Набор реагентов «Питательная среда для выделения гонококка сухая» (ГНК агар) предназначен для микробиологических целей. Применяется для выделения гонококка при исследовании инфицированного материала, а также в качестве среды для культивирования и хранения гонококка в научно-исследовательской работе.
Набор реагентов выпускается в виде комплекта из двух лиофилизированных компонентов:

• основы питательной среды - лиофилизат из объема 100 мл в бутылке- 1 шт;
• добавка к основе питательной среды - лиофилизат из объема 24 мл в бутылке - 1 шт

Состав : основа питательной среды - экстракт кроличьего мяса, пептон сухой ферментативный для бактериологических целей, натрий хлористый, аутолизат хлебопекарных дрожжей, кислота оротовая, агар микробиологический. Добавка к основе питательной среды - сыворотка лошадиная нормальная для бактериологических питательных сред жидкая, аутолизат хлебопекарных дрожжей, аминопептид для микробиологических питательных сред.

Приготовление: в бутылку с основой питательной среды добавляют 100 мл стерильной очищенной воды и выдерживают (30±5) мин, затем помещают на кипящую водяную баню до полного расплавления агара, после расплавления агара выдерживают на водяной бане не более 5 мин. В бутылку с добавкой питательной среды добавляют 24 мл стерильной очищенной воды и выдержать (20±2) мин до полного растворения при температуре 20-25°С. Растворенную добавку переносят в растворенную и охлажденную до температуры (50±2)°С основу Среду размешивают, разливают по 3 мл в стерильные пробирки и скашивают В каждую пробирку добавляют по 0,5 мл стерильного раствора натрия хлорида 0,9% для увлажнения среды. Среду можно также разливать по 10-15 мл в стерильные чашки Петри. Пробирки или чашки с питательной средой помещают на (24±1) ч в термостате при температуре (37±1)°С для контроля на стерильность. Готовую питательную среду хранят при температуре (6±2)°С до 7 сут.

Принцип действия: набор реагентов должен обеспечивать рост каждого тест-штамма Neisseria gonorrhoeae "Лошаков" и Neisseria gonorrhoeae "Денисов" при посеве 0,5 мл микробной взвеси из разведения 10"5 через 24 - 48 часов инкубации при температуре (37 ± 1) °С в виде прозрачных или полупрозрачных бесцветных колоний размером от 0,5 до 2 мм с ровными краями.

Проведение анализа : учет результатов посева проводят через 24, 48 и 72 ч инкубации при температуре (37±1)°С При посеве отделяемого мочеполовых органов больных гонореей рост гонококка на питательной среде должен быть через 24-72 часа. При отсутствии роста гонококка выдержать посевы в термостате до 7 суток.

Упаковка: полиэтиленовые банки по 0,25кг для приготовления 3,6 л среды.

Срок годности- 1 года.

Цена дана с учетом НДС за 1кг.

Гонококки имеют бобовидную форму, располагаются в виде диплококков, окружены микрокапсулой, жгутиков не имеют, спор не образуют, аналогично менингоккам. В клеточной стенке имеется наружная мембрана, белки которой подразделяют на три группы по их функциональному значению. Для гонококков характерно наличие пилей, которые отличаются друг от друга по своим антигенным свойствам (16 антигенных вариантов). Гонококки культивируют на питательных средах, содержащих нативный белок (сыворотка крови, асцитическая жидкость). Лучше растут при содержании 3-5% СО2. На асцитагаре образуют прозрачные колонии с ровными краями. Из углеводов ферментируют только глюкозу, образуют каталазу и цитохромоксидазу - типичные для нейссерий ферменты.

Антигены

Антигенная структура гонококков изменчива. Это связано с наличием многочисленных антигенных вариантов пилей, которые формируются в процессе развития инфекции.

Патогенность и патогенез

Гонококки прикрепляются к цилиндрическому эпителию уретры, влагалищной части шейки матки, прямой кишки, конъюнктиве глаза, а также сперматозоидам и простейшим (трихомонады, амеба). Адгезия происходит за счет пилей и белков наружной мембраны клеточной стенки. Характерной особенностью гонококков является их способность проникать в лейкоциты и размножаться в них. Липоолигосахаридная часть клеточной стенки оказывает токсическое действие. Капсулярные полисахариды подавляют фагоцитоз. Соединяясь с ворсинками цилиндрического эпителия слизистой уретры, а у женщин и эндоцервикального канала, гонококки проникают внутрь клеток при участии белков наружной мембраны клеточной стенки. Это приводит к развитию острого уретрита, цервицита и поражению у женщин шейки матки, придатков (трубы, яичники), у мужчин семенных пузырьков, предстательной железы. При экстрагенитальной локализации гонококки могут повреждать прямую кишку и миндалины, а также вызывать бленнорею (конъюнктивит) у новорожденных. Заражение происходит во время прохождения родовых путей матери, больной гонореей.

Иммунитет

При гонорее имеет место гуморальный иммунный ответ. Однако образующиеся антибактериальные антитела не обладают протективными свойствами. В течение заболевания образуются IgA, подавляющие прикрепление пилей возбудителя к клеткам слизистой уретры. Однако они не способны защитить слизистую от последующего заражения другими генерациями гонококков, что связано с изменением их антигенной структуры. Это приводит к реинфекциям и рецидивам, а также к переходу заболевания в хроническую форму.

Гонококковые инфекции

Возбудитель гонореи и бленнореи N.gonorrhoeae (по предварительной классификации гонококк) принадлежит к семейству Neisseriaceae, рода Neisseria. В мазках из выделений больных гонококки имеют форму кофейных зерен, грамотрицательные, располагаются парами как внутри лейкоцитов (незавершенный фагоцитоз), так и вне клеток. По своим морфологическим признакам они очень похожи менингококков. Для гонококков присущ полиморфизм - встречаются мелкие и крупные клетки, редко палочковидной формы.К питательных сред очень прихотливы. Лучше растут на средах, содержащих кровь, сыворотку, асцитическую жидкость. Гонококки содержат протеиновые и полисахаридные антигены, по которым разделены на 16 сероваров, но в рутинных баклаборатория их пока не определяют.Для микробиологической диагностики гонококковых инфекций используют бактериоскопический, бактериологический, серологический и аллергический методы.

Взятие материала для исследования

Чтобы достойно и доброкачественно провести бактериологическую и бактериоскопическую диагностику, важно правильно взять клинический материал. Его, как правило, должен проводить врач.У мужчин исследуют выделения мочеиспускательного канала, парауретральных ходов, прямой кишки, при показаниях - материал из ротоглотки, а также секрет предстательной железы после ее массажа. Можно также исследовать осадок и "нити" мочи, но в них гонококки выявляются значительно реже. Перед взятием материала из уретры больной не должен помочиться в течение 4-5 ч, не употреблять антимикробные препараты и дезинфицирующие растворы. Наружное отверстие уретры сначала протирают стерильным ватным тампоном, смоченным 0,85% раствором хлорида натрия, затем сухим тампоном. Мазки изготавливают не из навоза, свободно вытекает, а из материала, взятого путем соскоба со слизистой уретры бактериологической петлей или специальной ложечкой Фолькмана. При незначительных выделениях необходимо сделать предварительный массаж уретры. У женщин материал берут из уретры, парауретральных ходов, шейки матки, прямой кишки, а по показаниям - и из ротоглотки. Сначала очищают влагалище от выделений, проводят массаж уретры и путем соскоба бактериологической петлей или ложечкой Фолькмана забирают материал. Шейку матки сначала протирают сукиным стерильным ватным тампоном для удаления слизистой пробки. Выделения из канала шейки матки берут бактериологической петлей или пинцетом. Материал из дистального отдела прямой кишки берут с помощью ложечки Фолькмана слепым методом ", т.е. без какой-либо подготовки больного, или с помощью рекоскопа или ректального зеркала. В этом случае изучаемый материал забирают непосредственно из видимого места поражения.При орофарингеальном гонореи слизь из ротоглотки берут стерильными ватными тампонами на специальных держателях из стальной проволоки. Для диагностики "ленореи выделение конъюнктивы снимают бактериологической петлей. Редко гонорея осложняется гоносепсисом, эндокардитом, артритом. Тогда материалом для юслидження служит кровь или синовиальная жидкость. Принимая во внимание высокую - V тливисть гонококков к колебаниям температуры, исследуемые материалы доставляют в лабораторию в специальных термосах или сумках с грелкой.

Бактериоскопическое исследование

Бактериоскопическое исследование является наиболее распространенным, хотя и менее чувствительным методом лабораторной диагностики гонореи и бленнореи по сравнению с выделением-истих культур. Это особенно касается хронического течения болезни, когда в исследуемом материале содержится незначительное количество гонококков. Однако при правильном взятии материала, повторных обследованиях пациентов, применении методов провокации, квалифицированной оценке мазков бактериоскопическое исследования достаточно часто дает возможность быстро и верно диагностировать заболевание.С исследуемого материала изготавливают два тонких равномерные препараты-мазки. Один окрашивают метиленовой синькой, второй-по методу Грама. При отсутствии метиленового синего можно окрашивать один мазок 1% водным раствором кристаллического фиолетового или 0,5% раствором бриллиантового зеленого течение 1 мин. Заключение о наличии гонококков делают, основываясь на таких ихсвойствам: грамотрицательные окраску, диплококова структура, форма кофейных зерен, расположение внутри лейкоцитов.Под влиянием антибиотиков и других химиопрепаратов а также при хронической гонорее морфология и окраски гонококков могут меняться. Отдельные клетки приобретают различную форму и величину (так называемые формы Аша). Кроме того, в исследуемом материале могут находиться подобные гонококков грамотрицательные кокки из рода Veillonella. Это в некоторой степени ограничивает диагностическую ценность метода первичной микроскопии.Лучшие и надежные результаты дает метод иммунофлюоресценции. Тонкие мазки из выделений больных фиксируют в пламени горелки. На них наносят меченую изотиоцианатом флуоресцеина антигонококову сыворотку на 1 час при 35 ° С во влажной камере. После этого мазки дважды промывают буферным раствором, наносят забуферений глицерин и покрывают покровной стеклами. При взаимодействии гонококков с мечеными антителами под люминесцентным микроскопом видно характерное свечение вокруг бактериальных клеток.

Бактериологическое исследование

Показаниями к выделения чистых культур гонококков неоднократные отрицательные результаты бактериоскопии, наличие подозрительных по гонококков, но не идентифицированных морфологически микроорганизмов, а также для достоверного установления излеченности заболевания. Очень важно немедленно поместить посевы в термостат. При невозможности проведения посевов на месте взятия материала можно висел ватным тампоном в пробирку с транспортным средой Стюарта, которое обеспечивает сохранение жизнеспособности гонококков во время доставки в лабораторию.Посевы проводят по стандартной схеме в один из специальных питательных сред в пробирках или чашках Петри (КДС, Бейли, кровяное или сывороточный агар, сухой питательной среды Харьковского предприятия "Биолек" по производству бактериальных и лекарственных препаратов). Для диагностического культивирования гонококков во многих странах используют еще "шоколадный" агар. Наилучшими являются среды, изготовленные на основе агара из кроличьего мяса или свежих бычьих сердец. Добавление к ним 20 ЕД / мл полимиксина и 2 мкг / мл линкомицина значительно повышает частоту высева гонококков, поскольку указанные препараты подавляют рост других бактерий. Все среды перед посевом подогревают в термостате в течение 15-20 мин. Чашки и пробирки с посевами помещают в эксикаторы, где создают атмосферу с 20% С02. Колонии, как правило, вырастают через 18-24 ч, однако возможен и поздний рост. Тогда посевы выдерживают в термостате (в эксикаторе!) До 8 суток, ежедневно проверяя появление роста.Колонии гонококков, выросшие имеют круглую, слегка выпуклую форму, ровные края, блестящую поверхность, слизистую консистенцию. Они прозрачны, как капельки росы, почти бесцветные, хотя могут случаться и беловатые варианты. Полученные колонии исследуют макро-и микроскопически. В мазках гонококки располагаются парно, тетрадами и скоплениями. Типичные колонии пересевают на скошенный сывороточный агар для выделения чистой культуры. Окончательную идентификацию проводят, учитывая морфологические, культа рал ьни, ферментативные и антигенные свойства. Биохимически гонококки мало активны. На сывороточных средах с 1,5% различных углеводов они раскладывают только глюкозу, но не мальтозу и сахарозу.Оксидазно активность выделенных культур определяют путем нанесения на колонии (после микроскопии) 1% раствора диметилпарафенилендиамину. Оксидазопозитивни колонии сначала краснеют а позже чернеют.Дифференциация гонококков от других видов рода Neisseria имеет особое значение при диагностике орофарингеальной гонореи. Как известно, на слизистой миндалин, рото-и носоглотки постоянно находится большое количество грамотрицательных нейссерий - представителей нормальной микрофлоры человека. Надежными методами идентификации гонококков являются реакции иммунофлюоресценции, латекс-и коаглютинации а также определения ферментативных свойств. Обязательно проводят качественное определение чувствительности или резистентности микроорганизмов к антибиотикам с помощью метода диффузии в агар с использованием дисков.С целью повышения частоты нахождения гонококков в мазках при первичной микроскопии и более надежного выделения чистых культур особенно в случаях вялого, хронического течения заболевания прибегают к методам провокации гонореи, то есть искусственного обострения патологического процесса, в результате чего в выделениях появляется большее количество гонококков. Основными из этих методов являются:а) химический - инстилляция в уретру 0,5% раствора нитрата серебра у мужчин, смазывание канала шейки матки 2-5% раствором нитрата серебра;б) механическое - введение прямого бужа в уретру на 10 мин, или проведения передней уретроскопии;в) биологический - внутримышечное введение гоновакцины в количестве 500 млн. микробных тел или пирогенала 200 МПД;г) алиментарный - употребление соленой, острой пищи;д) термический - прогревание половых органов индуктотермичним током;е) физиологический - взятие мазков во время менструаций.Еще лучше комбинировать несколько методов провокации, например, химический, алиментарный и биологический.В последнее время для более надежного выявления возбудителя гонореи принимают полимеразной цепной реакции. Она позволяет выявить возбудителя в случаях хронической гонореи, когда бактериоскопическое и бактериологическое исследование не дает положительных результатов.

Серологическая диагностика

Серологическую диагностику гонореи осуществляют сравнительно редко, в основном, при хроническом ее течении, когда бактериоскопическое и бактериологические исследования не дают положительных результатов. В современных условиях проводят иммуноферментный анализ, РНГА и реакции Борде-Жангу (РСК). Антигенами для этих реакций служат: убита нагревом поливалентная гонококковая вакцина, вакцина, инактивированная ультразвуком, протеиновые и полисахаридные фракции гонококков, а также пиридиновый антиген. ИФА и РНГА является высокоспецифичным и достоверными серологическими реакциями. По сравнению с прошлым РСК несколько утратила свою роль. Она не имеет практического значения при диагностике острой гонореи, поскольку ее лечат еще до образования значительного количества антител. Для установления достоверности излечения она вообще непригодна. Реакция Борде-Жангу имеет важное значение при серодиагностици хронической гонореи, особенно при осложненных его формах (гоносепсис, метрит, артрит простатит и др.).Диагностическое значение аллергических проб несколько обесценивается тем, что они положительные течение многих лет после перенесенной гонореи. Для их постановки внутрикожно вводят 0,1 мл свежей гонококковой вакцины (100 млн микробных клеток в 1 мл). Через 24 ч наблюдают гиперемию, иногда с отеком в центре.

Лечение и профилактика

Для химиотерапии гонореи используют антибиотики: бета-лактамы (пенициллины, цефалоспорины) и другие антибиотики. Вакцинопрофилактика гонореи не проводится ввиду отсутствия эффективных вакцин. Для предупреждения бленнореи всем новорожденным закапывают на конъюнктиву глаза раствор одного из перечисленных антибиотиков.

Neisseria gonorrhoeae входят в семейство Neisseriaceae, род Neisseria. Гонококки обнаружены Нейссером в 1879 г. и в честь его названо все семейство.

Морфология . Гонококки - это диплококки, состоящие из двух бобовидных кокков, лежащих вогнутыми сторонами друг к другу (напоминают кофейные зерна). Размер гонококков 1,2-1,3 × 0,7-0,8 мкм. Они полиморфны, наряду с крупными встречаются очень мелкие, неправильной формы L-формы бактерий. Гонококки неподвижны, спор не имеют. В патологическом материале (гное) обнаруживают капсулообразное вещество. Грамотрицательны. Под влиянием лекарственных и других веществ быстро изменяются: появляются грамположительные формы. В патологическом материале располагаются внутриклеточно (в лейкоците), но могут быть вне клетки. Могут находиться в виде отдельных кокков (см. рис. 4).

Культивирование . Гонококки - аэробы. Очень требовательны к питательным средам. Растут на средах, содержащих нативный белок (человеческий) - кровь, сыворотку, при температуре 37° С и рН среды 7,2-7,4. Среды должны быть свежеприготовленными и влажными. Посев следует производить сразу после взятия материала. На сывороточной среде гонококки образуют мелкие колонии 1-2 мм, прозрачные, блестящие с ровными краями, напоминающие капельки росы. На кровяной среде гемолиза не дают. В сывороточном бульоне они дают слабое помутнение и пленку, которая оседает на дно пробирки. При скудном росте через 24 ч посевы оставляют в термостате на вторые сутки.

Ферментативные свойства . Сахаролитические свойства слабо выражены. Гонококки расщепляют только один сахар - глюкозу с образованием кислоты. Протеолитическими свойствами не обладают.

Токсинообразование . В клеточной стенке гонококков имеется токсическая субстанция - липополисахарид (мало изучен).

Антигенная структура . Антигенная структура неоднородна и легко изменяется под влиянием факторов внешней среды. Общепринятого деления гонококков на серовары и серотипы пока нет.

Устойчивость к факторам окружающей среды . Во внешней среде гонококки мало устойчивы. При температуре 56-60° С они погибают. При температуре 40° С их жизнеспособность резко снижается. Низкие температуры и высушивание их быстро губят. Но в гное они сохраняются до 24 ч. Дезинфицирующие растворы - 1% раствор фенола, сулема 1:1000 убивают гонококки в течение нескольких минут. Особенно гонококки чувствительны к солям серебра - 1% раствор серебра нитрата губит их сразу. УФ-лучи убивают их в течение нескольких минут.

Восприимчивость животных . Животные не чувствительны к гонококку. Однако внутрибрюшинное введение белым мышам гонококкового токсина вызывает их гибель.

Источники инфекции . Больной гонореей человек.

Пути передачи . Контактно-бытовой (половой), реже через зараженные предметы (полотенце, губки и др.).

Заболевания у человека . Гонорея и бленнорея.

Патогенез . Естественным хозяином гонококков является больной человек. Гонококки проникают через слизистые оболочки уретры (у женщин - уретры и шейки матки). Фактором патогенности гонококков является наличие у них пилей, которые, соединяясь с микроворсинками цилиндрического эпителия, способствуют проникновению гонококка внутрь клетки эпителия, обусловливая в слизистой оболочке острый воспалительный процесс.

Клинически гонорея проявляется болями при мочеиспускании, выделениями гноя из уретры и влагалища. Заболевание протекает остро, но иногда переходит в хроническую форму. Гонококки могут вызвать гонорейный конъюнктивит - бленнорею (гнойное воспаление слизистой оболочки глаз у новорожденных). Гонококки редко проникают из уретры в другие органы, но иногда они могут быть причиной артритов, эндокардитов и т. д.

Иммунитет . Естественной резистентности к гонококкам нет. Перенесенное заболевание также не создает иммунитета. Наблюдающийся фагоцитоз носит незавершенный характер.

Профилактика . Санитарное просвещение. Повышение культурно-гигиенического уровня. Специфической профилактики нет. Для профилактики бленнореи детям сразу после рождения обязательно вводят в конъюнктивальный мешок 1-2 капли 30% раствора альбуцида.

Лечение . Антибиотики (пенициллин, бициллин, стрептомицин и др.). Применяют также сульфаниламидные препараты. При хронической форме используют гонококковую вакцину.

Контрольные вопросы

1. Опишите морфологические свойства гонококков.

2. Каковы ферментативная активность и токсинообразование гонококков?

3. Какова устойчивость гонококков. К какому препарату гонококки особенно чувствительны?

4. Какие заболевания вызывают гонококки и их патогенез.

Микробиологическое исследование

Цель исследования: выявление гонококков и противогонококковых антител.

Материал для исследования

1. Отделяемое слизистой оболочки уретры у мужчин.

2. Отделяемое слизистой оболочки уретры и шейки матки у женщин.

3. Гнойные выделения из глаз.

4. Кровь для получения сыворотки.

Примечание. Для бактериоскопического и бактериологического исследования материал берут: 1) до начала лечения антибиотиками: 2) не ранее чем через 10 дней после окончания лечения антибиотиками; 3) не ранее чем через 2 ч после последнего мочеиспускания; 4) не ранее чем через 2 ч после спринцевания.

Основные методы исследования

1. Микроскопический (главным образом используется при острых формах).

2. Микробиологический.

3. Серологический.

Ход исследования

Второй день исследования

Вынимают посевы из термостата и просматривают их. Изучают колонии. Делают мазки. При наличии подозрительных грамотрицательных диплококков колонии пересевают на скошенную среду в пробирках (среда должна быть свежеприготовленной и содержать достаточное количество конденсата) и ставят пробу на оксидазу. Для этого пипеткой на колонию наносят каплю 1% раствора диметилпарафенилендиамина, колонии изменяют цвет от темно-коричневого до черного.

Третий день исследования

Вынимают посевы из термостата, делают мазки со скошенного агара, окрашивают по Граму и микроскопируют. Засевают на среды Гисса (лактозу, глюкозу, маннит и мальтозу). Эти углеводы должны содержать 30% сыворотки крови. Засеянные пробирки ставят в термостат.

Четвертый день исследования

Вынимают пробирки из термостата, при отсутствии роста оставляют их в термостате еще на 1-2 дня. При наличии роста учитывают результаты (табл. 28).

Серологическая диагностика

Третья неделя заболевания. При хроническом течении заболевания и в сомнительных случаях ставят РСК с сывороткой больного (см. главу 12). В качестве антигена используют убитую культуру гонококков, которую готовят в производственных условиях. Можно применить реакцию непрямой гемагглютинации (см. главу 12).

Контрольные вопросы

1. Какой материал служит для выявления гонококков и каким способом его получают?

2. Через сколько времени после мочеиспускания (или спринцевания у женщин) можно брать материал для исследования?

3. Какой метод исследования является основным при острой форме и какой - при хронической форме гонореи?

4. Когда и какую серологическую реакцию ставят при подозрении на гонорею?

5. От каких микроорганизмов необходимо дифференцировать гонококки?

Получите у преподавателя препарат. Изучите его и зарисуйте гонококки, расположенные внутри лейкоцита и вне его при окраске по Граму.

Питательные среды

Желточная среда . К 100 мл МПА из кроличьего мяса добавляют 15 мл желтка (свежего куриного яйца), 6 мл индикатора фенолового красного, 1,5 мл сахара, растворенного в 1 мл стерильной дистиллированной воды.

Питательная среда асцит-агар . К фильтрату бульона, приготовленного из кроличьего мяса, добавляют 2% агар, 1% пептон и 0,5% хлорид натрия. Нагревают до растворения агара, устанавливают рН 7,4-7,5, подщелачивают 20% гидроксидом натрия. Среду доводят до кипения, фильтруют, разливают в стерильные флаконы и стерилизуют в автоклаве 15 мин при 115° С.

Рецепты безасцитных питательных сред (МПА рН 7,4-7,5) .

1) мясной воды из кроличьего мяса или бычьих сердец - 100 мл

гидролизата казеина - 2 мл

дрожжевого аутолизата - 2 мл

сыворотки крови крупного рогатого скота - 20 мл

2) мясной воды из кроличьего мяса или бычьих сердец - 100 мл

5% раствор гемогидролизата - 2 мл

дрожжевого аутолизата - 2 мл

сыворотки рогатого скота - 20 мл

3) мясной воды из кроличьего мяса или бычьих сердец - 100 мл

желтка куриного яйца - 10 мл

сыворотки крови рогатого скота - 20 мл

Рост гонококков на этих средах обильный. Колонии гонококка могут быть выявлены с помощью пробы на оксидазу, при которой они окрашиваются в красный цвет, переходящий в черный.

Возбудителем гонореи является Neisseria gonorrhoeaе , вызывающая острые и хронические воспалительные поражения мочеполовых органов, слизистой оболочки ротоглотки и конъюнктивы глаза.

Материалом для исследования является гнойное отделяемое мочеполовых органов, прямой кишки или конъюнктивы глаз (при бленорее), суставной и перитонеальный экссудат. Строго регламентированными методами лабораторной диагностики гонореи являются микроскопическое и бактериологическое (культуральное) исследование. Методы микробиологической диагностики гонореи отражены в схеме 18 .

Схема 18. Методы микробиологической диагностики гонореи

Микроскопический метод заключается в исследовании мазков из исследуемого материала, окрашенных по Граму и метиленовым синим. При окрашивании препаратов на гонорею используют модификацию метода Грама (краситель генциан-виолет заменяют кристал-виолетом, а вместо фуксина применяют нейтральный красный; промывку препарата осуществляют после каждого этапа окраски). В мазках при острой гонорее обнаруживают большое количество полиморфноядерных лейкоцитов, внутри и вне которых расположены бобовидные грамотрицательные диплококки; сопутствующая микрофлора либо минимальна, либо отсутствует вовсе (рис. 25). При хронической гонорее в ряде случаев типичный гонококк в мазках не выявляется, либо выглядит нетипично в виде мелких пылевидных или крупных шарообразных образований, нередко 2 клетки гонококка располагаются под углом друг к другу, при этом обнаруживается обильная сопутствующая микрофлора, лейкоциты, эпителиальные и другие клетки. В качестве экспресс-метода диагностики может использоваться ИФМ.

Рис. 25. Возбудитель гонореи(Neisseria gonorrhoeaе) в мазках из уретры больного острой гонореей. Внутри и внеклеточно расположенные грамотрцательные диплококки, обилие лейкоцитов.

Бактериологический метод. Гонококк отличается высокой чувствительностью к различным неблагоприятным факторам, поэтому культуральное исследование необходимо проводить сразу после отбора материала. Посев производят на специальные питательные среды. Основой этих сред является МПА из кроличьего мяса с добавлением дрожжевого аутолизата, гидролизата казеина или гемогидрализата и сыворотки крупного рогатого скота. Асцитическая жидкость и яичный желток в качестве добавок к среде для культивирования гонококка в настоящее время не применяются. Второй тип питательных сред является селективным и включает в свой состав, помимо вышеуказанных компонентов, антибиотики (полимиксин, линкомицин, а для диагностики фарингеальной гонореи – оротовую кислоту). Посевы выращивают при 37 0 С в течение 24-72 часов в атмосфере с повышенным содержанием СО 2 . Колонии гонококков круглые, прозрачные, в виде капелек росы. Типичные для гонококков ко­лонии пересевают в пробирки со средой для культивирования гонококка для получения чистых культур, которые идентифицируют по морфологическим и сахаролитическим свойствам на средах «пестрого» ряда (полужид­кий агар с сывороткой и углеводом) или с помощью микро­тест-систем. В мазках из чистых культур гонококки располагаются не попарно, а отдельно. В биохимическом отношении гонококки малоактивны и ферментируют только глюкозу с обра­зованием кислоты, вырабатывают оксидазу. Для выявления оксидазы применяют пробу с 1% водным раствором диметилпарафенилендиамина или диэтилпарафенилендиамина, которые окрашивают колонии гонококка сначала в розовый, затем в красный, а через несколько минут – в черный цвет. Исследуют также чувствительность гонококков к антибиотикам и его бета-лактамазную активность.

Серологический метод (определение антител к гонококку в крови пациентов с помощью РСК и ИФА) не является строго регламентированным, не представляет диагностической ценности, не является методом контроля эффективности проводимого лечения и в реальной практике в настоящее время не используется.

Генодиагностика. Направлена на обнаружение специфических фрагментов ДНК гонококка с помощью ПЦР и может быть использована в качестве дополнительного высокоинформативного метода диагностики гонореи.

Самостоятельная работа студентов

1. Микроскопический метод - исследование гнойного отделяемого из уретры больного с подозрением на гонорею (демонстрационный микропрепарат, окраска по Граму).

2. Бактериологический метод. Изучение культуральных. возбудителя гонореи на питательной среде для выделения гонококка, на которой гонококки образуют круглые, прозрачные колонии в виде капелек росы. В ферментативном отношении гонококк малоактивен и ферментирует лишь глюкозу с образованием кислоты. Учесть результаты посева гонококка на «пестрый» ряд (демонстрация).

Диагностика гонореи

Без анализа на гонорею ни один современный врач диагноз не поставит. Неважно, какие симптомы присутствуют у пациента - гонорея, как и многие другие инфекции, определяется преимущественно лабораторными методами. И своевременная сдача анализов вместе с грамотным выбором метода, который лучше всего подойдет в каждом конкретном случае, играют решающую роль в предупреждении грозных осложнений.

Для лабораторной диагностики гонореи применяется несколько методов:

• микроскопия мазка на гонококки нейссера (бактериоскопический метод);
• бактериальный посев на гонорею (гонококки);
• серологические тесты (серодиагностика);
• иммуноферментный анализ (ИФА);
• ПЦР (полимеразная цепная реакция);
• экспресс тесты на гонорею.

Самые точные и распространенные из них - бак посев и ПЦР. Остановимся подробно на каждом, чтобы понять, почему.

Как делается микроскопический анализ на гонорею

Микроскопия мазка из мочеиспускательного канала или влагалища (шейки матки) – самый простой метод предварительной диагностики гонореи. Принцип проведения исследования прост. Мазок окрашивается и рассматривается под микроскопом. При этом обращают внимание на наличие двойных кокков с характерной для гонококков формой в виде кофейных зёрен.

При любом воспалении в мазке содержится большое количество лейкоцитов – кровяных клеток, отвечающих за защиту организма. При гонорее их количество также повышено, но этот факт не может служить подтверждением диагноза. Наличие белых кровяных клеток лишь свидетельствует о воспалении, но не указывает, какая инфекция его вызвала.

Лейкоциты и гонококки при гонорее могут определяться в общем анализе мочи (находятся в осадке).

Преимущество метода – в его простоте и быстроте. А главная проблема – в низкой точности. Выполнить анализ можно за 10-15 минут, только вот вероятность того, что результат верен – 50%. Схожий внешний вид характерен почти для всех нейссерии, в том числе непатогенных. Поэтому используют микроскопию только для скрининга, чтобы понять, есть ли в мазке что-то чужеродное. При обнаружении похожих на гонококки бактерий проводятся другие, более точные анализы: посев, ПЦР или анализ крови методом ИФА.

Как проводится бактериальный посев на гонококки

В отличие от микроскопического исследования мазка, бак посев – метод информативный. Гонококки растут только на специальных средах, их колонии имеют характерный вид, цвет. Кроме того, разные виды бактерий обладают разной способностью перерабатывать те или иные вещества (в частности, сахара). В совокупности эти характеристики помогают выявить и вид, и подвид микроба. Точность метода – 90%.

Если гонококки нашлись, то в лаборатории на этих же колониях определят чувствительность к антибиотикам. Тогда врач точно будет знать, какое лекарство сильнее в каждом конкретном случае. Поэтому проводить анализ имеет смысл, даже если другой метод однозначно определил наличие инфекции.

Минус метода – в его длительности. Время, которое готовится такой анализ на гонорею, может составлять от нескольких дней до нескольких недель.

В каких случаях проводится серодиагностика гонореи

Чтобы бороться с болезнью, иммунная система вырабатывает антитела – особые белки-защитники. Они специфичны для каждой инфекции, с которой должны бороться. Медики пошли от обратного – если есть антитела (следствие), то должна быть бактерия (причина). Принцип серологического метода – в наблюдении реакции крови больного, содержащей антитела к гонококкам, с антигенами к этим антителам, содержащимся в диагностическом наборе. Антитела и антигены притягиваются друг к другу, как полюса магнита, и слипаются. Из-за этого в растворе выпадает осадок.

Для диагностики гонореи серологические методы применяются редко. В основном представляют интерес для учёных. Раньше они достаточно широко применялись для выявления гонореи, но от них отказались из-за низкой точности и зависимости результата от субъективных факторов.

Срок ожидания результатов исследования на гонорею серологическими методами – несколько часов. Информативность – от 60 до 75%, в зависимости от диагностического набора антигенов. Серологические реакции не выявляют заболевание в первые недели после заражения – организму требуется время для накопления антител в крови.

Как выявить гонорею с помощью иммуноферментного анализа

Иммуноферментный анализ или ИФА – метод, сменивший собой серологические методы диагностики. Точно так же, позволяет определять в крови отдельные классы антител, специфичных для гонореи, но точнее. Способен диагностировать как острую (несколько дней после заражения), так и хроническую гонорею. Широко применяется для диагностики и скрининга.

Плюсы метода – достаточная точность (75-85%), приемлемая стоимость. Минус – возможно искажение результатов по субъективным (испорченные реактивы, человеческий фактор) и объективным (наличие иммунодефицита, иммунные заболевания) причинам. Сколько времени делается анализ крови на гонорею методом ИФА, зависит от каждой конкретной лаборатории и реактивов (от 1 до 5-6 дней).

Анализ на гонорею методом ПЦР

Метод полимеразной цепной реакции – венец достижений в области диагностики заболеваний. Он очень точен и специфичен. Создатель метода Кэри Муллис получил Нобелевскую Премию по медицине в 1993 году. Принцип метода основан на обнаружении генетического материала возбудителя (днк neisseria gonorrhoeae) в исследуемых образцах биологического материала. Для проведения исследования можно использовать любой биологический материал – кровь, сыворотку, выделения из половых путей, мочеипускательного канала, мазки и соскобы. Материал может быть загрязнён гноем, экссудатом, мочой и выделениями, на эффективность анализа это не влияет.

В материале ищут последовательность генов, характерных для возбудителя. Если находят, то это однозначный признак инфекции. Исследование методом ПЦР на гонорею обладает самой высокой информативностью и специфичностью. Его точность – около 95%. Длительность проведения анализа – от одного до нескольких дней, в зависимости от лаборатории и реактивов.

Экспресс тесты на гонорею в домашних условиях

Самым популярным производителем экспресс-тестов является компания STD Test Express

Специально для людей, живущих активной половой жизнью, разработаны экспресс тесты на гонорею. В основе – принцип, похожий на ИФА (реакция гонококкового антигена с антителами из материала, взятого у человека с подозрением на болезнь). Для исследования подойдут образцы крови, выделений из половых путей, мочеиспускательного канала, прямой кишки.

Главное преимущество экспресс тестов – скорость. Процедура занимает 10-20 минут. Минус метода – частые ложноположительные и ложноотрицательные результаты, зависимость от правильности проведения тестирования, искажение результатов из-за нарушения правил хранения. Поэтому лучше все же заглянуть в ближайшую лабораторию.

Подведем итоги

В большинстве случаев гонококки передаются вместе с другими половыми инфекциями. При подозрении на болезнь проверяться нужно на все возможные заболевания. Поэтому оптимально начать с анализа ПЦР – он готовится быстро, и один мазок можно одновременно исследовать на разные бактерии и вирусы.

Бак посев имеет смысл делать, если о гонорее уже известно, чтобы подтвердить диагноз и определить чувствительность к антибиотикам.

Может ли гонорея не проявляться в анализах? Ложноотрицательные результаты встречаются в самых точных методах. Антибиотики и другие лекарства, особенности организма больного, хроническая инфекция и другие факторы могут изменять вид и форму гонококков, превращать их в так называемые L-формы. В сложных случаях врач назначает провокацию гонореи - намеренное ослабление иммунитета, чтобы простимулировать инфекцию проявиться. Домашний метод провокации прост и приятен - выпить пива и принять горячую ванну, и рекомендуется всем, кому предстоит сдача мазка на бак посев.

Посев на гонорею

Гонорея - это заболевание, передающееся половым путем, которое является одним из самых распространенных среди населения.

Болезнь характеризуется воспалением органов мочевыделительной системы. Частой причиной заражения считаются беспорядочные половые связи без использования средств защиты.

Инфицироваться могут и мужчины, и женщины.

Важно! Гонорея, без своевременного лечения, способствует развитию бесплодия.

Сегодня мы расскажем вам, когда и как следует сдавать посевы на гонококковую инфекцию, и поможем разобраться в результатах анализа.

Посев на гонорею: показания

От момента заражения до первых видимых признаков обычно проходит от 3 до 15 дней. Может протекать бессимптомно.

Характерны следующие симптоматические признаки:

• Выделения гнойного характера;
• Покраснение и оттек уретры;
• Жжение и зуд в области половых органов;
• Болезненность внизу живота;
• Возможно повышение температуры тела;
• Болезненное мочеиспускание.

В том случае, если вы обнаружили у себя эти симптомы, следует как можно скорее обратиться за помощью к врачу. Показанием для обследования является гонококковая инфекция у полового партнера.

Внимание! Переход болезни в хроническую может привести к ряду осложнений и бесплодию.

Подготовка: посев на гонорею

Для бактериологического исследования может использоваться любой биологический материал.

Перед исследованием делают забор:

• Кожи;
• Спермы;
• Слизистых рта, ЖКТ;
• Соскоб мочеполовых путей.

Бактериологический посев назначает уролог или гинеколог.

Для получения достоверного результата, следует знать правила подготовки к бактериологическому посеву.

Если врач назначил проведение мазка, необходимо:

• Не вступать в половые связи за два дня до обследования;
• Не спринцеваться;
• Гигиену половых органов проводить без средств интимной гигиены;
• За 2-3 часа до взятия материла воздержаться от похода в туалет;
• Прекратить прием лекарственных препаратов за неделю до исследования.

У женщин мазок берется в первые дни после окончания менструации.

Посев помещается в термостат при оптимальной влажности и температурных условиях. Для гонококка необходимо соблюдать температурный режим в пределах 37 градусов. После проводят изучение сомнительных колоний.

Видовые особенности роста колоний на агаре:

• Бесцветные или с желтым оттенком;
• Не большие;
• Поверхность гладкая с блеском;
• Немного выпуклые.

Этот способ исследования достаточно информативен. Минусом является большая затрата времени на исследования. С помощью бактериологического исследования можно определить чувствительность микроорганизма к антибактериальным препаратам. Это необходимо для эффективности дальнейшего лечения.

Посев на гонорею из горла

В случае подозрения на гонорейный процесс в горле, необходимо обратится к лору или венерологу. Обязательно следует сдать мазок из зева, миндалин или глотки.

Параллельно сдается анализ из мочеполовых органов. Анализ на гонококковую инфекцию следует сдавать до начала курса лечения. После лечения следует пройти контрольное обследование.

Посев на гонорею из глаза

Пораженное веко отекает и становится синюшно - красным. В процессе большого выделения гноя, веко может слипаться.

Появляется болезненность, зуд и жжение. На анализ берут отделяемое из глаза. Проводят исследование методом ПЦР и бактериологический посев с дальнейшей постановкой на чувствительность к антибиотикам.

Посев на гонорею секрета простаты

Используя массаж предстательной железы, проводят забор секрета простаты.

Это прозрачная жидкость, которую засевают на специальные питательные среды. Через один, два дня можно идентифицировать колонии микроорганизмов. Ставят антибиотикограмму, чтобы определить эффективный препарат для дальнейшего лечения.

Посев на гонорею из ануса

Используют несколько методов для забора материла. В первом случае ватную палочку проводят по перианальным складкам. После кладут в стерильную емкость. Второй способ - это взятие соскоба.

Сроки изготовления посева на гонорею

Лабораторные исследования по длительности могут занимать от пяти до девяти дней.

Это зависит от вида и методики проводимого анализа. Результат микроскопического анализа можно получить примерно через пол часа.

ПЦР выполняется не более одного дня, можно выполнить и экспресс анализ. Палитра ПЦР позволяет параллельно исследовать на наличие сопутствующих инфекций.

Посев на гонорею для определения эффективности лечения

Отсутствие симптоматических признаков гонореи и отрицательные лабораторные исследования – это закономерный результат лечения. Контроль проводят на 10 день после отмены приема антибактериальных препаратов.

Исследование включает проведение троекратного изучения мазка под микроскопом и однократный посев материала на питательную среду.

Мужчинам показано проведения контроля один раз, женщины сдают его трижды. Через две недели отмены лечения, во время месячных и после них.

В случае отсутствия симптоматики, получения отрицательных анализов – человек здоров. Если результаты положительные, а симптомов не наблюдается - это говорит про скрытый процесс.

Курс лечения следует повторить. Отрицательные результаты и наличие признаков воспаления свидетельствует о присутствии в организме другого вида возбудителя.

Посев на гонорею: к какому врачу обратиться

Посевы на гонорею могут, назначит соответствующие специалисты – гинеколог, уролог, венеролог.

Обследование можно пройти в любой государственной или частной клинике. Если вам нужно получить срочные результаты анализов рекомендуем обратиться в частную лабораторию.

Запомните! В случае появления первых симптомов срочно обратитесь к врачу-специалисту.

Посев на гонорею: цена

Стоимость проводимых анализов зависит от метода исследования материала.

Цены будут варьироваться в пределах 150-2000 рублей. Бактериологический посев в ценовой политике составит примерно от 800-1300 рублей.

Если вам нужно выполнить посев на гонорею в Москве, обращайтесь в нашу клинику. Собственная лаборатория позволяет проводить нам исследования быстро, качественно и недорого. При получении результатов, вы можете проконсультироваться у врача венеролога.

В профилактических целях следует использовать средства барьерной контрацепции. Лучше предупредить развитие болезни, чем потом заниматься лечением.

При подозрении на гонорею обращайтесь к грамотным венерологам.

Использование: микробиология, диагностика гонореи, питательная среда для выделения и культивирования гонококка. Сущность изобретения: питательная среда содержит в качестве питательной основы панкреатический гидролизат рыбной муки и солянокислотный гидролизат казеина, в качестве стимулятора роста и источника витаминов - автолизат пекарных или пивных дрожжей, стимулятор роста гемофильных микроорганизмов. Среда дополнительно содержит глюкозу, агар микробиологический, полимиксина-В сульфат, линкомицина гидрохлорид и воду дистиллированную. Среда обеспечивает рост гонококка музейных штаммов и из материала от больных гонореей, сохраняя типичную морфологию микроорганизма, что способствует широкому применению в практическом здравоохранении при диагностике и лечении венерических заболеваний. 3 табл.

Изобретение относится к области медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике гонореи. Ведущими зарубежными фирмами ("Oxoid", "Gibco", "BRL" и др.) выпускаются питательные среды для культивирования гонококка на основе мясных переваров и ферментолизатов с добавлением стерильной нативной крови Из отечественных препаратов известны: питательная среда "Аргинин-агар", диагностическая, сухая, производства НПО "Питательные среды" г. Махачкала которая состоит из следующих компонентов, г: пептон 8,0-12,0; аргинин 0,07-0,3; цистин 0,007-0,03; глутаминовая кислота 1,0-1,8; ЭКД 4,0-7,0; тиамин бромид 0,002-0,007; нитрат железа 0,002-0,01; калий хлористый 0,07-0,2; натрий хлористый 5,0-8,0; хлористый аммоний 0,9-2,0; магний сернокислый 0,4-0,9; глюкоза 4,0-7,0; крахмал 0,5-2,0; трис-буфер 1,0-2,5; агар 13-17,0; бычья сыворотка 153,0-255,0; полимиксина-М сульфат 15000-25000 Ед; линкомицина гидрохлорид 0,001-0,003; вода дистиллированная до 1 л. Недостатком этой среды является: низкая чувствительность, нестабильность результатов по интенсивности роста гонококка. Лиофильновысушенная среда для выделения гонококка (производства НИИ ВСа, г. С.-Петербург) состоящая из основы среды и добавки при следующем соотношении компонентов, г; приведена в таблице 1. Недостатком этой среды является: нестабильность результатов по интенсивности роста гонококка и чувствительности. На практике же, в основном, применяются лабораторно приготовленные безасцитные среды из экстрактов свежего мяса кроликов и свежих бычьих сердец с добавлением пептона и 20% сыворотки крови крупного рогатого скота или стерильной нативной крови. Отсутствие необходимого количества отечественных питательных сред для диагностики гонореи, а также качество их вызывает нарекания со стороны практической службы здравоохранения. Задачей изобретения является создание сухой питательной среды, обеспечивающей стабильность результатов по интенсивности роста и повышенную чувствительность, не уступающей коммерческим средам для диагностики гонококка, и использовать для ее производства непищевые продукты. Поставленная задача решается сбалансированностью компонентного состава среды, содержащей питательную белковую основу, автолизат пекарных или пивных дрожжей, агар, хлористый натрий, ингибиторы посторонней микрофлоры линкомицина гидрохлорид и полимиксина-В сульфат, в качестве питательной основы она содержит панкреатический гидролизат рыбной кормовой муки и солянокислотный гидролизат казеина, кроме того она дополнительно содержит стимулятор роста гемофильных микроорганизмов (ферментативный гидролизат черного альбумина), глюкозу, для повышения стабильности результатов при обследовании больных хронической гонореей возможна добавка к среде сыворотки крови крупного рогатого скота (5-10)% при следующем содержании компонентов, г/л: панкреатический гидролизат рыбной муки 22,0-28,0 кислотный гидролизат казеина 2,8-3,2 автолизат пекарных или пивных дрожжей 0,8-1,2 стимулятор роста гемофильных микроорганизмов 2,0-10,0 глюкоза 9,0-11,0 натрий хлористый 2,9-3,1 агар микробиологический 12,0-15,0 полимиксина-В сульфат 15000-25000 Ед
линкомицина гидрохлорид 0,001-0,003
вода дистиллированная до 1 л
pH 7,3+0,2
Количественное соотношение компонентов питательной среды и ее рН обеспечивают повышенный уровень интенсивности роста гонококка и чувствительности среды. Питательную среду готовят следующим образом: навески основных ингредиентов вносят в колбу с дистиллированной водой. Среду тщательно перемешивают и, закрыв колбу ватно-марлевой пробкой, стерилизуют при (115-119) o C в течение 30 мин. затем охлаждают до температуры (45-50) o C и стерильно, предварительно растворив в стерильном физ. растворе, вносят навески полимиксина-В сульфата и линкомицина гидрохлорида. Среду перемешивают и разливают в стерильные чашки Петри. Для биологического контроля питательных сред использовали культуру Neisseria gonorrhoeae музейных штаммов и материал от больных гонореей. Все посевы культивировали при температуре (37+0,5) o C в атмосфере 10% СО 2 и повышенной влажности в течение 24-48 час: данные в таблице 1. Пример 1. Проверка предлагаемой среды производилась посевом штаммов Neisseria gonorrhoeae и на клиническом материале на питательную среду следующего состава, г:
панкреатический гидролизат рыбной муки 22,0
автолизат пекарных дрожжей 0,8
солянокислотный гидролизат казеина 2,8
стимулятор роста гемофильных микроорганизмов 2,0
глюкоза 9,0
натрий хлористый 2,9
агар микробиологический 12,0
полимиксина-В сульфат 15000 Ед
линкомицина гидрохлорид 0,001
вода дистиллированная до 1 л
рН 7,3+0,2
Учет результатов проводили через 24-48 час культивирования. Пример 2. Проверка предлагаемой среды производилась посевом штаммов Neisseria gonorrhoeae и на клиническом материале на питательную среду с оптимальным содержанием компонентов следующего состава, г:
панкреатический гидролизат рыбной муки 25,0
автолизат пекарных дрожжей 1,0
солянокислотный гидролизат казеина 3,0
стимулятор роста гемофильных микроорганизмов 5,0
глюкоза 10,0
натрий хлористый 3,0
агар микробиологический 13,0
полимиксина-В сульфат 20000 Ед
линкомицина гидрохлорид 0,002
вода дистиллированная до 1 л
pH 7,3+0,2
Учет результатов проводили через 24-48 час культивирования. Пример 3. Проверка пpедлагаемой среды производилась посевом штаммов Neisseria gonorrhoeae и на клиническом материале на питательную среду с максимальным содержанием компонентов следующего состава, г:
панкреатический гидролизат рыбной муки 28,0
автолизат пекарных дрожжей 1,2
солянокислотный гидролизат казеина 3,2
стимулятор роста гемофильных микроорганизмов 10,0
глюкоза 11,0
натрий хлористый 3,1
агар микробиологический 15,0
полимиксина-В сульфат 25000 Ед
линкомицина гидрохлорид 0,003
вода дистиллированная до 1 л
pH 7,3+0,2
Учет результатов проводили через 24-48 час культивирования. Пример 4. Проверка предлагаемой среды производилась посевом штаммов Neisseria gonorrhoeae и на клиническом материале на питательную среду с нарушением количественного соотношения компонентов следующего состава, г:
панкреатический гидролизат рыбной муки 31,0
автолизат пекарных дрожжей 1,4
солянокислотный гидролизат казеина 3,4
стимулятор роста гемофильных микроорганизмов 15,0
глюкоза 13,0
натрий хлористый 3,5
агар микробиологический 20,0
полимиксина-В сульфат 30000 Ед
вода дистиллированная до 1 л
pH 7,3+0,2
Учет результатов проводили через 24-48 час культивирования. Пример 5. Проверка предлагаемой среды производилась посевом штаммов Neisseria gonorrhoeae и на клиническом материале на питательную среду с нарушением количественного соотношения компонентов следующего состава, г:
панкреатический гидролизат рыбной муки 18,0
автолизат пекарных дрожжей 0,5
солянокислотный гидролизат казеина 2,5
стимулятор роста гемофильных микроорганизмов 0,5
глюкоза 5,0
натрий хлористый 2,5
агар микробиологический 10,0
полимиксина-В сульфат 10000 Ед
линкомицина гидрохлорид 0,005
вода дистиллированная до 1 л
pH 7,3+0,2
Учет результатов проводили через 24-48 час культивирования. В таблице 2 дана сравнительная характеристика роста гонококков из клинического материала и музейных штаммов на предлагаемой и известных средах через 24-48 ч роста. Морфология колоний и окрашенных мазков на всех испытуемых средах идентична типичная для гонококка. Из таблицы 2 видно, что предлагаемая среда по интенсивности роста гонококка и чувствительности превосходит коммерческие среды. Нарушение количественного соотношения компонентов среды ведет к резкому ухудшению микробиологических показателей качества предложенной среды. Предлагаемая среда позволяет поддерживать жизнеспособность штаммов Nisseria gonorrhoeae (как свежевыделенных от больных, так и музейных) при пассировании в течение 9 месяцев. В таблице 3 представлены данные жизнеспособности культуры Neisseria gonorrhoeae при культивировании и хранении на плотных средах,
Из таблицы 3 видно, что предлагаемая питательная среда пригодна для диагностических целей при выявлении больных острой и хронической гонореей, а также при получении биомассы Neisseria gonorrhoeae для создания гоновакцин. Источники информации
1. Handbook Culture Media (1982)
2. The manual of microbiological culture media (Gibco BRL 1988)
3. The Oxoid manual of culture media, ingredients and other laboratory services. (Oxoid Limited 1979)
4. Manual of BBL produkts and laboratoru procedures. 1991. 5. Авт. свидетельство N 1451167 г.р. Гаджиева и др. "Питательная среда для выделения гонококков". 6. ФС 42-146 ВС-88 Питательная сpеда для выделения гонококка, сухая.

Формула изобретения

1 Питательная среда для выделения и культивирования гонококка, содержащая питательную основу, автолизат пекарных или пивных дрожжей, агар микробиологический, натрий хлористый, ингибитор посторонней микрофлоры и воду дистиллированную, отличающаяся тем, что в качестве питательной основы она содержит панкреатический гидролизат рыбной муки и солянокислотный гидролизат казеина, дополнительно содержит стимулятор роста гемофильных микроорганизмов, глюкозу, а в качестве ингибитора посторонней микрофлоры полимиксина-В сульфат и линкомицина гидрохлорид при следующем соотношении компонентов, г/л:3 Панкреатический гидролизат рыбной муки7 22 283 Солянокислотный гидролизат казеина7 2,8 3,23 Автолизат пекарных или пивных дрожжей7 0,8 1,23 Стимулятор роста гемофильных микроорганизмов7 2 103 Глюкоза7 9 113 Натрий хлористый7 2,9 3,13 Агар микробиологический7 12 - 153 Полимиксина-В сульфат, Ед7 15000 250003 Линкомицина гидрохлорид7 0,001 0,0033 Вода дистиллированная7 До 1 л3 pH7 7,3 + 0,2

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицинской биотехнологии и касается получения менингококкового адгезина препарата бактериального происхождения, используемого, например, для определения степени адгезии менингококков при их взаимодействии с клетками макроорганизма