Mūsdienu HIV infekcijas diagnostikas metodes. Mūsdienu HIV infekcijas diagnostikas metodes Analītiskie un diagnostiskie raksturlielumi

1 Zvanīšanas mērķis

1.1 Komplekts ir paredzēts vienlaicīgai cilvēka imūndeficīta vīrusa 1. un 2. tipa (HIV-1 un HIV-2) un HIV-1 p24 antigēnu noteikšanai cilvēka serumā un asins plazmā “in vitro”, izmantojot netiešo enzīmu- saistītais imūnsorbcijas tests.

2 Komplekta raksturojums un darbības princips

2.1 Iestatīt saturu:

Komponenta nosaukums	Daudzums
Imunosorbents	2 tabletes
Pozitīvais kontroles paraugs AT (K+AT)	1 pudele, 3 ml
Pozitīvs AG kontroles paraugs (K + AG)	3 pudeles, liofilizēts preparāts
Negatīvs kontroles paraugs (UZ —)	2 pudeles pa 3 ml
Konjugāta šķīdums Nr.1 (RK-1)	1 pudele, 12 ml
Konjugāts Nr.2 (Kg-2)	1 pudele, 1 ml
Šķīdums konjugāta Nr.2 atšķaidīšanai (RR-K2)	2 pudeles pa 18 ml
Buferšķīdums substrātam ( BRS)	2 pudeles pa 18 ml
Hrogēns TMB	1 pudele, 1 ml
Fosfāta buferšķīduma sāls koncentrāts ar Tween (FSB-T×25)	2 pudeles pa 50 ml
Pārtrauciet reaģentu	1 pudele, 12 ml
Reaģenta vannas komplekts ar daudzkanālu pipetes uzgaļiem	1 komplekts
Līmplēve

2.2 "ELISA-HIV 1,2 AGAT" komplekta galvenās sastāvdaļas ir imūnsorbents, konjugāta šķīdums Nr.1 ​​un konjugāts Nr.2.

Imunosorbents ir polistirola plāksne, kuras iedobēs ir adsorbēts rekombinanto HIV-1 (gp41) un HIV-2 (gp36) antigēnu maisījums un monoklonālās antivielas pret HIV-1 p24 antigēnu.

Konjugāta šķīdums Nr.1 ir ar biotīnu iezīmētu monoklonālu maisījums cilvēka antivielas pret HIV-1 p24 antigēnu un ar biotīnu iezīmētiem rekombinantiem HIV-1 un HIV-2 proteīniem.

Konjugāts Nr.2 ir streptavidīns, kas konjugēts ar mārrutku peroksidāzi.

Pozitīvais kontroles paraugs AT– cilvēka asins serums, kas satur antivielas pret HIV-1 un HIV-2, nesatur antivielas pret C hepatīta vīrusu un Treponema pallidum, HIV-1 p24 antigēnu un HBs antigēnu, inaktivēts, karsējot 3 stundas 56 ºC temperatūrā.

Pozitīvs AG kontroles paraugs– cilvēka asins serums, kas satur dabisko HIV-1 p24 antigēnu, nesatur antivielas pret HIV-1, HIV-2, C hepatīta vīrusu un Treponema pallidum un HBs antigēnu, inaktivēts, karsējot 3 stundas 56 ºC temperatūrā.

Negatīvs kontroles paraugs– cilvēka asins serums, kas nesatur antivielas pret HIV-1, HIV-2, HCV, HIV-1 p24 antigēnu un HBs antigēnu, inaktivēts, karsējot 3 stundas 56 ºC temperatūrā.

Komplekta darbības princips. Pievienojot konjugāta šķīdumu Nr. 1 un seruma paraugus plāksnes iedobēs inficētas asinis p24 antigēns saistās gan ar specifiskām antivielām uz cietās fāzes, gan ar monoklonālām biotinilētām anti-p24 antivielām, kas iekļautas konjugāta šķīdumā Nr. 1; HIV specifiskās antivielas saistās gan ar rekombinantiem HIV-1 un HIV-2 antigēniem, kas adsorbēti uz cietās fāzes, gan ar antigēniem, kas iekļauti konjugāta šķīdumā Nr. 1, veidojot antigēnu-antivielu kompleksus. Anti-p24 specifisko antivielu un p24 antigēna imūnkompleksus nosaka ar konjugātu Nr.2. Pēc nesaistīto komponentu nomazgāšanas plāksnes iedobēm pievieno peroksidāzes substrāta (ūdeņraža peroksīda) un TMB hromogēna šķīdumu.

Peroksidāzes reakciju aptur, pievienojot apturēšanas reaģentu (0,9 M sērskābes šķīdumu), un šķīduma krāsas intensitāti iedobēs mēra ar spektrofotometru kā optiskā blīvuma (OD) vērtību pie viļņa garuma 450 nm.

OD vērtība ir tieši proporcionāla specifisku antivielu un/vai p24 antigēna koncentrācijai seruma vai plazmas paraugā. Jo augstāks ir antivielu un/vai p24 antigēna saturs seruma paraugā, jo augstāka ir krāsošanas intensitāte.

2.3 Komplekts ir paredzēts, lai veiktu 24 iestudējumi ELISA: 1 komplekts – 1 sloksne (8 bedrītes). Kopā - 192 definīcijas, ieskaitot kontroles paraugus.

3 Piesardzības pasākumi, strādājot ar komplektu

3.1 Visas komplekta sastāvdaļas izmantotajā koncentrācijā nav toksiskas. Tomēr strādājiet ar visiem cilvēka asins seruma (plazmas) testa paraugiem, kas jāuzskata par potenciāli inficētiem, kas spēj uzglabāt un pārnest HIV, B hepatīta vīrusu vai jebkuru citu patogēnu. vīrusu infekcija, ar atkritumu šķīdumiem un šķidrumiem, dažādām iekārtām, kuras analīzes procesā var būt piesārņotas, komplekta lietošanas laikā ir nepieciešami noteikti drošības pasākumi:

Darbs jāveic speciāli aprīkotā telpā;

Ir nepieciešams strādāt, izmantojot līdzekļus personīgā aizsardzība un veicot piesardzības pasākumus saskaņā ar , , un prasībām.

3.2 Apturēšanas reaģentam, kas satur sērskābi, ir kairinošs efekts. Ja nokļūst uz ādas un gļotādām, nekavējoties skalot ar lielu daudzumu ūdens.

3.3 Strādājot ar komplektu, darba vietām jābūt nodrošinātām ar pieplūdes un izplūdes ventilāciju.

3.4 Visām personām, kas strādā laboratorijā ar komplektiem, ir jāiziet obligātā medicīniskā pārbaude atbilstoši prasībām.

3.5 Medicīnisko atkritumu un/vai neizmantoto komplektu, kam beidzies derīguma termiņš, utilizācija jāveic atbilstoši prasībām.

4 Noteikumi darbam ar komplektu

4.1 Lai izvairītos no nepatiesiem rezultātiem, testa paraugi jāsagatavo un jāuzglabā apstākļos, kas novērš baktēriju augšanu. Seruma paraugi, kas satur agregētus seruma komponentus vai nogulsnes, jādzidrina, centrifugējot (5–10) minūtes ar ātrumu 3000 apgr./min. Seruma paraugus var uzglabāt (2-8) °C temperatūrā ne ilgāk kā 5 dienas. Saldētus paraugus (vēlams līdz temperatūrai vismaz mīnus 20 °C) var uzglabāt ne ilgāk kā 1 gadu. Jāizvairās no atkārtotiem paraugu sasaldēšanas-atkausēšanas cikliem.

Jāatceras, ka paraugi ar hemolīzi, hiperlipidēmiju, baktēriju augšanu, kā arī tie, kas ilgstoši uzglabāti bez sasalšanas, nav piemēroti analīzei.

Rezultātu ticamība ir atkarīga no šādiem noteikumiem:

Nav atļauts lietot komplektu pēc derīguma termiņa beigām, kā arī sajaukt dažādu sēriju komplektu sastāvdaļas;

Katra reaģenta sagatavošanai jāizmanto atsevišķs konteiners;

Neapstrādājiet visus reaģentu pagatavošanai izmantotos traukus ar dezinfekcijas un mazgāšanas līdzekļiem. Ja nepieciešams, noskalojiet ar tekošu dzeramo ūdeni un pēc tam piecas reizes noskalojiet ar destilētu ūdeni;

Lai strādātu ar TMB un PX hromogēnu, ir jāizmanto atsevišķi konteineri šķīdumiem, pipetes uzgaļiem un traukiem.

Ir jāpievērš uzmanība rūpīgai reaģentu sajaukšanai;

Laikam starp plāksnes iedobju piepildīšanu un iztukšošanu ar šķīdumiem un reaģentiem jābūt vismaz 30 s. Iedobumu žāvēšana nav atļauta visos ELISA posmos;

Lietojot mazgātāju, uzraugiet tabletes mazgāšanas šķīduma tvertnes stāvokli un savienojošās šļūtenes: tajās nedrīkst būt baktēriju vai sēnīšu augšanas pazīmes;

Nepieciešams izmantot automātiskās pipetes ar maināmiem uzgaļiem, sertificētas vidējai devai un pipetes rezultātu konsekvencei (kļūda ne vairāk kā 3%);

Apstrādājiet dozatorus un darba virsmas ar šķīdumu, kas satur 70% etilspirta. Nelietot hloramīnu vai citas hloru saturošas vielas;

Darbam ar testa un kontroles paraugiem ieteicams izmantot vienreizējās lietošanas pipetes uzgaļus. Katrs seruma paraugs, kā arī komplekta reaģenti jāsavāc ar atsevišķu galu.

Pievienojot iedobēm RK-1, ar pipetes galu neaiztieciet plāksnes virsmu un iedobēs esošo šķīdumu.

Analīzes laikā jāizvairās no tiešiem saules stariem uz darba virsmas.

4.2 Atverot un izšķīdinot liofilizētās sastāvdaļas, ir jānodrošina, lai uz pudeles vāka un sieniņām nepaliktu sausnas vielas.

5 Analīzei nepieciešamās iekārtas un materiāli

5.1 Vertikāli skenējošs spektrofotometrs, kas ļauj izmērīt šķīdumu optisko blīvumu plāksnes iedobēs pie viļņa garuma 450 nm;

Daļēji vai automātiska ierīce tablešu mazgāšanai (mazgātājs);

Sausā gaisa termostats TS-80 M2 tipa, uzturot temperatūru (37±1) °C, vai tai līdzīgas īpašības;

Vienkanāla automātiskās pipetes ar maināmiem uzgaļiem, kas ļauj izvilkt šķidruma tilpumus no 0,01 līdz 5,0 ml;

8 kanālu automātiskās pipetes ar maināmiem uzgaļiem, kas ļauj izņemt šķidruma tilpumus līdz 0,5 ml;

Mērcilindrs ar tilpumu 2000 ml;

Laboratorijas kolba ar ietilpību 2000 ml;

Stikla pudeles ar ietilpību 20 ml;

Paplātes reaģentiem vai Petri trauciņiem (diametrs 100 mm);

Medicīniskā higroskopiskā vate;

Filtrpapīrs;

Gumijas ķirurģiskie cimdi;

Tilpuma frakcijas šķīdums etilspirts 70 %;

Risinājums ar masas daļaūdeņraža peroksīds 6%;

dejonizēts vai destilēts ūdens;

Konteiners cieto atkritumu savākšanai;

Konteiners šķidro atkritumu novadīšanai.

6 Sagatavošanās analīzei

6.1 Pirms analīzes veikšanas izņemiet reaģentu komplektu no ledusskapja, atveriet kastes vāku un turiet komplekta sastāvdaļas temperatūrā. (18-25) °C 30 min.

Pirms testēšanas rūpīgi sajauciet visus seruma (plazmas) paraugus un reaģentus.

Reaģentu patēriņš testa komplektā, ko nosaka pēc izmantoto sloksņu skaita, ir norādīts A papildinājuma A.1. tabulā.

6.2 Šķīduma sagatavošana plāksnes mazgāšanai

Uzmanību!Šķīdumu plāksnes mazgāšanai sagatavo 15 minūtes pirms analīzes sākuma!

Ja pudelē ar FSB-T×25 ir nogulsnes, pirms lietošanas tā jāuzsilda (37±1) °C temperatūrā, līdz nogulsnes pilnībā izšķīst. Pievienojiet pudeles saturu ar FSB-T×25 mērcilindrā ar tilpumu 2000 ml, pēc tam pievienojiet destilētu ūdeni līdz atzīmei. 1250 ml un uzmanīgi samaisiet šķīdumu. Šķīdumu var uzglabāt (2-8) °C 72 stundas.

Ja tiek izmantota viena vai vairākas sloksnes, pudeles saturu ar FSB-T×25 enerģiski sakratiet (20-30) s, ņem nepieciešamo šķīduma tilpumu (tabula A.1) mērtraukā vai cilindrā, pievieno nepieciešamo daudzumu destilēta ūdens un sajauciet šķīdumu. Neizlietoto FSB-T×25 var uzglabāt slēgtā pudelē (2-8) °C temperatūrā komplekta derīguma termiņa laikā.

6.3. Imūnsorbenta sagatavošana

Imūnsorbents ir gatavs lietošanai.

Atveriet iepakojumu un uzstādiet uz rāmja nepieciešamo sloksņu skaitu. Atlikušās sloksnes 3 mēnešus uzglabāt cieši noslēgtā maisiņā ar desikantu (2-8) °C temperatūrā.

6.4. K + AT, K –, RK-1, RR-K2, BRS un stopreaģenta sagatavošana

K + AT, K – , RK-1, RR-K2, BRS un stopreaģents ir gatavi lietošanai.

Uzmanību! Pudelē ar RK-1 var veidoties nokrišņi. Analīzei jāizmanto supernatanta šķidrums.

Neizmantotos RK-1, RR-K2, BRS un stopreaģentu pēc flakonu atvēršanas var uzglabāt slēgtos flakonos (2-8) °C temperatūrā komplekta derīguma termiņa laikā.

Atlikušos K ​​+ AT un K - pēc atvēršanas flakonu var uzglabāt slēgtos flakonos (2-8) °C temperatūrā komplekta derīguma termiņa laikā.

6.5. K + AG šķīduma pagatavošana

Uzmanību! Sagatavojiet K + AG šķīdumu 15 minūtes pirms analīzes sākuma!

Lai atjaunotu liofilizēto K + AG, pirms pudeles atvēršanas viegli piesitiet, lai nokratītu daļiņas, kas pielipušas pie pudeles vai aizbāžņa sieniņām. Atveriet pudeli un novietojiet aizbāzni otrādi uz sausas virsmas. Pievienojiet pudelei 0,8 ml destilēta ūdens. Aizveriet pudeli ar aizbāzni, noturiet 10 minūtes (18-25) °C temperatūrā un uzmanīgi nolieciet un pagrieziet pudeli, samaisiet tās saturu līdz pilnīgai izšķīdināšanai, izvairoties no putu veidošanās.

Samazinātu K + AG slēgtā pudelē (2-8) °C temperatūrā var uzglabāt vienu mēnesi, mīnus 20 °C temperatūrā sešus mēnešus. Ir atļauta vienreizēja samazināta K + AG sasaldēšana-atkausēšana.

6.6. Kg-2 šķīduma sagatavošana darba atšķaidījumā

No pudeles ar Kg-2 paņemiet A.1. tabulā norādīto tilpumu un pārnesiet to pudelē ar PP-K2. Rūpīgi samaisiet pudeles saturu, izvairoties no putu veidošanās.

Ja lietojat vienu vai vairākas sloksnes, ieņemiet nepieciešamo PP-K2 daudzumu tīrā pudelē, pievienojiet Kg-2 saskaņā ar A.1 tabulu un samaisiet šķīdumu, izvairoties no putu veidošanās.

Uzmanību! Kg-2 šķīdumu darba atšķaidījumā sagatavo tieši pirms lietošanas! Kg-2 šķīdumu darba atšķaidījumā var uzglabāt 15 minūtes (18-25) °C temperatūrā. Izmantojiet tikai jaunu reaģenta vannu un jaunus padomus!

Pārējo Kg-2 var uzglabāt slēgtā flakonā (2-8) °C temperatūrā komplekta derīguma termiņa laikā.

6.7 Darba pamatnes šķīduma sagatavošana

Pirms lietošanas pudele ar TMB hromogēnu jāsasilda temperatūrā (37±1)° Līdz kristāli pilnībā izšķīst.

No pudeles ar TMB hromogēnu paņemiet A.1. tabulā norādīto tilpumu un pārnesiet to pudelē ar BRS. Rūpīgi samaisiet pudeles saturu, izvairoties no putu veidošanās.

Ja tiek izmantota viena vai vairākas sloksnes, ieņemiet nepieciešamo BRS daudzumu tīrā pudelē, pievienojiet TMB hromogēnu saskaņā ar A.1 tabulu un samaisiet šķīdumu, izvairoties no putu veidošanās.

Uzmanību! Pamatnes darba šķīdumu sagatavo tieši pirms lietošanas no gaismas aizsargātā vietā! Šķīdumu var uzglabāt 20 minūtes (18-25) °C temperatūrā no gaismas aizsargātā vietā.

Šķīdumam jābūt aizsargātam no gaismas un saskares ar metāliem vai metāla joniem. Pirms lietošanas substrāta šķīdumam jābūt bezkrāsainam. Trauki, kas reakcijas laikā nonāks saskarē ar substrāta šķīdumu, jāmazgā, neizmantojot sintētiskos mazgāšanas līdzekļus. mazgāšanas līdzekļi. Izmantojiet tikai jaunu reaģenta vannu un jaunus padomus!

Atlikušo TMB hromogēnu var uzglabāt slēgtā flakonā (2–8) °C temperatūrā līdz komplekta derīguma termiņa beigām.

7 Prasības plāksnes mazgāšanai

Visos mazgāšanas posmos ir jākontrolē visu aku piepildījums un pilnīga noņemšanašķidruma (aspirācija) no tiem;

Katras mazgāšanas laikā visas iedobes jāaizpilda ar šķīdumu līdz malām (0,30-0,35 ml katrā iedobē), nepārplūstot vai nepārplūstot šķidrumu no blakus esošajām iedobēm;

Ir nepieciešams 30 s turēt iedobes, kas piepildītas ar plāksnes mazgāšanas šķīdumu;

Katras aspirācijas laikā uzmanīgi izņemiet atlikušo šķidrumu no iedobēm, uzsitot rāmi ar sloksnēm apgrieztā stāvoklī uz vairākas reizes salocīta filtrpapīra, kas novietota uz polietilēna loksnes;

Slikta plāksnes mazgāšana rada nepareizus rezultātus.

8 Analīzes veikšana

8.1 Ielejiet jebkurās divās plāksnes iedobēs 0,07 ml(70 µl) K+AT, pārējās divās atverēs - katrā 0,07 ml(70 µl) K + AG, pārējās trīs bedrēs - katrā 0,07 ml(70 µl) UZ - .

Uzmanību! Veicot ELISA testu uz vienas sloksnes, ir atļauts izmantot divas iedobes K – -, vienu iedobi K + AT un vienu iedobi K + AG.

Ielejiet atlikušajās plāksnes iedobēs 0,07 ml(70 µl) pētīto cilvēka asins seruma (plazmas) paraugu.

Uzmanību! Katrs paraugs jāsavāc ar vienreiz lietojamo uzgali!

8.2 Visās plāksnes iedobēs virs kontroles paraugiem un asins seruma (plazmas) testa paraugiem uzreiz depozīts līdz 0,05 ml(50 µl) RK-1. Sajauciet iedobju saturu, viegli piesitot pa šķīvja malām.

8.3 (37 ± 1) ° No iekšienes 60 min.

Uzmanību!(1-2) minūtes pirms inkubācijas beigām sagatavo Kg-2 šķīdumu darba atšķaidījumā (6.6. sadaļa).

8.4 Noņemiet iedobju saturu, izmantojot paplāksni, pēc tam mazgājiet plāksnes iedobes ar šķīdumu plāksnes mazgāšanai (6.2. sadaļa). septiņas reizes.

8.5 Ielejiet visās plāksnes iedobēs 0,15 ml(150 µl) šķīdumu Kg-2 darba atšķaidījumā (6.6. punkts).

8.6 Plāksni pārklāj ar plēvi vai aizver ar vāku un inkubē termostatā temperatūrā (37 ± 1) ° No iekšienes 10 min.

8.7 Noņemiet plāksnes iedobju saturu, izmantojot paplāksni, pēc tam mazgājiet plāksnes iedobes ar plākšņu mazgāšanas šķīdumu (6.2. sadaļa). septiņas reizes.

8.8 Ielejiet visās plāksnes iedobēs 0,15 ml(150 µl) substrāta darba šķīdums(6.7. punkts).

Sagatavojot pamatnes darba šķīdumu (6.7. punkts) f Laka ar TMB hromogēnu pirms lietošanas jāuzsilda (3-5) minūtes (37)± 1) ° C, līdz kristāli ir pilnībā izšķīduši.

8.9 Plāksni pārklāj ar plēvi vai aizver ar vāku un inkubē termostatā temperatūrā (37 ± 1) ° AR vietā, kas ir aizsargāta no gaismas 15 minūtes.

Uzmanību! Beidzoties inkubācijai iedobēs ar seruma paraugiem, kas satur antivielas pret HIV-1 un/vai HIV-2 un/vai HIV-1 p24 antigēnu, šķīduma krāsa mainīsies no bezkrāsaina uz zilu ar dažādu intensitāti atkarībā no koncentrācijas. antivielu un/vai antigēnu daudzums pārbaudāmajā seruma paraugā.

8.10 Apturiet peroksidāzes reakciju, pievienojot 0,05 ml(50 µl) apturēt reaģentu.

Uzmanību! Iedobēs ar seruma paraugiem, kas satur antivielas pret HIV-1 un/vai HIV-2 un/vai HIV-1 p24 antigēnu, šķīduma krāsa mainīsies no zilas uz dzeltenu ar dažādu intensitāti.

8.11 Ne vēlāk kā (1-2) minūtes pēc reakcijas apturēšanas nosaka OD iedobēs viena viļņa režīmā pie viļņa garuma 450 nm.

9 Analīzes rezultātu apstrāde

9.2 Rezultāti tiek ņemti vērā tikai tad, ja:

OPsr K vērtība - nepārsniedz 0,2 OE;

Katrai atsevišķai OP K vērtībai nevajadzētu atšķirties no OPsr K - vairāk kā par 30%. Ja viena no trim OP K vērtībām pārsniedz šo robežu, tā ir jāizslēdz no OPsr K - aprēķina. Ja divas no trim OD K vērtībām ir ārpus šīs robežas, analīze jāatkārto, izmantojot jaunas komplekta reaģentus;

OPsr K + AT vērtība ir lielāka par 1,0 OE;

OPsr K + AG vērtība ir lielāka par 1,0 OU.

9.3 Ja ir izpildīti iepriekš minētie nosacījumi, aprēķina kritisko vērtību (OPcrit.), OE, izmantojot formulu (1):

OPcrit. = OPsr K - + 0,14 (1).

10 Analītiskie un diagnostiskie raksturlielumi

Jutīgums reaģentu komplekts ELISA-HIV 1.2 AGAT HIV-1 p24 antigēna noteikšanai –

Specifiskums reaģentu komplekts ELISA-HIV 1.2 AGAT– 100% AT(-)HIV standarts. Standarta serumu panelis, kas nesatur antivielas pret cilvēka imūndeficīta vīrusa 1. un 2. tipa (HIV-1,2) un HIV-1 (p24) antigēnu.OCO42-28-214-02P.CatNo.INS-20. CJSC "MBS"

11 Iestatiet atbrīvošanas veidlapu

11.1 Komplekts ir pieejams piecās konfigurācijas opcijās:

1 1P komplekts – manuāla analīze. Komplekts ir paredzēts, lai veiktu 12 ELISA iestatījumus uz saliekamas plāksnes: 1 palaišana – 1 sloksne (8 iedobes). Kopā – 96 noteikšanas, ieskaitot kontroles paraugus;

2 komplekts 2M – manuāla analīze. Komplekts ir paredzēts 2 ELISA testu veikšanai uz monolītām plāksnēm: 1 tests – 1 plate. Kopā – 192 noteikšanas, ieskaitot kontroles paraugus;

3 komplekts 2P– analīzes veikšana manuāli. Komplekts ir paredzēts, lai veiktu 24 iestudējumi ELISA 2 demontējams x tabletes: 1 iestatījums – 1 sloksne (8 iedobes). Kopā - 192 definīcijas, ieskaitot kontroles paraugus;

4 komplekts A2M – analīze uz automātiskā analizatora. Komplekts ir paredzēts 2 ELISA testu veikšanai uz monolītām plāksnēm: 1 tests – 1 plate. Kopā – 192 noteikšanas, ieskaitot kontroles paraugus;

5 komplekts A2P – analīze uz automātiskā analizatora. Komplekts ir paredzēts, lai veiktu 24 ELISA iestatījumus uz 2 saliekamām plāksnēm: 1 palaišana – 1 sloksne (8 iedobes). Kopā 192 noteikšanas, ieskaitot kontroles paraugus.

12 Komplekta uzglabāšanas un lietošanas nosacījumi

12.1 Komplekts visu derīguma termiņu jāuzglabā tīrā telpā, aizsargātā no mitruma un gaismas, temperatūrā (2-8) ° C. Nesasaldējiet komplekta sastāvdaļas.

12.2 Lai iegūtu ticamus rezultātus, ir stingri jāievēro komplekta lietošanas instrukcijas.

12.3 Komplekta derīguma termiņš – 12 mēneši.

Pielikums A

A.1. tabula – ELISA komplekta reaģentu patēriņš

reaģents, ml

Izmantoto sloksņu skaits, gab.

Šķīduma sagatavošana tabletes mazgāšanai

FSB-T×25

Destilēts ūdens

Kg-2 šķīduma sagatavošana darba atšķaidījumā

RR-K2

Darba substrāta šķīduma sagatavošana

Hrogēns TMB

Bibliogrāfija

	Sanitārie noteikumi	Baltkrievijas Republikas Veselības ministrijas 1998.gada 16.decembra rīkojums Nr.351 Par resoru nolikuma, kas regulē ar HIV/AIDS saistītus jautājumus, pārskatīšanu
	Baltkrievijas Republikas Veselības ministrijas 2002.gada 25.novembra rīkojums Nr.165 Par veselības aprūpes iestāžu veikto dezinfekciju un sterilizāciju
	Baltkrievijas Republikas Veselības ministrijas 2010.gada 28.aprīļa rezolūcija Nr.47 Par obligātās veikšanas kārtības instrukcijas apstiprināšanu medicīniskās pārbaudes darbu un dažu Baltkrievijas Republikas Veselības ministrijas lēmumu atzīšanu par spēkā neesošiem

Unikāls reģistra ieraksta numurs

Reģistrācijas numurs Medicīniska iekārta

FSR 2011/10182

Medicīniskās ierīces valsts reģistrācijas datums

Medicīniskā produkta nosaukums

Reaģentu komplekts "MilaLab-IFA-HIV-AGAT" enzīmu imūnanalīzes testu sistēma antivielu noteikšanai pret cilvēka imūndeficīta vīrusa 1. un 2.tipa (HIV-1 un HIV-2), HIV-1 grupas O un HIV-1 p24 antigēnu saskaņā ar TU 9398 -187-05941003-2017
kas sastāv no: - Imunosorbents - polistirola 96 iedobju izjaucama tablete strēmelēs (vai iedobēs), kuras iedobēs tiek sorbēti mākslīgie antigēni - gp160, gp41, p31 HIV-1, gp41 HIV-1 grupa O, gp36 HIV-2 un antivielas pret HIV-1 p24 antigēnu: 1. komplekts (1 tablete), 2. komplekts (2 tabletes), 3. komplekts (5 tabletes), - Konjugāts-1: 1. komplekts (1 flakons 1,2 ml), 2. komplekts (1 flakons. 1,2 ml), 3. komplekts (1 flakons 3,6 ml vai 3 flakoni pa 1,2 ml katrā), - Konjugāts-2: 1. komplekts (1 flakons 2,0 ml), 2. komplekts (1 flakons 2,0 ml). 2,0 ml), 3. komplekts (1 flakons ar 4,0 ml vai 2 flakoni pa 2,0 ml), - RRK-1 - šķīdums atšķaidīšanai Konjugāts-1: komplekts 1 (1 flakons ar 12,0 ml), komplekts 2 (1 flakons 12,0 ml), komplekts 3 (3 flakoni 12,0 ml) katrs), - RRK-2 - šķīdums atšķaidīšanai Konjugāts-2: komplekts 1 (1 flakons 20,0 ml), komplekts 2 (1 pudele 20,0 ml), komplekts 3 (2 pudeles pa 20,0 ml katrā), - K+AT - kontrole pozitīvs paraugs kas satur antivielas pret HIV: komplekts 1 (1 flakons 2,0 ml), komplekts 2 (1 flakons 2,0 ml), komplekts 3 (1 flakons 4,0 ml vai 2 flakoni 2,0 ml) , - K+AG - kontroles pozitīvs paraugs, kas satur mākslīgo HIV-1 p24 antigēns: 1. komplekts (1 flakons 2,0 ml), 2. komplekts (1 flakons 2,0 ml), 3. komplekts (1 flakons 4, 0 ml vai 2 pudeles pa 2,0 ml), - K- - kontrole negatīvs paraugs: komplekts 1 (1 pudele 2,5 ml), komplekts 2 (1 pudele 2,5 ml), komplekts 3 (1 pudele 5,0 ml vai 2 pudeles 2,5 ml katra), - PR - skalošanas šķīdums: komplekts 1 (1 pudele 50,0 ml), komplekts 2 (1 pudele 120,0 ml), komplekts 3 (2 pudeles pa 120,0 ml katrā), - Stop reaģents: komplekts 1 (1 pudele 25,0 ml), komplekts 2 (2 pudeles pa 25,0 ml), komplekts 3 (2 pudeles pa 50,0 ml vai 4 pudeles pa 25,0 ml), - SB - substrāta buferšķīdums: komplekts 1 ( 1 pudele 25,0 ml), komplekts 2 (1 pudele 25,0 ml), komplekts 3 (2 pudeles 50,0 ml vai 3 pudeles 25,0 ml), - TMB - šķīdums kas satur 3,3",5,5"-tetrametilbenzidīnu: 1. komplekts (1 pudele ar 2,5 ml), komplekts 2 (1 pudele ar 2,5 ml), komplekts 3 (2 pudeles pa 3,5 ml vai 3 pudeles pa 2,5 ml). Piederumi: - vāciņi polistirola 96 bedrīšu plāksnēm: komplekts 1 (1 gab.), komplekts 2 (2 gab.), komplekts 3 (5 gab.) vai - aizsargplēves ELISA plāksnēm: komplekts 1 (2 gab.) , komplekts 2 (4 gab.), komplekts 3 (10 gab.), - vienreizējās lietošanas uzgaļi: komplekts 1 (16 gab.), komplekts 2 (32 gab.), komplekts 3 (80 gab.), - plastmasas paplātes šķidrajiem reaģentiem : komplekts 1 (2 gab.), komplekts 2 (4 gab.), komplekts 3 (10 gab.), - plastmasas maisiņi ar Zip-Lock: komplekts 1 (1 gab.), komplekts 2 (2 gab.) , komplekts 3 (3 gab.).

Organizācijas nosaukums - medicīniskās ierīces pieteicējs

Medicīniskās ierīces pieteikuma iesniedzējas organizācijas atrašanās vieta

Medicīniskās ierīces pieteikuma iesniedzējas organizācijas juridiskā adrese

603014, Krievija, Ņižņijnovgoroda, st. Kominterne, 47

Medicīniskās ierīces ražotāja vai medicīniskās ierīces ražotāja nosaukums

SIA "NPO "Diagnostikas sistēmas"

Organizācijas - medicīniskās ierīces ražotāja vai medicīniskās ierīces ražotāja - organizācijas atrašanās vieta

603093, Krievija, Ņižņijnovgoroda, st. Jabloņeva, 22 gadi, pastkaste 69

Organizācijas-medicīniskās ierīces ražotāja vai medicīniskās ierīces ražotāja-organizācijas juridiskā adrese

Savlaicīga HIV infekcijas diagnostika kļūst par ārkārtīgi svarīgu pasākumu, jo agrīna ārstēšanas uzsākšana lielā mērā var noteikt tālākai attīstībai slimību un paildzina pacienta dzīvi. IN pēdējie gadi Tā identificēšanā ir panākts ievērojams progress briesmīga slimība: Vecās testa sistēmas tiek aizstātas ar modernākām, pārbaudes metodes kļūst pieejamākas, un to precizitāte ievērojami palielinās.

Šajā rakstā mēs runāsim par mūsdienu HIV infekcijas diagnostikas metodēm, kuru zināšanas ir noderīgas savlaicīga ārstēšanašo problēmu un uzturēt normālu pacienta dzīves kvalitāti.

HIV diagnostikas metodes

Krievijā, lai diagnosticētu HIV infekciju, standarta procedūra, kas ietver divus līmeņus:

• ELISA pārbaudes sistēma(skrīninga analīze);
• imūnblotēšana (IB).

Diagnozei var izmantot arī citas metodes:

• ātrās pārbaudes.

ELISA testu sistēmas

Diagnozes pirmajā posmā HIV infekcijas noteikšanai tiek izmantots skrīninga tests (ELISA), kura pamatā ir HIV proteīni, kas izveidoti laboratorijās, kas uztver specifiskas antivielas, kas organismā veidojas, reaģējot uz infekciju. Pēc to mijiedarbības ar testa sistēmas reaģentiem (enzīmiem) mainās indikatora krāsa. Tālāk šīs krāsu izmaiņas tiek apstrādātas, izmantojot īpašu aprīkojumu, kas nosaka veiktās analīzes rezultātu.

Šādi ELISA testi var uzrādīt rezultātus dažu nedēļu laikā pēc HIV infekcijas ievadīšanas. Šis tests nenosaka vīrusa klātbūtni, bet nosaka antivielu veidošanos pret to. Dažreiz cilvēka organismā antivielu veidošanās pret HIV sākas pēc 2 nedēļām pēc inficēšanās, bet lielākajai daļai cilvēku tās tiek ražotas ilgāk. vēlāk, pēc 3-6 nedēļām.

Ir četras ELISA testu paaudzes ar dažādu jutību. Pēdējos gados arvien vairāk tiek izmantotas trešās un ceturtās paaudzes testu sistēmas, kuru pamatā ir sintētiskie peptīdi vai rekombinantie proteīni un kurām ir lielāka specifika un precizitāte. Tos var izmantot, lai diagnosticētu HIV infekciju, uzraudzītu HIV izplatību un nodrošinātu drošību testēšanas laikā ziedotas asinis. III un IV paaudzes ELISA testu sistēmu precizitāte ir 93-99% (Rietumeiropā ražotie testi ir jutīgāki - 99%).

Lai veiktu ELISA testu, no pacienta vēnas ņem 5 ml asiņu. Starp pēdējā tikšanās pārtikai un analīzei vajadzētu aizņemt vismaz 8 stundas (parasti to veic no rīta tukšā dūšā). Šādu testu ieteicams veikt ne agrāk kā 3 nedēļas pēc aizdomām par infekciju (piemēram, pēc neaizsargāta dzimumakta ar jaunu dzimumpartneri).

ELISA testa rezultāti tiek iegūti 2-10 dienu laikā:

• negatīvs rezultāts: norāda uz HIV infekcijas neesamību un neprasa sazināties ar speciālistu;
• viltus negatīvs rezultāts: var novērot agrīnās stadijas infekcija (līdz 3 nedēļām), ar vēlīnās stadijas AIDS ar smagu imūnsupresiju un nepareizu asins sagatavošanu;
• viltus pozitīvs rezultāts: var novērot dažu slimību un nepareizas asins sagatavošanas gadījumā;
• pozitīvs rezultāts: norāda uz infekciju HIV infekcija, nepieciešama IB veikšana un pacientam jāsazinās ar AIDS centra speciālistu.

Kāpēc ELISA tests var dot viltus pozitīvus rezultātus?

Viltus pozitīvi HIV ELISA testa rezultāti var rasties nepareizas asins apstrādes dēļ vai pacientiem ar šādiem stāvokļiem un slimībām:

• multiplā mieloma;
• infekcijas slimības, ko izraisa Epšteina-Barra vīruss;
• stāvoklis pēc ;
• autoimūnas slimības;
• uz grūtniecības fona;
• stāvoklis pēc vakcinācijas.

Iepriekš aprakstīto iemeslu dēļ asinīs var būt nespecifiskas krusteniski reaģējošas antivielas, kuru veidošanos nav izraisījusi HIV infekcija.

Pēdējos gados viltus pozitīvu rezultātu biežums ir ievērojami samazinājies, jo tiek izmantotas III un IV paaudzes testa sistēmas, kas satur jutīgākus peptīdus un rekombinantos proteīnus (tie tiek sintezēti, izmantojot gēnu inženierija in vitro). Pēc šādu ELISA testu ieviešanas viltus pozitīvu rezultātu biežums ievērojami samazinājās un ir aptuveni 0,02-0,5%.

Atklāšana ir nepatiesa pozitīvs rezultāts nenozīmē, ka cilvēks ir inficēts ar HIV. Šādos gadījumos PVO iesaka veikt citu ELISA testu (obligāti IV paaudzes).

Pacienta asinis tiek nosūtītas uz references vai arbitrāžas laboratoriju ar atzīmi “atkārtot” un pārbaudītas, izmantojot IV paaudzes ELISA testu sistēmu. Ja jaunās analīzes rezultāts ir negatīvs, pirmais rezultāts tiek uzskatīts par kļūdainu (viltus pozitīvu) un IS netiek veikts. Ja otrā testa rezultāts ir pozitīvs vai apšaubāms, pacientam pēc 4-6 nedēļām jāveic IB, lai apstiprinātu vai atspēkotu HIV infekciju.

Imūnblotēšana

Galīgo HIV infekcijas diagnozi var veikt tikai pēc pozitīva imūnblotēšanas (IB) rezultāta iegūšanas. Lai to veiktu, tiek izmantota nitrocelulozes sloksne, uz kuras tiek uzklāti vīrusu proteīni.

Asins paraugu ņemšana IB tiek veikta no vēnas. Pēc tam tas tiek pakļauts īpašai apstrādei, un tā serumā esošās olbaltumvielas tiek atdalītas īpašā želejā atbilstoši to uzlādei un molekulārais svars(manipulācija tiek veikta, izmantojot īpašu aprīkojumu elektriskā lauka ietekmē). Uz asins seruma gēla tiek uzklāta nitrocelulozes sloksne un speciālā kamerā tiek veikta blotēšana (“blotēšana”). Sloksne tiek apstrādāta un, ja izmantotie materiāli satur antivielas pret HIV, tie saistās ar antigēnu joslām uz IB un parādās kā līnijas.

IB tiek uzskatīts par pozitīvu, ja:

• pēc Amerikas CDC kritērijiem - uz sloksnes ir divas vai trīs līnijas gp41, p24, gp120/gp160;
• saskaņā ar Amerikas FDA kritērijiem lentē ir divas līnijas p24, p31 un līnija gp41 vai gp120/gp160.

99,9% gadījumu pozitīvs IB rezultāts norāda uz HIV infekciju.

Ja līniju nav, IB ir negatīvs.

Identificējot līnijas ar gr160, gr120 un gr41, IB ir apšaubāma. Šis rezultāts var rasties, ja:

• onkoloģiskās slimības;
• grūtniecība;
• biežas asins pārliešanas.

Šādos gadījumos ir ieteicams atkārtot pētījumu, izmantojot cita uzņēmuma komplektu. Ja pēc papildu IB rezultāts paliek apšaubāms, tad novērošana ir nepieciešama sešus mēnešus (IB tiek veikta ik pēc 3 mēnešiem).

Polimerāzes ķēdes reakcija

PCR tests var noteikt vīrusa RNS. Tā jutība ir diezgan augsta un ļauj atklāt HIV infekciju 10 dienu laikā pēc inficēšanās. Dažos gadījumos PCR var dot viltus pozitīvi, jo tā augstā jutība var reaģēt arī uz antivielām pret citām infekcijām.

Šī diagnostikas metode ir dārga, un tai ir nepieciešams īpašs aprīkojums un augsti kvalificēti speciālisti. Šie iemesli neļauj veikt iedzīvotāju masveida testēšanu.

PCR izmanto šādos gadījumos:

• atklāt HIV jaundzimušajiem, kas dzimuši no HIV inficētām mātēm;
• atklāt HIV “logu periodā” vai šaubīgas IB gadījumā;
• kontrolēt HIV koncentrāciju asinīs;
• donoru asiņu izpētei.

Tikai PCR tests nenosaka HIV diagnozi, bet tiek veikts kā a papildu metode diagnostika, lai atrisinātu strīdīgas situācijas.

Ekspres metodes

Viens no jauninājumiem HIV diagnostikā ir eksprestesti, kuru rezultātus var novērtēt 10-15 minūšu laikā. Visefektīvākais un precīzus rezultātus iegūti, izmantojot imūnhromatogrāfiskos testus, kuru pamatā ir kapilārās plūsmas princips. Tās ir īpašas sloksnes, uz kurām tiek uzklātas asinis vai citi testa šķidrumi (siekalas, urīns). Ja ir antivielas pret HIV, pēc 10-15 minūtēm uz testa parādās krāsaina un kontroles josla - pozitīvs rezultāts. Plkst negatīvs rezultāts– parādās tikai vadības josla.

Tāpat kā ar ELISA testiem, ātro testu rezultāti jāapstiprina ar IB analīzi. Tikai pēc tam var noteikt HIV infekcijas diagnozi.

Ir pieejami ātrās mājas testēšanas komplekti. OraSure Technologies1 tests (ASV) ir FDA apstiprināts, pieejams bez receptes un to var izmantot HIV noteikšanai. Pēc pārbaudes, ja rezultāts ir pozitīvs, pacientam ieteicams veikt pārbaudi plkst specializētais centrs lai apstiprinātu diagnozi.

Citi testi priekš mājas lietošanai FDA vēl nav apstiprinājusi, un to rezultāti var būt ļoti apšaubāmi.

Neskatoties uz to, ka ātrās pārbaudes precizitāte ir zemāka par IV paaudzes ELISA testiem, tos plaši izmanto iedzīvotāju papildu testēšanai.

Jūs varat veikt testus HIV infekcijas noteikšanai jebkurā klīnikā, centrālajā rajona slimnīcā vai specializētos AIDS centros. Krievijas teritorijā tie tiek veikti absolūti konfidenciāli vai anonīmi. Katrs pacients var sagaidīt medicīnisku vai psiholoģisku konsultāciju pirms vai pēc pārbaudes. Jums būs jāmaksā tikai par HIV testiem komerciālos apstākļos medicīnas iestādēm, un iekšā valsts klīnikas un slimnīcās tie tiek veikti bez maksas.

Lasiet par veidiem, kā jūs varat inficēties ar HIV un kādi mīti pastāv par iespējām inficēties.