1 Postavite zadatak
1.1 Komplet je namijenjen istovremenoj detekciji antitijela na viruse humane imunodeficijencije prvog i drugog tipa (HIV-1 i HIV-2) i HIV-1 p24 antigena u humanom serumu i plazmi „in vitro“ metodom indirektnog enzima -vezani imunosorbentni test.
2 Karakteristike i princip rada seta
2.1 Set uključuje:
|
Ime komponente |
Količina |
|
Imunosorbent |
2 tablete |
|
Pozitivna kontrola AT (K + AT) |
1 boca, 3 ml |
|
Pozitivni kontrolni uzorak AG (K + AG) |
3 bočice, liofilizirani preparat |
|
Negativna kontrola (TO -) |
2 bočice od 3 ml |
|
Rastvor konjugata br. 1 (RC-1) |
1 boca, 12 ml |
|
Konjugat br. 2 (Kg-2) |
1 boca, 1 ml |
|
Rastvor za razblaživanje konjugata br. 2 (RR-K2) |
2 bočice od 18 ml |
|
Rastvor pufera supstrata ( BRS) |
2 bočice od 18 ml |
|
Chromogen TMB |
1 boca, 1 ml |
|
Tween PBS koncentrat (FSB-T × 25) |
2 boce od 50 ml |
|
Zaustavite reagens |
1 boca, 12 ml |
|
Komplet ladica za reagens sa vrhovima za višekanalne pipete |
1 komplet |
|
Adhezivni film |
2.2 Glavne komponente ELISA-HIV 1,2 AGAT kompleta su imunosorbent, rastvor konjugata br. 1 i konjugat br.
Imunosorbent je polistirenska ploča u čijim jamicama se sorbuje mješavina rekombinantnih HIV-1 (gp41) i HIV-2 (gp36) antigena i monoklonskih antitijela na HIV-1 p24 antigen.
Rastvor konjugata br. 1 je mješavina biotinom označenih monoklonskih ljudskih antitijela protiv HIV-1 p24 antigena i biotinom označenih rekombinantnih HIV-1 i HIV-2 proteina.
Konjugat br. 2 je streptavidin konjugiran sa peroksidazom hrena.
Pozitivna kontrola AT- ljudski krvni serum koji sadrži antitela na HIV-1 i HIV-2, koji ne sadrži antitela na hepatitis C i Treponema pallidum, HIV-1 p24 antigen i HBs antigen, inaktiviran zagrevanjem tokom 3 sata na 56 ºC.
Pozitivni kontrolni uzorak AG- ljudski krvni serum koji sadrži nativni HIV-1 p24 antigen, bez antitela na HIV-1, HIV-2, virus hepatitisa C i Treponema pallidum i HBs antigen, inaktiviran zagrevanjem tokom 3 sata na 56 ºC.
Negativna kontrola- ljudski krvni serum koji ne sadrži antitela na HIV-1, HIV-2, HCV, HIV-1 p24 antigen i HBs antigen, inaktiviran zagrevanjem tokom 3 sata na 56 ºC.
Princip seta. Kada se rastvor konjugata br. 1 i uzorci inficiranog krvnog seruma dodaju u jažice ploče, antigen p24 se vezuje i za specifična antitela na čvrstoj fazi i za monoklonska biotinilirana anti-p24 antitela koja su deo rastvora konjugata. br. 1; Antitela specifična za HIV vezuju se i za rekombinantne HIV-1 i HIV-2 antigene, adsorbovane na čvrstoj fazi, i za antigene uključene u rastvor konjugata br. 1, formirajući komplekse antigen-antitelo. Imuni kompleksi anti-p24 specifičnih antitela i p24 antigena detektuju se konjugatom #2. Nakon ispiranja nevezanih komponenti, u jažice ploče dodaje se otopina supstrata peroksidaze (vodikov peroksid) i TMB hromogena.
Reakcija peroksidaze se zaustavlja dodavanjem stop reagensa (0,9 M rastvor sumporne kiseline), a intenzitet boje rastvora u jamicama se meri na spektrofotometru kao vrednost optičke gustine (OD) na talasnoj dužini od 450 nm.
OD vrijednost je direktno proporcionalna koncentraciji specifičnih antitijela i/ili p24 antigena u uzorku seruma ili plazme. Što je veći sadržaj antitijela i/ili p24 antigena u uzorku seruma, to je veći intenzitet bojenja.
2.3 Set je dizajniran za držanje 24 nastupa ELISA: 1 set - 1 traka (8 rupa). Ukupno - 192 definicije uključujući kontrolne uzorke.
3 Mjere opreza pri rukovanju kompletom
3.1 Sve komponente kompleta su netoksične u korištenim koncentracijama. Međutim, raditi sa svim test uzorcima ljudskog krvnog seruma (plazme), koje treba smatrati potencijalno zaraznim, sposobnim za skladištenje i prijenos HIV-a, virusa hepatitisa B ili bilo kojeg drugog uzročnika virusne infekcije, sa otpadnim otopinama i tekućinama, različitom opremom koji mogu biti kontaminirani, proces analize zahtijeva određene sigurnosne mjere pri korištenju kompleta:
Radovi se moraju izvoditi u posebno opremljenoj prostoriji;
Neophodno je raditi uz upotrebu lične zaštitne opreme i poduzimanje mjera opreza u skladu sa zahtjevima, i.
3.2 Stop reagens koji sadrži sumpornu kiselinu je iritantan. U slučaju kontakta sa kožom i sluzokožama, odmah isprati sa dosta vode.
3.3 Prilikom rada sa kompletom radna mjesta moraju imati dovodnu i izduvnu ventilaciju.
3.4 Sve osobe koje rade u laboratoriji sa kompletima moraju biti podvrgnute obaveznom ljekarskom pregledu u skladu sa zahtjevima.
3.5 Medicinski otpad i/ili neiskorišteni kompleti kojima je istekao rok trajanja moraju se pravilno odložiti.
4 Pravila za rad sa setom
4.1 Da bi se isključili lažni rezultati, uzorci za testiranje moraju biti pripremljeni i uskladišteni u uslovima koji sprečavaju rast bakterija. Uzorke seruma koji sadrže agregirane komponente seruma ili sediment potrebno je razbistriti centrifugiranjem (5-10) minuta pri brzini rotacije od 3000 o/min. Uzorci seruma mogu se čuvati na temperaturi (2-8) °C ne duže od 5 dana. Zamrznuti uzorci (po mogućnosti do temperature od najmanje minus 20°C) mogu se čuvati ne duže od 1 godine. Treba izbjegavati ponovljene cikluse zamrzavanja-odmrzavanja uzoraka.
Treba imati na umu da uzorci s hemolizom, hiperlipidemijom, rastom bakterija, kao i oni koji su dugo čuvani bez zamrzavanja, nisu prikladni za analizu.
Pouzdanost rezultata ovisi o ispunjavanju sljedećih pravila:
Nije dozvoljeno koristiti komplet nakon isteka roka trajanja, kao ni mešati komponente kompleta različitih serija;
Za pripremu svakog reagensa treba koristiti posebnu posudu;
Ne tretirajte sav pribor koji se koristi za pripremu reagensa dezinficijensima i deterdžentima. Ako je potrebno, isperite vodom za piće, a zatim pet puta isperite destilovanom vodom;
Za rad sa TMB i PX hromogenom potrebno je koristiti odvojene posude za rastvore, vrhove pipeta i posude.
Potrebno je obratiti pažnju na temeljito miješanje reagensa;
Vrijeme između punjenja i pražnjenja jažica ploče s otopinama i reagensima treba biti najmanje 30 s. Sušenje bunara nije dozvoljeno u svim fazama ELISA;
Kada koristite mašinu za pranje, pratite stanje posude za rastvor za ispiranje ploča i creva za povezivanje: ne bi trebalo da pokazuju znake rasta bakterija ili gljivica;
Potrebno je koristiti automatske pipete sa zamjenjivim vrhovima, ovjerene vrijednošću prosječne doze i ponovljivošću rezultata pipetiranja (greška nije veća od 3%);
Dozatore i radne površine tretirajte otopinom sa volumnim udjelom etil alkohola od 70%. Nemojte koristiti hloramin i druge supstance koje sadrže hlor;
Za rukovanje ispitnim i kontrolnim uzorcima preporučuju se vrhovi za pipete za jednokratnu upotrebu. Svaki uzorak seruma kao i komplet reagensa moraju se uzeti posebnim vrhom.
Prilikom dodavanja PK-1 u jažice, vrhom pipete ne dodirujte površinu ploče i rastvor u jažicama.
Tokom analize izbjegavajte direktnu sunčevu svjetlost na radnoj površini.
4.2 Prilikom otvaranja i rastvaranja liofiliziranih komponenti potrebno je osigurati da na poklopcu i zidovima bočica ne ostane suha tvar.
5 Oprema i materijali potrebni za analizu
5.1 Spektrofotometar vertikalnog skeniranja, koji omogućava mjerenje optičke gustine rastvora u jamicama ploče na talasnoj dužini od 450 nm;
Polu- ili automatska mašina za pranje ploča (perilica);
Termostat sa suvim vazduhom tipa TS-80 M2, koji održava temperaturu (37 ± 1)°C, ili sličnih karakteristika;
Jednokanalne automatske pipete sa zamjenjivim vrhovima, koje omogućavaju uzimanje tekućine od 0,01 do 5,0 ml;
Pipete 8-kanalne automatske sa zamjenjivim vrhovima, omogućavaju uzimanje tekućine do 0,5 ml;
Graduirani cilindar kapaciteta 2000 ml;
Laboratorijska boca kapaciteta 2000 ml;
Staklene bočice kapaciteta 20 ml;
Posude za reagense ili Petrijeve zdjelice (promjer 100 mm);
Medicinska upijajuća pamučna vuna;
Filter papir;
Hirurške gumene rukavice;
Rastvor sa volumnim udjelom etil alkohola 70%;
Otopina s masenim udjelom vodikovog peroksida 6%;
Dejonizirana ili destilovana voda;
Kontejner za sakupljanje čvrstog otpada;
Kontejner za odvod tečnog otpada.
6 Priprema za analizu
6.1 Prije analize, izvadite komplet reagensa iz hladnjaka, otvorite poklopac kutije i držite komponente kompleta na temperaturi (18-25) °C 30 min.
Prije analize temeljito promiješajte sve uzorke seruma (plazme) i reagense.
Potrošnja reagensa za set za analizu, koja je određena brojem korištenih traka, data je u Tabeli A.1 Dodatka A.
6.2 Priprema rastvora za pranje ploča
Pažnja! Pripremite otopinu za pranje ploča 15 minuta prije početka analize!
Ako boca sa FSB-T × 25 sadrži talog, mora se zagrijati prije upotrebe na temperaturi od (37 ± 1) °C dok se talog potpuno ne otopi. Dodajte sadržaj boce sa FSB-T × 25 u merni cilindar kapaciteta 2000 ml, a zatim dodajte destilovanu vodu do oznake 1250 ml i lagano promiješajte rastvor. Rastvor se može čuvati na temperaturi od (2-8) °C 72 sata.
Ako se koristi jedna ili više traka, protresite sadržaj bočice sa FSB-T × 25 snažno (20-30) s, unesite potrebnu zapreminu rastvora (Tabela A.1) u mernu čašu ili cilindar, dodajte potrebnu količinu destilovane vode i promešati rastvor... Neiskorišteni FSB-T × 25 može se čuvati u zatvorenoj bočici na temperaturi od (2-8) °C tokom roka trajanja kompleta.
6.3 Priprema imunosorbenta
Imunosorbent je spreman za upotrebu.
Otvorite paket i postavite potreban broj traka na okvir. Preostale trake čuvajte u dobro zatvorenoj vrećici sa sredstvom za sušenje na (2-8) °C 3 mjeseca.
6.4 Priprema K + AT, K -, RK-1, RR-K2, BRS i stop reagensa
K + AT, K -, RK-1, PP-K2, BRS i stop reagens su spremni za upotrebu.
Pažnja! U boci sa RK-1 moguće su padavine. Za analizu se mora koristiti supernatant.
Neiskorišteni RK-1, RR-K2, BRS i stop reagens, nakon otvaranja bočica, mogu se čuvati u zatvorenim bočicama na temperaturi od (2-8) °C tokom roka trajanja kompleta.
Ostatak K + AT i K - nakon otvaranja bočice, može se čuvati u zatvorenim bočicama na temperaturi od (2-8) °C tokom roka trajanja kompleta.
6.5 Priprema rastvora K + AG
Pažnja! Pripremite rastvor K+AG 15 minuta pre početka analize!
Da biste obnovili liofilizirani K + AG, prije otvaranja boce lagano tapkajte kako biste otresli čestice koje su prianjale za stijenke boce ili čepa. Otvorite bocu i stavite čep naopako na suhu površinu. Dodajte 0,8 ml destilovane vode u bocu. Zatvorite bocu čepom, inkubirajte 10 minuta na temperaturi od (18-25) °C i lagano nagnite i rotirajte bocu, miješajte njen sadržaj dok se potpuno ne otopi, izbjegavajući stvaranje pjene.
Rekonstituisani K + AG može se čuvati u zatvorenoj boci na temperaturi od (2-8)°C mesec dana, na temperaturi od minus 20°C šest meseci. Dozvoljeno je jednokratno zamrzavanje-odmrzavanje obnovljenog K + AG.
6.6 Priprema Kg-2 rastvora u radnom razblaženju
Uzmite zapreminu navedenu u tabeli A.1 iz boce sa Kg-2 i prenesite je u bocu sa PP-K2. Sadržaj boce dobro promiješajte, izbjegavajući stvaranje pjene.
Ako se koristi jedna ili više traka, uzmite potrebnu količinu PP-K2 u čistu bocu, dodajte Kg-2 u skladu sa tabelom A.1 i promešajte rastvor, izbegavajući stvaranje pene.
Pažnja! Rastvor Kg-2 u radnom razblaženju priprema se neposredno pre upotrebe! Rastvor Kg-2 u radnom razblaženju može se čuvati 15 minuta na temperaturi od (18-25)°C. Koristite samo novu kupku reagensa i nove savjete!
Ostatak Kg-2 može se čuvati u zatvorenoj bočici na temperaturi od (2-8) °C tokom roka trajanja kompleta.
6.7 Priprema radnog rastvora podloge
Bočica s TMB hromogenom mora se zagrijati prije upotrebe na temperaturi od (37 ± 1)° Od dok se kristali potpuno ne otope.
Uzmite zapreminu navedenu u tabeli A.1 iz bočice sa TMB hromogenom i prenesite je u bočicu sa BRS. Sadržaj boce dobro promiješajte, izbjegavajući stvaranje pjene.
Ako se koristi jedna ili više traka, uzmite potrebnu količinu BRS-a u čistu bočicu, dodajte TMB hromogen u skladu sa tabelom A.1 i promešajte rastvor, izbegavajući stvaranje pene.
Pažnja! Radni rastvor podloge pripremiti neposredno pre upotrebe na tamnom mestu! Rastvor se može čuvati 20 minuta na temperaturi od (18-25)°C na tamnom mestu.
Otopina mora biti zaštićena od svjetlosti i kontakta s metalima ili metalnim ionima. Pre upotrebe rastvor supstrata mora biti bezbojan. Posuđe koje će doći u kontakt sa rastvorom supstrata tokom reakcije treba prati bez upotrebe sintetičkih deterdženata. Koristite samo novu kupku reagensa i nove savjete!
Ostatak TMB hromogena može se čuvati u zatvorenoj bočici na temperaturi od (2-8) °C tokom roka trajanja kompleta.
7 Zahtjevi za ispiranje ploča
U svim fazama pranja potrebno je kontrolisati punjenje svih bunara i potpuno uklanjanje (aspiraciju) tečnosti iz njih;
Potrebno je pri svakom pranju sve jažice puniti rastvorom do vrha (0,30-0,35 ml po bunarčiću), bez prelivanja i prelivanja tečnosti iz susednih bunara;
Potrebno je inkubirati jažice napunjene rastvorom za ispiranje ploča 30 s;
Prilikom svake aspiracije pažljivo izvadite preostalu tekućinu iz jažica tako što ćete okvir s trakama u obrnutom položaju tapkati po nekoliko puta presavijenom filter papiru, položenom na polietilenski list;
Loše ispiranje ploče će rezultirati netačnim rezultatima.
8 Analiza
8.1 Dodajte u bilo koje dvije udubine ploče 0,07 ml(70 μl) K + AT, u druge dvije rupe - svaka 0,07 ml(70 μl) K + AG, u ostale tri rupe - svaka 0,07 ml(70 μl) TO - .
Pažnja! Prilikom postavljanja ELISA na jednu traku, dozvoljeno je koristiti dvije jažice za K -, jednu jažicu za K + AT i jednu jažicu za K + AG.
Dodajte u preostale jažice ploče 0,07 ml(70 μl) proučavanih uzoraka ljudskog krvnog seruma (plazme).
Pažnja! Svaki uzorak se mora uzeti vrhom za jednokratnu upotrebu!
8.2 U svim jamicama ploče na vrhu kontrolnih uzoraka i uzoraka krvi za testiranje seruma (plazme). odmah depozit by 0,05 ml(50 μl) RC-1... Pomiješajte sadržaj jažica laganim tapkanjem po rubovima ploče.
8.3 (37 ± 1) ° Iznutra 60 minuta.
Pažnja!(1-2) minuta prije kraja inkubacije pripremite Kg-2 rastvor u radnom razblaženju (odeljak 6.6).
8.4 Uklonite sadržaj jažica pomoću podloške, a zatim isperite jažice na ploči otopinom za pranje ploče (odjeljak 6.2) sedam puta.
8.5 Dodajte u sve jažice ploče po 0,15 ml(150 μl) rastvora Kg-2 u radnom uzgoju (p 6.6).
8.6 Pokrijte ploču folijom ili pokrijte poklopcem i inkubirajte u termostatu na temperaturi (37 ± 1) ° Iznutra 10 min.
8.7 Uklonite sadržaj jažica ploče pomoću podloške, zatim isperite jažice ploče otopinom za pranje ploča (odjeljak 6.2) sedam puta.
8.8 Dodajte u sve udubine na ploči 0,15 ml(150 μl) radni rastvor supstrata(klauzula 6.7).
Prilikom pripreme radnog rastvora supstrata (tačka 6.7) f lak sa TMB hromogenom mora se zagrejati pre upotrebe (3-5) min na temperaturi od (37± 1) °C dok se kristali potpuno ne otope.
8.9 Pokrijte ploču folijom ili pokrijte poklopcem i inkubirajte u termostatu na temperaturi (37 ± 1) ° WITH na tamnom mestu za 15 minuta.
Pažnja! Nakon inkubacije u jažicama sa uzorcima seruma koji sadrže antitela na HIV-1 i/ili HIV-2, i/ili HIV-1 p24 antigen, boja rastvora će se promeniti od bezbojne do plave sa različitim intenzitetom u zavisnosti od koncentracije antitela. i/ili antigen u uzorku test seruma.
8.10 Zaustavite reakciju peroksidaze dodavanjem u sve jažice 0,05 ml(50 μl) stop reagens.
Pažnja! U jamicama sa uzorcima seruma koji sadrže antitela na HIV-1 i/ili HIV-2, i/ili HIV-1 p24 antigen, boja rastvora će se promeniti od plave do žute sa različitim intenzitetom.
8.11 Najkasnije (1-2) minuta nakon zaustavljanja reakcije, odredite OD u jažici u modu jedne talasne dužine na talasnoj dužini 450 nm.
9 Obrada rezultata analize
9.2 Uzmite u obzir rezultate samo ako:
Vrijednost Opsr K - ne prelazi 0,2 OE;
Svaka pojedinačna vrednost OD K - ne bi trebalo da odstupa od ODsr K - za više od 30%. Ako jedna od tri vrijednosti OP K - prelazi ovu granicu, treba je isključiti iz izračunavanja OPsr K -. Ako dvije od tri vrijednosti OD K - prelaze ovu granicu, analizu treba ponoviti na reagensima novog kompleta;
Vrijednost Opsr K + AT je veća od 1,0 OE;
Vrijednost Opsr K + AG je veća od 1,0 OU.
9.3 Ako su gore navedeni uslovi ispunjeni, izračunajte kritičnu vrijednost (OPcrit.), OE, prema formuli (1):
OPcrit. = OPsr K - + 0,14 (1).
10 Analitičke i dijagnostičke performanse
Osjetljivost komplet reagensa ELISA-HIV 1,2 AGAT za detekciju p24 antigena HIV-1 -
Specifičnost komplet reagensa ELISA-HIV 1,2 AGAT- 100% standardni AT (-) HIV. Standardni panel seruma koji ne sadrži antitela na virus humane imunodeficijencije tip 1 i 2 (HIV-1,2) i HIV-1 antigen (p24) .OSO42-28-214-02P.Kat # INS-20. CJSC MBS.
11 Obrazac za oslobađanje kompleta
11.1 Set je dostupan u pet opcija konfiguracije:
1 set 1P - ručna analiza. Komplet je dizajniran za 12 ELISA testova na sklopivoj ploči: 1 set - 1 traka (8 rupa). Ukupno - 96 određivanja, uključujući kontrolne uzorke;
2 seta 2M - ručna analiza. Komplet je dizajniran za izvođenje 2 seta ELISA na monolitnim pločama: 1 postavka - 1 ploča. Ukupno - 192 određivanja, uključujući kontrolne uzorke;
3 set 2P- izvođenje analize ručno. Set je dizajniran za nošenje 24 nastupa ELISA za 2 sklopivi x ploče: 1 set - 1 traka (8 rupa). Ukupno - 192 definicije uključujući kontrolne uzorke;
4 kompleta A2M - analiza na automatskom analizatoru. Komplet je dizajniran za izvođenje 2 seta ELISA na monolitnim pločama: 1 postavka - 1 ploča. Ukupno - 192 određivanja, uključujući kontrolne uzorke;
5 set A2P - analiza na automatskom analizatoru. Komplet je dizajniran za 24 ELISA testa na 2 sklopive ploče: 1 set - 1 traka (8 jažica). Ukupno - 192 određivanja, uključujući kontrolne uzorke.
12 Uslovi skladištenja i upotrebe kompleta
12.1 Komplet treba čuvati u čistoj prostoriji zaštićenoj od vlage i svjetlosti na temperaturi od (2-8)°C tokom cijelog roka trajanja. Nemojte zamrzavati komponente kompleta.
12.2 Da biste dobili pouzdane rezultate, potrebno je striktno pridržavanje uputa za upotrebu kompleta.
12.3 Rok upotrebe kompleta - 12 mjeseci.
Dodatak A
Tabela A.1 – Potrošnja reagensa za ELISA komplet
|
reagens, ml |
Broj korištenih traka, kom. |
|||||||||||
|
Priprema rastvora za pranje ploča |
||||||||||||
|
FSB-T × 25 |
||||||||||||
|
Destilirano vode |
||||||||||||
|
Priprema Kg-2 rastvora u radnom razblaženju |
||||||||||||
|
RR-K2 |
||||||||||||
|
Priprema radnog rastvora podloge |
||||||||||||
|
Chromogen TMB |
||||||||||||
Bibliografija
|
Sanitarna pravila |
Naredba Ministarstva zdravlja Republike Bjelorusije od 16. decembra 1998. br. 351 O reviziji resornih propisa koji uređuju pitanja vezana za HIV/AIDS |
|
|
Naredba Ministarstva zdravlja Republike Bjelorusije od 25. novembra 2002. br. 165 O dezinfekciji i sterilizaciji od strane zdravstvenih ustanova |
||
|
Rezolucija Ministarstva zdravlja Republike Belorusije od 28. aprila 2010. godine br. 47 O odobravanju Uputstva o postupku obavljanja obaveznih zdravstvenih pregleda radnika i poništavanju nekih uredbi Ministarstva zdravlja Republike Bjelorusije |
||
Jedinstveni broj registra
Registracijski broj medicinskog uređaja
FSR 2011/10182
Datum državne registracije medicinskog sredstva
Naziv medicinskog uređaja
Set reagensa "MilaLab-ELISA-HIV-AGAT" enzimski imunosorbentni test za otkrivanje antitijela na viruse humane imunodeficijencije tipova 1 i 2 (HIV-1 i HIV-2), HIV-1 grupe O i HIV-1 p24 antigen prema TU 9398 -187-05941003-2017
koji se sastoji od: - imunosorbenta - polistirenske sklopive ploče sa 96 jažica na trake (ili u jažice), u čijim jamicama se sorbiraju umjetni antigeni - gp160, gp41, p31 HIV-1, gp41 HIV-1 grupa O, gp36 HIV- 2 i antitela na HIV-1 p24 antigen: set 1 (1 ploča), set 2 (2 ploče), set 3 (5 ploča), - Konjugat-1: set 1 (1 fl. 1,2 ml), set 2 (1 fl. 1,2 ml), set 3 (1 bočica od 3,6 ml ili 3 bočice od 1,2 ml), - Konjugat-2: set 1 (1 bočica od 2,0 ml), set 2 (1 bočica od 2,0 ml), set 3 (1 bočica 4,0 ml ili 2 bočice od 2,0 ml), - RRK-1 - otopina za razrjeđivanje za konjugat-1: set 1 (1 bočica od 12,0 ml), set 2 (1 bočica od 12,0 ml), set 3 (3 bočice od 12,0 ml svaka) , - RRK-2 - rastvor za razblaživanje konjugata-2: set 1 (1 bočica 20,0 ml), set 2 (1 bočica od 20,0 ml), set 3 (2 bočice od 20,0 ml), - K + AT - kontrolni pozitivni uzorak koji sadrži antitela na HIV: set 1 (1 bočica 2,0 ml), set 2 (1 bočica od 2,0 ml), set 3 (1 bočica od 4,0 ml ili 2 bočice od 2,0 ml), - K + AG - kon Troll pozitivan uzorak koji sadrži umjetni HIV-1 p24 antigen: set 1 (1 bočica. 2,0 ml), set 2 (1 bočica 2,0 ml), set 3 (1 bočica od 4,0 ml ili 2 bočice od 2,0 ml svaka), - K- - kontrolni negativni uzorak: set 1 (1 bočica od 2,5 ml), set 2 (1 boca 2,5 ml), set 3 (1 boca od 5,0 ml ili 2 boce po 2,5 ml), - PR - rastvor za pranje: set 1 (1 boca od 50,0 ml), set 2 (1 boca od 120,0 ml), set 3 (2 boce od 120,0 ml), - Stop reagens: set 1 (1 boca od 25,0 ml), set 2 (2 bočice od 25,0 ml), set 3 (2 bočice od 50,0 ml ili 4 bočice od 25,0 ml), - SB - pufer za supstrat rastvor: set 1 (1 bočica 25, 0 ml), set 2 (1 bočica od 25,0 ml), set 3 (2 bočice od 50,0 ml ili 3 bočice od 25,0 ml), - TMB - rastvor koji sadrži 3,3 ", 5,5" -tetrametilbenzidin : komplet 1 (1 bočica od 2,5 ml), komplet 2 (1 bočica od 2,5 ml), komplet 3 (2 bočice od 3,5 ml ili 3 bočice od 2,5 ml). Pribor: - poklopci za polistirenske ploče sa 96 jažica: set 1 (1 kom.), set 2 (2 kom.), set 3 (5 kom.) ili - zaštitne folije za ELISA ploče: set 1 (2 kom.), set 2 (4 kom.), set 3 (10 kom.), - vrhovi za jednokratnu upotrebu: set 1 (16 kom.), set 2 (32 kom.), set 3 (80 kom.), - plastične posude za tečne reagense : set 1 (2 kom.), set 2 (4 kom.), set 3 (10 kom.), - plastične kese sa Zip-Lock: set 1 (1 kom.), set 2 (2 kom.), set 3 (3 kom.).
Naziv organizacije - podnosioca zahtjeva za medicinsko sredstvo
Lokacija organizacije podnosioca zahtjeva za medicinsko sredstvo
Pravna adresa organizacije podnosioca zahtjeva za medicinsko sredstvo
603014, Rusija, Nižnji Novgorod, ul. Kominterna, 47
Naziv proizvođača medicinskog uređaja ili proizvođača medicinskog uređaja
OOO "NPO" Dijagnostički sistemi "
Lokacija organizacije-proizvođača medicinskog sredstva ili organizacije-proizvođača medicinskog sredstva
603093, Rusija, Nižnji Novgorod, ul. Jablonjeva, 22, P.F. 69
Pravna adresa proizvođača medicinskog uređaja ili proizvođača medicinskog uređaja
Pravovremena dijagnoza HIV infekcije postaje izuzetno važna mjera, jer ranije započinjanje liječenja u velikoj mjeri može predodrediti dalji razvoj bolesti i produžiti život pacijenta. Posljednjih godina zabilježen je značajan napredak u otkrivanju ove strašne bolesti: stari test sistemi se zamjenjuju naprednijim, metode ispitivanja postaju pristupačnije, a njihova preciznost se značajno povećava.
U ovom članku ćemo govoriti o savremenim metodama dijagnosticiranja HIV infekcije koje je korisno znati za pravovremeno liječenje ovog problema i održavanje normalne kvalitete života oboljele osobe.
Tehnike dijagnostike HIV-a
U Rusiji se za dijagnozu HIV infekcije provodi standardna procedura koja uključuje dva nivoa:
- ELISA test sistem (skrining analiza);
- imunoblotiranje (IB).
Za dijagnostiku se mogu koristiti i druge metode:
- ekspresni testovi.
ELISA test sistemi
U prvoj fazi dijagnostike koristi se skrining test (ELISA) za otkrivanje HIV infekcije, koji se zasniva na HIV proteinima stvorenim u laboratorijama koji hvataju specifična antitijela koja se proizvode u tijelu kao odgovor na infekciju. Nakon njihove interakcije sa reagensima (enzimima) test sistema, boja indikatora se menja. Nadalje, ove promjene boje se obrađuju na posebnoj opremi, što određuje rezultat izvršene analize.
Takvi ELISA testovi mogu pokazati rezultate u roku od nekoliko sedmica nakon unošenja HIV infekcije. Ova analiza ne otkriva prisustvo virusa, ali otkriva proizvodnju antitijela na njega. Ponekad u ljudskom tijelu proizvodnja antitijela na HIV počinje 2 sedmice nakon infekcije, ali se kod većine ljudi razvijaju kasnije, nakon 3-6 sedmica.
Postoje četiri generacije ELISA testova sa različitom osjetljivošću. Poslednjih godina sve se češće koriste test sistemi III i IV generacije, koji su kreirani na bazi sintetičkih peptida ili rekombinantnih proteina i imaju veću specifičnost i tačnost. Mogu se koristiti za dijagnosticiranje HIV infekcije, praćenje prevalencije HIV-a i osiguranje sigurnosti pri skriningu darovane krvi. Preciznost ELISA test sistema III i IV generacije je 93-99% (osetljiviji testovi koji se proizvode u zapadnoj Evropi su 99%).
Za izvođenje ELISA testa uzima se 5 ml krvi iz vene pacijenta. Između posljednjeg obroka i testa treba proći najmanje 8 sati (obično se radi ujutro na prazan želudac). Preporučuje se da se takav test uradi ne ranije od 3 nedelje nakon navodne infekcije (na primer, nakon nezaštićenog odnosa sa novim seksualnim partnerom).
Rezultati ELISA testa dobijaju se za 2-10 dana:
- negativan rezultat: ukazuje na odsustvo HIV infekcije i ne zahtijeva upućivanje specijalistu;
- lažno negativan rezultat: može se primijetiti u ranim fazama infekcije (do 3 sedmice), u kasnim stadijumima AIDS-a, uz izraženu supresiju imuniteta i nepravilnu pripremu krvi;
- lažno pozitivan rezultat: može se uočiti kod nekih bolesti i kod nepravilno obavljene pripreme krvi;
- pozitivan rezultat: ukazuje na HIV infekciju, zahteva IB i kontakt pacijenta sa specijalistom u centru za AIDS.
Zašto ELISA test može dati lažno pozitivne rezultate?
Lažno pozitivni rezultati ELISA testa na HIV mogu se uočiti kod nepravilne obrade krvi ili kod pacijenata sa sljedećim stanjima i bolestima:
- multipli mijelom;
- zarazne bolesti izazvane virusom Epstein-Barr;
- stanje nakon;
- autoimune bolesti;
- na pozadini trudnoće;
- stanje nakon vakcinacije.
Iz gore opisanih razloga, u krvi mogu biti prisutna nespecifična unakrsna antitijela, čija proizvodnja nije izazvana HIV infekcijom.
Posljednjih godina učestalost lažno pozitivnih rezultata značajno je smanjena zbog upotrebe test sistema III i IV generacije, koji sadrže osjetljivije peptidne i rekombinantne proteine (sintetizirani su genetskim inženjeringom in vitro). Nakon početka upotrebe ovakvih ELISA testova, učestalost lažno pozitivnih rezultata značajno se smanjila i iznosi oko 0,02-0,5%.
Pronalaženje lažno pozitivnog ne znači da je osoba zaražena HIV-om. U takvim slučajevima SZO preporučuje još jedan ELISA test (obavezna IV generacija).
Krv pacijenta se šalje u referentnu ili arbitražnu laboratoriju sa oznakom "ponoviti" i testira se na ELISA test sistemu IV generacije. Ako je rezultat nove analize negativan, tada se prvi rezultat prepoznaje kao pogrešan (lažno pozitivan) i IB se ne provodi. U slučaju pozitivnog ili sumnjivog rezultata tokom drugog testa, pacijentu se mora dodijeliti IB za 4-6 sedmica kako bi se potvrdila ili demantovala HIV infekcija.
Imuno blotting
Konačna dijagnoza HIV infekcije može se postaviti tek nakon što se dobije pozitivan rezultat imunoblotinga (IB). Za njegovu implementaciju koristi se nitrocelulozna traka na koju se nanose virusni proteini.
Uzimanje krvi za IB se vrši iz vene. Zatim se podvrgava posebnoj obradi i proteini sadržani u njegovom serumu se odvajaju u poseban gel prema njihovom naboju i molekularnoj težini (manipulacija se vrši na posebnoj opremi pod uticajem električnog polja). Nitrocelulozna traka se nanosi na gel krvnog seruma i upijanje („blotting“) se provodi u posebnoj komori. Traka se obrađuje i ako korišteni materijali sadrže antitijela na HIV, onda se vežu za antigene trake na IB i pojavljuju se kao linije.
IB se smatra pozitivnim ako:
- prema američkim kriterijima CDC-a - postoje dvije ili tri linije gp41, p24, gp120 / gp160 na traci;
- prema kriterijima američke FDA - na traci se nalaze dvije linije p24, p31 i linija gp41 ili gp120 / gp160.
U 99,9% slučajeva pozitivan IB nalaz ukazuje na HIV infekciju.
U nedostatku linija, IB je negativan.
U identifikaciji linija sa gp160, gp120 i gp41- IB je sumnjiv. Takav rezultat se može otkriti kada:
- onkološke bolesti;
- trudnoća;
- česte transfuzije krvi.
U takvim slučajevima preporučuje se ponovni pregled uz pomoć kompleta druge kompanije. Ako nakon dodatnog IB-a rezultat ostane sumnjiv, tada je potrebno praćenje šest mjeseci (IB se provodi svaka 3 mjeseca).
Lančana reakcija polimeraze
PCR test može otkriti RNK virusa. Njegova osjetljivost je prilično visoka i omogućava vam da otkrijete HIV infekciju već 10 dana nakon infekcije. U nekim slučajevima, PCR može dati lažno pozitivne rezultate, jer njegova visoka osjetljivost također može reagirati na antitijela na druge infekcije.
Ova dijagnostička tehnika je skupa i zahtijeva posebnu opremu i visoko kvalifikovane stručnjake. Ovi razlozi ne omogućavaju njegovo sprovođenje tokom masovnog testiranja populacije.
PCR se koristi u takvim slučajevima:
- otkrivanje HIV-a kod novorođenčadi koja su rođena od majki zaraženih HIV-om;
- za otkrivanje HIV-a u "prozorskom periodu" ili u slučaju sumnjive IB;
- za kontrolu koncentracije HIV-a u krvi;
- za proučavanje krvi davalaca.
Samo PCR testom HIV se ne dijagnostikuje, već se provodi kao dodatna dijagnostička metoda za rješavanje kontroverznih situacija.
Ekspresne metode
Jedna od inovacija u dijagnostici HIV-a su brzi testovi, čiji se rezultati mogu procijeniti u roku od 10-15 minuta. Najefikasniji i najprecizniji rezultati se dobijaju imunohromatografskim testovima na principu kapilarnog toka. To su posebne trake na koje se nanosi krv ili druge ispitivane tekućine (slina, urin). U prisustvu antitijela na HIV, nakon 10-15 minuta, na testu se pojavljuje obojena traka, a kontrolna traka - pozitivan rezultat. Ako je rezultat negativan, pojavljuje se samo kontrolna traka.
Kao i nakon ELISA testova, rezultati brzih testova moraju biti potvrđeni IB analizom. Tek tada se može postaviti dijagnoza HIV infekcije.
Postoje ekspresni kompleti za kućno testiranje. Test OraSure Technologies1 (SAD) je odobren od FDA, prodaje se bez recepta i može se koristiti za otkrivanje HIV-a. Nakon testa, u slučaju pozitivnog rezultata, pacijentu se preporučuje pregled u specijaliziranom centru radi potvrđivanja dijagnoze.
Ostatak testova za kućnu upotrebu još nije odobren od strane FDA i mogu biti vrlo upitni.
Unatoč činjenici da su brzi testovi inferiorni u preciznosti od IV generacije ELISA testova, oni se široko koriste za dodatno testiranje populacije.
Testove za otkrivanje HIV infekcije možete poduzeti u bilo kojoj klinici, centralnoj okružnoj bolnici ili u specijalizovanim centrima za AIDS. Na teritoriji Rusije oni se drže potpuno povjerljivo, ili anonimno. Svaki pacijent može očekivati medicinski ili psihološki savjet prije ili nakon testa. Testove na HIV ćete morati da plaćate samo u komercijalnim bolnicama, au državnim poliklinikama i bolnicama oni se rade besplatno.
Pročitajte o načinima na koje se možete zaraziti HIV-om i koji mitovi postoje o mogućnostima zaraze u
Učitavanje ...