Metode moderne pentru diagnosticarea infecției cu HIV. Metode moderne de diagnosticare a infecției cu HIV Caracteristici analitice și diagnostice

1 Setați atribuirea

1.1 Trusa este destinată detectării simultane a anticorpilor împotriva virusului imunodeficienței umane de primul și al doilea tip (HIV-1 și HIV-2) și antigenului HIV-1 p24 în ser și plasmă umană “in vitro” prin metoda enzimei indirecte -test imunosorbent legat.

2 Caracteristici și principiul de funcționare al setului

2.1 Setul include:

Numele componentului	Cantitate
Imunosorbant	2 comprimate
Control pozitiv AT (K + AT)	1 flacon, 3 ml
Eșantion de control pozitiv al AG (K + AG)	3 flacoane, preparat liofilizat
Control negativ (LA -)	2 flacoane de 3 ml
Soluția conjugată nr. 1 (RC-1)	1 flacon, 12 ml
Conjugați nr. 2 (Kg-2)	1 sticla, 1 ml
Soluția de diluare conjugată nr. 2 (RR-K2)	2 sticle de 18 ml
Soluție tampon substrat ( BRS)	2 sticle de 18 ml
Cromogen TMB	1 sticla, 1 ml
Concentrat Tween PBS (FSB-T × 25)	2 sticle de 50 ml
Opriți reactivul	1 flacon, 12 ml
Kit tava reactiv cu sfaturi pentru pipete multicanal	1 set
Film adeziv

2.2 Componentele principale ale kitului ELISA-HIV 1,2 AGAT sunt soluția imunosorbentă, conjugată nr. 1 și conjugatul nr. 2.

Imunosorbant este o placă de polistiren în godeurile căreia se sorbește un amestec de antigeni recombinanti HIV-1 (gp41) și HIV-2 (gp36) și anticorpi monoclonali împotriva antigenului HIV-1 p24.

Soluția conjugată nr. 1 este un amestec de anticorpi umani monoclonali marcați biotin împotriva antigenului HIV-1 p24 și proteine recombinate HIV-1 și HIV-2 marcate cu biotină.

Conjugați nr. 2 este streptavidină conjugată cu peroxidază de hrean.

Control pozitiv AT- ser de sânge uman care conține anticorpi împotriva HIV-1 și HIV-2, care nu conține anticorpi împotriva hepatitei C și Treponema pallidum, antigen HIV-1 p24 și antigen HBs, inactivat prin încălzire timp de 3 ore la 56 ° C.

Eșantion de control pozitiv al AG- ser de sânge uman care conține antigenul nativ HIV-1 p24, fără anticorpi împotriva HIV-1, HIV-2, virusul hepatitei C și Treponema pallidum și antigen HBs, inactivat prin încălzire timp de 3 ore la o temperatură de 56 ° C.

Control negativ- ser de sânge uman care nu conține anticorpi împotriva HIV-1, HIV-2, VHC, antigen HIV-1 p24 și antigen HBs, inactivat prin încălzire timp de 3 ore la 56 ° C.

Principiul setului. Când o soluție de conjugat nr. 1 și probe de seruri de sânge infectat sunt adăugate la godeurile plăcii, antigenul p24 se leagă atât la anticorpii specifici din faza solidă, cât și la anticorpii monoclonali anti-p24 biotinilați incluși în soluția conjugată nr. 1; Anticorpii specifici HIV se leagă atât la antigenii recombinați ai HIV-1 și HIV-2, adsorbiți pe faza solidă, cât și la antigenii incluși în soluția conjugată nr. 1, formând complecși antigen-anticorp. Complexele imune de anticorpi specifici anti-p24 și antigenul p24 sunt detectate de conjugat # 2. După spălarea componentelor nelegate, în godeurile plăcii se adaugă o soluție de substrat de peroxidază (peroxid de hidrogen) și cromogen TMB.

Reacția peroxidazei este oprită prin adăugarea unui reactiv stop (soluție de acid sulfuric 0,9 M), iar intensitatea culorii soluției din godeuri este măsurată pe un spectrofotometru ca valoare a densității optice (OD) la o lungime de undă de 450 nm.

Valoarea OD este direct proporțională cu concentrația de anticorpi specifici și / sau antigen p24 într-o probă de ser sau plasmă. Cu cât conținutul de anticorpi și / sau antigen p24 este mai mare în proba de ser, cu atât este mai mare intensitatea colorării.

2.3 Setul este conceput pentru a fi ținut 24 de spectacole ELISA: 1 set - 1 bandă (8 găuri). Total - 192 definiții inclusiv probe de control.

3 Precauții la manipularea kitului

3.1 Toate componentele kitului sunt netoxice în concentrațiile utilizate. Cu toate acestea, lucrați cu toate probele de ser de sânge uman (plasmă), care ar trebui considerate ca fiind potențial infecțioase, capabile să stocheze și să transmită HIV, virusul hepatitei B sau orice alt agent cauzator al infecției virale, cu soluții reziduale și lichide, diverse echipamente care poate fi contaminat, procesul de analiză necesită anumite măsuri de siguranță la utilizarea kitului:

Lucrarea trebuie efectuată într-o încăpere special echipată;

Este necesar să se lucreze cu utilizarea echipamentului individual de protecție și să se ia măsuri de precauție în conformitate cu cerințele ,, și.

3.2 Reactivul de oprire care conține acid sulfuric este iritant. În caz de contact cu pielea și mucoasele, clătiți imediat cu multă apă.

3.3 Când lucrați cu un set, locurile de muncă trebuie să fie prevăzute cu ventilație de alimentare și evacuare.

3.4 Toate persoanele care lucrează în laborator cu trusele trebuie să fie supuse unui examen medical obligatoriu în conformitate cu cerințele.

3.5 Deșeurile medicale și / sau trusele expirate neutilizate trebuie eliminate în mod corespunzător.

4 Reguli pentru lucrul cu setul

4.1 Pentru a exclude rezultatele false, probele testate trebuie să fie preparate și depozitate în condiții care împiedică dezvoltarea bacteriilor. Este necesar să se clarifice probele de ser care conțin componente serice agregate sau sedimente prin centrifugare timp de (5-10) minute la o viteză de rotație de 3000 rpm. Probele de ser pot fi păstrate la o temperatură (2-8) ° С timp de cel mult 5 zile. Probele congelate (de preferință până la o temperatură de cel puțin minus 20 ° C) pot fi păstrate timp de cel mult 1 an. Trebuie evitate ciclurile repetate de îngheț-dezgheț al probelor.

Trebuie reamintit faptul că probele cu hemoliză, hiperlipidemie, creștere bacteriană, precum și cele care au fost depozitate mult timp fără îngheț, nu sunt potrivite pentru analiză.

Fiabilitatea rezultatelor depinde de îndeplinirea următoarelor reguli:

Nu este permisă utilizarea kitului după data de expirare, precum și amestecarea componentelor kiturilor din diferite serii;

Pentru prepararea fiecărui reactiv trebuie utilizat un recipient separat;

Nu tratați toate ustensilele utilizate pentru prepararea reactivilor cu dezinfectanți și detergenți. Dacă este necesar, clătiți cu apă potabilă, apoi clătiți de cinci ori cu apă distilată;

Pentru a lucra cu cromogenul TMB și PX, este necesar să folosiți recipiente separate pentru soluții, vârfuri de pipetă și vase.

Este necesar să se acorde atenție amestecării minuțioase a reactivilor;

Timpul dintre umplerea și golirea godeurilor plăcii cu soluții și reactivi trebuie să fie de cel puțin 30 de secunde. Uscarea puțurilor nu este permisă în toate etapele ELISA;

Când utilizați mașina de spălat, monitorizați starea recipientului pentru soluția de clătire a plăcilor și furtunurile de conectare: acestea nu trebuie să prezinte semne de creștere bacteriană sau fungică;

Este necesar să se utilizeze pipete automate cu vârfuri înlocuibile, certificate de valoarea dozei medii și de repetabilitatea rezultatelor pipetării (eroarea nu depășește 3%);

Distribuitoarele și suprafețele de lucru trebuie tratate cu o soluție cu o fracție de volum de alcool etilic de 70%. Nu utilizați cloramină și alte substanțe care conțin clor;

Sfaturi de pipetă de unică folosință sunt recomandate pentru manipularea probelor de testare și control. Fiecare probă de ser, precum și reactivii kitului trebuie luate cu un vârf separat.

Când adăugați PK-1 la godeuri, nu atingeți suprafața plăcii și soluția din godeuri cu vârful pipetei.

În timpul analizei, evitați lumina directă a soarelui pe suprafața de lucru.

4.2 La deschiderea și dizolvarea componentelor liofilizate, este necesar să vă asigurați că nu rămâne materie uscată pe capacul și pereții flacoanelor.

5 Echipamente și materiale necesare analizei

5.1 Spectrofotometru de scanare verticală, care permite măsurarea densității optice a soluțiilor din sondele plăcii la o lungime de undă de 450 nm;

Mașină de spălat plăci semi sau automată (mașină de spălat);

Termostat cu aer uscat de tip ТС-80 М2, care menține temperatura (37 ± 1) ° С sau caracteristici similare;

Pipete automate monocanale cu vârfuri înlocuibile, permițând preluarea volumelor de lichid de la 0,01 la 5,0 ml;

Pipete automate cu 8 canale cu vârfuri înlocuibile, permițând preluarea volumelor de lichid de până la 0,5 ml;

Cilindru gradat cu o capacitate de 2000 ml;

Balon de laborator cu o capacitate de 2000 ml;

Flacoane din sticlă cu o capacitate de 20 ml;

Tăvi cu reactivi sau cutii Petri (diametru 100 mm);

Vată medicală higroscopică;

Hârtie de filtru;

Mănuși chirurgicale din cauciuc;

O soluție cu o fracție de volum de alcool etilic de 70%;

O soluție cu o fracție de masă de peroxid de hidrogen 6%;

Apă deionizată sau distilată;

Recipient pentru colectarea deșeurilor solide;

Recipient pentru scurgerea deșeurilor lichide.

6 Pregătirea pentru analiză

6.1 Înainte de analiză, scoateți kitul de reactivi din frigider, deschideți capacul cutiei și mențineți componentele kitului la o temperatură (18-25) ° С timp de 30 min.

Amestecați bine toate probele de ser (plasmă) și reactivii înainte de analiză.

Consumul de reactivi pentru setul de testare, care este determinat de numărul de benzi utilizate, este dat în tabelul A.1 din apendicele A.

6.2 Pregătirea soluției de spălare a plăcilor

Atenţie! Pregătiți soluția de spălare cu plăci cu 15 minute înainte de începerea testului!

Dacă o sticlă cu FSB-T × 25 conține un precipitat, acesta trebuie încălzit înainte de utilizare la o temperatură de (37 ± 1) ° С până când precipitatul este complet dizolvat. Într-un cilindru de măsurare cu o capacitate de 2000 ml, adăugați conținutul unei sticle cu FSB-T × 25, apoi adăugați apă distilată la semn 1250 mlși amestecați ușor soluția. Soluția poate fi păstrată la o temperatură de (2-8) ° C timp de 72 de ore.

În cazul utilizării uneia sau mai multor benzi, agitați conținutul flaconului cu FSB-T × 25 energic timp de (20-30) s, luați volumul necesar de soluție (Tabelul A.1) într-un pahar de măsurare sau cilindru, adăugați cantitatea necesară de apă distilată și amestecați soluția ... FSB-T × 25 neutilizat poate fi depozitat într-un flacon închis la o temperatură de (2-8) ° С pe durata de valabilitate a kitului.

6.3 Prepararea imunosorbantului

Imunosorbentul este gata de utilizare.

Deschideți pachetul și instalați numărul necesar de benzi pe cadru. Păstrați benzile rămase într-o pungă bine închisă cu un desicant la (2-8) ° C timp de 3 luni.

6.4 Pregătirea K + AT, K -, RK-1, RR-K2, BRS și reactiv de oprire

K + AT, K -, RK-1, PP-K2, BRS și reactivul stop sunt gata de utilizare.

Atenţie!Într-o sticlă cu RK-1, sunt posibile precipitații. Pentru analize trebuie utilizat un supernatant.

Reactivul RK-1, RR-K2, BRS neutilizat și reactivul de oprire, după deschiderea flacoanelor, pot fi păstrate în flacoane închise la o temperatură de (2-8) ° C pe durata de valabilitate a kitului.

Restul K + AT și K - după deschiderea flaconului, pot fi păstrate în flacoane închise la o temperatură de (2-8) ° C pe durata de valabilitate a kitului.

6.5 Pregătirea soluției K + AG

Atenţie! Pregătiți soluția K + AG cu 15 minute înainte de începerea analizei!

Pentru a restabili K + AG liofilizat, înainte de a deschide sticla, scuturați particulele care se lipesc de pereții sticlei sau de plută prin atingere ușoară. Deschideți sticla și puneți dopul cu capul în jos pe o suprafață uscată. Adăugați 0,8 ml de apă distilată în sticlă. Închideți sticla cu un dop, incubați timp de 10 minute la o temperatură de (18-25) ° С și înclinați ușor și rotiți sticla, amestecați conținutul până la dizolvarea completă, evitând formarea de spumă.

K + AG reconstituit poate fi depozitat într-o sticlă închisă la o temperatură de (2-8) ° C timp de o lună, la o temperatură de minus 20 ° C timp de șase luni. Este permisă înghețarea-dezghețarea unică a K + AG recuperată.

6.6 Prepararea soluției de Kg-2 în diluție de lucru

Luați volumul indicat în tabelul A.1 din flacon cu Kg-2 și transferați-l în flacon cu PP-K2. Se amestecă bine conținutul sticlei, evitând formarea de spumă.

Dacă se utilizează una sau mai multe benzi, luați cantitatea necesară de PP-K2 într-un flacon curat, adăugați Kg-2 în conformitate cu Tabelul A.1 și amestecați soluția, evitând formarea de spumă.

Atenţie! O soluție de Kg-2 în diluarea de lucru este pregătită imediat înainte de utilizare! O soluție de Kg-2 într-o diluție de lucru poate fi păstrată timp de 15 minute la o temperatură de (18-25) ° C. Folosiți numai o baie de reactivi nouă și sfaturi noi!

Restul de Kg-2 poate fi depozitat într-un flacon închis la o temperatură de (2-8) ° C pe durata de valabilitate a kitului.

6.7 Pregătirea soluției de lucru a substratului

Flaconul cu cromogen TMB trebuie încălzit înainte de utilizare la o temperatură de (37 ± 1)° De la până când cristalele sunt complet dizolvate.

Luați volumul indicat în tabelul A.1 din flacon cu cromogen TMB și transferați-l în flacon cu BRS. Se amestecă bine conținutul flaconului, evitând formarea de spumă.

Dacă se utilizează una sau mai multe benzi, luați cantitatea necesară de BRS într-un flacon curat, adăugați cromogenul TMB în conformitate cu tabelul A.1 și amestecați soluția, evitând formarea de spumă.

Atenţie! Pregătiți soluția de lucru a substratului imediat înainte de utilizare într-un loc întunecat! Soluția poate fi păstrată timp de 20 de minute la o temperatură de (18-25) ° C într-un loc întunecat.

Soluția trebuie protejată de lumină și de contactul cu metale sau ioni metalici. Soluția de substrat trebuie să fie incoloră înainte de utilizare. Vasele care vor intra în contact cu soluția de substrat în timpul reacției ar trebui să fie spălate fără utilizarea detergenților sintetici. Folosiți doar o baie de reactivi nouă și sfaturi noi!

Restul cromogenului TMB poate fi depozitat într-un flacon închis la o temperatură de (2-8) ° C pe durata de valabilitate a kitului.

7 Cerințe pentru spălarea plăcii

În toate etapele de spălare, este necesar să se controleze umplerea tuturor godeurilor și îndepărtarea completă (aspirația) lichidului din ele;

Este necesar să umpleți toate godeurile cu o soluție până la bord cu fiecare spălare (0,30-0,35 ml per godeu), fără revărsare și revărsare de lichid din godeurile adiacente;

Este necesar să se incubeze godeurile umplute cu soluția de spălare a plăcii timp de 30 de secunde;

La fiecare aspirație, îndepărtați cu grijă lichidul rămas din puțuri atingând rama cu benzi în poziție inversă pe hârtia de filtru îndoită de mai multe ori, așezată pe o foaie de polietilenă;

Clătirea slabă a plăcii va duce la rezultate incorecte.

8 Analiza

8.1 În oricare două godeuri ale plăcii, adăugați 0,07 ml(70 μl) K + AT, în celelalte două găuri - fiecare 0,07 ml(70 μl) K + AG, în celelalte trei găuri - fiecare 0,07 ml(70 μl) LA - .

Atenţie! Când setați ELISA pe o bandă, este permisă utilizarea a două godeuri pentru K - - un godeu pentru K + AT și un godeu pentru K + AG.

Adăugați la fântânile rămase ale farfuriei 0,07 ml(70 μl) din probele studiate de ser de sânge uman (plasmă).

Atenţie! Fiecare probă trebuie luată cu un vârf de unică folosință!

8.2 În toate godeurile plăcii de deasupra probelor martor și a probelor de sânge de ser (plasmă) studiate pe loc depuneți până la 0,05 ml(50 μl) RC-1... Amestecați conținutul puțurilor atingând ușor marginile plăcii.

8.3 (37 ± 1) ° Din cadrul 60 de minute.

Atenţie!(1-2) minute înainte de sfârșitul incubării, preparați o soluție de Kg-2 într-o diluție de lucru (secțiunea 6.6).

8.4 Îndepărtați conținutul godeurilor folosind o mașină de spălat, apoi clătiți godeurile plăcii cu o soluție pentru spălarea plăcii (secțiunea 6.2) de șapte ori.

8.5 Adăugați la toate godeurile plăcii până la 0,15 ml(150 μl) soluție Kg-2în diluarea de lucru (p 6.6).

8.6 Acoperiți placa cu folie sau acoperiți cu un capac și incubați într-un termostat la o temperatură (37 ± 1) ° Din cadrul 10 minute.

8.7 Îndepărtați conținutul godeurilor plăcii folosind o mașină de spălat, apoi clătiți godeurile plăcii cu o soluție de spălare a plăcilor (secțiunea 6.2) de șapte ori.

8.8 Se adaugă la toate godeurile plăcii 0,15 ml(150 μl) soluție de lucru a substratului(clauza 6.7).

La pregătirea soluției de lucru a substratului (clauza 6.7) f lacul cu cromogenul TMB trebuie încălzit înainte de utilizare timp de (3-5) minute la o temperatură de (37± 1) ° C până când cristalele sunt complet dizolvate.

8.9 Acoperiți placa cu folie sau acoperiți cu un capac și incubați într-un termostat la o temperatură (37 ± 1) ° CU într-un loc întunecat pentru 15 minute.

Atenţie! După incubarea în godeuri cu probe de ser care conțin anticorpi împotriva antigenului HIV-1 și / sau HIV-2 și / sau HIV-1 p24, culoarea soluției se va schimba de la incolor la albastru cu intensitate variabilă în funcție de concentrația anticorpilor și / sau antigen în proba de ser testată.

8.10 Opriți reacția peroxidazei prin adăugarea la toate godeurile 0,05 ml(50 μl) opriți reactivul.

Atenţie!În godeurile cu probe de ser care conțin anticorpi împotriva HIV-1 și / sau HIV-2 și / sau antigen HIV-1 p24, culoarea soluției se va schimba de la albastru la galben de intensitate variabilă.

8.11 Nu mai târziu de (1-2) min după oprirea reacției, determinați DO în puțuri într-un singur mod de lungime de undă la o lungime de undă 450 nm.

9 Prelucrarea rezultatelor analizei

9.2 Luați în considerare rezultatele numai dacă:

Valoarea Opsr K - nu depășește 0,2 OE;

Fiecare valoare individuală a OD K - nu trebuie să se abată de la ODsr K - cu mai mult de 30%. Dacă una dintre cele trei valori ale OP K - depășește această limită, ar trebui exclusă din calculul OPsr K -. Dacă două dintre cele trei valori ale OD K - depășesc această limită, analiza ar trebui repetată pe reactivii noului kit;

Valoarea Opsr K + AT este mai mare de 1,0 OE;

Valoarea Opsr K + AG este mai mare de 1,0 OU.

9.3 Dacă sunt îndeplinite condițiile de mai sus, calculați valoarea critică (OPcrit.), OE, conform formulei (1):

OPcrit. = OPsr K - + 0,14 (1).

10 Performanțe analitice și diagnostice

Sensibilitate trusa de reactivi ELISA-HIV 1,2 AGAT pentru detectarea antigenului p24 HIV-1 -

Specificitate trusa de reactivi ELISA-HIV 1,2 AGAT- 100% standard AT (-) HIV. Panou standard de seruri care nu conțin anticorpi împotriva virusului imunodeficienței umane tipurile 1 și 2 (HIV-1,2) și antigenul HIV-1 (p24) .ОСО42-28-214-02P.Kat # INS-20. CJSC MBS.

11 Formular de lansare a kitului

11.1 Setul este disponibil în cinci opțiuni de configurare:

1 set de 1P - analiză manuală. Kitul este conceput pentru 12 rulaje ELISA pe o placă pliabilă: 1 set - 1 bandă (8 găuri). În total - 96 de determinări, inclusiv probe de control;

2 set 2M - analiză manuală. Kitul este conceput pentru a efectua 2 seturi de ELISA pe plăci monolitice: 1 setare - 1 placă. În total - 192 de determinări, inclusiv probe de control;

3 set 2P- efectuarea analizei manual. Setul este conceput pentru a fi transportat 24 de spectacole ELISA pentru 2 pliabil x plăci: 1 set - 1 bandă (8 găuri). Total - 192 definiții inclusiv probe de control;

4 set А2М - analiză pe un analizor automat. Kitul este conceput pentru a efectua 2 seturi de ELISA pe plăci monolitice: 1 setare - 1 placă. În total - 192 de determinări, inclusiv probe de control;

5 set A2P - analiză pe un analizor automat. Kitul este conceput pentru 24 de rulaje ELISA pe 2 plăci pliabile: 1 set - 1 bandă (8 godeuri). În total - 192 de determinări, inclusiv probe de control.

12 Condiții de depozitare și utilizare a kitului

12.1 Kitul trebuie păstrat într-o cameră curată, protejată de umiditate și lumină la o temperatură de (2-8) ° С pe toată durata de valabilitate. Nu congelați componentele kitului.

12.2 Pentru a obține rezultate fiabile, este necesară respectarea strictă a instrucțiunilor de utilizare a kitului.

12.3 Data de expirare a kitului este 12 luni.

Anexa A

Tabelul A.1 - Consumul de reactivi pentru trusa ELISA

reactiv, ml

Număr de benzi folosite, buc.

Pregătirea soluției de spălare a plăcilor

FSB-T × 25

Distilat

apă

Prepararea soluției de Kg-2 în diluție de lucru

RR-K2

Pregătirea soluției de lucru a substratului

Chromogen TMB

Bibliografie

	Reguli sanitare	Ordinul Ministerului Sănătății al Republicii Belarus din 16 decembrie 1998 nr. 351 Cu privire la revizuirea reglementărilor departamentale care reglementează problemele legate de HIV / SIDA
	Ordinul Ministerului Sănătății al Republicii Belarus din 25 noiembrie 2002 nr. 165 Despre dezinfectarea și sterilizarea de către instituțiile medicale
	Rezoluția Ministerului Sănătății al Republicii Belarus din 28 aprilie 2010 nr. 47 Cu privire la aprobarea Instrucțiunii privind procedura de efectuare a controalelor medicale obligatorii ale lucrătorilor și invalidarea unor decrete ale Ministerului Sănătății al Republicii Belarus

Număr unic de înregistrare

Număr de înregistrare a dispozitivului medical

FSR 2011/10182

Data înregistrării de stat a unui dispozitiv medical

Numele dispozitivului medical

Un set de reactivi Test imunosorbent legat de enzime "MilaLab-ELISA-HIV-AGAT" pentru detectarea anticorpilor împotriva virusurilor imunodeficienței umane de tipul 1 și 2 (HIV-1 și HIV-2), HIV-1 grupa O și HIV-1 p24 antigen conform TU 9398 -187-05941003-2017
constând din: - Imunosorbant - o placă polistiren pliabilă cu 96 de godeuri pe benzi (sau în godeuri), în godeurile cărora se sorbesc antigeni artificiali - gp160, gp41, p31 HIV-1, gp41 HIV-1 grupa O, gp36 HIV- 2 și anticorpi la antigenul p24 al HIV-1: set 1 (1 placă), set 2 (2 plăci), set 3 (5 plăci), - Conjugat-1: set 1 (1 fl. 1,2 ml), set 2 ( 1 fl. 1,2 ml), set 3 (1 flacon 3,6 ml sau 3 flacoane de 1,2 ml), - Conjugat-2: set 1 (1 flacon 2,0 ml), set 2 (1 flacon. 2,0 ml), set 3 (1 flacon 4,0 ml sau 2 flacoane de 2,0 ml), - RRK-1 - soluție de diluare pentru conjugat-1: set 1 (1 flacon 12,0 ml), set 2 (1 flacon 12,0 ml), set 3 (3 flacoane de 12,0 ml fiecare ), - RRK-2 - soluție de diluare pentru conjugat-2: set 1 (1 flacon 20,0 ml), kit 2 (1 flacon 20,0 ml), kit 3 (2 flacoane de 20,0 ml), - K + AT - probă pozitivă de control care conține anticorpi împotriva HIV: kit 1 (1 flacon 2,0 ml), set 2 (1 flacon 2,0 ml), set 3 (1 flacon 4,0 ml sau 2 flacoane de 2,0 ml), - K + AG - con Probă troll pozitivă care conține antigen artificial HIV-1 p24: set 1 (1 flacon. 2,0 ml), set 2 (1 flacon 2,0 ml), set 3 (1 flacon 4,0 ml sau 2 flacoane 2,0 ml fiecare), - К- - probă negativă de control: set 1 (1 flacon 2,5 ml), set 2 (1 flacon 2,5 ml), set 3 (1 sticlă 5,0 ml sau 2 sticle de 2,5 ml), - PR - soluție de spălare: set 1 (1 sticlă 50,0 ml), set 2 (1 sticlă 120,0 ml), set 3 (2 sticle fiecare 120,0 ml), - Opriți reactivul: set 1 (1 flacon 25,0 ml), set 2 (2 flacoane de 25,0 ml), set 3 (2 flacoane de 50,0 ml sau 4 flacoane de 25,0 ml), - SB - soluție tampon substrat: set 1 (1 flacon 25, 0 ml), set 2 (1 flacon 25,0 ml), set 3 (2 flacoane de 50,0 ml sau 3 flacoane de 25,0 ml), - TMB - soluție care conține 3,3 ", 5,5" -tetrametilbenzidină: kit 1 (1 flacon 2,5 ml), kit 2 (1 flacon 2,5 ml), kit 3 (2 flacoane de 3,5 ml sau 3 flacoane de 2,5 ml). Accesorii: - huse pentru plăci cu 96 de godeuri din polistiren: set 1 (1 buc.), Set 2 (2 buc.), Set 3 (5 buc.) Sau - folii de protecție pentru plăci ELISA: set 1 (2 buc.), set 2 (4 buc.), set 3 (10 buc.), - vârfuri de unică folosință: set 1 (16 buc.), set 2 (32 buc.), set 3 (80 buc.), - tăvi din plastic pentru reactivi lichizi : set 1 (2 buc.), set 2 (4 buc.), set 3 (10 buc.), - pungi din polietilenă cu Zip-Lock: set 1 (1 buc.), set 2 (2 buc.), set 3 (3 buc.).

Numele organizației - solicitantul dispozitivului medical

Locația organizației solicitante a dispozitivului medical

Adresa juridică a organizației solicitante de dispozitive medicale

603014, Rusia, Nijni Novgorod, st. Comintern, 47

Numele producătorului dispozitivului medical sau al producătorului dispozitivului medical

LLC "NPO" Sisteme de diagnosticare "

Locația organizației-producătorului unui dispozitiv medical sau a organizației - producătorul unui dispozitiv medical

603093, Rusia, Nijni Novgorod, st. Yabloneva, 22, P.O. Box 69

Adresa legală a unui producător de dispozitive medicale sau a unui producător de dispozitive medicale

Diagnosticul în timp util al infecției cu HIV devine o măsură extrem de importantă, deoarece inițierea mai timpurie a tratamentului poate predetermina în mare măsură dezvoltarea ulterioară a bolii și poate prelungi viața pacientului. În ultimii ani, s-au înregistrat progrese semnificative în detectarea acestei boli teribile: sistemele vechi de testare sunt înlocuite cu altele mai avansate, metodele de examinare devin tot mai accesibile și precizia lor crește semnificativ.

În acest articol, vom vorbi despre metodele moderne de diagnosticare a infecției cu HIV, care sunt utile de știut pentru tratarea la timp a acestei probleme și menținerea calității normale a vieții persoanei bolnave.

Tehnici de diagnostic HIV

În Rusia, pentru diagnosticarea infecției cu HIV, se efectuează o procedură standard, care include două niveluri:

Sistem de testare ELISA (analiză de screening);
blot imun (IB).

De asemenea, pot fi utilizate și alte metode pentru diagnosticare:

teste exprese.

Sisteme de testare ELISA

În prima etapă a diagnosticului, un test de screening (ELISA) este utilizat pentru a detecta infecția cu HIV, care se bazează pe proteinele HIV create în laboratoare care captează anticorpi specifici produși în organism ca răspuns la infecție. După interacțiunea lor cu reactivii (enzimele) sistemului de testare, culoarea indicatorului se schimbă. Mai mult, aceste modificări de culoare sunt procesate pe echipamente speciale, care determină rezultatul analizei efectuate.

Astfel de teste ELISA sunt capabile să arate rezultate în câteva săptămâni după introducerea infecției cu HIV. Această analiză nu determină prezența unui virus, dar detectează producția de anticorpi împotriva acestuia. Uneori, în corpul uman, producția de anticorpi împotriva HIV începe după 2 săptămâni după infecție, dar la majoritatea oamenilor aceștia sunt dezvoltați la o dată ulterioară, după 3-6 săptămâni.

Există patru generații de teste ELISA cu sensibilitate diferită. În ultimii ani, sistemele de testare din generația III și IV, care sunt create pe baza peptidelor sintetice sau a proteinelor recombinate și au o specificitate și o precizie mai mari, au fost utilizate mai des. Acestea pot fi utilizate pentru a diagnostica infecția cu HIV, pentru a monitoriza prevalența HIV și pentru a asigura siguranța atunci când se examinează sângele donat. Acuratețea sistemelor de testare ELISA din generațiile III și IV este de 93-99% (testele mai sensibile produse în Europa de Vest sunt de 99%).

Pentru efectuarea testului ELISA se iau 5 ml de sânge din vena pacientului. Trebuie să treacă cel puțin 8 ore între ultima masă și analiză (de regulă, se efectuează dimineața pe stomacul gol). Se recomandă efectuarea unui astfel de test nu mai devreme de 3 săptămâni de la presupusa infecție (de exemplu, după actul sexual neprotejat cu un nou partener sexual).

Rezultatele testului ELISA sunt obținute în 2-10 zile:

rezultat negativ: indică absența infecției cu HIV și nu necesită o vizită la un specialist;
rezultat fals negativ: poate fi observat în stadiile incipiente ale infecției (până la 3 săptămâni), în stadiile tardive ale SIDA, cu suprimarea pronunțată a imunității și cu pregătirea necorespunzătoare a sângelui;
rezultat fals pozitiv: poate fi observat cu unele boli și cu prepararea sângelui efectuată necorespunzător;
rezultat pozitiv: indică infecția cu infecția cu HIV, necesită IB și trimiterea pacientului la un specialist în centrul SIDA.

De ce un test ELISA poate da rezultate fals pozitive?

Rezultatele fals pozitive ale unui test ELISA pentru HIV pot fi observate cu o prelucrare necorespunzătoare a sângelui sau la pacienții cu următoarele afecțiuni și boli:

mielom multiplu;
boli infecțioase provocate de virusul Epstein-Barr;
stare după;
boală autoimună;
pe fondul sarcinii;
condiție după vaccinare.

Din motivele descrise mai sus, anticorpii nespecifici cu reactivitate încrucișată pot fi prezenți în sânge, a căror producție nu a fost declanșată de infecția cu HIV.

În ultimii ani, frecvența rezultatelor fals pozitive a scăzut semnificativ datorită utilizării sistemelor de testare din generația III și IV, care conțin peptide mai sensibile și proteine recombinante (sunt sintetizate folosind ingineria genetică in vitro). După începerea utilizării unor astfel de teste ELISA, frecvența rezultatelor fals pozitive a scăzut semnificativ și este de aproximativ 0,02-0,5%.

Găsirea unui fals pozitiv nu înseamnă că o persoană este infectată cu HIV. În astfel de cazuri, OMS recomandă un alt test ELISA (generație IV obligatorie).

Sângele pacientului este trimis la un laborator de referință sau arbitraj marcat cu „repetare” și analizat pe un sistem ELISA de generație IV. Dacă rezultatul noii analize este negativ, atunci primul rezultat este recunoscut ca eronat (fals pozitiv) și IB nu se realizează. În cazul unui rezultat pozitiv sau dubios în timpul celui de-al doilea test, pacientul trebuie să primească IB după 4-6 săptămâni pentru a confirma sau a refuza infecția cu HIV.

Blot imunitar

Un diagnostic definitiv al infecției cu HIV poate fi făcut numai după obținerea unui rezultat pozitiv al imunoterapiei (IB). Pentru implementarea sa, se folosește o bandă de nitroceluloză, pe care se aplică proteine virale.

Prelevarea de sânge pentru IB se efectuează dintr-o venă. Apoi suferă o prelucrare specială și proteinele conținute în serul său sunt separate într-un gel special în funcție de încărcarea și greutatea lor moleculară (manipularea se efectuează pe echipamente speciale sub influența unui câmp electric). O bandă de nitroceluloză se aplică pe gelul seric din sânge și blotarea ("blotarea") se efectuează într-o cameră specială. Banda este procesată și dacă există anticorpi împotriva HIV în materialele utilizate, atunci acestea se leagă de benzile antigenice de pe IB și apar ca linii.

IB este considerat pozitiv dacă:

conform criteriilor CDC americane - există două sau trei linii de gp41, p24, gp120 / gp160 pe bandă;
conform criteriilor FDA americane - pe bandă există două linii p24, p31 și o linie gp41 sau gp120 / gp160.

În 99,9% din cazuri, un rezultat IB pozitiv indică infecția cu HIV.

În absența liniilor - IB este negativ.

În identificarea liniilor cu gp160, gp120 și gp41- IB este îndoielnic. Un astfel de rezultat poate fi detectat atunci când:

boli oncologice;
sarcina;
transfuzii frecvente de sânge.

În astfel de cazuri, se recomandă efectuarea unei reexaminări folosind un kit de la o altă companie. Dacă, după IB suplimentar, rezultatul rămâne îndoielnic, atunci monitorizarea este necesară timp de șase luni (IB se efectuează la fiecare 3 luni).

Reacție în lanț a polimerazei

Un test PCR poate detecta ARN-ul virusului. Sensibilitatea sa este destul de mare și vă permite să detectați infecția cu HIV încă din 10 zile după infectare. În unele cazuri, PCR poate da rezultate fals pozitive, deoarece sensibilitatea sa ridicată poate reacționa și la anticorpi la alte infecții.

Această tehnică de diagnostic este costisitoare și necesită echipamente speciale și specialiști cu înaltă calificare. Aceste motive nu fac posibilă efectuarea acestuia în timpul testării în masă a populației.

PCR este utilizat în astfel de cazuri:

pentru a detecta HIV la nou-născuții care s-au născut de mame infectate cu HIV;
pentru a detecta HIV în „perioada de fereastră” sau în caz de IB îndoielnic;
pentru a controla concentrația HIV în sânge;
pentru studiul sângelui donat.

Doar prin testul PCR, HIV nu este diagnosticat, ci se efectuează ca o metodă de diagnostic suplimentară pentru rezolvarea situațiilor controversate.

Metode exprese

Una dintre inovațiile în diagnosticul HIV a devenit teste rapide, ale căror rezultate pot fi evaluate în decurs de 10-15 minute. Cele mai eficiente și precise rezultate se obțin cu teste imunocromatografice bazate pe principiul fluxului capilar. Sunt benzi speciale pe care se aplică sânge sau alte lichide investigate (saliva, urină). În prezența anticorpilor împotriva HIV, după 10-15 minute, pe test apare o bandă colorată și martor - un rezultat pozitiv. Dacă rezultatul este negativ, apare doar banda de control.

Ca și după testele ELISA, rezultatele testelor rapide trebuie confirmate printr-o analiză IB. Abia atunci se poate pune diagnosticul infecției cu HIV.

Există truse expres pentru testarea la domiciliu. Testul OraSure Technologies1 (SUA) este aprobat de FDA, vândut fără prescripție medicală și poate fi utilizat pentru a detecta HIV. După test, în cazul unui rezultat pozitiv, pacientului i se recomandă să se supună unui examen la un centru specializat pentru a confirma diagnosticul.

Restul testelor pentru uz casnic nu au fost încă aprobate de FDA și pot fi extrem de discutabile.

În ciuda faptului că testele rapide sunt inferioare în ceea ce privește precizia testelor ELISA de generația IV, acestea sunt utilizate pe scară largă pentru testarea suplimentară a populației.

Puteți face teste pentru a detecta infecția cu HIV în orice clinică, spital central districtual sau în centre specializate de SIDA. Pe teritoriul Rusiei, acestea sunt păstrate absolut confidențial sau anonim. Fiecare pacient se poate aștepta să primească sfaturi medicale sau psihologice înainte sau după test. Va trebui să plătiți pentru testele HIV numai în spitalele comerciale, iar în clinicile și spitalele publice, acestea sunt efectuate gratuit.

Citiți despre modalitățile prin care vă puteți infecta cu HIV și ce mituri există despre posibilitățile de a vă infecta