PRIPREME
EVALUACIJA NOVOG ELISA TEST SISTEMA
"Rotavirus-antigen-ELISA-BEST"
12Zhirakovskaya E.V., 3Ignatiev G.M., 3Indikova I.N., 12Tikunova N.V.
1 FGUN SSC VB "Vektor" Rospotrebnadzora, naselje Koltsovo, Novosibirska oblast;
2 Institut za hemijsku biologiju i fundamentalnu medicinu, Novosibirsk;
3 Državni zavod za standardizaciju i kontrolu medicinskih bioloških proizvoda im L.A. Tarasevichag Moskva
Prikazani su rezultati ispitivanja osjetljivosti, specifičnosti i reproduktivnosti novog seta reagensa "Rotavirus-antigen-IFA-BEST" razvijenog u CJSC "Vector-Best" (Novosibirsk). Dobijeni podaci omogućavaju da se predvidi dijagnostička pouzdanost rezultata pri korištenju ovog test sistema za otkrivanje antigena rotavirusa grupe A u kliničkom materijalu.
Ključne reči: ELISA test sistem, efikasnost, rotavirus A
Rotavirusi grupe A (familija Reoviridae, rod Rotavirus) su najčešći uzročnici teškog gastroenteritisa kod male djece širom svijeta. Odrasli sa oslabljenim imunološkim sistemom često obolijevaju. Rotavirusna infekcija (RVI) je vrlo zarazna bolest s više puteva prijenosa. Izvor infekcije je osoba sa otvorenim ili asimptomatskim oblikom bolesti, kao i nosilac virusa. Kod djece i odraslih RVI se može manifestirati u obliku sporadičnih slučajeva, lokalnih grupnih bolesti, izbijanja i široko je rasprostranjena. Fekalno-oralni mehanizam prenošenja ove infekcije ostvaruje se prehrambenim (mlijeko i mliječni proizvodi, hrana za bebe), vodom i kontaktno-domaćinskim putem.
Dijagnoza rotavirusnog gastroenteritisa prema kliničkoj slici, posebno sa sporadičnim morbiditetom, predstavlja određene poteškoće, jer se simptomi karakteristični za ovu infekciju malo razlikuju od simptoma drugih akutnih crijevnih infekcija (AEI) različite etiologije. Diferencijalna dijagnoza kod pacijenata sa rotavirusnim gastroenteritisom provodi se kako sa toksikoinfekcijama hranom, tako i sa drugim virusnim AEI (norovirusi, astrovirusi, adenovirusi, koronavirusi, Coxsackie enterovirusi i ECHO) i bakterijskim (salmoneloza, dizenterija, mikroorganizmi kolere. Nažalost, ne provode sve specijalizirane medicinske ustanove Ruske Federacije dijagnostiku rotavirusne infekcije.
Dijagnostičke metode za RVI imaju za cilj otkrivanje cijelih viriona, virusnog antigena ili virusno specifične RNK u izmetu. Pristup koji obećava direktnoj detekciji virusa kako u kliničkom materijalu tako iu objektima okoline je metoda reverzne transkripcije - lančana reakcija polimeraze (RT-PCR). Poslednjih godina kreirani su sistemi za testiranje zasnovani na savremenim naučnim dostignućima sa kombinacijom različitih metoda za detekciju rotavirusa: multipleks PCR sa hibridizaciono-fluorescentnom detekcijom produkata amplifikacije „na krajnjoj tački“; imuno-PCR baziran na krajnjoj tački (IPCR) sa detekcijom u realnom vremenu; kvantitativni RT-PCR sa detekcijom u realnom vremenu. Istraživačke laboratorije koriste elektronsku mikroskopiju za brzo otkrivanje rotavirusa. Međutim, sve gore navedene metode su prilično naporne i zahtijevaju skupe instrumente i visoko kvalifikovano osoblje. Stoga, pri provođenju laboratorijske dijagnostike u bolnicama i ambulantno, prednost se daje metodama koje se temelje na otkrivanju virusnog antigena u fecesu pomoću enzimskog imunosorbentnog testa (ELISA) s mono- i polikonalnim antitijelima na rotaviruse. Ova metoda je dostupna za praktične laboratorije, jednostavna je za postavljanje i omogućava brzo dobivanje rezultata.
Svrha ovog rada je proučavanje dijagnostičke efikasnosti novog seta reagensa "Rotavirus-antigen-IFA-BEST" razvijenih u JSC "Vector-Best", Novosibirsk.
^ septembar-decembar
materijali i metode
Materijal istraživanja bili su uzorci fecesa male dece sa dijagnozom AEI i bez kliničkih manifestacija crevne infekcije, koja su hospitalizovana na odeljenjima za crevne infekcije i respiratorne infekcije Dječije gradske kliničke bolnice br. 3, Novosibirsk. Uzorci fekalija su sakupljani u sterilne plastične posude za jednokratnu upotrebu u zapremini od 2-3 ml po prijemu pacijenata u bolničko odjeljenje i čuvani na -20°C 15 dana. Duže skladištenje materijala vršeno je na -70°C.
Panel od 104 uzorka fekalija preliminarno je testiran na prisustvo OCI patogena. Od njih:
30 uzoraka u kojima su ELISA i RT-PCR detektovani samo rotavirusi grupe A; genotipizacija RT-PCR je pokazala da su fekalni uzorci sadržavali rotaviruse genotipa PG1 (18 uzoraka), PG2 (4 uzorka), PG3 (3 uzorka), PG4 (2 uzorka), PG4 (1 uzorak), PG9 (1 uzorak) , PG3 (1 uzorak);
14 uzoraka u kojima su RT-PCR detektovani samo norovirusi drugog genotipa, što je potvrđeno određivanjem nukleotidne sekvence 5" - regiona kapsidnog gena koji se nalazi na genomu norovirusa u području od 5085-5485 h .;
15 uzoraka u kojima su RT-PCR detektovani samo astrovirusi, što je potvrđeno određivanjem nukleotidne sekvence 5" - regiona kapsidnog gena koji se nalazi na genomu Astrovirusa u regionu 4526 - 4955 n.; 15 uzoraka u koji su samo adenovirusi otkriveni PCR-om;
30 fekalnih uzoraka (kontrola) od djece bez kliničkih manifestacija crijevne infekcije, hospitalizirane na respiratornom odjeljenju bolnice; preliminarna analiza nije otkrila gore navedene virusne patogene u ovim uzorcima.
Uzorci su testirani na prisustvo ili odsustvo rot-, noro-, astro- i adenovirusa RT-PCR-om koristeći komercijalne komplete "AmpliSens No go virus 1, 2 genotipovi - 306/322", "AmpliSens Astrovirus -165" registrovani u Ruska Federacija, "AmpliSens Adenovirus - 462", "AmpliSens Rotavirus - 290" (proizvodi Centralni istraživački institut za epidemiologiju, RF). Uzorci su ispitani u skladu sa uputstvima za upotrebu odgovarajućih kompleta reagensa tokom roka trajanja. Uzorci pozitivni na prisustvo rotavirusa genotipizirani su RT-PCR. Određivanje prisustva ili odsustva antigena rotavirusa takođe je izvršeno ELISA-om korišćenjem komercijalnog test sistema IDEIA™ Rotavirus, (DakoCytomation, UK) u skladu sa uputstvima za komplet.
Prilikom testiranja kompleta reagensa Rota-virus-antigen-ELISA-BEST, svi gornji uzorci (104) su šifrirani i testirani tri puta s kompletom za testiranje. Po završetku ispitivanja, uzorci su dekodirani i rezultati analizirani.
Rezultati i diskusija
Osetljivost kompleta reagensa "Rotavirus-antigen-ELISA-BEST" procenjena je brojem podudarnosti pozitivnih rezultata (u%) uzoraka testiranja na testiranom test sistemu i referentnim lekovima. Istovremeno je otkriveno da je pri korištenju kompleta reagensa "Rotavirus-antigen-ELISA-BEST" svih 30 uzoraka s potvrđenim prisustvom rotavirusa A bilo pozitivno (Tabela 1). Posljedično, osjetljivost test kompleta za otkrivanje rotavirusa A bila je 100%. Treba napomenuti da su na panelu bili uzorci sa sedam različitih genotipova rotavirusa, a svi su uspješno detektovani pomoću kompleta reagensa Rotavirus - antigen - I FAB-EST.
Specifičnost test sistema procenjena je brojem podudarnosti negativnih rezultata (u%) ispitivanja uzoraka primenom testiranog test sistema sa dostavljenim preliminarnim studijama. Za procjenu specifičnosti korišteno je 30 uzoraka u kojima nisu otkriveni virusni patogeni, kao i 14 uzoraka u kojima su RT-PCR metodom otkriveni samo norovirusi drugog genotipa, 15 uzoraka u kojima je RT-PCR metoda otkriveni su samo astrovirusi; 15 uzoraka u kojima su PCR-om otkriveni samo adenovirusi. Utvrđeno je da u 69 od 74 negativna uzorka vrijednosti optičke gustoće prilikom detekcije kompletom reagensa Rotavirus-antigen-ELISA-BEST na prisustvo rotavirusa A nisu prelazile pozadinske vrijednosti, odnosno vrijednosti dobiveno kao rezultat mjerenja optičke gustoće u kontrolnim negativnim uzorcima. Dva uzorka koja sadrže astroviruse, jedan uzorak - norovirus drugog genotipa, jedan uzorak - adenovirus i dva uzorka u kojima nije otkriven nijedan od navedenih virusnih patogena, pokazali su pozitivne indekse optičke gustoće. Treba napomenuti da su u uzorcima u kojima nijedan od virusnih patogena prethodno nije otkriven, pozitivni signali zabilježeni samo u jednoj od ponovljenih studija (tabela 2). Tako je specifičnost kompleta reagensa Rotavirus-Antigen-ELISA-BEST bila 93,2%.
Tokom ispitivanja procijenjena je ponovljivost rezultata dobivenih korištenjem test kompleta reagensa „Rotavirus-antigen-ELISA-BEST“ na kliničkom materijalu – svi uzorci su tri puta ispitivani u različitim eksperimentima kako bi se utvrdila varijacija u rezultatima. U skoro svim slučajevima dobijeni su slični rezultati: test sistem je na isti način detektovao sve negativne i pozitivne uzorke. Izuzetak su bila dva uzorka, u kojima nijedan od virusnih patogena nije prethodno otkriven: u jednom od ponavljanja za oba uzorka, vrijednosti optičke gustoće su premašile ODcrit. Treba napomenuti da je višak bio neznatan (tabela 2). Dakle, ponovljivost rezultata iznosila je 98,8%.
Rezultati ispitivanja su pokazali da je test set reagensa "Rotavirus-antigen-ELISA-BEST" po svojoj dijagnostičkoj efikasnosti - specifičnosti, osjetljivosti i reproduktivnosti - uporediv sa dijagnostikom dostupnom u Ruskoj Federaciji.
korištenjem testiranog kompleta reagensa "Rotavirus-antigen-ELISA-BEST" za detekciju antigena rotavirusa grupe A u kliničkom materijalu.
Književnost
1. Bogomolov B.P. // "Zarazne bolesti: hitna dijagnostika, liječenje, prevencija". - M., Novo-dijamed. - 2007.
2. Vasiliev B.Ya., Vasil'eva RI, Lobzin Yu.V. // “Akutne crijevne bolesti. Rotavirusi i Rotavirusna infekcija”. - S.-Pb., Lan. - 2000.
3. Zhirakovskaya EV, Tikunov A.Yu., Bodnev O.A., et al. // "BIOPreparations". - 2008. - br. 2. - str. 15 - 18.
4. Zhirakovskaya E.V., Maleev V.V., Bodnev A.C. i drugi. // ZhMEI - 2008 - br. 4. - sa. 12 - 16.
5. Ignatyuk TE, Golutvin IA, Nasikan NS, et al. // "Questions of Virology". - 2003. - t. 48. - br. 6. - str. 1721.
6. Novikova H.A., Fedorova O.F., Epifanova N.V., Chuprova A.B. // "Pitanja virusologije". - 2007.-- v. 52. -№ 3 - str. 19-23.
7. Podkolzin A.T., Mukhina A.A., Shipulin G.A., et al. //
"Zarazne bolesti". - 2004. - t. 2. - br. 4. - str. 85 -91.
8. Podkolzin AT, Fenske EB, Abramycheva N.Yu., et al. // "Therapeutic archive". - 2007. - V. 79. - Br. 11. -str. 10-16.
9. Sergevnin VI, Woldschmidt NB, Sarmometov EV, et al. // Epidemiologija i zarazne bolesti. -2004.-№ 6.-str. 17-20.
10.Sergevnin V.I., Woldschmidt N.B., Sarmometov E.V., et al. // Higijena i sanitacija. - 2007. - br. 1. - str. 56 -58.
11. Arcangeletti MC, De Conto E, Pinardi F., i dr. // Acta Biomed. Ateneo. Parmense. - 2005. -V. 76 (3). - Str. 165 -170.
12. Gladstone B. P., Iturriza-Gomara M., Ramani S., i dr. // Epidemiol. Zaraziti. - 2008. V. 136 (3). - P. 399-405.
13. Min B.S., NohYJ., Shin J.H., atal. // J. Virol. Metode. -2006. - V. 137 (2). - Str. 280 - 286.
14. Santos N., Honma S., Timenetsky Mdo C., i dr. // J. Clin. Microbiol. - 2008. V. 46 (2). - Str. 462 - 469.
15 Schets F. M., van Wijnen J. H., Schijven J. F., i dr. // Appl. Environ. Microbiol. - 2008. - V. 74 (7). - Str. 2069 - 2078.
16. Stockman L. J., Staat M. A., Holloway M., i dr. // J. Clin. Microbiol. - 2008. - V. 46 (5). - P. 1842 - 1843.
Procjena osjetljivosti i specifičnosti kompleta reagensa "Rotavirus-antigen-ELISA-BEST"
Tabela 1
Broj uzoraka Broj uzoraka Rezultati detekcije uz pomoć uporednih lijekova IDEIA Rotavirus Astro-PCR Hopo 2-PCR Adeno-PCR Rezultati detekcije sa setom "Rotavirus-antigen-ELISA-BEST"
1. 30 30 0 0 0 30
2. 15 0 15 0 0 2
3. 14 0 0 14 0 1
4. 15 0 0 0 15 1
Procjena specifičnosti kompleta reagensa "Rotavirus-antigen-ELISA-BEST" -
tabela 2
PCR AmpliSens
rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus
0,443 1,306 0,676 0,418
Rotavirus-antigen-IFA-BEST CJSC "Vector-Best"
OPKrit OPKrit OPKrit
0,250 0,263 0,251
> 4,000 > 4,000 > 4,000 3,926 > 4,000 3,939
> 4,000 > 4,000 > 4,000
> 4,000 > 4,000 > 4,000
£ septembar
decembar 2009
AmpliSens
rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus
IDEIA Rotavirus DakoCytomation OPCrit = 0,150
0,401 0,322 1,659 0,566 0,518 1,278 1,285 0,809 1,160 0,407 0,218 0,703 1,889 1,069 1,302 0,879 1,842 0,747 0,793 1,013 1,124 0,670 0,726 0,683 0,814 0,997 0,206 0,052 0,050 0,034 0,040 0,048 0,040
Rotavirus
OPKrit 0.250
> 4,000 3,933 3,987 3,918 3,853 3,972
> 4,000 3,864 3,879 3,897 3,800
> 4,000 3,981
> 4,000 3,713
> 4,000 4.000
> 4,000 3,989
> 4,000 3,872 0,088 0,103 0,230 0,240 0,268 1,819 0,062
antigen-ELISA-BEST "Vektor-Best"
OPKrit OPKrit 0,263 0,251
> 4,000 > 4,000
> 4,000 > 4,000
> 4,000 > 4,000 3,821 3,899
> 4,000 3,964 3,845 3,923 3,962 3,871
> 4,000 3,929
> 4,000 3,881 3,884 > 4,000
> 4,000 > 4,000 3,800 3,851 3,818 >4,000
> 4,000 > 4,000
> 4,000 3,995
> 4,000 > 4,000
> 4,000 > 4,000
> 4,000 > 4,000 3,837 3,839
> 4,000 > 4,000
> 4,000 > 4,000
> 4,000 3,986
> 4,000 > 4,000
> 4,000 3,998
> 4,000 > 4,000
> 4,000 3,823 0,063 0,073 0,054 0,061 0,255 0,250 0,256 0,244 0,278 0,560 1,117 1,235 0,052 0,052
astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus
IDEIA Rotavirus DakoCytomation OIIKpHT = 0,150
0,043 0,043 0,041 0,052 0,040 0,046 0,041 0,040 0,037 0,039 0,030 0,045 0,032 0,030 0,037 0,042 0,034 0,039 0,043 0,043 0,045 0,039 0,050 0,034 0,050 0,043 0,050 0,042 0,041 0,042 0,038 0,047 0,039
PoTaBHpyc-aHTHreH-HOA-EECT 3AO "BeKtop-EecT"
OnKpHT OnKpHT OIIKpHT
0,250 0,263 0,251
0,115 0,075 0,082
0,053 0,046 0,058
0,233 0,198 0,189
0,144 0,105 0,128
0,243 0,062 0,073
0,043 0,040 0,046
0,069 0,043 0,041
0,143 0,044 0,058
0,220 0,206 0,230
3,475 2,577 2,405
0,223 0,247 0,240
0,232 0,236 0,231
0,048 0,042 0,041
0,121 0,085 0,093
0,132 0,111 0,174
0,122 0,052 0,063
0,061 0,044 0,054
0,073 0,035 0,048
0,089 0,046 0,046
0,047 0,043 0,044
0,041 0,039 0,044
0,083 0,046 0,038
0,168 0,074 0,097
0,247 0,118 0,099
0,248 0,251 0,242
0,243 0,259 0,250
0,054 0,048 0,055
0,048 0,040 0,037
0,058 0,045 0,046
0,053 0,045 0,049
0,069 0,058 0,065
0,912 0,344 0,379
0,089 0,037 0,042
decembar 2009
PCR AmpliSens
adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus negat neglig neglig negativan
IDEIA Rotavirus DakoCytomation OPCrit = 0,150
0,040 0,044 0,039 0,041 0,260 0,044 0,046 0,042 0,047 0,041 0,039 0,048 0,055 0,035 0,039 0,040 0,041 0,033 0,046 0,049 0,048 0,038 0,039 0,029 0,037 0,036 0,043 0,043 0,039 0,042 0,034 0,037 0,041 0,036
Rotavirus - antigen - IFA-BEST CJSC "Vector-Best"
OPKrit OPKrit OPKrit
0,250 0,263 0,251
0,105 0,042 0,043
0,046 0,143 0,133
0,227 0,045 0,042
0,065 0,068 0,054
0,125 0,039 0,042
0,196 0,191 0,182
0,209 0,170 0,154
0,316 0,071 0,073
0,058 0,043 0,049
0,171 0,056 0,061
0,049 0,060 0,064
0,047 0,062 0,065
0,058 0,047 0,066
0,073 0,072 0,066
0,188 0,120 0,109
0,180 0,074 0,072
0,057 0,063 0,058
0,047 0,060 0,047
0,162 0,146 0,143
0,248 0,248 0,260
0,063 0,066 0,104
0,247 0,223 0,251
0,054 0,053 0,070
0,242 0,240 0,248
0,073 0,061 0,103
0,066 0,065 0,064
0,108 0,123 0,192
0,072 0,067 0,071
0,079 0,079 0,087
0,104 0,079 0,164
0,169 0,150 0,162
0,140 0,166 0,146
0,114 0,133 0,131
Liječenje helmintijaze kod djece izuzetno je važno, jer posljedice toga mogu biti zaostajanje u razvoju fizičkog i mentalnog, patološki procesi unutrašnjih organa i sistema, pa čak i smrt. Osim toga, helmintičke infestacije su vrlo zarazne, zbog čega se tako lako šire u predškolskim i školskim ustanovama. Na osnovu toga je jasno koliko je važno pravovremeno liječenje helmintoze kod djece.
Prvi znakovi helminta kod djece
Crvi su uslovno patogeni agensi ljudskog tijela, crvi čiji je čovjek konačni vlasnik. Osim toga, u ovom slučaju dob vlasnika ne igra nikakvu ulogu, mogu se primijetiti različite vrste helmintioza i kod djece i kod odraslih pacijenata.
Zašto je helmintijaza opasna za dijete?
Kao što je ranije spomenuto, helminti kod djece mogu uzrokovati ozbiljne bolesti i patologije, zbog čega se usporava mentalni i fizički razvoj. Moguće komplikacije za svaku vrstu helmintijaze mogu biti potpuno različite, na primjer:
Stoga dječje helmintoze zahtijevaju još više pažnje, pravovremenu medicinsku pomoć, dugotrajno praćenje specijalista i prevenciju.
Glavni simptomi kod djece
Simptomi helmintijaze kod djeteta mogu biti različiti, ovisno o vrsti crva:
1. Okali crvi se odmah manifestuju kao alergijska reakcija, groznica i mučnina kod deteta. Prve pojave su obično svijetle, ali brzo nestaju. Nakon toga mogu se primijetiti sljedeći simptomi: 
- kolike i disbioza i novorođenčad;
- kod beba mlađih od 1 godine, bol u pupku, problemi sa stolicom, alergije i dijateza;
- starija djeca imaju problema sa spavanjem, nemirno ponašanje, noćne more;
- djecu od 3-7 godina karakteriziraju mučnina, groznica, kašalj i bol u trbuhu, osip.
2. Enterobioza, čiji su uzročnici pinworms, manifestuje se kao izbrisana klinička slika. I tek nakon 1 mjeseca mogu se primijetiti sljedeći simptomi:
- kod novorođenčadi, upala, otok i crvenilo anusa, odbijanje jela, plač noću, nedostatak apetita;
- djecu mlađu od godinu dana karakteriziraju isti simptomi, kao i jak svrab anusa noću (od 23.00 do 1.00), djevojčice pate od upale genitalija;
- kod starije dece bol u stomaku u blizini pupka, poremećaj sna, svrab u zadnjici.
3. Simptome toksokaroze je teško prepoznati, osim niske tjelesne temperature i alergijskih reakcija (osip, koprivnjača, svrab i oteklina). Nakon infekcije može se javiti kašalj koji dodatno uzrokuje upalu pluća ili bronhitis, posebno kod najmanjih pacijenata. 
Trihineloza sugerira blage znakove kod novorođenčadi, inače se uočavaju sljedeći znakovi:
- grozničavo stanje;
- oticanje lica;
- bol u mišićima;
- alergijske reakcije;
- djeca od 5 godina i starija mogu imati uvećane krajnike, slezinu, osip i upalu grla.
Najteže je dijagnosticirati simptome helmintoze kod djece od 2 godine i mlađe, jer dijete ne može objasniti svoje ponašanje i stanje. Stoga je za sve atipične manifestacije i ponašanje djeteta bolje pokazati liječniku.
Šta prvo treba učiniti?
Crvi koji su pronađeni u stolici djeteta najvažniji su simptom bolesti, nakon čega morate odmah potražiti pomoć ljekara. Nijedno liječenje helmintima ne može biti uspješno bez pravilno provedene dijagnoze. Metode istraživanja u ovom slučaju trebale bi biti složene, uključujući sljedeće procedure: 
- uzimanje struganja iz anusa;
- proučavanje djetetovog izmeta;
- test krvi;
- biopsija mišića u rijetkim slučajevima sa sumnjom na trihinelozu;
- serološki test krvi;
- Rendgen, ultrazvuk, tomografija;
- ELISA za otkrivanje antitijela u krvi.
Metode liječenja
Liječenje helmintoze kod djece treba biti sveobuhvatno, dobro osmišljeno, propisano sa preciznim dozama i učestalošću primjene lijeka. To je zbog činjenice da se lijekovi s toksičnim komponentama koriste za anthelmintički učinak, što znači da neracionalna upotreba može dovesti do nuspojava. Osim toga, kod kuće je prikladno alternativno liječenje ljekovitim biljkama.
Narodni lijekovi
Moderno liječenje s narodnim lijekovima za takve bolesti za djecu uključuje 4 efikasna načina: 
O bilo kojoj metodi kućnog liječenja treba unaprijed razgovarati sa svojim ljekarom. Treba imati na umu da postoje kontraindikacije za biljke i narodne lijekove u obliku individualne netolerancije.
Tretman lijekovima
- Kod enterobijaze i askariaze obično se koriste lijekovi kao što su Pirantel i Mebendazol. Uzimanje Pirantela je prikladno u dozi od 10 mg tvari za svaki kilogram težine od pinworms i 5 mg / kg od ascaris. Mebendazol se uzima dva puta dnevno po 50 mg za djecu od 2-3 godine tri dana za redom, dva puta po 100 mg tri dana zaredom za djecu stariju od 3 godine, nakon 3 sedmice terapija se ponavlja.
- U slučaju toksokaroze, Mebendazol se propisuje u drugoj dozi - za djecu od 2 godine i stariju, dva puta dnevno, 100 mg 14-10 dana.
- Liječenje trihineloze prima mebendazol 5 mg po kilogramu težine, nakon čega se doza dijeli u tri doze dnevno. Tok tretmana je 1 sedmica pod strogim nadzorom ljekara.
Prevencija helmintoze
- pranje ruku odmah nakon kontakta sa životinjama, nakon ulice i pješčanika, odlaska u toalet i prije jela;
- jesti samo čistu hranu;
- pravilno provedena toplinska obrada mesnih i ribljih proizvoda;
- pijenje prokuvane vode;
- poštivanje lične higijene i higijene;
- redovno dehelmintiziranje kućnih ljubimaca;
- provođenje preventivne dehelmintizacije kod djece od 2 godine i više.
Test krvi na toksokar
Osobine ljudske infekcije toksokarozom
Nosioci infekcije su psi, rjeđe mačke. Jaja toksokara se distribuiraju sa izmetom pasa lutalica. Jednom na tlu, u vodi ili zadržavajući se na krznu životinje, na razne načine se unose u zdravo tijelo.
Reakcija na upad
Iz medicinske statistike je poznato da su odrasli manje skloni oboljevanju od toksokaroze, osim ako je njihovo zanimanje ugroženo. Djeca imaju mnogo veću vjerovatnoću da dobiju infekciju.
Najčešći simptomi toksokaroze:
- Groznica bez ikakvih bolesti.
- Povećanje temperature.
- Jačanje i smanjenje bola u glavi ili abdomenu.
- Pojava kožnog osipa koji se ne može eliminisati.
- Natečenost lica.
- Povećanje nivoa eozinofila u krvi, otkriveno općom analizom.
Da bi se postavila tačna dijagnoza, propisan je imunološki test na toksokar. Prisutnost proteinskih spojeva u krvi, koji nose genetsku informaciju helminta (antigena), izaziva imunitet na proizvodnju antitijela igg klase. Ovo je prvi znak infekcije toksokarozom.
Preliminarna dijagnostika
Početna faza pacijentove anamneze je kolektivna. Prije slanja pacijenta na analizu krvi na toksokarozu, potrebno je proučiti povijest bolesti i napraviti preliminarni pregled.
Primarna dijagnoza:
- Proučavanje otežavajućih okolnosti koje bi mogle izazvati infekciju - specifičan rad sa životinjama ili prisustvo kućnog ljubimca, iskopavanje u potencijalno opasnim područjima, igra djece na mjestima gdje se psi šetaju.
- Fizikalni pregled pacijenta. Pregled kože radi potkožne invazije toksokarima, kapaka i očnih jabučica, palpacija.
- Imenovanje detaljne analize krvi. Tokom infekcije toksokarozom, karakterističan je značajan porast nekih pokazatelja - eozinofila (70-80%), limfocita, ESR. Dok nivo hemoglobina značajno opada.
- Uzimanje uzoraka jetre. Kod teške invazije utiče opterećenje na jetru, što se očituje snažnim skokom bilirubina.
Nemoguće je dobiti direktnu potvrdu invazije Toxocar rutinskim testovima (krv, koprogram, bris). Također, duodenalna studija nije informativna, jer je larve teško migrirati.
Nakon dobijanja rezultata preliminarnog pregleda, koji ukazuju na moguću infekciju toksokarima, i diferenciranja navodne dijagnoze od bolesti sa sličnim simptomima, pacijentu se dodjeljuje ELISA test na toksokarozu.
Vezani imunosorbentni test
Glavni cilj ovog istraživanja je potvrditi prisustvo toksokara u ljudskom tijelu. Antitijela na ove helminte nalaze se u krvnoj plazmi, pa se uzima iz vene.
Analiza toksokara zahtijeva određene pripreme:
- Nemojte jesti masnu ili tešku hranu dan prije zahvata.
- Ne pijte zašećerena, gazirana ili alkoholna pića tokom dana prije posjete laboratoriji.
- Uzmite uzorke na prazan želudac.
- Nemojte uzimati lekove prethodnog dana i dana za koji je zakazana pretraga.
Treba napomenuti da na ovaj vrlo informativan način otkrivanja invazije mogu utjecati neke okolnosti. Lažno pozitivan rezultat može se pojaviti ako pacijent ima:
- Onkološke bolesti.
- Plućna tuberkuloza.
- Teške patologije jetre.
- Autoimuni sindrom.
- Antifosfolipidni sindrom.
- Trudnoća.
U tom slučaju neće biti moguće dobiti 100% potvrdnu analizu, jer pod tim okolnostima odbrambeni sistem proizvodi i imunoglobuline (antitijela). Potrebno je provesti dodatnu dijagnostiku i razlikovati toksokarozu od navedenih faktora.
Koncentracija imunoglobulina (titar) IgG klase dostiže maksimalnu moguću vrijednost nakon 2-3 mjeseca od početka invazije. Što je infekcija teža, to je ta brojka veća.
ELISA rezultati
Da bi se postavila dijagnoza, pažljivo se proučava enzimski imunotest, dobijeni rezultati se upoređuju s referentnim vrijednostima. Norma je titar antitijela od 1:100 s indeksom pozitivnosti manjim od 0,9.
Numeričke vrijednosti naslova
Dobiveni rezultati mogu biti negativni, pozitivni, slabo pozitivni ili upitni. Broj AT titara ovisi o težini invazije i starosti njenog nastanka.
Dekodiranje analize:
- AT titar do 1:100 - rezultat je negativan. U tijelu pacijenta nisu pronađene larve toksokara.
- AT titar do 1: 400 - rezultat je slabo pozitivan. Pacijent ima slabu invaziju ili se razvija okularni oblik toksokaroze. U nekim slučajevima indikator govori o nedavnoj infekciji.
- AT titar do 1: 600 - rezultat je pozitivan. Osoba pati od kliničkog oblika helmintijaze, ako se otkrije, potrebna je hitna terapija.
- AT titar do 1: 800 - rezultat je pozitivan. To govori o teškoj invaziji progresivne prirode i visokom udjelu vjerojatnosti razvoja patološkog procesa unutarnjih organa.
Uz rijetke izuzetke, ELISA studije otkrivaju zanemareni oblik invazije s primjesom helmintioza različitog porijekla. U ovom slučaju ukupna antitijela mogu biti veća od 1:800.
Koeficijent pozitivnosti
U enzimskom imunosorbentnom testu za toksokarozu s titrom od 1: 400 - 1: 600 za razlikovanje invazije od sporednih faktora, dobiveni pokazatelji se upoređuju s referentnom vrijednošću. Razlika između ovih brojeva obično se naziva indeks ili koeficijent pozitivnosti.
Obično, u obliku sprovedene ELISA, jedan indikator stoji nasuprot drugom. Prvo je norma, drugo može značiti:
- Do 0,9 - rezultat je negativan. Nisu pronađene larve toksokara.
- 0,9-1,1 - rezultat je sumnjiv. U tom slučaju se dodjeljuje ponovljena dijagnostika.
- 1,1-2,2 - rezultat je slabo pozitivan. Osoba je nosilac sa slabom invazijom.
- 2,2-4,2 - rezultat je pozitivan. Umjerena toksokaroza se razvija već duže vrijeme.
- Iznad 4,4 - rezultat ukazuje na vrhunac helmintičke invazije ili nedavnu helmintiazu.
KP sa rezultatom 4,4 i otkrivenim porastom eozinofilije za 10% može ukazivati na razvoj očnog oblika toksokaroze i prisustvo antitijela na unakrsne invazije, ukupno na toksokarozu.
Imunološki odgovor i optička gustoća antitijela (koeficijent pozitivnosti) zavise od stupnja infekcije toksokarima i njihove lokacije. Najmanji titar i indikator CP samo nam omogućavaju da pretpostavimo odsustvo helminta, ali ne i da to tvrdimo.
Dostavljene informacije ne mogu poslužiti kao izvor za samodijagnozu ili samoliječenje. Rezultati ELISA u kombinaciji s preliminarnim pregledom mogu samo specijalistu reći o prisutnosti problema. U laboratoriji Invitro dijagnostika krvi se provodi s visokom preciznošću, rezultat analize popraćen je komentarima stručnjaka o koeficijentu pozitivnosti. Ovo uvelike pomaže doktoru da postavi tačniju dijagnozu.
Broj određenja 96 (48 u duplikatu)
Radni format tableta: ogoljen 12x8, lomljenje 1 rupa.
Osetljivost: 1,5 U / ml.
Raspon mjerenja: 0-400 U / ml.
Volumen ispitnog uzorka nije veći od 25 μl.
Standardizacija uslova za izvođenje enzimske reakcije sa hromogenom u termostatiranoj šejkeru na 37°C.
Set uključuje:
1. Prugasta ploča 12 x 8 jažica, spremna za upotrebu - 1 kom.
2. Uzorci za kalibraciju spremni za upotrebu (0-400 U/ml) obojeni različitim intenzitetom u zavisnosti od koncentracije - 6 bočica.
3. Kontrolni uzorak - 1 boca.
4. Jednokomponentni konjugat, spreman za upotrebu, ne zahtijeva razrjeđivanje - 1 bočica.
5. Rastvor za razrjeđivanje seruma - 1 boca.
6. Hromogeni supstrat, jednokomponentni - rastvor tetrametilbezidina plus (TMB+), spreman za upotrebu, ne zahteva razblaživanje - 1 boca.
7. Puferski rastvor fosfat-fiziološki rastvor sa tween - 2 bočice.
8. Stop reagens, spreman za upotrebu - 1 boca.
9. Film za zaptivanje tableta - 1 kom.
10. Šablona za izradu kalibracionog grafikona - 1 kom.
11. Kupka reagensa - 2 kom.
12. Vrhovi za pipete za 5-200 µl - 16 kom.
Pakovanje tableta - tikovina sa patent zatvaračem.
Stabilnost radne otopine FST-T najmanje 5 dana na temperaturi od +2 ... 8 ° C.
Čuvajte komplet na temperaturi od +2 ... 8 ° C. Rok upotrebe - 1 godina od datuma proizvodnje.
Registrovan kod Roszdravnadzora.
Vodeći ruski proizvođači U segmentu kompleta reagensa za dijagnostiku infekcija: - CJSC "Vector-Best", Novosibirsk; - LLC NPO Diagnostic Systems, N. Novgorod; - CJSC "Ecolab", Electrogorsk, Moskovska oblast. U oblasti kompleta reagensa za dijagnostiku neinfektivnih bolesti i fizioloških stanja: - LLC "Alkor-Bio", Sankt Peterburg; - CJSC "Vector-Best", Novosibirsk; - DOO "Hema-Medica", Moskva. U segmentu reagensa za laboratorijsku dijagnostiku alergija: - LLC "Alkor-Bio", Sankt Peterburg; - CJSC "Vector-Best", Novosibirsk; - LLC NPO Immunotex, Stavropolj. Proizvodnja laboratorijske opreme: - DOO „Pikon, Moskva
Procjena stepena moguće zamjene uvoza po nomenklaturi ispitivanja Nomenklatura analita, j. Odobreno za upotrebu u RF Proizvedeno u RF Stepen moguće zamjene uvoza Markeri zaraznih bolesti% Markeri neinfektivnih bolesti i indikatori fizioloških stanja% Markeri alergije% Ukupno:%
Procjena stepena zamjene uvoza po obimu tržišta proizvoda za tablete ELISA Segmenti tržišta Obim tržišta u Ruskoj Federaciji, mil. Obim prodaje domaćih proizvođača, milion rub. Udio zamjene uvoza Markeri zaraznih bolesti% Markeri nezaraznih bolesti i indikatori fizioloških stanja% Markeri alergije% Oprema 50051% Ukupno:%
Procjena stepena zamjene uvoza po obimu tržišta za proizvode za imunohemijske metode u cjelini Segmenti tržišta Obim tržišta u Ruskoj Federaciji, mil. Obim prodaje domaćih proizvođača, milion rub. Udio zamjene uvoza Markeri zaraznih bolesti% Markeri nezaraznih bolesti i indikatori fizioloških stanja% Markeri alergije% Oprema% Ukupno:%
Problemi domaćih proizvođača u industriji: ELISA metoda postaje zastarjela. Postoji postepena zamena domaćih IF-reagensa uvoznim hemiluminiscentnim; Postojeći sistem javnih nabavki stimuliše ili kupovinu najjeftinije robe, ili uvoznih proizvoda sa jedinstvenim karakteristikama; Jedan od glavnih razloga nerazvijenosti domaćih proizvođača automatske opreme i lokalizacije proizvodnje uvoznih proizvoda je carinska administrativna barijera; Glavni problem novijeg vremena je kolaps sistema državne registracije novih proizvoda u RZN. Ulazak novih proizvoda na tržište je praktično stao, a oni strani proizvođači koji su se ranije registrovali sa dugim listama i dalje imaju prednost u odnosu na domaće; Glavni razlog tehnološkog zaostajanja je nemogućnost dobijanja prava na proizvodnju kompatibilnih proizvoda za savremenu opremu; Nizak stepen konsolidacije domaćih proizvođača i stalni međusobni ratovi cena onemogućavaju razvoj naprednih proizvoda i ravnopravnu konkurenciju vodećim igračima, uključujući i inostrana tržišta.
Prijedlozi: Uvesti vankonkurentnu proceduru za javnu nabavku medicinskih sredstava u okviru FCC-a, nakon čega slijedi pozicijska objava. Određivanje limita finansiranja na osnovu prosječne tržišne cijene će dati određene prednosti domaćim proizvođačima, omogućiti ograničavanje potrošnje skupih uvoznih reagensa i efikasnije kontrolisati korištenje budžetskih sredstava; Promovirati proširenje i konsolidaciju domaćih proizvođača u cilju koncentriranja resursa na razvoj modernih proizvoda i izlazak na međunarodno tržište. Nekonkurentni postupak javne nabavke će brzo ostaviti samo stvarno konkurentna preduzeća na tržištu; Odvojiti državna sredstva za stimulisanje, na principima javno-privatnog partnerstva, razvoj niza testova dovoljnih da osiguraju biološku sigurnost zemlje; Carinske privilegije treba da budu za komponente, a ne za gotove proizvode; Uskladiti sistem registracije sa evropskim, gdje se medicinska sredstva sa niskim nivoom potencijalnog rizika registruju na osnovu deklaracije o usklađenosti.
Učitavanje ...