A tanninok (tanninok) olyan növényi nagy molekulatömegű fenolos vegyületek, amelyek képesek fehérjéket kicsapni, és fanyar ízűek.
A "tanninok" kifejezés történelmileg alakult ki, köszönhetően annak, hogy ezek a vegyületek az állatok nyers bőrét tartós, nedvességgel és mikroorganizmusokkal szemben ellenálló bőrré alakítják. Ezt a kifejezést, amelyet hivatalosan 1796-ban Seguin javasolt, bizonyos növények kivonataiban olyan anyagok megjelölésére, amelyek alkalmasak a cserzési folyamat végrehajtására.
A barnulás a tanninok és a kollagén molekulák – a kötőszövet fő fehérje – összetett kémiai kölcsönhatása. Barnító tulajdonságokkal rendelkeznek a többmagvú fenolok, amelyek egynél több hidroxilcsoportot tartalmaznak a molekulában. A tannit lapos elrendezésével a fehérjemolekulán stabil hidrogénkötések jönnek létre közöttük:
Fehérje molekula fragmentum Tanid molekula fragmentum
A tannid és a fehérje kölcsönhatásának erőssége a hidrogénkötések számától függ, és a polifenolvegyület molekulájának mérete korlátozza. A tanninok molekulatömege akár 20 000 is lehet, ugyanakkor a tanninokban 100 molekulatömeg egységenként 1-2 fenolos hidroxilcsoport található. Ezért a kialakult hidrogénkötések száma nagy, és a barnulási folyamat visszafordíthatatlan. A külső környezetre orientált hidrofób gyökök hozzáférhetetlenné teszik a bőrt a nedvesség és a mikroorganizmusok számára.
Nem minden tannin képes valódi barnulásra. Az 1000 vagy annál nagyobb molekulatömegű vegyületeket ez a tulajdonság különbözteti meg. Az 1000-nél kisebb tömegű polifenolos vegyületek nem képesek a bőr cserzésére, és csak összehúzó hatásuk van.
A tanninokat széles körben használják az iparban. Elég, ha csak annyit mondunk, hogy a világ tannintermelése meghaladja az évi 1 500 000 tonnát, és a növényi tanninok aránya az összmennyiség 50-60%-át teszi ki.
Elterjedés a növényvilágban és a tanninok szerepe a növényekben. A tanninok széles körben megtalálhatók a fedett és gymnospermek, algák, gombák, zuzmók képviselőiben, limfoidokban és páfrányokban. Számos magasabb rendű növényben megtalálhatók, különösen a kétszikűekben. Legnagyobb számukat a Fabaceae, Myrtaceae, Rosaceae, Anacardiaceae, Fagaceae, Polygonaceae családok számos képviselőjében találták meg.
A növényben található tanninok a sejtvakuólumokban helyezkednek el, és a sejtöregedés során adszorbeálódnak a sejtfalakon. Nagy mennyiségben felhalmozódnak a földalatti szervekben, a kéregben, de lehetnek levelekben és gyümölcsökben.
A tanninok főként védelmi funkciókat látnak el a növényekben. A szövetek mechanikai károsodásával a tanninok intenzívebb képződése indul meg, amelyet a felületi rétegekben oxidatív kondenzáció kísér, ezzel megvédve a növényt a további károsodásoktól és a kórokozók negatív hatásától. A nagy mennyiségű fenolos hidroxilnek köszönhetően a tanninok kifejezett bakteriosztatikus és gombaölő tulajdonságokkal rendelkeznek, ezáltal megvédik a növényi szervezeteket a különböző betegségektől.
A tanninok osztályozása. 1894-ben G. Procter a tanninok pirolízisének végtermékeit tanulmányozva 2 vegyületcsoportot fedezett fel - pirogallikust (pirogallol képződik) és pirokatecholt (bomlás során pirokatekol képződik):
K. Freudenberg 1933-ban pontosította G. Procter osztályozását. Procterhez hasonlóan a tanninokat bomlásuk végtermékei szerint osztályozta, de nem pirolízis körülményei között, hanem savas hidrolízissel. A hidrolízis képességétől függően K. Freudenberg a tanninok két csoportjának megkülönböztetését javasolta: hidrolizálható és kondenzálható. Jelenleg K. Freudenberg osztályozását használják gyakrabban.
A csoporthoz hidrolizálható tanninok A vegyületeket az észterek típusának megfelelően állítják elő, és a savas hidrolízis során komponenseikre bomlanak. A központi lánc leggyakrabban glükóz, ritkábban más cukrok vagy aliciklusos vegyületek (például kininsav). A központi maradék alkoholos hidroxilcsoportjai galluszsavval éterkötéssel kapcsolódhatnak, így csoportot képeznek gallotanninok, vagy ellagsav, csoportot alkotva ellagitanninok.
Gallotanninok- galluszsav észterei, leggyakrabban a hidrolizálható tanninok csoportjában találhatók. Léteznek mono-, di-, tri-, tetra-, penta- és polihalogén-éterek. A monogalloil-éterek képviselője a b-D-glukogallin:
A polihalogén-éterek példája a kínai tannin, amelynek szerkezetét először 1963-ban Hawors határozta meg:
Ellagitanninok a cukor és az ellagsav észterei vagy származékai. Az ellagsav két galluszmolekula hexaoxidifensavvá történő oxidációjával képződik, amely azonnal laktont - ellaginsavat képez:
Az előző esethez hasonlóan a glükóz leggyakrabban az ellagitanninok cukorkomponense.
Nem cukor galluszsav-észterek A galluszsav és egy nem cukorkomponens, például kinsav, hidroxi-fahéjsav stb. észterei. Ilyen anyagcsoport például a 3,4,5-trihaloil-kinsav.
Kondenzált tanninok abban különböznek a hidrolizálhatóaktól, hogy a savas hidrolízis során nem bomlanak le alkotóelemeikre, hanem éppen ellenkezőleg, ásványi savak hatására sűrű vörösesbarna polimerizációs termékek - flobafének - keletkeznek.
A kondenzált tanninokat főként katechinek és leukocianidinek, és sokkal ritkábban a flavonoidok egyéb redukált formái képezik. A kondenzált tanninok nem tartoznak a „glikozidok” csoportba: a kondenzált tanninokban nincs cukorkomponens.
A kondenzált tanninok képződése kétféleképpen történhet. K. Freudenberg (XX. század 30-as évei) megállapította, hogy a kondenzált tanninok képződése a katechinek vagy leukocianidinek autokondenzációjának (vagy keresztkondenzációjának) nem enzimatikus folyamata a légköri oxigén, hő és savas környezet hatására. . Az autokondenzáció a katechinek pirángyűrűjének felszakadásával jár, és az egyik molekula C-2 szénatomja szén-szén kötéssel kapcsolódik egy másik molekula C-6 vagy C-8 szénatomjához. Ebben az esetben egy kellően hosszú lánc alakulhat ki:
Egy másik tudós, D. Hatuei szerint kondenzált tanninok képződhetnek a „fejtől farokig” (a gyűrűtől a B gyűrűig) vagy a „faroktól a farokig” (B gyűrűtől B gyűrűig) molekulák enzimatikus oxidatív kondenzációja eredményeként. típusok:
A kondenzált tanninokat tartalmazó növényeknek rendelkezniük kell prekurzoraikkal – szabad katechinekkel vagy leukocianidinek. Gyakoriak a katechinek és leukocianidinek vegyes kondenzált polimerei.
A növényekben általában egyidejűleg vannak jelen a kondenzált és hidrolizálható csoportok tanninjai.
A tanninok fizikai-kémiai tulajdonságai. A tanninokat nagy molekulatömegük jellemzi - akár 20 000. A természetes tanninok néhány kivételtől eltekintve eddig csak amorf állapotban ismertek. Ennek az az oka, hogy ezek az anyagok hasonló kémiai szerkezetű, de molekulatömegükben eltérő vegyületek keverékei.
A tanninok sárga vagy barna vegyületek, amelyek vízben kolloid oldatot képeznek. Oldható etanolban, acetonban, butanolban és oldhatatlan oldószerekben kifejezett hidrofóbsággal - kloroform, benzol stb.
A gallotanninok hideg vízben rosszul, forró vízben pedig viszonylag jól oldódnak.
A tanninok optikai aktivitással rendelkeznek, és levegőn könnyen oxidálódnak.
A fenolos hidroxilok jelenléte miatt nehézfémsókkal kicsapódnak, és Fe +3-mal színes vegyületeket képeznek.
Tanninok izolálása növényi anyagokból. Mivel a tanninok különböző polifenolok keverékei, izolálásuk és elemzésük bizonyos nehézségeket okoz.
Gyakran a teljes tannin eléréséhez a nyersanyagokat forró vízzel extrahálják (a tanninok hideg vízben rosszul oldódnak), és a lehűtött kivonatot szerves oldószerrel (kloroform, benzol stb.) kezelik a lipofil anyagok eltávolítására. Ezután a tanninokat nehézfémek sóival kicsapják, majd a komplexet kénsavval vagy szulfidokkal lebontják.
A kémiai szerkezetben hasonló tanninok frakciójának eléréséhez használhatja a nyersanyagok extrakcióját dietil-éterrel, metil- vagy etil-alkoholokkal, a lipofil komponensek előzetes eltávolításával, kifejezett hidrofób hatású oldószerekkel - petroléter, benzol, kloroform.
Elterjedt a tanninok egyes komponenseinek izolálása ólomsókkal végzett vizes vagy vizes-alkoholos oldatokból történő kicsapással. A keletkezett csapadékot ezután híg kénsavval kezeljük.
A tanninok egyes komponenseinek elkülönítésekor kromatográfiás módszereket alkalmaznak: adszorpciós kromatográfia cellulózon, poliamidon; ioncsere különböző kationcserélőkön; szilikagélen eloszlás; gélszűrés molekulaszitán.
A tanninok egyes komponenseinek azonosítása papíron vagy vékony szorbensrétegben végzett kromatográfiával, spektrális elemzéssel, kvalitatív reakciókkal és a hasadási termékek vizsgálatával történik.
A tanninok minőségi elemzése. A tanninokra adott kvalitatív reakciók két csoportra oszthatók: kicsapódási reakciókra és színreakciókra. A kiváló minőségű reakciók végrehajtásához a nyersanyagokat leggyakrabban forró vízzel vonják ki.
Kicsapódási reakciók. 1. Amikor a tanninok kölcsönhatásba lépnek 10%-os nátrium-klorid-oldatban készített 1%-os zselatin oldattal, csapadék képződik, vagy az oldat zavarossá válik. Ha felesleges zselatint adunk hozzá, a zavarosság eltűnik.
2. A tanidok alkaloidokkal (koffein, pachikarpin), valamint néhány nitrogénbázissal (urotropin, novokain, dibazol) bőséges csapadékot adnak.
3. Ha 10%-os ólom-acetát-oldattal kölcsönhatásba lépnek, a hidrolizálható csoport tanninjai flokkuláló csapadékot képeznek.
4. A kondenzált tanninok brómos vízzel reagálva flokkuláló csapadékot képeznek.
Színes reakciók. A hidrolizálható csoport tanninjai ammónium-vas-timsó oldattal fekete-kék színű vegyületeket képeznek, a kondenzált csoporté pedig fekete-zöld.
Ha a növény egyszerre tartalmaz hidrolizálható és kondenzált csoport tanninjait is, akkor a hidrolizálható tanninokat először 10%-os ólom-acetát-oldattal kicsapják, a csapadékot leszűrik, majd a szűrletet ammónium-vas-timsó oldattal reagáltatják. A sötétzöld szín megjelenése kondenzált csoportos anyagok jelenlétét jelzi.
A tanninok mennyiségi meghatározása. Annak ellenére, hogy a tanninok mennyiségi meghatározására mintegy 100 különböző módszer létezik, a biológiailag aktív anyagok ezen csoportjának pontos kvantitatív elemzése nehéz.
A tanninok mennyiségi meghatározásának széles körben használt módszerei közül a következőket különböztetjük meg.
1. Gravimetriás - a tanninok mennyiségi kicsapásán alapul zselatinnal, nehézfémsókkal stb.
2. Titrimetriás - oxidatív reakciókon alapul, elsősorban kálium-permanganáttal.
3. Fotoelektromos kolorimetriás - a tanninok azon képességén alapul, hogy stabil színű reakciótermékeket képeznek vas-oxid sókkal, foszfovolfrámsavval stb.
A X. és XI. kiadású Állami Gyógyszerkönyv titrimetriás módszert javasolt a tanninok mennyiségi meghatározására.
Tartalomjegyzék
OFS.1.5.3.0008.15 Tannin-tartalom meghatározása gyógynövényi alapanyagokban és gyógynövény-készítményekben
Művészet helyett GF XI
A gyógynövényi alapanyagok és gyógynövénykészítmények tannintartalmának meghatározása titrimetriás és/vagy spektrofotometriás módszerekkel történik. A titrimetriás módszerrel a tanninok mennyiségét tanninban határozzuk meg, a spektrofotometriás módszerrel pedig a tanninok mennyiségét pirogallolban határozzuk meg.
Módszer 1. A tanninok mennyiségének meghatározása tanninban kifejezve
Körülbelül 2 g (pontosan kimért) zúzott gyógynövényi anyagot vagy gyógynövénykészítményt 3 mm-es lyukú szitán átszitáljuk egy 500 ml-es Erlenmeyer-lombikba, 250 ml forrásig melegített vizet öntünk rá és villanytűzhelyen, zárt spirálon visszafolyató hűtő alatt 30 percig főzzük, időszakos keverés mellett. A kapott kivonatot szobahőmérsékletre hűtjük, és vattán keresztül egy 250 ml-es mérőlombikba szűrjük, hogy a nyersanyag / készítmény részecskéi ne kerüljenek a lombikba, és az oldat térfogatát vízzel a jelig hozzuk. és keverjük össze. A kapott vizes kivonat 25,0 ml-ét 1000 ml-es Erlenmeyer-lombikba helyezzük, 500 ml vizet, 25 ml indigoszulfonsav-oldatot adunk hozzá, és folyamatos keverés közben 0,02 M-os kálium-permanganát oldattal aranysárgára titráljuk. színezés.
Ezzel párhuzamosan kontrollkísérletet is végzünk: 525 ml vizet, 25 ml indigoszulfonsav-oldatot helyezünk egy 1000 ml-es Erlenmeyer-lombikba, és 0,02 M-os kálium-permanganát oldattal folyamatos keverés közben aranysárgára titráljuk. színezés.
1 ml 0,02 M kálium-permanganát oldat 0,004157 g tanninnak felel meg tannin tekintetében.
(V – V 1 ) 0,004157 250 100 100
x = ————————————————— ,
a· 25 · (100 - W)
V- a vizes extrakció titrálásához felhasznált 0,02 M kálium-permanganát oldat térfogata, ml;
V 1 - a kontrollkísérletben a titráláshoz felhasznált 0,02 M kálium-permanganát oldat térfogata, ml;
0,004157 - 1 ml 0,02 M kálium-permanganát oldatnak megfelelő tannin mennyisége (tanninban kifejezve), g;
a- a nyersanyagok vagy a növényi gyógyszer tömege, g;
W- gyógynövények vagy gyógynövénykészítmények nedvességtartalma, %;
250 - a vízkivonás teljes térfogata, ml;
25 - titráláshoz vett vízkivonat térfogata, ml.
Jegyzet.Indigoszulfonsav oldat készítése. 1 g indigókármint 25 ml tömény kénsavban feloldunk, majd további 25 ml tömény kénsavat adunk hozzá és vízzel 1000 ml-re hígítjuk, a kapott oldatot óvatosan vízbe öntve egy űrtartalmú mérőlombikban. 1000 ml, keverjük össze.
2. módszer. A tanninok mennyiségének meghatározásapirogallol tekintetében
Egy 250 ml-es Erlenmeyer-lombikba körülbelül 0,5-1,0 g (pontosan kimért vagy a gyógyszerkönyvi monográfiában vagy a szabályozási dokumentációban meghatározott) zúzott gyógynövényi anyagot vagy gyógynövényi készítményt 0,18 mm-es lyukú szitán átszitálva helyezünk. , adjunk hozzá 150 ml vizet és forraljuk visszafolyató hűtő alatt vízfürdőben 30 percig. A kapott vizes kivonatot a lombikban lehűtjük szobahőmérsékletre, vattán átszűrjük egy 250 ml-es mérőlombikba úgy, hogy a nyersanyag részecskéi ne kerüljenek a lombikba, az oldat térfogatát 250 ml-es mérőlombikba szűrjük. a jelet vízzel és összekeverjük. A kapott oldatot körülbelül 125 mm átmérőjű papírszűrőn átszűrjük, a szűrlet első 50 ml-ét kiöntve.
A meghatározást sötét helyen végezzük.
A tanninok mennyiségének meghatározása... A szűrletből 5,0 ml-t 25 ml-es mérőlombikba helyezünk, az oldat térfogatát vízzel jelig töltjük és összekeverjük. Helyezzen 2,0 ml-t a kapott oldatból egy 25 ml-es mérőlombikba, adjon hozzá 1 ml foszfomolibdén-volfrám reagenst, 10 ml vizet, és az oldat térfogatát 10,6%-os nátrium-karbonát-oldattal jelig töltse (vizsgálati oldat). . 30 perc elteltével mérjük meg a vizsgálati oldat (A1) optikai sűrűségét spektrofotométeren 760 nm hullámhosszon 10 mm rétegvastagságú küvettában, referenciaoldatként vizet használva.
A bőrpor által nem adszorbeált tanninok mennyiségének meghatározása. A szűrlet 10,0 ml-éhez 0,1 g bőrport adunk, a kapott keveréket 60 percig keverjük, majd papírszűrőn átszűrjük. A kapott szűrletből 5,0 ml-t 25 ml-es mérőlombikba helyezünk, az oldat térfogatát vízzel jelig töltjük és összekeverjük. Helyezzen 2,0 ml-t a kapott oldatból egy 25 ml-es mérőlombikba, adjon hozzá 1 ml foszfor-polibdén-volfrám reagenst, 10 ml vizet, hígítsa az oldat térfogatát a jelig nátrium-karbonáttal 10,6%-os oldattal és keverje össze (vizsgálati oldat). ). 30 perc elteltével mérjük meg a vizsgálati oldat (A2) optikai sűrűségét spektrofotométeren 760 nm hullámhosszon 10 mm rétegvastagságú küvettában, referenciaoldatként vizet használva.
A standard oldat optikai sűrűségét párhuzamosan mérjük.
25 ml-es mérőlombikba 2,0 ml pirogallol-CO-oldatot teszünk, 1 ml foszfomolibdén-volfrám reagenst, 10 ml vizet adunk hozzá, az oldat térfogatát 10,6%-os oldattal nátrium-karbonát-jelre állítjuk és keverjük. (átlagos megoldás). 30 perc elteltével mérjük meg a standard oldat (A 3) optikai sűrűségét spektrofotométeren 760 nm hullámhosszon 10 mm rétegvastagságú küvettában, referenciaoldatként vizet használva.
A 1- a vizsgálati oldat optikai sűrűsége a tanninok mennyiségének meghatározásakor;
A 2- a vizsgálati oldat optikai sűrűsége a bőrpor által nem adszorbeált tanninok mennyiségének meghatározásakor, pirogallolban számolva;
A 3— standard oldat optikai sűrűsége;
a- gyógynövény-alapanyag vagy gyógynövényi gyógyszer kimért mennyisége, g;
a 0 - pirogallol CRM lemért mennyisége, g;
W- gyógynövények vagy gyógynövénykészítmények nedvességtartalma,%.
jegyzet. Pirogallol CO oldat készítése... 0,05 g (pontosan kimért) pirogallol CO-t 100 ml-es mérőlombikba helyezünk, vízben feloldjuk, az oldat térfogatát vízzel jelig töltjük, és összekeverjük. A kapott oldatból 5,0 ml-t 100 ml-es mérőlombikba helyezünk, az oldat térfogatát vízzel jelig töltjük és összekeverjük. Az oldatot frissen elkészítve használjuk fel.
Bevezetés
A növényekben a biológiailag aktív anyagok (BAS) egyik legelterjedtebb csoportja a tanninok (tanninok), amelyek széles spektrumú farmakológiai aktivitással rendelkeznek.Tanninokvérzéscsillapító, összehúzó, gyulladáscsökkentő, antimikrobiális hatásúak, valamint magas P-vitamin aktivitással, szklerózis- és hipoxiaellenes hatással rendelkeznek. A kondenzált tanninok antioxidánsok és daganatellenes hatásúak. Tanninokglikozidokkal, alkaloidokkal, nehézfémsókkal való mérgezés ellenszereként használják. A gyógyászatban a tanninokat olyan betegségek kezelésére használják, mint szájgyulladás, ínygyulladás, torokgyulladás, mandulagyulladás, vastagbélgyulladás, enterocolitis, vérhas, égési sérülésekre, méh-, gyomor- és aranyérvérzésekre is használják..
A tartalom meghatározásaA tanninok fontos összetevők a tannint tartalmazó növényi anyagok minőségének megállapításában. A tanninok meghatározására többféle módszer létezik, de leggyakrabban titrimetriás és spektrofotometriás módszereket alkalmaznak.
Célkitűzés- a tanninok mennyiségi meghatározására szolgáló módszerek validálása a konvergencia, helyesség, linearitás szempontjából.
Anyagok és kutatási módszerek
A kutatás tárgyaként az alapanyagot - légszáraz füvet - használták.közönséges mandzsetta (Alchemilla vulgaris L.) fam. Rosaceae (Rosaceae).
A légszáraz fű tanninjainak mennyiségi meghatározására szolgáló módszerek validálási értékeléséhezkét módszert választottunk: permanganatometrikus titrálást és spektrofotometriás meghatározást a Folin-Ciocalteu reagenssel végzett reakció alapján. A technikák megválasztását a gyakorlati alkalmazásuk gyakorisága indokolja.
Légszáraz fűközönséges mandzsetta beszerzett 2015 szeptemberében az Arhangelszk régió Primorszkij kerületében, amely a kutatás és a tanninok (tanninok) mennyiségi meghatározásának alapanyaga volt.
A permanganatometrikus meghatározás módszere gyógyszerkönyvi, amely aza tanninok kálium-permanganát oldattal való oxidációs reakcióján alapul.Körülbelül 2 g (pontosan kimért) zúzott nyersanyagot, amelyet 3 mm-es lyukméretű szitán átszitáltunk, 500 ml-es Erlenmeyer-lombikba helyeztünk, 250 ml forrásig melegített vizet adtunk hozzá, és visszafolyatás közben forraltuk. zárt spirállal ellátott elektromos tűzhely 30 percig időszakos keverés mellett. A kapott kivonatot szobahőmérsékletre hűtjük, és egy 250 ml-es Erlenmeyer-lombikot vattán átszűrünk, hogy a nyersanyag részecskéi ne kerüljenek a lombikba. Pipettázzunk 25 ml-t a kapott kivonatból, és vigyük átegy másik, 750 ml-es Erlenmeyer-lombikba, adjunk hozzá 500 ml vizet, 25 ml indigoszulfonsav-oldatot, és folyamatos keverés közben titráljuk kálium-oldattal.permanganát (0,02 mol / l) aranysárga elszíneződésig.
Ezzel párhuzamosan kontrollkísérletet is végeztünk.
1 ml kálium-permanganát-oldat (0,02 mol / l) tannin tekintetében 0,004157 g tanninnak felel meg.
A tannin (X) százalékos arányát abszolút száraz alapanyagra vonatkoztatva az (1) képlettel számítottuk ki:
Hol (1)
V az extrakció titrálásához felhasznált kálium-permanganát-oldat (0,02 mol/l) térfogata, ml;
- a kontrollkísérletben a titráláshoz felhasznált kálium-permanganát oldat térfogata (0,02 mol/l), ml;
0,004157 - 1 ml kálium-permanganát oldatnak (0,02 mol / l) megfelelő tannin mennyisége (tanninban kifejezve), g;
250 - teljes extrakciós térfogat, ml;
25 - a titráláshoz vett extrakció térfogata, ml.
m- alapanyag tömege, g;
W- tömegveszteség a nyersanyagok szárítása során, g;
A tanninok spektrofotometriás kvantitatív meghatározásához a vizsgált növényi anyagból körülbelül 1 g (pontosan kimért) 1 mm-es lyukméretű szitán átmenő szemcseméretűre zúzva egy vékony metszetű Erlenmeyer-lombikba helyeztünk. 50 ml-es űrtartalommal 25 ml aceton-víz elegyet adunk hozzá 7:3 arányban (70%-os acetonos oldat). A lombikot lezárjuk, és 60 percre laboratóriumi keverőbe (LAB PU-2, Oroszország) helyezzük. A kapott extraktumot 50 ml-es mérőlombikba szűrjük, és a térfogatot 70%-os acetonos oldattal (A oldat) a jelig beállítjuk.
Egy 10 ml-es mérőlombikba 1 ml A-oldatot helyeztünk, a lombikban lévő oldat térfogatát tisztított vízzel (B-oldat) a jelig töltjük.
0,5 ml B oldatot 10 ml-es mérőlombikba helyeztünk, 2 ml tisztított vizet, 0,25 ml Folen-Chocalteu reagenst, 1,25 ml 20%-os nátrium-karbonát-oldatot adtunk hozzá, és az oldat térfogatát feltöltöttük jelölje meg vízzel. A lombikot 40 percig fénytől védve hagyjuk állni. Az oldat optikai sűrűségét 750 nm hullámhosszon határoztuk meg. Referenciaoldatként a reagensek extrakció nélküli keverékét használtuk.
A növényi nyersanyagokból származó kivonatok tannintartalmát a kalibrációs grafikon értékeiből számítottuk ki, amelynek elkészítéséhez a CO tannin standard mintájának 0,1 mg / ml-es oldatát használtuk. Ebből a célból egy 100 ml-es mérőlombikba 0,05 g (pontos tömegű) CO-tannint 30 ml vízben feloldottunk, és a lombikban lévő térfogatot a jelig beállítottuk ugyanazzal az oldószerrel (A oldat).
A kapott oldatból 1 ml-t átvittünk egy 10 ml-es mérőlombikba. A lombikban lévő oldat térfogatát a jelig feltöltöttük vízzel (B oldat).
Egy-egy oldatot tartalmazó sorozat; 2; 3; 4; 5 μg/ml CO-tannint állítottunk elő úgy, hogy a B oldat kimért adagjait 10 ml-es mérőlombikokba helyeztük, hozzáadtuk a Folin – Chocalteu reagenst és a 20%-os vizes nátrium-karbonát oldatot, majd a lombikban lévő oldatok térfogatát a jelre állítottuk. víz.
Az oldatokat összekeverjük, a lombikokat lezárjuk és szobahőmérsékleten, fénytől védve 40 percig tartjuk.
A kapott oldatok optikai sűrűségét spektrofotometriásan határoztuk meg 1 cm rétegvastagságú kvarcküvettákban, a referenciaoldathoz viszonyított 725 nm hullámhosszon.
A referenciaoldat reagensek keveréke volt, CO tannin hozzáadása nélkül (B oldat).
A vizsgálatok eredményei alapján felépítettük az optikai sűrűség tanninkoncentrációtól való függésének grafikonját (1. ábra).
A kapott értékeket figyelembe véve a tanninok összegét tanninban a következő képlet szerint számítottuk ki:
, ahol
eredmények
A tanninok titrálással történő mennyiségi meghatározásának eredményeit a táblázat tartalmazza. egy.
1. táblázat A tanninok permanganatometriás kvantitatív meghatározásának eredményei
| A növényi alapanyagok mintatömege, g | A növényi nyersanyagokból nyert kivonat titrálásához felhasznált kálium-permanganát (0,02 mol/l) térfogata, ml | A tanninok mennyisége, % (Xén) | |
|
2,10250 |
15,34892 |
15,72%
|
|
|
2,03255 |
15,21262 |
||
|
2,18345 |
15,84713 |
||
|
2,24350 |
16,24333 |
||
|
2,12465 |
15,85257 |
||
|
2,07055 |
15,80574 |
Az alapanyag tannintartalmának átlagos értéke 15,7% volt. A relatív szórás értékének számított értéke (0,024%), amely nem haladja meg a 2%-ot, amely az eredmények kielégítő konvergenciáját jellemzi.
Az eljárás helyességének megállapítására az összeadás módszerét alkalmaztuk. Ebből a célból 1 ml 0,05%, 0,1% és 0,15% CO tannint adtunk a titráló lombikba, és minden esetben háromszor titráltuk. A vizsgálatok eredményeit a táblázat tartalmazza. 2.
2. táblázat A tanninok permanganatometrikus titrálási módszerének helyességének meghatározása
| A hozzáadott CO tannin mennyisége, g | Nyersanyag tömeg, g | Számított tannin mennyisége, g | Talált mennyiségű tannin, g | Nyitási arány,% | Metrológiai jellemzők |
|
0,0005 |
2,2435 |
0,0357 |
0,0353 |
98,87 |
99,91%
|
|
2,1247 |
0,0339 |
0,0340 |
100,29 |
||
|
2,0706 |
0,0330 |
0,0337 |
102,12 |
||
|
0,001 |
2,2435 |
0,0362 |
0,0357 |
98,61 |
|
|
2,1247 |
0,0344 |
0,0340 |
98,84 |
||
|
2,0706 |
0,0335 |
0,0336 |
100,51 |
||
|
0,0015 |
2,2435 |
0,0367 |
0,0366 |
99,73 |
|
|
2,1247 |
0,0349 |
0,0353 |
101,14 |
||
|
2,0706 |
0,0340 |
0,0337 |
99,12 |
A kapott eredmények azt mutatják, hogy a számított Student-féle együttható kisebb, mint a táblázati érték ésa módszer nem tartalmaz szisztematikus hibát, amiből arra következtethetünk, hogy helyes.
A linearitás vizsgálatához meghatározták a tanninok mennyiségi tartalmának talált értékeinek függését a vizsgált növényi anyag kimért részétől. Ebből a célból a tanninok mennyiségi meghatározását végeztük a közönséges mandzsetta légszáraz nyersanyagának hat kimért, tömegében eltérő részletében (3. táblázat).
3. táblázat: A talált tannintartalom függése a növényi nyersanyag-minta tömegétől permanganatometriával
|
|
A titráláshoz felhasznált kálium-permanganát térfogata, ml |
|
|
2,0706 |
0,3159 |
|
|
3,0013 |
10,8 |
0,4490 |
|
4,0595 |
13,0 |
0,5404 |
|
5,1180 |
15,3 |
0,6360 |
|
6,1385 |
18,2 |
0,7566 |
A vizsgálatok során nyert adatok alapján egy adott tannintartalomnak a vizsgált növényi anyag mintájának tömegétől való függésének grafikonját ábrázoltuk (2. ábra), és kiszámítottuk a korrelációs együtthatót.
Rizs. 2. A talált tanninmennyiség függésének grafikonja a mandzsetta közönséges légszáraz nyersanyag mintájának tömegétől
A számított korrelációs együttható nem haladta meg a 0,95-öt, ami a vizsgált növényi anyag mintájának tömegéből a vizsgált anyagtartalom meghatározásának eredményének linearitását jelzi a jelzett koncentráció-tartományban.
A közönséges mandzsettafű légszáraz alapanyagában a tanninok spektrofotometriás módszerrel történő kvantitatív meghatározásának eredményeit táblázat tartalmazza. 4.
4. táblázat A tanninok spektrofotometriás kvantitatív meghatározásának eredményei
|
A minta tömege, g |
Az oldat optikai sűrűsége |
Talált tannin mennyiség, % (Xén) |
Metrológiai jellemzők |
|
|
1,02755 |
0,5957 |
7,30920 |
7,87340 |
7,84%
|
|
0,99745 |
0,6130 |
7,52147 |
8,34656 |
|
|
1,0068 |
0,5678 |
6,96687 |
7,65932 |
|
|
0,99580 |
0,5742 |
7,04539 |
7,83120 |
|
|
1,0060 |
0,5750 |
7,05521 |
7,76261 |
|
|
1,00670 |
0,5617 |
6,89202 |
7,57779 |
A növényi anyagok tannintartalmának átlagos értéke 7,8%, relatív szórással (0,034%) nem haladja meg a 2%-ot, ami az eredmények kielégítő konvergenciáját jellemzi.
Az eljárás helyességének megállapítására az összeadás módszerét alkalmaztuk. Ebből a célból primer acetonos extrakcióval 1 ml 0,05%, 0,1% és 0,15% CO-os tannint adtunk a lombikba, majd koncentrációnként háromszor elvégeztük a tanninok mennyiségi meghatározását. A vizsgálatok eredményeit a táblázat tartalmazza. 5.
Az RU 2439568 számú szabadalom birtokosai:
A találmány a farmakológia területére vonatkozik, és növényi anyagok tanninjainak meghatározására használható. A növényi nyersanyagok tanninjainak meghatározására szolgáló módszer abból áll, hogy a nyersanyagmintát forrás közben vízzel extraháljuk, lehűtjük, szűrjük, egy alikvot minta optikai sűrűségét 277 nm-es hullámhosszon mérjük, és a minta tartalmát az összes tannin összegét egy adott képlet alapján kiszámítjuk, majd a szűrlet aliquot mintájához 1%-os ecetsavban készült 1%-os kollagénoldatot adunk, összerázzuk, leszűrjük, megmérjük a szűrlet optikai sűrűségét 277 nm hullámhosszon és kiszámítjuk. a kicsapódott tannin tartalma egy bizonyos képlet szerint. A módszer javítja a növényi nyersanyagok tannintartalmának meghatározásának pontosságát, valamint a növényi nyersanyagokban a kicsapódott és ki nem csapódott tanninok szelektív meghatározását.
A találmány tárgya a kémiai-gyógyszeripar, a farmakognózia és a gyógyszerkémia területe, és felhasználható tannint tartalmazó növényi alapanyagok minőségének szabályozására.
Ismert módszer a tanninok gyógynövényi nyersanyagban (HP) történő meghatározására coulometriás módszerrel a tannin tekintetében (SG Abdullina et al. Tanninok coulometric meghatározása gyógynövényi alapanyagokban. // Gyógyszertár. 4. szám - 2010.). - P.13 -15).
Ennek a módszernek a hátránya a kiegészítő berendezés (coulométer), egy speciális titráló (kálium-hipojodid) alkalmazása, amely oxidáló tulajdonságaiban közel áll a kálium-permanganáthoz, és nem teszi lehetővé a nagy és kis molekulatömegű tanninok megkülönböztetését.
Ismeretes módszer a tea tannin- és galluszsav-származék-tartalmának konduktometriával történő meghatározására is (2127878 számú szabadalom. Method for the külön determination of the tannin and catechins (gallusav) in the tea. M .: 1999) .
Ennek a módszernek a hátránya a mérgező szerves oldószerek (izobutil-alkohol) alkalmazása, valamint a Fe (III)-val való színreakció alkalmazása, amelynek terméke egy színes vegyület, amelynek színe idővel instabil.
Ismert módszer is a tanninok tannintartalmának mennyiségi meghatározására a scumpia és a szumács leveleiben komplexometriás módszerrel a tanninok cinksókkal történő kicsapása után (GOST 4564-79. Scumpia leaf. Specifikációk; GOST 4565-79. Sumach lap. Műszaki adatok).
A módszer hátránya az elemzés időtartama és az ekvivalenciapont meghatározásának nehézsége.
Ismert módszer a tanninok spektrofotometriás módszerrel történő kvantitatív meghatározására is a Folin-Chocalteu reagenssel végzett reakció után galluszsav vonatkozásában (Útmutató a biológiailag aktív élelmiszer-adalékanyagok minőség-ellenőrzésének és biztonságának módszereihez. Útmutató. P 4.1. 1672-03. - M. - 2004. - 94-95.
Ennek a módszernek a hátránya, hogy nem lehet külön meghatározni a kis és nagy molekulatömegű tanninokat.
A javasolt módszerhez az áll a legközelebb, hogy a tanninokat spektrofotometriával határozzák meg galluszsav tekintetében (Irányelvek a biológiailag aktív élelmiszer-adalékanyagok minőség-ellenőrzési módszereihez és biztonságához. Útmutató. R 4.1.1672-03. - M. - 2004 - 120. o. ).
Ennek a módszernek a hátránya a vizsgálati minta ismételt hígítása, aminek következtében az oldatban a tanninok koncentrációja rosszul meghatározható. Ebben a módszerben a referenciaoldat egy pufferoldat is, ami megnehezíti az elemzést. Ezenkívül ez a módszer nem teszi lehetővé a kis molekulatömegű és a nagy molekulatömegű tanninok külön-külön történő meghatározását.
A találmány célja a tanninok meghatározásának pontosságának javítása, valamint a kicsapódott és ki nem csapódott tanninok elkülönített meghatározásának lehetősége növényi alapanyagokban.
A problémát megoldja, hogy a nyersanyagmintát forrás közben vízzel extraháljuk, lehűtjük, szűrjük, egy aliquot minta optikai sűrűségét 277 nm hullámhosszon mérjük, és az összes tannin összegének tartalmát képlet segítségével számítjuk ki
50 - a lombik térfogata, ml,
W - nyersanyagok nedvességtartalma,%,
A szűrlet egy alikvot mintájához 1%-os kollagénoldatot 1%-os ecetsavban adunk, összerázzuk, szűrjük, a szűrlet optikai sűrűségét 277 nm hullámhosszon megmérjük, és a képlet segítségével kiszámítjuk a kicsapódott tannin tartalmát.
D 1 - az 1. oldat optikai sűrűsége,
D 2 - a 2. oldat optikai sűrűsége,
m nav - nyersanyagminta tömege, g,
V a egy alikvot minta térfogata, ml,
250 - teljes extrakciós térfogat, ml,
50 - a lombik térfogata, ml,
508 - galluszsav fajlagos abszorpciós indexe (1%-os galluszsav-oldat optikai sűrűsége 1 mg/ml),
W - nyersanyagok nedvességtartalma,%.
A gyakorlatban a módszert a következőképpen hajtják végre. A 3 mm-es lyukátmérőjű szitán átszitált zúzott nyersanyagból körülbelül 2,0 (pontosan kimért) 500 ml-es lombikba helyezzük, 250 ml forrásig melegített vizet öntünk rá, és 30 percig forraljuk. visszafolyató hűtő alatt, időszakos keverés közben. Szobahőmérsékletre hűtjük, vízzel 250 ml-re melegítjük, vattán átszűrjük, hogy a nyersanyag részecskéi ne kerüljenek a vizes kivonatba. Öntse ki az első 50 ml szűrletet.
1-4 ml vizes kivonatot egy 50 ml-es mérőlombikba helyezünk, és vízzel jelig töltjük (1. oldat). Az 1. oldat optikai sűrűségét 277 nm hullámhosszon mérjük. Összehasonlításként vizet használnak.
30 ml vizes kivonatot egy 50 ml-es mérőedénybe helyezünk, hozzáadunk 2-10 ml kicsapó reagenst, 30-60 percig rázatjuk, ülepítjük, szűrjük. A kapott szűrlet 1-4 ml-ét egy 50 ml-es lombikba töltjük, és vízzel jelig töltjük (2. oldat). A 2. oldat optikai sűrűségét 277 nm hullámhosszon mérjük. Összehasonlításként vizet használnak.
A találmányt az alábbi példákkal szemléltetjük.
1. példa Az elemzéshez növényi nyersanyagot vettünk - tölgyfa kérgét.
Körülbelül 2,0 (pontosan kimért) zúzott nyers tölgyfa kérget, amelyet 3 mm-es lyukátmérőjű szitán átszitálunk, egy 500 ml-es lombikba helyezünk, 250 ml forrásig melegített vizet öntünk rá, és 30 percig forraljuk. visszafolyató hűtő alatt, időszakos keverés közben. Szobahőmérsékletre hűtjük, vízzel 250 ml-re melegítjük, vattán átszűrjük, hogy a nyersanyag részecskéi ne kerüljenek a vizes kivonatba. Öntse ki az első 50 ml szűrletet.
2 ml tölgyfakéreg vizes kivonatot helyezünk egy 50 ml-es mérőlombikba, amelyet vízzel jelig töltünk (1. oldat). Az 1. oldat optikai sűrűségét 277 nm hullámhosszon mérjük. Összehasonlításként vizet használnak. D 1 tölgy kéreg esetén 0,595.
30 ml vizes kivonatot egy 50 ml-es mérőedénybe helyezünk, hozzáadunk 2 ml csapadékreagenst, 30 percig rázzuk, ülepítjük, szűrjük. A kapott szűrlet 2 ml-ét egy 50 ml-es lombikba töltjük, és vízzel jelig töltjük (2. oldat). A 2. oldat optikai sűrűségét 277 nm hullámhosszon mérjük. Összehasonlításként vizet használnak. D 2 tölgy kéreg esetén 0,276.
2. példa Az elemzéshez a tekercs rizómák növényi anyagát vettük.
A 3 mm-es lyukátmérőjű szitán átszitált tekercs rizóma zúzott nyersanyagából körülbelül 2,0 (pontosan kimért) 500 ml-es lombikba helyezzük, 250 ml forrásig melegített vizet öntünk rá, 30 percig forraljuk visszafolyató hűtő alatt, időszakos keverés közben. Szobahőmérsékletre hűtjük, vízzel 250 ml-re melegítjük, vattán átszűrjük, hogy a nyersanyag részecskéi ne kerüljenek a vizes kivonatba. Öntse ki az első 50 ml szűrletet.
A tekercs rizómájából származó 1 ml vízkivonatot egy 50 ml-es mérőlombikba helyezzük, és vízzel jelig töltjük (1. oldat). Az 1. oldat optikai sűrűségét 277 nm hullámhosszon mérjük. Összehasonlításként vizet használnak.
30 ml vizes kivonatot egy 50 ml-es mérőedénybe helyezünk, hozzáadunk 7 ml kicsapó reagenst, 60 percig rázatjuk, ülepítjük, szűrjük. A kapott szűrlet 1 ml-ét egy 50 ml-es lombikba töltjük, és vízzel jelig töltjük (2. oldat). A 2. oldat optikai sűrűségét 277 nm hullámhosszon mérjük. Összehasonlításként vizet használnak.
A javasolt módszer javítja a növényi nyersanyagok tannintartalmának meghatározásának pontosságát, valamint a növényi nyersanyagokban a kicsapódott és ki nem csapódott tanninok szelektív meghatározását.
Módszer a növényi nyersanyagok tanninjainak galluszsavban kifejezett meghatározására, amely abból áll, hogy a nyersanyagmintát forrás közben vízzel extraháljuk, lehűtjük, szűrjük, és egy alikvot minta optikai sűrűségét mérjük az 1. hullámhosszon. 277 nm, és az összes tannin összegének tartalmát a következő képlettel számítjuk ki: 
ahol x a - a tanninok összegének tartalma galluszsavban kifejezve, %;
50 - a lombik térfogata, ml;
508 - galluszsav fajlagos abszorpciós sebessége (1% gallusz-oldat optikai sűrűsége 1 mg / ml);
W - nyersanyagok nedvességtartalma,%,
a szűrlet alikvot mintájához 1%-os kollagén 1%-os ecetsavban oldatát adjuk, összerázzuk, szűrjük, 277 nm hullámhosszon megmérjük a szűrlet optikai sűrűségét, és a kicsapódott tannin tartalmát a képlet: 
ahol X a kivált tannin tartalma galluszsavban kifejezve, %;
D 1 - az 1. oldat optikai sűrűsége;
D 2 - a 2. oldat optikai sűrűsége;
m nav - nyersanyagminta tömege, g;
V a az aliquot minta térfogata, ml;
250 - teljes extrakciós térfogat, ml;
50 - a lombik térfogata, ml;
508 - galluszsav fajlagos abszorpciós sebessége (1% gallusz-oldat optikai sűrűsége 1 mg / ml);
W - nyersanyagok nedvességtartalma,%.
Hasonló szabadalmak:
A találmány az orvostudományra, nevezetesen a pszichoneurológiára vonatkozik, és eljárást ír le az ischaemiás stroke akut periódusában lévő betegek neurológiai funkcióinak helyreállításának előrejelzésére, klinikai és biokémiai vizsgálatokkal a szérumban lévő albumin (OCA) g/g-ban kifejezett összkoncentrációjára vonatkozóan. l, ahol a betegség napján 5-7-ig még meghatározzák az effektív albumin koncentrációt (ECA), kiszámítják az albumin kötődési (PCA) tartalékot, és ha ez a mutató egynél kisebb, akkor a helyreállítás negatív eredménye. Az ischaemiás stroke akut periódusában szenvedő betegek neurológiai funkcióinak alakulását jósolják.
A találmány az orvostudományra, az onkológiai biológiai kutatásokra vonatkozik, és felhasználható az agydaganatok rosszindulatú folyamatának sebészeti kezelés utáni kialakulásának meghatározására.
A találmány az orvostudományra, különösen az onkológiára vonatkozik, és eljárást ír le a hólyagrák neoadjuváns kemoterápia hatékonyságának felmérésére páciens vizsgálatával, amelyben a spektrum zöld tartományában a tumorszövetek autofluoreszcenciájának maximális intenzitását rögzítik az elsődleges diagnózis stádiumában és 1 hónappal a preoperatív kemoterápia után, valamint a tumorszövet maximális autofluoreszcencia intenzitásának a páciens értékeinek a kezdeti 15% -kal vagy annál nagyobb növekedésével a kezelés hatékonyságát a daganat részleges regressziójaként értékelik. A folyamat során a tumorszövet autofluoreszcenciájának intenzitásában az eredetihez viszonyított változás hiányában a folyamat stabilizálódását határozzák meg, a tumorszövet autofluoreszcenciájának intenzitásának 15%-os vagy nagyobb csökkenésével a kezdeti jelhez képest a progresszió. a daganatos folyamatról.
Betöltés ...