ĮVADAS. \\ T

1. Bendra citokinų charakteristika ir klasifikacija.

1.1. Matavimo veiksmai.

1.2 Cytokinų paveldėjimas.

1.3ROL citokinai reguliuojant kūno fiziologines funkcijas.

2. Galimi citokinų tyrimai.

2.1 Gydyti citokinų į uždegiminių ligų, gaunamos duklinėjimo vaikams patogenezėje.

2.2.Lolo azoto oksidas ir citokinai Ūminio plaučių žalos sindromui.

3. CYTOKINŲ nustatymo metodai

3.1. Išsami informacija apie citokinų biologinį aktyvumą

3.2. Susiję citokinai naudojant antikūnus

3.3. Citokinų nustatymas pagal fermento imunologinio metodo metodą.

3.3.1 Naviko alfa nekrozės veiksnys.

3.3.2Gamma-interferonas.

3.3.3 Interlakin-4.

3.3.4 Embellakin-8.

3.3.5Receptor interleukin-1 antagonistas.

3.3.6 Falph interferonas.

3.3.7 ir alfa informacija.

4.Munotropiniai vaistai, pagrįsti citokinais.

Naudotų literatūros sąrašas.

Išvada.

ĮVADAS. \\ T

Nuo pirmųjų citokinų aprašymo momento šiek tiek praėjo. Tačiau jų tyrimas lėmė plačią žinių dalį - citokinologiją, kuri yra neatskiriama įvairių žinių sričių dalis ir visų pirma imunologija, kuri davė galingiausią imuniką šių tarpininkų tyrimui. "Cockinology" praleidžia visas klinikines disciplinas, pradedant nuo ligų etiologijos ir patogenezės ir baigiant įvairių patologinių sąlygų prevenciją ir gydymą. Todėl mokslinis tyrėjai ir gydytojai turi būti sutelktas į reguliavimo molekulių įvairovę ir turi aiškią idėją apie kiekvieno citokinų vaidmenį tyrimo procesuose. Visos imuninės sistemos ląstelės turi tam tikrų funkcijų ir veikia aiškiai nuoseklią sąveiką, kurią teikia specialios biologiškai veikiančios medžiagos - citokinai - imuninės reakcijos reguliatoriai. Citokinai vadinami konkrečiais baltymais, su kuriais įvairios imuninės sistemos ląstelės gali keistis vieni su kitais ir koordinuoti veiksmus. Cytokinų, veikiančių ląstelių paviršiaus receptorių, rinkinys ir kiekis yra "citokinų terpė" - atspindi sąveikos ir dažnai keičiančių signalų matricą. Šie signalai yra sudėtingi dėl didelio įvairių citokinų receptorių ir dėl to, kad kiekvienas citokinas gali suaktyvinti ar slopinti kelis procesus, įskaitant savo sintezę ir kitų citokinų sintezę, taip pat citokinų receptorių ląstelių formavimąsi ir išvaizdą . Mūsų darbo tikslas - mokytis citakinų, jų funkcijų ir savybių, taip pat galimas jų naudojimas medicinoje. Citokinai yra nedideli baltymai (Mol. Mol masė nuo 8 iki 80 kDa), veikiančių autokrinų (t. Y., ant jų ląstelės) arba paraconno (ant ląstelių). Šių labai aktyvių molekulių susidarymas ir išleidimas vyksta trumpai ir yra tvirtai reguliuojamas.

Literatūros apžvalga.

Bendros charakteristikos ir klasifikacija citokinų.

Citokinai yra polipeptidų tarpininkų grupė, susijusi su tarptautiniu mastu, daugiausia susijusios su organizmo apsauginių reakcijų formavimu ir reguliavimu Įdiegiant patogenus ir pažeidžiant audinių vientisumą, taip pat reguliuojant daugybę įprastų fiziologinių funkcijų reguliavimo. Citokinai gali būti skiriami naujam nepriklausomam reguliavimo sistemai, kuri egzistuoja kartu su nervų ir endokrininės sistemos, siekiant išlaikyti homeostazę, ir visos trys sistemos yra glaudžiai susijusios ir tarpusavyje susijusios. Per pastaruosius du dešimtmečius daugelio citokinų genai yra klonuoti ir rekombinantiniai analogai, visiškai pakartojant natūralių molekulių biologines savybes. Dabar yra daugiau kaip 200 atskirų medžiagų, priklausančių citokinų šeimai. Cytokinų tyrimo istorija prasidėjo XX a. 40-ajame dešimtmetyje. Tuomet buvo aprašytas pirmasis kapsulės poveikis - kraujo serume esantis veiksnys ir galingas talpyklos arba kūno svorio sumažėjimas. Ateityje šis tarpininkas sugebėjo skirti ir parodyti savo tapatybę navikų nekrozės veiksniui (FNO). Tuo metu citokinų tyrimas buvo surengtas dėl vieno biologinio poveikio nustatymo principo, kuris buvo atliktas atitinkamo tarpininko vardo pradžios taškas. Taigi 50-aisiais interferonas (IFN) buvo pavadintas dėl gebėjimo trukdyti arba padidinti atsparumą pakartotinei virusinei infekcijai. "Interleukin-1" (IL-1) taip pat buvo pirmoji pirmoji endogeninė pirogena į atsvarą bakterinių lipopolijų, laikomi egzogeniniais pirogenais. Kitas citokinų studijų etapas, susijęs su 60-70 metų, yra susijęs su natūralių molekulių gryninimo ir visapusiško jų biologinių veiksmų būdingų. Iki to laiko, T-ląstelių augimo koeficiento atidarymas yra žinomas kaip IL-2, ir daug kitų molekulių, kurie skatina augimo ir funkcinę veiklą t-, b-limfocitų ir kitų tipų leukocitų skaičių. 1979 m. Laikotarpis "Interleukins" buvo pasiūlyta dėl jų paskyrimo ir sisteminimo, ty tarpininkų, bendraujančių tarp leukocitų. Tačiau greičiau paaiškėjo, kad citokinų biologinis poveikis toli nuo imuninės sistemos, todėl anksčiau siūlomas terminas "Citokinas" buvo labiau priimtinas, konservuotas iki šios dienos. Revoliucinis posūkis citokinų tyrimas įvyko 1980 m. Pradžioje po interferono pelės ir žmogaus genų bei rekombinantinių molekulių gamybą, kuri visiškai pakartojo natūralių citokinų biologines savybes. Po to buvo galima klonuoti genus ir kitus tarpininkai iš šios šeimos. Svarbus citokinų istorijos etapas buvo klinikinis rekombinantinių interferonų naudojimas ir ypač rekombinantinis IL-2 už gydymą vėžio gydymui. 90-ųjų buvo pažymėtos citokinų receptorių subvieneto struktūros ir "Citokine Network" koncepcijos formavimas ir XXI amžiaus pradžia - daugelio naujų citokinų atradimas pagal genetinę analizę. Citokinai yra interferonai, kolonstimuliuojantys veiksniai (CSF), chemokinų transformuojančios augimo veiksniai; naviko nekrozės veiksnys; Interleukins su esamais istoriškai eitesniais skaičiais ir kai kuriais kitais endogeniniais tarpininkais. Interleukins, turintys sekos numerius, pradedant nuo 1, nepriklauso vienam citokinų pogrupiui, susijusiems su funkcijų bendrumu. Jie savo ruožtu gali būti suskirstyti į uždegiminius citokinų, augimo ir diferenciacijos limfocitų veiksnių, atskirų reguliavimo citokinų. Pavadinimas "Interleukin" priskiriamas naujai atviram tarpininkui tuo atveju, jei tarptautinės imunologinės visuomenės sąjungos nomenklatūros komiteto sukūrė šie kriterijai: sukurto veiksnio molekulinė klonavimas ir išraiška, unikalaus nukleotido buvimas ir atitinkamas aminorūgščių seka, neutralizuojančių monokloninių antikūnų. Be to, nauja molekulė turėtų būti gaminama imuninės sistemos ląstelės (limfocitai, monocitai ar kitų rūšių leukocitų), turėti svarbią biologinę funkciją reguliuojant imuninį atsaką, taip pat papildomų funkcijų, dėl kurių ji negali būti funkcinis pavadinimas. Galiausiai, išvardytos naujos interleukino savybės turi būti skelbiamos tarpusavio vertinamame moksliniame leidinyje. Cytokinų klasifikavimas gali būti atliekamas pagal jų biochemines ir biologines savybes, taip pat pagal receptorių tipus, per kuriuos citokinai naudojasi biologinėmis funkcijomis. Cytokinų klasifikacija struktūroje (1 lentelė) atsižvelgiama ne tik aminorūgščių seką, bet ir pirmiausia baltymų tretine struktūra, tiksliau atspindi evoliucinę molekulių kilmę.

1 lentelė. Citokinų klasifikavimas struktūroje.

Genų klonavimas ir citokinų receptorių konstruktorių analizė parodė, kad taip pat patys citokinai, šios molekulės gali būti suskirstytos į kelių tipų pagal aminorūgščių sekų panašumą ir ekstraląstelinių domenų organizavimo ypatumus ( 2 lentelė). Viena didžiausių citokinų receptorių šeimų vadinama hematopoetino receptorių šeima arba I tipo tipo tipo citokinų receptoriui. Šios receptorių grupės struktūros funkcija yra "Trp-Ser-X-Trp-Ser" (WSXWS) buvimas, esantis trumpu atstumu nuo ląstelių membranos Cistein molekulėje. II citokinų receptorių klasė sąveikauja su interferonais ir su IL-10. Abu pirmieji receptoriai turi homologiją. Šie receptorių grupės suteikia sąveiką su citokinų iš naviko nekrozės koeficiento ir IL-1 šeima. Šiuo metu daugiau nei 20 skirtingų chemokino receptorių sąveikauja su skirtingais afiniteto laipsniais su viena ar daugiau chemokino šeimos ligandų. "Chemokine" receptoriai priklauso Rhodopsin receptorių superfamiliui, turi 7 transmembranines sritis ir atlikti signalą su G-baltymų dalyvavimu.

2 lentelė. Citokino receptorių klasifikacija.

Daugelis citokinų receptorių sudaro 2-3 subvienetai, koduotus skirtingais genais ir išreiškiami savarankiškai. Tuo pačiu metu reikia vienu metu sąveikauti visų subvienetų, kad būtų sukurtas aukštos išgrynintas receptorius. Tokios citokinų receptorių organizacijos pavyzdys yra IL-2 receptorių komplekso struktūra. Stebina buvo tai, kad IL-2 receptorių komplekso individualūs subvienetai yra bendri IL-2 ir kai kurie kiti citokinai. Taigi, β-grandinė vienu metu yra IL-15 receptorių komponentas, o γ grandinė tarnauja kaip įprastas IL-2, IL-7, IL-9, IL-15 ir IL-15 ir IL-15 ir Il-21. Tai reiškia, kad visi minėti citokinai, kurių receptoriai taip pat susideda iš 2-3 atskirų polipeptidų, naudokite γ-grandinę kaip savo receptorių komponentą, o komponentas, atsakingas už signalo vedimą. Visais atvejais kiekvienos citokino sąveikos specifiką teikia kiti struktūrai skiriasi subvienetai. Tarp citokinų receptorių yra dar 2 bendri receptorių subvienetai po sąveikos su skirtingais citokinais. Tai yra bendras receptorių subvienetas βc (GP140) IL-3 receptoriams, IL-5 ir GM-CSF, taip pat GP130 receptorių subvienetas, apskritai IL-6 šeimos nariams. Bendros signalizacijos subvieneto buvimas citokinų receptoriuose yra vienas iš jų klasifikavimo požiūrių, nes jis leidžia jums rasti bendruomenę tiek ligandų struktūroje ir biologiniu poveikiu.

3 lentelėje parodyta kombinuota struktūrinė ir funkcinė klasifikacija, kurioje visi citokinai yra atskirti į grupes, visų pirma atsižvelgiant į jų biologinį aktyvumą, taip pat pirmiau minėtas citokinų molekulių ir jų receptorių struktūros ypatybes.

3 lentelė. Konstrukcinė ir funkcinė citokinų klasifikacija.

	Šeimos citokinai	Pogrupiai ir ligandai	Pagrindinės biologinės funkcijos
	Interferonai I tipo	IFN A, B, D, K, W, T, IL-28, IL-29 (IFN L)	Antivirusinė veikla, antiproliferacinis, imunomoduliacinis poveikis
	Hematopoetiniai ląstelių augimo veiksniai	Kamieninis ląstelių koeficientas (Kit-ligandas, plieno faktorius), Flt-3 Ligand, p. KSF, M-KSF, IL-7, IL-11 Ligands gp140: IL-3, IL-5, GM-KSF	Poliferacijos skatinimas ir įvairių tipų pirmtakų ląstelių kaulų čiulpų aktyvinimas, kraujo formavimo įjungimas Eritropoetinas, trombopoetinas
	Super Moteris Interleukina-1 ir FRF	FRF šeima: Rūgštus FRF, pagrindinis FRF, FRF3 - FRF23 Šeima IL-1 (F1-11): IL-1α, IL-1β, IL-1 receptorių antagonistas, IL-18, IL-33 ir kt.	Fibroblastų ir epitelinių ląstelių proliferacijos aktyvinimas Netiesioginiai veiksmai, specifinio imuniteto aktyvinimas
	Naviko nekrozės faktoriaus šeima	FNF, limfotoksinai α ir β, fas-ligandas ir kt.	Pro-uždegiminis veiksmas, apoptozės reguliavimas ir imunocitų ląstelių sąveika
	Interleukina-6 šeima	Ligands gp130: IL-6, IL-11, IL-31, Oncostatin-M, kardiotropinas-1, leukemijos slopinamasis veiksnys, ciliarinis neurotrofinis veiksnys	Tinkamas ir imunoreguliacinis veiksmas
	Chemokina.	Ss, cxc (Il-8), shs3s su	Įvairių leukocitų chemotaksės reguliavimas
	Interleukina-10 šeima	IL-10,19,22,24,26.	Imunosupresinis veiksmas
	Interleukina-12.		Pagalbininko t-limfocitų diferenciacijos reguliavimas
	"T-helper" klonų citokinai ir limfocitų funkcijų reguliavimas	T-pagalbininkai 1 tipo: IL-2, IL-15, IL-21, IFNG T-helpers 2 tipas: IL-4, IL-5, IL-10, IL-13 Ligands γ-grandinė IL-2 receptorius: IL-7 TSLP	Mobiliojo imuniteto aktyvinimas Humoralinio imuniteto aktyvinimas, imunomoduliavimo efektas Įvairių limfocitų, DK, NK ląstelių, makrofagų, makrofagų, makrofagų, makrofagų, makrofagų ir tt diferenciacijos, platinimo ir funkcinių savybių stimuliavimas
	Interleukin šeima 17.	IL-17A, B, C, D, E, F	Aktyvinimas iš uždegiminių citokinų sintezės
	Superfamily augimo faktoriaus nervai, trombocitų augimo veiksnys ir augimo veiksnių transformavimas	Nervų augimo šeima: FRN, smegenų neurotrofinis veiksnys Transliekų augimo veiksniai (PDGF), angiogeniniai augimo veiksniai (VEGF) Šeimos TRF: Trfb, veikla, slopina, mazginiai, kaulų morfogeniniai baltymai, mullerijos inhibitor medžiaga	Uždegimo, angiogenezės, neuronų veikimo, embriono vystymosi ir audinių regeneracijos reguliavimas
	Epidermio augimo veiksnio šeima	ERF, trfa ir kt.
	Insulino augimo veiksnių šeima	IRF-I, IRF-II	Įvairių ląstelių rūšių proliferacijos skatinimas

Pirmoji grupė apima I tipo interferonus ir yra paprasčiausias organizacijoje, nes visi molekulės yra panašios struktūros ir iš esmės tos pačios funkcijos, susijusios su antivirusiniu apsauga. Antroji grupė apėmė augimo veiksnius ir diferenciaciją hematopoetinių ląstelių, kurios skatina kraujo formavimo pirmtakų ląstelių plėtrą, pradedant nuo kamieninių ląstelių. Ši grupė apima citokines, siaurai konkrečiai individualiai diferencijuoti hematopoetines ląstelių (eritropoetiną, trombopoietą, taip pat IL-7, veikiančių pirmtakų T-in-limfocitų), taip pat citokinų su platesnį biologinio aktyvumo spektrą, pavyzdžiui, IL-3, IL-11, gaubtinės žarnų fravimo veiksniai. Šios citokinų grupės sudėtis pabrėžė GP140 ligandų, turinčių bendrą receptorių subvienetą, taip pat trombopoetiną ir eritropoetiną dėl struktūrinės molekulių organizavimo. FRF ir IL-1 "IL-1" citokinai turi didelį homologiją ir panašią baltymų struktūrą, kuri patvirtina kilmės bendrumą. Nepaisant to, pagal biologinės veiklos apraiškas, FRF daugiausia skiriasi nuo IL-1 šeimos agonistų. IL-1 molekulės šeima šiuo metu, be funkcinių pavadinimų, turi F1-F11, kur F1 atitinka IL-1α, F2 - IL-1β, F3 - IL-1 receptorių antagonistas, F4 - IL-18 . Likę šeimos nariai yra atviri dėl genetinės analizės ir turi pakankamai didelio homologijos su IL-1 molekuliais, tačiau jų biologiškai funkcijos nėra visiškai išaiškintos. Šie cytokinų grupės apima IL-6 šeimas (bendrojo receptorių Subvieno GP130), naviko nekrozės koeficientas ir chemokinas, atstovaujamas didžiausiu atskirų ligandų skaičiumi ir visiškai išvardijami atitinkamuose skyriuose. Nekrozės koeficiento šeima yra suformuota daugiausia dėl ligandų struktūros ir jų receptorių, susidedančių iš trijų nesilentaliai susijusių vienodų subvienetų, sudarančių biologiškai aktyvios molekules. Tuo pačiu metu citokinai su pakankamai skirtinga veikla yra įtrauktos į šios šeimos biologines savybes. Pavyzdžiui, TNF yra viena iš gyvybingiausių pro-uždegiminių citokinų, FAS Ligandas sukelia apoptozę tikslinių ląstelių, o CD40 Ligand suteikia stimuliuojantį signalą su conklarato sąveika T-ir B-limfocitų. Tokius struktūriškai panašių molekulių biologinio aktyvumo skirtumus pirmiausia nustatomi jų receptorių išraiškos ir struktūros ypatumai, pvz., "Mirties" intracelulinio domeno buvimas ar nebuvimas, kuris lemia ląstelių apoptozę. Pastaraisiais metais IL-10 ir IL-12 šeimoms taip pat buvo papildyti naujais nariais, kurie gavo eilės numerius interleukins. Be to, laikomasi labai sudėtingos citokinų grupės, kuri yra pagalbinės pagalbos t-limfocitų funkcinės veiklos tarpininkai. Į šią grupę įtraukimas grindžiamas dviem pagrindiniais principais: 1) priklausanti citokinams, sintezuotoms TX1 arba TX2, kuris lemia daugiausia humoralinio ar ląstelių tipo imunologinių reakcijų, 2) bendros receptorių subvieno - gama grandinės IL-2 receptorių kompleksas. Tarp gama grandinės ligandų, IL-4 buvo papildomai izoliuota, kuri taip pat turi bendrą receptorių subvienetą su IL-13, kuri iš esmės lemia iš dalies sutapti biologinį aktyvumą šių citokinų. Panašiai IL-7 buvo izoliuotas, kuris turi receptorių konstrukcijos su TSLP. Iš konkrečios klasifikacijos privalumai yra susiję su tuo pačiu metu atsižvelgiant į biologines ir biochemines savybes citokinų. Tokio požiūrio įgyvendinamumą šiuo metu patvirtinamas naujų citokinų atradimas genetine genetine analize ir panašių genų struktūrinių genų paieška. Šio metodo dėka I tipo IL-1, IL-10, IL-12 interferonas IL-12 buvo žymiai išplėsta, atsirado nauja IL-17 analogų šeimos, kuri jau sudarė 6 nariai. Matyt, artimiausioje ateityje naujų citokinų atsiradimas atsiras gerokai lėčiau, nes žmogaus genomo analizė beveik baigta. Pakeitimai greičiausiai įmanoma dėl paaiškinančių "Ligand" receptorių sąveikos ir biologinių savybių galimybių, kurios leistų klasifikuoti citokines pasmerkti galutinę formą.

Veiksmo mechanizmai.

B. Citokino receptoriai. Citokinai yra hidrofilinės signalinės medžiagos, kurių veiksmo yra tarpininkaujant tam tikrais receptoriais ant išorinės pusės plazmos membranos. Cytokine su receptoriu (1) privaloma per daugelį tarpinių etapų (2-5), kad būtų įjungtas tam tikrų genų transkripcijos (6). Citokinų receptoriai neturi tirosinio kinazės aktyvumo (kelioms išimtims). Įrišdami į citokiną (1), receptorių molekulės yra susijusios formuojant homodimatorių. Be to, jie gali suformuoti heterodimiklius dėl asociacijos su signalinių vežėjų baltymais [BPS (STP)] arba skatina pačių bps dimerizaciją (2). I klasė Citokino receptoriai gali suvesuoti su trijų tipų BPS: baltymų gp130, βc arba γc. Šie pagalbiniai baltymai patys negali sujungti citokinų, tačiau jie perduoda signalą į tirozino kinazės (3), tos pačios spektrai biologinio aktyvumo daugelio citokinų yra paaiškinami įvairių citokinų receptorių kompleksų gali aktyvuoti tą patį bps.

Kaip signalo iš citokinų perdavimo diagramoje pavyzdys, jis rodomas kaip IL-6 receptorius (IL-6) po surišimo į ligandą (1) stimuliuoja GP130 (2) dimerizaciją. GP130 membranos baltymų dimeris jungiasi ir aktyvuoja citoplazminio tirozino kinazę iš Yak šeimos (Janus kinazės, turintys du aktyvius centrus) (3). JANUS kinazės fosforilato citokino receptoriai, bps ir įvairių citoplazminių baltymų, kurie naudojasi papildomu signalo perdavimu; Jie taip pat fosforilato transkripcijos veiksniai - signalų laikikliai ir transkripcijos aktyvatoriai [PSAT (STAT (STAT, nuo anglų signalo transkripcijos ir translipties aktyvatorių)]. Šie baltymai priklauso BPS šeimai SH3 domeno struktūroje, pripažįstant fosfotizino liekanas (žr. 372 p.). Todėl jie turi turtą susieti su fosforilino citokino receptoriu. Jei PSAT molekulės fosforilinimas (4) įvyksta, veiksnys patenka į aktyvią formą ir sudaro dydį (5). Po perkėlimo į branduolį, dimeras kaip transkripto koeficientas yra susijęs su promotoriumi (žr 240) generuojamo geno ir sukelia jo transkripcijos (6). Geriamojo citokinų receptorių gali nukristi ekstraląsteline Ligand-riba domenas (6). Domenas patenka į kraują, kur konkuruoja dėl privalomo citokinui, kuris sumažina citokino koncentraciją kraujyje. Cytokinų derinys sudaro reguliavimo tinklą (citokinų kaskadą) su daugiafunkciniu veiksmu. Įjungimas tarp citokinų veda į tai, kad daugelio jų veiksme stebimas sinergizmas, o kai kurie citokinai yra antagonistai. Dažnai organizme galite stebėti visą citokinų kaskadą su sudėtinga atsiliepimais.

Citokinų savybės.

Bendros citokinų savybės, dėl kurių šie tarpininkai gali būti derinami į nepriklausomą reguliavimo sistemą.

1. Citokinai yra polipeptidai arba baltymai, dažnai glikozilinta, dauguma jų turi mm nuo 5 iki 50 kDa. Biologiškai aktyvios citokinų molekulės gali būti sudarytos iš vieno, dviejų, trijų ar daugiau identiškų arba skirtingų subvienetų.

2. Citokinai neturi antigeninio biologinio poveikio specifiškumo. Jie turi įtakos ląstelių funkcinei veiklai, dalyvaujančių įgimtos ir įgytos imuniteto reakcijose. Nepaisant to, turintys įtakos t- ir b limfocitai, citokinai gali paskatinti antigenų sukeltus procesus imuninei sistemai.

3. Cytokinų genų yra trys išraiškos galimybės: a) Stadiono specifinė išraiška tam tikrais embrioninio vystymosi etapais, b) reguliuojamaisiais normaliomis fiziologinėmis funkcijomis, c) pramogų raiškos rūšies charakteristika. Daugumai citokinų . Iš tiesų, dauguma citokinų už uždegiminio atsako ir imuninio atsako nėra sintezuojamas ląstelių. Cytokine genų išraiška prasideda reaguojant į skverbimą į patogenų kūną, antigeninį dirginimą ar audinių pažeidimą. Kai kurie iš galingiausių infegiminių citokinų sintezės induktorių yra su patogenais susijusios molekulinės struktūros. Norėdami pradėti t-ląstelių citokinų sintezę, ląstelių aktyvinimas reikalauja specifinio antigeno su T-ląstelių antigeninio receptoriaus dalyvavimo.

4. Citokinai yra sintetinami reaguojant į trumpo laikotarpio stimuliavimą. Sintezė nustoja galioti dėl įvairių autoregumo mechanizmų, įskaitant padidėjusį RNR nestabilumą, ir dėl neigiamo grįžtamojo ryšio, sukeliančių prostaglandinų, kortikosteroidų hormonų ir kitų veiksnių.

5. Tą patį citokino gali būti gaminamas skirtingai hisogenetinių kilmės tipų organizmų ląstelių skirtinguose organuose.

6. Citokinai gali būti siejami su membranas sintezuojant savo ląsteles, turintys membranos formos su visišku spektro biologinės veiklos forma ir rodo jo biologinį poveikį pertvarkymo metu.

7. Cytokinų biologinis poveikis yra tarpininkaujant per konkrečius ląstelių receptorių kompleksus, kurie susieja citokines su labai aukštu afininiais, o atskiri citokinai gali naudoti bendrus receptorių subvienetą. Citokino receptoriai gali egzistuoti tirpioje formoje, išlaikant galimybę susieti ligandus.

8. Citokinai turi biologinį playotrophizmą. Tas pats citokinas gali veikti daugelyje ląstelių tipų, sukeliant įvairius efektus, priklausomai nuo tikslinių ląstelių tipo (1 pav.). Cytokine veiksmų playotropy užtikrina citokinų receptorių išraiška skirtingiems ląstelių tipams ir signalams ir signalams, naudojant keletą skirtingų ląstelių pasiuntinių ir transkripcijos veiksnių.

9. Cytokinams būdingas biologinių veiksmų pakeitimas. Keletas skirtingų citokinų gali sukelti tą patį biologinį poveikį arba turėti panašią veiklą. Citokinai sukelia slopinant pačių, kitų citokinų ir jų receptorių sintezę.

10. Atsakydama į aktyvinimo signalą, ląstelių sintezė vienu metu kelis citokinų, dalyvaujančių formuojant citokinų tinklą. Biologinis poveikis audiniuose ir kūno lygmeniu priklauso nuo kitų citokinų, turinčių sinerginį, priedą ar priešingą poveikį, buvimą ir koncentraciją.

11. Citokinai gali paveikti tikslinių ląstelių proliferaciją, diferenciaciją ir funkcinę veiklą.

12. Citokinų aktas ląstelėse įvairiais būdais: autokrtinas - ląstelėje, sintezuojant ir išskiriant šį citokiną; Paraconno - ant ląstelių, esančių šalia gamintojų ląstelių, pavyzdžiui, uždegimo ar limfoidinio organo dėmesio centre; Endokrininė - toli nuo ląstelių bet organų ir audinių po įėjimo į apyvartą. Pastaruoju atveju citokinų veiksmai panašūs į hormonų veikimą (2 pav.).

Fig. 1. Tą patį citokiną galima pagaminti skirtingais organizmo ląstelių tipais skirtinguose organuose ir veikti daugelyje ląstelių tipų, sukeliant įvairius efektus, priklausomai nuo tikslinių ląstelių tipo.

Fig. 2. Trys citokinų biologinio poveikio versijos.

Matyt, citokinų reguliavimo sistemos formavimas buvo evoliucinis kartu su daugialypių organizmų plėtra ir buvo susijęs su intercellegal sąveikos tarpininkų formavimu, į kurį hormonai, neuropeptidai, sukibimo molekulės ir kai kurie kiti gali būti skaičiuojami. Šiame plane citokinai yra universaliausias reguliavimo sistema, nes jie gali parodyti biologinę veiklą kaip toli nuo pagaminto ląstelės (lokaliai ir system) ir interpleto kontakto sekrecijos, biologiškai aktyvus membranos formos pavidalu. Ši citokinų sistema skiriasi nuo sukibimo molekulių, kurios atlieka siauresnes funkcijas tik tiesioginiu ląstelių kontaktu. Tuo pačiu metu citokinų sistema skiriasi nuo hormonų, kurie daugiausia sintezuojami specializuotos institucijos ir turi veiksmą po apyvartos sistemos įvedimo.

Citokinų vaidmuo reglamentuojant kūno fiziologines funkcijas.

Cytokinų vaidmuo organizmo fiziologinių funkcijų reguliavime galima suskirstyti į 4 pagrindinius komponentus:

1. Embrionezės, žymių ir organų plėtros reguliavimas, įsk. Imuninės sistemos organai.

2. Atskirų įprastų fiziologinių funkcijų reguliavimas.

3. organizmo apsaugos reakcijų reguliavimas vietos ir sistemos lygmeniu.

4. audinių regeneravimo procesų reguliavimas.

Atskirų citokinų genų išraiška įvyksta tam tikru embrioninio vystymosi etapais. Kamieninis ląstelių koeficientas transformuoja augimo veiksnius, FNF šeimos ir chemokinų citokinų reguliuoja įvairių ląstelių diferenciaciją ir migraciją bei imuninės sistemos organų klojimą. Po to kai kurių citokinų sintezė negali būti atnaujinta, o kiti ir toliau reguliuoja įprastus fiziologinius procesus arba dalyvauja plėtojant apsaugines reakcijas.

Nepaisant to, kad dauguma citokinų yra tipiški pramoginiai tarpininkai ir po gimdomojo laikotarpio nėra sintezuojami ląstelių už uždegiminio atsako ir imuninio atsako, kai kurie citokinai nepatenka šios taisyklės. Dėl konstitucinės genų išraiškos kai kurie iš jų yra nuolat sintezuojama nuolat ir gana dideliais kiekiais yra apyvartoje, reguliuojant tam tikrų tipų ląstelių proliferaciją ir diferencijavimą visame gyvenime. Šio tipo fiziologinio reguliavimo funkcijų pagal citokinų tipo gali būti nuolat aukšto lygio eritropoetino ir kai XFS teikti hemopoiesis. Reguliavimas apsauginių reakcijų organizmo citokinų vyksta ne tik pagal imuninės sistemos sistemą, bet ir organizuojant apsaugos reakcijas holistinio organizmo lygiu per beveik visas šalis į uždegimo ir imuninio atsako plėtros. Tai yra svarbiausia funkcija visai citokinų sistemai yra susijęs su dviem pagrindinėmis citokinų biologinių veiksmų kryptimis - apsauga nuo infekcinių agentų ir sugadintų audinių atkūrimo. Citokinai pirmiausia reguliuoja vietinių apsauginių reakcijų kūrimą audiniuose, kuriuose dalyvauja įvairių tipų kraujo ląstelių, endotelio, jungiamojo audinio ir epitelio kūrimą. Apsauga vietos lygmeniu vystosi, formuojant tipinį uždegiminį atsaką su savo klasikiniais apraiškomis: hiperemija, edema, skausmo sindromo išvaizda ir funkcijų sutrikimas. Citokinų sintezė prasideda skverbiasi patogenais arba sutrikusi jų vientisumą, kuris paprastai teka lygiagrečiai. Cytokinų gamyba yra neatskiriama ląstelių atsako dalis, susijusi su panašių struktūrinių komponentų mielonocitų serijos ląstelių pripažinimu, vadinamais su patogenais susijusių molekulinių modelių. Tokių patogenų struktūrų pavyzdžiai yra gram-neigiamų bakterijų, gram-teigiamų mikroorganizmų, flagllino ar DNR peptidoglikanai, turintys daug CPOLYG sekų, kurios yra būdingos visų tipų bakterijų DNR. "Leukocits" išreiškia atitinkamus modelio atpažinimo receptorius, taip pat vadinamus rinkliavų receptorius (TLR) ir specifiniais tam tikriems mikroorganizmų struktūriniams modeliams. Po mikroorganizmų sąveikos arba jų komponentų su TLR, intracelulinė signalo perdavimo kaskada yra pradėta, o tai lemia funkcinės veiklos leukocitų ir citokinų genų išraiška.

TLR aktyvinimas sukelia dviejų pagrindinių citokinų grupių sintezę: I tipo uždegiminiai citokinai ir I tipo interferonai, daugiausia IFNα / β klaviatūros renginys yra už uždegiminių citokinų iš IL-1 šeimų sintezė, \\ t IL-6, FNF ir "Chemokices", skatinančios daugumą šių įvykių uždegiminį atsaką ir teikiant ventiliatoriaus išplėtimą įvairių tipų ląstelių, dalyvaujančių palaikant ir reguliuojant uždegimą, įjungimą, įskaitant visų tipų leukocitų, dendritines ląsteles, t ir B-limfocitai, NK ląstelės, endotelio ir epitelinės ląstelės, fibroblastai ir kt. Tai užtikrina tolesnius uždegiminio atsako kūrimo etapus, o tai yra pagrindinis įgimtų imuniteto įgyvendinimo mechanizmas. Be to, "IL-12 šeimos citokinų dendritinių ląstelių sintezė, skatinanti pagalbininkų" limfocitų "diferencijavimą, kuris yra savitas tiltas iki specifinio imuniteto reakcijų, susijusių su konkrečių atpažinimo pripažinimu pradžioje. mikroorganizmų antigeninės konstrukcijos.

Antrasis ne mažiau svarbus mechanizmas, susijęs su IFS sinteze, užtikrina antivirusinę apsaugą. I tipo interferonų eksponuoti 4 pagrindines biologines savybes:

1. Tiesioginis antivirusinis veiksmas blokuojant transkripciją.

2. Slopinimas ląstelių, reikalingų užblokuoti viruso plitimo.

3. NK ląstelių funkcijų aktyvinimas su gebėjimu užsikrėsti ląstelių ląstelių virusu.

4. Stiprinti pagrindinio histocompatsibility i klasės molekulių išraišką, kuri yra būtina siekiant padidinti virusinių antigenų su užkrėstų ląstelių atstovavimo veiksmingumą citotoksiniais t-limfocitais. Tai lemia konkretaus ląstelių, užsikrėtusių "T-Lymphocyte" virusu, pripažinimą - pirmąjį lyzės virusų infekuotų tikslinių ląstelių etapą.

Kaip rezultatas, be tiesioginio antivirusinių veiksmų, mechanizmai aktyvuojami kaip įgimtos (NK ląstelės) ir įgytų (t-limfocitų) imuniteto. Tai yra pavyzdys, kaip vienas mažas citokinų molekulės su mm 10 kartų mažesnis nei MM antikūnų molekulės gali aktyvuoti visiškai skirtingus apsauginius reakcijos mechanizmus, kuriais siekiama atlikti vieną tikslą - pašalinti virusą įsiskverbė į kūną.

Audinių lygiu citokinų yra atsakingos už uždegimo plėtrą, o tada audinių regeneraciją. Kuriant sisteminį uždegiminį atsaką (aštriu etapu), citokinai veikia beveik visus organus ir sistemas, dalyvaujančią homeostazės reglamente. Pro uždegiminių citokinų poveikis CNS lemia apetito sumažėjimą ir viso elgesio reakcijų komplekso pokyčius. Laikinas maisto paieškos nutraukimas ir seksualinės veiklos sumažėjimas yra naudingas energijos taupymo vienai užduočiai - kovoti su įsivaizduojamu patogenu. Šis signalas suteikia citokines, nes jų apyvarta nukentėjo, tai reiškia, kad vietinė apsauga nesudaro su patogenu, ir reikalingas sisteminis uždegiminis atsakas įtraukimas. Vienas iš pirmųjų pasireiškimų sistemos uždegiminis atsakas, susijęs su citokinų veikimu su hipotalamo termostato termostato termostatu yra slypi kūno temperatūros kilimu. Temperatūros padidėjimas yra veiksminga apsauginė reakcija, nes esant aukštesnei temperatūrai, sumažėja daugybė bakterijų reprodukcijai, tačiau, priešingai, padidėja limfocitų plitimas.

Kepenyje, pagal citokinų įtaką, aštrių fazių baltymų sintezė ir papildomos sistemos komponentai, kurie yra būtini siekiant kovoti su patogenu, padidinti, bet tuo pačiu metu mažina albumino sintezę. Kitas citokinų rinkimų poveikio pavyzdys yra kraujo plazmos joninės sudėties pokytis kuriant sisteminį uždegiminį atsaką. Tuo pačiu metu, yra geležies jonų lygis, bet padidinti cinko jonų lygį, ir gerai žinoma, kad gerai žinoma, kad geležies jonų bakterijų ląstelė reiškia - sumažinti jo proliferacinį potencialą ( Laktorrino veiksmas yra pagrįstas šiuo). Kita vertus, cinko lygio padidėjimas yra būtinas normaliam imuninės sistemos veikimui, visų pirma, būtina formuoti biologiškai aktyvų sūrio koeficientą - vienas iš pagrindinių timinių hormonų, kurie užtikrina limfocitų diferenciaciją . Cytokinų poveikis hematopoetinėje sistemoje yra susijęs su dideliu hematopo aktyvavimu. Leukocitų skaičiaus padidėjimas yra būtinas norint papildyti nuostolius ir didinti ląstelių skaičių, daugiausia neutrofilinius granulocitus, atsižvelgiant į pūlingo uždegimą. Veiksmai dėl kraujo krešėjimo sistemos siekiama didinti koaguliaciją, reikalingą kraujavimui sustabdyti ir tiesiogiai blokuoti patogeną.

Taigi, plėtojant sisteminį citokinų uždegimą, yra daug biologinės veiklos ir trukdo beveik visų organizmų sistemų darbui. Tačiau nė vienas iš nuolatinių pokyčių yra atsitiktinis: visi jie yra būtini tiesiogiai įjungti apsaugines reakcijas arba naudingas energijos srautų perjungimui vienai užduočiai, kad būtų galima kovoti su įsivaizduojamu patogumu. Atskirų genų išraiškos reguliavimo forma, hormoniniai pokyčiai ir citokinų elgesio reakcijų pokyčiai užtikrina tų organizmo sistemų, kurios šiuo metu reikalingos siekiant plėtoti apsaugines reakcijas, įtraukimas ir maksimalus efektyvumas. Tuo holistinio organizmo lygiu, citokinų bendrauti tarp imuninės, nervų, endokrininės, hematopoetinių ir kitų sistemų ir padeda įtraukti juos į organizavimo ir reguliavimo vienos apsauginės reakcijos. Citokinai tiesiog tarnauja kaip organizavimo sistema, kuri formuoja ir reguliuoja visą kompleksą apsauginių reakcijų organizme įvedant patogenus. Matyt, tokia reglamento sistema buvo suformuota evoliuciškai ir turi besąlygišką naudą optimaliausiam makrorganizmo atsakymui. Todėl, matyt, neįmanoma apriboti apsaugos reakcijų sąvokos tik nes konkrečius atsparumo mechanizmus ir specifinį imuninį atsaką. Vienoje apsauginėje reakcija, visas kūnas ir visos sistemos dalyvauja iš pirmo žvilgsnio, nesusijęs su imuniteto palaikymu.

Specialūs citokinų tyrimai.

Citokinų vertė į uždegiminių ligų, gaunamų duktoriaus, patogenezėje.

S.V. Belmer, A.S. Simbirtai, O.V. Golovnko, L.V. Bubnova, L.M. Carpina, N.E. Schigolev, T.L. Mikhailova. Rusijos valstybinis medicinos universitetas GSC Coloproctology universitetas, Maskvos ir gnilli ypač gryno biopreparats, Sankt Peterburgo elgesio dirbti studijuoti citokinų vertę į uždegiminių ligų gėlės storosios žarnos vaikams patogenezėje. Lėtinės uždegiminės ligos virškinimo trakto šiuo metu užima viena iš pirmaujančių vietų virškinimo organų patologijos vaikams. Ypač svarbu yra prijungtas prie uždegiminių ligas, gautos dvitaškio (BIS), kurių atsiradimo dažnumas visame pasaulyje nuolat didėja. Ilgas srautas su dažnai, o kai kuriais atvejais mirtina recidyvai, vietos ir sisteminių komplikacijų plėtra - visi skatina išsamų ligos patogenezę ieškant naujų BD gydymo būdų. Pastaraisiais dešimtmečiais nespecifinio opinio kolito (NIAC) dažnis sudarė 510 atvejų per metus 100 tūkstančių gyventojų, su Krono liga (BC), 16 atvejų per metus 100 tūkstančių gyventojų. Paplidžio lygis Rusijoje, Maskvos regione atitinka Vidurio ekonomikos duomenis, tačiau žymiai mažesnis nei Skandinavijos šalyse, Amerikoje, Izraelyje ir Anglijoje. Nym, 19,3 už 100 tūkstančių paplitimas 1,2 už 100 tūkstančių žmonių per metus paplitimas. BC paplitimas 3,0 už 100 tūkstančių, dažnis 0,2 už 100 tūkstančių žmonių per metus. Tai, kad didžiausias dažnis pastebimas labai išsivysčiusiuose centruose, yra ne tik socialiniai ir ekonominiai veiksniai, bet ir genetiniai ir imunologiniai pacientai, nustatantys polinkį į BIS. Šie veiksniai yra esminiai bis kilmės imunopatogenetinėje teorijoje. Virusinės ir (arba) bakterinės teorijos paaiškina tik ūminę ligos pradžią, o proceso chronizavimas priklauso nuo genetinio polinkio ir imuninio atsako ypatumų, kurie taip pat yra genetiškai nustatyti. Pažymėtina, kad BDS šiuo metu yra priskirta ligoms, turintiems genetiškai nevienalytę kompleksinį polinkį. Iš 2 grupių (imunostacinės ir imunoreguliacinės) buvo atskleista daugiau nei 15 tariamų šalių kandidatų, sukelia paveldimą polinkį. Didžiausią polinkio tikimybę lemia keli genai, lemiantys imunologinių ir uždegiminių reakcijų pobūdį. Remiantis daugelio tyrimų rezultatais, galima daryti išvadą, kad greičiausiai genų lokalizavimas, susijęs su BDS plėtra, yra 3, 7, 12 ir 16 chromosomos. Šiuo metu didelis dėmesys skiriamas funkcijų t ir limfocitų funkcijų tyrimui, taip pat uždegiminių mediatorių citokinai. Tarplunkinų (IL), interferono (IFN) vaidmuo, naviko nekrozės koeficientas (TNF-A), makrofagai ir autoantibodai į dvitaškio gleivinės baltymų baltymus ir automatinį matuoklį ir automatinį pakrantę yra aktyviai tiriamas. Atskleidžiamos jų pažeidimų su BK ir Nyak funkcijos, tačiau lieka neaišku, ar šie pokyčiai atsiranda pirminiame ar antriniame. Suprasti daugybę patogenezės, tyrimai, atliekami ikiklinikiniu būdu BDS, taip pat pirmojo giminės giminaičių giminaičiai būtų labai svarbūs. Tarp uždegimo tarpininkai, ypatingas vaidmuo priklauso citokinams, kurie yra polipeptidų molekulių grupė, kurių masė yra nuo 5 iki 50 kD, dalyvaujant organizmo apsauginėms reakcijoms formavimui ir reguliavimui. Citokino organizmo lygiu yra ryšys tarp imuninės, nervų, endokrininės, hematopo ir kitų sistemų ir padeda juos įtraukti į organizavimą ir apsauginių reakcijų reguliavimą. Cytokinų klasifikacija parodyta 2 lentelėje. Dauguma citokinų nėra sintezuojami ląstelių už uždegiminio atsako ir imuninio atsako. Cytokine genų išraiška prasideda reaguojant į skverbimą į patogenų kūną, antigeninį dirginimą ar audinių pažeidimą. Vienas iš galingiausių citokinų sintezės induktorių yra bakterijų ląstelių sienų komponentai: LPS, peptidoglikans ir muramildepeptidai. Produktai iš uždegiminių citokinų yra daugiausia monocitai, makrofagai, t ląstelės ir tt, priklausomai nuo poveikio uždegiminiam procesui citokinų, jis yra padalintas į dvi grupes: pro-uždegiminis (IL-1, IL-6, IL-8 , TNF-A, IFN-G) ir priešuždegiminis (IL-4, IL-10, TGF-B). Interleukin-1 (IL-1) yra imunoreguliacinis tarpininkas, izoliuotas pagal uždegimines reakcijas, audinių pažeidimus ir infekcijas (infekcinė citokinas). IL-1 atlieka svarbų vaidmenį aktyvuojant T-ląsteles, kai jie bendrauja su antigenu. Žinomos 2 IL-1 tipai: IL-1A ir IL-1B, dviejų skirtingų genų lokalizų produktai, esantys 2 žmonių chromosomoje. IL-1A lieka ląstelės viduje arba gali būti membranos forma, nedidelė suma pasirodo ekstraląstelinėje erdvėje. Membranos formos vaidmuo IL-1A yra signalo įjungimo signalus iš makrofagų t-limfocitų ir kitų ląstelių pertvarkymo metu. IL-1A - pagrindinis trumpalaikių veiksmo tarpininkas. IL-1B, skirtingai nei IL-1A, aktyviai išskiria ląstelės, veikiančios sistemiškai ir vietoje. Iki šiol yra žinoma, kad IL-1 yra vienas iš pagrindinių uždegiminių reakcijų tarpininkų, stimuliuoja T ląstelių platinimą, padidina IL-2 receptorių išraišką ir IL-2 gamybą t-ląstelių gamybai. IL-2 kartu su antigenu, sukelia aktyvavimą ir sukibimą neutrofilų, stimuliuoja kitų citokinų (IL-2, IL-3, IL-6 ir tt) suaktyvintos t ląstelės ir fibroblastai, stimuliuoja fibroblastų ir endotelio platinimą formavimąsi ląstelės. Sistemiškai IL-1 veikia sinergiškai su TNF-A ir IL-6. Kai IL-1 pabaiga padidėja, IL-1 paveikia hipotalamo ląsteles ir sukelia kūno temperatūros, karščiavimo, mieguistumą, sumažėjimą apetito ir stimuliuoja kepenų ląsteles į ūminių fazių baltymų (CRP, amiloido a , A-2 makrobulino ir fibrinogeno). IL4 (5 chromosoma). Slopina makrofagų aktyvavimą ir blokuoja daug reiškinių, kuriuos stimuliuoja IFG, pavyzdžiui, IL1 produktai, azotas ir prostaglandinai, vaidina svarbų vaidmenį priešuždegiminių reakcijų, turi imunosupresinį poveikį. IL6 (chromosoma 7), vienas iš pagrindinių pro-uždegiminių citokinų, yra pagrindinis etapas galutinio etapo didinimo ir makrofagų diferenciacijos, galingas stimuliatorius ūminių fazių baltymų kepenų ląstelių produktų. Viena iš pagrindinių funkcijų IL6 stimuliacijos antikūnų in vivo ir in vitro. IL8 (4 chromosoma). Nurodo chemocheses tarpininkų sukelia tikslinę migraciją (hemotaxis) leukocitus į uždegimą dėmesio. Pagrindinė "IL10" pirmojo tipo pyragų citokinų gamybos (TNFB, IFG) ir aktyvintų makrofagų (TNF-A, IL1, IL12). Šiuo metu pripažįstama, kad imuninio atsako tipai yra susiję su vienu iš limfocitų aktyvinimo variantų su vyraujančiu tlimfocitų klonų dalyvavimą pirmojo tipo pagalbininkų (th2) arba antrojo tipo (th3). T2 ir T3 produktai neigiamai veikia priešingų klonų aktyvavimą. Pernelyg didelis tam tikrų klonų aktyvinimas gali siųsti imuninį atsaką į vieną iš plėtros parinkčių. Lėtinis th klonų aktyvinimo disbalansas lemia imunopatologinių sąlygų kūrimą. Cytokinų pokyčiai BDS gali būti tiriamas įvairiais būdais, nustatant jų kraujo lygį arba in situ. IL1 lygis padidėja su visomis uždegiminėmis žarnyno ligomis. Skirtumai tarp NIK ir BC yra padidinti IL2 išraišką. Jei NPP aptinkamas sumažintas arba įprastas IL2 lygis, tada BC aptinkamas padidintu lygiu. IL4 turinys didėja su NYM, o su BC jis lieka normalus arba net mažėja. IL6 lygis tarpininkaujant su aštriomis fazių reakcijomis taip pat didėja su visomis uždegimo formomis. Gauti duomenys, susiję su citokino profiliu, suteikė galimybę išreikšti prielaidą, kad dvi pagrindinės lėtinės pavarų dėžės formos pasižymi įvairiais citokinų aktyvinimu ir išraiška. Tyrimų rezultatai rodo, kad pacientams pastebėta citokinų profilis yra labiau suderinamas su TH3 profiliu, o pacientams, sergantiems BC, th2 profilis turėtų būti laikoma labiau būdinga. Šios hipotezės patrauklumas apie th2 ir th3 profilių vaidmenį taip pat susideda iš to, kad citokinų naudojimas gali pakeisti imuninį atsaką į vieną ar kitą kryptį ir paskatinti atleisti citokinų likutį. Tai gali būti patvirtinta, ypač naudojant IL10. Tolesni tyrimai turėtų parodyti, ar citokinų atsakas yra antrinis reiškinys, atsakydamas į dirginimą arba, priešingai, atitinkamų citokinų išraiška lemia kūno reaktyvumą su vėlesniais klinikiniais apraiškomis. Dar nebuvo atliktas citokinų lygio tyrimas vaikams. Šis dokumentas yra pirmoji mokslinis tyrimo dėl citokino statuso tyrimo metu BDS vaikams. Šio darbo tikslas buvo makrofagų humoralinio aktyvumo tyrimas su lygių apibrėžimu (IL1A, IL8) kraujyje vaikams nuo NIAC ir BC, taip pat jų dinamika nuo gydymo fone. Nuo 2000 iki 2002, 34 vaikas nuo NIC ir 19 vaikų nuo BCS tarp 4 ir 16 metų amžiaus buvo išnagrinėta nuo 2000 iki 2002 iš Gastroenterologijos Rusijos vaikų klinikinės ligoninės katedros. Diagnozė buvo patikrinta analogiškai, endoskopiškai ir morfologiškai. IL1A pro-uždegiminių citokinų tyrimas, IL8 buvo atliktas fermento imunosay (ELISA) metodu. Norėdami nustatyti IL1A koncentraciją, IL8 naudojo LLC "Tsitokin" (Sankt Peterburgo, Rusijos) gamybos testus. Analizė buvo atlikta Emunopharmakologijos laboratorijoje Labai grynų biopreparatų mokslinio centro (laboratorijos vadovas) laboratorijoje. Tyrimo metu gauti rezultatai atskleidė didelį padidėjimą IL1A, IL8 lygių per paūmėjimo laikotarpiu, išreikštas didesniu mastu vaikams nuo NYM, nei vaikai su BC. Iš paūmėjimo, pro-uždegiminių citokinų kiekis yra sumažintas, tačiau nepasiekia normų. NYM, IL-1A lygiai, IL-8 buvo iškeltos 76,2% ir 90% vaikų, o remisijos laikotarpiu - 69,2% ir 92,3%, atitinkamai. Be BC, IL-1A lygiai, IL-8 yra padidėjusi per 73,3% ir 86,6% vaikų, ir per atleidimo laikotarpį - 50% ir 75%, atitinkamai.

Priklausomai nuo ligos sunkumo, vaikai buvo gauti gydant aminoalcilates arba gliukokortikoidais. Gydymo pobūdis labai paveikė citokinų dinamiką. Atsižvelgiant į gydymo fone su aminoalcilatais, pro-uždegiminių citokinų lygiai vaikų grupėje iš NIAC ir BC žymiai viršijo kontrolės grupės tuos. Tuo pačiu metu vaikų grupėje buvo pastebėti didesni tarifai iš NIAC grupės. Su nymu gydymo fone su aminoalcilates IL1A, IL8 padidėjo 82,4% ir 100% vaikų, atitinkamai, o su gliukokortikoidiniais terapija 60% vaikų tiek citokinų. Su "BC IL1A", IL8 padidėja prieš gydymo fone su aminoalcilatais visuose vaikuose, ir gliukokortikoidinės terapijos 55,5% ir 77,7% vaikų, atitinkamai. Taigi šio tyrimo rezultatai rodo didelį dalyvavimą patogenetiniam imuninės sistemos makrofaginio elemento daugumoje vaikų su NIC ir BC. Šiame tyrime gauti duomenys iš esmės nesiskiria nuo suaugusių pacientų tyrimo metu gautų duomenų. IL1A ir IL8 lygių skirtumai pacientams, sergantiems NIAC ir BC, yra kiekybiniai, bet ne kokybiniai, kurie siūlo nespecifinį šių pokyčių pobūdį dėl lėtinio uždegiminio proceso eigos. Todėl šie rodikliai neturi diagnostinės vertės. Dinamiško IL1A ir IL8 žalos tyrimo rezultatai yra pateisinami didesniu gliukokortikoidinės vaisto terapijos veiksmingumu, palyginti su gydymu su aminoalcilam. Pateikti duomenys yra pirmojo etapo su citokinų statuso su BIS tyrimo rezultatas. Reikalingas tolesnis problemos tyrimas, atsižvelgiant į kitų uždegiminių ir priešuždegiminių citokinų rodiklius.

Azoto oksido ir citokinų vaidmuo plėtojant ūminį plaučių žalos sindromą.

Studijuojant šią problemą užsiima T.a. Shumatova, V.B.Shumatov, E.V. Martelova, L.G.Sukhotepelya: Anesteziologijos katedra ir Vladivostok valstijos medicinos universiteto atgaivinimas. Ūminės žalos sindromas plaučiams (suaugusiųjų kvėpavimo sutrikimų sindromas, RDSV) yra viena iš sunkiausių ūmaus kvėpavimo nepakankamumo formų, atsirandančių dėl sunkių sužalojimų, sepsio, peritonito, pankreatito fone, gausių kraujo netekimo, siekio, Po plačių veiksmų intervencijų ir 50-60% atvejų, dėl kurių miršta. Šie RDSV patogenezės tyrimai, ankstyvos diagnostikos kriterijų kūrimas ir sindromo prognozė yra nedaug, yra gana prieštaringa, o tai neleidžia plėtoti liekno diagnostikos ir terapinės koncepcijos. Nustatyta, kad RDSV yra pagrįstas plaučių kapiliarų endotelyje ir alveolio epiteliumu, kraujo reologinių savybių pažeidimas, vedantis į sąsajos ir alveolinio audinio edemos, reiškinių reiškinius, atelektazę, plaučių hipertenziją. Pastarųjų metų literatūra atsirado pakankamai informacijos apie universalią ląstelių ir audinių metabolizmo reguliatorių - azoto oksidą. Palūkanos azoto oksidu (NO) pirmiausia yra dėl to, kad jis dalyvauja dėl funkcijų rinkinio, įskaitant kraujagyslių toną, širdies susitraukimų dažnį, trombocitų agregaciją, neurotransmisiją, ATP ir baltymų sintezę, imuninę apsaugą. Be to, priklausomai nuo molekulinių tikslų pasirinkimo ir sąveikos su juo pasirinkimu, ne turi žalingą poveikį. Manoma, kad ląstelių aktyvinimo pradžios mechanizmas yra nesubalansuotas citokinemija. Citokinai yra tirpūs peptidai, atliekantys imuninės sistemos tarpininkų funkcijas ir teikiant ląstelių bendradarbiavimą, teigiamą ir neigiamą imunoreguliavimą. Mes stengėmės susisteminti literatūroje pateiktą informaciją apie ne ir citokinų vaidmenį ūmaus plaučių žalos sindromo kūrime. Netirpsta vandenyje ir dujų riebalai. Jo molekulė yra nestabilus laisvos radikalus, lengvai difuzuoja į audinį, absorbuojamas ir sunaikinamas taip greitai, kad jis gali turėti įtakos tik artimiausios aplinkos ląstelių. Nėra molekulės turi visas klasikinių pasiuntinių savybes: greitai pagamintas, veikia labai mažomis koncentracijomis, nutraukus išorinio signalo veikimą, greitai paverčia kitus junginius, oksiduojančius į stabilius neorganinius azoto oksidus: nitritą ir nitratą. NO gyvenimo trukmė audinyje yra pagal įvairius šaltinius nuo 5 iki 30 sekundžių. Pagrindiniai molekuliniai tikslai yra geležies turintys fermentai ir baltymai: tirpūs guanilatai, iš tikrųjų nitrookshyntazės (NOS), hemoglobino, mitochondrijų fermentų, Krebs ciklo fermentų, baltymų ir DNR sintezės. Nenustatyta sintezė organizme atsiranda azininių amino rūgšties L-arginino azymation transformacijomis pagal konkrečios NOS fermento įtaką ir yra tarpininkaujant kalcio jonų sąveika su malimodulinu. Fermentas yra inaktyvuotas mažomis koncentracijomis ir aktyviausiai yra 1 mikronų laisvo kalcio. Nustatyti du NOS izoformos: konstitucinės (CNOS) ir sukeltos (INOS), kurie yra įvairių genų produktai. "Calmodulin" priklausoma CNOS kalcis yra nuolat pateikiama ląstelėje ir prisideda prie nedidelio kiekio ne reaguojant į receptorių ir fizinę stimuliaciją. Ne, susidarė pagal šio izoformo įtaką, veikia kaip vežėjas daugelyje fiziologinių atsakymų. Kalcis-calmodulinnese priklausančios INOS susidaro įvairiose ląstelių tipuose, atsižvelgiant į uždegiminius citokines, endotoksinus ir oksidantus. Ši NOS izoforma yra transkribuojama pagal konkrečius genus 17 chromosomos ir skatina daugelio NO sintezę. Fermentas taip pat klasifikuojamas pagal trijų tipų: NOS-I (neuronal), NOS-II (makrofagarinis), NOS-III (endotelio). Fermentų, sintezuojančių ne, randama daugelyje plaučių ląstelių: bronchų epitelocitų, alveolocituose, alveoliniuose makrofaguose, riebalų ląstelėse, bronchų arterijų ir venų endothelocitų, lygių bronchų ir laivų miokuose, neholinerginiais neuronais. Bronchų ir žmogaus ir žinduolių alveolių ir žinduolių epithelicytes yra patvirtinta daugelyje tyrimų. Nustatyta, kad asmens kvėpavimo takų viršuje, taip pat žemesniems departamentams, dalyvauja ne. Tyrimai, atlikti pacientams, sergantiems tracheostomija parodė, kad ore, iškvėptas per tracheostomiją, dujų kiekis yra gerokai mažesnis, palyginti su nosies ir burnos ertmėmis. Endogeninės sintezė Ne smarkiai kenčia pacientams, kurie yra dirbtinėje plaučių ventiliacijoje. Tyrimai patvirtina, kad ne iš ryškumo momento išleidimas ir yra kontroliuojamas makšties nervo sistema. Duomenys buvo gauti, kad asmens kvėpavimo takų epitelio formavimas padidėja kvėpavimo organų uždegiminėmis ligomis. Dujų sintezė didėja dėl NOS aktyvavimo, sukeltos citokinų, taip pat endotoksinai ir lipopolizaiacharidų.

Šiuo metu žinoma, daugiau nei šimtas citokinų, kurie tradiciškai suskirstyti į kelias grupes.

1. Interleukins (IL-1 - IL18) yra sekretoriaus reguliavimo baltymai, teikiantys žiniasklaidos sąveiką imuninei sistemai ir jo ryšį su kitomis kūno sistemomis.

2. Interferonai (IFN-alfa, beta, gama) - antivirusiniai citokinai su sunkiu imunoreguliaciniu poveikiu.

3. Naviko nekrozės veiksniai (TNF alfa, beta) - citokinų ir reguliavimo veiksmų citokinai.

4. kolonistimuliuojantys veiksniai (G-CSF, M-CSF, GM-CSF) - augimo stimuliatoriai ir hematopoietinių ląstelių diferenciacija, reguliuojanti hemopoies.

5. Chemokines (IL-8, IL-16) - hemattractants leukocitų.

6. Augimo veiksniai - augimo reguliatoriai, įvairių audinių priedų ląstelių diferenciacija ir funkcinė veikla ("Fibroblast" augimo veiksnys, endotelio ląstelių augimo veiksnys, epidermio augimo veiksnys) ir augimo veiksnių transformavimas (TGF beta).

Šios biofeguliacinės molekulės nustato uždegimo ir imuninio atsako tipą ir trukmę, kontroliuoti ląstelių, hemopoies, angiogenezės, žaizdų gijimo ir daugelio kitų procesų platinimą. Visi mokslininkai pabrėžia, kad citokinai netenka specifiškumo antigenams. Eksperimentai su kultivuotų plaučių makrofagais ir nutukusių ląstelių parodė INOS susidarymą atsakant į gama interferoną, interleukin-1, naviko nekrozės koeficientą ir lipopolizakarijus. Inos ir CNOS išraiška dėl pro-uždegiminių citokinų buvo rasta alveolocitais gyvūnų ir žmonių. Pridedant epidermio augimo faktoriaus kultūrą, epitelio ląstelių funkcijos reguliatorių, sumažino tik sukelto fermento aktyvumą. Yra žinoma, kad, priklausomai nuo gamtos, citokinų įstatymas automatinis automatinis ląsteles patys gamintojams, Parakrinno - į kitas ląsteles - tikslai arba endokrinas - skirtingose \u200b\u200bląstelėse už savo produktų vietos. Tuo pačiu metu jie gali bendrauti tarpusavyje agonistinio ar antagonistinio principo, keičiant tikslinių ląstelių funkcinę būseną ir formuojant citokinų tinklą. Taigi citokinai nėra fragmentiški peptidai, tačiau holistinė sistema, kurios pagrindinės sudedamosios dalys yra pagamintos ląstelės, pati baltymai - citokinas, receptorius suvokia, ir tikslinė ląstelė. Nustatyta, kad plėtojant ūminę plaučių pažeidimą, padidėja pro uždegiminių citokinų lygis: IL-1, 6, 8, 12, TNF alfa, IFN alfa. Jų poveikis yra susijęs su laivų pratęsimo, jų pralaidumo padidėjimas ir skysčio kaupimasis į plaučių audinį. Be to, tyrimai rodo IFN gama ir TNF alfa sugebėjimą sukelti sukibimo molekulių išraišką - ICAM -1 žmogaus endothelocitų. Sukibimo molekulės, laikosi leukocitų, trombocitų ir endotelio ląstelių, sudaro "riedėjimo" (palietė) neutrofilus ir prisideda prie fibrino dalelių suvesavimo. Šie procesai prisideda prie kapiliarų kraujotakos pažeidimo, padidinti kapiliarų pralaidumą, paskatinti vietinį audinių edemą. Kapiliarinio kraujo tekėjimo sulėtėjimas prisideda prie ne išjungimo, kuris sukelia arteriolio rinkimą. Tolesnė leukocitų migracija uždegimo dėmesio centre kontroliuoja specialūs citokinai - chemokinai, kurie gaminami ir išskiriami ne tik aktyvintais makrofagais, bet ir endotelio ląstelėmis, fibroblastais, lygiais micitaisais. Jų pagrindinė funkcija yra tiekti neutrofilus į uždegimo dėmesio ir aktyvuoti jų funkcinę veiklą. Pagrindinė neutrofilų chemokinas yra IL-8. Jo stipriausi induktoriai patiekiami bakteriniai lipopolizaiacharidai, IL-1 ir TNFALF. R. Bahra et al. Manoma, kad kiekvienas neutrofilų trans-endeliacinės migracijos etapą reglamentuoja stimuliuojančios TNF alfa koncentracijos. Plėtojant ūminę žalą plaučiams endotheliciocitai laivų, epithelocitai iš bronchų ir alveolinių makrofagų yra aktyvuojami ir dalyvauja fazių sąveika. Dėl šios priežasties, viena vertus, yra jų mobilizavimas ir stiprinimas apsauginių savybių, ir, kita vertus, gali būti žala patys ląstelėms ir aplinkiniams audiniams. Daugelyje darbo parodyta, kad dalinio deguonies sumažinimo produktas gali kauptis uždegimo dėmesio centre - superoksido, aušintuvo inaktyvuoja vazoaktyvus poveikis Nr. Ne ir superoksido anijonas patiria greitą sąveiką su peroksinitrito formavimu, žalingu ląstelėmis. Ši reakcija padeda pašalinti ne nuo kraujagyslių ir bronchų sienos, taip pat nuo alveolocitų paviršiaus. Atstovauja tyrimo interesas, kuris parodė, kad tradiciškai laikoma toksiškumo tarpininku, peroksitinitas gali turėti fiziologinį poveikį ir sukelti kraujagyslių atsipalaidavimą per ne tarpininkaujant didėjančią CGMF kiekį kraujagyslių endotelio. Savo ruožtu peroksinitritas yra stiprus oksidantas, kuris gali sugadinti alveolinį epitelį ir plaučių paviršinio aktyvumo medžiagą. Jis sukelia baltymų ir membranų lipidų sunaikinimą, nuostoliai endoteliui didina trombocitų agregaciją, dalyvauja endotoksmato procesuose. Jo padidėjęs švietimas pažymėtas ūminės žalos sindromui plaučiams. Mokslininkai mano, kad sukeltos fermento sukelto fermento aktyvavimas skirtas nespecifinei organizmo apsaugai nuo įvairių patogeninių agentų, lėtina trombocitų agregaciją ir pagerina vietinį kraujotaką. Nustatyta, kad perteklinis kiekis ne slopina CNOS aktyvumą ląstelėse dėl sąveikos su superoksidu ir, galbūt dėl \u200b\u200bguanillatciklazų desensizavimo, dėl to sumažėjo CGMF ląstelėje ir padidinant Intracelulinio kalcio. Brett et al. ir Kooy et al. Analizuojant nitrooksidinių mechanizmų svarbą į RDSV patogenezę, inos, peroksinitritui gali būti atliekamas pagrindinis vaidmuo sindromo kūrimui, o nitortozinas yra pagrindinis produktas, kurio baltymai yra pagrindinis produktas . Cuthbertson et al. Manoma, kad ūminės plaučių žalos pagrindas yra ne ir peroksyntrito poveikis elaste ir interleukin - 8. Kobayashi C et al. Taip pat įsišaknijęs inos, interleukin-1, interleukin-6, interleukin-8 turinio padidėjimas bronchoalveolar skystyje pacientams, sergantiems ūminiu plaučių žalos sindromu. Meldrum C AUTO. Numatoma, kad į uždegiminių citokinų su plaučių makrofagais sumažėjo su RDSV pagal vietinių ne - L-arginino produktų substrato įtaką. Nustatyta, kad ūmaus žalos sindromo genezėje plaučiuose, kraujagyslių pralaidumas dėl citokinų poveikio - TNF alfa, GM-2, GM-CSF, monokloninių antikūnų iki CD3 limfocitų endotelio ląstelių. Plaučiai ir imunocitai yra dedami. Greitas ir stiprus plaučių laivų pralaidumo padidėjimas sukelia neutrofilų migraciją į plaučių audinį ir citotoksinių tarpininkų išleidimą, kuris yra pirmaujanti plėtojant plaučių patologinį pakitimus. Siekiant plėtoti ūminę plaučių pažeidimą, TNF alfa padidina neutrofilų sukibimą į kraujagyslių sieną, padidina jų migraciją audiniuose, prisideda prie struktūrinių ir metabolinių endothelocitų pokyčių, sutrikdo ląstelių membranų pralaidumą, suaktyvina kitų citokinų susidarymą ir. \\ T Eikosanoidai, sukelia apoptozę ir plaučių nekrozę. Gauti duomenys, nurodyti, kad LP įvedimo makrofagai daugiausia susiję su IFN gama ir yra sumažintas pagal IL-4, IL-10, TGF beta. Tačiau Kobayashi et al. Gauti duomenys, rodantys, kad IFN gama gali būti įtrauktas į gleivinės kvėpavimo takų epitelio atkūrimo procesus. Studijose, Hagimoto yra informacijos, kad epitelio ląstelės bronchų ir alveol atsako į TNF alfa arba Fas Ligand yra izoliuotas IL-8, IL-12. Šis procesas yra susijęs su Carrian branduolinio veiksnio aktyvavimo Fas Ligand.

Manoma, kad IL-8 yra vienas iš svarbiausių citokinų ūminės plaučių pažeidimų patofiziologijoje. Miller et al. Broncho-alveolinio skysčio tyrime pacientams, sergantiems RDSV, dėl SespSio fone, buvo nustatyta didelė IL-8 lygio padidėjimas, palyginti su kardiogeninių plaučių pacientais. Buvo pasiūlyta, kad pirminis šaltinis IL-8 yra šviesos, ir šis kriterijus gali būti naudojamas diferencinės diagnostikos sindromo. Grau et al. Manoma, kad plaučių kapiliarų endothelicitai yra svarbus citokinų šaltinis - IL-6, IL-8 su ūmaus pažeidimo plaučiais kūrimą. Goodman et al. Studijuojant citokino koncentracijos dinamiką į broncho-alveolinės plovimo dinamiką pacientams, sergantiems RDSV, labai padidėja IL-1BET, IL-8, monocytic chemotaktikos peptidas-1, epitelio ląstelių neutrofilų aktyvatorius, makrofaginis uždegiminis peptidas -1 alfa . Tuo pačiu metu autoriai mano, kad IL-1 beta turinio padidėjimas gali tarnauti kaip nepageidaujamo sindromo rezultatų žymeklis. Bauer et al. Buvo įrodyta, kad kontroliuoti į bronchoalveolar skysčio pacientams, sergantiems RDSV IL-8 gali būti naudojamas stebėsenos, IL-8 lygio sumažėjimas rodo nepalankų procesą. Daugeliui tyrimų taip pat pateikiama informacija, kad citokinų produktų lygis plaučių laivų endotelio paveikia ūminės plaučių pažeidimus ir kontrolę, kuri gali būti naudojama klinikinėje ankstyvos diagnozės praktikoje. Dėl galimų neigiamų pasekmių didinant uždegiminių citokinų kiekį pacientams, sergantiems RDSV, liudija Martin ir kt., Warner et al., Aktyvavo citokinų ir bakterijų endotoksinai alveolinės makrofagai didina sintezę Nr. Nė vienas iš bronchų ir alveolių, neutrofilų, riebalų ląstelių, endothelicitų ir lygių plaučių indų ir lygių miokalų gamybos lygis taip pat didėja, tikėtina, kad aktyvuojant Carra branduolinį veiksnį. Autoriai mano, kad NOS sukeltos azoto sukeltos Nr. NOS pirmiausia skirtas nespecifinei organizmo apsaugai. Pažymėjimas nuo makrofagų, ne greitai prasiskverbia bakterijas, grybus, kur slopina tris gyvybiniais fermentų grupėmis: H-elektro transportu, Krebs ciklą ir DNR sintezę. Ne dalyvauja ginant kūną paskutiniuose imuninio atsako etapuose ir yra oficialiai laikomas imuninės sistemos "bausmingu kardu". Tačiau kaupimasis ląstelėje nepakankamai dideliuose kiekiuose, ne turi žalingą poveikį. Taigi, kai ūmaus žalos šviesos citokinų sindromas ir ne yra pradėtos nuoseklios reakcijos grandinės, išreikštos sutrikusi mikrocirkuliacija, audinių hipoksijos, alveolio ir intersticinės edemos atsiradimas, plaučių metabolinės funkcijos pažeidimas. Todėl galima teigti, kad fiziologinių ir patofiziologinių mechanizmų citokinų ir ne yra perspektyvi kryptis mokslinių tyrimų ir toliau ne tik išplėsti idėjas apie RDSV patogenezę, bet ir nustatyti diagnostinius ir prognostinius žymenis Sindromas, plėtoti patogenetiškai pagrįstų terapijos įgyvendinimo variantai, kuriais siekiama sumažinti mirtingumą.

Citokinų nustatymo metodai.

Peržiūra skirta pagrindiniams šiuo metu naudojamų citokinų tyrimo metodams. Trumpai apibūdino metodų galimybes ir tikslą. Pateikiami įvairių metodų požiūrių į citokinų genų ekspresijos metodus nukleino rūgščių ir baltymų produktų lygiu, privalumai ir trūkumai. (Citokinai ir uždegimas. 2005 m. T. 4, Nr. 1. P. 22-27.)

Citokinai yra reguliavimo baltymai, kurie sudaro visuotinį mediatorių tinklą, būdingą tiek imuninę sistemą ir kitų organų ir audinių ląsteles. Kontroliuoti šios klasės reguliavimo baltymų vyksta visi ląstelių renginiai: proliferacija, diferenciacija, apoptozė, specializuota ląstelių funkcinė veikla. Kiekvienos citokino poveikis ląstelėse pasižymi playotropy, skirtingų tarpininkų poveikio spektras sutapimas ir, daugiausia galutinis funkcinė ląstelės būsena priklauso nuo kelių citokinų, veikiančių sinergiškai. Taigi citokinų sistema yra universali, polimorfinis reguliavimo tinklas tarpininkų, skirtų kontroliuoti proliferacijos, diferenciacijos, apoptozės ir funkcinės veiklos ląstelių elementų hematopoetinių, imuninės ir kitų homeostatinių kūno sistemų procesus. Metodai nustatant citokines 20 metų savo intensyvaus tyrimo praėjo labai greitas evoliucija ir šiandien yra visa sritis mokslinės žinios. Priešais citokinologijos mokslo darbuotojus darbo pradžioje yra klausimas dėl būdo pasirinkimo. Ir čia tyrėjas turi tiksliai žinoti, kokią informaciją jis turėjo pasiekti tikslą. Šiuo metu yra sukurtos šimtai įvairių citokinų sistemos vertinimo būdų, kurie suteikia įvairios informacijos apie šią sistemą. Įvertinkite citokines įvairiose biologinėse terpėse, gali būti naudojama speciali biologine veikla. Juos galima nustatyti kiekybiškai naudojant daugybę imunologinių metodų, naudojant poli ir monokloninius antikūnus. Be to, studijavo citokinų sekrecinių formų, jų ląstelių kiekį ir produktus srauto citofluotimetrijos metodų audiniuose, gali būti tiriamas vakarietiškas-blot ir imunohistochemijos in situ. Labai svarbi informacija gali būti gaunama studijuojant citokinų mRNR išraišką, MRNR stabilumą, MRNR ISOFORMs buvimą citokinų, natūralių antisensijos nukleotidų sekų. "Cytokine Genes" alelių variantų tyrimas gali suteikti svarbią informaciją apie genetiškai užprogramuotus aukštus ar mažus tam tikros tarpininko produktus. Kiekvienas metodas turi savo trūkumus ir jų privalumus, jo sprendimą ir nustatymo tikslumą. Šių niuansų tyrėjas nežinojimas ir nesusipratimas gali sukelti klaidingas išvadas.

Citokinų biologinio aktyvumo nustatymas.

Aptikimo istorija ir pirmieji žingsniai citokinų tyrime buvo glaudžiai susijęs su imunokompetentingų ląstelių ir ląstelių linijų auginimu. Tada buvo parodyta daugelio tirpių baltymų gamtos veiksnių reguliavimo poveikis (biologinis aktyvumas) dėl limfocitų proliferacinio aktyvumo, imunoglobulinų sintezės, dėl imuninės reakcijų kūrimo in vitro modeliuose. Vienas iš pirmųjų metodų nustatant biologinį aktyvumą tarpininkų yra nustatyti migracijos veiksnį žmogaus limfocitų ir jo slopinimo koeficientas. Kadangi citokinų biologinis poveikis atsirado įvairūs jų biologinės veiklos vertinimo metodai. Taigi, IL-1 buvo nustatomas įvertinant pelės timocytes proliferaciją in vitro, IL-2 - gebėjimas skatinti proliferacinį aktyvumą limfoblastus, IL-3 - už hematopoetinių kolonijų augimą in vitro, IL-4 - įjungta Poveikis judantis, stiprinti IA-baltymų išraišką, apie švietimo IgG1 ir IgE ir kt. Šių metodų sąrašas gali būti tęsiamas, jis nuolat atnaujinamas, nes nustatomas naujas tirpių veiksnių biologinis aktyvumas. Pagrindinis trūkumas yra nestandartiniai metodai, jų suvienijimo neįmanoma. Toliau kūrimas metodų, skirtų nustatyti citokinų biologinį aktyvumą, sukūrė daugelį ląstelių linijų, jautrių tam tikroms citokinui arba daugialypėms linijoms. Dabar dauguma šių citokinchsten ląstelių galima aptikti komerciškai paskirstytų ląstelių linijų sąrašuose. Pavyzdžiui, bandant IL-1A ir B, D10S ląstelių linija naudojama IL-2 ir IL-15 - CTLL-2 ląstelių linijai, IL-3, IL-4, IL-5, IL-9, IL -13, IL-13, GM-CSF - TF-1 ląstelių linija, už IL-6 - ląstelių linija B9, už IL-7 - ląstelių linija 2E8, TNFA ir TNFB - L929 ląstelių linija, už IFG - Widr ląstelių linija , už IL-18 - korinio linijos kg-1. Tačiau toks požiūris į imunoaktyviųjų baltymų tyrimą, kartu su gerai žinomais privalumais, pvz., Tikrosios brandžių ir aktyvių baltymų biologinio aktyvumo matavimas, aukštas atkuriamumas pagal standartizuotas sąlygas, turi savo trūkumus. Tai yra pirmiausia, ląstelių linijų jautrumas nėra vienas citokinas, bet keliems susijusiems citokinų, kurių biologinis poveikis sutampa. Be to, neįmanoma pašalinti kitų citokinų produktų indukcijos galimybės pagal tikslines ląsteles, kurios gali iškraipyti bandymo parametrą (kaip taisyklė, tai yra platinimas, citotoksiškumas, chemotaksis). Mes vis dar nežinome visų citokinų, o ne visas jų poveikis, todėl jis nėra įrodytas pats citokinas, bet bendras specifinis biologinis aktyvumas. Taigi biologinės veiklos vertinimas, nes bendras įvairių tarpininkų aktyvumas (nepakankamas specifiškumas) yra vienas iš šio metodo trūkumų. Be to, naudojant citokinching linijas, neįmanoma atskleisti neaktyvuotų molekulių ir susijusių baltymų. Taigi, tokie metodai neatspindi realių produktų daugeliui citokinų. Kitas svarbus ląstelių linijų naudojimo stoka yra ląstelių kultūros laboratorijos poreikis. Be to, visos ląstelės didėjančios procedūros, inkuruojančios su studijuojamais baltymais ir žiniasklaida, reikalauja didelių išlaidų. Taip pat reikėtų pažymėti, kad ląstelių linijos per ilgalaikį naudojimą reikia atnaujinimų ar pakartotinio sertifikavimo, nes dėl auginimo jie gali mutuoti ir keisti, o tai gali sukelti jų jautrumo pokyčius tarpininkams ir sumažinti tikslumą biologinės veiklos apibrėžimą. Nepaisant to, šis metodas idealiai tinka išbandyti konkrečią rekombinantinių tarpininkų biologinį aktyvumą.

Kiekybinis citokinų nustatymas su antikūnais.

Imunokompetencijos ir kitų tipų citokinų ląstelių citokinas yra išleidžiamas į interklertinę erdvę paracroids ir autokrtino signalizacijos sąveikos įgyvendinimui. Šių baltymų koncentracija serume arba kondicionuojamoje terpėje gali įvertinti patologinio proceso pobūdį ir apie tam tikrų ląstelių funkcijų perteklių ar trūkumo pacientui. Cytokinų nustatymo metodai su konkrečiais antikūnais yra labiausiai paplitusios šių baltymų aptikimo sistemos. Šie metodai praėjo per visą modifikacijų seriją naudojant skirtingus etiketes (radioizotope, fluorescencinį, elektrinį superiminescencinį, fermentą ir kt.). Jei radioIsotope metodai turi daug trūkumų, susijusių su radioaktyviosios etiketės naudojimu ir laiko ribotais laiku, naudojant paženklintus reagentus (pusinės eliminacijos trukmę), tada imunoassima metodai rado platesnį platinimą. Jie grindžiami netirpių fermentinės reakcijos produktų vizualizavimu, sugeria šviesą nuo žinomo bangos ilgio, kiekiais, lygiais nustatytos medžiagos koncentracijai. Antikūnai, taikomi kietam polimero pagrindui, naudojamos išmatuotų medžiagų surišimui ir vizualizavimui - antikūnai konjuguoti su fermentais, kaip taisyklė, šarminės fosfatazės arba krienų peroksidazės. Metodos privalumai yra akivaizdūs: tai yra didelis tikslumas nustatant standartizuotas sąlygas saugoti reagentus ir procedūras, kiekybinę analizę, atkuriamumą. Trūkumai apima ribotą apibrėžtų koncentracijų spektrą, dėl kurių visos koncentracijos viršija tam tikrą ribą, laikoma lygi jai. Pažymėtina, kad metodo vykdymui praleistas laikas skiriasi priklausomai nuo gamintojo rekomendacijų. Tačiau bet kuriuo atveju kalbame apie kelias valandas, būtinas inkubavimui ir reagentų plovimui. Be to, latentinė ir susijusi forma citokinų yra nustatomi, kurie, jų koncentracija, gali žymiai viršyti laisvas formas, daugiausia atsakingas už biologinį aktyvumą tarpininko. Todėl šis metodas pageidautina naudoti kartu su metodais, kaip įvertinti tarpininko biologinį aktyvumą. Kitas imunologinio metodo modifikavimas, kuris buvo plačiai naudojamas - elektrochemiluminescencinio metodas (EHL) baltymų apibrėžimas antikūnais, paženklinti rutenum ir biotiną. Šis metodas turi tokius privalumus, palyginti su radioizotope ir imuninimu ir imminaliu požiūriu: vykdymo paprastumas, trumpas technikos vykdymo laikas, plovimo procedūros, nedidelis mėginio tūris, daugybė citokinų koncentracijų serume ir kondicionuojamoje terpėje, didelio jautrumo serume metodo ir jo atkuriamumo. Nagrinėjamas metodas yra priimtinas naudoti tiek mokslinių tyrimų, tiek klinikinėse. Šis biologinės aplinkos citokinų vertinimo metodas grindžiamas srauto fluorimetrijos technologija. Tai leidžia vienu metu įvertinti mėginyje į šimtus baltymų. Šiuo metu sukūrė komercinius rinkinius, kad nustatytų iki 17 citokinų. Nepaisant to, šio metodo privalumus lemia jos trūkumai. Pirma, tai yra optimaliomis sąlygomis, skirtos nustatyti keletą baltymų, antra, citokinų produktai yra kaskados su produkto viršūnėmis skirtingais laikais. Todėl daugelio baltymų apibrėžimas vienu metu ne visada yra informatyvus. Bendras imunologinės masės metodų reikalavimas naudojant vadinamąjį Sumuštinis, yra kruopščiai parinkimas antikūnų pora, kuri leidžia nustatyti arba laisva arba susieta forma analizuojamo baltymo, kuris nustato šio apribojimo metodo, ir tai visada turėtų būti atsižvelgiama aiškinant gautus duomenis . Šie metodai nustato bendrą citokinų gamybą su skirtingomis ląstelėmis, tuo pačiu metu imunokompetentinės ląstelės antigenciniai produktai gali būti vertinami tik tariamai. Šiuo metu sukurta "Elispot" sistema (fermentų imunospot), kuri labai pašalina šiuos trūkumus. Šis metodas leidžia labai įvertinti citokinų gamybą atskirų ląstelių lygiu. Didelė šio metodo rezoliucija leidžia įvertinti antigenų stimuliuojamus citokinų produktus, kurie yra labai svarbūs vertinant konkretų imuninį atsaką. Kitas, plačiai naudojamas mokslo tikslais, yra intracelulinė citokinų apibrėžimas srauto citofluotimetrija. Nauda yra akivaizdi. Mes galime fenotipiškai apibūdinti citokinų gamybos ląstelių populiaciją ir (arba) nustatyti individualių ląstelių pagaminto citokino spektrą, o šio produkto santykinės kiekybinės charakteristikos. Tuo pačiu metu aprašytas metodas yra gana sudėtingas ir reikalauja brangios įrangos. Toliau pateikiami šie metodai, kurie daugiausia naudojami mokslo tikslais, yra imunohistocheminiai metodai, naudojant paženklintus monokloninius antikūnus. Privalumai yra akivaizdūs - citokinų produktų nustatymas tiesiogiai audiniuose (in situ), kur atsiranda įvairių imunologinių reakcijų. Tačiau nagrinėjami metodai yra labai sunkūs ir nesuteikia tikslių kiekybinių duomenų.

Citokinų nustatymas pagal fermento imunologinio masto metodą.

CJSC "Geriausia" vadovaujant Ryabicheva, N.A. Varaksin, N.V. Timofeeva, M.YU. Muzikos aktyviai dirba citokinų nustatymo kryptimi. Citokinai yra polipeptidų tarpininkų grupė, dažnai glikozilinta, kurių molekulinė masė yra nuo 8 iki 80 cd. Citokinai dalyvauja organizmo ir jo homeostazės formavimui ir reguliavimui. Jie dalyvauja visose humoralinio ir ląstelių imuninės atsako nuorodose, įskaitant imunokompetentų pirmtakų ląstelių diferenciaciją, antigeno, ląstelių aktyvinimo ir proliferacijos atstovavimą, sukibimo molekulių išraišką ir aštrių fazių atsaką. Kai kurie iš jų gali parodyti daug biologinio poveikio įvairioms tikslinėms ląstelėms. Citokinų poveikis ląstelių atliekamas šiais būdais: autokrtinas - ant ląstelių, sintezuojant ir išskiriant šį citokiną; Pariakrinno - ant ląstelių, esančių šalia gamintojų ląstelių, pavyzdžiui, uždegimo arba limfoidinio organo dėmesio; Endokrininė-nuotoliniu būdu - ant bet kokių organų ir audinių ląstelių po citokino į kraujotaką. Mokymas ir citokinų išsiskyrimas paprastai būna trumpai ir sunkiai reguliuojamas. Citokinai veikia ląstelę, surišantį prie konkrečių receptorių citoplazminės membranos, sukeldamas šį reakcijų kaskadą, sukeliančią indukciją, stiprinant arba slopinant daugelio genų genų skaičių. Dėl citokinų apibūdinamas sudėtingas tinklo veikimo pobūdis, kuriame vienos iš jų produktai turi įtakos daugelio kitų asmenų veiklos formavimui ar pasireiškimui. Cytokinai yra vietiniai tarpininkai, todėl patartina matuoti jų lygius atitinkamuose audiniuose po audinių baltymų iš atitinkamų organų arba natūralių skysčių biotų: šlapimas, ašarų skystis, dykumos kišenės, bronchoalveolio plovimas, makšties paslaptis, ejakuliacija , plaunamos iš ertmės, stuburo arba sinovizacinių skysčių ir kt. Papildoma informacija apie organizmo imuninę sistemą gali būti gaunama studijuojant kraujo ląstelių gebėjimą į citokinų produktus in vitro. Plazminiai citokino lygiai atspindi dabartinę imuninės sistemos būklę ir in vivo apsauginių reakcijų kūrimą. Periferinių kraujo mononukarų kultūros kultūros spontaniški produktai leidžia įvertinti atitinkamų ląstelių būklę. Padidėjęs spontaniškas citokinų gamyba rodo, kad ląstelės jau yra aktyvuotos in vivo antigenu. Padidinti citokino produktai leidžia įvertinti galimą atitinkamų ląstelių gebėjimą reaguoti į antigeninę stimuliaciją. Sumažintas in vitro citokinų indukcija, pavyzdžiui, gali būti vienas iš imunodeficito būsenos požymių. Todėl abu citokinų lygių koncentracija tiek cirkuliuojant kraujyje, tiek jų gamybai ląstelių kultūrų metu yra svarbūs viso kūno imunoročio savybių ir atskirų neaisomųjų vienetų funkcijoms. Iki šiol mažai mokslininkų grupės dalyvavo citokinų tyrime Rusijoje, nes biologiniai tyrimo metodai yra labai sunkūs ir importuojami labai brangūs imunocheminiai rinkiniai. Su turimų vietinių imunologinių rinkinių atsiradimu, praktikuojantys gydytojai eksponuoti vis labiau suinteresuoti mokytis citokinų profilio. Šiuo metu citokinų lygio įvertinimo diagnostinė reikšmė yra nustatyti savo koncentracijos didinimo ar mažėjimo faktą tam tikram pacientui su konkrečia liga. Be to, patartina nustatyti priešingų ir pro-uždegiminių citokinų koncentraciją patologijos plėtros dinamiką, įvertinti ligos eigos sunkumą ir prognozavimą. Pavyzdžiui, citokino kiekis periferiniame kraujyje nustatomas pagal paūmėjimo laikotarpius, atspindi patologinio proceso dinamiką su opinėmis ligomis ir kitomis virškinimo trakto ligomis. Anksčiau paūmėjimu, interleukin-1bet (IL-1BET), interleukin-8 (IL-8) turinio padidėjimas, tada padidėja interleukin-6 koncentracija (IL-6), gama interferonas (GAMMA INF) , naviko nekrozės faktoriaus -Ph (alfa fnf). Interleukin-12 (IL-12) koncentracija, Gamma INF, ALFA-FNO pasiekė didžiausią ligos viduryje, o aštrių fazių žymenų turinys per šį laikotarpį buvo kreipiamasi normaliomis vertėmis. Pasaulio piko metu alfa-TNF lygis gerokai viršija interleukin-4 (IL-4) turinį tiek serume, tiek tiesiogiai, esant nukentėjusiam šaliai esančioje zonoje, po kurio jis pradėjo palaipsniui mažėja. Kaip smarkiai fazės reiškiniai, atlyginimo procesų padidėjimas padidino IL-4 koncentracijos padidėjimą. Keičiant citokino profilį, galima įvertinti chemoterapijos efektyvumą ir galimybes. Vykdydami citokinoterapiją, pavyzdžiui, su alfa interferono (alfa-inf) terapija, būtina kontroliuoti tiek jo turinio lygį cirkuliuojant kraują ir antikūnų veikimą į "Alpha Inf". Yra žinoma, kad kai yra daug šių antikūnų, interferonoterapija ne tik nustoja būti veiksmingos, bet ir gali sukelti autoimunines ligas. Neseniai nauji vaistai buvo sukurti ir įgyvendinti praktikoje, vienaip ar kitaip kintant citokinų būklę kūno. Pavyzdžiui, už reumatoidinio artrito gydymą, siūloma vaistas, pagrįstas antikūnais su alfa-flops, skirta pašalinti alfa-flops, dalyvaujančias sunaikinant jungiamojo audinio sunaikinimą. Tačiau tiek mūsų duomenimis, tiek literatūros, toli nuo visų lėtinio reumatoidinio artrito pacientų, alfa-FNF lygis padidėjo, todėl šiems pacientų grupei, alfa-flo lygio sumažėjimas gali dar labiau pabloginti imuninės sistemos disbalansas. Taigi, teisinga citokinoterapija reiškia kontroliuoti citokinų būklę organizmo metu gydymo metu. Apsauginis pro-uždegiminių citokinų vaidmuo pasireiškia vietoje uždegimo dėmesio centre, tačiau jų sisteminiai produktai nesukelia infekcinio imuniteto vystymosi ir netrukdo bakterijų ir toksiško šoko kūrimui, kuris sukelia ankstyvą mirtingumą Chirurginiai pacientai, sergantys pūlingomis septinėmis komplikacijomis. Iš chirurginių infekcijų patogenezės pagrindas yra citokino kaskados, kuriame yra, yra draudžiama, ir dėl kitų - priešuždegiminių citokinų paleidimas. Šių dviejų priešingų pusiausvyra iš esmės lemia pūlingų septinių ligų srauto pobūdį ir rezultatus. Tačiau, nustatant kraujo koncentraciją vienoje citokine iš šių grupių (pavyzdžiui, alfa-TNF arba IL-4) nepakankamai atspindi viso citokinų balanso būklę. Todėl būtina slėpti kelių tarpininkų (ne mažiau kaip 2-3 priešingų pogrupių) lygį. "Vector-Geriausia" CJSC, šiuo metu sukuriami kiekybinio nustatymo reagentų rinkiniai ir serijiniai gaminami: naviko alfa nekrozės koeficientas (jautrumas - 2 pg / ml, 0-250 pg / ml); Gammos interferonas (jautrumas - 5 pg / ml, 0-2000 p / ml); Interleukin-4 (jautrumas - 2 pg / ml, 0-400 pg / ml); Interleukin-8 (jautrumas - 2 pg / ml, 0-250 pg / ml); receptoriaus antagonistas Interleukin-1 (IL-1R) (jautrumas - 20 pg / ml, 0-2500 pg / ml); Alfa interferonas (jautrumas - 10 pg / ml, 0-1000 pg / ml); Autoimuniniai antikūnai iki alfa interferono (jautrumas - 2 ng / ml, 0-500 ng / ml). Visi rinkiniai yra skirti nustatyti šių citokinų koncentraciją žmogaus biologiniais skysčiais, kultūros viršininkų studijuojant žmogaus ląstelių kultūrų gebėjimą in vitro citokinų. Analizės principas yra "sumuštinis" - tvirtinimo fazės trijų etapų (inkubacijos laikas - 4 val.) Arba dviejų etapų (inkubavimo laikas - 3,5 val. - 3,5 h) tablečių analizės. Analizė reikalauja 100 μl biologinio skysčio arba vienos skylės supervaitanto. Apskaitos rezultatai - spektrofotometriškai esant 450 nm bangos ilgiui. Visuose chromogeno rinkiniuose - tetrametilbenzidinas. Mūsų rinkinių tinkamumo laikas padidinamas iki 18 mėnesių nuo išleidimo dienos ir 1 mėnesio nuo naudojimo pradžios. Literatūros duomenų analizė parodė, kad citokinų kiekis kraujyje sveikų žmonių kraujo plazmoje priklauso nuo jų apibrėžimo ir regiono, kuriame gyvena šie žmonės. Todėl, norint išsiaiškinti įprastos citokinų koncentracijos vertes, mūsų regiono gyventojai analizavo atsitiktinių plazmos mėginius (nuo 80 iki 400 mėginių) praktiškai sveikų kraujo donorų, įvairių 18-60 metų amžiaus socialinių grupių be klinikinių apraiškų šiurkščios somatinės patologijos ir hbsag, antikūnų iki ŽIV, hepatito virusai B ir C.

Naviko alfa nekrozės veiksnys.

"Alpha-FLN" yra grojaraščio uždegiminis citokinas, susidedantis iš dviejų pailgos B-grandinių, kurių molekulinė masė yra 17 CD ir atlieka reguliavimo ir efektoriaus funkcijas imuniniame atsakyme ir uždegimu. Pagrindiniai "Alpha-Fnf" gamintojai yra monocitai ir makrofagai. Šis citokinas taip pat išleistas limfocitų ir kraujo granulocitų, natūralių žudikų, t-limfocitinių ląstelių linijų. Pagrindiniai Alfa kritimo induktoriai yra virusai, mikroorganizmai ir jų medžiagų apykaitos produktai, įskaitant bakterinį lipopolizakariją. Be to, kai kurie citokinai, pavyzdžiui, IL-1, IL-2, granulocitų makrofagai kolonistimuliavimo faktorius, alfa ir beta informacija, taip pat gali atlikti induktorių vaidmenį. Pagrindinės "Alfa" rudens biologinio aktyvumo kryptys: pasireiškia selektyvus citotoksiškumas kai kurių navikų ląstelių; Suaktyvina granulocitus, makrocages, endotelio ląsteles, hepatocitų (aštrų fazių baltymus), osteoklastus ir chondrocytes (kaulų ir kremzlės audinio rezorbcija), kitų uždegiminių citokinų sintezė; Stimuliuoja proliferaciją ir diferenciaciją: neutrofilai, fibroblastai, endotelio ląstelės (angiogenezės), hematopoetinės ląstelės, t- ir b-limfocitai; pagerina neutrofilų srautą nuo kaulų čiulpų kraujyje; Jis turi antituor ir antivirusinę veiklą in vivo ir in vitro; Dalyvauja ne tik apsaugančiose reakcijose, bet ir sunaikinimo procesuose bei su uždegimu susijusios reporacijos; Jis tarnauja kaip vienas iš audinių sunaikinimo tarpininkų, įprastų su ilgu, lėtiniu uždegimu.

Fig. 1. Alfa-Flo lygio pasiskirstymas

sveikų donorų plazmoje.

Paduotas lygis Alfa-FFO stebimas serume po trauminės būklės, su plaučių disfunkcijos, normalaus nėštumo, onkologinių ligų, bronchų astmos, pažeidimų. Alfa-kelionės lygis 5-10 kartų didesnis už normą pastebima lėtinės virusinio hepatito formos paūmėjimu. Virškinimo trakto ligų paūmėjimui, alfa nuotraukos koncentracija serumui viršija normą vidutiniškai 10 kartų ir atskirų pacientų - 75-80 kartų. Didelės alfa-FNF koncentracijos randamos smegenų skystyje pacientams, sergantiems išsėtine skleroze ir smegenų meningitu, ir pacientams, sergantiems reumatoidiniu artritu - sinoviniuose skystyje. Tai leidžia prisiimti alfa-flo dalyvavimą daugelio autoimuninių ligų patogenezėje. Alfa-flops aptikimo serume dažnis, net ir sunkus uždegimas, neviršija 50%, su sukeltais ir spontaniškais produktais - iki 100%. Alfa-Flo koncentracijos asortimentas buvo 0-6 pg / ml, reiškia - 1,5 pg / ml (1 pav.).

Gama interferonas.

Fig. 2. Gamma informacijos lygio pasiskirstymas

sveikų donorų plazmoje.

Interleukin-4.

IL-4 - glikoproteinas, kurio molekulinė masė yra 18-20 kD, natūralus uždegimo inhibitorius. Kartu su gama-info IL-4 yra pagrindinis citokinas, pagamintas pagal T-ląstelių (daugiausia tn-2-limfocitų). Jis palaiko th-1/2 balansą. Pagrindinės IL-4 biologinio aktyvumo kryptys: pagerina eozinofiliją, riebalų ląstelių kaupimą, IgG4 sekreciją, kurią sukelia TN-2-ląstelių humoralinis imuninis atsakas; Ji turi vietinę antimumoro veiklą, skatinančią citotoksinių t-limfocitų ir naviko infiltracijos gyventojus eozinofilais; Slopina citokinų išleidimą uždegimo (ALP-TNN, IL-1, IL-8) ir prostaglandinų iš aktyvintų monocitų, citokinų produktų TN-1 limfocitų (IL-2, gama infraraudonųjų spindulių ir tt).

Fig. 3. IL-4 lygio pasiskirstymas plazmoje

sveiki donorai.

Didesnis IL-4 kiekis tiek serume ir stimuliuojamuose limfocituose gali būti stebimas alerginėmis ligomis (ypač pasunkėjimo metu), pvz., Bronchinė astma, alerginis rinitas, polinitas, atopinis dermatitas, virškinimo trakto ligose. IL-4 lygis taip pat pastebimai auga pacientams, sergantiems lėtiniu hepatitu C (HGS). SVS paūmėjimo laikotarpiais jo skaičius padidėja beveik 3 kartus, palyginti su normomis ir atlaisvinant HGS, IL-4 lygis sumažėja, ypač dėl gydymo, atlikto rekombinantinio IL-2. IL-4 koncentracijos asortimentas buvo 0-162 pg / ml, vidutinis - 6,9 pg / ml, diapazonas yra normalus - 0-20 p / ml (3 pav.).

Interleukin-8.

IL-8 reiškia chemoks, yra baltymas su molekuliniu mastu 8 CD. IL-8 gamina mononukleriniai fagocitai, polimorfoidiniai leukocitai, endotelio ląstelės ir kitos rūšies ląstelės reaguojant į įvairias paskatas, įskaitant bakterijas ir virusus bei jų metabolizmo produktus, įskaitant uždegiminius citokines (pvz., IL-1, raides Fno). Pagrindinis interleukin-8 vaidmuo yra chemotaksio leukocitų padidėjimas. Jis atlieka svarbų vaidmenį ūminiu ir lėtiniu uždegimu. Padidėjęs IL-8 lygis pastebimas pacientams, sergantiems bakterinėmis infuzomis, lėtinėmis plaučių ligomis, virškinimo trakto ligomis. IL-8 lygis plazmoje padidėja pacientams, sergantiems sepsis, ir jos didelės koncentracijos koreliuoja su padidėjusiu mirtingumu. IL-8 turinio matavimo rezultatai gali būti naudojami gydymo pažangai kontroliuoti ir prognozuoti ligą. Taigi padidėjęs IL-8 kiekis buvo aptiktas ašarų skystyje visuose pacientams, kuriems yra palankus ragenos opos eiga. Visuose pacientams, sergantiems sudėtinga ragenos opų eiga, IL-8 koncentracija buvo 8 kartus didesnė nei pacientams, kuriems yra palanki ligos eiga. Taigi, pro-uždegiminių citokinų (ypač IL-8) kiekis ašarų skysčiu po ragenos opa gali būti naudojama kaip prognozinis kriterijus šiai ligai.

Fig. 4. IL-8 lygio pasiskirstymas

sveikų donorų plazma (Novosibirskas).

Remiantis mūsų ir literatūros duomenimis, sveiki žmonės kraujo serume IL-8 yra labai reti; Spontaniški IL-8 mononuklerinio kraujo produktai stebimi 62% ir sukelia - 100% sveikų donorų. IL-8 koncentracijos spektras buvo 0-34 p / ml, vidurkis - 2 pg / ml, diapazonas yra normalus - 0-10 pg / ml (4 pav.).

Fig. 5. IL-8 lygio pasiskirstymas plazmoje

sveiki donorai (Serbitsovsk).

Receptorių interleukin-1 antagonistas.

IL-1R nurodo citokines, yra oligopeptidas, kurio molekulinė masė yra 18-22 kd. IL-1 yra endogeninis IL-1 inhibitorius, pagamintas makrofagais, monocitais, neutrofilais, fibroblastais ir epitelinėmis ląstelėmis. IL-1R slopina IL-1PHUKINS ir IL-1BET biologinį aktyvumą, konkuruodamas su jais, kad būtų surišti į korinio ryšio receptorių.

Fig. 6. IL-1 lygio pasiskirstymas

sveikų donorų plazmoje

IL-1R produktai stimuliuoja daug citokinų, virusų produktų ir ūminių fazių baltymų. IL-1R gali būti aktyviai išreikšta uždegiminiais židiniais su daugeliu lėtinių ligų: su reumatoidiniu ir nepilnamečiu lėtiniu artritu, sisteminiu raudonais lupiais, išeminių smegenų pažeidimais, žarnyno uždegiminėmis ligomis, bronchų astma, pielonefritu, psoriaze ir kt. Sepsyje didžiausias IL-1R padidėjimas pastebimas - iki 55 ng / ml kai kuriais atvejais, ir nustatoma, kad padidėjusi IL-1R koncentracija koreliuoja su palankia prognoze. Aukštas IL-1 lygis stebimas moterims, kenčiančioms nuo didelio nutukimo lygio, ir šis lygis yra gerokai sumažintas per 6 mėnesius po liposukcijos. IL-1R koncentracijų asortimentas buvo 0-3070 pg / ml, vidutinis - 316 pg / ml. Diapazonas yra normalus - 50-1000 pg / ml (6 pav.).

Alfa interferonas.

"Alfa-Inf" yra monomerinis kreidos baltymas su 18 CD molekuliniu mastu, kuris yra sintezuojamas daugiausia leukocitais (limfocitais, monocitais). Ši citokinas taip pat gali būti gaminamas iš bet kokio tipo ląstelių, reaguojant į atitinkamą sužadinimą, galingas virusų infekcijas gali būti galingi stimuliatoriai alfa infliacija. "Alpha" informuoja: virusus ir jų produktus, tarp kurių pirmaujanti vieta užima dvigubą vietą, pagamintą viruso replikacijos metu, taip pat bakterijos, mikoplazmos ir pirmuzos, citokinų ir augimo veiksnių (pvz., IL-1, IL-2, \\ t Alfa -furnish, kolonijos teigiami veiksniai ir kt.). Pradinė organizmo antibakterinio reakcijos apsauginė reakcija apima "Alpha" ir "Beta" informacijos indukciją. Šiuo atveju ji gamina antigeną, pateikiančią ląsteles (makrofagais), kurie užėmė bakterijas. Interferonai (įskaitant "Alpha Inf") vaidina svarbų vaidmenį nespecifinei antivirusinio imuninio atsako nuorodoje. Jie pagerina atsparumą antivirusinį atsparumą, sukeltą fermentų sintezę, slopinančią nukleino rūgščių ir virusų baltymų formavimąsi. Be to, jie turi imunomoduliacinį poveikį, didina pagrindinio histokompetentingumo komplekso antigenų ląstelių išraišką. Alfa-info turinio pasikeitimas buvo atskleistas viruso etiologijos hepatitu ir ciroze. Virusinių infekcijų sunkinimo metu šio citokino koncentracija daugumoje pacientų žymiai padidėja ir rekonstrukcijos laikotarpiu jis sumažėja iki normalaus lygio. Parodomas priklausomybė nuo alfa-informacijos serumo lygio ir gravitacijos laipsnio ir gripo infekcijos trukmė.

Fig. 7. Alfa informacijos pasiskirstymas

sveikų donorų plazmoje.

Didėjantis alfa-informacijos koncentracijos padidėjimas, serume, sergančiame autoimuninėmis ligomis, pvz., Poliartritu, reumatoidiniu artritu, spondiloze, psoriaziniu artritu, reumatiniu polimalgija ir sklerodermija, sisteminis raudonasis lupus ir sisteminis vaskulitas. Aukštas šio interferono lygis taip pat stebimas atskirų pacientų per opinio ir tulžies ligos paūmėjimo. Alfa informacijos koncentracijos diapazonas sudarė 0-93 pg / ml, vidutiniškai 20 pg / ml. Diapazonas yra normalus - iki 45 p / ml (7 pav.).

Antikūnai su alfa inform.

Antikūnai ir alfa pažeidimai gali būti aptikta serume su somatine eritematine lupu. Spontaniškas antikūnų indukcija į Alpha Infrane taip pat pastebima serumuose pacientams, sergantiems įvairių formų vėžio navikų. Kai kuriais atvejais alfa infrastruktūros antikūnai buvo rasti serumuose ŽIV užsikrėtusių žmonių, taip pat smegenų skysčio ir serumo su meningito per ūminės fazės laikotarpiu, seros poliartrito lėtine forma.

Fig. 8. Antikūnų lygio pasiskirstymas į "Alpha Infra"

sveikų donorų plazmoje.

"Alfa Info" yra vienas iš veiksmingų antivirusinių ir antiviruočių terapinių vaistų, tačiau jo ilgalaikis naudojimas gali sukelti konkrečių antikūnų produktus su "Alpha Inf". Tai sumažina gydymo veiksmingumą, o kai kuriais atvejais jis sukelia įvairius šalutinius poveikius: nuo gripo kaip autoimuninių ligų vystymuisi. Atsižvelgiant į tai, su informacijos terapija, svarbu kontroliuoti antikūnų lygį alfa info paciento kūno. Jų švietimas priklauso nuo gydymo terapijos vartojamo vaisto tipo, gydymo trukmę ir ligos tipą. Antikūnų koncentracijų asortimentas iki alfa informacijos sudarė 0-126 ng / ml, reiškia - 6.2 ng / ml. Diapazonas yra normalus - iki 15 ng / ml (8 pav.). Cytokinų lygio įvertinimas naudojant reagentų rinkinius, serijiniu būdu pagamintus CJSC "Vector-Best", leidžia naują būdą ištirti kūno imuninės sistemos būklę klinikinėje praktikoje.

Citokinų pagrindu imunotropiniai vaistai.

Įdomus darbas. SS Simbirteva, specialiai švaraus Rusijos Sveikatos apsaugos ministerijos biologinių preparatų BNII GNII, Sankt Peterburgo). Titins gali būti skiriama naujam nepriklausomam organo funkcijų sistemai, kuri egzistuoja kartu su nervų ir endokrinine veikla Reglamentas ir pirmiausia susijęs su homeostazės išlaikymu į patogenų įvedimą ir audinių vientisumo sutrikimą. Ši nauja reguliavimo molekulių klasė buvo sukurta pobūdžio milijonais metų evoliucijos metais ir turi neribotas galimybes naudoti kaip narkotikus. Pagal imuninę sistemą citokinų, santykis tarp nespecifinių apsauginių reakcijų ir specifinio imuniteto, veikiančių abiem kryptimis. Citokino organizmo lygiu yra ryšys tarp imuninės, nervų, endokrininės, hematopo ir kitų sistemų ir padeda juos įtraukti į organizavimą ir apsauginių reakcijų reguliavimą. Intensyvaus citokinų tyrimo varomoji jėga visada buvo perspektyva savo klinikinio naudojimo perspektyva, skirta plačiai paplitusių ligų, įskaitant vėžį, infekcines ir imunologines ligas, gydymui. Rusijoje yra registruojami keli citokinų preparatai, įskaitant interferonus, teigiamus veiksnius, interleukins ir jų antagonistus, naviko nekrozės koeficientą. Visi citokinų vaistai gali būti suskirstyti į natūralų ir rekombinantinį. Natūralūs yra įvairaus gryninimo laipsnių, gautų iš stimuliacinių eukariotinių ląstelių kultūros terpės, daugiausia žmogaus ląstelių. Pagrindiniai trūkumai yra nedidelis valymo lygis, standartizacijos neįmanoma dėl didelio komponentų skaičiaus, kraujo komponentų naudojimas kraujo komponentų gamyboje. Matyt, citokinų terapijos ateitis yra susijusi su genų inžinerijos preparatais, gautais naudojant naujausius biotechnologijų pasiekimus. Per pastaruosius du dešimtmečius daugelio citokinų genai yra klonuoti ir rekombinantiniai analogai, visiškai pakartojant natūralių molekulių biologines savybes. Klinikinėje praktikoje yra trys pagrindinės citokinų naudojimo sritys:

1) citokinų terapija, skirta aktyvinti organizmo, imunomoduliacijos, ar papildymo endogeninių citokinų trūkumo,

2) anticicinio imunosupresinė terapija, skirta blokuoti biologinius veiksmus citokinų ir jų receptorių,

3) citokinų genoterapija, siekiant pagerinti antivinio imunitetą arba korekcijos genetinius defektus citokinų sistemoje.

Klinikoje galima naudoti keletą citokinų sisteminių ir vietinių programų. Sisteminis administravimas pateisina tais atvejais, kai būtina užtikrinti citokinų veiksmus keliuose organuose, kad būtų veiksmingesnis imunitetas arba aktyvintos tikslinės ląstelės, esančios skirtingose \u200b\u200bkūno dalyse. Kitais atvejais vietinis taikymas turi daug privalumų, nes leidžia jums pasiekti aukštą vietinę dabartinės pradžios koncentraciją, tikslingai paveikti tikslinį organą ir išvengti nepageidaujamų sisteminių apraiškų. Šiuo metu citokinai laikomi vienu iš perspektyviausių vaistų, skirtų naudoti klinikinėje praktikoje.

Išvada.

Taigi, šiuo metu, be abejo, citokinai yra esminiai imunopatogenezės veiksniai. Cytokinų lygio tyrimas leidžia gauti informaciją apie įvairių tipų imuniketų ląstelių funkcinę veiklą, I ir II tipų aktyvinimo procesų santykį, kuris yra labai svarbus diferencijai diagnozuojant skaičių infekcinių ir imunopatologinių procesų. Citokinai yra specifiniai baltymai, kuriais imuninės sistemos ląstelės gali keistis viena kitai ir įgyvendinti sąveiką. Šiandien buvo rasta daugiau nei šimtas skirtingų citokinų, kurie paprastai padalinta į uždegimą (provokuojančią uždegimą) ir priešuždegiminį (užkirsti kelią uždegimo plėtrai). Taigi citokinų biologinių funkcijų įvairovė yra suskirstyti į tris grupes: jie kontroliuoja imuninės sistemos vystymąsi ir homeostazę, stebi kraujo ląstelių augimą ir diferenciaciją (hematopopoperinės sistemos) ir dalyvauja nespecifinėmis kūno apsauginėmis reakcijomis. , turintys įtakos uždegiminiams procesams, kraujo krešėjimui, kraujo spaudimui.

Naudotų literatūros sąrašas.

S.V. Belmer, A.S. Simbirtai, O.V. Golovnko, L.V. Bubnova, L.M. Carpina, N.E. Schigolev, T.L. Mikhailova. / Rusijos valstybinis medicinos universitetas GSC Coloproctologija, Maskva ir gnilli ypač gryno bioprepretu, Sankt Peterburgas.

S.V. SENNIKOV, A.N. Silkov // Žurnalas "Citokinai ir uždegimas", 2005, Nr. 1, Nr. 1, Nr. 1. P.22-27.

T.G. Ryabicheva, N.A. Varaksin, N.V. Timofeeva, M.YU. Musknikovas, darbo medžiagos CJSC "Best".

A. S. S. Simbirstevas, ypač Rusijos Sveikatos apsaugos ministerijos, Sankt Peterburgo, Gnilli.

Ketlinsky S.A., Simbirtsev A. Gosnia Ypač grynas BiopreprePurg, Sankt Peterburgas.

T.A. Shumatova, V.B.Shumatov, E.V. Markelova, L.G.sukhotepelya. Anesteziologijos katedra ir Vladivostok valstijos medicinos universiteto atgaivinimas.

Darbas naudojo medžiagas iš svetainės http://humbio.ru/humbio/spid/000402c2.htm

tam tikri infekcinių ligų sukėlėjėms agentai. Taigi, "Norsulfazolas" ...

1. Antivirusiniai imuniteto molekuliniai korinio korinio mechanizmai, plėtros ir imunito modeliai

   Santraukos \u003e\u003e Medicina, sveikata

   ... "Svetainė" žymi konkrečią sritį apibrėžta. polipeptidas (antigenas), su kuriuo ... jos ankstyvieji etapai. Citokinų ir chemokinas. Kiti citokinų, be interferonų, ... jie pagamino jų vienam vienetui citokinų Nustato proliferacijos intensyvumą ir ...

2. Tyrinėkite kaulų čiulpų fibrozės vystymosi priežastis mieloproliferose ligose, analizuojant trombocitų veiksnių poveikį mezenchim in kamieninėms ląstelėms

   Namų darbas \u003e\u003e Medicina, sveikata

   Skirtingos koncentracijos; - Kiekybinis apibrėžimas Baltymai eksperimentinėms sistemoms ... lemia ilgalaikį veiksmą citokinasKas pagerina fibrozės procesą ... trombocitai. Taip pat padidėjo turinys citokinas Jis buvo atrastas šlapime ...

3. Tuberkuliozės patogenezė žmogui

   Santraukos \u003e\u003e Medicina, sveikata

   Tačiau galimas "Welimentary". Tam tikras Vaidmuo aerogeninės infekcijos vaidina ... vaidina, išskiria makrofagais ir monocitais citokinas - naviko nekrozės koeficientas (tnf). ... jonai, kiekviena ląstelė apibrėžta. Transportavimo medžiagos sistema ...

). Dėl to, kad jie aktyvavo arba moduliavo šios klasės ląstelių proliferacines savybes, jie buvo pavadinti imunocitu. Po to, kai jie tapo žinoma, kad šie junginiai sąveikauja ne tik su imuninės sistemos ląstelių, jų pavadinimas sumažėjo į citokinų, įskaitant kolonstituuojančio faktoriaus (CSF) ir daugelis kitų (žr vazoaktyvius agentus ir uždegimą).

Citokinai [graikai. Kytos. - Laivas čia - ląstelę ir Kineo. - juda, skatinant] - didelę ir įvairią mažo dydžio grupę (molekulinė masė nuo 8 iki 80 kDa) baltymų gamtos tarpininkų - tarpinių molekulių ("komunikacijos baltymai"), dalyvaujantys interpletiniame signalų perdavimo metu daugiausia imuninėje sistemoje. Citokinai yra naviko nekrozės veiksnys, interferonai, daugybė tarplunkių ir kitų citokinų, kurie yra sintezuojami limfocitais ir yra platinimo ir diferenciacijos, ypač hematopoetinių ląstelių ir ląstelių imuninės sistemos, yra vadinami limfinu. Terminas "Cytokine" siūloma S. Kenom et al. 1974 m

Visos imuninės sistemos ląstelės turi tam tikrų funkcijų ir veikia aiškiai nuoseklią sąveiką, kurią teikia specialios biologiškai veikiančios medžiagos - citokinai - imuninės reakcijos reguliatoriai. Citokinai yra specifiniai baltymai, kuriais įvairios imuninės sistemos ląstelės gali keistis vieni su kitais ir koordinuoti veiksmus. Cytokinų, veikiančių ląstelių paviršiaus receptorių, rinkinys ir kiekis yra "citokinų terpė" - atspindi sąveikos ir dažnai keičiančių signalų matricą. Šie signalai yra sudėtingi dėl didelio įvairių citokinų receptorių ir dėl to, kad kiekvienas citokinas gali suaktyvinti ar slopinti kelis procesus, įskaitant savo sintezę ir kitų citokinų sintezę, taip pat citokinų receptorių ląstelių formavimąsi ir išvaizdą . Dėl įvairių audinių, jo sveika "citokinų aplinka" yra būdinga. Daugiau nei šimtas skirtingų citokinų.

Citokinai yra svarbus elementas skirtingų limfocitų sąveikos tarpusavyje ir su fagocitais (4 pav.). Tai per citokines, kad T-pagalbininkai padeda koordinuoti įvairių ląstelių, dalyvaujančių imuniniame atsakyme veikimą.

Nuo atidarymo aštuntajame dešimtmetyje daugiau nei šimtas biologiškai aktyvių medžiagų buvo atrasta iki šiol. Įvairūs citokinai Reguliuoja imunocitų ląstelių proliferaciją ir diferenciaciją. Ir jei citokinų įtaka konkrečiuose procesuose buvo gerai išnagrinėti, tada duomenys apie citokinų poveikį apoptozei pasirodė gana neseniai. Jie turėtų būti atsižvelgiama į klinikinio naudojimo citokinų metu.

Intercellulinė signalizacija imuninei sistemai atlieka tiesioginio kontaktinio ląstelių sąveika arba naudojant tarpininkų tarpininkų sąveiką. Studijuojant imunikompetenčių ir hematopoetinių ląstelių diferencijavimą, taip pat tarpinės sąveikos sąveikos mechanizmus, formuojant imuninį atsaką ir didelę ir įvairią tirpių baltymų gamtos ir tarpininkų molekulių ("komunikacijos baltyčiais") grupę, dalyvaujančią tarpininkų perdavimo metu Signalai - atidaryta citokinai. Hormonai paprastai neįtraukiami į šią kategoriją remiantis endokrinine (ir ne Paracryn ar autokrininine) savo veiksmų pobūdžiu. (Žr Citokines: hormoninių signalų mechanizmus). Kartu su hormonais ir neurotiatoriais jie sudaro cheminio aliarmo kalbos pagrindą, pagal kurį audinių morfogenezė ir regeneracija reguliuojama daugialypiame organizme. Teigiamas ir neigiamas imuninio atsako reguliavimas, jie turi pagrindinį vaidmenį. Iki šiol asmuo buvo rastas ir mokėsi vienam ar kitam laipsniui, kaip minėta pirmiau, daugiau nei šimtai citokinų ir nuolat rodomi pranešimai apie naujų atidarymo. Kai kurioms, gaunami genų inžinerijos analogai. Citokinai veikia per citokinų receptorių aktyvavimą.

Dažnai citokinų padalijimas į daugybę šeimų atlieka ne jų funkcijomis, bet ir trimatės struktūros pobūdžiu, atspindintį specifinių ląstelių citokinų receptorių atitikties ir aminorūgščių seką (žr. " receptoriai į citokines "). Kai kurie iš jų gamina t ląstelių (žr. "T-ląstelių citokinų"). Pagrindinis citokinų biologinis aktyvumas yra imuninio atsako reguliavimas visuose jo vystymosi etapuose, kuriuose jie atlieka pagrindinį vaidmenį. Apskritai, visa didelė endogeninių reguliatorių grupė suteikia įvairius procesus, pvz. ,:

Citotoksiškumo indukcija nuo makrofagų,

Daugelis sunkios ligos padidina IL-1 ir FNO alfa lygį. Šie citokinai prisideda prie fagocitų aktyvavimo, jų migracijos į uždegimo vietą, taip pat uždegiminių tarpininkų - lipidų darinių, ty prostagland e2, tromboksanai ir trombocitų aktyvinimo koeficientas. Be to, jie tiesiogiai ar netiesiogiai sukelia arteriolių išplėtimą, lipnios glikoproteinų sintezę, įjunkite t- ir b limfocitus. IL-1 pristato IL-8 sintezę, kuri prisideda prie monocitų ir neutrofilų hemotaxis bei fermentų išėjimo nuo neutrofilų. Kepenys mažina albumino sintezę ir gerinant ūminio uždegimo fazės baltymų sintezę, įskaitant proteazių inhibitorius, papildo komponentus, fibrinogeną, cerullulzmin, feridin ir haptoglobiną. C-Jet baltymų lygis, kuris jungiasi prie pažeistų ir negyvų ląstelių, taip pat kai kurie mikroorganizmai, gali padidinti 1000 kartų. Taip pat galima žymiai padidinti amiloido A koncentraciją serume ir jo nusėdimo įvairiuose organuose, dėl kurių antrinė amiloidozė. Svarbiausias ūminio uždegimo etapo tarpininkas yra IL-6, nors IL-1 ir FNF alfa taip pat gali paskambinti aprašytus kepenų funkcijos pokyčius. IL-1 ir FNA alfa sustiprina vieni kitų įtaką vietos ir bendrų uždegimo apraiškų, todėl šių dviejų citokinų derinys net mažomis dozėmis gali sukelti poliorgano trūkumą ir nuolatinę arterinę hipotenziją. Bet kurios iš jų veiklos slopinimas pašalina šią sąveiką ir gerokai pagerina paciento būklę. IL-1 aktyvuoja T- ir B-limfocitus 39 * su 37 * s. IL-1 ir TNF alfa sukelia negyvos kūno masės sumažėjimą ir apetito praradimą, vedantį į talpyklą su ilga karščiavimu. Šie citokinai patenka į kraujotaką tik trumpą laiką, tačiau paaiškėja, kad pakanka pradėti IL-6 produktus. IL-6 nuolat yra kraujyje, todėl jos koncentracija yra labiau suderinama su karščiavimo ir kitų pasireiškimų infekcijos sunkumą. Nepaisant to, IL-6, priešingai nei IL-1 ir FNF alfa, nelaikomi mirtinais citokine.

Santrauka. Citokinai yra nedideli baltymai, veikiantys autokrynas (t. Y., ant jų ląstelės) arba paraconno (ant ląstelių). Šių labai aktyvių molekulių susidarymas ir išleidimas vyksta trumpai ir yra tvirtai reguliuojamas. Citokinai, kurie yra sintezuojami pagal limfocitus ir yra platinimo ir diferenciacijos reguliavimo, ypač hematopoetinių ląstelių ir ląstelių imuninės sistemos taip pat vadinamas limfinu ir

Šiame skyriuje bus svarstomas integruotas požiūris į citokinų sistemą, naudojant šiuolaikinius anksčiau aprašytus mokslinių tyrimų metodus.

Iš pradžių pristatysime pagrindines idėjas apie citokinų sistemą.

Citokinai šiuo metu laikomi proteinopeptido molekuliais, pagamintais įvairių kūno ląstelėmis ir atlieka tarpsektinės ir intersistemos sąveiką. Citokinai yra universalūs ląstelių gyvavimo ciklo reguliatoriai, jie kontroliuoja diferenciacijos, platinimo, funkcinio aktyvinimo ir apoptozės procesus.

Imuninės sistemos ląstelių citokinai vadinami imunocitais; Jie yra tirpių peptidų tarpininkų, reikalingų jos kūrimui, eksploatavimui ir sąveikai su kitomis kūno sistemomis, klasė (Kovalchuk L.V. ir kt., 1999).

Kaip reguliavimo molekulės, citokinų atlieka svarbų vaidmenį įgyvendinant įgimtą ir prisitaikančią imunitetą, užtikrinti jų santykius, kontroliuoti hemopoijas, uždegimą, žaizdų gijimą, naujų kraujagyslių (angiogenezės) ir daugelio kitų gyvybiškai svarbių procesų formavimąsi.

Šiuo metu yra keletas skirtingų Citokinų klasifikacijų, kuriose atsižvelgiama į jų struktūrą, funkcinę veiklą, kilmę, citokinų receptorių tipą. Tradiciškai pagal biologinį poveikį atliekamos šios citokinų grupės.

1. Interleukins.(IL-1-IL-33) - Imuninės sistemos sekretroniniai reguliavimo baltymai, teikiant žiniasklaidos sąveiką imuninei sistemai ir jo ryšiui su kitomis kūno sistemomis. Interleukins yra atskirtos funkciniu aktyvumu dėl limfocitų, reguliavimo citokinų ir kt.

3. Navikų nekrozės veiksniai (FLN)- Citokinai su citotoksiniais ir reguliavimo veiksmais: FNO ir limfotoksinai (LT).

4. Hematopoetiniai ląstelių augimo veiksniai- stiebo ląstelių augimo koeficientas (rinkinys - ligandas), IL-3, IL-7, Il-11, eritropoetinas, granulociatinis-makrofaginė kolonysKondilamento faktorius - GM-CSP, Granulocitinis KSF - p. KSF, makrofaginis

kSF - M-KSF).

5. Chemokina.- C, SS, CXC (IL-8), SH3C - chemotaxis reguliatoriai įvairių ląstelių tipų.

6. Nelmano augimo veiksniai- įvairių audinių priedų augimo reguliatoriai, diferenciacija ir funkcinė veikla ("Fibroblast" augimo faktorius - FRF, endotelio ląstelių augimo veiksnys, epidermio augimo faktorius - EPIDERMIS EF) ir augimo veiksnių transformavimas (TFRβ, TFRα).

Be kita ko, pastaraisiais metais veiksnys, slopinantis makrofagų migraciją (migracijos slopinantis veiksnys - mitas), kuris laikomas neurogormonu su citokino ir fermentų aktyvumu (Suslov A.P., 2003; Kovalchuk L.V. ir kt.,

Citokinai skiriasi struktūra, biologinė veikla ir kitos savybės. Tačiau kartu su citokinų skirtumų bendrosios savybėsŠios bioreguliacinių molekulių klasė.

1. CiTokinai paprastai yra glikozilintos vidutinės molekulinės masės polipeptidai (mažiau nei 30 kD).

2. CiTokinai gaminami imuninės sistemos ir kitų ląstelių ląstelės (pavyzdžiui, endotelium, fibroblastai ir kt.) Reaguodama į aktyvinamąjį stimulą (patogenines molekulines struktūras, antigenus, citokines ir kt.) Ir dalyvauja įgimtų ir įgimtų reakcijų. Prisitaikanti imunitetas, reglamentuojantis jų stiprumą ir trukmę. Kai kurie citokinai yra sintezuojami.

3. citokinų sekrecija yra trumpalaikis procesas. Citokinai neišsaugomi kaip informuoti molekulės ir jų

sintezė prasideda visada su genų transkripcija. Ląstelės gamina citokines mažos koncentracijos (picogramai mililitre).

4. Daugeliu atvejų citokinai gaminami ir veikia į tikslines ląsteles, esančias artimai arti (trumpalaikis veiksmas). Pagrindinė citokino vieta - Intercellulinės sinaptos.

5. Atleidimascitokine sistemos pasireiškia tuo, kad kiekvienas ląstelių tipas gali pagaminti kelis citokines, ir kiekvienas citokinas gali būti išskiriamas įvairių ląstelių.

6. Visi citokinai būdingi pleotropy,arba veiksmų polieklumas. Taigi, uždegimo požymių pasireiškimas priklauso nuo IL-1, FNOα, IL-6, IL-8. Funkcijų dubliavimas užtikrina citokinų sistemos patikimumą.

7. citokinų poveikis tikslinėms ląstelėms tarpininkaujama labai specifiniais visapinčiais membraniniais receptoriais, atstovaujančiais transmembrane glikoproteinus, kurį sudaro kaip taisyklė, daugiau nei vienas subvienetas. Receptorių ekstraląstelinė dalis yra atsakinga už citokino privalomą. Yra receptorių, kurie pašalina perteklinius citokines patologinį dėmesį. Tai yra vadinamieji receptoriai. Tirpūs receptoriai yra ekstraląstelinės membranos receptorių domenas, atskirtas fermentu. Tirpūs receptoriai gali neutralizuoti citokinų, dalyvauti transportuojant juos į uždegimo ir pašalinant nuo kūno dėmesio.

8. CYTOKINES. \\ T darbas su tinklo principu.Jie gali veikti koordinuojami. Daugelis funkcijų, priskirtų originaliam citokinui, kaip paaiškėjo, yra dėl sutartų veiksmų kelių citokinų. (Sinergizmas. \\ Tveiksmai). Cytokinų sinerginės sąveikos pavyzdžiai yra uždegiminių reakcijų stimuliavimas (IL-1, IL-6 ir FNO), taip pat IgE sintezės

(IL-4, IL-5 ir IL-13).

Kai kurie citokinai sukelia kitų citokinų sintezę (kaskada).Cytokinų veiksmų kaskadoje yra būtina uždegiminių ir imuninių reakcijų kūrimui. Kai kurių citokinų gebėjimas sustiprinti ar atlaisvinti kitų produktų produktus, nustato svarbius teigiamus ir neigiamus reguliavimo mechanizmus.

Cytokinų antagonistinis poveikis, pvz., IL-6 produktai, reaguojant į FNO koncentracijos padidėjimą

neigiamas reguliavimo mechanizmas stebėti šio tarpininko plėtros uždegimo metu.

Tikslinių ląstelių funkcijų citokinų reguliavimas atliekamas naudojant autokriją, paracryn arba endokrininius mechanizmus. Kai kurie citokinai (IL-1, IL-6, FNFα ir kt.) Geba dalyvauti įgyvendinant visus išvardytus mechanizmus.

Į ląstelių atsakymas citokino poveikio priklauso nuo kelių veiksnių:

Nuo ląstelių tipo ir jų pradinės funkcinės veiklos;

Nuo vietinės citokino koncentracijos;

Nuo kitų tarpininkų molekulių buvimo.

Taigi, gamybos ląstelės, citokinai ir jų specifiniai receptoriai į tikslines ląsteles sudaro vieną žiniasklaidos tinklą. Tai yra reguliavimo peptidų, o ne atskirų citokinų rinkinys, nustato galutinį ląstelių atsakymą. Šiuo metu citokinų sistema laikoma visuotiniu reguliavimo sistema holistinio organizmo lygiu, kuris užtikrina apsauginių reakcijų kūrimą (pvz., Infekcijai).

Pastaraisiais metais buvo idėja, susijusi su citokinų sistema:

1) gamybos ląstelės;

2) tirpios citokinai ir jų antagonistai;

3) Tikslinės ląstelės ir jų receptoriai (7.1 pav.).

Įvairių citokinų sistemos sudedamųjų dalių pažeidimai sukelia daugybę patologinių procesų, todėl šioje reguliavimo sistemos defektai yra svarbūs tinkamai formuluoti diagnozę ir paskirti tinkamą terapiją.

Iš pradžių apsvarstykite pagrindinius citokinų sistemos komponentus.

Citokinų ląstelių gamintojai

I. Pagrindinė citokinų gamintojų grupė prisitaikanti imuninis atsakas yra limfocitai. Liaudies ląstelės nėra išskiriamos citokinų. Kai antigeno atpažinimas ir su receptorių sąveika (CD28-CD80 / 86 už T-limfocitai ir CD40-CD40L b-limfocitų), ląstelės yra suaktyvintos, todėl citokinų genų transkripcija, transliacija ir sekrecijos glikozilintų peptidų transkripcijos Intercellulinė erdvė.

Fig. 7.1.Citokinų sistema

CD4 T-pagalbininkai yra atstovaujami pagal paraiškas: TH0, TH1, TH2, TH17, TFH, kuris skiriasi išskiriamų citokinų spektro reaguojant į įvairius antigenus.

"TH0" sukuria platų citokinų asortimentą labai mažomis koncentracijomis.

Diferenciacijos kryptis.nustato dviejų imuninės atsako formų raidą su humoralinių ar ląstelių mechanizmų vyraujančia.

Antigeno pobūdis, jo koncentracija, lokalizacija ląstelėje, antigenų pristatymo ląstelių tipą ir tam tikrą citokinų rinkinį reguliuoja diferenciacijos kryptį.

Dendritinės ląstelės po fiksavimo ir antigeno apdorojimo yra antigeniniai peptidai th0 ląstelės ir gamina citokines, reguliuojančias jų diferenciacijos kryptį į efektyvumo ląsteles. Atskirų citokinų vaidmuo šiame procese atsispindi Fig. 7.2. IL-12 skatina IFNγ T-limfocitų ir] sintezę. IFNU pateikia diferenciaciją iš jūsų1, kuris pradeda išskirti citokines (IL-2, IFNU, IL-3, FNO, limfotoksinai), reglamentuojančius reakcijų į intracelulinius patogenus kūrimą

(Lėtai tipas padidėjęs jautrumas (GZT) ir įvairių tipų ląstelių citotoksiškumo).

IL-4 suteikia th0 diferencijuojant th2. Aktyvinta TH2 gamina citokines (IL-4, IL-5, IL-6, IL-13, ir tt), kuri nustato B-limfocitų platinimą, jų tolesnį diferenciaciją į plazmos ląsteles, ir anti-oro genezės reakcijų kūrimą , daugiausia dėl ekstraląstelinių patogenų.

IFNA neigiamai koreguoja th2 ląstelių funkciją ir, priešingai, IL-4, IL-10, išskiria T2, slopina th1 funkciją (7.3 pav.). Šio reglamento molekulinė mechanizmas yra susijęs su transkripcijos veiksniais. "T-Bet" ir "Stat4" išraiška, deterministinis IFNA, nukreipia T ląstelių diferenciaciją palei TH1 kelią ir slopina th2 plėtrą. IL-4 sukelia GATA-3 ir STAT6 išraišką, atitinkamai užtikrina naivaus yo0 konversiją th2 ląstelėse (7,2 pav.).

Pastaraisiais metais buvo aprašytas specialus pagalbininkų T-ląstelių pogrupis (TH17), gaminantis IL-17. "IL-17" šeimos nariai gali būti išreikšti aktyvuotos atminties ląstelės (CD4CD45RO), U5T ląstelės, NKT ląstelės, neutrofilai, monocitai pagal IL-23, IL-6, TFRβ, gaminamo makrofagais ir dendritinėmis ląstelėmis, įtakoje. Pagrindinis diferenciacijos koeficientas žmonėms yra ror-c, pelėms - ror-γ l. Rodomas Lėtinis uždegimas ir autoimuninės patologijos kardinolas (žr. 7.2 pav.).

Be to, "T-Lymphocytes" galima diferencijuoti į gamtinių ląstelių reguliatorių (treg), išreiškiant paviršiaus žymenis CD4 + CD25 + ir transkripcijos faktoriaus FOXP3. Šios ląstelės gali slopinti imuninį atsaką, tarpininkaujant pagal th1 ir th2 ląsteles, tiesioginiu intercalluliniu kontaktu ir TFβ ir IL-10 sintezei.

TH0 klonų diferenciacijos schemos ir jų išskiriamos citokinas yra pavaizduotas Fig. 7.2 ir 7.3 (taip pat žr. CV. Sklypas).

T-citotoksinės ląstelės (CD8 +), natūralūs žudikai - silpna citokinų gamyba, pvz., Interferonai, FNO ir limfotografiniai.

Pernelyg didelis vieno iš th subpopuliacijų aktyvavimas gali nustatyti vieno iš imuninio atsako įgyvendinimo variantų kūrimą. Lėtinis aktyvinimo disbalansas gali sukelti imunopatologines sąlygas, susijusias su apraiškomis

alergijos, autoimuninė patologija, lėtiniai uždegiminiai procesai ir kt.

Fig. 7.2.Įvairūs t-limfocitų, gaminančių citokinų, pogrupiai

Ii. Įgimtos imuniteto sistemoje pagrindiniai citokinų gamintojai yra mieloidų serijos ląstelės. Naudojant rinkliavų vertės receptorius (TLR), jie pripažįsta panašias įvairių patogenų molekulines struktūras, vadinamuosius patogenizuotus molekulinius paternes (rampą), pvz., Gram-neigiamų bakterijų lipopolizacharido lipopolių rūgštis, gram-teigiamų mikroorganizmų peptidoglikanai , flagllin, DNR, turtinga nesukurta SRGG kartojimų ir kt

Ši sąveika su TLR pradeda intraceluliniu signalo perdavimo kaskadu, kuris lemia dviejų pagrindinių citokinų grupių genų išraišką: "Pro-uždegiminis ir 1 tipo" (7.4 pav. Taip pat žr. "Col..clock"). Daugiausia, šie citokinai (IL-1, -6, -8, -12, FNO, GM-CSF, IFN, Chemokina ir kt.) Sukelia uždegimą ir dalyvauja kūno apsaugoje nuo bakterijų ir virusinių infekcijų.

Fig. 7.3.Cytokinų spektras, išskiriamas pagal jus1 ir You2 ląsteles

III. Ląstelės, kurios nėra susijusios su imunine sistema (jungiamojo audinio ląstelės, epitelio, endotelio), išreiškia autokrtino augimo veiksnius (FRF, EPR, TFR ir kt.). ir citokinų, palaikančių hematopoetinių ląstelių proliferaciją.

Citokinai ir jų antagonistaiišsamiai aprašyta keletas monografijų (Kovalchuk L.V. ir kt., 2000; Ketlinsky s.a., Simbirtai A.S.

Fig. 7.4."TLR" netiesioginis citokinų gamybos indukcija pagal įgimtų imuniteto ląsteles

Pernelyg didelė citokinų išraiška yra nesaugi organizmui ir gali sukelti pernelyg didelį uždegiminį atsaką, ryškų etapo atsaką. Atsižvelgiant į pro-uždegiminių citokinų gamybą, dalyvauja įvairūs inhibitoriai. Taigi, daugelis medžiagų yra aprašyta, kad nespecifiškai susieti citokinas IL-1 ir užkirsti kelią jo biologinio veiksmo (A2-makroglobulino, C3 komponento papildymo, uromodulino) pasireiškimą. Konkretūs IL-1 inhibitoriai gali būti tirpūs receptoriai, antikūnai ir receptorių antagonistas IL-1 (IL-1RA). Į uždegimą plėtojant padidėjo IL-1R geno išraiškos padidėjimas. Bet vieni, šis antagonistas yra didelės koncentracijos kraujyje (iki 1 ng / ml ar daugiau), blokuojant endogeninio IL-1 poveikį.

Mishenia ląstelės

Cytokinų poveikis tikslinėse ląstelėse yra tarpininkaujant per konkrečius receptorius, kurie susieja citokines su labai aukštu afininiais, ir gali naudoti individualius citokines

generaliniai receptorių subvienetai. Kiekvienas citokinas yra susijęs su konkrečiu receptoriu.

Citokino receptoriai yra transmembraniniai baltymai ir yra suskirstyti į 5 pagrindinius tipus. Dažniausiai vadinamasis hemopoetino tipo receptorių, turinčių du ekstraląstelinius domenus, iš kurių viena yra bendra aminorūgščių likučių seka dviejų pakartojimų triptofano ir serino, atskirtų bet aminorūgščių (WSXWs-motyvas). Antrojo tipo receptoriai gali turėti dvi ekstraląstelines sritis su daugybe konservatyvių cisteinų. Tai yra IL-10 šeimos ir IFN receptorius. Tipo tipas yra citokinų receptoriai, priklausantys FNF grupei. Ketvirtasis citokinų receptorių tipas priklauso superfamily imunoglobulino receptoriams, kurių domenai primena imunoglobulino molekulių domenų struktūrą. Penktasis tipo receptoriai, jungiantys chemokino šeimos molekules, yra paversti transmembraniniu baltymais, kertančiais ląstelių membraną 7 vietose. Citokino receptoriai gali egzistuoti tirpioje formoje, išlaikant galimybę susieti ligandus (Ketlinsky s.a. ir kt., 2008).

Citokinai gali daryti įtaką tikslinių ląstelių platinimui, diferenciacijai, funkcinei veiklai ir apoptozei (žr. 7.1 pav.). Cytokinų biologinio aktyvumo pasireiškimas tikslinėse ląstelėse priklauso nuo įvairių intracelulinių sistemų dalyvavimo signalo perdavimo iš receptoriaus, kuris yra susijęs su tikslinių ląstelių savybes. Atliekamas signalas į apoptozę, įskaitant specialią FNF receptorių šeimos skyrių, vadinamąjį "mirties" domeną (7.5 pav., Žr. Col. sklypas). Diferencijavimas ir aktyvavimo signalai perduodami intraceluliniais baltymais JAK-STAT - signalų transdaktoriai ir transkripcijos aktyvatoriai (7.6 pav. Žr. "Skly"). G-baltymai yra susiję su hemokinio signalo perdavimo, kuris veda padidinti migracijos ir sukibimo ląsteles.

Išsamios citokinų sistemos analizė apima šiuos dalykus.

I. Gamybos ląstelių vertinimas.

1. Sąvoka:

Receptoriai, atpažįstantys patogeną arba antigeną, TLR) genų ir baltymų molekulių lygiu (PCR, srauto citofluotimetrijos metodas);

Adapterio molekulės, atliekančios signalą, kuris vykdo citokinų genų transkripciją (PCR ir kt.);

Fig. 7.5.Signalo perdavimas su FPF receptoriu

Fig. 7.6.JAK-STAT - signalizacijos kelias su 1 tipo citokinų receptoriais

Citokino genai (PCR); Baltymų citokinų molekulės (apskaičiuotos citokinsinto jautrūs žmogaus mononuklerinių ląstelių funkcijos).

2. kiekybinis ląstelių pogrupių, kuriuose yra šių ar kitų citokinų, nustatymas: th1, th17 (citokinų intracelulinių dažų metodas); Nustatymo ląstelių, išskiriančių tam tikrus citokines (Elispot metodas, skaičiaus žr. Ch. 4).

Ii. Cytokinų ir jų antagonistų vertinimas kūno biologinėje aplinkoje.

1. Biologinio aktyvumo bandymas citokinų.

2. Kiekybinis citokinų nustatymas naudojant ELISA.

3. imunohistocheminis dažymas citokinų audiniuose.

4. Priešingų citokinų (pro- ir priešuždegiminių), citokinų ir antagonistų santykio nustatymas citokinų receptorių.

III. Tikslinių ląstelių vertinimas.

1. citokinų receptorių ekspresijos nustatymas genų lygiu ir baltymų molekulėje (PCR, srauto citofluotimetrijos metodas).

2. Signalinių molekulių nustatymas intraceluliniu turiniu.

3. Tikslinių ląstelių funkcinės veiklos nustatymas.

Šiuo metu yra daugybė metodų apskaičiuojant citokinų sistemas, kurios teikia įvairios informacijos. Tarp jų išsiskiria:

1) molekuliniai biologiniai metodai;

2) citokinų kiekybinių metodai, naudojant imunologinę masę;

3) citokinų biologinio aktyvumo bandymai;

4) citokinų ląstelių dažymas;

5) metodas ELISPOT, leidžiantis nustatyti citokines aplink vieną citokino gamybos ląstelę;

6) imunofluorescencija.

Mes pateikiame trumpą šių metodų aprašymą.

Per molekuliniai biologiniai metodaigalima ištirti citokinų genų išraišką, jų receptorius, signalų molekules, ištirti šių genų polimorfizmą. Pastaraisiais metais buvo atlikta daug darbų, kurie atskleidė citokinų sistemos ir polinkio molekulių molekulių alelių variantų asociacijas

Į daugybę ligų. Cytokine genų alelių variantų tyrimas gali teikti informaciją apie šio ar kito citokino genetiškai užprogramuotus produktus. Jautriausia yra polimerazės grandinės reakcija realiu laiku - PCR-RV (žr. Ch. 6). Hibridizacijos metodas savo vietoje.leidžia išaiškinti citokinų genų išraiškos audinį ir ląstelių lokalizavimą.

Kiekybinis citokinų nustatymas biologiniais skysčiais ir periferinio kraujo mononuklerinių ląstelių kultūromis pagal IFA metodą galima apibūdinti taip. Kadangi citokinai yra vietiniai tarpininkai, labiau patartina matuoti jų lygius atitinkamuose audiniuose po audinių baltymų gavybos arba natūralių skysčių, pavyzdžiui, ašaroje, plyšiu, plaušu iš ertmių, šlapimo, amniono skysčio, stuburo skysčio ir kt. Cytokino koncentracija arba kiti biologiniai skysčiai atspindi dabartinę imuninės sistemos būseną, t.y. Citokinų sintezė pagal kūno ląsteles in vivo.

Nustatant citokinų gamybos lygį per periferinį kraujo mononuklanduolinį (MNC) rodo funkcinę būseną ląstelių. Spontaniniai produktai MNC citokinų kultūroje rodo, kad ląstelės jau yra įjungtos in vivo.Sukeltos (įvairūs stimuliatoriai, mitogenai) citokinų sintezė atspindi potencialą, ląstelių atsarginę kopiją reaguoti į antigeninį stimulą (ypač vaistų poveikį). Sumažinta sukelta citokinų gamyba gali būti viena iš imunodeficito būsenos požymių. Citokinai nėra būdingi konkrečiam antigenui. Todėl konkretus infekcinių, autoimuninių ir alerginių ligų diagnozė nustatant tam tikrų citokinų lygį yra neįmanoma. Tuo pačiu metu citokinų kiekio įvertinimas leidžia gauti duomenis apie uždegiminio proceso sunkumą, perėjimą prie sistemos lygio ir prognozės, imuninės sistemos ląstelių funkcinės veiklos, atsižvelgiant į th1- ir Th2 ląstelės, kurios yra labai svarbios diferencinės diagnozei daugeliui infekcinių ir imunopatologinių procesų.

Biologinėje aplinkoje galima nustatyti citokines kiekybiškai su įvairove imunoanalizės metodainaudojant polikloninius ir monokloninius antikūnus (žr. Ch. 4). IFA leidžia išsiaiškinti, kokios tiksliai koncentracijos citokinų bio

logikos kūno skysčiai. "Enplofersum" aptikimas citokinų turi keletą privalumų dėl kitų metodų (didelis jautrumas, specifiškumas, nepriklausomumas nuo antagonistų buvimo, galimybė tiksliai automatizuotą apskaitą, apskaitos standartizaciją). Tačiau šis metodas turi savo apribojimus: IFA nesibaigia citokinų biologiniam aktyvumui, gali duoti klaidingų rezultatų kryžminio reaktyviųjų epitopų.

Biologinis bandymasjie atliekami remiantis žiniomis apie pagrindines citokinų savybes, jų veiksmus tikslinėse ląstelėse. Cytokinų biologinio poveikio tyrimas leido sukurti keturių tipų citokinų tyrimus:

1) dėl proliferacijos tikslinių ląstelių;

2) citotoksinio poveikio;

3) dėl kaulų santuokos pirmtakų diferenciacijos;

4) pagal antivirusinius veiksmus.

IL-1 nustato stimuliuojančią poveikį pelės timocytes platinimui, kurį aktyvuoja mitogenas in vitro;IL-2 - gebėjimas skatinti proliferacinį limfoblastų aktyvumą; Pasak citotoksinio poveikio pelės fibroblastai (L929), tnos ir limfotoksinai yra išbandyti. Colonsimulatting veiksniai vertinami pagal jų gebėjimą išlaikyti kaulų ribinių pirmtakų augimą kolonijų pavidalu agare. IFN antivirusinė veikla aptariama virusų diploidinių fibroblastų ir pelių L-929 fibroblastų auglio linijos priespaudai.

Buvo sukurtos ląstelių linijos, kurių augimas priklauso nuo tam tikrų citokinų buvimo. Tab. 7.1 Pateikė citokinų bandymo ląstelių linijų sąrašą. Gebėjimu sukelti jautrių tikslinių ląstelių, biostesting IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-15, ir tt Tačiau šie bandymų metodai išsiskiria nepakankamu jautrumu ir informatyvumas. Inhibitorių ir antagonistų molekulės gali užmaskuoti citokinų biologinį aktyvumą. Kai kurie citokinai turi bendrą biologinę veiklą. Nepaisant to, šie metodai idealiai tinka išbandyti konkrečią rekombinantinės citokinų aktyvumą.

7.1 lentelė.Mobiliosios linijos, naudojamos citokinų biologiniam aktyvumui

Pabaigos lentelė. 7.1

Laboratoriniai darbai 7-1.

IL-1 biologinio aktyvumo nustatymas dėl komedogeninio poveikio timocitų pelėms platinimui

Biologinio bandymo metodo pagrindas IL-1 yra citokino gebėjimas skatinti pelės timocitų platinimą.

IL-1 gali būti apibrėžta monocitų kultūroje, stimuliuojama LPS, taip pat bet kuriame biologiniame skysčio kūne.Būtina atkreipti dėmesį į dalių skaičių.

1. Bandymui naudojami C3H / Hej linijos pelių timecytes, stimuliuojama iki Mitogenų proliferacijos (Confanavalin A - Kona ir fitohemaglutinin - FGA). "Tymocytes C3N / Hej" nėra pasirinkta atsitiktinai: šios inbred linijos pelės nereaguoja į LPS, kuri gali būti išbandytos medžiagos sudėtį ir sukelti IL-1 produktus.

2. Timocytes yra atsakingos už IL-2 ir mitogenus, todėl IL-2 ir mitogeno buvimas taip pat turėtų būti nustatytas bandomuose preparatuose IL-1.

Veiklos procedūra

1. Timodozocitų suspensija gaunama 12 × 10 6 / ml RRMI 1640 vidutinio, turinčio 10% karvių embrionų ir 2-merkaptoetanolio serume (5 × 10-5 m).

2. Paruoškite keletą iš eilės einančių eksperimentinių (biologinių skysčių kūno) ir kontrolės pavyzdžių. Kaip kontrolė, biologiniai skysčiai, kurių sudėtyje yra IL-1 arba mėginiai, gaunami inkubuojant mononuklerines ląsteles be LPS, ir laboratorinis standartas IL-1 turintys narkotikų. 96 gerai apvalios apatinės plokštės iš kiekvieno praskiedimo, perkeliami 50 μl 6 skylių.

3. Iš trijų skylių kiekvieno praskiedimo, 50 μl išgryninto FGA (Wellcome) ištirpinto 3 μg / ml koncentracija, ir kitoje 3 μl 3 μl terpės.

4. 50 μl Timocyte suspensijos pridedama prie kiekvieno šulinio ir inkubuojama 48 valandas 37 ° C temperatūroje.

6. Prieš užpildydami auginimą šuliniuose, 50 μl tirpalo (1 MKKI / ml) ["3 h] - sąnarių įvedami ir inkubuojami dar 20 valandų.

7. Norėdami nustatyti radioaktyvumo lygį, kultūros ląstelė perkeliama į filtro popierių, naudojant automatinį ląstelių kolektorių, filtrai džiovinami ir nustato etiketės įtraukimą skystu scintiliacijos skaitikliu.

8. Rezultatai išreiškiami stimuliavimo koeficiento forma.

kur M CP yra vidutinis impulsų skaičius 3 skylutėse.

Jei "Tymocytes" reaguoja į stimuliaciją su standartiniu IL-1, studijuojamo mėginio stimuliavimo indeksas didesnis kaip 3 patikimai rodo IL-1 aktyvumą.

Bioanalizė yra vienintelis būdas įvertinti citokino veikimą, tačiau šis metodas turi būti papildytas skirtingų tipų tinkamos specifiškumo kontrolės būdu, naudojant monokloninius antikūnus. Tam tikrų monokloninių antikūnų pridėjimas į citokiną į kultūrą blokuoja citokino biologinį aktyvumą, kuris įrodo: signalas į ląstelių linijos proliferaciją yra nustatyta citokinas.

Naudojant bioenalizę, kad nustatytumėte interferoną.IFS biologinio aktyvumo vertinimo principas grindžiamas jo antivirusiniu veiksmu, kurį lemia ląstelių kultūros bandomojo viruso reprodukcijos slopinimas.

Darbe, ląstelės, kurios yra jautrios IFN veikimui: pirminiai tripsinizuoti mobiliojo ryšio ląstelių ląstelės viščiukų, išversta ląstelių diploidinių fibroblastų iš asmens ir pelės ląstelių kultūra (L929).

Apskaičiuojant IFS antivirusinį veiksmą, patartina naudoti virusus su trumpu reprodukcijos ciklu, dideliu jautrumu IFN veikimui: pelių encefalomielito virusas, pelės vesiklinis stomatitas pelės ir kt.

Laboratoriniai darbai 7-2.

Interferono veiklos nustatymas

1. Dipoidinių fibroblastų sustabdymas žmogaus vaisiaus terpėje su 10% karvių embrionų serume (ląstelių koncentracija - 15-20 × 10 6 / ml) yra pilamas į sterilų 96-holes plokščią plokšteles, kurių reikia 100 μl Na ir dedami į CO 2-Encumbatver esant 37 ° C temperatūrai.

2. Po pilno monolayer formavimo iš skylių Pašalinti augimo terpę ir 100 μl atraminę terpę pridedama prie kiekvieno šulinio.

3. IFN aktyvumo titravimas tiriamuose mėginiuose atliekamas dvigubo veisimo metodas Monolayer Fibroblastuose.

Kartu su mėginiais šuliniuose, pelių encefalomyelitis po 48 valandų po infekcijos įvesta 100% ląstelių pažeidimo doze.

4. Norėdami kontroliuoti, naudokite gręžinius su nepažeistais (neapdorotais) ląstelėmis, užkrečiamais virusu.

Kiekviename tyrime nuorodos IFN mėginiai su žinoma veikla naudojama kaip etaloniniai preparatai.

5. Mėginių praskiedimo plokštės inkubuojamos 24 valandas 37 ° C temperatūroje atmosferoje su 5% CO 2 kiekiu.

6. IFNS veiklos lygis lemia nevertins didžiausio bandinio praskiedimo vertė, kuri vėluoja viruso citopatinį poveikį 50% ir išreiškia jį į 1 ml veiklos vienetus.

7. Norėdami nustatyti IFN tipą, antiserumą prieš IFNα, IFNβ arba IFNγ pridedama prie sistemos. Anti-Vortex atšaukia atitinkamo citokino veikimą, leidžiantį nustatyti IFN tipą.

Slopinančio veiksnio migracijos biologinio aktyvumo nustatymas.Šiuo metu buvo visiškai naujos idėjos apie mito prigimtį ir savybes, atidarytas 60-ajame amžiuje, buvo suformuotas su mobiliojo imuniteto tarpininku ir daugelį metų likusių be tinkamo dėmesio (Bloom Br, Bennet V., 1966; David Jr, 1966 m.). Tik per pastaruosius 10-15 metų tapo aišku: mitas yra vienas iš svarbiausių biologinių tarpininkų organizme su įvairiais citokinų biologinėmis funkcijomis, hormonu, fermentu. Mito poveikis tikslinėms ląstelėms įgyvendinama per CD74 - -Receptor arba per ne klasikinį endocitozės kelią.

Mitas yra laikomas svarbiu uždegimo tarpininku, kuris suaktyvina makrofagų funkciją (citokinų, fagocitozės, citotoksiškumo ir kt.), Taip pat endogeninį imunoreguliacinį hormoną, gliukokortikoidų aktyvumą.

Vis daugiau informacijos apie mito vaidmenį daugelio uždegiminių ligų patogenezėje yra sukaupta, įskaitant sepsį, reumatoidinį artritą (RA), glomerulonefritą ir kt. Pažeistų sąnarių skysčio koncentracija yra gerokai padidinta, koreliuojama su ligos sunkumas. Pagal mito įtaką propaguojančių citokinų, kaip makrofagų ir sinovitinių ląstelių, gamyba didėja.

Įvairūs mito aktyvumo bandymų metodai yra žinomi, kai migruojantys ląstelės (mito tikslinės ląstelės) yra įdėtos į stiklinį kapiliarinį (kapiliarinį testą), Agarozės arba agarozės automobilį.

Mes pristatome palyginti paprastą atrankos metodą, pagrįstą 96 skylučių plokščios apačioje ląstelių mikrokultūrų (leukocitų ar makrofagų), standarto vietovėje ir ląstelių skaičiui ir skaičiui, po jų auginimo maistinių medžiagų laikmenoje ir nustatant pokyčius Šių mikrokultūrų srityje pagal mito veiksmus (Suslov A.P., 1989).

Laboratoriniai darbai 7-3.

Mitinės veiklos apibrėžimas

Biologinio aktyvumo apibrėžimas mito atliekamas su prietaiso pagal mobiliųjų mikrokultruotų (7,7 pav.) - Migrosurin (tyrimų institutas epidemiologijos ir mikrobiologijos. N.F. GAMALEI RAMS).

1. Skylė 96-šulinių tabletė (srautas, Jungtinė Karalystė arba panašūs) Įpilama 100 μl mėginio kultūros terpės, padalyto iš kultūros terpės, kurioje nustatomas mitas (kiekvienas veisimas 4 paralelėse, patyrę pavyzdžiai). Kultūros terpė apima RPMI 1640, 2 mm l-glutaminą, 5% karvės embriono serumą, 40 μg / ml Gentamicino.

2. Kultūros terpė pridedama prie kontrolės šulinių (4 paralelėse) 100 μl.

3. Mobilusis ląstelių pakaba peritoninės makrofagų yra paruoštas, už kurį 2 pelėms hibridai (Swachs57v1 / 6) F1 intraperitoneally vartojamas 10 ml Henksa tirpalo su heparinu (10 vienetų / ml), kruopščiai masažuokite pilvą 2-3 minutes . Tada gyvūnas yra užsikimšęs su dekapijulė, kruopščiai pradurta pilvo siena į kirkšnių ir per adatą švirkšto čiulpti eksudato. Peritoninės eksudato ląstelės plaunamos su henks tirpalu, centrifuguojant juos 10-15 minučių 200 g. Tada paruošti ląstelių sustabdymą, kurio koncentracija yra 10 ± 1 mln. / Ml RPMI 1640 aplinkos. Skaičiavimas atliekamas karštoje kameroje.

4. Surinkite migmorineriną sistemą, atstovaujančią nukreipiamam ir standartiniam patarimų fiksavimui su ląstelių kultūromis griežtai vertikalioje padėtyje tam tikru aukštyje virš 166-šulinio kultūros tabletės centro, taip pat įskaitant 92 patarimų automatiniam pipetę Bendrovė "Costar", JAV (ryžiai 7.7).

Įklijuokite trikojo kojas į tabletės kampinius šulinius. Ląstelių pakaba gaunama automatiniu pipete ant patarimų - 5 μl kiekviename, jie nuplaunami nuo ląstelių perteklių vienkartiniu mažėjimu trečiadienį ir įterpti vertikaliai į sistemos trikojo lizdus. Užpildytas trikodas su antgaliais laikomi kambario temperatūroje 1 valandą ant griežto horizontalaus paviršiaus. Per šį laiką yra pakabos ląstelės šulinių apačioje, kur formuojami standartiniai ląstelių mikrokultūros.

5. Trikojis su antgaliais yra kruopščiai pašalinami iš tabletės. Tabletė su ląstelių mikrotuleku yra tvirtai horizontalioje padėtyje CO 2-patalpoje, kur kultivuotas 20 valandų. Mobiliųjų kultūros metu migruoja palei šulinių apačią.

6. Kiekybinis rezultatų apskaita po inkubacijos atliekamas ant binokulinės lupos, vizualiai įvertinant kolonijos dydį ant skalės viduje okuliaro. Mikrokultūros turi apskritimo formą. Tada mokslininkai nustato kolonijų skersmens vidutinę vertę pagal kolonijų matavimo rezultatus 4 eksperimentines ar kontrolines skyles. Matavimo paklaida yra ± 1 mm.

Migracijos indeksas (-ai) apskaičiuojamas pagal formulę:

Pavyzdys turi mitą, jei jų vertės yra lygios

Už mito aktyvumo sąlyginis vienetas (vienetų) yra atvirkštinė vertė, lygi didžiausiam mėginio praskiedimo (mėginio) vertei, kurioje migracijos indeksas yra 0,6 ± 0,2.

FEO biologinis aktyvumasJis yra α iki citotoksinio poveikio L-929 transformuota "Fibroblast" linija. Kaip teigiama kontrolė, rekombinantinis FNO naudojamas, o kultūros terpės ląstelės naudojamos kaip neigiama kontrolė.

Apskaičiuokite citotoksinį indeksą (Qi):

kur a.- kontrolės ląstelių skaičius; b.- gyvenimo ląstelių skaičius.

Fig. 7.7.Migrosino schema. Ląstelių kultūrų migracijos įtaisai

Ląstelės yra dažytos dažais (metileno mėlyna), kuri yra įtraukta tik į mirusių ląstelių.

Už veiksnių sąlyginio vieneto TNF imti atvirkštinio skiedimo mėginio, reikalingo 50% ląstelių citotoksiškumo. Konkretus mėginio aktyvumas yra aktyvumo ir tradicinių vienetų santykis 1 ml baltymų koncentracijos, esančios mėginyje.

Citokinų ląstelių dažai.Įvairių citokinų gamybos ląstelių santykio keitimas gali atspindėti ligos patogenezę ir tarnauti kaip ligos prognozės ir terapijos vertinimo kriterijus.

Intracelulinės dažymo metodas nustato citokino išraišką vienos ląstelės lygiu. Srauto citofluorimetrija leidžia apskaičiuoti vieną ar kitą citokino ląstelių skaičių.

Nurodome pagrindinius intracelulinių citokinų apibrėžimo etapus.

Pernelyg didelės ląstelės sukuria nedidelius citokinų kiekius, kurie paprastai nėra deponuojami, todėl svarbus žingsnis intracelulinių citokinų įvertinimu yra limfocitų stimuliavimas ir šių produktų iš ląstelių rezultatų blokada.

Kaip citokinų induktorius, baltymų kinazės aktyvatorius su folibu-12-MyriStat-13-acetato (FMA) kartu su jonoforo kalcium vartojama kartu su jonofore kalcio. Tokio derinio naudojimas sukelia plataus spektro citokinų sintezę: IFNU, IL-4, IL-2, FNUα. FMA naudojimo trūkumas - CD4 molekulių aptikimo dėl limfocitų paviršiaus problema po tokio aktyvavimo. Be to, citokinų T-limfocitų produktai sukelia mitogeno (FGA). B ląstelės ir monocitai stimuliuoja

Mononuklinės ląstelės inkubuojamos į citokino produktų induktorius ir 2-6 val.

Tada ląstelės resuspenduojamos į buferio tirpalą. Fiksavimui pridedama 2% formaldehido, inkubuojama 10-15 minučių kambario temperatūroje.

Tada ląstelės yra apdorojamos saponinu, o tai padidina ląstelių membranos pralaidumą ir yra nudažytas su konkrečiais citokinais būdingais monokloniniais antikūnais. Paviršiaus žymenų išankstinis dažymas (CD4, CD8) padidina informacijos apie ląstelę skaičių ir leidžia tiksliau nustatyti savo gyventojų priklausomybę.

Yra keletas apribojimų taikant pirmiau aprašytus metodus. Taigi, su jų pagalba neįmanoma išanalizuoti citokinų sintezę vienoje ląstelėje, neįmanoma nustatyti citokinų gamybos ląstelių skaičiaus, neįmanoma nustatyti, ar citokinproduction ląstelės išreiškia unikalius žymenis, ar tai yra įvairūs Citokinai sintezuojami su skirtingomis ląstelėmis arba vieni ir vienodi. Atsakymas į šiuos klausimus gaunamas naudojant kitus tyrimo metodus. Norint nustatyti citokinų gamybos ląstelių dažnį gyventojų dažnumui, naudojama praskiedimų ir lispot imunodų analizės variantas (žr. Ch. 4).

In situ hibridizacijos metodas.Metodas apima:

2) paraformaldehido fiksavimas;

3) MRNR aptikimas naudojant paženklintą CDNA. Kai kuriais atvejais citokinas mRNR yra nustatomas ant sekcijų su radioIISOTOPE PCR.

Imunofluorescencija.Metodas apima:

1) organo įšaldymas ir kriostato skyrių rengimas;

2) fiksavimas;

3) sekcijų su paženklintų fluoresceno anticiciniais antikūnais apdorojimas;

4) Fluorescencijos stebėjimas.

Šie metodai (hibridizacija savo vietoje.ir imunofluorescence) greitas ir nepriklausomas nuo išskiriamo produkto ribinės koncentracijos. Tačiau jie nenustato išskirto citokino sumos ir gali būti sudėtinga techniškai. Reikia nuodugniai kontroliuoti nespecifinių reakcijų.

Su pateiktų citokino įvertinimo metodų pagalba, patologiniai procesai, susiję su citokinų sistemos pažeidimais įvairiais lygmenimis.

Taigi citokinų sistemos vertinimas yra labai svarbus organizmo imuninės sistemos būklės charakteristikoms. Įvairių citokinų sistemos lygių tyrimas leidžia gauti informaciją apie įvairių imuniketų ląstelių funkcinę veiklą, uždegiminio proceso sunkumą apie jo perėjimą prie sistemos lygio ir ligos prognozės.

Klausimai ir užduotys.

1. Išvardinkite bendras citokinų savybes.

2. Pateikite citokinų klasifikavimą.

3. Nurodykite pagrindinius Citokine sistemos komponentus.

4. Nurodykite citokinų ląstelių gamintojus.

5. Apibūdinkite citokinų receptorių šeimą.

6. Kokie yra citokinų tinklo veikimo mechanizmai?

7. Papasakokite apie citokinų vystymąsi įgimto imuniteto sistemoje.

8. Kokie yra pagrindiniai požiūriai į išsamaus citokinų sistemos vertinimą?

9. Kokie yra citokinų bandymų biologinių skysčių bandymų metodai?

10. Kokie yra citokinų sistemos defektai su skirtingais patologijomis?

11. Kokie yra pagrindiniai biologinių bandymų metodai IL-1, IFN, mitas, flo biologiniai skysčiai?

12. Apibūdinkite citokinų intracelulinio turinio nustatymo procesą.

13. Apibūdinkite citokinų išsiskyrimo procesą.

14. Apibūdinkite citokino receptorių defekto nustatymo metodų seką.

15. Apibūdinkite metodų seką, naudojamą citokinų gamintojų defektui aptikti.

16. Kokią informaciją galima gauti ištirti citokinų gamybą į mononuklerinių ląstelių kultūrą, serume?

ĮVADAS. \\ T

Apskritai. \\ T

Citokinų klasifikacija

Citokino receptoriai

Citokinų ir imuninto atsakymo reguliavimas

Išvada

Literatūra

ĮVADAS. \\ T

Citokinai yra viena iš svarbiausių imuninės sistemos dalių. Imuninė sistema reikalauja perspėjimų sistemos nuo kūno ląstelių, kaip pagalbos verkimo. Tai galbūt geriausias citokinų nustatymas. Kai ląstelė yra pažeista arba nustebinta patogeninio organizmo, makrofagai ir pažeistos ląstelės išsiskiria citokinai. Tai apima veiksnius, tokius kaip interleukinas, interferonas ir naviko alfa nekrozės koeficientas. Pastarasis taip pat įrodo, kad naviko audinio sunaikinimas kontroliuoja imuninę sistemą. Atleidžiami citokinai, jie kviečia specialias imunines ląsteles, pavyzdžiui, leukocitus ir t- ir b ląsteles.

CyTokinai taip pat suteikia signalą apie tam tikrą tikslą, kad ląstelių duomenys turi būti įvykdyti. Citokinai ir antikūnai yra visiškai skirtingi, nes antikūnai yra kažkas, kas yra susijusi su antigenais, jie leidžia imuninę sistemą nustatyti užsienio organizmų invaziją. Taigi, analogija gali būti atlikta: citokinai yra pagrindinis signalizacija už įsibrovėlių ir antikūnų - skautų. Cytokinų analizės procesas vadinamas citokinų apibrėžimu.

Apskritai. \\ T

Citokinai [graikai. Kito - laivas, čia - ląstelė ir kineo - juda, skatinant] - didelė ir įvairi dalis mažo dydžio (molekulinė masė nuo 8 iki 80 kDa) baltymų tarpininkų - tarpinių molekulių ("komunikacijos baltymai"), dalyvaujančių interklertiniame signale signalų perdavimas daugiausia imuninėje sistemoje.

Citokinai yra naviko nekrozės veiksnys, interferonai, daugybė tarplunkių ir kitų citokinų, kurie yra sintezuojami limfocitais ir yra platinimo ir diferenciacijos, ypač hematopoetinių ląstelių ir ląstelių imuninės sistemos, yra vadinami limfinu.

Visos imuninės sistemos ląstelės turi tam tikrų funkcijų ir veikia aiškiai nuoseklią sąveiką, kurią teikia specialios biologiškai veikiančios medžiagos - citokinai - imuninės reakcijos reguliatoriai. Citokinai yra specifiniai baltymai, kuriais įvairios imuninės sistemos ląstelės gali keistis vieni su kitais ir koordinuoti veiksmus.

Cytokinų, veikiančių ląstelių paviršiaus receptorių, rinkinys ir kiekis yra "citokinų terpė" - atspindi sąveikos ir dažnai keičiančių signalų matricą. Šie signalai yra sudėtingi dėl didelio įvairių citokinų receptorių ir dėl to, kad kiekvienas citokinas gali suaktyvinti ar slopinti kelis procesus, įskaitant savo sintezę ir kitų citokinų sintezę, taip pat citokinų receptorių ląstelių formavimąsi ir išvaizdą .

Intercellulinė signalizacija imuninei sistemai atlieka tiesioginio kontaktinio ląstelių sąveika arba naudojant tarpininkų tarpininkų sąveiką. Studijuojant imunikompetenčių ir hematopoetinių ląstelių diferencijavimą, taip pat tarpinės sąveikos sąveikos mechanizmus, formuojant imuninį atsaką ir didelę ir įvairią tirpių baltymų gamtos ir tarpininkų molekulių ("komunikacijos baltyčiais") grupę, dalyvaujančią tarpininkų perdavimo metu Signalai - atidaryta citokinai.

Hormonai paprastai neįtraukiami į šią kategoriją remiantis endokrinine (ir ne Paracryn ar autokrininine) savo veiksmų pobūdžiu. (Žr Citokines: hormoninių signalų mechanizmus). Kartu su hormonais ir neurotiatoriais jie sudaro cheminio aliarmo kalbos pagrindą, pagal kurį audinių morfogenezė ir regeneracija reguliuojama daugialypiame organizme.

Teigiamas ir neigiamas imuninio atsako reguliavimas, jie turi pagrindinį vaidmenį. Iki šiol asmuo buvo rastas ir mokėsi vienam ar kitam laipsniui, kaip minėta pirmiau, daugiau nei šimtai citokinų ir nuolat rodomi pranešimai apie naujų atidarymo. Kai kurioms, gaunami genų inžinerijos analogai. Citokinai veikia per citokinų receptorių aktyvavimą.

A. Interferonai (IFN):

1. Natural.IFN (1 karta):

2. Rekombanitai IFN (2 karta):

a) Trumpas veiksmas:

IFN A2B: INTRON-A

IFN β: Avonex ir kiti.

(Pagilinta IFN): Paginterferon

B. Inductor interferonas (Interferogenai):

1. Sintetika. - cikloferonas, tiloronas, dibazolas ir tt

2. Natūralus- Ridostin ir kt.

Į Interleukins. : Rekombinantinis interleukin-2 (roncolein, aldesleikinas, proleikinas, ) , rekombinantinis interleukin 1-beta (betalkinas).

G. Kolonijų veiksniai ("Argraphworks" ir kt.)

Peptidų vaistai

Tiiminų peptidų preparatai .

Peptidų junginiai, kuriuos gamina šakės geležies, stimuliuoja t-limfocitų brendimą(Timopoetins).

Iš pradžių sumažėję rodikliai, tipiškų peptidų preparatai padidina T ląstelių skaičių ir jų funkcinę veiklą.

Dviejų kartų pirmosios kartos timologijos narkotikai Rusijoje tapo Tabuti., kuris yra peptidų kompleksas, išgautas iš galvijų tymių. Taip pat susiję su preparatais, kuriuose yra timinių peptidų komplekso Timalin, TimoPin. ir kiti, ir timso ekstraktai - Thorusulin ir vilozen.

Peptidų preparatai nuo galvijų Thymus timalin, Tistibamulinasšvirkščiamas į raumenis ir tabuti, Timoptin.- po oda daugiausia į mobiliojo imuniteto nepakankamumą:

Su t-imunodeficitu

Virinės infekcijos. \\ T

Už infekcijų prevenciją radioterapijos metu ir navikų chemoterapijoje.

Klinikinis vaisto klinikinis veiksmingumas yra neabejotinas, tačiau jie turi vieną trūkumą: jie yra neatlygintinas biologiškai aktyvių peptidų mišinys, gana sunku standartizuoti.

Pažanga narkotikų vartojimo srities srityje vyko preparatų II ir III kartos - sintetinių analogų natūralių hormonų timso ar fragmentų šių hormonų su biologiniu aktyvumu.

Šiuolaikinis vaistas Imunofan -hexapeptidas, sintetinis analogas aktyvaus cilindro timopoopoetino, yra naudojamas imunodeficientams, navikams. Vaistas stimuliuoja IL-2 imunikompetentų ląstelių susidarymą, padidina limfoidinių ląstelių jautrumą prie šios limfino, sumažina FNF (naviko nekrozės veiksnys), turi reguliavimo poveikį imuniteto (uždegimo) ir imunoglobulinų gamybai. .

Kaulų čiulpų peptidų preparatai

Melopid Gaukite žinduolių kaulų čiulpų ląstelių kultūros (veršeliai, kiaulės). Vaisto veikimo mechanizmas yra susijęs su "V-ir T-ląstelių proliferacijos ir funkcinės veiklos skatinimu.

Organizme šio narkotiko tikslas yra Limfocituose. Esant imunino ar hematopoede, mielopido įvedimas veda į bendrą mitotine aktyvumą kaulų čiulpų ląstelių ir jų diferenciacijos link subrendimo į limfocitų kryptį.

Myelopid yra naudojamas sudėtingoje terapijoje antrinių imunodeficito narių su pageidautina pažeidimų humoralinio imuniteto, už infekcinių komplikacijų prevencijos po chirurginių intervencijų prevencijos, sužalojimai perduodami osteomielitui, nespecifinių plaučių ligų, lėtinių poroders. Narkotikų šalutinis poveikis - galvos svaigimas, silpnumas, pykinimas, hiperemija ir skausmas vartojimo vietoje.

Visi šios grupės narkotikai yra kontraindikuotinas nėščia, mielopidas ir imunofanas yra kontraindikuotinas dalyvaujant reesus motinos ir vaisiui.

Imunoglobulinov preparatai

Žmogaus imunoglobulinai

a) imunoglobulinai į raumenis

Nespecifinis: Žmogaus imunoglobulinas Normal.

Konkretūs: Imunoglobulinas nuo hepatito žmogaus, žmogaus imunoglobulino antisfococcal, imunoglobulino žmogus anti-beaded, imunoglobulino žmogus nuo erkių encefalito, imunoglobulino vyras nuo pasiutligės viruso ir kt.

b) imunoglobulinai intraveniniam vartojimui

Nespecifinis:imunoglobulino žmogus normalus intraveniniam vartojimui (Gabriglobin, imunikinas, intraglobinas, humaglobinas)

Konkretūs: Imunoglobulinas nuo hepatito vienam asmeniui (ne apkrovai), pentaglobin (yra antibakterinio IgM, IgG, IGA), imunoglobulino nuo citomegaloviruso (citoto), imunoglobulino vyras nuo erkių encefalito, anti-bibliotekos IG ir daugiau.

c) Žodinio vartojimo imunoglobulinai:imunoglobulino komplekso vaistas (prietaisai), skirtos ūminės žarnyno infekcijose; Anthytavirus imunoglobulinas už geriamąjį vartojimą.

Heterologiniai imunoglobulinai:

imunoglobulino anti-biblioteka nuo arklio serumo, serumas yra antichangreno polivalentinis arklys ir kt.

Specifinių imunoglobulinų preparatai naudojami pirminiam ir antriniam imunodeficitui, specifinių imunoglobulinų preparatai - su atitinkamomis infekcijomis (su terapiniu ar prevenciniu tikslu).

Citokinai ir preparatai, pagrįsti jais

Reglamentas dėl besivystančio imuninio atsako yra atliekamas citokinų - sudėtinga endogeninių imunoreguliacinių molekulių kompleksaskuri yra pagrindas sukurti didelę ir natūralių ir rekombinantinių imunomoduliacinių vaistų grupę.

Interferonai (IFN):

1. Natural.IFN (1 karta):

Alfa Niferons: žmogaus leukociyaria IFN ir kiti.

Betaferons: žmogaus fibroblastinis IFN ir kt.

2. Rekombanitai IFN (2 karta):

a) Trumpas veiksmas:

IFN A2A: Refaferon, Viferon ir kt.

IFN A2B: INTRON-A

IFN β: Avonex ir kiti.

b) Ilgalaikis veiksmas (Pagylintas IFN): Paginterferon (IFN A2B + polietilenglikolio) ir kt.

Pagrindinis IFN - T-limfocitų (natūralių žudikų ir citotoksinių t-limfocitų) poveikio dėmesys.

Natūralūs interferonai gaunami donorų kraujo leukocitų ląstelių kultūroje (limfoblastoido ir kitų ląstelių kultūroje) pagal induktoriaus viruso įtaką.

Rekombinantiniai interferonai gaunami genetiškai inžinerijos metodu - auginant bakterijų padermes, kurių sudėtyje yra jų genetinio aparato įmontuotą rekombinantinę žmogaus interferono geno plazmidę.

Interferonai turi antivirusinį, antitirorą ir imunomoduliacinį efektą.

Kaip antivirusiniai agentai Interferono preparatai yra efektyviausi gydant herpetinių akių ligų (loclets forma, subrangos forma), paprastumas su lokalizacija ant odos, gleivinės membranos ir lytinių organų, stumdomas žemyn (vietoje tepalas pavidalu ant hidrogelio pavidalu -Based), ūminis ir lėtinis virusinis hepatitas B ir C (parenteraliai, tiesiai žvakių), gydant ir prevencijai gripo ir arvi (intranazly lašų pavidalu). ŽIV infekcijos metu rekombinantinio interferono preparatai normalizuoja imunologinius parametrus, sumažinti ligos eigos aštrumą daugiau nei 50% atvejų, sukelia viemijos lygį ir serumo žymeklių kiekį ligos. AIDS atliekamas kartu su azidotimidine terapija.

Interferono preparatų antimumoro poveikis yra susijęs su antiproliais - platinti natūralią žudiko aktyvumą. Kaip antiminio agentai, IFN alfa, IFN-alfa 2a, IFN-alfa-2b, IFN-Alpha-N1, IFN-beta yra naudojami.

IFN beta-lb naudojamas kaip imunomoduliatorius su išsėtine skleroze.

Interferono vaistai sukelia panašų šalutiniai poveikiai. Būdingas - įtakos sindromas; Pakeitimai iš CNS: galvos svaigimas, regėjimo pažeidimas, painiava, depresija, nemiga, Parresza, drebulys. Iš virškinimo trakto: apetito praradimas, pykinimas; Iš širdies ir kraujagyslių sistemos, širdies nepakankamumo simptomai yra įmanomi; iš šlapimo sistemos - proteinurijos; Nuo kraujo formavimo pusės - trumpalaikės leukopenijos. Jis taip pat gali būti beshed, niežulys, alopecija, laikinas impotencija, kraujavimas.

Induktoriaus interferonas (Interferogenai):

1. Sintetika. - cikloferonas, tiloronas, pusiau ir tt

2. Natural. - Ridostin ir kt.

Interferono induktoriai yra preparatai, didinantys endogeninio interferono sintezę. Šie vaistai turi daug privalumų, palyginti su rekombinantiniais interferonais. Jie neturi antigeninio aktyvumo. Skatinama endogeninio interferono sintezė nesukelia hiperninterterio.

Tilororon.("Amixin") reiškia mažą molekulinio svorio sintetinius junginius, yra geriamojo induktoriaus interferonas. Ji turi platų antivirusinės veiklos spektrą nuo DNR ir RNR turinčių virusų. Kaip antivirusinis ir imunomoduliacinis agentas naudojamas gripo, ARVI, hepatito A prevencijai ir gydymui, viruso hepatito gydymui, paprasto (įskaitant urogenitalinį) ir konjunktyvų, su sudėtinga chlamidinių infekcijų, neurovirinių ir infekcinių alerginių terapija ligų, antrinių imunodeficientų. Vaistas yra gerai toleruojamas. Dispeptiški reiškiniai, trumpalaikiai šaltkrėtis, padidina bendrą toną, kuriam nereikia narkotiko atšaukimo.

Pusiau Tai biosintetinė poliyribonukonukleotidų kompleksas poliadenilo ir poliuridilo rūgščių (lygių santykiuose). Vaistas turi ryškų slopinamą poveikį paprastų herpes virusams. Jis naudojamas akių lašų ir injekcijų pavidalu po konjunktyviu. Vaistas skiriamas suaugusiems už virusinių akių ligų gydymą: herpetinis ir adenovirusinis konjunktiviškumas, keratokonjunovivotitas, keratitas ir kerato-chirosocitai (keratovets), iridociklies, chororetinitų, regos nervo neurito.

Šalutiniai poveikiai Yra retai ir pasireiškia su alerginių reakcijų kūrimu: niežulys ir užsienio kūno jausmas akyje.

Cycloferon. - maža molekulinė svorio induktoriaus interferonas. Jis turi antivirusinį, imunomoduliacinį ir priešuždegiminį poveikį. Cycloferon yra veiksmingas virusų erkių encefalito, herpes, citomegaloviruso, ŽIV ir kt. Turi antilamidinį poveikį. Veiksmingai su sisteminėmis jungiamojo audinio ligomis. Įdiegta radijo apsauga ir vaisto nuo uždegimo poveikis.

Arbidol.nurodyta viduje už gripo ir kitų Arvi prevencijos ir gydymo, taip pat herpetinių ligų.

Interleukins:

rekombinantinis IL-2 (aldesleikinas, proleikinas, roncolein ) , rekombinantinis IL-1BET ( bETALSKIN.).

Dėl citokino preparatų natūralios kilmės, kuriame yra pakankamai didelis uždegimas citokinų ir pirmojo imuninio atsako etapo, būdingas daugialypis poveikis žmogaus organizmui. Šie vaistai veikia ląsteles, susijusias su uždegimu, regeneravimo ir imuninio atsako procesais.

Aldeslakin. - Rekombinantinis IL-2 analogas. Jis turi imunomoduliacinį ir antitumoro poveikį. Suaktyvina ląstelių imunitetą. Padidina T-limfocitų ir IL-2 priklausomų ląstelių populiacijų platinimą. Padidina limfocitų ir ląstelių citotoksiškumą - žudikus, kurie atpažįsta ir sunaikina navikų ląsteles. Pagerina gama interferono, FNF, IL-1 produktus. Jis naudojamas inkstų vėžiui.

BETALSKIN. - Rekombinantinis žmogaus IL-1 beta. Stimuliuoja leukopoese ir imuninę apsaugą. Mes švirkščiame po oda arba į veną su pūlingais procesais su imunodeficitu, leukopenijoje dėl chemoterapijos, navikų metu.

RONCOLEKIN.- Rekombinantinis interleukin-2 vaistas yra į veną Sepsio metu su imunodeficitu, taip pat su inkstų vėžiu.

COLONSESSIVE veiksniai:

MRR. (Lekukoxa) yra rekombinantinis žmogaus granulocitų-makrofaginės kolonioto koeficiento veiksnys. Stimuliuoja leukeopoese, turi imunotropinę veiklą. Padidina prekursorių proliferaciją ir diferencijavimą, padidina brandžių ląstelių turinį periferiniame kraujyje, granulocitų, monocitų, makrofagų augimą. Padidina subrendusių neutrofilų funkcinę veiklą, padidina fagocitozę ir oksidacinį metabolizmą, teikiant fagocitozės mechanizmus, padidina piktybinių ląstelių citotoksiškumą.

Pilgrastimas (Neatogenas) yra rekombinantinis žmogaus granulocitų kolonistimuliavimo koeficientas. Pilgrantis reguliuoja neutrofilų produktus ir jų srautą į kaulų čiulpų kraują.

Lenograstim. - žmogaus granulocitų kolonistimuliavimo koeficiento rekombinantinis vaistas. Tai labai išgrynintas baltymas. Tai imunomooduliatorius ir leukeopoese stimuliatorius.

Sintetiniai imunostimuliatoriai: Levamizol, polioksido izoprodas, Galavit.

Levamizol.(Decaris), imidazolo dariniai, naudojami kaip imunostimuliatorius, taip pat kaip anti-zhilant narkotikų per Ascariasise. Levamizolio imunostimuliacinės savybės yra susijusios su makrofagų ir t-limfocitų aktyvumo padidėjimu.

Levamizol skiriamas viduje su pasikartojančiomis herpetinėmis infekcijomis, lėtiniu virusiniu hepatitu, autoimuninės ligos (reumatoidinis artritas, sisteminė raudona lupus, karūnos liga). Vaistas taip pat naudojamas didelio žarnyno navikuose po chirurginės, radiacijos ar narkotikų terapijos navikų.

Izoprosas. \\ T- vaistas, turintis inozino. Skatina makrofagų aktyvumą, interleukins produktus, T-limfocitų platinimą.

Nurodyta viduje su virusinėmis infekcijomis, lėtinėmis kvėpavimo ir šlapimo takų infekcijomis, imunodeficientencialiais.

Polioksidonio. - Sintetinis vandenyje tirpus polimerinis junginys. Vaistas turi imunostimuliuojančio ir detoksikuojančio efektą, padidina kūno imuninį atsparumą vietinėms ir apibendrintoms infekcijoms. Polioksidonija suaktyvina visus natūralaus atsparumo veiksnius: monocyto makrofagų sistemos ląstelės, neutrofilų ir natūralių žudikų ląstelės, didinant jų funkcinę veiklą su iš pradžių sumažintais rodikliais.

Galavit - fttadzido darinys. Šio vaisto ypatumas yra ne tik imunomoduliuojanti, bet ir ryškių priešuždegiminių savybių.

Kitų farmakologinių klasių su imunostimuliuojančia veikla preparatai

1. Adaptogai ir augalinės kilmės preparatai (fitopreparations): Echinacea (imuninis), Eleutherococcus, ženšenio, Rhodioa rožinės ir kt.

2. Vitaminai: Acorbino rūgštis (vitaminas c), tokoferolis acetatas (vitaminas E), retinolio acetatas (vitaminas A) (žr. Skyrių "vitaminai").

Echinacea preparatai Turėti imunostimuliacines ir priešuždegimines savybes. Be to, šie vaistai padidina makrofagų ir neutrofilų fagocitiną aktyvumą, skatina interleukin-1 produktus, T-pagalbininkų veiklą, limfocitų diferenciaciją.

Naudojami Echinacea preparatai imunodeficitui ir lėtinėms uždegiminėms ligoms. Ypač, imuninisnurodytas viduje lašų prevencijos ir gydymo ūminių kvėpavimo takų infekcijų, taip pat kartu su antibakterinių medžiagų odos infekcijos, kvėpavimo ir šlapimo takų.

Bendrieji imunostimuliatorių taikymo principai pacientams, sergantiems antriniu imunodeficitu

Labiausiai pagrįstas imunostimuliatorių naudojimas pateikiamas su imunodeficientais, kurie pasireiškia padidėjusi infekcinė dažnis. Pagrindinis imunostimuliuojančių vaistų tikslas išlieka antriniu imunodeficitu, kuris pasireiškia dažnai pasikartojančiu, sunku gydyti užkrečiamųjų ir uždegiminių ligų visų lokalizacijų ir bet etiologijos. Kiekvieno lėtinio infekcinio uždegiminio proceso širdyje yra imuninės sistemos pokyčiai, kurie yra viena iš šio proceso atkaklumo priežasčių.

· Immunomoduliatoriai yra skirti sudėtingoje terapijoje vienu metu su antibiotikais, priešgrybeliniais, anti-pondozoiniais arba anti-anti-anti-anti-anti-anti-.

· Vykdydami imunorelabitacines priemones, ypač su neišsamiuoju atsigavimu po ūminės infekcinės ligos, imunomoduliatoriai gali būti taikomi kaip monoterapija.

· Immunomoduliatorių taikyti tik imunologinio stebėsenos fone, kuris turėtų būti atliekamas neatsižvelgiant į šaltinio pokyčių buvimą ar nebuvimą imuninei sistemai.

· Immunomoduliatoriai, veikiantys fagocitiniu imunitetu, gali būti skiriami pacientams, kuriems yra nustatytas ir nesusijęs imuninės būklės sutrikimas, t. Y.. Jų taikymo pagrindas yra klinikinis vaizdas.

Nuleidimas nuo imuniteto parametro atskleista imunodiagnostiko tyrime praktiškai sveikam asmeniui, ne Anksčiau Tai yra imunomoduliacinės terapijos skyrimo pagrindas.

Kontrolės klausimai:

1. Kas yra imunostimuliantai, kokie yra imunoterapijos liudijimas, kokios rūšys yra suskirstytos imunodeficito valstybėse?

2. Immunomoduliatorių klasifikavimas dėl lengvatinių rinkimų veiksmų?

3. Mikrobinės kilmės imunostimuliantai ir jų sintetiniai analogai, jų farmakologinės savybės, naudojimo indikacijos, kontraindikacijos, šalutinis poveikis?

4. Endogeniniai imunostimuliatoriai ir jų sintetiniai analogai, jų farmakologinės savybės, naudojimo indikacijos, kontraindikacijos, šalutinis poveikis?

5. preparatai timinių peptidų ir kaulų čiulpų peptidų jų farmakologinių savybių, vartojimo indikacijos, kontraindikacijos, šalutinis poveikis?

6. Imunoglobulino preparatai ir interferonai (IFNS), jų farmakologinės savybės, naudojimo indikacijos, kontraindikacijos, šalutinis poveikis?

7. Interferono induktoriaus preparatai (interferogenai), jų farmakologinės savybės, naudojimo indikacijos, kontraindikacijos, šalutinis poveikis?

8. Interleukins ir kolonentų veiksniai, jų farmakologinės savybės, naudojimo indikacijos, kontraindikacijos, šalutinis poveikis?

9. Sintetiniai imunostimuliatoriai jų farmakologinių savybių, vartojimo indikacijos, kontraindikacijos, šalutinis poveikis?

10. Kitų farmakologinių klasių su imunostimuliuojančia veikla ir bendrieji imunostimuliantų naudojimo pacientams, sergantiems antriniais imunodeficiumais, preparatai?