine ​​plazme, upravlja metaboličkim procesima i učestvuje u normalizaciji količine kolesterola i drugih komponenti neophodnih za rad. vitalnu aktivnost organizma.

Da bi ispunile svoju svrhu, ćelije jetre moraju biti zdrave, imati stabilnu strukturu, svaka osoba ih mora zaštititi od uništenja.

O strukturi i tipovima jetrenih lobula

Ćelijski sastav organa karakterizira raznolikost. Ćelije jetre čine lobule, segmenti su napravljeni od lobula. Struktura organa je takva da se hepatociti (glavne jetrene ćelije) nalaze oko centralne vene, granaju se od nje, međusobno se povezuju, formirajući sinusoide, odnosno praznine ispunjene krvlju. Krv kroz njih teče kao kroz kapilare. Jetra se opskrbljuje krvlju iz portalne vene i arterije koja se nalazi u organu. Jetreni lobuli proizvode žuč i ispuštaju je u protočne kanale.

Druge vrste ćelija jetre i njihova svrha

1. Endotel - ćelije koje oblažu sinusoide i sadrže fenestru. Potonji su namijenjeni da formiraju stepenastu barijeru između sinusoida i Disseovog prostora.
2. Sam dise-prostor je ispunjen zvezdastim ćelijama, koje obezbeđuju odliv tkivne tečnosti u limfne sudove portalnih zona.
3. Kupfferove ćelije su povezane sa endotelom, vezane su za njega, njihova funkcija je da štite jetru kada generalizovana infekcija uđe u organizam, u slučaju povrede.
4. Ćelije udubljenja su ubice hepatocita zahvaćenih virusom, osim toga, citotoksične su za tumorske ćelije.

Ljudska jetra se sastoji od 60% hepatocita i 40% drugih vrsta ćelijskih jedinjenja. Hepatociti imaju izgled poliedra, ima ih najmanje 250 milijardi. Normalno funkcioniranje hepatocita je posljedica spektra komponenti koje luče sinusoidne stanice koje ispunjavaju sinusoidni odjeljak. Odnosno gore navedene Kupfferove, zvjezdaste i pit ćelije (intrahepatične limfocite).

Endotel je filter između krvi u sinusoidnom prostoru i plazme u Disseovom prostoru. Ovaj biološki filter odstranjuje velike, pretjerano bogate spojeve retinola i kolesterola i ne propušta ih, što je blagotvorno za organizam. Osim toga, njihova funkcija je zaštita jetre (odnosno hepatocita) od mehaničkih oštećenja krvnih stanica.

Naš redovni čitalac preporučio je efikasan metod! Novo otkriće! Naučnici iz Novosibirska identifikovali su najbolji lek za čišćenje jetre. 5 godina istraživanja. Samoliječenje kod kuće! Nakon što smo ga pažljivo pregledali, odlučili smo da ga ponudimo vašoj pažnji.

Proces interakcije elemenata organa

Interakcija se javlja između svih čestica organa, što ima prilično složenu shemu. Zdravu jetru karakterizira stabilnost staničnih veza; u patološkim procesima, ekstracelularni matriks se prati pod mikroskopom.

Tkivo organa pod utjecajem toksina, na primjer, alkohola, virusnih agenasa, podliježe promjenama. One su sljedeće:

• taloženje u organu proizvoda nastalih tijekom metaboličkih poremećaja;
• ćelijska distrofija;
• nekroza hepatocita;
• fibroza jetrenog tkiva;
• upalni proces jetre;
• holestaza.

O liječenju patologije organa

Svakom pacijentu je korisno znati šta znače promjene kojima je podvrgnut organ. Nisu svi katastrofalni. Na primjer, distrofija može biti blaga ili teška. Oba ova procesa su reverzibilna. Trenutno postoje lijekovi koji obnavljaju stanice i cijele segmente jetre.

Holestaza se može izliječiti čak i narodnim lijekovima - dekocijama i infuzijama. Oni doprinose normalizaciji sinteze bilirubina i eliminiraju smetnje u odljevu žuči u duodenum.

Kod ciroze u početnoj fazi, liječenje počinje dijetom, a zatim se propisuje hepatoprotektivna terapija. Najefikasniji način lečenja ciroze i fibroze su matične ćelije, koje se ubrizgavaju u pupčanu venu ili intravenozno, obnavljaju hepatocite oštećene raznim agensima.

Glavni razlozi smrti ćelija jetre su zloupotreba alkohola, izloženost drogama, uključujući droge, lijekovi. Svaki toksin koji uđe u tijelo uništava jetru. Stoga se trebate odreći loših navika kako biste imali zdravu jetru.

Ko je rekao da je nemoguće izliječiti tešku bolest jetre?

• Isprobane su mnoge metode, ali ništa ne pomaže.
• A sada ste spremni iskoristiti svaku priliku koja će vam pružiti dugo očekivano dobro zdravlje!

Postoji efikasan tretman za jetru. Pratite link i saznajte šta vam ljekari preporučuju!

Pročitajte također:

Obrazovanje: Rostov State Medical University (Rostov State Medical University), Odsjek za gastroenterologiju i endoskopiju.

ENDOTELIJALNE ĆELIJE, KUPFEROVE ĆELIJE I ITO

Strukturu endotelnih ćelija, Kupferovih i Ito ćelija, razmotrićemo na primeru dve slike.

Na slici desno od teksta prikazane su sinusoidne kapilare (SC) jetre - intralobularne kapilare sinusoidnog tipa, koje se povećavaju od ulaznih venula do centralne vene. Sinusoidne kapilare jetre čine anastomotsku mrežu između jetrenih ploča. Oblogu sinusoidnih kapilara formiraju endotelne i Kupfferove ćelije.

Na slici lijevo od teksta, jetrena lamina (LF) i dvije sinusoidne kapilare (SC) jetre su izrezane okomito i horizontalno kako bi se pokazale Itove perisinusoidne ćelije (CI). Na slici su prikazani i presečeni žučni kanali (GC).

ENDOTELIJALNE ĆELIJE

Endotelne ćelije (EC) su visoko spljoštene skvamozne ćelije sa izduženim malim jezgrom, nerazvijenim organelama i velikim brojem mikropinocitnih vezikula. Citomembrana je prošarana nepravilnim otvorima (O) i fenestrama, često grupiranim u rešetkaste ploče (RP). Ove rupe propuštaju krvnu plazmu, ali ne i krvne ćelije, dajući joj pristup hepatocitima (D). Endotelne ćelije nemaju bazalnu membranu i nemaju fagocitozu. Oni su međusobno povezani pomoću malih spojnih sklopova (nisu prikazani). Zajedno sa Kupfferovim ćelijama, endotelne ćelije čine unutrašnju granicu Disseovog prostora (DP); njegovu vanjsku granicu formiraju hepatociti.

KUPFEROVE ĆELIJE

Kupferove ćelije (KK) su velike, nestabilne zvezdaste ćelije unutar jetrenih sinusoidnih kapilara, delimično na njihovim bifurkacijama.

Procesi Kupfferovih ćelija prolaze bez ikakvih spojnih uređaja između endotelnih ćelija i često prelaze lumen sinusoida. Kupfferove ćelije sadrže ovalno jezgro, mnogo mitohondrija, dobro razvijen Golgijev kompleks, kratke cisterne granularnog endoplazmatskog retikuluma, mnogo lizozoma (L), rezidualna tijela i rijetke prstenaste ploče. Kupfferove ćelije također uključuju velike fagolizozome (PL), koji često sadrže zastarjela crvena krvna zrnca i strane tvari. Također se može otkriti, posebno supravitalnim bojenjem, inkluzijama hemosiderina ili željeza.

Na površini Kupferovih ćelija nalaze se nepravilne spljoštene citoplazmatske nabore zvane lamelipodije (LP) - lamelarne pedunke, kao i procesi zvani filopodije (F) i mikroresice (MV) prekrivene glikokaliksom. Plazmolema formira vermiformna tijela (CT) sa centralno smještenom gustom linijom. Ove strukture mogu predstavljati kondenzovani glikokaliks.

Kupferove ćelije su makrofagi, koji vrlo verovatno formiraju nezavisan rod ćelija. Obično potiču iz drugih Kupfferovih ćelija zbog mitotičke podjele potonjih, ali mogu poticati i iz koštane srži. Neki autori smatraju da se radi o aktiviranim endotelnim ćelijama.

Povremeno, slučajno autonomno nervno vlakno (NV) prolazi kroz Disseov prostor. U nekim slučajevima, vlakna dolaze u kontakt sa hepatocitima. Rubovi hepatocita su omeđeni interhepatocitnim udubljenjima (MU), posutim mikroresicama.

ITO CELLS

To su zvjezdane ćelije lokalizirane unutar Disseovih prostora (DP). Njihova jezgra su bogata kondenzovanim hromatinom i obično su deformisana velikim lipidnim kapljicama (LA). Potonji su prisutni ne samo u perikarionu, već iu procesima ćelije i vidljivi su izvana kao sferične izbočine. Organele su slabo razvijene. Perisinusoidne ćelije pokazuju slabu endocitotsku aktivnost, ali ne posjeduju fagosome. Ćelije imaju nekoliko dugih procesa (O), koji su u kontaktu sa susjednim hepatocitima, ali ne stvaraju spojne komplekse.

Procesi pokrivaju sinusoidne kapilare jetre i u nekim slučajevima prolaze kroz jetrene ploče, dolazeći u kontakt sa susjednim jetrenim sinusoidima. Procesi nisu konstantni, razgranati i tanki; mogu se i spljoštiti. Akumulirajući grupe lipidnih kapljica, one se izdužuju i poprimaju oblik grozda.

Smatra se da su Itove perisinusoidne ćelije slabo diferencirane mezenhimske ćelije koje se mogu smatrati hematopoetskim matičnim ćelijama, jer se pod patološkim uslovima mogu transformisati u masne ćelije, aktivne krvne matične ćelije ili fibroblaste.

U normalnim uslovima, Ito ćelije su uključene u akumulaciju masti i vitamina A, kao iu proizvodnju intralobularnih retikularnih i kolagenih vlakana (KB).

Psihologija i psihoterapija

Ovaj odjeljak će uključivati ​​članke o istraživačkim metodama, lijekovima i drugim komponentama koje se odnose na medicinske teme.

Mali dio stranice koji sadrži članke o originalnim artiklima. Satovi, namještaj, ukrasni predmeti - sve to možete pronaći u ovom dijelu. Odjeljak nije glavni za stranicu, već služi kao zanimljiv dodatak svijetu ljudske anatomije i fiziologije.

Ito ćelije jetre

Univerzalna popularna naučna online enciklopedija

JETRA

JETRA, najveća žlijezda u tijelu kičmenjaka. Kod ljudi to iznosi oko 2,5% tjelesne težine, u prosjeku 1,5 kg za odrasle muškarce i 1,2 kg za žene. Jetra se nalazi u gornjem desnom dijelu trbuha; vezana je ligamentima za dijafragmu, trbušni zid, želudac i crijeva i prekrivena je tankom fibroznom membranom - glisson kapsulom. Jetra je mekan, ali gust crvenkasto-smeđi organ i obično se sastoji od četiri režnja: velikog desnog režnja, manjeg lijevog i mnogo manjih repnih i četvrtastih režnja koji čine stražnju donju površinu jetre.

Funkcije.

Jetra je vitalni organ s mnogo različitih funkcija. Jedna od glavnih je stvaranje i lučenje žuči, prozirne tečnosti narandžaste ili žute boje. Žuč sadrži kiseline, soli, fosfolipide (masti koje sadrže fosfatnu grupu), holesterol i pigmente. Žučne soli i slobodne žučne kiseline emulgiraju masti (tj. razbijaju se u male kapljice), čime se olakšava njihova probava; pretvaraju masne kiseline u oblike rastvorljive u vodi (što je neophodno za apsorpciju i samih masnih kiselina i vitamina rastvorljivih u mastima A, D, E i K); imaju antibakterijsko djelovanje.

Svi nutrijenti koji se apsorbiraju u krv iz probavnog trakta – proizvodi probave ugljikohidrata, proteina i masti, minerali i vitamini – prolaze kroz jetru i u njoj se prerađuju. U ovom slučaju dio aminokiselina (fragmenti proteina) i dio masti se pretvaraju u ugljikohidrate, pa je jetra najveće „depo“ glikogena u tijelu. Sintetiše proteine ​​krvne plazme - globuline i albumine, kao i reakcije konverzije aminokiselina (deaminacija i transaminacija). Deaminacija - uklanjanje amino grupa koje sadrže dušik iz aminokiselina - omogućava da se potonje koriste, na primjer, za sintezu ugljikohidrata i masti. Transaminacija je prijenos amino grupe iz aminokiseline u keto kiselinu uz stvaranje druge aminokiseline ( cm. METABOLIZAM). Jetra također sintetiše ketonska tijela (proizvode metabolizma masnih kiselina) i kolesterol.

Jetra je uključena u regulaciju nivoa glukoze (šećera) u krvi. Ako se ovaj nivo poveća, ćelije jetre pretvaraju glukozu u glikogen (tvar slična škrobu) i talože je. Ako glukoza u krvi padne ispod normalnog, glikogen se razgrađuje i glukoza ulazi u krvotok. Osim toga, jetra je u stanju sintetizirati glukozu iz drugih supstanci, kao što su aminokiseline; ovaj proces se naziva glukoneogeneza.

Druga funkcija jetre je detoksikacija. Lijekovi i drugi potencijalno toksični spojevi mogu se pretvoriti u vodotopiv oblik u stanicama jetre, što im omogućava da se izluče u žuči; oni također mogu biti podvrgnuti uništenju ili konjugirati (kombinirati) s drugim supstancama da bi formirali bezopasne proizvode koji se lako izlučuju iz tijela. Neke supstance se privremeno talože u Kupfferovim ćelijama (specijalne ćelije koje apsorbuju strane čestice) ili u drugim ćelijama jetre. Kupfferove ćelije su posebno efikasne u uklanjanju i uništavanju bakterija i drugih stranih čestica. Zahvaljujući njima, jetra igra važnu ulogu u imunološkoj odbrani organizma. Posjedujući gustu mrežu krvnih žila, jetra služi i kao rezervoar krvi (stalno sadrži oko 0,5 litara krvi) i učestvuje u regulaciji volumena krvi i protoka krvi u tijelu.

Općenito, jetra obavlja više od 500 različitih funkcija, a njena aktivnost još nije umjetno reprodukovana. Uklanjanje ovog organa neminovno dovodi do smrti u roku od 1-5 dana. Međutim, jetra ima ogromnu unutrašnju rezervu, ima nevjerovatnu sposobnost oporavka od oštećenja, tako da ljudi i drugi sisari mogu preživjeti i nakon što se ukloni 70% jetrenog tkiva.

Struktura.

Složena struktura jetre savršeno je prilagođena da ispuni svoje jedinstvene funkcije. Lobusi se sastoje od malih strukturnih jedinica - lobula. U ljudskoj jetri ih ima oko sto hiljada, svaki dug 1,5-2 mm i širok 1-1,2 mm. Lobul se sastoji od ćelija jetre - hepatocita, koji se nalaze oko centralne vene. Hepatociti se spajaju u slojeve debljine jedne ćelije - tzv. hepatične ploče. Radijalno se odvajaju od centralne vene, granaju se i spajaju jedni s drugima, formirajući složen sistem zidova; uske praznine između njih, ispunjene krvlju, poznate su kao sinusoidi. Sinusoidi su ekvivalentni kapilarama; prelazeći jedno u drugo, formiraju neprekidni lavirint. Jetreni lobuli se snabdijevaju krvlju iz grana portalne vene i jetrene arterije, a žuč koja se formira u lobulima ulazi u tubularni sistem, iz njih u žučne kanale i izlučuje se iz jetre.

Jetrena portalna vena i hepatična arterija pružaju jetri neobičnu, dvostruku opskrbu krvlju. Krv bogata hranjivim tvarima iz kapilara želuca, crijeva i nekoliko drugih organa skuplja se u portalnu venu, koja, umjesto da nosi krv do srca kao većina drugih vena, nosi je u jetru. U lobulima jetre, portalna vena se dijeli na mrežu kapilara (sinusoidi). Termin "portalna vena" označava neobičan pravac transporta krvi od kapilara jednog organa do kapilara drugog (bubrezi i hipofiza imaju sličan cirkulacijski sistem).

Drugi izvor opskrbe krvlju jetre, hepatična arterija, prenosi krv bogatu kisikom od srca do vanjskih površina lobula. Portalna vena osigurava 75-80%, a jetrena arterija 20-25% ukupne opskrbe krvlju jetri. U principu, oko 1500 ml krvi prođe kroz jetru u minuti, tj. četvrtinu minutnog volumena srca. Krv iz oba izvora na kraju završava u sinusoidama, gdje se miješa i odlazi u centralnu venu. Iz centralne vene počinje otjecanje krvi u srce kroz lobarne vene u jetrenu (ne brkati je sa portalnom venom jetre).

Ćelije jetre izlučuju žuč u najmanje tubule između ćelija - žučne kapilare. Preko unutrašnjeg sistema tubula i kanala sakuplja se u žučni kanal. Dio žuči ide direktno u zajednički žučni kanal i izlijeva se u tanko crijevo, ali većina žuči se vraća u žučnu kesu, malu vrećicu mišićnih zidova koja je pričvršćena za jetru, za skladištenje kroz cistični kanal. Kada hrana uđe u crijeva, žučna kesa se skuplja i ispušta svoj sadržaj u zajednički žučni kanal, koji se otvara u duodenum. Ljudska jetra proizvodi oko 600 ml žuči dnevno.

Portalna trijada i acinus.

Grane portalne vene, hepatične arterije i žučnog kanala nalaze se jedna pored druge, na vanjskoj granici lobula, i čine portalnu trijadu. Nekoliko takvih portalnih trijada nalazi se na periferiji svakog lobula.

Acinus se smatra funkcionalnom jedinicom jetre. To je dio tkiva koji okružuje portalnu trijadu i uključuje limfne žile, nervna vlakna i susjedne sektore dva ili više lobula. Jedan acinus sadrži oko 20 jetrenih ćelija koje se nalaze između portalne trijade i centralne vene svakog lobula. Na dvodimenzionalnoj slici, jednostavan acinus izgleda kao grupa žila okruženih susjednim dijelovima lobula, a na trodimenzionalnoj slici izgleda kao bobica (acinus - lat. Berry), koja visi sa stabljike krvi i žučnih sudova. Acinus, čiji se mikrovaskularni okvir sastoji od gore navedenih krvnih i limfnih sudova, sinusoida i nerava, je mikrocirkulacijska jedinica jetre.

Ćelije jetre

(hepatociti) imaju oblik poliedra, ali imaju tri glavne funkcionalne površine: sinusoidnu, okrenutu ka sinusoidnom kanalu; cjevasti - učestvuje u formiranju zida žučne kapilare (nema svoj zid); i međućelijski - direktno graniči sa susjednim ćelijama jetre.

Itov kavez

Ito ćelije (sinonimi: zvezdasta ćelija jetre, ćelija za skladištenje masti, lipocit, eng. Hepatična zvezdasta ćelija, HSC, Ito ćelija, Ito ćelija) - periciti sadržani u perisinusoidnom prostoru jetrenog lobula, sposobni da funkcionišu u dva različita stanja - miran i aktiviran. Aktivirane Ito ćelije igraju važnu ulogu u fibrogenezi - formiranju ožiljnog tkiva u oštećenju jetre.

U intaktnoj jetri nalaze se zvijezdaste stanice mirno stanje... U tom stanju ćelije imaju nekoliko izraslina koje pokrivaju sinusoidnu kapilaru. Još jedna karakteristična karakteristika ćelija je prisustvo rezervi vitamina A (retinoida) u njihovoj citoplazmi u obliku masnih kapljica. Mirne Ito ćelije čine 5-8% svih ćelija jetre.

Ito-ćelijske izrasline dijele se na dvije vrste: perisinusoidalni(subendotelni) i interhepatocelularni... Prvi napuštaju tijelo ćelije i prostiru se duž površine sinusne kapilare, prekrivajući je tankim prstastim granama. Perisinusoidni izrasline prekrivene su kratkim resicama i imaju karakteristične duge mikro-izbacivanja koja se protežu i dalje duž površine kapilarne endotelne cijevi. Interhepatocelularne izrasline, nakon što su prevladale ploču hepatocita i dosegnule susjednu sinusoidu, podijeljene su u nekoliko perisinusoidnih izraslina. Dakle, Itova ćelija u prosjeku pokriva nešto više od dvije susjedne sinusoide.

Ako je jetra oštećena, Itove ćelije prelaze u aktivirano stanje... Aktivirani fenotip karakterizira proliferacija, kemotaksija, kontraktilnost, gubitak zaliha retinoida i stvaranje ćelija sličnih miofibroblastima. Aktivirane zvijezdaste ćelije jetre također pokazuju povećane nivoe novih gena kao što su α-SMA, ICAM-1, hemokini i citokini. Aktivacija ukazuje na početak rane faze fibrogeneze i prethodi povećanom stvaranju ECM proteina. Završnu fazu zacjeljivanja jetre karakterizira povećana apoptoza aktiviranih Ito stanica, zbog čega je njihov broj naglo smanjen.

Za vizualizaciju Ito ćelija tokom mikroskopije koristi se bojenje zlatnim hloridom. Takođe je utvrđeno da je njihova ekspresija proteina reelina pouzdan marker za diferencijaciju ovih ćelija od drugih miofibroblasta.

istorija

Karl von Kupfer je 1876. opisao ćelije koje je nazvao "Sternzellen" (zvezdane ćelije). Kada su obojeni zlatnim oksidom, u citoplazmi ćelija su bile uočljive inkluzije. Pogrešno smatrajući da su to fragmenti eritrocita zarobljenih fagocitozom, Kupfer je 1898. revidirao svoje stavove o "zvjezdanoj ćeliji" kao zasebnoj vrsti ćelija i uputio ih u kategoriju fagocita. Međutim, u narednim godinama, opisi ćelija sličnih Kupfferovim "zvjezdanim ćelijama" redovno su se pojavljivali. Dobili su različita imena: intersticijske ćelije, parasinusoidne ćelije, lipociti, periciti. Uloga ovih ćelija ostala je misterija 75 godina, sve dok profesor Toshio Ito nije otkrio određene ćelije koje sadrže inkluzije masti u perisinusoidnom prostoru ljudske jetre. Ito ih je nazvao "shibo-sesshu saibo" - ćelije koje upijaju masti. Shvativši da su inkluzije masnoće koje stvaraju ćelije iz glikogena, promijenio je naziv u "shibo-chozo saibo" - ćelije koje skladište masnoće. Godine 1971. Kenjiro Wake je dokazao identitet Kupfferovih "Sternzellen" i Itovih ćelija koje skladište masnoće. Wake je također otkrio da ove ćelije igraju važnu ulogu u skladištenju vitamina A (ranije se smatralo da se vitamin A taloži u Kupfferovim ćelijama). Ubrzo nakon toga, Kent i Popper su pokazali snažnu povezanost Ito ćelija s fibrozom jetre. Ova otkrića označila su početak procesa detaljnog proučavanja Ito ćelija.

vidi takođe

Napišite recenziju na članak "Itov kavez"

Linkovi

• Young-O Kueon, Zachary D. Goodman, Jules L. Dienstag, Eugene R. Schiff, Nathaniel A Brown, Elmar Burckhardt, Robert Skunkhoven, David A Brenner, Michael W. Fraid (2001). Journal of Haepothology 35; 749-755. - prevod članka u časopisu "Infekcije i antimikrobna terapija", svezak 04/N 3/2002, na web stranici Consilium-Medicum.
• Popper H: Raspodjela vitamina A u tkivu otkrivena fluorescentnom mikroskopijom. Physiol Rev 1944, 24 :.

Bilješke (uredi)

1. Geerts A. (2001.) Istorijat, heterogenost, razvojna biologija i funkcije zvjezdanih ćelija jetre u mirovanju. Semin Liver Dis. 21 (3): 311-35. PMID
2. Wake, K. (1988) Perivaskularne ćelije jetre otkrivene metodom impregnacije zlatom i srebrom i elektronskom mikroskopom. U “Biopatologija jetre. Ultrastrukturni pristup" (Motta, P. M., ur.) str. 23-36, Kluwer Academic Publishers, Dordrecht, Holandija
3. Stanciu A, Cotutiu C, Amalinei C. (2002) Novi podaci o ITO ćelijama. Rev Med Chir Soc Med Nat Iasi. 107 (2): 235-9. PMID
4. John P. Iredale (2001) Ponašanje zvjezdastih ćelija jetre tijekom rješavanja ozljede jetre. Seminari iz bolesti jetre, 21 (3): PMID- na Medscapeu.
5. Kobold D, Grundmann A, Piscaglia F, Eisenbach C, Neubauer K, Steffgen J, Ramadori G, Knittel T. (2002) Ekspresija reelina u zvezdastim ćelijama jetre i tokom popravke jetrenog tkiva: novi marker za diferencijaciju HSC od drugih miofibroblasta jetre. J Hepatol. 36 (5): 607-13. PMID
6. Adrian Ruben (2002.) Hepatologija. Tom 35, broj 2, stranice 503-504
7. Suematsu M, Aiso S. (2001) Profesor Toshio Ito: vidovnjak u biologiji pericita. Keio J Med. 50 (2): 66-71. PMID (eng.)
8. Querner F: Der mikroskopische Nachweis von Vitamin A im animalen Gewebe. Zur Kenntnis der paraplasmatischen Leberzellen-einschlüsse. Dritte Mitteilung. Klin Wschr 1935, 14 :.

Odlomak iz Itovog kaveza

Pola sata kasnije, Kutuzov je otišao za Tatarinovu, a Benigsen i njegova pratnja, uključujući Pjera, vozili su se duž linije.

Od Gorkog je Benigsen sišao visokim putem do mosta, koji je oficir iz humka pokazao Pjeru kao centar položaja, a na čijoj obali su bili redovi pokošene trave koja je mirisala na sijeno. Prešli su most do sela Borodino, odatle skrenuli ulijevo i pored ogromnog broja vojske i topova odvezli se do visoke humke, na kojoj su milicioneri kopali zemlju. Bila je to reduta koja još nije imala ime, kasnije nazvana Reduta Raevskog ili kurganska baterija.

Pjer nije obraćao mnogo pažnje na ovu redutu. Nije znao da će mu ovo mjesto ostati u sjećanju od svih mjesta u Borodinskom polju. Zatim su se vozili kroz jarugu do Semjonovskog, u kojem su vojnici vukli posljednje trupce koliba i štala. Zatim nizbrdo i uzbrdo, vozili su naprijed kroz razbijenu raž izbijenu kao grad, tek popločanim artiljerijskim putem duž naslanja oranica do ravnice [neka vrsta utvrđenja. (Napomena. Lav Tolstoj.)], Takođe tada još kopa.

Benigsen se zaustavio na flushima i počeo da gleda ispred sebe (bivšu jučerašnju našu) Redutu Ševardinskog, na kojoj se videlo nekoliko konjanika. Oficiri su rekli da je tamo bio Napoleon ili Murat. I svi su željno gledali ovu gomilu konjanika. Pjer je također pogledao tamo, pokušavajući pogoditi koji je od ovih jedva vidljivih ljudi Napoleon. Konačno su konjanici napustili humak i nestali.

Bennigsen se okrenuo generalu koji mu je prišao i počeo objašnjavati cjelokupnu situaciju naših trupa. Pierre je slušao Bennigsenove riječi, naprežući sve svoje mentalne snage da shvati suštinu predstojeće bitke, ali s tugom je osjetio da njegove mentalne sposobnosti nisu dovoljne za to. On ništa nije razumeo. Benigsen prestade da govori i primetivši figuru Pjera koji sluša, iznenada reče obraćajući mu se:

- Mislim da niste zainteresovani?

„Oh, naprotiv, veoma je zanimljivo“, ponovio je Pjer, ne sasvim istinito.

Uz zamah, odvezli su se još dalje ulijevo putem koji je vijugao kroz gustu, nisku brezovu šumu. Usred ovoga

šumi, mrki zec bijelih nogu iskočio je na cestu ispred njih i, uplašen topotom velikog broja konja, bio toliko zbunjen da je dugo skakao po cesti ispred njih, uzbudivši generala. pažnjom i smehom, a tek kad su mu u nekoliko glasova viknuli, odjurio je u stranu i nestao u gustiš. Prošavši dva versa kroz šumu, izašli su na čistinu na kojoj su bile stacionirane trupe Tučkovovog korpusa, koje su trebale braniti lijevi bok.

Ovdje, na krajnjem lijevom krilu, Benigsen je mnogo i strastveno pričao i napravio, kako se Pjeru činilo, važnu vojnu naredbu. Ispred lokacije Tučkovljevih trupa nalazilo se uzvišenje. Ovu kotu nisu zauzele trupe. Bennigsen je glasno kritizirao ovu grešku, rekavši da je suludo ostaviti glavnog komandanta brda nezauzetim i postaviti trupe ispod njega. Neki generali su izrazili isto mišljenje. Jedan je posebno s vojničkim žarom govorio da su stavljeni ovdje na klanje. Benigsen je u svoje ime naredio da se trupe prebace na visinu.

Ovo naređenje na lijevom krilu učinilo je Pjera još većom sumnjom u njegovu sposobnost razumijevanja vojnih poslova. Slušajući Bennigsena i generale koji osuđuju položaj trupa pod planinom, Pjer ih je potpuno razumio i dijelio njihovo mišljenje; ali upravo zbog toga nije mogao shvatiti kako je onaj ko ih je postavio ovdje ispod planine mogao napraviti tako očiglednu i grubu grešku.

Pjer nije znao da ove trupe nisu raspoređene da brane položaj, kao što je mislio Bennigsen, već su postavljene na skriveno mjesto za zasjedu, odnosno kako bi bile neprimijećene i iznenada udarile na neprijatelja koji je napredovao. Benigsen to nije znao i pomerio je trupe napred iz posebnih razloga, a da o tome nije rekao glavnokomandujućem.

Knez Andrej je ove vedre avgustovske večeri 25. ležao, oslonjen na ruku, u razbijenoj šupi u selu Knjazkov, na ivici lokacije svog puka. Kroz rupu u razbijenom zidu gledao je u traku tridesetogodišnjih breza sa odsječenim donjim granama koje su išle uz ogradu, na oranicu na kojoj su bile razbijene hrpe zobi i na žbunje preko kojih je Vidio se dim vatri – vojničke kuhinje.

Koliko god da je bio skučen i nikome nepotreban, i koliko god se princu Andreju njegov život sada činio teškim, on se, kao i pre sedam godina u Austerlicu, uoči bitke, osećao uznemireno i razdraženo.

On je davao i primao naređenja za sutrašnju bitku. Nije imao šta više da uradi. Ali misli su bile najjednostavnije, najjasnije i stoga strašne misli ga nisu ostavljale na miru. Znao je da je sutrašnja bitka trebala biti najstrašnija od svih u kojima je učestvovao i mogućnost smrti po prvi put u životu, bez ikakve veze sa svakodnevnim životom, bez obzira na to kako će to uticati na druge, već samo jer mu se odnos prema njemu, prema njegovoj duši, živahno, gotovo sigurno, jednostavno i užasno, predstavljao. I sa visine ove predstave, sve što ga je ranije mučilo i zaokupljalo odjednom je obasjalo hladnom bijelom svjetlošću, bez senki, bez perspektive, bez razlikovanja obrisa. Čitav život mu se činio kao čarobni fenjer, u koji je dugo gledao kroz staklo i pod veštačkim osvetljenjem. Sada je odjednom ugledao, bez stakla, na jarkom dnevnom svjetlu, ove loše naslikane slike. "Da, da, to su te lažne slike koje su me uzbuđivale i divile i mučile", rekao je u sebi, prelazeći u svojoj mašti preko glavnih slika svog čarobnog fenjera života, sada ih gledajući u ovom hladnom bijelom svjetlu dan - jasna pomisao na smrt. - Evo ih, ovih grubo oslikanih figura, koje su izgledale kao nešto lijepo i tajanstveno. Slava, javno dobro, ljubav prema ženi, sama otadžbina - kako su mi se ove slike činile sjajne, kakav dubok smisao su izgledale ispunjene! A sve je to tako jednostavno, blijedo i grubo na hladnom bijelom svjetlu tog jutra, koje se, osjećam, diže za mene." Tri glavne tuge njegovog života posebno su mu zaokupile pažnju. Njegova ljubav prema ženi, smrt njegovog oca i francuska invazija koja je zauzela pola Rusije. „Ljubav. Ova djevojka, koja mi se činila ispunjena misterioznim moćima. Kako sam je voleo! Pravio sam poetske planove o ljubavi, o sreći sa njom. Oh dragi dečko! Rekao je naglas ljutito. - Kako! Vjerovao sam u nekakvu idealnu ljubav, koja je trebala da mi bude vjerna čitavu godinu mog odsustva! Kao nežna golubica iz bajke, trebalo je da uvene odvojeno od mene. I sve je ovo mnogo jednostavnije... Sve je ovo užasno jednostavno, odvratno!

Međućelijska komunikacija se može ostvariti parakrinom sekrecijom i direktnim kontaktima između stanica. Poznato je da perisinusoidne ćelije jetre (HPC) uspostavljaju regionalnu nišu matičnih ćelija i određuju njihovu diferencijaciju. U isto vrijeme HPC ostaju slabo okarakterizirani na molekularnom i ćelijskom nivou.

Cilj projekta bio je proučavanje interakcija između perisinusoidnih ćelija jetre štakora i različitih matičnih ćelija kao što su frakcija mononuklearnih ćelija ljudske krvi iz pupčane vrpce (UCB-MC) i multipotencijalne mezenhimalne stromalne ćelije dobijene iz koštane srži štakora (BM-MMSC).

Materijali i metode. Pacovske BM-MSC i HPC, ljudske UCB-MC ćelije su izvedene standardnim tehnikama. Da bismo proučavali HPC parakrinu regulaciju, zajedno smo kultivirali UCB-MC ili BM-MMSC ćelije sa HPC koristeći Boydenove komore i kondicionirane HPC ćelije. Diferencijalno obilježene ćelije su zajedno kultivirane i njihove interakcije su promatrane fazno-kontrastnom fluorescentnom mikroskopijom i imunocitohemijom.

Rezultati. Tokom prve sedmice uzgoja došlo je do autofluorescencije vitamina A zbog sposobnosti PHC-a da skladišti masnoće. BM-MMSC je pokazao visoku održivost u svim modelima ko-kulture. Nakon 2 dana inkubacije u kondicioniranoj podlozi ko-kulture BM-MMSC sa HPC, uočili smo promjene u morfologiji MMSC - smanjile su se u veličini i njihove klice su postale kraće. Ekspresija α-aktina glatkih mišića i desmina bila je slična miofibroblastu - srednjem obliku kulture Ito ćelija in vitro. Ove promjene mogu biti posljedica parakrine stimulacije HPC-om. Najdublji efekat HPC-a na UCB-MC ćelije uočen je u kontaktnoj kokulturi, stoga je važno za UCB-MC ćelije da stvore direktne kontakte između ćelije radi održavanja njihove vitalnosti. Nismo uočili nikakvu ćelijsku fuziju između HPC/UCB i HPC/BM-MMSC ćelija u ko-kulturama. U našim daljim eksperimentima planiramo proučavanje faktora rasta koje proizvodi HPC za hepatičku diferencijaciju matičnih ćelija.

Uvod.

Od posebnog interesa među raznim ćelijama jetre su perisinusoidne ćelije jetre (Ito ćelije)... Zbog lučenja faktora rasta i komponenti ekstracelularnog matriksa stvaraju mikrookruženje hepatocita, a niz naučnih istraživanja je pokazao sposobnost zvezdastih ćelija jetre da formiraju mikrookruženje za progenitorske ćelije (uključujući hematopoetske ćelije) i utiču na njihovu diferencijacija u hepatocite. Međućelijske interakcije ovih populacija ćelija mogu se izvoditi parakrinim izlučivanjem faktora rasta ili direktnim međućelijskim kontaktima, međutim, molekularna i ćelijska osnova ovih procesa ostaje potpuno neistražena.

Svrha studije.

Proučavanje mehanizama interakcije Ito ćelije sa hematopoetskim (HSC) i mezenhimalnim (MMSC) matičnim ćelijama in vitro.

Materijali i metode.

Ito ćelije jetre štakora izolovane su dvema različitim enzimskim metodama. U isto vrijeme, stromalni MMSC su dobijeni iz koštane srži pacova. Mononuklearna frakcija hematopoetskih matičnih ćelija je izolirana iz ljudske krvi iz pupčane vrpce. Parakrini efekti Ito ćelija su ispitivani tokom kultivacije MMSC i HSC u medijumu u kojem su Ito ćelije rasle, kao i tokom kokultivacije ćelija odvojenih polupropusnom membranom. Učinak kontakta između stanica proučavan je u ko-ćelijskoj kokultivaciji. Za bolju vizualizaciju, svaka populacija je označena individualnom fluorescentnom oznakom. Morfologija ćelija je procenjena faznim kontrastom i fluorescentnom mikroskopijom. Fenotipske karakteristike kultiviranih ćelija proučavane su metodama imunocitokemijske analize.

Rezultati.

U roku od nedelju dana nakon izolacije perisinusoidnih ćelija, primetili smo njihovu sposobnost autofluorescencije zbog njihove sposobnosti akumulacije masti. Tada su ćelije ušle u međufazu svog rasta i dobile zvjezdasti oblik. U početnim fazama ko-kultivacije Ito ćelija sa MMSC koštane srži pacova, održivost MMSC je zadržana u svim opcijama kultivacije. Drugog dana, tokom kultivacije MMSC u medijumu kulture Ito ćelija, morfologija MMSC se promenila - smanjili su se u veličini, procesi su skraćeni. Ekspresija aktina i desmina alfa glatkih mišića u MMSC je povećana, što ukazuje na njihovu fenotipsku sličnost sa miofibroblastima, međufazom u rastu aktiviranih Ito ćelija in vitro. Naši podaci ukazuju na uticaj parakrinih faktora koje luče Ito ćelije na svojstva MMSC u kulturi.

Na osnovu ko-kultivacije hematopoetskih matičnih ćelija sa Ito ćelijama, pokazalo se da hematopoetske matične ćelije zadržavaju vitalnost samo pri kontaktnoj kokultivaciji sa Ito ćelijama. Prema podacima fluorescentne analize mješovitih kultura, nije otkriven fenomen stanične fuzije različitih populacija.

Zaključci. Za očuvanje vitalnosti hematopoetskih matičnih ćelija odlučujući faktor je prisustvo direktnih međućelijskih kontakata sa Ito ćelijama. Parakrina regulacija je uočena samo tokom kultivacije MMSC u hranljivoj podlozi u kojoj su rasle Ito ćelije. Istraživanje uticaja specifičnih faktora koje proizvode Ito ćelije na diferencijaciju HSC i MMSC u ćelijskoj kulturi planirano je da se sprovede u narednim studijama.

Shafigullina A.K., Trondin A.A., Shaikhutdinova A.R., Kaligin M.S., Gazizov I.M., Rizvanov A.A., Gumerova A.A., Kiyasov A.P.
GOU VPO "Kazanski državni medicinski univerzitet Federalne agencije za zdravstvenu zaštitu i društveni razvoj"

Glavni izvor endotoksina u tijeluje gram-negativna crijevna flora. Trenutno nema sumnje da je jetra glavni organ, vršenje čišćenja endotoksina. EnDotoksin prije svega hvata stanica kami Kupffer (KK), u interakciji sa membranskim receptorom CD 14. Može se vezati za receptor kao sebe lipopolisaharida(LPS), i njegov kompleks sa proteinom koji vezuje lipid A grudvica plazme. Interakcija LPS-a s makrofagima jetre pokreće niz reakcija zasnovanih na proizvodnji i oslobađanju citokini i drugi biološki aktivni posrednici.

Postoje mnoge publikacije o ulozi makrofa.fluks jetre (CC) u hvatanju i čišćenju bakterijskog LPS-a, međutim, interakcija endotela s drugim mezenhimalnićelije, posebno sa perisinusoidalni Ito ćelije, praktički nisu proučavane.

TEHNIKA ISTRAŽIVANJA

Bijeli mužjaci pacova težine 200 g ubrizgani su intraperitonealno u 1 ml sterilne fiziološke otopine visoko prečišćen liofilizirani LPS E. coli soj 0111 u dozi od 0,5,2,5, 10, 25 i 50 mg/kg. U 0,5, 1, 3, 6, 12, 24, 72 h i 1 sedmici, unutrašnji organi su uklonjeni pod anestezijom i stavljeni u puferirani 10% formalin. Materijal je ugrađen u parafinske blokove. Presjeci debljine 5 μm su obojeni imunohistohemijskistreptavidin-biotin antitela na desmin, α - glatko mišićni aktin (A-GMA) i nuklearni antigenćelije koje se dobro razmnožavaju ( PCNA, " Dako"). Desmin je korišten kao marker perisinusoidalniIto ćelije, A-GMA - as ve marker miofibroblasti, PCNA - proliferirajuće ćelije. Za otkrivanje endotoksina u ćelijama jetre, pročišćeni anti-Re-glikolipidantitela (Institut za opštu i kliničku patologiju KDO, Moskva).

REZULTATI ISTRAŽIVANJA

Pri dozama od 25 mg/kg i više, 6 sati nakon primjene LPS-a uočen je šok sa smrtnim ishodom. Akutno dejstvo LPS-a na tkivo jetre izazvalo je aktivaciju Ito ćelija, što se manifestovalo povećanjem njihovog broja. Broj desmin-pozitivanćelije su se povećale od 6 h nakon injekcije LPS-a i dostigle maksimum ma za 48-72 h (sl. 1, a, b).

Rice. 1. Presjeci jetre pacova sy obrađeno LSAB -ja- chennyantitela na dec moj(Bend α - glatko shechnomu actin (v), x400 (a, b), x200 (c).

a - prije uvođenja endotoksijena, samac desmin-pozitivanIto ćelije u periportalnoj zoni; b- 72 hnakon uvođenja endotoksa do: brojne desmin-pozitivan Ito ćelije; v- 120 sati nakon uvođenja en dotoksin: α - glatke mišiće prisutan je samo aktinna ćelije glatkih mišića kah posuda.

U 1 broj sedmice desmin-pozitivanćelije su se smanjile, ali je bilobio iznad standarda. At ovo ni u kom slučaju nismo uočili pojavu A-GMA-pozitivanćelije u sinusoidima dah jetre. Interno pozitivno kontrola kod bojenja antitelima na A-GMA služi za identifikaciju glatkih mišićnih ćelija krvivenske žile portalnih trakta koje sadrže A-GMA (slika 1, v). Shodno tome, uprkos povećanju broja Ito ćelija, jednokratno novi efekat L PS ne dovodi do transformacije ( transdiferencijacija) ih u miofibroblaste.

Rice. 2. Sekcije jetrepacovi tretirani LSAB -obeležena antitela na PCNA. a - prije uvođenja en dotoksin: pojedinačniproliferirajući on patociti, x200; b - 72 sata nakon primjene endotoksina: brojni proliferirajući hepatociti, x400.

Povećanje broja desmin-pozitivanćelije su započele unutar zone portala. Od 6 h do 24 h nakon primjene LPS-a perisinusoidalnićelije su nađene samo oko portalnih trakta, tj. u 1. zoni aci nousa... U 48-72 sata, kada je uočen makmaksimalni iznos desmin-pozitivan ljepilo struje, pojavile su se u drugim područjima acina; ipak, većina Itovih ćelija je ipak bila periportalno locirana.

Možda je to zbog činjenice da periportalnolocirani KK prvi su uhvatili endotoksin koji dolazi iz crijeva kroz portalnu venu ili iz sistemske cirkulacije. Ak aktivirani QC proizvode širok spektar citokini za koje se smatra da pokreću aktivaciju Ito ćelija i transdiferencijacija ih u miofibroblaste. Očigledno, zato su Ito ćelije koje se nalaze u blizini aktiviranih makrofaga jetre (u 1. acinus zoni) prve koje reaguju na oslobađanje citokina. Međutim, u našoj studiji ih nismo uočili. transdiferencijacija v miofibroblasti, a to sugerira da citokini koje luče CC i hepatociti mogu poslužiti kao faktor koji podržava već započeti proces transdiferencijacija ali vjerovatno ga ne mogu pokrenuti samo jednom izloženošću jetri s LPS-om.

Uočeno je i povećanje proliferativne aktivnosti ćelija uglavnom u 1. zoni acinusa. To vjerovatno znači da su svi (ili skoro svi) procesi usmjereni na van O- i parakrina regulacija međućelijskih interakcija, odvijaju se u periportalnim zonama. Uočeno je povećanje broja proliferirajućih ćelija od 24 sata nakon primjene LPS-a; broj pozitivnih ćelija se povećavao do 72 h (maksimum proliferativne aktivnosti, sl. 2, a, b). Proliferirali su i hepatociti i sinusoidne ćelije. Međutim, bojenje na PCNA ne daje sposobnost da se identifikuje tip proliferacije sinusoidne ćelije. Prema literaturi, djelovanje endotoksina dovodi do pojačanog iznos CC. Vjeruje se da se radi o dolazi kako zbog proliferacije jetrenih makrofaga, tako i zbog migracije monocita iz drugih organa. Citokini koje oslobađa CK mogu povećati proliferativni kapacitet Ito ćelija. Stoga je logično pretpostaviti da su zastupljene ćelije koje se razmnožavaju perisinusoidalni Ito ćelije. Povećanje njihovog broja koje smo zabilježili je očigledno neophodno za povećanje sinteze faktora rasta i obnavljanje ekstracelularnog matriksa u uslovima oštećenja. Ovo može biti jedna od karika u kompenzatorno-restorativnim reakcijama jetre, budući da su Ito ćelije glavni izvor komponenti ekstracelularnog matriksa, faktora matičnih ćelija i faktora rasta hepatocita, koji su uključeni u popravku i diferencijaciju. lezija epitelnih ćelija jetre. Odsutan ista transformacija Ito ćelija u miofibroblasti ukazuje da jedna epizoda endotoksinske agresije nije dovoljna za razvoj fibroze jetre.

Dakle, akutni utjecaj endotoksa sina uzrokuje povećanje broja desmin-pozitivan Ito ćelije, što je indirektan znak oštećenja jetre. Količina perisinusoidalnićelija se povećava, očigledno kao rezultat njihove proliferacije. Jedna epizoda endotoksinske agresije uzrokuje preokret moja aktivacija perisinusoidalni Ito ćelije i ne vodi do njih transdiferencijacija u miofibroblaste. S tim u vezi, može se pretpostaviti da u mehanizmima aktivacije i transdiferencijacija Ito ćelije nisu uključivale samo endotoksin i citokine, već i neke druge faktore međućelijskih interakcija.

LITERATURA

1. Mayansky D.N., Visse E., Decker K. // Nove granice hepatologija... Novosibirsk, 1992.

2. Salakhov I.M., Ipatov A.I., Konev Yu.V., Yakovlev M.Yu. // Uspjesi lažu, biol. 1998. T. 118, br. 1.S. 33-49.

3. Yakovlev M.Yu. // Kazan ... m jedinica zhurn. 1988. br. 5. S. 353-358.

4. Freudenberg N., Piotraschke J., Galanos C. et al. // Virchows Arch. [B]. 1992. Vol... 61. P. 343-349.

5. Gressner A. M. // Hepatogastronterologija... 1996. Vol. 43. P. 92-103.

6. Schmidt C, Bladt F., Goedecke S. et al. // Priroda. 1995. Vol. 373, br. 6516. P. 699-702.

7. Wisse E., Braet F., Luo D. et al. // Toxicol. Pathol. 1996. Vol. 24, br. 1. str. 100-111.

Ključne riječi

JETRA / ITO ZVEZDANE ĆELIJE/ MORFOLOGIJA / KARAKTERISTIKE / VITAMIN A / FIBROZA / JETRA / JETRA / ZVEZDANE ĆELIJE / MORFOLOGIJA / KARAKTERISTIKE / VITAMIN A / FIBROZA

anotacija naučni članak o fundamentalnoj medicini, autor naučnog rada - Tsyrkunov V.M., Andreev V.P., Kravchuk R.I., Kondratovič I.A.

Uvod. Uloga Ito zvjezdanih stanica (Ito zvjezdanih stanica) identificirana je kao jedna od vodećih u razvoju fibroze u jetri, međutim intravitalna vizualizacija Ito strukture se minimalno koristi u kliničkoj praksi. Svrha rada: predstaviti strukturne i funkcionalne karakteristike PCI na osnovu rezultata citološke identifikacije intravitalnih biopsija jetre. Materijali i metode. Primijenjene su klasične metode svjetlosne i elektronske mikroskopije biopsijskih uzoraka i originalne tehnike ultratankih rezova, fiksacije i bojenja. Rezultati. Foto ilustracije svjetlosne i elektronske mikroskopije biopsija jetre pacijenata s kroničnim hepatitisom C pokazuju strukturne karakteristike PCI u različitim fazama (mirovanje, aktivacija) iu procesu transformacije u miofibroblaste. Zaključci. Upotreba originalnih metoda kliničke morfološke identifikacije i procjene funkcionalnog stanja PCI poboljšat će kvalitetu dijagnostike i predviđanja fibroze jetre.

Povezane teme naučni radovi o fundamentalnoj medicini, autor naučnog rada - Tsyrkunov V.M., Andreev V.P., Kravchuk R.I., Kondratovič I.A.

• Klinička citologija jetre: Kupfferove ćelije

  2017 / Tsyrkunov V.M., Andreev V.P., Kravchuk R.I., Prokopchik N.I.

• Praćenje morfoloških efekata autolognih mezenhimalnih matičnih ćelija transplantiranih u jetru kod virusne ciroze (klinički slučaj)

  2018 / Aukashnk S.P., Alenikova O.V., Tsyrkunov V.M., Isaykina Ya.I., Kravchuk R.I.

• Klinička morfologija jetre: nekroza

  2017 / Tsyrkunov V.M., Prokopchik N.I., Andreev V.P., Kravchuk R.I.

• Polimorfizam zvjezdastih stanica jetre i njihova uloga u fibrogenezi

  2008 / Aydagulova S.V., Kapustina V.I.

• Struktura sinusoidnih ćelija jetre kod pacijenata sa koinfekcijom virusom HIV/hepatitis C

  2013 / Matievskaya N.V., Tsyrkunov V.M., Kravchuk R.I., Andreev V.P.

• Mezenhimalne matične stanice kao obećavajuća metoda za liječenje fibroze/ciroze jetre

  2013 / Lukashik S.P., Aleinikova O.V., Tsyrkunov V.M., Isaykina Ya.I., Romanova O.N., Shimansky A.T., Kravchuk R.I.

• Izolacija i kultivacija miofibroblasta jetre štakora eksplantacijom

  2012 / Miyanovich O., Shafigullina A.K., Rizvanov A.A., Kiyasov A.P.

• Patomorfološki aspekti nastanka fibroze jetre kod HCV infekcije i drugih oštećenja jetre: moderni koncepti

  2009 / Lukashik S.P., Tsyrkunov V.M.

• Analiza miofibroblasta štakora dobijenih iz struktura portalnih trakta jetre eksplantacijom

  2013 / Miyanovich O., Katina M.N., Rizvanov A.A., Kiyasov A.P.

• Transplantirane zvijezdaste stanice jetre uključene su u regeneraciju organa nakon djelomične hepatektomije bez rizika od razvoja fibroze jetre

  2012 / Shafigullina A.K., Gumerova A.A., Trondin A.A., Titova M.A., Gazizov I.M., Burganova G.R., Kaligin M.S., Andreeva D.I., Rizvanov A.A., Mukhammedov A.R., Kiyasov A.P.

Uvod. Uloga Ito zvjezdanih stanica (Hepatic Stellate Cells, HSC) identificirana je kao jedna od vodećih u razvoju fibroze jetre, ali je upotreba intravitalne vizualizacije HSC struktura u kliničkoj praksi minimalna. Cilj rada je prikazati strukturne i funkcionalne karakteristike HSC na osnovu nalaza citološke identifikacije uzoraka intravitalne biopsije jetre. Materijali i metode. Primijenjene su klasične metode svjetlosne i elektronske mikroskopije biopsijskih uzoraka u okviru originalne tehnike korištenja ultratankih rezova, fiksacije i bojenja. Rezultati. Strukturne karakteristike HSC uzoraka biopsije jetre pacijenata sa kroničnim hepatitisom C prikazane su na foto ilustracijama svjetlosne i elektronske mikroskopije. HSC su prikazani u različitim fazama (mirovanje, aktivacija) i tokom procesa transformacije u miofibroblaste. Zaključci. Upotreba originalnih metoda kliničke i morfološke identifikacije i procjene funkcionalnog statusa HSC omogućava poboljšanje kvalitete dijagnoze i prognoze fibroze jetre.

Tekst naučnog rada na temu "Klinička citologija jetre: Ito zvezdaste ćelije"

UDK 616.36-076.5

KLINIČKA CITOLOGIJA JETRE: ZVEZDANE ĆELIJE ITO

Tsyrkunov V.M. ( [email protected]), Andreev V.P. ( [email protected]), Kravchuk R.I. ( [email protected]), Kondratovič I.A. ( [email protected]) EE "Grodno državni medicinski univerzitet", Grodno, Bjelorusija

Uvod. Uloga Ito zvjezdanih stanica (Ito zvjezdanih stanica) identificirana je kao jedna od vodećih u razvoju fibroze u jetri, međutim intravitalna vizualizacija Ito strukture se minimalno koristi u kliničkoj praksi.

Svrha rada: predstaviti strukturne i funkcionalne karakteristike PCI na osnovu rezultata citološke identifikacije intravitalnih biopsija jetre.

Materijali i metode. Primijenjene su klasične metode svjetlosne i elektronske mikroskopije biopsijskih uzoraka i originalne tehnike ultratankih rezova, fiksacije i bojenja.

Rezultati. Foto ilustracije svjetlosne i elektronske mikroskopije biopsija jetre bolesnika s kroničnim hepatitisom C pokazuju strukturne karakteristike PCI u različitim fazama (mirovanje, aktivacija) iu procesu transformacije u miofibroblaste.

Zaključci. Upotreba originalnih metoda kliničke morfološke identifikacije i procjene funkcionalnog stanja PCI poboljšat će kvalitetu dijagnostike i predviđanja fibroze jetre.

Ključne reči: jetra, Itove zvezdaste ćelije, morfologija, karakteristike, vitamin A, fibroza.

Uvod

Nepovoljan ishod većine kroničnih difuznih lezija jetre različite etiologije, uključujući i kronični hepatitis C (CHC), je fibroza jetre, u čijem su razvoju glavni sudionici aktivirani fibroblasti, čiji su glavni izvor aktivirane Ito zvjezdane stanice (IOCI) .

ZKI, sinonim - zvjezdane ćelije jetre, ćelije koje skladište masnoće, perisinusoidni lipociti, zvjezdane ćelije (engleski Hepatic Stellate Cell, HSC, Cell of Ito, Ito cell). ZKI je prvi opisao 1876. K. Kupffer i nazvao zvjezdanim ćelijama ("Stemzellen"). T. Ito, nakon što je u njima pronašao kapljice masti, označio ih je prvo kao apsorbirajuće masti ("shibo-sesshusaibo"), a zatim, utvrdivši da mast proizvode same ćelije iz glikogena, - ćelije koje skladište masnoće (" shibo-chozosaibo") ... Godine 1971. K. Wake je dokazao identitet Kupffferovih zvjezdanih ćelija i Itoovih ćelija koje skladište masnoće i da te ćelije "pohranjuju" vitamin A.

Oko 80% prisutnog vitamina A u tijelu se akumulira u jetri, a do 80% svih jetrenih retinoida se taloži u masnim kapima ZKI. Esteri retinola u hilomikronima ulaze u hepatocite, gdje se pretvaraju u retinol, formirajući kompleks vitamina A sa proteinom koji vezuje retinol (RBP), koji se luči u perisinusoidni prostor, odakle se deponuje u ćelijama.

Bliska povezanost PCI sa fibrozom jetre koju je ustanovio K. Popper pokazao je njihovu dinamičku, a ne statičku funkciju – sposobnost da direktno učestvuju u remodeliranju intralobularnog perihepatocelularnog matriksa.

Glavna metoda morfološkog pregleda jetre, koja se provodi radi procjene promjena u intravitalnim biopsijama, je svjetlosna mikroskopija, koja u kliničkoj praksi omogućava utvrđivanje aktivnosti

pečenje i stadij hroničnosti. Nedostatak ove metode je niska rezolucija, koja ne dozvoljava procjenu strukturnih karakteristika ćelija, intracelularnih organela, inkluzija i funkcionalnih karakteristika. Doživotni elektronski mikroskopski pregled ultrastrukturnih promjena u jetri omogućava dopunu podataka svjetlosne mikroskopije i povećanje njihove dijagnostičke vrijednosti.

U tom smislu, identifikacija PCI jetre, proučavanje njihovog fenotipa u procesu transdiferencijacije i određivanje intenziteta njihove proliferacije su najvažniji doprinos predviđanju ishoda bolesti jetre, kao i patomorfologiji i patofiziologija fibrogeneze.

Svrha - predstaviti strukturne i funkcionalne karakteristike PCI na osnovu rezultata citološke identifikacije intravitalnih biopsija jetre.

materijali i metode

Intravitalna biopsija jetre dobijena je aspiracionom biopsijom jetre kod pacijenata sa CHC (HCV RNA +), od kojih je dobijen pismeni informirani pristanak.

Za svjetlosnu mikroskopiju polutankih rezova, uzorci biopsije jetre pacijenata veličine 0,5 ^ 2 mm fiksirani su metodom dvostruke fiksacije: prvo, prema Sato Taizan metodi, zatim su uzorci tkiva dodatno fiksirani 1 sat u 1 % fiksatora osmijuma pripremljenog u 0,1 M fosfatnom Serensen puferu, pH 7,4. Za bolju identifikaciju intracelularnih struktura i intersticijalnih supstanci na polutankim presecima dodani su 1% osmijum tetroksid, kalijum dihromat (K2Cr207) ili kristali hromnog anhidrida (1 mg/ml). Nakon dehidracije uzoraka u nizu alkoholnih rastvora sve veće koncentracije i acetona, stavljeni su u pretpolimerizovanu mešavinu butil metakrilata i stirena i polimerizovani na 550C. Polutanki rezovi (debljine 1 μm) su uzastopno bojeni

azurni II-bazni fuksin. Mikrofotografije su dobijene digitalnom video kamerom (Leica FC 320, Njemačka).

Elektronsko mikroskopsko ispitivanje je obavljeno u uzorcima biopsije jetre veličine 0,5x1,0 mm, fiksiranih sa 1% rastvorom osmijum tetroksida u 0,1 M Milloni-ha puferu, pH 7,4, na +40C tokom 2 sata. Nakon dehidracije u alkoholima rastuće koncentracije i acetonu, uzorci su izliveni u araldit. Od dobijenih blokova pripremljeni su polutanki rezovi (400 nm) na Leica EM VC7 ultramikrotomu (Nemačka) i obojeni metilenskim plavim. Preparati su pregledani pod svjetlosnim mikroskopom i odabrano je mjesto istog tipa za dalje proučavanje ultrastrukturnih promjena. Ultratanki rezovi (35 nm) su suprotstavljeni sa 2% rastvorom uranil acetata u 50% metanolu i olovo citratu prema E.S. Reynoldsu. Elektronski mikroskopski preparati su proučavani u elektronskom mikroskopu JEM-1011 (JEOL, Japan) pri uvećanjima od 10.000-60.000 pri ubrzavajućem naponu od 80 kW. Za dobijanje slika korišćen je kompleks digitalnog fotoaparata Olympus MegaViewIII (Nemačka) i softver za obradu slike iTEM (Olympus, Nemačka).

Rezultati i diskusija

ZKI se nalaze u perisinusoidnom prostoru (Disse) u džepovima između hepatocita i endotelnih ćelija, imaju duge procese koji prodiru duboko između hepatocita. U većini publikacija posvećenih ovoj populaciji PCI, dat je njihov šematski prikaz, koji omogućava samo ukazivanje na „teritorijalnu“ pripadnost PCI u jetri iu odnosu na okolne „susjede“ (Slika 1.).

PCI imaju bliski kontakt sa endotelnim ćelijama kroz nekompletne komponente bazalne membrane i intersticijska kolagena vlakna. Nervni završeci prodiru između PCI i parenhimskih ćelija, zbog čega se Disseov prostor definiše kao prostor između ploča parenhimskih ćelija i

kompleks PCI i endotelnih ćelija.

Vjeruje se da PCB potiču iz slabo diferenciranih mezenhimskih stanica poprečnog septuma jetre u razvoju. Eksperimentom je utvrđeno da su hematopoetske matične ćelije uključene u formiranje PCI i da ovaj proces nije posljedica stanične fuzije.

Sinusoidne ćelije (SC), prvenstveno ZKI, imaju vodeću ulogu u svim vrstama regeneracije jetre. Fibrozirajuća regeneracija jetre nastaje kao rezultat inhibicije matičnih funkcija PCI i matičnih stanica koštane srži. U ljudskoj jetri ZKI čine 5-15%, kao jedan od 4 tipa SC mezenhimskog porijekla: Kupfferove ćelije, endoteliociti, Pd ćelije. SC bazen takođe sadrži 20-25% leukocita.

U citoplazmi PCA nalaze se masne inkluzije sa retinolom, trigliceridima, fosfolipidima, holesterolom, slobodnim masnim kiselinama, a-aktinom i desminom. Bojenje zlatnim hloridom koristi se za vizualizaciju ZKI. Eksperimentalno je utvrđeno da je marker diferencijacije PCI od drugih miofibroblasta njihova ekspresija proteina reelin.

PCI postoje u tihom ("neaktivni PCI"), prelaznom i dugoročno aktiviranom stanju, od kojih je svaki karakteriziran ekspresijom gena i fenotipom (aNMA, ICAM-1, hemokini i citokini).

ZKI u neaktivnom stanju imaju zaobljen, blago izdužen ili nepravilan oblik, veliko jezgro i svijetli vizualizacijski znak - lipidne inkluzije (kapi) koje sadrže retinol (slika 2).

Broj lipidnih kapljica u neaktivnom PCI dostiže 30 ili više, one su bliske veličine, graniče jedna s drugom, pritiskaju se u jezgro i potiskuju ga na periferiju (slika 2). Male inkluzije mogu se nalaziti između velikih kapi. Boja kapi ovisi o fiksatoru i boji materijala. U jednom slučaju su svijetle (slika 2a), u drugom tamnozelene (slika 2b).

Slika 1. - Šema lokacije PCI (stellatecell, perisinusoidal lipocyte) u perisinusoidalnom prostoru Disse (prostor Disse), Internet resurs

Slika 2. - ZKI u neaktivnom stanju

a - ZKI zaobljenog oblika sa visokim sadržajem lipidnih kapljica svijetle boje (bijele strelice), hepatocita (Hz) sa osiromašenom citoplazmom (crna strelica); b - ZKI sa lipidnim kapima tamne boje, u bliskom kontaktu sa makrofagom (Mf); a-b - polutanke kriške. Azur II boja je glavni fuksin. Mikrografije. Odneo sam ga. 1000; c - ZKI sa obiljem lipidnih kapljica (više od 30), nepravilnog oblika (mag. 6.000); r-ultrastrukturne komponente ZKI: l-lipidne kapljice, mitohondrije (narandžaste strelice), GRES (zelene strelice), Golgijev kompleks (crvena strelica), uv. 15.000; c-d - dijagrami difrakcije elektrona

Elektronskom mikroskopijom formira se osmiofilniji marginalni rub na pozadini laganog lipidnog supstrata (slika 5a). Uz velike inkluzije lipida, većina PCI u „mirovanju“ ima primjetno malu količinu citoplazmatskog matriksa, siromašnog mitohondrijama (Mx) i granularnog endoplazmatskog retikuluma (GRES). Istovremeno, odjeljci srednje razvijenog Golgijevog kompleksa jasno su vidljivi u obliku hrpe od 3-4 spljoštene cisterne sa blago proširenim krajevima (slika 2d).

Pod određenim uslovima, aktivirani PCI dobijaju mešoviti ili prelazni fenotip, kombinujući morfološke karakteristike ćelija koje sadrže lipide i ćelija sličnih fibroblastima (Slika 3).

Prijelazni PCI fenotip također ima svoje morfološke karakteristike. Ćelija poprima izduženi oblik, smanjuje se broj lipidnih inkluzija, a smanjuje se broj invaginacija nukleoleme. Povećava se volumen citoplazme, koja sadrži brojne cisterne GRES-a sa vezanim ribosomima i slobodnim ribozomima, Mx. Uočena je hiperplazija komponenti lamelarnog Golgijevog kompleksa, predstavljena sa nekoliko naslaga od 3-8 spljoštenih cisterni, povećava se broj lizosoma uključenih u degradaciju.

Slika 3. - ZKI u prolaznom stanju

a - ZKI (bijele strelice). Polutanka kriška. Azur II boja je glavni fuksin. Micrograph. Odneo sam ga. 1000; b - ZKI izdužen i sa malom količinom lipidnih kapljica; sw. 8.000; c - ZKI u kontaktu sa Kupfferovim ćelijama (KK) i limfocitom (Lc), uv. 6 000. (Hz - hepatocit, l - lipidne kapi, E - eritrocit); d - mitohondrije (narandžaste strelice), GRES (zelene strelice), Gold-ji (crvena strelica), lizozomi (plave strelice), magn.20.000; b, c, d - obrasci difrakcije elektrona

cije lipidnih kapljica (slika 3d). Hiperplazija komponenti GRES-a i Golgijevog kompleksa povezana je sa sposobnošću fibroblasta da sintetiziraju molekule kolagena, kao i da ih modeliraju posttranslacijskom hidroksilacijom i glikozilacijom u endoplazmatskom retikulumu i elementima Golgijevog kompleksa.

U neoštećenoj jetri, ZKI, u mirnom stanju, pokriva sinusoidnu kapilaru svojim procesima. Procesi PCI se dijele na 2 tipa: perisinusoidni (subendotelni) i interhepatocelularni (Slika 4).

Prvi napuštaju tijelo ćelije i prostiru se duž površine sinusne kapilare, prekrivajući je tankim prstastim granama. Prekrivene su kratkim resicama i imaju karakteristične duge mikroejekcije koje se protežu i dalje duž površine kapilarne endotelne cijevi. Interhepatocelularne izrasline, nakon što su prevladale ploču hepatocita i dosegnule susjednu sinusoidu, podijeljene su u nekoliko perisinusoidnih izraslina. Dakle, PCR pokriva, u prosjeku, više od dvije susjedne sinusoide.

U slučaju oštećenja jetre aktivira se PCI i proces fibrogeneze u kojem se razlikuju 3 faze. Oni se nazivaju inicijacijom, produženjem i rezolucijom (razlučivanjem fibroznog tkiva). Ovaj proces transformacije "odmarajućeg" PCI u fibrozirajuće miofibroblaste iniciraju citokini (^ -1, ^ -6,

Slika 4. - Perisinusoidni (subendotelni) i interhepatocelularni procesi (izrasline) PCI

a - proces PCI (žute strelice), koji izlazi iz tijela ćelije, uv. 30.000; b - proces PCI, koji se nalazi duž površine sinusoidne kapilare, koji sadrži kapljicu lipida, uv. 30.000; c - subendotelno locirani procesi PCI. Procesi endotelnih ćelija (ružičaste strelice); d - interhepatocelularni proces PCI; područje razaranja membrana PCI i hepatocita (crne strelice), uv. 10 000. Obrasci elektronske difrakcije

TOT-a), nedovoljno oksidirani metabolički proizvodi, reaktivne vrste kisika, dušikov oksid, endotelin, faktor aktivacije trombocita (PDGF), aktivator plazminogena, transformirajući faktor rasta (TGF-1), acetaldehid i mnogi drugi. Direktni aktivatori su hepatociti u stanju oksidativnog stresa, Kupfferove ćelije, endotelne ćelije, leukociti, trombociti koji proizvode citokine (parakrini signali) i sami PCI (autokrina stimulacija). Aktivacija je praćena ekspresijom (aktivacijom) novih gena, sintezom citokina i proteina ekstracelularnog matriksa (kolageni I, III, U tipovi).

U ovoj fazi, proces aktivacije PCA može se završiti stimulacijom stvaranja protuupalnih citokina u PCA, koji inhibiraju proizvodnju TOT-a od strane makrofaga u oštećenom području. Kao rezultat toga, količina ZKI je naglo smanjena, oni prolaze kroz apoptozu i procesi fibroze u jetri se ne razvijaju.

U drugoj fazi (produženoj), uz produženo konstantno parakrino i autokrino djelovanje aktivirajućih podražaja, u PCI se „održava“ aktivirani fenotip, karakteriziran transformacijom PCI u kontraktilne stanice slične miofibroblastima koje sintetiziraju ekstracelularni fibrilarni kolagen.

Aktivirani fenotip karakterizira proliferacija, kemotaksija, kontraktilnost, gubitak zaliha retinoida i stvaranje ćelija sličnih miofibroblastima. Aktivirani PCR također pokazuju povećane nivoe novih gena kao što su a-SMA, ICAM-1, hemokini i citokini. Aktivacija ćelije ukazuje na početak rane faze fibrogeneze i prethodi povećanom stvaranju ECM proteina. Rezultirajuće fibrozno tkivo se podvrgava remodeliranju zbog cijepanja matriksa pomoću matriksnih metaloproteinaza (MMP). Zauzvrat, degradaciju matriksa regulišu tkivni inhibitori matriksnih metaloproteinaza (TIMP). MMP i TIMP članovi su porodice enzima zavisnih od cinka. MMP se sintetizira u PCI u obliku neaktivnih zimoenzima, koji se aktiviraju cijepanjem propeptida, ali se inhibiraju pri interakciji sa endogenim TIMP-ovima - TIMP-1 i TIMP-2. PCI proizvode 4 tipa MMP-a membranskog tipa, koji se aktiviraju IL-1 p. Među MMP-ovima poseban značaj pridaje se MMP-9, neutralnoj matriksnoj metaloproteinazi, koja je aktivna protiv kolagena tipa 4, koji je dio bazalne membrane, kao i protiv djelomično denaturiranih kolagena tipa 1 i 5.

Povećanje populacije PCI s različitim tipovima oštećenja jetre prosuđuje se po aktivnosti značajnog broja mitogenih faktora, povezanih receptora tirozin kinaze i drugih identificiranih mitogena koji uzrokuju najizraženiju proliferaciju PCI: endotelin-1, trombin, FGF - fibroblast faktor rasta, PDGF - endotelni faktor rasta krvnih sudova, IGF - faktor rasta sličan insulinu. Akumulacija PCI u područjima oštećenja jetre nastaje ne samo zbog proliferacije ovih ćelija, već i zbog njihove usmjerene migracije u ova područja kemotaksom, uz učešće kemoatraktanata kao što su PDGF i leukocitni kemoatraktant-MCP (monocitni kemotaksik protein-1).

Kod aktiviranog PCI, broj lipidnih kapljica je smanjen na 1-3 sa njihovom lokacijom na suprotnim polovima ćelije (slika 5).

Aktivirani PCI dobijaju izduženi oblik, značajna područja citoplazme zauzima Golgijev kompleks, a otkrivaju se prilično brojne cisterne GRES-a (indikator sinteze proteina za izvoz). Broj ostalih organela je smanjen: ima malo slobodnih ribozoma i polisoma, pojedinačnih mitohondrija, nepravilno - lizozoma (slika 6).

Godine 2007. ZKI su prvi put nazvane matičnim ćelijama jetre, jer eksprimiraju jedan od markera hematopoetskih mezenhimskih matičnih ćelija - CD133.

Slika 5. - ZKI, koji su u aktiviranom stanju

a, b - PCI (plave strelice) s pojedinačnim lipidnim inkluzijama lokaliziranim na suprotnim polovima jezgra. Perisinusoidno vezivno tkivo (na slici 6a) i sloj intercelularnog matriksa oko hepatocita (na slici 6b) obojeni su crvenom bojom. Citotoksični limfociti (ljubičaste strelice). Endotelna ćelija (bijela strelica). Bliski kontakt između plazma ćelije (crvena strelica) i hepatocita. Polutanke kriške. Azur II boja je glavni fuksin. Mikrografije. Odneo sam ga. 1000; c, d - ultrastrukturne komponente PCR-a: mitohondrije (narandžaste strelice), Golgijev kompleks (crvena strelica), cisterne njegove osmiofilnije cis-strane okrenute prema proširenim elementima granularnog endoplazmatskog retikuluma (zelene strelice), lizozom (plava strelica) ( uvećanje 10.000 odnosno 20.000); c, d - dijagrami difrakcije elektrona

Miofibroblasti, kojih nema u normalnoj jetri, imaju tri potencijalna izvora: prvo, tokom intrauterinog razvoja jetre, u portalnim traktovima, miofibroblasti okružuju sudove i žučne kanale tokom njihovog sazrijevanja, a nakon što je jetra potpuno razvijena, nestaju i nestaju. zamijenjen u portalnim traktovima portalnim fibroblastima; drugi - u slučaju oštećenja jetre nastaju zbog portalnih mezenhimalnih stanica i PCI u mirovanju, rjeđe zbog prijelaznih epitelno-mezenhimalnih stanica. Karakterizira ih prisustvo CD45-, CD34-, Desmin +, glijalnog fibrilarnog proteina povezanog sa (GFAP) + i Thy-1 +.

Nedavne studije su pokazale da hepatociti, holangiociti i endotelne ćelije mogu postati miofibroblasti preko epitelnih ćelija ili preko tranzicije endotelnih u mezenhimalne ćelije (EMT). Ove ćelije uključuju markere kao što su CD45-, albumin + (tj. hepatociti), CD45-, CK19 + (tj. holangiociti) ili Tie-2 + (endotelne ćelije).

Slika 6. - Visoka fibrotska aktivnost PCI

a, b - miofibroblast (Mfb), ćelija sadrži veliko jezgro, elemente GRES-a (crvene strelice), brojne slobodne ribozome, polimorfne vezikule i granule, pojedinačne mitohondrije i svetao vizualizacioni znak - snop aktinskih filamenata u citoplazmi (žute strelice); odneo. 12.000 i 40.000; c, d, e, f - visoka fibrotska aktivnost PCI uz zadržavanje kapi lipida koji sadrže retinoid u citoplazmi. Brojni snopovi kolagenih vlakana (bijele strelice) koji su zadržali (a) i izgubili (d, e, f) specifične poprečne pruge; odneo. 25 000, 15 000, 8 000, 15 000. Obrasci difrakcije elektrona

Osim toga, stanice koštane srži, koje se sastoje od fibrocita i cirkulirajućih mezenhimskih stanica, mogu se transformirati u miofibroblaste. To su CD45 + ćelije (fibrociti), CD45 +/- (cirkulirajuće mezenhimske ćelije), kolagen tip 1+, CD11d + i MHC klasa 11+ (Slika 7).

Literaturni podaci potvrđuju ne samo blisku vezu između proliferacije ovalnih ćelija i proliferacije sinusoidnih ćelija, već i podaci o mogućoj diferencijaciji PCI u epitel jetre, što je nazvano mezenhimsko-epitelna transformacija perisinusoidnih ćelija.

U stanju fibrogene aktivacije, PCI nalik miofibroblastu, zajedno sa smanjenjem broja i naknadnim nestankom lipidnih kapljica, karakteriziraju se fokalnom proliferacijom (slika 8), imunohistohemijskom ekspresijom markera sličnih fibroblastima, uključujući a-aktin glatkih mišića. i formiranje pericelularnih kolagenih vlakana u fibrilima.

U fazi razvoja fibroze sve veća hipoksija jetrenog tkiva postaje faktor dodatne prekomerne ekspresije u matičnim ćelijama proinflamatornih adhezionih molekula - 1CAM-1, 1CAM-2, VEGF, proinflamatornih

Interakcija duktalnih jetrenih progenitornih stanica s miofibroblastima jetre

PCB-ovi slični miofibroblastima u stanju fibrogene aktivacije.

Slika 7. - Učesnici u miofibroblastnoj aktivaciji PCI

limfni hemoatraktanti - M-CSF, MCP-1 (monocitni kemotaktički protein-1) i SGS (neutrofilni hemoatraktant posredovan citokinom) i drugi koji stimulišu stvaranje proinflamatornih citokina (TGF-b, PDGF, FGSCF, PF ET-1) i pojačavaju procese fibrogeneze u jetri, stvarajući uslove za samoodrživu indukciju kontinuirane aktivacije PCI i procesa fibrogeneze.

Na mikroskopskim preparatima, perikapilarna fibroza se manifestuje u obliku intenzivne boje perisinusoidnog vezivnog tkiva i sloja intercelularnog matriksa oko hepatocita (često umirućih) u crveno. Na elektronskim mikroskopskim preparatima fibrotične promjene se vizualiziraju ili u obliku velikih snopova vlakana kolagenih vlakana koja su zadržala poprečnu prugastost ili u obliku masivnih

naslage u Disseovom prostoru fibrozne mase, koja je natečena i kolagena vlakna koja su izgubila periodičnu prugastost (slika 9).

Prema modernim konceptima, fibroza je dinamičan proces koji može napredovati i nazadovati (Slika 10).

Nedavno je predloženo nekoliko specifičnih markera PCI: procvat vitamina A (BA) u lipidne kapljice, GFAP, p75 NGF receptor i sinaptofizin. Sprovode se studije o učešću PCI jetre u proliferaciji i diferencijaciji matičnih ćelija jetre.

Proučavali smo sadržaj proteina koji vezuje retinol (RSB-4), koji formira kompleks sa VA, čija koncentracija u krvnoj plazmi normalno korelira sa opskrbom organizma VA, od čega je 80% u PCI.

Odnos između sadržaja

Slika 8. - Fokalna proliferacija PCI u stanju fibrogene aktivacije

a - PCI hiperplazija (bijele strelice) u lumenu proširenih sinusoida; b - proliferacija transdiferenciranih PCI (bijele strelice), endotelne ćelije (ružičasta strelica). Polutanke kriške. Azur II boja je glavni fuksin. Mikrografije. Odneo sam ga. 1000

Slika 9. - Završna faza miofibroblastične aktivacije PCI

a, b - perisinusoidna fibroza (bijele strelice). Perisinusoidno vezivno tkivo i sloj intercelularnog matriksa oko hepatocita (b) obojeni su u crveno sa osnovnim fuksinom. PCI se aktivira i transformiše u fibroblaste (plave strelice). Hz na sl. a - hepatocit sa osiromašenom citoplazmom. Polutanke kriške. Azur II boja je glavni fuksin. Mikrografije. Odneo sam ga. 1000; c, d - perisinusoidna i perihepatocelularna fibroza u lobulu jetre, povećana gustoća elektrona kolagenih vlakana; kondenzacija mitohondrijalnog matriksa u hepatocitu (narandžasta strelica). Uv 8.000 i 15.000, respektivno. Obrasci difrakcije elektrona

Tabela 1. - Pokazatelji sadržaja RSB-4 kod pacijenata sa cirozom jetre (LC) i hroničnim hepatitisom (CG) različite etiologije, ng/ml (M ± m)

Grupa n M ± m p

Ciroza jetre 17 23,6 ± 2,29<0,05

CG, AsAT norma 16 36,9 ± 2,05 *> 0,05

CG, ASAT> 2 norme 13 33,0 ± 3,04 *> 0,05

CG, ALAT norma 13 37,5 ± 3,02 *> 0,05

CG, ALAT> 2 norme 21 35,9 ± 2,25 *> 0,05

Kontrola 15 31,2 ± 2,82

Napomena: p - značajne razlike u odnosu na kontrolu (str<0,05); * - достоверные различия между ЦП и ХГ (р<0,05)

Pseudo-lobul okružen fibroznom rezolucijom septuma sa fibroznim septumom. Bojenje prema masenom krugu lažnog lobula. Bojenje prema nu.Uv.x50 Masson. Uv.x200

Slika 10. - Dinamika događaja u lažnom lobulu bolesnika s virusnom cirozom 6 mjeseci nakon transplantacije autolognih mezenhimalnih matičnih stanica u jetru

Jedemo RSB-4 i fibrozu (cirozu) stadijuma 4, za razliku od hroničnog hepatitisa, kod kojeg takva zavisnost nije uočena, bez obzira na biohemijske markere aktivnosti upale u jetri.

Ova činjenica se mora uzeti u obzir kada se opravdava nadomjesna terapija kako bi se eliminirao nedostatak VA u tijelu, koji može biti posljedica iscrpljivanja PCI potencijala zbog progresije fibroze u jetri.

1. Maksimalna efikasnost procjene strukturnog i funkcionalnog stanja PCI postiže se morfološkim pregledom uzorka intravitalne biopsije uz istovremeno korištenje kompleksa tehnika vizualizacije ćelija (svjetlosna, elektronska mikroskopija ultratankih rezova i originalne metode fiksacije i bojenje).

2. Rezultati morfoloških studija PCI omogućavaju poboljšanje kvaliteta intravitalne dijagnoze fibroze, njeno praćenje i predviđanje ishoda hroničnih difuznih lezija jetre na višem savremenom nivou.

3. Rezultati morfoloških zaključaka će omogućiti kliničaru da u formulaciju konačne dijagnoze dodatno uključi ažurirane podatke o stadiju hroničnosti (stabilizacija, progresija ili povlačenje fibroze) tokom terapije.

Književnost

1. Ivaškin, VT Klinički simptomi prefibroznih promjena: transkript predavanja sa Sveruskog internet kongresa internih specijalista / VT Ivaškin, AO Bueverov // INTERNIST: Nacionalno internet društvo specijalista interne medicine. - 2013. - Način pristupa: http: // internist. ru / publikacije / detalj / 6569 /. - Datum pristupa: 21.11.2016.

2. Kiyasov, AP Ovalne ćelije - pretpostavljene matične ćelije jetre ili hepatoblasti? / A. P. Kiyasov, A. A. Gumerova, M. A. Titova // Stanična transplantologija i inženjerstvo tkiva. - 2006. - T. 2, br. 4. - S. 55-58.

1. Ivashkin, VT Klinicheskaya simptomatika dofibroticheskih izmenenij: stenogramma lekcii Vserossijskogo Internet-Kongressa specialistov po vnutrennim boleznyam / VT Ivashkin, AO Bueverov // INTERNIST: Nacional "noe Internet-special dobshchestvorunut. //internist.656. - Podaci dostupa: 21.11.2016.

2. Kiyasov, AP Oval "nye kletki - predpolagaemye stvolovye kletki pecheni ili gepatoblasty? / AP Kiyasov, AA Gumerova, MA Titova // Kletochnaya transplantologiya i tkanevaya inzheneriya. - 2006. - T. 2. - S. 55. - 58.

3. O ulozi sinusoidnih stanica jetre i stanica koštane srži u pružanju regenerativne strategije za zdravu i oštećenu jetru / A. V. Lundup [et al.] // Bilten transplantologije i umjetnih organa. -2010. - T. XII, br. 1. - S. 78-85.

4. Serov, VV Morfološki kriteriji za procjenu etiologije, stupnja aktivnosti i faze procesa kod virusnog kroničnog hepatitisa B i C / VV Serov, LO Severgina // Arhiv patologije. - 1996. - br. 4. - S. 61-64.

5. Strukturne i funkcionalne karakteristike zvezdastih ćelija jetre u dinamici fibroze / OA Postnikova [et al.] // Fundamentalna istraživanja. - 2011. - br. 10.

6. Ultrastrukturna i imunohistokemijska studija zvjezdanih stanica jetre u dinamici fibroze jetre i ciroze infektivne virusne geneze / GI Nepomnyashikh [et al.] // Bilten eksperimentalne biologije i medicine. - 2006. - T. 142, br. 12. - S. 681-686.

7. Shcheglev, AI Strukturne i metaboličke karakteristike sinusoidnih ćelija jetre / AI Shcheglev, OD Mishnev // Napredak moderne biologije. - 1991. - T. 3, br. 1. - S. 73-82.

10. Učinci dijetalnih retinoida i triglicerida na sastav lipida zvjezdanih stanica jetre štakora i lipidnih kapljica zvjezdanih stanica / H. Moriwaki // J. Lipid. Res. - 1988. - Vol. 29 .-- R. 1523-1534.

13. Friedman, S. Hepatična fibroza 2006: Izvještaj sa treće AASLD konferencije o jednoj temi / S. Friedman, D. Rockey, B. Montgomery // Hepatologija. - 2006. - Vol. 45 (1). - R. 242-249.

18. Iredale, J. P. Hepatične zvjezdane ćelije tijekom rješavanja ozljede jetre / J. P. Iredale // Semin. Liver Dis. -2001. - Vol. 21 (3). - R. 427-436.

19. Kobold, D. Ekspresija reelina u zvjezdanim ćelijama jetre i tokom popravke jetrenog tkiva: novi marker za diferencijaciju HSC od drugih miofibroblasta jetre / D. Kobold // J. Hepatol. - 2002. - Vol. 36 (5). - R. 607-613.

20. Lepreux, S. Miofibroblasti ljudske jetre tokom razvoja i bolesti sa fokusom na portalu (myo)

3. O roli sinusoidalnih "nyh kletok pečeni i kletok kostnog mozga v obespečeniji regeneratornoj strategiji zdrave i povredenoj pečeni / A. V. Lyundup // Vestnik transplantologii i iskusstvennyh organov. - 2010. - S. HII- 85.

4. Serov, V. V. Morfologicheskie kriteriji ocenki ehtiologije, stepeni aktivnosti i stadii procesa pri virusnih hroničnih gepatitah V i S / V. V. Serov, L. O. Severgina // Arhiv patologii.

1996. - br. 4. - S. 61-64.

5. Strukturno-funkcional "naya harakteristika zvezdchatyh kletok pecheni v dinamike fibroza / O. A. Postnikova // Fundamental" nye issledovaniya. - 2011. - br. 10. - C. 359-362.

6. Ul "trastrukturnoe i immunogistohimicheskoe issledovanie zvezdchatyh kletok pecheni v dinamike fibroze i cirroza pecheni infekcionno-virusnogo geneza / GI Nepomnyashchih // Byulleten" ehksperimental "12. -686.

7. SHCHeglev, A. I. Strukturno-metabolicheskaya harakteristika sinusoidal "nyh kletok pecheni" / A. I. SHCHeglev, O. D. Mishnev // Uspekhi sovremennoj biologii. - 1991. - T. 3, br. 1. - S. 73-82.

8. CD34 jetrene zvjezdane stanice su progenitorne stanice / C. Kordes // Biochem., Biophys. Res. Često. - 2007. - Vol. 352 (2). - P. 410-417.

9. Degradacija matriksnih proteina u fibrozi jetre / M. J. Arthur // Pathol. Res. Prakt. - 1994. - Vol. 190 (9-10).

10. Učinci dijetalnih retinoida i triglicerida na sastav lipida zvjezdanih stanica jetre štakora i lipidnih kapljica zvjezdanih stanica / H. Moriwaki // J. Lipid. Res. - 1988. - Vol. 29. - R. 1523-1534.

11. Fetalna jetra se sastoji od stanica u epitelnom prijelazu u mezenhim / J. Chagraoni // Krv. - 2003. - Vol. 101. - P. 2973-2982.

12. Fiksacija, dehidratacija i ugradnja bioloških uzoraka / A. M. Glauert // Praktične metode u elektronskoj mikroskopiji. - Njujork: Am. Elsevier, 1975. - Vol. 3, dio 1.

13. Friedman, S. Hepatična fibroza 2006: Izvještaj sa treće AASLD konferencije o jednoj temi / S. Friedman, D. Rockey, B. Montgomery // Hepatologija. - 2006. - Vol. 45 (1). - R. 242-249.

14. Gaga, M. D. Ljudske i zvjezdane stanice ratepatike proizvode faktor matičnih stanica: mogući mehanizam za regrutaciju mastocita kod fibroze jetre / M. D. Gaga // J. Hepatol. - 1999. - Vol. 30, br. 5. - P. 850-858.

15. Glauert, A. M. Araldite kao medij za ugradnju za elektronsku mikroskopiju / A. M. Glauert, R. H. Glauert // J. Biophys. Biochem. Cytol. - 1958. - Vol. 4. - P. 409-414.

16. Zvjezdane stanice jetre i portalni fibroblasti glavni su stanični izvori kolagena i lizil oksidaza u normalnoj jetri i rano nakon ozljede / M. Perepelyuk // Am. J. Physiol. Gastrointest. Fiziol jetre. - 2013. - Vol. 304 (6). - P. 605614.

17. Jezgra virusa hepatitisa C i nestrukturni proteini induciraju fibrogene efekte u zvjezdanim stanicama jetre / R. Bataller // Gastroenterologija. - 2004. - Vol. 126, br. 2. - P. 529-540.

18. Iredale, J. P. Hepatične zvjezdane ćelije tijekom rješavanja ozljede jetre / J. P. Iredale // Semin. Liver Dis. -2001. - Vol. 21 (3). - R. 427-436.

19. Kobold, D. Ekspresija reelina u zvjezdanim ćelijama jetre i tokom popravke jetrenog tkiva: novi marker za diferencijaciju HSC od drugih miofibroblasta jetre / D. Kobold // J. Hepatol. - 2002. - Vol. 36 (5). - R. 607-613.

20. Lepreux, S. Miofibroblasti ljudske jetre tokom razvoja i bolesti sa fokusom na portalne (myo) fibroblaste / S. Lepreux, A. Desmouliére

fibroblasti / S. Lepreux, A. Desmouliere // Front. Physiol. - 2015. - Način pristupa: http: //dx.doi. org / 10.3389 / fphys.2015.00173. - Datum pristupa: 31.10.2016.

22. Transplantacija matičnih ćelija iz mezenhimske koštane srži kod pacijenata sa cirozom jetre povezanom sa HCV / S. Lukashyk // J. Clin. Transl. Hepatol. - 2014. - Vol. 2, br. 4. - P. 217-221.

23. Millonig, G. A. Prednosti fosfatnog pufera za otopine osmijum tetroksida u fiksaciji / G. A. Millonig // J. Appl. fizika. - 1961. - Vol. 32. - P. 1637-1643.

Vol. 158. - P. 1313-1323.

Vol. 24. - P. 205-224.

29. Querner, F. Der mikroskopische Nachweis von Vitamin Aimanimalen Gewebe. Zur Kenntnis der paraplasmatischen Leberzellen-einschlüsse. Dritte Mitteilung / F. Querner // Klin. Wschr. - 1935. - Vol. 14. - P. 1213-1217.

30. Najnovija dostignuća u biologiji miofibroblasta: paradigme za remodeliranje vezivnog tkiva / B. Hinz // Am. J. Pathol. - 2012. - Vol. 180. - P. 1340-1355.

35. Mesotelijum izveden iz septuma transversum stvara zvjezdaste ćelije jetre i perivaskularne mezenhimske stanice u razvoju mišje jetre / K. Asahina // Hepatologija. -2011. - Vol. 53. - P. 983-995.

Vol. 50. - P. 66-71.

38. Thabut, D. Intrahepatična angiogeneza i sinusoidno remodeliranje kod kronične bolesti jetre: novi ciljevi u liječenju portalne hipertenzije? / D. Thabut, V. Shah // J. Hepatol. - 2010. - Vol. 53. - P. 976-980.

39. Wake, K. Zvezdaste ćelije jetre: trodimenzionalna struktura, lokalizacija, heterogenost i razvoj / K.

// Front. Physiol. - 2015. - Način pristupa: http: //dx.doi. org / 10.3389 / fphys.2015.00173. - Datum pristupa: 31.10.2016.

21. Ligandi peroksizomskog proliferator-aktiviranog receptora gama modula profibrogenog i proinflamatornog djelovanja u zvjezdanim stanicama jetre / F. Marra // Gastroenterologija. -2000. - Vol. 119. - P. 466-478.

22. Transplantacija matičnih ćelija iz mezenhimske koštane srži kod pacijenata sa cirozom jetre povezanom sa HCV / S. Lukashyk // J. Clin. Transl. Hepatol. - 2014. - Vol. 2, br. 4. - R. 217-221.

23. Millonig, G. A. Prednosti fosfatnog pufera za otopine osmijum tetroksida u fiksaciji / G. A. Millonig // J. Appl. Rhysics. - 1961. - Vol. 32. - P. 1637-1643.

24. Podrijetlo i strukturna evolucija ranih proliferirajućih ovalnih stanica u jetri štakora / S. Paku // Am. J. Hepatol. - 2001.

Vol. 158. - P. 1313-1323.

25. Porijeklo miofibroblasta u fibrozi jetre / D. A. Brenner // Fibrogenesis Tissue Repair. - 2012. - Vol. 5, dop. 1. - S. 17.

26. Porijeklo i funkcije miofibroblasta jetre / S. Lemoinne // Biochim. Biophys. Acta. - 2013. - Vol. 1832 (7). - P. 948-954.

27. Pinzani, M. PDGF i transdukcija signala u zvjezdanim stanicama jetre / M. Pinzani // Front. Biosci. - 2002. - Vol. 7. - P. 1720-1726.

28. Popper, H. Raspodjela vitamina A u tkivu otkrivena fluorescentnom mikroskopijom / H. Popper // Physiol. Rev. - 1944.

Vol. 24. - R. 205-224.

29. Querner, F. Der mikroskopische Nachweis von Vitamin Aimanimalen Gewebe. Zur Kenntnis der paraplasmatischen Leberzellen-einschlüsse. Dritte Mitteilung / F. Querner // Klin. Wschr. - 1935. - Vol. 14. - R. 1213-1217.

30. Najnovija dostignuća u biologiji miofibroblasta: paradigme za remodeliranje vezivnog tkiva / B. Hinz // Am. J. Pathol. - 2012. - Vol. 180. - R. 1340-1355.

31. Reynolds, E. S. Upotreba olovnog citrata pri visokom pH kao elektronopaque mrlje u elektronskoj mikroskopiji / E. S. Reynolds // J. Cell. Biol. - 1963. - Vol. 17. - P. 208-212.

32. Safadi, R. Imunološka stimulacija jetrene fibrogeneze CD8 stanicama i atenuacija transgenim interleukinom-10 iz hepatocita / R. Safadi // Gastroenterologija. - 2004. - Vol. 127 (3). - P. 870-882.

33. Sato, T. Elektronsko mikroskopsko istraživanje uzoraka fiksiranih na duže periode u formalinu puferiranom fosfatom / T. Sato, I. Takagi // J. Electron Microsc. - 1982. - Vol. 31, br. 4. - P. 423-428.

34. Senoo, H. Ćelije koje pohranjuju vitamin A (Stellate Cells) / H. Senoo, N. Kojima, M. Sato // Vitam. Horm. - 2007. - Vol. 75.

35. Mesotelijum izveden iz septuma transversum stvara zvjezdaste ćelije jetre i perivaskularne mezenhimske stanice u razvoju mišje jetre / K. Asahina // Hepatologija. -2011. - Vol. 53. - R. 983-995.

36. Stanciu, A. Novi podaci o ITO ćelijama / A. Stanciu, C. Cotutiu, C. Amalinei // Rev. Med. Chir. Soc. Med. Nat. Iasi. -2002. - Vol. 107, br. 2. - P. 235-239.

37. Suematsu, M. Profesor Toshio Ito: vidovnjak u biologiji pericita / M. Suematsu, S. Aiso // Keio J. Med. - 2000.

Vol. 50. - R. 66-71.

38. Thabut, D. Intrahepatična angiogeneza i sinusoidno remodeliranje kod kronične bolesti jetre: novi ciljevi u liječenju portalne hipertenzije? / D. Thabut, V. Shah // J. Hepatol. - 2010. - Vol. 53. - R. 976-980.

39. Wake, K. Hepatične zvjezdane stanice: trodimenzionalna struktura, lokalizacija, heterogenost i razvoj / K. Wake // Proc. Jpn. Akad. Ser. B, Phys. Biol. Sci. - 2006. - Vol.

Wake // Proc. Jpn. Akad. Ser. B, Phys. Biol. Sci. - 2006. - Vol. 82 (4). - P. 155-164.

82 (4). - P. 155-164.

40. Wake, K. U ćelijama jetrenih sinusoida / K. Wake, H. Senoo // Kupffer Cell Foundation (Rijswijk, Nizozemska). - 1986. - Vol. 1. - P. 215-220.

41. Watson, M. L. Bojenje presjeka tkiva za elektronsku mikroskopiju teškim metalima / M. L. Watson // J. Biophys. Biochem. Cyt. - 1958. - Vol. 4. - P. 475-478.

KLINIČKA CITOLOGIJA JETRE: ITO ZVEZDADEĆE ĆELIJE (HEPATIČNE ZVEZDAĆE ĆELIJE)

Tsyrkunov V. M, Andreev V. P., Kravchuk R. I., Kandratovich I. A. Obrazovna ustanova "Grodno State Medical University", Grodno, Bjelorusija

Uvod. Uloga Ito zvjezdanih stanica (Hepatic Stellate Cells, HSC) identificirana je kao jedna od vodećih u razvoju fibroze jetre, ali je upotreba intravitalne vizualizacije HSC struktura u kliničkoj praksi minimalna.

Cilj rada je prikazati strukturne i funkcionalne karakteristike HSC na osnovu nalaza citološke identifikacije uzoraka intravitalne biopsije jetre.

Materijali i metode. Primijenjene su klasične metode svjetlosne i elektronske mikroskopije biopsijskih uzoraka u okviru originalne tehnike korištenja ultratankih rezova, fiksacije i bojenja.

Rezultati. Strukturne karakteristike HSC uzoraka biopsije jetre pacijenata sa kroničnim hepatitisom C prikazane su na foto ilustracijama svjetlosne i elektronske mikroskopije. HSC su prikazani u različitim fazama (mirovanje, aktivacija) i tokom procesa transformacije u miofibroblaste.

Zaključci. Upotreba originalnih metoda kliničke i morfološke identifikacije i procjene funkcionalnog statusa HSC omogućava poboljšanje kvalitete dijagnoze i prognoze fibroze jetre.