Kas perisinusoidsed rakud võivad olla piirkondlikud maksa tüvirakud? Maksa itorakkude mõju uurimine tüvirakkudele Stellaatrakkudele

Genes & Cells: V köide, nr 1, 2010, lk: 33-40

Autorid

Gumerova A.A., Kiyasov A.P.

Regeneratiivne meditsiin on üks kiiremini arenevaid ja perspektiivikamaid meditsiinivaldkondi, mis põhineb põhimõtteliselt uuel lähenemisel kahjustatud organi taastamisele, stimuleerides ja (või) kasutades regeneratsiooni kiirendamiseks tüvi- (eel-)rakke. Selle lähenemisviisi elluviimiseks on vaja teada, mis on tüvirakud ja eelkõige piirkondlikud tüvirakud, milline on nende fenotüüp ja tugevus. Paljude kudede ja elundite, näiteks epidermise ja skeletilihaste puhul on tüvirakud juba tuvastatud ja nende nišše kirjeldatud. Maks, organ, mille taastumisvõime on tuntud juba iidsetest aegadest, pole aga veel avaldanud oma peamist saladust – tüviraku saladust. Selles ülevaates käsitleme meie enda ja kirjanduse andmete põhjal püstitatud hüpoteesi, et perisinusoidsed tähtrakud võivad nõuda maksa tüvirakkude rolli.

Perisinusoidsed maksarakud (Ito-rakud, tähtrakud, lipotsüüdid, rasva-, A-vitamiini säilitavad rakud) on üks müstilisemaid maksa rakutüüpe. Nende rakkude uurimise ajalugu ulatub enam kui 130 aasta taha ning nende fenotüübi ja funktsioonide kohta on endiselt palju rohkem küsimusi kui vastuseid. Neid rakke kirjeldas 1876. aastal Kupffer, nimetas ta tähtrakkudeks ja määras makrofaagidele. Hiljem said tõelised istuvad maksamakrofaagid Kupfferi nime.

On üldtunnustatud, et Ito rakud asuvad Disse'i ruumis otseses kontaktis hepatotsüütidega, akumuleerivad A-vitamiini ja on võimelised tootma rakkudevahelise aine makromolekule ning oma kontraktiilse aktiivsusega reguleerima ka verevoolu sinusoidaalsetes kapillaarides nagu peritsüüdid. Loomade Ito-rakkude tuvastamise kuldstandardiks on lihaskoele iseloomuliku tsütoskeleti vahefilamentvalgu tuvastamine neis - desmiin. Teised nende rakkude üsna levinud markerid on neuronite diferentseerumise markerid – happeline gliaalfibrillaarne valk (Glial fibrillary acid protein, GFAP) ja nestiin.

Paljude aastate jooksul käsitleti Ito rakke ainult nende osalemise seisukohast fibroosi ja maksatsirroosi tekkes. See on tingitud asjaolust, et maksakahjustus põhjustab alati nende rakkude aktiveerumist, mis seisneb desmiini suurenenud ekspressioonis, proliferatsioonis ja transdiferentseerumises müofibroblastilaadseks rakutransformatsiooniks, mis ekspresseerib -silelihasaktiini (--GMA) ja sünteesib märkimisväärses koguses. rakkudevahelist ainet, eriti I tüüpi kollageeni. Just selliste aktiveeritud Ito rakkude tegevus põhjustab paljude teadlaste sõnul fibroosi ja maksatsirroosi väljakujunemist.

Teisest küljest kuhjuvad järk-järgult faktid, mis võimaldavad vaadelda Ito rakke täiesti ootamatutest positsioonidest, nimelt kui hepatotsüütide, kolangiotsüütide ja vererakkude arengu mikrokeskkonna kõige olulisemat komponenti hematopoeesi maksafaasis, ja pealegi kui võimalikud tüvirakud (eellas-) maksarakud. Selle ülevaate eesmärk on analüüsida praeguseid andmeid ja seisukohti nende rakkude olemuse ja funktsionaalse tähtsuse kohta, hinnates nende võimalikku kuulumist maksa tüvirakkude (eelasrakkude) populatsiooni.

Ito-rakud on oluliseks osalejaks parenhüümi taastumisel maksa regenereerimisel tänu nende poolt toodetud rakuvälise maatriksi makromolekulidele ja selle ümberkujunemisele, samuti kasvufaktorite tootmisele. Esimesed kahtlused väljakujunenud teooria tõesuses, mis peab Ito rakke eranditult maksafibroosi peasüüdlasteks, ilmnesid siis, kui leiti, et need rakud toodavad märkimisväärsel hulgal morfogeenseid tsütokiine. Nende hulgas moodustavad olulise rühma tsütokiinid, mis on hepatotsüütide potentsiaalsed mitogeenid.

Kõige olulisem selles rühmas on hepatotsüütide kasvufaktor - hepatotsüütide mitogeen, mis on vajalik rakkude proliferatsiooniks, ellujäämiseks ja liikuvuseks (tuntud ka kui hajumistegur - hajumistegur. Selle kasvufaktori ja (või) selle C-met retseptori defekt hiirtel põhjustab maksa hüpoplaasia ja selle parenhüümi hävimine hepatoblastide proliferatsiooni pärssimise, suurenenud apoptoosi ja rakkude ebapiisava adhesiooni tagajärjel.

Lisaks hepatotsüütide kasvufaktorile toodavad Ito rakud tüvirakufaktorit. Seda on näidatud maksa regenereerimise mudelis pärast osalist hepatektoomiat ja kokkupuudet 2-atsetoaminofluoreeniga. Samuti on leitud, et Ito rakud sekreteerivad transformeerivat kasvufaktorit - ja epidermaalset kasvufaktorit, mis mängivad olulist rolli nii hepatotsüütide proliferatsioonis regeneratsiooni ajal kui ka stimuleerivad Ito rakkude endi mitoosi. Hepatotsüütide proliferatsiooni käivitavad ka Ito rakkude poolt ekspresseeritud mesenhümaalne morfogeenne valk epimorfiin, mis ilmneb neis pärast osalist hepatektoomiat, ja pleiotropiin.

Lisaks hepatotsüütide ja Ito rakkude vahelise interaktsiooni parakriinsetele mehhanismidele mängivad teatud rolli ka nende rakkude otsesed rakkudevahelised kontaktid hepatotsüütidega. Ito rakkude ja epiteeli eellasrakkude vaheliste rakkudevaheliste kontaktide tähtsust näidati in vitro, kui segakultuuris kultiveerimine oli viimaste albumiini tootvateks hepatotsüütideks diferentseerumisel efektiivsem kui membraaniga eraldatud rakkude kultiveerimine, kui nad suutsid vahetada ainult lahustuvaid rakke. tegurid läbi kultuurikeskkonna. Isoleeritud hiire loote maksast 13,5 päeva. tiinus, mesenhümaalsed rakud fenotüübiga Thy-1 +/C049!±/vimentin+/desmin+/ --GMA+, pärast otseste rakkudevaheliste kontaktide loomist, stimuleerisid primitiivsete maksa endodermaalsete rakkude populatsiooni diferentseerumist - hepatotsüütideks (sisaldavad glükogeeni, ekspresseerivad mRNA-d türosiinaminotransferaasi ja trüptofanoksüge -nimetused). Thy-1+/desmin+ mesenhümaalsete rakkude populatsioon ei ekspresseerinud hepatotsüütide, endoteeli ja Kupfferi rakkude markereid ning suure tõenäosusega esindasid seda Ito rakud. Roti ja inimese sünnieelses maksas on in vivo täheldatud desmiin-positiivsete Ito-rakkude suurt tihedust ja nende asukohta tihedas kontaktis diferentseeruvate hepatotsüütidega. Seega võimaldavad kõik need faktid järeldada, et see rakutüüp on mikrokeskkonna kõige olulisem komponent, mis on vajalik hepatotsüütide normaalseks arenguks ontogeneesis ja nende taastumiseks reparatiivse regeneratsiooni protsessis.

Viimastel aastatel on saadud andmeid, mis näitavad Ito rakkude olulist mõju vereloome tüvirakkude diferentseerumisele. Seega toodavad Ito rakud erütropoetiini ja neurotrofiini, mis mõjutavad mitte ainult maksa epiteelirakkude, vaid ka vereloome tüvirakkude diferentseerumist. Loote vereloome uuring rottidel ja inimestel näitas, et just need rakud moodustavad maksas vereloomesaarte mikrokeskkonna. Ito rakud ekspresseerivad vaskulaarse raku adhesioonimolekuli-1 (VCAM-1), mis on võtmemolekuli vereloome eellasrakkude adhesiooni säilitamiseks luuüdi stroomarakkudega. Lisaks ekspresseerivad nad ka stromaalset faktorit 1 – (stroomalt tuletatud faktor-1 –, SDF-1 –) – potentsiaalset hematopoeetiliste tüvirakkude kemoatraktanti, stimuleerides nende migratsiooni vereloome piirkonda tänu interaktsioonile spetsiifilise retseptoriga Cystein- X-tsüsteiini retseptor 4 (CXR4), aga ka homeoboksi valk Hlx, kui on tegemist defektiga, mille korral on häiritud nii maksa enda areng kui ka maksa vereloome. Tõenäoliselt käivitab VCAM-1 ja SDF-1 a ekspressioon loote Ito rakkudel hematopoeetiliste eellasrakkude värbamise loote maksa edasiseks diferentseerumiseks. Ito rakkude poolt kogunenud retinoidid on samuti oluline morfogeneesi tegur hematopoeetiliste rakkude ja epiteeli jaoks. On võimatu rääkimata Ito rakkude mõjust mesenhümaalsetele tüvirakkudele. Roti maksast eraldatud ja täielikult aktiveeritud Ito rakud moduleerivad 2 nädala pärast mesenhümaalsete tüvirakkude (multipotentsed mesenhümaalsed stroomarakud) diferentseerumist luuüdis hepatotsüütide sarnasteks rakkudeks (akumuleerivad glükogeeni ning ekspresseerivad tetaasi ja fosfoenoolpüruvaadi karboksükinaasi). kooskasvatamine.

Seega võimaldavad kogunenud teaduslikud faktid järeldada, et Ito rakud on üks olulisemaid rakutüüpe, mis on vajalikud maksa arenguks ja taastumiseks. Just need rakud loovad mikrokeskkonna nii loote maksa hematopoeesiks kui ka hepatotsüütide diferentseerumiseks sünnieelse arengu käigus, samuti epiteeli ja mesenhümaalsete eellasrakkude diferentseerumiseks hepatotsüütideks in vitro tingimustes. Praegu ei tekita need andmed kahtlust ja kõik maksa uurijad tunnustavad neid. Mis siis oli lähtepunktiks artikli pealkirjas püstitatud hüpoteesi tekkimisel?

Esiteks soodustas selle ilmumist rakkude tuvastamine maksas, mis ekspresseerivad samaaegselt nii hepatotsüütide epiteelimarkereid kui ka Ito rakkude mesenhümaalseid markereid. Esimesed tööd selles valdkonnas viidi läbi imetajate maksa sünnieelse histo- ja organogeneesi uurimisel. Just arenguprotsess on võtmesündmus, mille uurimine võimaldab looduslikes tingimustes jälgida elundi erinevate rakutüüpide lõpliku fenotüübi esmase moodustumise dünaamikat, kasutades spetsiifilisi markereid. Praegu on selliste markerite valik üsna lai. Selle probleemi uurimisele pühendatud töödes kasutati erinevaid mesenhümaalsete ja epiteelirakkude, maksa üksikute rakupopulatsioonide ja tüvirakkude (sh vereloome) markereid.

Läbiviidud uuringutes leiti, et rotiloote desmiin-positiivsed Ito rakud on 14-15 päeva mööduvad. gestatsioonid ekspresseerivad hepatoblastidele iseloomulikke epiteelimarkereid, nagu tsütokeratiinid 8 ja 18. Teisest küljest ekspresseerivad hepatoblastid samal arenguajal rakumarkerit Ito desmin. Just see võimaldas oletada, et maksas esineb emakasisese arengu ajal üleminekufenotüübiga rakke, mis ekspresseerivad nii mesenhümaalseid kui ka epiteelimarkereid, ning seetõttu kaaluda võimalust arendada Ito rakke ja hepatotsüüte samast allikast ja ( või) käsitlema neid rakke kui ühte ja sama rakutüüpi erinevatel arenguetappidel. Täiendavad uuringud histogeneesi uuringu kohta, mis viidi läbi inimese embrüonaalse maksa materjaliga, näitasid, et 4-8 nädalat. Inimese maksa loote arengus ekspresseerisid Ito rakud tsütokeratiine 18 ja 19, mida kinnitas kahekordne immunohistokeemiline värvimine, ja hepatoblastides täheldati desmiini nõrka positiivset värvimist.

Kuid 2000. aastal avaldatud töös ei õnnestunud autoritel tuvastada desmiini ekspressiooni hiireloote maksa hepatoblastides ning E-kadheriini ja tsütokeratiinide ekspressiooni Ito rakkudes. Autorid saavutasid tsütokeratiinide positiivse värvumise Ito rakkudes vaid väikesel osal juhtudest, mida nad seostasid primaarsete antikehade mittespetsiifilise ristreaktiivsusega. Nende antikehade valik tekitab mõningast hämmeldust – töös kasutati kanade desmiini ja veise tsütokeratiinide 8 ja 18 vastaseid antikehi.

Lisaks desmiinile ja tsütokeratiinidele on Ito rakkude ning hiire ja roti loote hepatoblastide tavaline marker veel üks mesenhümaalne marker, vaskulaarsete rakkude adhesioonimolekul VCAM-1. VCAM-1 on ainulaadne pinnamarker, mis eristab Ito rakke müofibroblastidest täiskasvanud roti maksas ja esineb ka mitmel teisel mesenhümaalse päritoluga maksarakkudel, nagu endoteliotsüüdid või müogeensed rakud.

Veel üks tõend vaadeldava hüpoteesi kasuks on täiskasvanud rottide maksast eraldatud Ito rakkude mesenhümaal-epiteeli transdiferentseerumise (konversiooni) võimalus. Tuleb märkida, et kirjanduses käsitletakse peamiselt pigem epiteeli-mesenhümaalset kui mesenhümaal-epiteeli transdiferentseerumist, kuigi tunnistatakse võimalikuks mõlemat suunda ning sageli kasutatakse terminit "epiteeli-mesenhümaalne transdiferentseerumine" mis tahes suuna transdiferentseerumise tähistamiseks. Pärast süsiniktetrakloriidiga (CTC) kokkupuudet täiskasvanud rottide maksast eraldatud Ito rakkude mRNA ja vastavate valkude ekspressiooniprofiili analüüsimist leidsid autorid neis nii mesenhümaalsed kui ka epiteeli markerid. Mesenhümaalsetest markeritest netiin, --GMA, maatriksi metalloproteinaas-2 (Matrix Metalloproteinase-2, MMP-2) ja epiteelimarkeritest lihaspüruvaatkinaas (Muscle püruvaatkinaas, MRK), mis on iseloomulik ovaalsetele rakkudele, tsütokeratiin 19, a-FP, E-kadheriin, samuti transkriptsioonifaktor Hepatotsüütide tuumafaktor 4- (HNF-4-), mis on spetsiifiline rakkudele, mis on määratud muutuma hepatotsüütideks. Samuti leiti, et inimese epiteeli maksa eellasrakkude primaarses kultuuris toimub Itonestini rakumarkerite mRNA ekspressioon, GFAP - epiteeli eellasrakud koekspresseerivad nii epiteeli kui ka mesenhümaalseid markereid. Mesenhümaal-epiteeli transdiferentseerumise võimalust kinnitab selliseks transdiferentseerumiseks vajaliku ensüümi integriiniga seotud kinaasi (ILK) ilmumine Ito rakkudesse.

Mesenhümaal-epiteeli transdiferentseerumine ilmnes ka meie in vitro katsetes, kus kasutati originaalset lähenemisviisi roti maksast eraldatud Ito rakkude puhta populatsiooni kultiveerimiseks kuni tiheda raku monokihi moodustumiseni. Pärast seda lõpetasid rakud desmiini ja teiste mesenhümaalsete markerite ekspressiooni, omandasid epiteelirakkude morfoloogia ja hakkasid ekspresseerima hepatotsüütidele iseloomulikke markereid, eriti tsütokeratiin 8 ja 18. Sarnased tulemused saadi ka rotiloote maksa organotüüpse kultiveerimise ajal.

Viimase aasta jooksul on avaldatud kaks artiklit, milles Ito rakke käsitletakse ovaalsete rakkude alatüübina või nende derivaatidena. Ovaalsed rakud on väikesed ovaalse kujuga kitsa tsütoplasma servaga rakud, mis esinevad maksas mõne toksilise maksakahjustuse mudeli korral ja mida praegu peetakse bipotentseteks eellasrakkudeks, mis on võimelised diferentseeruma nii hepatotsüütideks kui ka kolangiotsüütideks. Lähtudes tõsiasjast, et isoleeritud Ito rakkude poolt ekspresseeritud geenid langevad kokku ovaalsete rakkude poolt ekspresseeritud geenidega ning Ito rakkude kultiveerimise teatud tingimustes tekivad hepatotsüüdid ja sapiteede rakud, kontrollisid autorid hüpoteesi, et Ito rakud on tüüpi ovaalsed rakud, mis on võimelised tekitama hepatotsüüte kahjustatud maksa taastamiseks. Transgeensetele GFAP-Cre/GFP (roheline fluorestsentsvalk) hiirtele toideti Ito-rakkude ja ovaalsete rakkude aktiveerimiseks metioniini-koliinipuudust/etioniiniga rikastatud dieeti. Puhkanud Ito rakkudel oli GFAP+ fenotüüp. Pärast Ito rakkude aktiveerimist vigastuse või kultuuri tõttu vähenes nende GFAP ekspressioon ja nad hakkasid ekspresseerima ovaalsete ja mesenhümaalsete rakkude markereid. Ovaalsed rakud kadusid, kui ilmusid GFP+ hepatotsüüdid, mis hakkasid ekspresseerima albumiini ja lõpuks asendasid suured maksa parenhüümi alad. Nende leidude põhjal püstitasid autorid hüpoteesi, et Ito rakud on ovaalsete rakkude alatüüp, mis diferentseeruvad "mesenhümaalse" faasi kaudu hepatotsüütideks.

Samal ovaalsete rakkude aktiveerimise mudelil tehtud katsetes, kui viimased eraldati rottide maksast, leiti, et in vitro ovaalsed rakud ekspresseerivad mitte ainult traditsioonilisi markereid 0V-6, BD-1/BD-2 ja M2RK ja rakuvälise maatriksi markerid, sealhulgas kollageenid, maatriksi metalloproteinaasid ja metalloproteinaaside kudede inhibiitorid - Ito rakkude markertunnused. Pärast kokkupuudet TGF-pl rakkudega suurenes lisaks kasvu pärssimisele ja morfoloogilistele muutustele ka nende geenide, aga ka desmiini ja GFAP geenide ekspressioon ning epiteeli eest vastutava Snail transkriptsioonifaktori ekspressioon. -mesenhümaalne transdiferentseerumine ja E-kadheriini ekspressiooni lakkamine, mis näitab ovaalsete rakkude "tagurpidi" transdiferentseerumise võimalust Ito rakkudeks.

Kuna ovaalseid rakke peetakse traditsiooniliselt nii hepatotsüütide kui ka kolangiotsüütide bipotentseteks prekursoriteks, on tehtud katseid kindlaks teha üleminekuvormide olemasolu intrahepaatiliste sapiteede epiteelirakkude ja Ito rakkude vahel. Seega näidati, et normaalses ja kahjustatud maksas värvusid väikesed duktaalset tüüpi struktuurid Ito rakumarkeri - GMA suhtes positiivselt, kuid artiklis esitatud fotodel, mis kajastavad immunofluorestsentsvärvimise tulemusi, on võimalik kindlaks teha, mis need tegelikult on – GMA+ kanalite struktuurid – sapijuhad või veresooned – pole võimalik. Siiski on avaldatud ka teisi tulemusi, mis näitavad Ito rakumarkerite ekspressiooni kolangiotsüütides. Juba mainitud L. Yangi töös näidati Ito rakumarkeri GFAP ekspressiooni sapijuha rakkude poolt. Tsütoskeleti vahefilamentide valk, sinemiin, mis esineb normaalses maksas Ito rakkudes ja vaskulaarsetes rakkudes, ilmus duktuaalsetesse rakkudesse, mis osalesid duktuaalse reaktsiooni arengus; seda ekspresseeriti ka kolangi kartsinoomi rakkudes. Seega, kui Ito rakkude ja hepatotsüütide vastastikuse transdiferentseerumise võimaluse kohta on palju tõendeid, siis kolangiotsüütide puhul on sellised tähelepanekud endiselt üksikud ja mitte alati üheselt mõistetavad.

Kokkuvõttes võib öelda, et mesenhümaalsete ja epiteelimarkerite ekspressioonimustrid nii maksa histo- ja organogeneesi ajal kui ka erinevates katsetingimustes nii in vivo kui ka in vitro näitavad nii mesenhümaal-epiteeli kui ka epiteeli-mesenhiaalse väikese esinemise võimalust. üleminekud Ito rakkude / ovaalsete rakkude / hepatotsüütide vahel ja seetõttu võimaldavad meil pidada Ito rakke üheks hepatotsüütide arengu allikaks. Need faktid viitavad kahtlemata nende rakutüüpide vahelisele lahutamatule suhtele ja viitavad ka Ito rakkude olulisele fenotüübilisele plastilisusele. Nende rakkude fenomenaalsest plastilisusest annab tunnistust ka mitmete närvivalkude, nagu juba mainitud GFAP, nestiin, neurotrofiinid ja nende retseptorid, neuronaalse raku adhesioonimolekuli (N-CAM), sünaptofüsiini, närvi kasvufaktori ekspressioon. (Neural growth factor, NGF), ajust tuletatud neurotroofne faktor (BDNF), mille põhjal arutlevad mitmed autorid Ito rakkude arendamise võimaluse üle närviharjast. Viimase kümnendi jooksul on teadlased aga pälvinud suurt tähelepanu veel ühele versioonile – nimelt võimalusele arendada hematopoeetilistest ja mesenhümaalsetest tüvirakkudest hepatotsüüte ja Ito-rakke.

Esimese teose, milles see võimalus tõestati, avaldas V.E. Petersen jt, kes näitasid, et hepatotsüüdid võivad areneda hematopoeetilisest tüvirakust. Hiljem kinnitati seda asjaolu korduvalt ka teiste teadlaste töödes ja veidi hiljem näidati ka mesenhümaalsete tüvirakkude puhul hepatotsüütideks diferentseerumise võimalust. Kuidas see juhtub - doonorrakkude liitmisel retsipiendi maksarakkudega või nende transdiferentseerumisega - pole siiani selge. Siiski leidsime ka, et osalise hepatektoomia läbinud rottide põrna siirdatud inimese nabaväädi vereloome tüvirakud koloniseerivad maksa ja on võimelised diferentseeruma hepatotsüütideks ja sinusoidaalseteks maksarakkudeks, mida tõendab inimese rakumarkerite olemasolu nendes rakkudes. tüübid. Lisaks näitasime esmakordselt, et nabaväädi vererakkude esialgne geneetiline modifitseerimine ei mõjuta oluliselt nende levikut ja diferentseerumise võimalust retsipiendi maksas pärast siirdamist. Mis puudutab hepatotsüütide tekke tõenäosust vereloome tüvirakkudest sünnieelse histogeneesi ajal, siis kuigi seda võimalust ei saa täielikult välistada, tundub see siiski ebatõenäoline, kuna nende rakkude morfoloogia, lokaliseerimine ja fenotüüp erinevad oluliselt maksarakkude omadest. Ilmselt, kui selline rada on olemas, ei mängi see ontogeneesi käigus epiteeli- ja sinusoidaalsete rakkude moodustumisel olulist rolli. Hiljutised nii in vivo kui ka in vitro uuringute tulemused seavad kahtluse alla väljakujunenud teooria hepatotsüütide arengu kohta ainult eessoole endodermaalsest epiteelist, millega seoses tekkis oletus, et maksa piirkondlik tüvirakk. võib paikneda selle mesenhümaalsete rakkude hulgas. Kas Ito rakud võivad sellised rakud olla?

Arvestades nende rakkude ainulaadseid omadusi, nende fenomenaalset plastilisust ja Ito rakkudest hepatotsüütideni ülemineku fenotüübiga rakkude olemasolu, eeldame, et need rakud on selle rolli peamised kandidaatid. Täiendavad argumendid selle võimaluse kasuks on see, et need rakud, nagu ka hepatotsüüdid, võivad moodustuda vereloome tüvirakkudest ja need on ainsad sinusoidsed maksarakud, mis on võimelised ekspresseerima tüvirakkude (eellasrakkude) markereid.

2004. aastal leiti, et Ito rakud võivad areneda ka hematopoeetilisest tüvirakust. Pärast GFP hiirte luuüdi rakkude siirdamist ilmusid retsipienthiirte maksa Ito rakumarkerit GFAP ekspresseerivad GFP+ rakud ja nende rakkude protsessid tungisid hepatotsüütide vahele. Kui CTC kahjustas retsipiendi maksa, ekspresseerisid siirdatud rakud ka blastitaolisi Ito rakke. Kui mitteparenhümaalsete rakkude fraktsioon eraldati retsipienthiirte maksast, moodustasid lipiidide tilkadega GFP+ rakud eraldatud rakkudest 33,4+2,3%; nad väljendasid desmiini ja GFAP-i ning 7 päeva pärast. kasvatamine

Teisest küljest põhjustab luuüdi rakkude siirdamine mitte ainult Ito rakkude, vaid I tüüpi kollageeni geeni moodustumist, mille põhjal järeldati, et selline siirdamine aitab kaasa fibroosi tekkele. Siiski on ka töid, kus on näidatud maksafibroosi vähenemist siirdatud rakkude migreerumise tõttu kiulistesse vaheseintesse ja maatriksi metalloproteinaas-9 (Matrix Metalloproteinase-9, MMP-9) tootmine nendes rakkudes, mis on üks Ito rakkude olulisemad omadused. Meie esialgsed andmed näitasid ka müofibroblastide arvu vähenemist ja fibroositaseme langust pärast perifeerse vere mononukleaarse fraktsiooni autotransplantatsiooni raske maksafibroosiga kroonilise hepatiidiga patsientidel. Lisaks võivad hematopoeetiliste tüvirakkude siirdamise tulemusena retsipiendi maksa ilmuda muud rakutüübid, mis on võimelised tootma rakuvälist maatriksit. Seega, sapijuha ligeerimisest põhjustatud maksakahjustuse korral diferentseeruvad kollageeni ekspresseerivate diferentseerunud fibrotsüütide siirdatud rakud ja ainult TGF-pl juuresolekul kultiveeritud müofibroblastid, mis võivad kaasa aidata fibroosi tekkele. Seega seostasid autorid maksafibroosi riski pärast luuüdi rakkude siirdamist mitte Ito rakkudega, vaid "ainulaadse fibrotsüütide populatsiooniga". Saadud andmete ebaühtluse tõttu kerkis arutelu veel ühe küsimuse juurde – kas siirdatud vereloome tüvirakkude diferentseerumise tulemusena tekkinud Ito rakud aitavad kaasa fibroosi tekkele või tagavad nende täieliku taastumise. maksakoe ja fibroosi vähendamine. Viimastel aastatel on (sealhulgas ülaltoodud andmete põhjal) ilmnenud, et müofibroblastide päritolu maksas võib olla erinev - Ito rakkudest, portaaltrakti fibroblastidest ja isegi hepatotsüütidest. Samuti on kindlaks tehtud, et erineva päritoluga müofibroblastid erinevad mitmete omaduste poolest. Seega erinevad aktiveeritud Ito rakud portaaltrakti müofibroblastidest vitamiinisisalduse, kontraktiilse aktiivsuse, tsütokiinidele, eriti TGF-β reageerimise ja spontaanse apoptoosi võime poolest. Lisaks on need rakupopulatsioonid erinevad ja ekspresseerivad võimaluse korral veresoonte rakkude adhesioonimolekuli VCAM-1, mis esineb Ito rakkudel ja puudub müofibroblastidel. Ei saa öelda, et lisaks ekstratsellulaarse maatriksi valkude tootmisele toodavad aktiveeritud Ito rakud ka maatriksi metalloproteinaase, mis seda maatriksit hävitavad. Seega pole Ito rakkude, sealhulgas vereloome tüvirakkudest moodustunud rakkude roll fibroosi tekkes kaugeltki nii üheselt mõistetav, kui seni arvati. Ilmselt ei soodusta need mitte niivõrd fibroosi, kuivõrd muudavad rakuvälist maatriksit pärast vigastust maksa parandamise protsessis, pakkudes seeläbi sidekoe karkassi maksa parenhüümirakkude regenereerimiseks.

normaalne ja kahjustatud rottide maks. Roti Ito rakud ekspresseerivad ka teist tüvirakkude (eellasrakkude) markerit – CD133 – ja demonstreerivad eellasrakkude omadusi, mis on võimelised sõltuvalt tingimustest diferentseeruma eri tüüpideks – 2) tsütokiinide lisamisel, mis hõlbustavad endoteelirakkudeks diferentseerumist, moodustavad induktsiooniga hargnenud torukujulisi struktuure. markerite ekspressiooni endoteelirakkudest - endoteeli NO-süntaas ja veresoonte endoteeli kadheriin; 3) tsütokiinide kasutamisel, mis soodustavad tüvirakkude diferentseerumist hepatotsüütideks - hepatotsüütide markereid ekspresseerivateks ümarateks rakkudeks - FP ja albumiin. Samuti ekspresseerivad roti Ito rakud 0ct4, mis on iseloomulik pluripotentsetele tüvirakkudele. Huvitav on see, et ainult osa Ito rakupopulatsioonist saab isoleerida magnetsorteerijaga, kasutades anti-CD133 antikehi; pärast standardset (pronaas / kollagenaas) eraldamist ekspresseerisid kõik plastikuga seotud rakud CD133 ja 0kt4. Teist eellasrakkude markerit Bcl-2 ekspresseerivad desmin+ rakud inimese maksa sünnieelse arengu ajal.

Seega on erinevad teadlased näidanud tüvirakkude (eel-)rakkude teatud markerite ekspressiooni võimalust Ito rakkude poolt. Veelgi enam, hiljuti avaldati artikkel, milles esmakordselt püstitati hüpotees, et basaalmembraani valkudest, endoteelirakkudest ja hepatotsüütidest moodustatud Disse ruum, milles paiknevad Ito rakud, võib moodustada viimaste jaoks mikrokeskkonna, mis toimib. kui tüvirakkude “nišš”. Seda tõendavad mitmed tüvirakkude nišile iseloomulikud tunnused, mis on tuvastatud Ito rakkude mikrokeskkonna komponentides. Seega peavad varre vahetus läheduses asuvad rakud tootma lahustuvaid faktoreid, samuti läbi viima otseseid interaktsioone, mis hoiavad tüvirakku diferentseerimata olekus ja säilitavad selle nišis, mis asub sageli basaalmembraanil. Tõepoolest, maksa sinusoidsete kapillaaride endoteelirakud sünteesivad lahustuvat SDF-1, mis seondub spetsiifiliselt Ito raku retseptoriga CXR4 ja stimuleerib nende rakkude migratsiooni in vitro. See interaktsioon mängib võtmerolli hematopoeetiliste tüvirakkude migreerumisel nende lõplikku nišši luuüdis ontogeneesi ja selles alalise elamise ajal, samuti nende mobiliseerimisel perifeersesse verre. On loogiline eeldada, et selline interaktsioon võib mängida sarnast rolli maksas, hoides Ito rakke Disse'i ruumis. Maksa regenereerimise varases staadiumis võib SDF-1 suurenenud ekspressioon aidata kaasa ka täiendavate keha tüvirakkude sektsioonide värbamisele. Niširakkude innervatsioon peaks hõlmama sümpaatilist närvisüsteemi, mis on seotud hematopoeetiliste tüvirakkude värbamise reguleerimisega. Sümpaatilise närvisüsteemi noradrenergilised signaalid mängivad kriitilist rolli GCSF-is (Granulocyte colony-stimulating factorl-induced mobilisation of hematopoetic stem cells from luuüdist. Närvilõpmete paiknemine Ito rakkude vahetus läheduses on leidnud kinnitust mitmetes töödes. Samuti on leitud, et vastusena sümpaatilisele stimulatsioonile eritavad Ito rakud prostaglandiine F2a ja D, mis aktiveerivad glükogenolüüsi lähedalasuvates parenhüümirakkudes. Need faktid viitavad sellele, et sümpaatiline närvisüsteem võib avaldada mõju Ito raku nišile. Tüve teine ​​funktsioon. rakunišš on säilitada "aeglane" rakutsükkel ja tüvirakkude diferentseerumata olek. Ito rakkude diferentseerumata seisundi säilitamist in vitro tingimustes soodustavad parenhümaalsed maksarakud – nende kahe membraaniga eraldatud rakupopulatsiooni kultiveerimisel säilib Ito rakkudes tüvirakkude markerite CD133 ja 0kt4 ekspressioon, samas kui hepatotsüütide puudumisel omandavad Ito rakud müofibroblastide fenotüübi ja kaotavad tüvirakkude markerid. Seega on tüvirakkude markerite ekspressioon kahtlemata puhkevate Ito rakkude tunnus. Samuti on kindlaks tehtud, et parenhüümirakkude mõju Ito rakkudele võib põhineda hepatotsüütide poolt sünteesitud parakriinsete faktorite Wnt ja Jag1 interaktsioonil vastavate retseptoritega (Myc, Notchl) Ito rakkude pinnal. Wnt/b-kateniini ja Notchi signaalirajad toetavad tüvirakkude võimet ise uueneda aeglase sümmeetrilise jagunemise teel ilma järgneva diferentseerumiseta. Niši teiseks oluliseks komponendiks on basaalmembraani valgud, laminiin ja kollageen IV, mis säilitavad Ito rakkude puhkeoleku ja pärsivad nende diferentseerumist. Sarnane olukord esineb lihaskiududes ja keerdunud seemnetorukestes, kus satelliitrakud (lihaskoe tüvirakud) ja diferentseerumata spermatogooniad on tihedas kontaktis vastavalt lihaskiu ehk "spermatogeense epiteeliga" basaalmembraaniga. Ilmselt pärsib tüvirakkude interaktsioon ekstratsellulaarse maatriksi valkudega nende lõpliku diferentseerumise vallandamist. Saadud andmed võimaldavad seega pidada Ito rakke tüvirakkudeks, nišiks, mille jaoks Disse ruum võib teenida.

Meie andmed Ito rakkude tüve tugevuse ja nendest rakkudest hepatotsüütide moodustumise võimaluse kohta said kinnitust katsetes, mis uurisid maksa regeneratsiooni in vivo osalise hepatektoomia ja maksa toksilise kahjustuse mudelites pliinitraadiga. Traditsiooniliselt arvatakse, et nende maksa regenereerimise mudelite puhul ei aktiveeru tüvekamber ja puuduvad ovaalsed rakud. Siiski õnnestus meil kindlaks teha, et mõlemal juhul on võimalik jälgida mitte ainult Ito rakkude aktivatsiooni, vaid ka teise tüviraku markeri, nimelt C-kit tüvirakufaktori retseptori ekspressiooni neis. Kuna C-komplekti ekspressiooni täheldati ka üksikutes hepatotsüütides (milles see oli vähem intensiivne), mis asusid peamiselt kokkupuutes C-komplekti positiivsete Ito rakkudega, võib eeldada, et need hepatotsüüdid diferentseerusid C-kit+ Ito rakkudest. On ilmne, et see rakutüüp mitte ainult ei loo tingimusi hepatotsüütide populatsiooni taastamiseks, vaid hõivab ka piirkondlike tüvirakkude niši.

Seega on nüüdseks kindlaks tehtud, et Ito rakud ekspresseerivad erinevates arengu-, regenereerimis- ja kultiveerimistingimustes vähemalt viit tüviraku markerit. Kõik praeguseks kogutud andmed viitavad sellele, et Ito rakud võivad mängida piirkondlike maksa tüvirakkude rolli, olles üks hepatotsüütide (ja võib-olla ka kolangiotsüütide) arengu allikatest ning on ka maksa morfogeneesi ja mikrokeskkonna kõige olulisem komponent. maksa hematopoees. Sellegipoolest tundub ennatlik teha ühemõttelisi järeldusi nende rakkude kuuluvuse kohta maksa tüvirakkude (eelasrakkude) populatsiooni. Siiski on ilmselge vajadus sellesuunaliste uute uuringute järele, mis avavad edu korral väljavaateid tüvirakkude siirdamisel põhinevate tõhusate maksahaiguste ravimeetodite väljatöötamiseks.

Sel juhul reageerivad need rakud prolifereerudes kahjustatud maksa poolt toodetud tsütokiinide, kasvufaktorite ja kemokiinide (põletikku soodustavate tsütokiinide) toimele. Stellaatrakkude krooniline aktiveerimine vastusena HBV ja HCV replikatsiooni põhjustatud oksüdatiivsele stressile võib kaasa aidata fibrogeneesile ja krooniliselt HBV ja HCV-ga nakatunud hepatotsüütide proliferatsioonile.

Seega osalevad tähtrakud hepatotsüütide kasvu, diferentseerumise ja tsirkulatsiooni reguleerimises, mis koos MAP kinaaside aktiveerimisega võivad viia maksavähi tekkeni [Block, 2003].

Lingid:

Juhuslik joonistamine

Tähelepanu! Teave saidil

mõeldud ainult hariduslikuks otstarbeks

Maksa Ito rakkude mõju uurimine tüvirakkudele

Rakkudevaheline suhtlus võib toimuda parakriinse sekretsiooni ja otseste rakkudevaheliste kontaktide kaudu. On teada, et maksa perisinusoidsed rakud (HPC) loovad piirkondliku tüvirakkude niši ja määravad nende diferentseerumise. Samal ajal on HPC molekulaarsel ja rakulisel tasemel halvasti iseloomustatud.

Shafigullina A.K., Trondin A.A., Shaikhutdinova A.R., Kaligin M.S., Gazizov I.M., Rizvanov A.A., Gumerova A.A., Kiyasov A.P.

SEI HPE "Föderaalse Tervise ja Sotsiaalarengu Agentuuri Kaasani Riiklik Meditsiiniülikool"

Rekombinantse luu morfogeneetilise valgu osteoinduktiivsuse eksperimentaalne hindamine

Rakutehnoloogiad luude ja liigeste degeneratiivsete-düstroofsete haiguste ravis

Ito puur

rahulik Ja aktiveeritud. Aktiveeritud Ito rakud

rahulik olek

perisinusoidne(subendoteliaalne) ja interhepatotsellulaarne. Esimesed lahkuvad raku kehast ja ulatuvad piki sinusoidaalse kapillaari pinda, kattes selle peenikeste sõrmetaoliste okstega. Perisinusoidsed väljakasvud on kaetud lühikeste villidega ja neil on iseloomulikud pikad mikroeendid, mis ulatuvad veelgi kaugemale piki kapillaaride endoteeli toru pinda. Interhepatotsellulaarsed väljakasvud, mis on ületanud hepatotsüütide plaadi ja jõudnud naabersinusoidi, jagunevad mitmeks perisinusoidseks väljakasvuks. Seega katab Ito rakk keskmiselt veidi rohkem kui kaks kõrvuti asetsevat sinusoidi.

aktiveeritud olek

maksarakud

Inimese maks koosneb rakkudest, nagu iga orgaaniline kude. Loodus on paigutatud nii, et see organ täidab kõige olulisemaid funktsioone, puhastab keha, toodab sappi, kogub ja ladestab glükogeeni, sünteesib plasmavalke, juhib ainevahetusprotsesse, osaleb kolesterooli ja muude vajalike komponentide koguse normaliseerimises. keha eluks.

Oma eesmärgi täitmiseks peavad maksarakud olema terved, stabiilse struktuuriga, iga inimene peab neid kaitsma hävimise eest.

Maksasagarate struktuurist ja tüüpidest

Keha rakulist koostist iseloomustab mitmekesisus. Maksarakud moodustavad lobuleid, segmendid koosnevad sagaratest. Elundi struktuur on selline, et hepatotsüüdid (peamised maksarakud) paiknevad keskveeni ümber, hargnevad sellest, ühenduvad üksteisega, moodustades sinusoidid, see tähendab verega täidetud tühimikud. Veri liigub läbi nende nagu kapillaarid. Maksa varustatakse verega elundis asuvast portaalveenist ja arterist. Maksa lobulid toodavad sappi ja viivad selle sapiteedesse.

Muud tüüpi maksarakud ja nende eesmärk

1. Endoteel – sinusoide vooderdavad ja fenestrat sisaldavad rakud. Viimased on loodud astmelise barjääri moodustamiseks sinusoidi ja Disse'i ruumi vahele.
2. Disse ruum ise on täidetud tähtrakkudega, mis tagavad koevedeliku väljavoolu portaaltsoonide lümfisoontesse.
3. Kupfferi rakud on seotud endoteeliga, kinnituvad selle külge, nende ülesanne on kaitsta maksa üldistatud infektsiooni sattumisel organismi, vigastuse korral.
4. Pitrakud on viiruse poolt mõjutatud hepatotsüütide tapjad, lisaks on neil kasvajarakkudele tsütotoksilisus.

Inimese maks koosneb 60% hepatotsüütidest ja 40% muud tüüpi rakulistest ühenditest. Hepatotsüüdid näevad välja nagu hulktahukas, neid on vähemalt 250 miljardit. Hepatotsüütide normaalne toimimine on tingitud komponentide spektrist, mida eritavad sinusoidsed rakud, mis täidavad sinusoidset sektsiooni. See tähendab, ülaltoodud Kupfferi, stellate ja süvendite rakud (intrahepaatilised lümfotsüüdid).

Endoteelirakud on filter sinusoidaalses ruumis oleva vere ja Disse'i ruumis oleva plasma vahel. See bioloogiline filter sorteerib välja suured, liiga rikkad retinooli- ja kolesterooliühendid ning ei lase neid läbi, mis on organismile kasulik. Lisaks on nende ülesanne kaitsta maksa (nimelt hepatotsüüte) vererakkude mehaaniliste kahjustuste eest.

Meie püsilugeja soovitas tõhusat meetodit! Uus avastus! Novosibirski teadlased on tuvastanud parima vahendi maksa puhastamiseks. 5 aastat uurimistööd. Eneseravi kodus! Pärast selle hoolikat läbivaatamist otsustasime sellele teie tähelepanu pöörata.

Keha elementide interaktsiooni protsess

Kõigi kehaosakeste vahel toimub vastastikmõju, millel on üsna keeruline skeem. Tervet maksa iseloomustab rakuliste ühendite stabiilsus, patoloogilistes protsessides saab mikroskoobi all jälgida rakuvälist maatriksit.

Toksiinide, näiteks alkoholi, viiruslike ainete mõju all olevad organid muutuvad. Need on järgmised:

• ainevahetushäiretest tulenevate toodete ladestumine organismis;
• raku düstroofia;
• hepatotsüütide nekroos;
• maksakudede fibroos;
• maksa põletikuline protsess;
• kolestaas.

Elundite patoloogia ravist

Igal patsiendil on kasulik teada, mida elundis toimuvad muutused tähendavad. Mitte kõik neist pole katastroofilised. Näiteks düstroofia võib olla kerge või raske. Mõlemad protsessid on pöörduvad. Praegu on ravimeid, mis taastavad rakke ja terveid maksa segmente.

Kolestaasi saab ravida isegi rahvapäraste ravimitega - keetmise ja infusiooniga. Need aitavad kaasa bilirubiini sünteesi normaliseerimisele ja kõrvaldavad häired sapi väljavoolus kaksteistsõrmiksoole.

Algstaadiumis tsirroosiga algab ravi dieediga, seejärel määratakse ravi hepatoprotektoritega. Kõige tõhusam viis tsirroosi ja fibroosi ravimiseks on tüvirakud, mida süstitakse nabaveeni või veeni, need taastavad erinevate mõjuritega kahjustatud hepatotsüüte.

Maksarakkude surma peamised põhjused on alkoholi kuritarvitamine, kokkupuude ravimitega, sealhulgas ravimid, ravimid. Iga kehasse sattuv toksiin on maksa hävitaja. Seetõttu peaksite loobuma halbadest harjumustest, et teil oleks terve maks.

Kes ütles, et raskeid maksahaigusi on võimatu ravida?

• Proovitud on palju meetodeid, kuid miski ei aita.
• Ja nüüd olete valmis kasutama kõiki võimalusi, mis annavad teile kauaoodatud hea tervise!

Tõhus vahend maksa raviks on olemas. Järgige linki ja uurige, mida arstid soovitavad!

Loe ka:

Haridus: Rostovi Riiklik Meditsiiniülikool (RostGMU), gastroenteroloogia ja endoskoopia osakond.

ENDOTEELIRAKUD, KUPFER JA ITO-RAKUD

Endoteelirakkude, Kupfferi ja Ito rakkude struktuuri vaatleme kahe joonise näitel.

Tekstist paremal olev joonis näitab maksa sinusoidseid kapillaare (SC) - sinusoidset tüüpi intralobulaarseid kapillaare, mis suurenevad sisendveenidest keskveeni. Maksa sinusoidsed kapillaarid moodustavad anastomootilise võrgustiku maksakihtide vahel. Sinusoidsete kapillaaride limaskesta moodustavad endoteelirakud ja Kupfferi rakud.

Tekstist vasakul oleval joonisel on maksa kiht (LP) ja kaks siinuskapillaari (SC) lõigatud vertikaalselt ja horisontaalselt, et näidata perisinusoidseid Ito rakke (CI). Joonisel on näha ka lõigatud sapijuhad (LC).

ENDOTEELIRAKUD

Endoteelirakud (EC) on tugevalt lamedad lamerakud, millel on piklik väike tuum, vähearenenud organellid ja suur hulk mikropinotsüütilisi vesiikuleid. Tsütomembraanil on mittepüsivad augud (O) ja fenestra, mis on sageli rühmitatud kriibikujulisteks plaatideks (RP). Need avad võimaldavad vereplasmat läbida, kuid mitte vererakke, võimaldades sellel juurdepääsu hepatotsüütidele (D). Endoteelirakkudel ei ole basaalmembraani ja neil puudub fagotsütoos. Need on üksteisega ühendatud väikeste pistikukomplekside abil (pole näidatud). Koos Kupfferi rakkudega moodustavad endoteelirakud Disse'i ruumi (PD) sisemise piiri; selle välispiiri moodustavad hepatotsüüdid.

KUPFER CELLS

Kupfferi rakud (CC) on suured, mittepüsivad tähtrakud maksa sinusoidaalsetes kapillaarides, osaliselt nende bifurkatsioonides.

Kupfferi rakkude protsessid kulgevad ilma endoteelirakkude vahel ühendavate seadmeteta ja sageli läbivad sinusoidide valendiku. Kupfferi rakud sisaldavad ovaalset tuuma, palju mitokondreid, hästi arenenud Golgi kompleksi, granulaarse endoplasmaatilise retikulumi lühikesi tsisterne, palju lüsosoome (L), jääkehasid ja haruldasi rõngakujulisi plaate. Kupfferi rakud sisaldavad ka suuri fagolüsosoome (PL), mis sisaldavad sageli vananenud erütrotsüüte ja võõrkehi. Samuti võib tuvastada hemosideriini või raua lisandeid, eriti supravitaalsel värvimisel.

Kupfferi rakkude pinnal on ebakorrapärased lamedad tsütoplasmaatilised voldid, mida nimetatakse lamellipodiaks (LP) – lamellvarred, aga ka protsessid, mida nimetatakse filopoodiaks (F) ja mikrovillideks (MV), mis on kaetud glükokalüksiga. Plasmalemma moodustab vermiformsed kehad (CT), millel on tsentraalselt paiknev tihe joon. Need struktuurid võivad kujutada endast kondenseerunud glükokalüksi.

Kupfferi rakud on makrofaagid, mis tõenäoliselt moodustavad iseseisva rakuperekonna. Tavaliselt pärinevad nad teistest Kupfferi rakkudest viimaste mitootilise jagunemise tõttu, kuid võivad pärineda ka luuüdist. Mõned autorid usuvad, et need on aktiveeritud endoteelirakud.

Mõnikord läbib Disse'i ruumi juhuslik autonoomne närvikiud (NF). Mõnel juhul puutuvad kiud kokku hepatotsüütidega. Hepatotsüütide servad on piiritletud interhepatotsüütide depressioonidega (MU), mis on kaetud mikrovilliga.

ITO CELLS

Need on täherakud, mis paiknevad Disse'i (PD) ruumides. Nende tuumad on rikkad kondenseerunud kromatiini poolest ja tavaliselt deformeeruvad suured lipiiditilgad (LA). Viimased ei esine mitte ainult perikarüonis, vaid ka raku protsessides ning on väljastpoolt nähtavad sfääriliste eenditena. Organellid on halvasti arenenud. Perisinusoidsed rakud näitavad nõrka endotsüütilist aktiivsust, kuid neil puuduvad fagosoomid. Rakkudel on mitu pikka protsessi (O), mis on kontaktis naaberhepatotsüütidega, kuid ei moodusta ühendavaid komplekse.

Protsessid ümbritsevad maksa sinusoidseid kapillaare ja mõnel juhul läbivad maksa kihte, puutudes kokku külgnevate maksa sinusoididega. Protsessid ei ole püsivad, hargnenud ja õhukesed; need võivad olla ka lamedad. Kogunevad lipiiditilkade rühmad, need pikenevad ja omandavad viinamarjaharja välimuse.

Arvatakse, et perisinusoidsed Ito rakud on halvasti diferentseerunud mesenhümaalsed rakud, mida võib pidada hematopoeetilisteks tüvirakkudeks, kuna need võivad patoloogilistes tingimustes muutuda rasvarakkudeks, aktiivseteks vere tüvirakkudeks või fibroblastideks.

Normaalsetes tingimustes osalevad Ito rakud rasva ja A-vitamiini kogunemises ning intralobulaarsete retikulaarsete ja kollageenikiudude (KB) tootmises.

Psühholoogia ja psühhoteraapia

See jaotis sisaldab artikleid uurimismeetodite, ravimite ja muude meditsiiniteemadega seotud komponentide kohta.

Väike osa saidist, mis sisaldab artikleid originaalsete esemete kohta. Kellad, mööbel, dekoratiivesemed - kõik see leiate sellest jaotisest. Sektsioon ei ole saidi jaoks peamine, vaid on pigem huvitav täiendus inimese anatoomia ja füsioloogia maailmale.

Ito maksarakud

Universaalne populaarteaduslik veebientsüklopeedia

MAKS

MAKS, suurim nääre selgroogsete kehas. Inimestel on see umbes 2,5% kehakaalust, täiskasvanud meestel keskmiselt 1,5 kg ja naistel 1,2 kg. Maks asub kõhuõõne paremas ülaosas; see on sidemetega kinnitatud diafragma, kõhuseina, mao ja soolte külge ning on kaetud õhukese kiudmembraaniga – glissoni kapsliga. Maks on pehme, kuid tihe punakaspruuni värvusega organ ja koosneb tavaliselt neljast sagarast: suurest paremast, väiksemast vasakpoolsest ja palju väiksematest saba- ja ruudukujulistest sagaratest, mis moodustavad maksa tagumise alumise pinna.

Funktsioonid.

Maks on eluks hädavajalik organ, millel on palju erinevaid funktsioone. Üks peamisi on sapi, läbipaistva oranži või kollase vedeliku moodustumine ja eritumine. Sapp sisaldab happeid, sooli, fosfolipiide (fosfaatrühma sisaldavad rasvad), kolesterooli ja pigmente. Sapphappesoolad ja vabad sapphapped emulgeerivad rasvu (st purustavad need väikesteks tilkadeks), mis muudab need kergemini seeditavaks; muuta rasvhapped vees lahustuvateks vormideks (mis on vajalik nii rasvhapete endi kui ka rasvlahustuvate A-, D-, E- ja K-vitamiinide omastamiseks); omavad antibakteriaalset toimet.

Kõik seedekulglast verre imenduvad toitained – süsivesikute, valkude ja rasvade, mineraalide ja vitamiinide seedimisproduktid – läbivad maksa ja töödeldakse selles. Samal ajal muudetakse osa aminohapetest (valgufragmendid) ja osa rasvadest süsivesikuteks, seega on maks kehas suurim glükogeeni “depoo”. See sünteesib vereplasma valke – globuliine ja albumiini, samuti aminohapete transformatsioonireaktsioone (deamineerimine ja transamiinimine). Deamineerimine – lämmastikku sisaldavate aminorühmade eemaldamine aminohapetest – võimaldab viimaseid kasutada näiteks süsivesikute ja rasvade sünteesiks. Transamiinimine on aminorühma ülekandmine aminohappelt ketohappeks teise aminohappe moodustamiseks ( cm. AINEVAHETUS). Maks sünteesib ka ketokehi (rasvhapete ainevahetuse saadusi) ja kolesterooli.

Maks on seotud glükoosi (suhkru) taseme reguleerimisega veres. Kui see tase tõuseb, muudavad maksarakud glükoosi glükogeeniks (tärklisega sarnaseks aineks) ja säilitavad selle. Kui veresuhkru tase langeb alla normi, lagundatakse glükogeen ja glükoos siseneb vereringesse. Lisaks on maks võimeline sünteesima glükoosi teistest ainetest, näiteks aminohapetest; seda protsessi nimetatakse glükoneogeneesiks.

Maksa teine ​​funktsioon on võõrutus. Ravimid ja muud potentsiaalselt toksilised ühendid võivad muutuda maksarakkudes vees lahustuvaks vormiks, mis võimaldab neil sapiga erituda; neid saab ka hävitada või konjugeerida (kombineerida) teiste ainetega, moodustades kahjutuid tooteid, mis organismist kergesti erituvad. Mõned ained ladestuvad ajutiselt Kupfferi rakkudesse (spetsiaalsed rakud, mis absorbeerivad võõrosakesi) või teistes maksarakkudes. Kupfferi rakud on eriti tõhusad bakterite ja muude võõrosakeste eemaldamisel ja hävitamisel. Tänu neile mängib maks olulist rolli keha immuunkaitses. Maks, millel on tihe veresoonte võrgustik, toimib ka verereservuaarina (sisaldab pidevalt umbes 0,5 liitrit verd) ning osaleb veremahu ja verevoolu reguleerimises kehas.

Üldiselt täidab maks enam kui 500 erinevat funktsiooni ja selle tegevust ei ole veel võimalik kunstlikult taastoota. Selle organi eemaldamine põhjustab paratamatult surma 1–5 päeva jooksul. Maksal on aga tohutu sisemine reserv, sellel on hämmastav võime kahjustustest taastuda, nii et inimesed ja teised imetajad võivad ellu jääda ka pärast 70% maksakoe eemaldamist.

Struktuur.

Maksa keeruline struktuur on suurepäraselt kohandatud selle ainulaadsete funktsioonidega. Aktsiad koosnevad väikestest struktuuriüksustest - lobulitest. Inimese maksas on neid umbes sada tuhat, igaüks 1,5–2 mm pikk ja 1–1,2 mm lai. Lobul koosneb maksarakkudest - hepatotsüütidest, mis paiknevad keskveeni ümber. Hepatotsüüdid ühinevad kihtidena ühe raku paksusega – nn. maksa plaadid. Need lahknevad radiaalselt keskveenist, hargnevad ja ühenduvad üksteisega, moodustades keeruka seinte süsteemi; kitsad vahed nende vahel, täidetud verega, on tuntud kui sinusoidid. Sinusoidid on samaväärsed kapillaaridega; üksteisesse liikudes moodustavad nad pideva labürindi. Maksasagaraid varustatakse verega portaalveeni harudest ja maksaarterist ning sagaratesse moodustunud sapp siseneb tuubulite süsteemi, neist sapiteedesse ja eritub maksast.

Maksa portaalveen ja maksaarter tagavad maksale ebatavalise kahekordse verevarustuse. Toitaineterikas veri mao, soolte ja mitmete teiste elundite kapillaaridest kogutakse portaalveeni, mis selle asemel, et kanda verd südamesse nagu enamik teisi veeni, viib selle maksa. Maksa lobulites laguneb portaalveen kapillaaride võrgustikuks (sinusoidid). Mõiste "portaalveen" tähistab ebatavalist veretranspordi suunda ühe organi kapillaaridest teise kapillaaridesse (neerudel ja hüpofüüsil on sarnane vereringesüsteem).

Maksa teine ​​verevarustus, maksaarter, kannab hapnikuga rikastatud verd südamest sagarate välispindadele. Portaalveen annab 75–80% ja maksaarter 20–25% maksa kogu verevarustusest. Üldiselt läbib maksa umbes 1500 ml verd minutis, s.o. veerand südame väljundist. Mõlema allika veri jõuab sinusoididesse, kus see seguneb ja läheb keskveeni. Tsentraalsest veenist algab vere väljavool südamesse lobaarveenide kaudu maksa (mitte segi ajada maksa portaalveeniga).

Maksarakud eritavad sapi kõige väiksematesse rakkudevahelistesse tuubulitesse – sapikapillaaridesse. Torukeste ja kanalite sisemise süsteemi kaudu kogutakse see sapijuhasse. Osa sapist läheb otse ühisesse sapijuhasse ja välja peensoolde, kuid suurem osa sellest suunatakse tsüstilise kanali kaudu tagasi sapipõide, mis on maksa küljes olev väike lihaselise seinaga kotike, säilitamiseks. Kui toit siseneb soolde, tõmbub sapipõis kokku ja väljutab sisu ühisesse sapijuhasse, mis avaneb kaksteistsõrmiksoole. Inimese maks toodab umbes 600 ml sappi päevas.

Portaali kolmik ja acinus.

Portaalveeni, maksaarteri ja sapijuha harud paiknevad kõrvuti, sagara välispiiril ja moodustavad portaalkolmkõla. Iga lobule perifeerias on mitu sellist portaaltriaadi.

Maksa funktsionaalne üksus on acinus. See on koe osa, mis ümbritseb portaaltriaadi ja sisaldab lümfisooneid, närvikiude ja kahe või enama sagara külgnevaid sektoreid. Üks acinus sisaldab umbes 20 maksarakku, mis paiknevad portaaltriaadi ja iga lobule keskveeni vahel. Kahemõõtmelisel pildil näeb lihtne acinus välja nagu veresoonte rühm, mida ümbritsevad kõrvuti asetsevad lobulite alad, kolmemõõtmelisel pildil aga vere- ja sapivarrel rippuva marja (acinus – ladina mari). laevad. Acinus, mille mikrovaskulaarne raam koosneb ülaltoodud vere- ja lümfisoontest, sinusoididest ja närvidest, on maksa mikrotsirkulatsiooniüksus.

maksarakud

(hepatotsüüdid) on polüeedrite kujuga, kuid neil on kolm peamist funktsionaalset pinda: sinusoidsed, sinusoidse kanali poole; torukujuline - osaleb sapi kapillaari seina moodustamises (sellel pole oma seina); ja rakkudevaheline - naabermaksarakkudega vahetult piirnev.

Ito puur

Ito rakud (sünonüümid: maksa tähtrakk, rasva salvestav rakk, lipotsüüt, inglise keel. Maksa tähtrakk, HSC, Ito rakk, Ito rakk) - maksa sagara perisinusoidaalses ruumis sisalduvad peritsüüdid, mis on võimelised toimima kahes erinevas olekus - rahulik Ja aktiveeritud. Aktiveeritud Ito rakud mängivad suurt rolli fibrogeneesis - armkoe moodustumises maksakahjustuse korral.

Intaktses maksas leidub tähtrakke rahulik olek. Selles olekus on rakkudel mitu väljakasvu, mis katavad sinusoidset kapillaari. Veel üks rakkude eristav tunnus on A-vitamiini (retinoidi) varude olemasolu nende tsütoplasmas rasvatilkade kujul. Vaiksed Ito rakud moodustavad 5-8% kõigist maksarakkudest.

Ito rakkude väljakasvud jagunevad kahte tüüpi: perisinusoidne(subendoteliaalne) ja interhepatotsellulaarne. Esimesed lahkuvad raku kehast ja ulatuvad piki sinusoidaalse kapillaari pinda, kattes selle peenikeste sõrmetaoliste okstega. Perisinusoidsed väljakasvud on kaetud lühikeste villidega ja neil on iseloomulikud pikad mikroeendid, mis ulatuvad veelgi kaugemale piki kapillaaride endoteeli toru pinda. Interhepatotsellulaarsed väljakasvud, mis on ületanud hepatotsüütide plaadi ja jõudnud naabersinusoidi, jagunevad mitmeks perisinusoidseks väljakasvuks. Seega katab Ito rakk keskmiselt veidi rohkem kui kaks kõrvuti asetsevat sinusoidi.

Kui maks on kahjustatud, muutuvad Ito rakud aktiveeritud olek. Aktiveeritud fenotüüpi iseloomustavad proliferatsioon, kemotaksis, kontraktiilsus, retinoidivarude kadu ja müofibroblastiliste rakkude moodustumine. Aktiveeritud maksa tähtrakud näitavad ka uute geenide, nagu α-SMA, ICAM-1, kemokiinide ja tsütokiinide, suurenenud taset. Aktiveerimine näitab fibrogeneesi varase staadiumi algust ja eelneb ECM-valkude suurenenud tootmisele. Maksa paranemise viimast etappi iseloomustab aktiveeritud Ito-rakkude suurenenud apoptoos, mille tulemusena väheneb nende arv järsult.

Ito rakkude visualiseerimiseks mikroskoobi all kasutatakse värvimist kuldkloriidiga. Samuti tehti kindlaks, et usaldusväärne marker nende rakkude eristamiseks teistest müofibroblastidest on nende reeliini valgu ekspressioon.

Ajalugu

1876. aastal kirjeldas Karl von Kupfer rakke, millele ta pani nimeks "Sternzellen" (tähtrakud). Kuldoksiidiga värvimisel olid rakkude tsütoplasmas nähtavad kandmised. Pidades neid ekslikult fagotsütoosiga hõivatud erütrotsüütide fragmentideks, muutis Kupfer 1898. aastal oma seisukohti "tähtraku" kui eraldi rakutüübi kohta ja klassifitseeris need fagotsüütideks. Kuid järgmistel aastatel ilmus regulaarselt kirjeldusi rakkudest, mis sarnanesid Kupfferi "tähtrakkudega". Neile anti mitmesuguseid nimetusi: interstitsiaalsed rakud, parasinusoidrakud, lipotsüüdid, peritsüüdid. Nende rakkude roll jäi saladuseks 75 aastat, kuni professor Toshio Ito avastas mõned rakud, mis sisaldavad inimese maksa perisinusoidaalses ruumis rasvalaike. Ito nimetas neid "shibo-sesshu saibo" - rasva neelavad rakud. Mõistes, et need kandmised on glükogeenist rakkude poolt toodetud rasv, muutis ta nime "shibo-chozo saibo" - rasva salvestavad rakud. 1971. aastal tõestas Kenjiro Wake Kupfferi "Sternzelleni" ja Ito rasva talletavate rakkude identiteedi. Wake tegi ka kindlaks, et need rakud mängivad olulist rolli A-vitamiini säilitamisel (seni arvati, et A-vitamiin ladestub Kupfferi rakkudesse). Varsti pärast seda näitasid Kent ja Popper Ito rakkude tihedat seost maksafibroosiga. Need avastused algatasid Ito rakkude üksikasjaliku uurimise.

Vaata ka

Kirjutage ülevaade artiklist "Ito puur"

Lingid

• Young-O Queon, Zachary D. Goodman, Jules L. Dienstag, Eugene R. Schiff, Nathaniel A. Brown, Elmar Burkhardt, Robert Skunkhoven, David A. Brenner, Michael W. Fried (2001). Journal of Haepotology 35; 749-755. - Consilium-Medicumi veebisaidil ajakirjas "Infections and Antimicrobial Therapy", köide 04/N 3/2002 ilmunud artikli tõlge.
• Popper H: A-vitamiini jaotumine kudedes, nagu selgus fluorestsentsmikroskoopia abil. Physiol Rev 1944, 24:.

Märkmed

1. Geerts A. (2001) Vaiksete maksa tähtrakkude ajalugu, heterogeensus, arengubioloogia ja funktsioonid. Semin Liver Dis. 21(3):311-35. PMID
2. Wake, K. (1988) Maksa perivaskulaarsed rakud, mis avastati kulla- ja hõbedaga immutamise meetodil ja elektronmikroskoopiaga. Maksa biopatoloogias. Ultrastructural Approach” (Motta, P. M., toim) lk. 23-36, Kluwer Academic Publishers, Dordrecht, Holland
3. Stanciu A, Cotutiu C, Amalinei C. (2002) Uued andmed ITO rakkude kohta. Rev Med Chir Soc Med Nat Iasi. 107(2):235-9. PMID
4. John P. Iredale (2001) Maksa tähtkuju rakkude käitumine maksakahjustuse lahendamise ajal. Seminars in Liver Disease, 21(3):PMID- on Medscape.
5. Kobold D, Grundmann A, Piscaglia F, Eisenbach C, Neubauer K, Steffgen J, Ramadori G, Knittel T. (2002) Reeliini ekspressioon maksa tähtrakkudes ja maksakoe parandamise ajal: uudne marker HSC eristamiseks teistest maksa müofibroblastidest. J Hepatol. 36(5):607-13. PMID
6. Adrian Reuben (2002) hepatoloogia. 35. köide, 2. väljaanne, lk 503–504
7. Suematsu M, Aiso S. (2001) Professor Toshio Ito: selgeltnägija peritsüütide bioloogias. Keio J Med. 50(2):66-71. PMID
8. Querner F: Der mikroskopische Nachweis von Vitamin A im animalen Gewebe. Zur Kenntnis der paraplasmatischen Leberzellen-einschlüsse. Dritte Mitteilung. Klin Wschr 1935, 14:.

Ito puuri iseloomustav katkend

Pool tundi hiljem lahkus Kutuzov Tatarinovisse ja Bennigsen koos saatjaskonnaga, sealhulgas Pierre'iga, sõitis mööda liini.

Benigsen Gorkist läks mööda maanteed alla sillale, millele künka ohvitser näitas Pierre'i kui positsiooni keskpunkti ja mille lähedal kaldal lebasid heina järele lõhnavad niidetud rohu read. Nad sõitsid üle silla Borodino külla, sealt pöörati vasakule ja mööda tohutut hulka vägesid ja relvi sõitsid kõrgele künkale, millel miilitsad maad kaevasid. See oli reduut, millel veel nime polnud, siis nimetati seda Raevski reduutiks ehk kärupatareiks.

Pierre ei pööranud sellele redoutile erilist tähelepanu. Ta ei teadnud, et see koht jääb talle rohkem meelde kui kõik kohad Borodino väljal. Seejärel sõideti üle kuristiku Semjonovskisse, kus sõdurid tõmbasid ära viimaseid onnide ja aitade palke. Siis sõideti allamäge ja ülesmäge läbi murdunud rukki, välja nagu rahe, mööda teed õhetustesse [omamoodi kindlustus. (L.N. Tolstoi märkus.) ], ka siis veel kaevatud.

Bennigsen peatus lindude juures ja hakkas vaatama Shevardinsky reduuti (mis oli eile meie oma), millel oli näha mitut ratsanikku. Ohvitserid ütlesid, et seal on Napoleon või Murat. Ja kõik vaatasid innukalt seda ratturite kamba peale. Ka Pierre vaatas sinna, püüdes arvata, kes neist vaevunähtavatest inimestest on Napoleon. Lõpuks sõitsid ratsanikud künka pealt maha ja kadusid.

Benigsen pöördus talle lähenenud kindrali poole ja hakkas selgitama kogu meie vägede positsiooni. Pierre kuulas Benigseni sõnu, pingutades kõiki oma vaimseid jõude, et mõista eelseisva lahingu olemust, kuid tundis kurvastusega, et tema vaimsed võimed on selleks ebapiisavad. Ta ei saanud millestki aru. Bennigsen lõpetas rääkimise ja märgates Pierre'i kuulavat kuju, ütles ta järsku tema poole pöördudes:

- Ma arvan, et teid ei huvita?

"Oh, vastupidi, see on väga huvitav," kordas Pierre, mitte päris tõetruult.

Kohapeal sõitsid nad veel rohkem vasakule mööda teed, lookledes läbi tiheda madala kasemetsa. Selle keskel

metsas hüppas nende ette teele valgete jalgadega pruunjänes ja oli suure hulga hobuste klõbisemisest ehmunud nii segaduses, et hüppas tükk aega mööda teed nende ette, äratades kindrali. tähelepanu ja naeru ning alles siis, kui mitu häält tema peale karjusid, tormas külili ja peitis tihnikusse. Olles kaks versta läbi metsa sõitnud, sõitsid nad välja lagendikule, millel seisid Tuchkovi korpuse väed, mis pidi kaitsma vasakut tiiba.

Siin, vasakpoolsel äärmisel tiival, rääkis Bennigsen palju ja tulihingeliselt ning andis, nagu Pierre'ile tundus, sõjalisest seisukohast olulise korralduse. Tuchkovi vägede paigutuse ees oli kõrgendus. Seda kõrgust väed ei hõivanud. Bennigsen kritiseeris seda viga valjult, öeldes, et on rumal jätta kõrgkoht hõivamata ja paigutada selle alla väed. Mõned kindralid avaldasid sama arvamust. Eelkõige rääkis üks sõjalise kirglikult, et nad pandi siia tapmiseks. Bennigsen andis oma nimel käsu viia väed kõrgustesse.

See vasakul tiival antud käsk pani Pierre'i veelgi enam kahtlema oma võimes mõista sõjalisi asju. Kuulates Bennigsenit ja kindraleid, kes mõistsid hukka vägede positsiooni mäe all, mõistis Pierre neid täielikult ja jagas nende arvamust; aga just seetõttu ei saanud ta aru, kuidas see, kes need siia mäe alla pani, sai teha nii ilmselge ja jämeda vea.

Pierre ei teadnud, et neid vägesid ei saadetud positsiooni kaitsma, nagu arvas Bennigsen, vaid paigutati varjatud kohta varitsuspaika, st selleks, et jääda märkamatuks ja ootamatult ründava vaenlase pihta. Bennigsen seda ei teadnud ja viis väed erilistel põhjustel edasi, ilma sellest ülemjuhatajale rääkimata.

Sel selgel 25. augusti õhtul lamas vürst Andrei, käele toetudes, Knjazkovi küla katkises kuuris oma rügemendi serval. Läbi murtud müüri augu vaatas ta kolmekümneaastaste kaskede riba, mille alumised oksad olid aia ääres ära lõigatud, põllumaad, mille peal olid purustatud kaerahunnikud, ja põõsaid, mida mööda oli näha tulekahjude suitsu – sõdurikööke.

Ükskõik kui kitsas ja keegi ei vaja ning kui raske ta elu nüüd prints Andreile ka ei tundus, tundis ta, nagu seitse aastat tagasi Austerlitzis lahingu eelõhtul, ärevil ja ärritununa.

Tema andis ja võttis vastu korraldusi homseks lahinguks. Tal polnud enam midagi teha. Kuid kõige lihtsamad, selgemad ja seetõttu kohutavad mõtted ei jätnud teda rahule. Ta teadis, et homne lahing oli kõige kohutavam kõigist nendest, milles ta osales, ja esimest korda elus on võimalik surm, arvestamata ilmalikuga, kaalumata, kuidas see teisi mõjutab, kuid ainult suhe iseendaga, oma hingega, elavusega, peaaegu kindlalt, lihtsalt ja kohutavalt, esitas ta end talle. Ja selle idee kõrguselt valgustas kõike, mis teda varem oli piinanud ja hõivanud, äkitselt külm valge valgus, ilma varjudeta, ilma perspektiivita, ilma piirjoonteta. Kogu elu tundus talle kui võlulatern, millesse ta pikka aega läbi klaasi ja tehisvalguse käes vaatas. Nüüd nägi ta järsku, ilma klaasideta, eredas päevavalguses neid halvasti maalitud pilte. "Jah, jah, siin nad on, need võltspildid, mis mind erutasid, rõõmustasid ja piinasid," ütles ta endamisi, pöörates kujutluses ümber oma maagilise elulaterna põhipildid, vaadates neid nüüd selles külmas valges päevavalguses. - selge mõte surmast. - Siin nad on, need jämedalt maalitud figuurid, mis tundusid olevat midagi ilusat ja salapärast. Au, avalik hüve, armastus naise vastu, isamaa ise – kui vahvad need pildid mulle tundusid, millise sügava tähendusega need näisid olevat täidetud! Ja see kõik on selle hommiku külmas valges valguses nii lihtne, kahvatu ja toores, et ma tunnen, et see tõuseb minu jaoks." Tema tähelepanu köitsid eelkõige tema elu kolm peamist kurbust. Tema armastus naise vastu, isa surm ja Prantsusmaa sissetung, mis vallutas pool Venemaad. "Armastus. See tüdruk, kes tundus mulle täis salapäraseid jõude. Kuidas ma teda armastasin! Tegin poeetilisi plaane armastusest, temaga koosõnnest. Oh kallis poiss! ütles ta valjusti vihaselt. - Kuidas! Uskusin mingisse ideaalsesse armastusse, mis pidi teda mulle truuks hoidma kogu minu äraolekuaasta! Nagu muinasjutu õrn tuvi, pidi ta minust eemalduma. Ja see kõik on palju lihtsam ... See kõik on kohutavalt lihtne, vastik!

Rakkudevaheline suhtlus võib toimuda parakriinse sekretsiooni ja otseste rakkudevaheliste kontaktide kaudu. On teada, et maksa perisinusoidsed rakud (HPC) loovad piirkondliku tüvirakkude niši ja määravad nende diferentseerumise. Samal ajal on HPC molekulaarsel ja rakulisel tasemel halvasti iseloomustatud.

Projekti eesmärk oli uurida interaktsioone roti maksa perisinusoidaalsete rakkude ja erinevate tüvirakkude, nagu inimese nabaväädivere mononukleaarsete rakufraktsioonide (UCB-MC) ja roti luuüdist pärinevate multipotentsiaalsete mesenhümaalsete stroomarakkude (BM-MMSC) vahel.

materjalid ja meetodid. Roti BM-MSC ja HPC, inimese UCB-MC rakud saadi standardsete tehnikate abil. HPC parakriinse regulatsiooni uurimiseks kultiveerisime UCB-MC või BM-MMSC rakke koos HPC-ga, kasutades Boydeni kambreid ja konditsioneeritud HPC rakkude söödet. Erinevalt märgistatud rakke kultiveeriti koos ja nende koostoimeid jälgiti faasikontrastse fluorestsentsmikroskoopia ja immunotsütokeemia abil.

tulemused. Esimesel kultiveerimisnädalal toimus A-vitamiini autofluorestsents PHC rasvade säilitamise võime tõttu. BM-MMSC näitas kõigis ühiskultuurimudelites suurt elujõulisust. Pärast 2-päevast inkubeerimist konditsioneeritud söötmes BM-MMSC ja HPC kaaskultuuris täheldasime muutusi MMSC morfoloogias - nende suurus vähenes ja nende võrsed muutusid lühemaks. α-Smooth Muscle Actiini ja desmiini ekspressioon oli sarnane müofibroblastiga – Ito rakukultuuri in vitro vahevormiga. Need muutused võivad olla tingitud HPC parakriinsest stimulatsioonist. HPC kõige sügavamat mõju UCB-MC rakkudele täheldati kontaktkultuuris, mistõttu on UCB-MC rakkude jaoks oluline luua otsene rakkudevaheline kontakt nende elujõulisuse säilitamiseks. Me ei täheldanud kaaskultuurides rakkude sulandumist HPC / UCB ja HPC / BM-MMSC rakkude vahel. Edasistes katsetes plaanime uurida HPC poolt toodetud kasvufaktoreid tüvirakkude maksa diferentseerumiseks.

Sissejuhatus.

Eri maksarakkude hulgas pakuvad erilist huvi perisinusoidsed maksarakud (Ito rakud). Tänu kasvufaktorite ja rakuvälise maatriksi komponentide sekretsioonile loovad nad hepatotsüütide mikrokeskkonna ning mitmed teaduslikud uuringud on näidanud maksa tähtrakkude võimet moodustada mikrokeskkonda eellasrakkudele (sh vereloomerakkudele) ja mõjutada nende diferentseerumist hepatotsüüdid. Nende rakupopulatsioonide rakkudevahelised interaktsioonid võivad toimuda kasvufaktorite parakriinse sekretsiooni või otseste rakkudevaheliste kontaktide kaudu, kuid nende protsesside molekulaarne ja rakuline alus jääb uurimata.

Uuringu eesmärk.

Interaktsioonimehhanismide uurimine Ito rakud hematopoeetiliste (HSC) ja mesenhümaalsete (MMSC) tüvirakkudega in vitro tingimustes.

Materjalid ja meetodid.

Roti maksa Ito rakud eraldati kahe erineva ensümaatilise meetodiga. Samal ajal saadi rottide luuüdist stromaalsed MMSC-d. Inimese nabanööri verest eraldatud hematopoeetiliste tüvirakkude mononukleaarne fraktsioon. Ito rakkude parakriinset toimet uuriti MMSC-de ja HSC-de kultiveerimisega söötmes, milles Ito rakud kasvasid, ja poolläbilaskva membraaniga eraldatud rakkude kaaskultuurimisega. Rakkudevaheliste kontaktide mõju on uuritud rakkude kooskasvatamisel. Parema visualiseerimise huvides märgistati iga populatsioon individuaalse fluorestsentsmärgisega. Rakkude morfoloogiat hinnati faasikontrast- ja fluorestsentsmikroskoopia abil. Kultiveeritud rakkude fenotüüpseid tunnuseid uuriti immunotsütokeemilise analüüsiga.

Tulemused.

Nädala jooksul pärast perisinusoidsete rakkude eraldamist täheldasime nende võimet autofluorestsentsiks nende rasva kogumisvõime tõttu. Seejärel läksid rakud oma kasvu vahepealsesse faasi ja omandasid tähekuju. Ito rakkude ja roti luuüdi MMSC-dega kooskasvatamise algfaasis säilitati MMSC-de elujõulisus kõigis kultiveerimisvariantides. Teisel päeval, kui MMSC-sid kasvatati Ito rakkude söötmes, muutus MMSC-de morfoloogia: nende suurus vähenes ja protsessid lühenesid. Alfa-silelihase aktiini ja desmiini ekspressioon MMSC-s suurenes, mis näitab nende fenotüübilist sarnasust müofibroblastidega, mis on aktiveeritud Ito-rakkude kasvu vahepealne etapp in vitro. Meie andmed näitavad Ito rakkude poolt sekreteeritud parakriinsete tegurite mõju MMSC-de omadustele kultuuris.

Tuginedes vereloome tüvirakkude ja Ito rakkude kultiveerimisele, on näidatud, et vereloome tüvirakud jäävad elujõuliseks ainult Ito rakkudega kultiveerimisel. Segakultuuride fluorestsentsanalüüsi kohaselt ei ilmnenud erinevatest populatsioonidest pärit rakkude sulandumise nähtust.

Järeldused. Hematopoeetiliste tüvirakkude elujõulisuse säilitamiseks on otsustavaks teguriks otseste rakkudevahelise kontakti olemasolu Ito rakkudega. Parakriinset regulatsiooni täheldati ainult siis, kui MMSC-sid kasvatati toitainekeskkonnas, milles kasvasid Ito rakud. Ito rakkude poolt toodetud spetsiifiliste tegurite mõju uurimine HSC-de ja MMSC-de diferentseerumisele rakukultuuris on plaanis läbi viia tulevastes uuringutes.

Shafigullina A.K., Trondin A.A., Shaikhutdinova A.R., Kaligin M.S., Gazizov I.M., Rizvanov A.A., Gumerova A.A., Kiyasov A.P.
SEI HPE "Föderaalse Tervise ja Sotsiaalarengu Agentuuri Kaasani Riiklik Meditsiiniülikool"

Peamine endotoksiinide allikas organismison gramnegatiivne soolefloora. Praegu pole kahtlust, et maks on peamine organ endotoksiini puhastamine. Endotoksiini omastavad esimesena rakk Kami Kupffer (KK), interakteerudes membraaniretseptoriga CD 14. Võib seostuda retseptoriga iseendana lipopolüsahhariid(LPS), ja selle kompleks lipiid A-siduva valguga plasma tükk. LPS-i interaktsioon maksa makrofaagidega käivitab reaktsioonide kaskaadi, mis põhinevad maksarakkude tootmisel ja vabanemisel. tsütokiinide ja muude bioloogiliselt aktiivsete ioonidega vahendajad.

Makro rolli kohta on palju väljaandeidmaksa (LK) mõju bakteriaalse LPS-i omastamisel ja kliirensil, kuid endoteeli interaktsioon teiste mesenhümaalne rakud, eriti perisinusoidne Ito rakkude poolt praktiliselt ei uuritud.

UURIMISE MEETOD

200 g kaaluvatele valgetele isastele rottidele süstiti intraperitoneaalselt 1 ml steriilset soolalahust kõrgelt puhastatud lüofiliseeritud LPS E. coli tüvi 0111 annustes 0,5,2,5, 10, 25 ja 50 mg/kg. Ajavahemikel 0,5, 1, 3, 6, 12, 24, 72 tundi ja 1 nädal eemaldati siseorganid anesteesia all ja pandi puhverdatud 10% formaliini. Materjal sisestati parafiiniplokkidesse. 5 µm paksused lõigud värviti immunohistokeemilinestreptavidiin-biotiin desmiinivastaste antikehade meetodil, α - sile - lihaste aktiin (A-GMA) ja tuumaantigeen hästi prolifereeruvad rakud ( PCNA, " Dako"). Markerina kasutati Desminit perisinusoidneIto rakud, A-GMA - as marker ve müofibroblastid, PCNA - prolifereeruvad rakud. Endotoksiini tuvastamiseks maksarakkudes kasutatakse puhastatud anti-Re-glükolipiidantikehad (KDO üld- ja kliinilise patoloogia instituut, Moskva).

UURINGU TULEMUSED

25 mg/kg ja suurema annuse korral täheldati surmavat šokki 6 tundi pärast LPS-i manustamist. LPS-i äge kokkupuude maksakoega põhjustas Ito rakkude aktiveerumise, mis väljendus nende arvu suurenemises. Number desminpositiivne rakud suurenesid 6 tundi pärast LPS-i süstimist ja saavutasid maksimumi ma kuni 48-72 h (joon. 1, a, b).

Riis. 1. Roti maksa lõigud sy, töödeldud LSAB -mina- chennymides-vastased antikehad minu oma(a, b) ja α - sile emakakaela aktiin (c), x400 (aga, b) x200 (c).

a - enne endotoksiini sisseviimistsees, vallaline desminpositiivneIto rakud periportaalses tsoonis; b- 72 tundipärast endotoksiini manustamist kohta: arvukalt desminpositiivne Ito rakud; sisse- 120 tundi pärast en dotoksiin: α - Sujuv muskel ainult aktiin on olemasco silelihasrakkudes kah laevad.

Aastal 1 nädala number desminpositiivne rakud vähenesid, kuidoli võrdlusalustest kõrgem. Kell Sel juhul me välimust ei jälginud A-GMA-positiivne rakud siinuses dah maksa. sisemine positiivne A-GMA antikehadega värvimisel kasutatakse silelihasrakkude tuvastamiseksportaaltraktide venoossed veresooned, mis sisaldavad A-GMA-d (joonis 1, sisse). Seetõttu hoolimata Ito rakkude arvu suurenemisest üks kord LPS-i mõju ei too kaasa transformatsiooni ( transdiferentseerumine) need müofibroblastideks.

Riis. 2. Maksa lõigudrotid, ravitud LSAB - märgistatud antikehad PCNA. a - enne en kasutuselevõttu dotoksiin: üksikprolifereeruvad geenid patotsüüdid, x200; b - 72 tundi pärast endotoksiini sisestamist: arvukalt prolifereeruvaid hepatotsüüte, x400.

Kasvav kogus desminpositiivne rakud algasid portaali tsoonis. 6 tundi kuni 24 tundi pärast LPS-i manustamist perisinusoidne rakke leiti ainult portaaltraktide ümbrusest, st. 1. aci tsoonis noosa. Ajal 48-72 tundi, kui mooni vaadeldimaksimaalne kogus desminpositiivne liim praegune, ilmnesid need ka teistes acinuse tsoonides; sellest hoolimata asus enamik Ito rakke endiselt periportaalselt.

Võib-olla on see tingitud asjaolust, et periportaalseltasuvad CC-d on esimesed, kes hõivavad endotoksiin, mis pärineb soolestikust portaalveeni kaudu või süsteemsest vereringest. Ak tiveeritud QC toodavad laias valikus tsütokiinid, mis arvatakse käivitavat Ito rakkude aktivatsiooni ja transdiferentseerumine need müofibroblastideks. Ilmselgelt on see põhjus, miks aktiveeritud maksa makrofaagide lähedal (acinuse 1. tsoonis) asuvad Ito rakud reageerivad esimesena tsütokiinide vabanemisele. Kuid me ei jälginud neid oma uuringus. transdiferentseerumine sisse müofibroblastid ja see viitab sellele, et CK ja hepatotsüütide poolt sekreteeritud tsütokiinid võivad olla juba alanud protsessi toetav tegur. transdiferentseerumine, kuid tõenäoliselt ei suuda nad seda käivitada maksa ühekordse kokkupuutega LPS-iga.

Rakkude proliferatiivse aktiivsuse suurenemist täheldati ka peamiselt acinuse 1. tsoonis. See tähendab ilmselt, et kõik (või peaaegu kõik) protsessid on suunatud välja umbes- ja rakkudevaheliste interaktsioonide parakriinne reguleerimine, jätkake periportaalsetes tsoonides. 24 tundi pärast LPS-i manustamist täheldati prolifereeruvate rakkude arvu suurenemist; positiivsete rakkude arv tõusis kuni 72 tunnini (maksimaalne proliferatiivne aktiivsus, joonis 2, a, b). Nii hepatotsüüdid kui ka sinusoidrakud vohasid. Küll aga värvimine PCNA ei anna võime tuvastada proliferi tüüpi sinusoidsete rakkude juhtimine. Kirjanduse andmetel põhjustab endotoksiini toime suurenemist QC number. Nad arvavad, et see on umbes tuleneb nii maksa makrofaagide proliferatsioonist kui ka monotsüütide migratsioonist teistest elunditest. CK poolt vabastatud tsütokiinid võivad suurendada Ito rakkude proliferatsioonivõimet. Seetõttu on loogiline eeldada, et prolifereeruvaid rakke esindab perisinusoidne Ito rakud. Nende arvukuse suurenemine meie poolt on ilmselt vajalik kasvufaktorite sünteesi suurendamiseks ja rakuvälise maatriksi taastamiseks kahjustuse tingimustes. See võib olla üks lülidest maksa kompenseerivates-regeneratiivsetes reaktsioonides, kuna Ito rakud on rakuvälise maatriksi, tüvirakufaktori ja hepatotsüütide kasvufaktori komponentide peamine allikas, mis osalevad parandamises ja diferentseerumises. rovka maksa epiteelirakud. Puudub sama Ito rakkude muundumine müofibroblastid näitab, et ühest endotoksiini agressiooni episoodist ei piisa maksafibroosi tekkeks.

Seega äge kokkupuude endotokiga sina põhjustab arvu suurenemist desminpositiivne Ito rakud, mis on kaudne märk maksakahjustusest. Kogus perisinusoidne rakkude arv suureneb ilmselt nende vohamise tulemusena. Üks endotoksiini agressiooni episood põhjustab pöördumise minu aktiveerimine perisinusoidne Ito rakud ja ei vii selleni transdiferentseerumine müofibroblastidesse. Sellega seoses võib eeldada, et aktiveerimismehhanismides ja transdiferentseerumine Ito rakkudes ei osale mitte ainult endotoksiin ja tsütokiinid, vaid ka mõned muud rakkudevahelise interaktsiooni tegurid.

KIRJANDUS

1. Mayansky D.N., Wisse E., Decker K. // Uued piirid hepatoloogia. Novosibirsk, 1992.

2. Salahhov I.M., Ipatov A.I., Konev Yu.V., Jakovlev M.Yu. // Edu kaasaegne, biol. 1998. Vol. 118, Issue . 1. S. 33-49.

3. Jakovlev M. Yu. // Kaasan . m ühikut ajakiri 1988. nr 5. S. 353-358.

4. Freudenberg N., Piotraschke J., Galanos C. et al. // Virchows Arch. [b]. 1992. aasta. Vol. 61.P. 343-349.

5. Gressner A. M. // Hepatogastroneroloogia. 1996 kd. 43. Lk 92-103.

6. Schmidt C, Bladt F., Goedecke S. et al. // Loodus. 1995 kd. 373, nr 6516. Lk 699-702.

7. tark E., Braet F., Luo D. et al. // Toksikool. Pathol. 1996. aastal. Vol. 24, nr 1. Lk 100-111.

Märksõnad

MAKS / ITO STAR CELLS/ MORFOLOOGIA / OMADUSED / A-VITAMIIN / FIBROOS

annotatsioon teaduslik artikkel fundamentaalmeditsiini kohta, teadusliku töö autor - Tsyrkunov V.M., Andreev V.P., Kravchuk R.I., Kondratovich I.A.

Sissejuhatus. Ito stellaatrakkude (ISC) rolli määratletakse kui üht juhtivat rolli fibroosi tekkes maksas, kuid kliinilises praktikas kasutatakse ITO-de struktuuri in vivo visualiseerimist minimaalselt. Töö eesmärk: esitleda HCI struktuurseid ja funktsionaalseid omadusi, tuginedes intravitaalsete maksa biopsia proovide tsütoloogilise tuvastamise tulemustele. Materjalid ja meetodid. Kasutati klassikalisi biopsiaproovide valgus- ja elektronmikroskoopia meetodeid ning originaaltehnikaid, kasutades üliõhukesi lõike, fikseerimist ja värvimist. Tulemused. Kroonilise C-hepatiidiga patsientide maksa biopsiaproovide valgus- ja elektronmikroskoopia fotode illustratsioonid näitavad HSC-de struktuurseid omadusi erinevatel etappidel (puhkus, aktiveerimine) ja müofibroblastideks muutumise protsessis. Järeldused. HCI kliinilise morfoloogilise tuvastamise ja funktsionaalse seisundi hindamise originaalmeetodite kasutamine parandab maksafibroosi diagnoosimise ja prognoosimise kvaliteeti.

Seotud teemad teaduslikud tööd fundamentaalmeditsiini kohta, teadustöö autor - Tsyrkunov V.M., Andreev V.P., Kravchuk R.I., Kondratovitš I.A.

• Maksa kliiniline tsütoloogia: Kupfferi rakud

  2017 / Tsyrkunov V.M., Andreev V.P., Kravchuk R.I., Prokopchik N.I.

• Maksa siirdatud autoloogsete mesenhümaalsete tüvirakkude morfoloogiliste mõjude jälgimine viirusliku tsirroosi korral (kliiniline vaatlus)

  2018 / Aukashnk S.P., Alenikova O.V., Tsyrkunov V.M., Isaykina Ya.I., Kravchuk R.I.

• Maksa kliiniline morfoloogia: nekroos

  2017 / Tsyrkunov V.M., Prokopchik N.I., Andreev V.P., Kravchuk R.I.

• Maksa tähtrakkude polümorfism ja nende roll fibrogeneesis

  2008 / Aidagulova S.V., Kapustina V.I.

• Sinusoidsete maksarakkude struktuur HIV / C-hepatiidi viirusega samaaegselt nakatunud patsientidel

  2013 / Matievskaya N. V., Tsyrkunov V. M., Kravchuk R. I., Andreev V. P.

• Mesenhümaalsed tüvirakud kui paljulubav meetod maksafibroosi/tsirroosi raviks

  2013 / Lukashik S. P., Aleinikova O. V., Tsyrkunov V. M., Isaykina Ya. I., Romanova O. N., Shimansky A. T., Kravchuk R. I.

• Roti maksa müofibroblastide eraldamine ja kultiveerimine eksplantatsiooni teel

  2012 / Miyanovich O., Shafigullina A. K., Rizvanov A. A., Kiyasov A. P.

• Maksafibroosi moodustumise patoloogilised aspektid HCV infektsiooni ja muude maksakahjustuste korral: kaasaegsed kontseptsioonid

  2009 / Lukashik S. P., Tsyrkunov V. M.

• Maksa portaaltraktide struktuuridest eksplantatsiooni teel saadud roti müofibroblastide analüüs

  2013 / Miyanovich O., Katina M. N., Rizvanov A. A., Kiyasov A. P.

• Siirdatud maksa tähtrakud osalevad elundite regenereerimises pärast osalist hepatektoomiat ilma maksafibroosi tekke riskita

  2012 / Shafigullina A. K., Gumerova A. A., Trondin A. A., Titova M. A., Gazizov I. M., Burganova G. R., Kaligin M. S., Andreeva D. I., Rizvanov A. A., Mukhammedov A. R., Kiyasov A. P.

sissejuhatus. Ito stellaatrakkude (Hepatic Stellate Cells, HSC) roll on tuvastatud kui üks juhtivaid maksafibroosi arengus, kuid HSC struktuuride intravitaalse visualiseerimise kasutamine kliinilises praktikas on minimaalne. Töö eesmärgiks on intravitaalsete maksa biopsia proovide tsütoloogilise identifitseerimise leidude põhjal esitada HSC struktuurne ja funktsionaalne tunnus. materjalid ja meetodid. Kasutati klassikalisi biopsiaproovide valgus- ja elektronmikroskoopia meetodeid, kasutades üliõhukesi sektsioone, fikseerimist ja värvimist. tulemused. Kroonilise C-hepatiidiga patsientide maksa biopsia proovide HSC struktuursed omadused on esitatud valgus- ja elektronmikroskoopia fotoillustratsioonidel. HSC-sid on kujutatud erinevates etappides (puhkus, aktiveerimine) ja müofibroblastideks transformatsiooni protsessis. Järeldused. HSC kliinilise ja morfoloogilise tuvastamise ja funktsionaalse seisundi hindamise originaalmeetodite kasutamine võimaldab parandada maksafibroosi diagnoosimise ja prognoosimise kvaliteeti.

Teadusliku töö tekst teemal "Kliiniline maksatsütoloogia: Ito stellate rakud"

UDK 616.36-076.5

MAKSA KLIINILINE TÜTOLOOGIA: ITO stellaatsed rakud

Tsyrkunov V. M. ( [e-postiga kaitstud]), Andrejev V.P. ( [e-postiga kaitstud]), Kravchuk R. I. ( [e-postiga kaitstud]), Kondratovitš I. A. ( [e-postiga kaitstud]) EE "Grodno Riiklik Meditsiiniülikool", Grodno, Valgevene

Sissejuhatus. Ito stellaatrakkude (ISC) rolli määratletakse kui üht juhtivat rolli fibroosi tekkes maksas, kuid kliinilises praktikas kasutatakse ITO-de struktuuri intravitaalset visualiseerimist minimaalselt.

Töö eesmärk: esitleda HCI struktuurseid ja funktsionaalseid omadusi, tuginedes intravitaalsete maksa biopsia proovide tsütoloogilise tuvastamise tulemustele.

Materjalid ja meetodid. Kasutati klassikalisi biopsiaproovide valgus- ja elektronmikroskoopia meetodeid ning originaaltehnikaid, kasutades üliõhukesi lõike, fikseerimist ja värvimist.

Tulemused. Kroonilise C-hepatiidiga patsientide maksa biopsiaproovide valgus- ja elektronmikroskoopia fotode illustratsioonid näitavad HSC-de struktuurseid omadusi erinevatel etappidel (puhkus, aktiveerimine) ja müofibroblastideks muutumise protsessis.

Järeldused. HCI kliinilise morfoloogilise tuvastamise ja funktsionaalse seisundi hindamise originaalmeetodite kasutamine parandab maksafibroosi diagnoosimise ja prognoosimise kvaliteeti.

Märksõnad: maks, Ito stellate rakud, morfoloogia, omadused, A-vitamiin, fibroos.

Sissejuhatus

Enamiku erineva etioloogiaga krooniliste difuussete maksakahjustuste, sealhulgas kroonilise C-hepatiidi (CHC) ebasoodne tagajärg on maksafibroos, mille arengus on peamisteks osalisteks aktiveeritud fibroblastid, mille peamiseks allikaks on aktiveeritud Ito stellaatrakud (SSC). .

HSC, sünonüüm – maksa tähtrakud, rasva säilitavad rakud, perisinusoidsed lipotsüüdid, tähtrakud (inglise Hepatic Stellate Cell, HSC, Cell of Ito, Ito cell). ZKI-d kirjeldas esmakordselt 1876. aastal K. Kupffer ja nimetas ta tähtrakkudeks ("Stemzellen"). Leides neis rasvatilgad, nimetas T. Ito need algul rasva neelavateks ("shibo-sesshusaibo") ja seejärel, olles kindlaks teinud, et rasva toodavad rakud ise glükogeenist, rasvu salvestavatest rakkudest ("shibo" -chososaibo”). 1971. aastal tõestas K. Wake Kupfferi tähtrakkude ja rasvu salvestavate Ito rakkude identsust ning seda, et need rakud "salvestavad" A-vitamiini.

Umbes 80% kehas olevast A-vitamiinist koguneb maksas ja kuni 80% kõigist maksa retinoididest ladestub HKI rasvatilkades. Külomikronite koostises olevad retinoolestrid sisenevad hepatotsüütidesse, kus need muundatakse retinooliks, moodustades A-vitamiini kompleksi retinooli siduva valguga (RBP), mis eritub perisinusoidaalsesse ruumi, kust see ladestub rakkude poolt.

K. Popperi poolt kindlaks tehtud HCI tihe seos maksafibroosiga näitas nende pigem dünaamilist kui staatilist funktsiooni – võimet otseselt osaleda intralobulaarse perihepatotsellulaarse maatriksi ümberkujundamises.

Maksa morfoloogilise uurimise peamine meetod, mida tehakse intravitaalsete biopsiaproovide muutuste hindamiseks, on valgusmikroskoopia, mis võimaldab kliinilises praktikas tuvastada paljunemisaktiivsust.

põletamine ja kroonilisuse staadium. Meetodi puuduseks on madal eraldusvõime, mis ei võimalda hinnata rakkude, rakusiseste organellide, inklusioonide ja funktsionaalseid omadusi. Maksa ultrastruktuursete muutuste intravitaalne elektronmikroskoopiline uurimine võimaldab täiendada valgusmikroskoopia andmeid ja tõsta nende diagnostilist väärtust.

Sellega seoses on maksa HSC-de tuvastamine, nende fenotüübi uurimine transdiferentseerumise protsessis ja nende proliferatsiooni intensiivsuse kindlaksmääramine kõige olulisem panus maksahaiguste tagajärgede ennustamisse, samuti patomorfoloogiasse ja fibrogeneesi patofüsioloogia.

Eesmärk – esitada HCI struktuursed ja funktsionaalsed omadused, mis põhinevad intravitaalsete maksa biopsia proovide tsütoloogilise tuvastamise tulemustel.

materjalid ja meetodid

Intravitaalne maksa biopsia saadi maksa aspiratsioonibiopsiaga CHC (HCV+ RNA) patsientidel, kellelt saadi kirjalik teadlik nõusolek.

Poolõhukeste lõikude valgusmikroskoopia jaoks fikseeriti 0,5 × 2 mm suuruste patsientide maksa biopsiaproovid topeltfiksatsiooniga: esmalt Sato Taizani meetodil, seejärel fikseeriti koeproovid täiendavalt 1 tund 1% osmiumfiksaator, mis on valmistatud 0,1 M fosfaat-Sorenseni puhvriga, pH 7,4. Kaaliumdikromaat (K2Cr207) või kroomanhüdriidi kristallid (1 mg/ml) lisati 1% osmiumtetroksiidile, et paremini paljastada rakusisesed struktuurid ja vaheaine poolõhukeste lõikudes. Pärast proovide dehüdraatimist suureneva kontsentratsiooniga alkoholilahustes ja atsetoonis asetati need butüülmetakrülaadi ja stüreeni eelpolümeriseeritud segusse ning polümeriseeriti temperatuuril 55 °C. Poolõhukesed lõigud (1 µm paksused) värviti järjestikku

taevasinine II-põhifuksiin. Mikrograafid saadi digitaalse videokaamera (Leica FC 320, Saksamaa) abil.

Elektronmikroskoopiline uuring viidi läbi 0,5x1,0 mm suuruste maksa biopsia proovide proovidega, mis fikseeriti 1% osmiumtetroksiidi lahusega 0,1 M Millonigi puhvris, pH 7,4, temperatuuril +40 C 2 tundi. Pärast dehüdraatimist tõusvates alkoholides ja atsetoonis valati proovid araldiiti. Saadud plokkidest valmistati Leica EM VC7 ultramikrotoomis (Saksamaa) poollõigud (400 nm) ja värviti metüleensinisega. Preparaate uuriti valgusmikroskoobi all ja ultrastruktuursete muutuste edasiseks uurimiseks valiti välja ühte tüüpi koht. Üliõhukesed lõigud (35 nm) värviti E. S. Reynoldsi järgi 2% uranüülatsetaadiga 50% metanoolis ja pliitsitraadiga. Elektronmikroskoopilisi preparaate uuriti JEM-1011 elektronmikroskoobiga (JEOL, Jaapan) suurendustega 10 000–60 000 kiirenduspingel 80 kW. Piltide saamiseks kasutati Olympus MegaViewIII digikaamera (Saksamaa) ja iTEM pilditöötlustarkvara (Olympus, Saksamaa) kompleksi.

Tulemused ja arutlus

HSC-d asuvad perisinusoidaalses ruumis (Disse) hepatotsüütide ja endoteelirakkude vahelistes taskutes; neil on pikad protsessid, mis tungivad sügavale hepatotsüütide vahele. Enamikus väljaannetes, mis on pühendatud sellele HSC-de populatsioonile, on esitatud nende skemaatiline esitus, mis võimaldab ainult määrata HSC-de territoriaalset kuuluvust maksas ja nende ümbritsevate "naabrite" suhtes (joonis 1).

HSC-d on endoteelirakkudega tihedas kontaktis mittetäieliku basaalmembraani komponentide ja interstitsiaalsete kollageenkiudude kaudu. Närvilõpmed tungivad SC ja parenhüümirakkude vahele, mistõttu Disse'i ruumi defineeritakse kui ruumi parenhüümirakkude plaatide ja

HCl ja endoteelirakkude kompleks.

Arvatakse, et HSC-d pärinevad areneva maksa põikivaheseina halvasti diferentseerunud mesenhümaalsetest rakkudest. Katse käigus leiti, et vereloome tüvirakud osalevad HSC moodustumisel ja see protsess ei ole tingitud rakkude sulandumisest.

Sinusoidrakud (SC-d), peamiselt HSC-d, mängivad juhtivat rolli igat tüüpi maksa regenereerimisel. Maksa fibroseeriv regenereerimine toimub HSC ja luuüdi tüvirakkude tüvifunktsioonide pärssimise tulemusena. Inimese maksas moodustavad HSC-d 5–15%, olles üks neljast mesenhümaalse päritoluga SC-st: Kupfferi rakud, endoteliotsüüdid ja Pb-rakud. SC kogus sisaldab ka 20-25% leukotsüüte.

HCI tsütoplasmas on rasvhappeid koos retinooli, triglütseriidide, fosfolipiidide, kolesterooli, vabade rasvhapete, a-aktiini ja desmiiniga. ZKI visualiseeritakse kuldkloriidiga värvimise abil. Katses leiti, et HKI teistest müofibroblastidest diferentseerumise marker on nende reeliini valgu ekspressioon.

HSC-d eksisteerivad vaikses ("inaktiivne HSC"), mööduvas ja pikaajalises aktiveeritud olekus, millest igaüht iseloomustab geeniekspressioon ja fenotüüp (α-IgMA, ICAM-1, kemokiinid ja tsütokiinid).

Mitteaktiivses olekus HSC-del on ümar, veidi piklik või ebakorrapärane kuju, suur tuum ja ere visuaalne märk - retinooli sisaldavad lipiidide kandmised (tilgad) (joonis 2).

Lipiiditilkade arv mitteaktiivses HSC-s ulatub 30-ni või rohkem, need on suuruselt lähedased, külgnevad üksteisega, surudes tuuma sisse ja surudes selle perifeeriasse (joonis 2). Väikesed kandmised võivad asuda suurte tilkade vahel. Tilkade värvus sõltub fiksaatorist ja materjali värvist. Ühel juhul on need heledad (joonis 2a), teisel juhul tumerohelised (joonis 2b).

Joonis 1. ICH (stellatecell, perisinusoidal lipocyte) asukoha skeem Disse perisinusoidaalses ruumis (Disse'i ruum), Interneti-ressurss

Joonis 2. - CCI-d, mis on passiivses olekus

a - ümmarguse kujuga HCl, milles on palju heledaid lipiiditilkasid (valged nooled), hepatotsüüte (Hz), millel on hävitatud tsütoplasma (must nool); b - HCl tumedate lipiidipiiskadega tihedas kontaktis makrofaagiga (Mf); a-b - poolõhukesed lõigud. Värvimine taevasinine II - põhiline magenta. Mikropildid. Suurenenud 1000; c - ebakorrapärase kujuga lipiiditilkade rohkusega (üle 30) HCl (magnituud 6000); HCI d-ultrastrukturaalsed komponendid: l-lipiidide tilgad, mitokondrid (oranžid nooled), GRES (rohelised nooled), Golgi kompleks (punane nool), sw. 15 000; c-d - elektronogrammid

Elektronmikroskoopiaga moodustub kerge lipiidsubstraadi taustal osmiofiilsem marginaalne serv (joonis 5a). Enamikus "puhkavates" HSC-des on koos suurte lipiidide inklusioonidega märgatavalt väike kogus tsütoplasmaatilist maatriksit, millel on vähe mitokondreid (Mx) ja granulaarset endoplasmaatilist retikulumit (GRES). Samal ajal on mõõdukalt arenenud Golgi kompleksi sektsioonid selgelt nähtavad 3-4 lameda, veidi laiendatud otstega tsisterni virna kujul (joonis 2d).

Teatud tingimustel omandavad aktiveeritud HSC-d sega- või üleminekufenotüübi, ühendades nii lipiide sisaldavate kui ka fibroblastitaoliste rakkude morfoloogilised tunnused (joonis 3).

HCI üleminekufenotüübil on ka oma morfoloogilised tunnused. Rakk omandab pikliku kuju, lipiidide inklusioonide arv väheneb ja nukleolemma invaginatsioonide arv väheneb. Tsütoplasma maht suureneb, sisaldades arvukalt seotud ribosoomide ja vabade ribosoomidega GRES-i tsisterne, Mx. Esineb lamellaarse Golgi kompleksi komponentide hüperplaasia, mida esindavad mitmed 3-8 lamestatud tsisternist koosnevad virnad, lagunemisel osalevate lüsosoomide arvu suurenemine.

Joonis 3. - ZKI, mis on üleminekuseisundis

a - ZKI (valged nooled). Pooleks lõigatud. Värvimine taevasinine II - põhiline magenta. Mikrograaf. Suurenenud 1000; b - pikliku kujuga ja väikese koguse lipiiditilkadega ZKI; uv. 8000; c - HCI kontaktis Kupfferi rakkude (CC) ja lümfotsüütidega (Lc), SW. 6000. (Hz - hepatotsüüt, l - lipiidide tilgad, E - erütrotsüüt); d - mitokondrid (oranžid nooled), GRES (rohelised nooled), c. Goldji (punane nool), lüsosoomid (sinised nooled), magn. b, c, d - elektronide difraktsioonimustrid

lipiiditilgad (joonis 3d). GRES-i komponentide ja Golgi kompleksi hüperplaasia on seotud fibroblastide võimega sünteesida kollageenimolekule, samuti modelleerida neid translatsioonijärgse hüdroksüülimise ja glükosüülimise teel endoplasmaatilises retikulumis ja Golgi kompleksi elementides.

Terves maksas katavad HCI rahulikus olekus sinusoidse kapillaari oma protsessidega. HCI protsessid jagunevad kahte tüüpi: perisinusoidsed (subendoteliaalsed) ja interhepatotsellulaarsed (joonis 4).

Esimesed lahkuvad raku kehast ja ulatuvad piki sinusoidaalse kapillaari pinda, kattes selle peenikeste sõrmetaoliste okstega. Need on kaetud lühikeste villidega ja neil on iseloomulikud pikad mikroeendid, mis ulatuvad veelgi kaugemale piki kapillaaride endoteeli toru pinda. Interhepatotsellulaarsed väljakasvud, mis on ületanud hepatotsüütide plaadi ja jõudnud naabersinusoidi, jagunevad mitmeks perisinusoidseks väljakasvuks. Seega hõlmab FQI keskmiselt rohkem kui kahte külgnevat sinusoidi.

Maksakahjustusega toimub HSC aktiveerimine ja fibrogeneesi protsess, milles eristatakse 3 faasi. Neid nimetatakse initsiatsiooniks, pikenemiseks ja lahustamiseks (kiulise koe eraldumine). Seda "puhkavate" HSC-de fibroseerivateks müofibroblastideks muutmise protsessi käivitavad tsütokiinid (^-1, ^-6,

Joonis 4. HCI perisinusoidsed (subendoteliaalsed) ja interhepatotsellulaarsed protsessid (väljakasvud)

(a) raku kehast väljuva ZKI (kollased nooled) protsess, uv. 30 000; b - HCI protsess, mis asub piki sinusoidse kapillaari pinda ja sisaldab lipiidide tilka, SW. 30 000; c) HCI subendoteliaalselt paiknevad protsessid. Endoteelirakkude protsessid (roosad nooled); d - HCI hepatotsellulaarne protsess; HCI ja hepatotsüütide membraanide hävimise piirkond (mustad nooled), paistes 10 000. Elektronogrammid

TOT-a), alaoksüdeeritud ainevahetusproduktid, reaktiivsed hapniku liigid, lämmastikoksiid, endoteliin, trombotsüüte aktiveeriv faktor (PDGF), plasminogeeni aktivaator, transformeeriv kasvufaktor (TGF-1), atseetaldehüüd ja paljud teised. Otsesed aktivaatorid on oksüdatiivse stressi seisundis olevad hepatotsüüdid, Kupfferi rakud, endoteliotsüüdid, leukotsüüdid, tsütokiine tootvad trombotsüüdid (parakriinsed signaalid) ja ZKI ise (autokriinne stimulatsioon). Aktiveerimisega kaasneb uute geenide ekspressioon (töösse kaasamine), rakuvälise maatriksi tsütokiinide ja valkude süntees (I, III, Y tüüpi kollageenid).

Selles etapis saab HSC-de aktiveerimise protsessi lõpule viia, stimuleerides HSC-des põletikuvastaste tsütokiinide moodustumist, mis pärsivad TOT-a tootmist makrofaagide poolt kahjustatud piirkonnas. Selle tulemusena väheneb järsult HSC-de arv, need läbivad apoptoosi ja fibroosiprotsessid maksas ei arene.

Teises faasis (pikaajaline), pikaajalise konstantse parakriinse ja autokriinse kokkupuutega aktiveerivate stiimulitega, "säilitatakse" HSC-s aktiveeritud fenotüüp, mida iseloomustab HSC muundumine kontraktiilseteks müofibroblastilaadseteks rakkudeks, mis sünteesivad rakuvälist fibrillaarset kollageeni.

Aktiveeritud fenotüüpi iseloomustavad proliferatsioon, kemotaksis, kontraktiilsus, retinoidivarude kadu ja müofibroblastilisi rakke meenutavate rakkude moodustumine. Aktiveeritud HSC-d näitavad ka uute geenide, nagu a-SMA, ICAM-1, kemokiinide ja tsütokiinide, suurenenud taset. Rakkude aktiveerimine näitab fibrogeneesi varajase staadiumi algust ja eelneb ECM-valkude suurenenud tootmisele. Saadud kiulised koed remodelleeritakse maatriksi lõhustumise tõttu maatriksi metalloproteinaaside (maatriksmetaloproteinaaside – MMP) abil. Maatriksi lagunemist omakorda reguleerivad MMP-de koeinhibiitorid (maatriksi metaloproteinaaside koe inhibiitorid – TIMP-d). MMP-d ja TIMP-d on tsingist sõltuva ensüümide perekonna liikmed. MMP-d sünteesitakse HSC-des inaktiivsete proensüümidena, mis aktiveeruvad propeptiidi lõhustamisel, kuid inhibeeritakse interaktsioonil endogeensete TIMP-de, TIMP-1 ja TIMP-2-ga. HSC-d toodavad 4 tüüpi membraanitüüpi MMP-sid, mida aktiveerib IL-1 p. MMP-de hulgas on eriti oluline MMPs-9, neutraalne maatriksi metalloproteinaas, millel on aktiivsus nii 4. tüüpi kollageeni vastu, mis on osa basaalmembraanist, kui ka osaliselt denatureeritud 1. ja 5. tüüpi kollageenide vastu.

HCI populatsiooni suurenemist erinevat tüüpi maksakahjustustega hinnatakse paljude mitogeensete tegurite, nendega seotud türosiinkinaasi retseptorite ja muude tuvastatud mitogeenide aktiivsuse järgi, mis põhjustavad HKI kõige tugevamat proliferatsiooni: endoteliin-1, trombiin, FGF. fibroblastide kasvufaktor, PDGF - endoteeli kasvufaktori veresooned, IGF - insuliinitaoline kasvufaktor. HSC-de akumuleerumine maksakahjustusega piirkondades ei toimu mitte ainult nende rakkude proliferatsiooni tõttu, vaid ka nende suunatud migratsiooni tõttu nendesse tsoonidesse kemotaksise toimel kemoatraktantide nagu PDGF ja leukotsüütide kemoatraktant-MCP (monotsüüdi kemotaktiline valk-) osalusel. 1) .

Aktiveeritud HSC-des väheneb lipiidide tilkade arv 1-3-ni nende asukohaga raku vastaspoolustel (joonis 5).

Aktiveeritud HSC-d omandavad pikliku kuju, tsütoplasma olulised alad on hõivatud Golgi kompleksiga ja paljastatakse üsna palju GRES-i tsisterneid (valgusünteesi indikaator ekspordiks). Teiste organellide arv väheneb: leitakse vähe vabu ribosoome ja polüsoome, üksikuid mitokondreid ja ebaregulaarseid lüsosoome (joonis 6).

2007. aastal nimetati HSC-d esmakordselt maksa tüvirakkudeks, kuna need ekspresseerivad ühte hematopoeetiliste mesenhümaalsete tüvirakkude markeritest CD133.

Joonis 5. - CCI-d aktiveeritud olekus

a, b - HCI (sinised nooled) üksikute lipiidide kandmistega, mis paiknevad tuuma vastaspoolustel. Perisinusoidne sidekude (joonis 6a) ja rakkudevaheline maatriksikiht hepatotsüütide ümber (joonis 6b) on värvunud punaseks. Tsütotoksilised lümfotsüüdid (lillad nooled). Endoteelirakk (valge nool). Tihe kontakt plasmaraku (punane nool) ja hepatotsüütide vahel. Poolõhukesed lõiked. Värvimine taevasinine II - põhiline magenta. Mikropildid. Suurenenud 1000 ; c, d - HCI ultrastruktuursed komponendid: mitokondrid (oranžid nooled), Golgi kompleks (punane nool), selle osmiofiilsema cis-küljega tsisternad, mis on suunatud granulaarse endoplasmaatilise retikulumi laiendatud elemendid (rohelised nooled), lüsosoom (sinine nool) (magn vastavalt 10 000 ja 20 000); c, d - elektronide difraktsioonimustrid

Müofibroblastidel, mis normaalses maksas puuduvad, on kolm potentsiaalset allikat: esiteks maksa emakasisese arengu ajal ümbritsevad müofibroblastid portaaltraktides veresooni ja sapijuhasid nende küpsemise ajal ning pärast maksa täielikku arengut nad kaovad. ja on portaaltraktides asendatud portaali fibroblastidega; teine ​​- maksakahjustusega, moodustuvad need portaal-mesenhümaalsete rakkude ja puhke-HSC-de tõttu, harvemini epiteeli-mesenhümaalsete üleminekurakkude tõttu. Neid iseloomustab CD45-, CD34-, Desmin+, gliafibrillaarne valk, mis on seotud (GFAP)+ ja Thy-1+-ga.

Hiljutised uuringud on näidanud, et hepatotsüüdid, kolangiotsüüdid ja endoteelirakud võivad muutuda müofibroblastideks epiteeli või endoteeli-mesenhümaalse ülemineku (EMT) kaudu. Need rakud hõlmavad markereid, nagu CD45-, albumiin+ (st hepatotsüüdid), CD45-, CK19+ (st kolangiotsüüdid) või Tie-2+ (endoteelirakud).

Joonis 6. - HSC kõrge fibrootiline aktiivsus

a, b - müofibroblast (Mfb), rakk sisaldab suurt tuuma, GRES-i elemente (punased nooled), arvukalt vabu ribosoome, polümorfseid vesiikuleid ja graanuleid, üksikuid mitokondreid ja eredat visualiseerimismärki - aktiini filamentide kimpu tsütoplasmas (kollane). nooled); ära viinud. 12 000 ja 40 000; c, d, e, f - HSC kõrge fibrootiline aktiivsus koos retinoidi sisaldavate lipiidide tilkade säilimisega tsütoplasmas. Arvukad kollageenfibrillide kimbud (valged nooled) säilitasid (a) ja kaotasid (d, e, f) spetsiifilise põikitriibutuse; ära viinud. 25 000, 15 000, 8 000, 15 000. Elektronogrammid

Lisaks võivad fibrotsüütidest ja ringlevatest mesenhümaalrakkudest koosnevad luuüdi rakud muutuda müofibroblastideks. Need on CD45+ (fibrotsüüdid), CD45+/- (tsirkuleerivad mesenhümaalsed rakud), kollageen tüüp 1+, CD11d+ ja MHC klass 11+ (joonis 7).

Kirjanduse andmed ei kinnita mitte ainult tihedat seost ovaalsete rakkude proliferatsiooni ja sinusoidaalsete rakkude proliferatsiooni vahel, vaid ka andmeid HSC võimaliku diferentseerumise kohta maksa epiteeliks, mida nimetati perisinusoidsete rakkude mesenhümaal-epiteeli transformatsiooniks.

Fibrogeense aktivatsiooni seisundis iseloomustab müofibroblastitaolisi HSC-sid koos lipiidide tilkade arvu vähenemise ja järgneva kadumisega fokaalne proliferatsioon (joonis 8), fibroblastitaoliste markerite, sealhulgas silelihaste α-aktiini immunohistokeemiline ekspressioon. ja peritsellulaarsete kollageenfibrillide moodustumine Disse'i ruumides.

Fibroosi arengu faasis muutub maksakoe suurenev hüpoksia põletikueelsete adhesioonimolekulide tüvirakkudes - 1CAM-1, 1CAM-2, VEGF, põletikueelsed - täiendava üleekspressiooni teguriks.

Maksa kanalite eellasrakkude koostoime maksa müofibroblastidega

Müofibroblastilaadsed HSC-d fibrogeense aktivatsiooni olekus.

Joonis 7. – HSC müofibroblastilises aktivatsioonis osalejad

tugevatoimelised kemoatraktandid – M-CSF, MCP-1 (monotsüüdi kemotaktiline valk-1) ja SGS (tsütokiinide vahendatud neutrofiilide kemoatraktant) ja teised, mis stimuleerivad põletikueelsete tsütokiinide moodustumist (TGF-b, PDGF, FGF, PAF, SCF, ET-1) ja parandavad fibrogeneesi protsesse maksas, luues tingimused HSC ja fibrogeneesi protsesside pidevaks aktiveerimiseks.

Mikroskoopilistel preparaatidel väljendub perikapillaarne fibroos perisinusoidse sidekoe ja hepatotsüütide ümbritseva rakkudevahelise maatriksikihi intensiivse punase värvumisena (sageli suremas). Elektronmikroskoopilistel preparaatidel visualiseeritakse fibrootilised muutused kas moodustunud suurte kollageenkiudude fibrillide kimpudena, mis on säilitanud põikitriibutuse, või massiivse kimpudena.

ladestused Disse'i kiulise massi ruumis, mis on paisunud kollageenkiud, mis on kaotanud perioodilise triibutuse (joonis 9).

Kaasaegsete kontseptsioonide kohaselt on fibroos dünaamiline protsess, mis võib progresseeruda ja taanduda (joonis 10).

Hiljuti on pakutud välja mitmeid spetsiifilisi ICD markereid: A-vitamiini (VA) õitsemine lipiidide tilkades, GFAP, p75 NGF retseptor ja sünaptofüsiin. Tehakse uuringuid maksa HCI osaluse kohta maksa tüvirakkude proliferatsioonis ja diferentseerumises.

Oleme uurinud retinooli siduva valgu (RBP-4) sisaldust, mis moodustab VA-ga kompleksi, mille kontsentratsioon vereplasmas on tavaliselt korrelatsioonis organismi varustatusega VA-ga, millest 80% on HCI-s. .

Sisu omavaheline suhe

Joonis 8. HSC fokaalne proliferatsioon fibrogeense aktivatsiooni seisundis

a - HCI hüperplaasia (valged nooled) laienenud sinusoidide luumenis; b - transdiferentseerunud HSC-de (valged nooled), endoteelirakkude (roosa nool) proliferatsioon. Poolõhukesed lõiked. Värvimine taevasinine II - põhiline magenta. Mikropildid. Suurenenud 1000

Joonis 9. – HSC müofibroblastilise aktivatsiooni viimane etapp

a, b - perisinusoidne fibroos (valged nooled). Peri-sinusoidne sidekude ja hepatotsüütide (b) ümbritsev rakkudevaheline maatriksikiht värvitakse aluselise fukssiiniga punaseks. HSC-d aktiveeriti ja muudeti fibroblastideks (sinised nooled). Hz joonisel fig. a - hävitatud tsütoplasmaga hepatotsüüt. Poolõhukesed lõiked. Värvimine taevasinine II - põhiline magenta. Mikropildid. Suurenenud 1000; c, d - perisinusoidne ja perihepatotsellulaarne fibroos maksasagaras, kollageenkiudude fibrillide elektrontiheduse suurenemine; mitokondriaalse maatriksi kondenseerumine hepatotsüütides (oranž nool). Suurendage vastavalt 8000 ja 15 000. elektronogrammid

Tabel 1. RBP-4 sisalduse näitajad erineva etioloogiaga maksatsirroosi (LC) ja kroonilise hepatiidi (CH) patsientidel, ng/ml (M±m)

Rühm n M±m p

Maksatsirroos 17 23,6±2,29<0,05

CG, ASAT norm 16 36,9±2,05* >0,05

CG, ASAT >2 normi 13 33,0±3,04* >0,05

CG, ALT norm 13 37,5±3,02* >0,05

CG, ALT >2 normi 21 35,9±2,25* >0,05

Kontroll 15 31,2±2,82

Märkus: p - olulised erinevused kontrolliga (lk<0,05); * - достоверные различия между ЦП и ХГ (р<0,05)

Valesagar, mida ümbritseb kiuline vaheseina koos kiulise vaheseinaga. Värvimine Masso järgi - valesagara ring. Värvimine vastavalt u.Uv.x50 Massonile. Suurenda x200

Joonis 10. Sündmuste dünaamika viirusliku tsirroosiga patsiendi valesagaras 6 kuud pärast autoloogsete mesenhümaalsete tüvirakkude siirdamist maksa

Söön RBP-4 ja fibroosi (tsirroosi) 4. staadiumi, erinevalt kroonilisest hepatiidist, mille puhul sellist sõltuvust ei täheldatud, sõltumata põletiku aktiivsuse biokeemilistest markeritest maksas.

Seda asjaolu tuleb arvestada asendusravi põhjendamisel VA vaeguse kõrvaldamiseks organismis, mille põhjuseks võib olla IKT potentsiaali ammendumine seoses fibroosi progresseerumisega maksas.

1. HCI struktuurse ja funktsionaalse seisundi hindamise maksimaalse efektiivsuse tagab intravitaalse biopsia proovi morfoloogiline uuring, kasutades samaaegselt rakkude visualiseerimise tehnikate kompleksi (valgus, üliõhukeste lõikude elektronmikroskoopia ja originaalsed meetodid). fikseerimine ja värvimine).

2. HCI morfoloogilise uuringu tulemused võimaldavad parandada fibroosi in vivo diagnoosimise kvaliteeti, jälgida seda ja ennustada krooniliste difuussete maksakahjustuste tagajärgi kaasaegsel kõrgemal tasemel.

3. Morfoloogiliste järelduste tulemused võimaldavad arstil lõpliku diagnoosi vormistamisel lisada ravi käigus täiendavalt täpsustatud andmeid kroonilisuse staadiumi (fibroosi stabiliseerumine, progresseerumine või taandumine) kohta.

Kirjandus

1. Ivashkin, V. T. Pre-fibrootiliste muutuste kliinilised sümptomid: Ülevenemaalise sisehaiguste spetsialistide Interneti-kongressi loengu stenogramm / V. T. Ivashkin, A. O. Bueverov // INTERNIST: National Internet Society of Internal Medicine Specialists. - 2013. - Juurdepääsurežiim: http://sisearst. ru/publications/detail/6569/. - tutvumise kuupäev: 21.11.2016.

2. Kiyasov, A. P. Ovaalsed rakud – oletatavad maksa tüvirakud või hepatoblastid? / A. P. Kiyasov, A. A. Gumerova, M. A. Titova // Rakutransplantoloogia ja koetehnoloogia. - 2006. - V. 2, nr 4. - S. 55-58.

1. Ivashkin, VT Klinitšeskaja sümptomid dofibroticheskih izmenenij: stenogramma lekcii Vserossijskogo Internet-Kongressa specialistov po vnutrennim boleznyam / VT Ivashkin, AO Bueverov // INTERNIST: Nacional "noe Internet-Obshchestrenni 3 po. ru/publications/detail/6569/ - Andmeid vaadatud: 21.11.2016.

2. Kiyasov, AP Oval "nye kletki - predpolagaemye stvolovye kletki pecheni või gepatoblasty? / AP Kiyasov, AA Gumerova, MA Titova // Kletochnaya transplantologiya i tkanevaya inzheneriya. - 2006. - T. 5 ., S. 5 . - 58.

3. Sinusoidsete maksarakkude ja luuüdirakkude rollist terve ja kahjustatud maksa regeneratiivse strateegia tagamisel / A. V. Lundup [et al.] // Transplantoloogia ja tehisorganite bülletään. -2010. - T. XII, nr 1. - S. 78-85.

4. Serov, V. V. Morfoloogilised kriteeriumid etioloogia, aktiivsuse astme ja protsessi staadiumi hindamiseks viirusliku kroonilise B- ja C-hepatiidi korral / V. V. Serov, L. O. Severgina // Patoloogia arhiiv. - 1996. - nr 4. - S. 61-64.

5. Maksa tähtrakkude struktuursed ja funktsionaalsed omadused fibroosi dünaamikas / OA Postnikova [et al.] // Fundamental research. - 2011. - nr 10.

6. Maksa tähtrakkude ultrastruktuurne ja immunohistokeemiline uuring nakkusliku viirusliku geneesi fibroosi ja tsirroosi dünaamikas / G. I. Nepomnyashchikh [et al.] // Eksperimentaalse bioloogia ja meditsiini bülletään. - 2006. - T. 142, nr 12. - S. 681-686.

7. Shcheglev, AI Sinusoidaalsete maksarakkude struktuurilised ja metaboolsed omadused / AI Shcheglev, OD Mishnev // Kaasaegse bioloogia edusammud. - 1991. - V. 3, nr 1. - S. 73-82.

10. Toidus sisalduva retinoidi ja triglütseriidi mõju roti maksa tähtrakkude ja tähtrakkude lipiidide tilkade lipiidide koostisele / H. Moriwaki // J. Lipid. Res. - 1988. - Vol. 29. - R. 1523-1534.

13. Friedman, S. Hepatic fibrosis 2006: Report of the Third AASLD Single Topic Conference / S. Friedman, D. Rockey, B. Montgomery // Hepatology. - 2006. - Vol. 45 lõige 1. - R. 242-249.

18. Iredale, J. P. Maksa täherakkude käitumine maksakahjustuse lahendamisel / J. P. Iredale // Semin. LiverDis. -2001. - Vol. 21 lõige 3. - R. 427-436.

19. Kobold, D. Reeliini ekspressioon maksa tähtrakkudes ja maksakoe parandamise ajal: uudne marker HSC eristamiseks teistest maksa müofibroblastidest / D. Kobold // J. Hepatol. - 2002. - Vol. 36 lõige 5. - R. 607-613.

20. Lepreux, S. Inimese maksa müofibroblastid arengu ajal ja haigused, keskendudes portaalile (müo)

3. O roli sinusoidaalne "nyh kletok pecheni i kletok kostnogo mozga v obespechenii regeneratornoj strategii zdorovoj i povrezhdennoj pecheni / AV Lyundup // Vestnik transplantologii i iskusstvennyh organov. - 2010. - 2010. - 5. 7. 8. 8. .

4. Serov, V. V. Morfologicheskie kriterii ocenki ehtiologii, stepeni aktivnosti i stadii processa pri virusnyh chrononicheskih gepatitah V i S / V. V. Serov, L. O. Severgina // Arhiv patologii.

1996. - nr 4. - S. 61-64.

5. Struktuurne funktsionaalne "naya harakteristika zvezdchatyh kletok pecheni v dinamike fibroza / O. A. Postnikova // Fundamental" nye issledovaniya. - 2011. - nr 10. - C. 359-362.

6. Ul "trastrukturnoe i immunogistohimicheskoe issledovanie zvezdchatyh kletok pecheni v dinamike fibroza i cirroza pecheni infekcionno-virusnogo geneza / GI Nepomnyashchih // Byulleten" ehk eksperimentaalne "noj. bioyi i mediciny. - - 20 i mediciny. 681-686.

7. SHCHeglev, A. I. Strukturno-metabolicheskaya harakteristika sinusoid "nyh kletok pecheni / A. I. SHCHeglev, O. D. Mishnev // Uspekhi sovremennoj biologii. - 1991. - T. 3, No. 1. - S. 8.

8. CD34 maksa tähtrakud on eellasrakud / C. Kordes // Biochem., Biophys. Res. Levinud. - 2007. -Kd. 352 lõige 2. - Lk 410-417.

9. Maatriksvalkude lagunemine maksafibroosi korral / M. J. Arthur // Pathol. Res. Harjuta. - 1994. - Vol. 190(9-10).

10. Toidus sisalduva retinoidi ja triglütseriidi mõju roti maksa tähtrakkude ja tähtrakkude lipiidide tilkade lipiidide koostisele / H. Moriwaki // J. Lipid. Res. - 1988. - Vol. 29. - R. 1523-1534.

11. Loote maks koosneb epiteeli-mesenhümaalse ülemineku rakkudest / J. Chagraoni // Veri. - 2003. - Vol. 101. - Lk 2973-2982.

12. Bioloogiliste proovide fikseerimine, dehüdratsioon ja kinnistamine / A. M. Glauert // Praktilised meetodid elektronmikroskoopias. - New York: Am. Elsevier, 1975. - Vol. 3, 1. osa.

13. Friedman, S. Hepatic fibrosis 2006: Report of the Third AASLD Single Topic Conference / S. Friedman, D. Rockey, B. Montgomery // Hepatology. - 2006. - Vol. 45 lõige 1. - R. 242-249.

14. Gaga, M. D. Inimese ja ratapaatilised täherakud toodavad tüvirakufaktorit: võimalik mehhanism nuumrakkude värbamiseks maksafibroosi korral / M. D. Gaga // J. Hepatol. - 1999. - Vol. 30, nr 5. - Lk 850-858.

15. Glauert, A. M. Araldiit elektronmikroskoopia sisestuskeskkonnana / A. M. Glauert, R. H. Glauert // J. Biophys. Biochem. Cytol. - 1958. - Vol. 4. - Lk 409-414.

16. Maksa tähtrakud ja portaalfibroblastid on peamised kollageenide ja lüsüüloksüdaaside allikad normaalses maksas ja varakult pärast vigastust / M. Perepelyuk // Am. J Physiol. seedetrakt. Maksa füsiool. - 2013. - Vol. 304 lõige 6. - lk 605614.

17. C-hepatiidi viiruse südamik ja mittestruktuursed valgud kutsuvad esile fibrogeenseid toimeid maksa tähtrakkudes / R. Bataller // Gastroenteroloogia. - 2004. - Vol. 126, iss. 2. - Lk 529-540.

18. Iredale, J. P. Maksa täherakkude käitumine maksakahjustuse lahendamisel / J. P. Iredale // Semin. LiverDis. -2001. - Vol. 21 lõige 3. - R. 427-436.

19. Kobold, D. Reeliini ekspressioon maksa tähtrakkudes ja maksakoe parandamise ajal: uudne marker HSC eristamiseks teistest maksa müofibroblastidest / D. Kobold // J. Hepatol. - 2002. - Vol. 36 lõige 5. - R. 607-613.

20. Lepreux, S. Inimese maksa müofibroblastid arengu ajal ja haigused, keskendudes portaal (müo) fibroblastidele / S. Lepreux, A. Desmouliére

fibroblastid / S. Lepreux, A. Desmoulière // Esikülg. füsiool. - 2015. - Juurdepääsuviis: http://dx.doi. org/10.3389/fphys.2015.00173. - tutvumise kuupäev: 31.10.2016.

22. Mesenhümaalsete luuüdist pärinevate tüvirakkude siirdamine HCV-ga seotud maksatsirroosiga patsientidel / S. Lukashyk // J. Clin. Tõlk. Hepatol. - 2014. - Vol. 2, iss. 4. - Lk 217-221.

23. Millonig, G. A. Osmiumtetroksiidi lahuste fosfaatpuhvri eelised fikseerimisel / G. A. Millonig // J. Appl. Füüsika. - 1961. - Vol. 32. - Lk 1637-1643.

Vol. 158. - Lk 1313-1323.

Vol. 24. - Lk 205-224.

29. Querner, F. Der mikroskopische Nachweis von Vitamin Aimamanimalen Gewebe. Zur Kenntnis der paraplasmatischen Leberzellen-einschlüsse. Dritte Mitteilung / F. Querner // Klin. Wschr. - 1935. - Kd. 14. - Lk 1213-1217.

30. Hiljutised arengud müofibroblastide bioloogias: sidekoe ümberkujundamise paradigmad / B. Hinz // Am. J. Pathol. - 2012. - Vol. 180. - Lk 1340-1355.

35. Septu transversum-derived mesothelium põhjustab maksa stellaatrakkude ja perivaskulaarsete mesenhümaalsete rakkude moodustumist hiire maksa arenemisel / K. Asahina // Hepatoloogia. -2011. - Vol. 53.-lk 983-995.

Vol. 50.-lk 66-71.

38. Thabut, D. Intrahepaatiline angiogenees ja sinusoidaalne ümberkujunemine kroonilise maksahaiguse korral: uued sihtmärgid portaalhüpertensiooni raviks? / D. Thabut, V. Shah // J. Hepatol. - 2010. - Vol. 53. - Lk 976-980.

39. Wake, K. Maksa tähtrakud: kolmemõõtmeline struktuur, lokaliseerimine, heterogeensus ja areng / K.

// ees. füsiool. - 2015. - Juurdepääsuviis: http://dx.doi. org/10.3389/fphys.2015.00173. - tutvumise kuupäev: 31.10.2016.

21. Peroksisoomi proliferaatoriga aktiveeritud gamma-retseptori gamma-modulaatprofibrogeensete ja proinflammatoorsete toimete ligandid / F. Marra // Gastroenteroloogia. -2000. - Vol. 119. - Lk 466-478.

22. Mesenhümaalsete luuüdist pärinevate tüvirakkude siirdamine HCV-ga seotud maksatsirroosiga patsientidel / S. Lukashyk // J. Clin. Tõlk. Hepatol. - 2014. - Vol. 2, iss. 4.-R 217-221.

23. Millonig, G. A. Osmiumtetroksiidi lahuste fosfaatpuhvri eelised fikseerimisel / G. A. Millonig // J. Appl. Rüüsika. - 1961. - Vol. 32. - Lk 1637-1643.

24. Varajase vohamise ovaalsete rakkude päritolu ja struktuurne areng roti maksas / S. Paku // Am. J. Hepatol. - 2001.

Vol. 158. - Lk 1313-1323.

25. Müofibroblastide päritolu maksafibroosis / D. A. Brenner // Fibrogenesis Tissue Repair. - 2012. - Vol. 5 varustus 1. - S. 17.

26. Maksa müofibroblastide päritolu ja funktsioonid / S. Lemoinne // Biochim. Biophys. acta. - 2013. - Vol. 1832(7). - Lk 948-954.

27. Pinzani, M. PDGF ja signaaliülekanne maksa tähtrakkudes / M. Pinzani // Front. biosci. - 2002. - Vol. 7. - Lk 1720-1726.

28. Popper, H. A-vitamiini jaotumine kudedes fluorestsentsmikroskoopia abil / H. Popper // Physiol. Rev. - 1944.

Vol. 24.-R 205-224.

29. Querner, F. Der mikroskopische Nachweis von Vitamin Aimamanimalen Gewebe. Zur Kenntnis der paraplasmatischen Leberzellen-einschlüsse. Dritte Mitteilung / F. Querner // Klin. Wschr. - 1935. - Kd. 14. - R. 1213-1217.

30. Hiljutised arengud müofibroblastide bioloogias: sidekoe ümberkujundamise paradigmad / B. Hinz // Am. J. Pathol. - 2012. - Vol. 180. - R. 1340-1355.

31. Reynolds, E. S. Pliitsitraadi kasutamine kõrge pH juures elektronmikroskoopias läbipaistmatu peitsina / E. S. Reynolds // J. Cell. Biol. - 1963. - Vol. 17. - Lk 208-212.

32. Safadi, R. Maksa fibrogeneesi immuunstimulatsioon CD8 rakkude poolt ja hepatotsüütidest pärineva transgeense interleukiin-10 nõrgenemine / R. Safadi // Gastroenteroloogia. - 2004. - Vol. 127 lõige 3. - Lk 870-882.

33. Sato, T. Pikemaks perioodiks fosfaatpuhverdatud formaliinis fikseeritud proovi elektronmikroskoopiline uuring / T. Sato, I. Takagi // J. Electron Microsc. - 1982. - Vol. 31, nr 4. - Lk 423-428.

34. Senoo, H. A-vitamiini säilitavad rakud (tähtrakud) / H. Senoo, N. Kojima, M. Sato // Vitam. Horm. - 2007. - Vol. 75.

35. Septu transversum-derived mesothelium põhjustab maksa stellaatrakkude ja perivaskulaarsete mesenhümaalsete rakkude moodustumist hiire maksa arenemisel / K. Asahina // Hepatoloogia. -2011. - Vol. 53.-R 983-995.

36. Stanciu, A. Uued andmed ITO rakkude kohta / A. Stanciu, C. Cotutiu, C. Amalinei, Rev. Med. Chir. soc. Med. Nat. Iasi. -2002. - Vol. 107, nr 2. - Lk 235-239.

37. Suematsu, M. Professor Toshio Ito: selgeltnägija peritsüütide bioloogias / M. Suematsu, S. Aiso // Keio J. Med. - 2000.

Vol. 50.-R 66-71.

38. Thabut, D. Intrahepaatiline angiogenees ja sinusoidaalne ümberkujunemine kroonilise maksahaiguse korral: uued sihtmärgid portaalhüpertensiooni raviks? / D. Thabut, V. Shah // J. Hepatol. - 2010. - Vol. 53.-R 976-980.

39. Wake, K. Maksa tähtrakud: kolmemõõtmeline struktuur, lokaliseerimine, heterogeensus ja areng / K. Wake // Proc. Jpn. Acad. Ser. B, Phys. Biol. sci. - 2006. - Vol.

Äratus // Proc. Jpn. Acad. Ser. B, Phys. Biol. sci. - 2006. - Vol. 82 lõige 4. - Lk 155-164.

82 lõige 4. - Lk 155-164.

40. Wake, K. In Cells of the Hepatic sinusoid / K. Wake, H. Senoo // Kupffer Cell Foundation (Rijswijk, Holland). - 1986. - Vol. 1. - Lk 215-220.

41. Watson, M. L. Koelõikude värvimine elektronmikri jaoks raskmetallidega / M. L. Watson // J. Biophys. Biochem. Cyt. - 1958. - Vol. 4. - Lk 475-478.

MAKSA KLIINILINE TSÜTOLOOGIA: SELLE TÄHTERAKUD (MAKSA TÄHERAKUD)

Tsyrkunov V. M, Andreev V. P., Kravchuk R. I., Kandratovitš I. A. Haridusasutus "Grodno Riiklik Meditsiiniülikool", Grodno, Valgevene

sissejuhatus. Ito stellaatrakkude (Hepatic Stellate Cells, HSC) roll on tuvastatud kui üks juhtivaid maksafibroosi arengus, kuid HSC struktuuride intravitaalse visualiseerimise kasutamine kliinilises praktikas on minimaalne.

Töö eesmärgiks on intravitaalsete maksa biopsia proovide tsütoloogilise identifitseerimise leidude põhjal esitada HSC struktuurne ja funktsionaalne tunnus.

materjalid ja meetodid. Kasutati klassikalisi biopsiaproovide valgus- ja elektronmikroskoopia meetodeid, kasutades üliõhukesi sektsioone, fikseerimist ja värvimist.

tulemused. Kroonilise C-hepatiidiga patsientide maksa biopsia proovide HSC struktuursed omadused on esitatud valgus- ja elektronmikroskoopia fotoillustratsioonidel. HSC-sid on kujutatud erinevates etappides (puhkus, aktiveerimine) ja müofibroblastideks transformatsiooni protsessis.

Järeldused. HSC kliinilise ja morfoloogilise tuvastamise ja funktsionaalse seisundi hindamise originaalmeetodite kasutamine võimaldab parandada maksafibroosi diagnoosimise ja prognoosimise kvaliteeti.