Celulele perisinusoidale ar putea fi celule stem hepatice regionale? Studiul efectului celulelor hepatice ito asupra celulelor stem Celulele stelate

Genes & Cells: Volumul V, # 1, 2010, pp: 33-40

Autorii

Gumerova A.A., Kiyasov A.P.

Medicina regenerativă este una dintre domeniile cele mai rapide și promițătoare ale medicinei, care se bazează pe o abordare fundamental nouă a restaurării unui organ deteriorat prin stimularea și (sau) utilizarea acestuia pentru a accelera regenerarea celulelor stem (progenitoare). Pentru a pune în practică această abordare, trebuie să știți ce sunt celulele stem și, în special, celulele stem regionale, care este fenotipul și potența lor. Pentru un număr de țesuturi și organe, cum ar fi epiderma și mușchiul scheletic, celulele stem au fost deja identificate și nișele lor au fost descrise. Cu toate acestea, ficatul, un organ ale cărui abilități de regenerare sunt cunoscute încă din cele mai vechi timpuri, nu și-a dezvăluit încă principalul secret - misterul celulei stem. În această revizuire, pe baza datelor noastre proprii și publicate, discutăm ipoteza propusă că celulele stelate perisinusoidale pot revendica rolul unei celule stem hepatice.

Celulele hepatice perisinusoidale (celule Ito, celule stelate, lipocite, celule care stochează grăsimi, celule care stochează vitamina A) sunt unul dintre cele mai misterioase tipuri de celule hepatice. Istoria studiului acestor celule are mai bine de 130 de ani și există încă mult mai multe întrebări cu privire la fenotipul și funcțiile lor decât răspunsuri. Celulele au fost descrise în 1876 de Kupffer, numite de el celule stelate și denumite macrofage. Mai târziu, numele de Kupffer a fost dat adevăratelor macrofage sedentare ale ficatului.

Este în general acceptat că celulele Ito sunt situate în spațiul Disse în contact direct cu hepatocitele, acumulează vitamina A și sunt capabile să producă macromolecule ale substanței intercelulare și, de asemenea, având activitate contractilă, reglează fluxul sanguin în capilarele sinusoidale precum pericitele. Etalonul de aur pentru identificarea celulelor Ito la animale este detectarea unei proteine ​​din filamentele intermediare ale citoscheletului, caracteristică țesutului muscular, desmina. Alți markeri destul de obișnuiți ai acestor celule sunt markerii diferențierii neuronale - proteina acidului fibrilar glial (GFAP) și nestinul.

Timp de mulți ani, celulele Ito au fost considerate numai din punctul de vedere al participării lor la dezvoltarea fibrozei hepatice și a cirozei. Acest lucru se datorează faptului că atunci când ficatul este afectat, aceste celule sunt întotdeauna activate, ceea ce constă în exprimarea crescută a desminei, proliferarea și transdiferențierea în celule precum miofibroblastele (transformarea celulară asemănătoare miofibroblastelor), exprimând - actina musculară netedă (-- SMA) și sintetizarea unor cantități semnificative de substanță intercelulară, în special, colagen de tip I. Activitatea unor astfel de celule Ito activate este cea care duce, conform multor cercetători, la dezvoltarea fibrozei hepatice și a cirozei.

Pe de altă parte, se acumulează treptat fapte care fac posibilă privirea celulelor Ito din poziții complet neașteptate, și anume, ca cea mai importantă componentă a micromediului pentru dezvoltarea hepatocitelor, colangiocitelor și celulelor sanguine în timpul etapei hepatice a hematopoiezei, și, în plus, ca posibile celule stem (progenitoare) hepatice. Scopul acestei revizuiri este de a analiza datele și punctele de vedere actuale cu privire la natura și semnificația funcțională a acestor celule cu o evaluare a posibilei lor apartenențe la populația de celule stem hepatice (progenitoare).

Celulele Ito sunt un participant important la refacerea parenchimului în timpul regenerării ficatului datorită macromoleculelor din matricea extracelulară produse de acestea și remodelării sale, precum și producerii factorilor de creștere. Primele îndoieli cu privire la validitatea teoriei bine stabilite, considerând celulele Ito exclusiv ca fiind principalii vinovați de fibroză hepatică, au apărut atunci când s-a constatat că aceste celule produc un număr semnificativ de citokine morfogene. Printre acestea, un grup semnificativ este format din citokine, care sunt potențiali mitogeni pentru hepatocite.

Cel mai important din acest grup este factorul de creștere a hepatocitelor - mitogenul hepatocitelor, care este necesar pentru proliferarea celulelor, supraviețuirea și motilitatea (este cunoscut și ca factor de împrăștiere. Un defect în acest factor de creștere și (sau) receptorul său C-met. la șoareci duce la hipoplazie hepatică și distrugerea parenchimului acestuia ca urmare a suprimării proliferării hepatoblastelor, creșterea apoptozei și adeziunea celulară insuficientă.

Pe lângă factorul de creștere al hepatocitelor, celulele Ito produc factor de celule stem. Acest lucru a fost demonstrat într-un model de regenerare hepatică după hepatectomie parțială și expunere la 2-acetaminofluoren. De asemenea, s-a constatat că celulele Ito secretă factor de creștere transformant – și factor de creștere epidermic, care joacă un rol important atât în ​​proliferarea hepatocitelor în timpul regenerării, cât și stimulează mitoza celulelor Ito în sine. Proliferarea hepatocitelor este, de asemenea, declanșată de epimorfina proteinei morfogene mezenchimale exprimată de celulele Ito, care apare în ele după hepatectomie parțială, și pleiotrofina.

Pe lângă mecanismele paracrine de interacțiune dintre hepatocite și celulele Ito, un rol joacă și contactele intercelulare directe ale acestor celule cu hepatocite. Importanța contactelor intercelulare dintre celulele Ito și celulele progenitoare epiteliale a fost demonstrată in vitro, când cultivarea într-o cultură mixtă s-a dovedit a fi mai eficientă pentru diferențierea acestora din urmă în hepatocite producătoare de albumină decât cultivarea celulelor separate printr-o membrană, când puteau schimba doar factori solubili prin mediul cultural. Izolat din ficatul fetal al șoarecilor la 13,5 zile. gestație, celulele mezenchimale cu fenotipul Thy-1 + / С049!± / vimentin + / desmin + / --GMA +, după stabilirea contactelor intercelulare directe, au stimulat diferențierea populației de celule endodermice hepatice primitive - în hepatocite (conținând glicogen). , care exprimă m-ARN tirozin aminotransferaza și denumirea triptofosfatului). Populația de celule mezenchimale Thy-1 + / desmin + nu a exprimat markeri de hepatocite, endoteliu și celule Kupffer și, cel mai probabil, a fost reprezentată de celule Ito. O densitate mare de celule Ito pozitive pentru desmină și locația lor în contact strâns cu hepatocitele diferențiate au fost observate in vivo în ficatul prenatal de șobolan și uman. Astfel, toate aceste fapte ne permit să concluzionam că acest tip de celulă este cea mai importantă componentă a micromediului necesară dezvoltării normale a hepatocitelor în ontogeneză și refacerii lor în procesul de regenerare reparatorie.

În ultimii ani, s-au obținut date care indică un efect semnificativ al celulelor Ito asupra diferențierii celulelor stem hematopoietice. Astfel, celulele Ito produc eritropoietină și neurotrofină, care influențează diferențierea nu numai a celulelor epiteliale hepatice, ci și a celulelor stem hematopoietice. Studiul hematopoiezei fetale la șobolani și oameni a arătat că aceste celule constituie micromediul insulelor hematopoiezei din ficat. Celulele Ito exprimă o moleculă de adeziune a celulelor vasculare-1 (VCAM-1), o moleculă cheie pentru menținerea aderenței progenitoarelor hematopoietice la celulele stromale ale măduvei osoase. În plus, ele exprimă, de asemenea, factorul stromal-1 - (Stromal derived factor-1 -, SDF-1 -) - un potențial chemoatractant pentru celulele stem hematopoietice, stimulând migrarea acestora la locul hematopoiezei prin interacțiunea cu un receptor specific Cystein-X - Receptorul de cisteină 4 (CXR4), precum și proteina homeobox Hlx, în cazul unui defect în care sunt afectate atât dezvoltarea ficatului în sine, cât și hematopoieza hepatică. Cel mai probabil, expresia VCAM-1 și SDF-1 a pe celulele fetale lui Ito este factorul declanșator pentru atragerea celulelor progenitoare hematopoietice către ficatul fetal pentru diferențierea ulterioară. Retinoizii acumulați de celulele Ito sunt, de asemenea, un factor morfogenetic important pentru celulele hematopoietice și epitelii. Ar trebui spus despre influența celulelor Ito asupra celulelor stem mezenchimale. Celulele Ito, izolate din ficatul de șobolan și complet activate, modulează diferențierea celulelor stem mezenchimale (celule stromale mezenchimale multipotente) ale măduvei osoase în celule precum hepatocite (acumulând glicogen și care exprimă tetaza și fosfoenolpiruvat carboxikinaza) după 2 săptămâni. co-cultivare.

Astfel, faptele științifice acumulate ne permit să concluzionam că celulele Ito sunt unul dintre cele mai importante tipuri de celule necesare pentru dezvoltarea și regenerarea ficatului. Aceste celule sunt cele care creează micromediul atât pentru hematopoieza hepatică fetală, cât și pentru diferențierea hepatocitelor în timpul dezvoltării prenatale, precum și pentru diferențierea celulelor progenitoare epiteliale și mezenchimale în hepatocite in vitro. În prezent, aceste date nu sunt puse la îndoială și sunt recunoscute de toți cercetătorii hepatici. Ce a servit atunci ca punct de plecare pentru apariția ipotezei prezentate în titlul articolului?

În primul rând, apariția sa a fost facilitată de identificarea în ficat a celulelor care exprimă simultan atât markeri epiteliali ai hepatocitelor, cât și markeri mezenchimale ai celulelor Ito. Prima lucrare în acest domeniu a fost efectuată în studiul histo- și organogenezei prenatale a ficatului mamiferelor. Procesul de dezvoltare este evenimentul cheie, al cărui studiu face posibilă urmărirea în condiții naturale a dinamicii formării primare a fenotipului definitiv al diferitelor tipuri celulare ale unui organ cu ajutorul unor markeri specifici. În prezent, gama de astfel de markere este destul de largă. În lucrările dedicate studiului acestei probleme, au fost utilizați diverși markeri ai celulelor mezenchimale și epiteliale, populații individuale de celule ale ficatului, celule stem (inclusiv hematopoietice).

În studiile efectuate s-a constatat că celulele Ito desmin-pozitive ale fetușilor de șobolan sunt tranzitorii timp de 14-15 zile. gestația exprimă markeri epiteliali caracteristici hepatoblastelor, cum ar fi citocheratinele 8 și 18. Pe de altă parte, hepatoblastele în același timp de dezvoltare exprimă markerul celulei Ito desmină. Acesta este ceea ce a făcut posibil să se facă o presupunere cu privire la existența în ficat în timpul dezvoltării intrauterine a celulelor cu un fenotip tranzițional care exprimă atât markeri mezenchimali, cât și epiteliali și, prin urmare, să se ia în considerare posibilitatea dezvoltării celulelor Ito și a hepatocitelor dintr-unul. sursă și (sau) să considere aceste celule ca fiind unul și același tip de celule în diferite stadii de dezvoltare. Studii ulterioare privind studiul histogenezei, efectuate pe materialul ficatului embrionar uman, au arătat că la 4-8 săptămâni. Dezvoltarea in utero a ficatului uman, celulele Ito au exprimat citokeratinele 18 și 19, ceea ce a fost confirmat prin colorare imunohistochimică dublă și a fost observată o colorare slab pozitivă pentru desmină în hepatoblaste.

Cu toate acestea, într-o lucrare publicată în 2000, autorii nu au reușit să dezvăluie expresia desminei în hepatoblastele din ficatul fetușilor de șoarece și E-cadherina și citokeratinele în celulele Ito. Autorii au obținut colorare pozitivă pentru citocheratine în celulele Ito doar într-o mică proporție de cazuri, pe care le-au asociat cu reactivitate încrucișată nespecifică a anticorpilor primari. Alegerea acestor anticorpi provoacă o oarecare nedumerire - în lucrare au fost utilizați anticorpi la desmină de pui și citokeratine bovine 8 și 18.

Pe lângă desmină și citocheratine, un marker comun pentru celulele Ito și hepatoblastele fetale de șoarece și șobolan este un alt marker mezenchimal - molecula de adeziune a celulelor vasculare VCAM-1. VCAM-1 este un marker de suprafață unic care distinge celulele Ito de miofibroblastele din ficatul de șobolan adult și este prezent, de asemenea, pe mai multe alte celule hepatice de origine mezenchimală, cum ar fi endoteliocitele sau celulele miogenice.

O altă dovadă în favoarea ipotezei luate în considerare este posibilitatea transdiferențierii (conversiei) mezenchimato-epiteliale a celulelor Ito izolate din ficatul șobolanilor adulți. Trebuie remarcat faptul că literatura de specialitate discută în principal transdiferențierea epitelial-mezenchimală, mai degrabă decât mezenchimal-epitelială, deși ambele direcții sunt recunoscute ca posibile, iar termenul „transdiferențiere epitelial-mezenchimală” este adesea folosit pentru a desemna transdiferențierea în oricare dintre direcții. După ce au analizat profilul de expresie al ARNm și al proteinelor corespunzătoare în celulele Ito izolate din ficatul șobolanilor adulți după expunerea la tetraclorura de carbon (CTC), autorii au găsit în ele atât markeri mezenchimali, cât și epiteliali. Printre markerii mezenchimale au fost identificate nestin, --GMA, metaloproteinaza matricei-2 (Matrix Metalloproteinase-2, MMP-2), iar printre markerii epiteliali - piruvat kinaza musculara (MPK), caracteristica celulelor ovale, citokeratina 19, a -FP, E-caderina, precum și factorul de transcripție Hepatocyte nuclear factor 4- (HNF-4-), specific pentru celulele destinate să devină hepatocite. De asemenea, s-a constatat că în cultura primară a celulelor progenitoare hepatice epiteliale umane, sunt exprimați markeri ARNm ai celulelor Ito nestin, GFAP - progenitorii epiteliali coexprimă atât markeri epiteliali, cât și mezenchimale. Posibilitatea transdiferențierii mezenchimato-epiteliale este confirmată de apariția în celulele Ito a kinazei legate de integrină (ILK), o enzimă necesară pentru o astfel de transdiferențiere.

Transdiferențierea mezenchimato-epitelială a fost, de asemenea, dezvăluită în experimentele noastre in vitro, unde a fost luată o abordare originală pentru a cultiva o populație pură de celule Ito izolate din ficatul de șobolan până când s-a format un monostrat dens de celule. După aceea, celulele au încetat să exprime desmină și alți markeri mezenchimale, au dobândit morfologia celulelor epiteliale și au început să exprime markeri caracteristici hepatocitelor, în special, citocheratinele 8 și 18. Rezultate similare au fost obținute în timpul cultivării organotipice a ficatului embrionar de șobolan.

În ultimul an au fost publicate două articole în care celulele Ito sunt considerate ca un subtip de celule ovale, sau ca derivați ai acestora. Celulele ovale sunt celule ovale mici cu o margine îngustă de citoplasmă care apar în ficat în unele modele de leziuni hepatice toxice și sunt considerate în prezent celule progenitoare biopotente capabile să se diferențieze atât în ​​hepatocite, cât și în colangiocite. Pornind de la faptul că genele exprimate de celulele Ito izolate coincid cu genele exprimate de celulele ovale, iar în anumite condiții de cultivare a celulelor Ito apar hepatocite și celule ale căilor biliare, autorii au testat ipoteza conform căreia Ito. celulele sunt un tip de celule ovale capabile să genereze hepatocite pentru a regenera ficatul deteriorat. Șoarecii transgenici GFAP-Cre / GFP (proteina verde fluorescentă) au fost hrăniți cu o dietă cu deficit de metionină-colină / îmbogățită cu etionină pentru a activa celulele Ito și celulele ovale. Celulele de repaus ale lui Ito aveau un fenotip GFAP +. După activarea celulelor Ito prin deteriorare sau cultivare, expresia GFAP în ele a scăzut și au început să exprime markeri ai celulelor ovale și mezenchimale. Celulele ovale au dispărut când au apărut hepatocitele GFP +, începând să exprime albumina și în cele din urmă înlocuind zone mari ale parenchimului hepatic. Pe baza datelor obținute, autorii au sugerat că celulele Ito sunt un subtip de celule ovale care se diferențiază în hepatocite prin faza „mezenchimală”.

În experimentele efectuate pe același model de activare a celulelor ovale, când acestea din urmă au fost izolate din ficatul de șobolan, s-a constatat că celulele ovale in vitro exprimă nu numai markerii lor tradiționali 0V-6, BD-1/BD-2 și M2PK și arborii markeri ai matricei extracelulare, inclusiv colageni, metaloproteinaze ale matricei și inhibitori tisulari ai metaloproteinazelor - markeri ai celulelor Ito. După expunerea la celulele TGF-pl, pe lângă suprimarea creșterii și modificările morfologice, o creștere a expresiei acestor gene, precum și a genelor desmin și GFAP, apariția expresiei factorului de transcripție Snail responsabil de epitelial-mezenchimal. s-au notat transdiferențierea și terminarea expresiei E-caderinei, ceea ce indică posibilitatea transdiferențierii „inversa” a celulelor ovale în celule Ito.

Deoarece celulele ovale sunt considerate în mod tradițional ca precursori bipotenți atât ai hepatocitelor, cât și ai colangiocitelor, s-au încercat să se stabilească posibilitatea existenței unor forme de tranziție între celulele epiteliale ale căilor biliare intrahepatice și celulele Ito. Astfel, s-a demonstrat că în structurile de tip conductă mică ale ficatului normal și deteriorat colorate pozitiv pentru markerul de celule Ito - GMA, cu toate acestea, în fotografiile prezentate în articol, care reflectă rezultatele colorației imunofluorescente, este posibil să se determine ce acestea - GMA + structuri de conducte - căile biliare sau vase de sânge - nu este posibilă. Cu toate acestea, au fost publicate alte rezultate care indică expresia markerilor de celule Ito în colangiocite. În lucrarea deja menționată a lui L. Yang, a fost arătată expresia markerului de celule Ito GFAP de către celulele căilor biliare. Proteina filamentului intermediar al citoscheletului cinemină, care este prezentă în ficatul normal în celulele Ito și celulele vasculare, apare în celulele ductului implicate în dezvoltarea reacției ductulare; s-a exprimat și în celulele colangi-ocarcinomului. Astfel, dacă există o mulțime de dovezi diferite cu privire la posibilitatea transdiferențierii reciproce a celulelor Ito și a hepatocitelor, atunci cu colangiocite astfel de observații sunt încă rare și nu întotdeauna lipsite de ambiguitate.

Rezumând, putem spune că modelele de exprimare a markerilor mezenchimatoși și epiteliali atât în ​​timpul histo- și organogenezei hepatice, cât și în diferite condiții experimentale atât in vivo, cât și in vitro indică posibilitatea unor tranziții minime atât mezenchimato-epiteliale, cât și epitelial-mezenchimatoase. între celule Ito / celule ovale / hepatocite și, prin urmare, permit considerarea celulelor Ito ca una dintre sursele dezvoltării hepatocitelor. Aceste fapte indică, fără îndoială, o relație inextricabilă între aceste tipuri de celule și, de asemenea, indică o plasticitate fenotipică semnificativă a celulelor Ito. Plasticitatea fenomenală a acestor celule este evidențiată și de expresia lor a unui număr de proteine ​​neuronale, cum ar fi GFAP, nestinul, neurotrofinele și receptorii acestora, molecula de adeziune a celulelor neuronale (N-CAM), sinaptofizina, factorul de creștere a nervilor (Neural). factor de creștere, NGF), un factor neurotrofic derivat din creier (BDNF), pe baza căruia un număr de autori discută posibilitatea dezvoltării celulelor Ito din creasta neură. Cu toate acestea, în ultimul deceniu, o altă versiune a atras o mare atenție a cercetătorilor - și anume, posibilitatea dezvoltării hepatocitelor și a celulelor Ito din celule stem hematopoietice și mezenchimale.

Prima lucrare în care s-a dovedit o asemenea posibilitate a fost publicată de V.E. Petersen și colab., Care au arătat că hepatocitele sunt capabile să se dezvolte dintr-o celulă stem hematopoietică. Ulterior, acest fapt a fost confirmat în mod repetat în lucrările altor oameni de știință, iar puțin mai târziu a fost demonstrată posibilitatea diferențierii în hepatocite pentru celulele stem mezenchimale. Cum se întâmplă acest lucru - prin fuziunea celulelor donatoare cu celulele hepatice ale primitorului sau prin transdiferențierea acestora - nu este încă clar. Totuși, am constatat, de asemenea, că celulele stem hematopoietice din sângele din cordonul ombilical uman, atunci când sunt transplantate în splina șobolanilor care au suferit hepatectomie parțială, sunt colonizate în ficat și sunt capabile să se diferențieze în hepatocite și celule hepatice sinusoidale, așa cum demonstrează prezența markeri de celule umane în aceste tipuri de celule. În plus, am arătat pentru prima dată că modificarea genetică preliminară a celulelor din sângele din cordonul ombilical nu afectează semnificativ distribuția acestora și posibilitatea de diferențiere în ficatul primitorului după transplant. În ceea ce privește probabilitatea dezvoltării hepatocitelor din celulele stem hematopoietice în timpul histogenezei prenatale, deși această posibilitate nu poate fi exclusă complet, pare totuși puțin probabilă, deoarece morfologia, localizarea și fenotipul acestor celule diferă semnificativ de cele pentru celulele hepatice. Aparent, chiar dacă o astfel de cale există, ea nu joacă un rol semnificativ în formarea celulelor epiteliale și sinusoide în timpul ontogenezei. Rezultatele studiilor recente, efectuate atât in vivo, cât și in vitro, au pus la îndoială teoria bine stabilită a dezvoltării hepatocitelor numai din epiteliul endodermic al intestinului anterior, în legătură cu care a apărut în mod natural presupunerea că tulpina regională. celula ficatului poate fi găsită printre celulele sale mezenchimale. Aceste celule ar putea fi celule Ito?

Având în vedere proprietățile unice ale acestor celule, plasticitatea lor fenomenală și existența celulelor cu un fenotip de tranziție de la celulele Ito la hepatocite, presupunem că aceste celule sunt candidații principali pentru acest rol. Argumente suplimentare în favoarea acestei posibilități sunt că aceste celule, ca și hepatocitele, pot fi formate din celule stem hematopoietice și sunt singurele celule hepatice sinusoidale care sunt capabile să exprime markeri de celule stem (progenitoare).

În 2004, s-a descoperit că celulele Ito se pot dezvolta și dintr-o celulă stem hematopoietică. După transplantul de celule de măduvă osoasă de la șoareci GFP, celulele GFP + au apărut în ficatul șoarecilor primitori, exprimând markerul de celule Ito GFAP, iar procesele acestor celule au pătruns între hepatocite. Dacă ficatul destinatarului a fost deteriorat de CCU, celulele transplantate au exprimat, de asemenea, celule asemănătoare blastului lui Ito. Când fracțiunea de celule non-parenchimatoase a fost izolată din ficatul șoarecilor primitori, celulele GFP + cu picături de lipide au reprezentat 33,4 + 2,3% din celulele izolate; au exprimat desmin si GFAP, iar dupa 7 zile. cultivare

Pe de altă parte, transplantul de celule de măduvă osoasă duce la formarea nu numai a celulelor Ito, ci și a genei de colagen de tip I, pe baza căreia s-a ajuns la concluzia că un astfel de transplant favorizează dezvoltarea fibrozei. Cu toate acestea, există studii care au demonstrat o scădere a fibrozei hepatice din cauza migrării celulelor transplantate în septuri fibroase și a producției de metaloproteinaza matriceală-9 (Matrix Metalloproteinase-9, MMP-9) de către aceste celule, care este una dintre cele mai importante caracteristici ale celulelor Ito. Datele noastre preliminare au arătat, de asemenea, o scădere a numărului de miofibroblaste și o scădere a nivelului de fibroză după autotransplantul unei fracțiuni de celule mononucleare din sângele periferic la pacienții cu hepatită cronică cu fibroză hepatică severă. În plus, ca rezultat al transplantului de celule stem hematopoietice, în ficatul primitorului pot apărea și alte tipuri de celule capabile să producă matrice extracelulară. Astfel, în leziunile hepatice induse de ligatura căii biliare, celulele transplantate de fibrocite diferențiate care exprimă colagen și numai atunci când sunt cultivate în prezența TGF-pl, sunt miofibroblaste diferențiate, potențial favorizând fibroza. Astfel, autorii au asociat pericolul fibrozei hepatice după transplantul de celule de măduvă osoasă nu cu celule Ito, ci cu „o populație unică de fibrocite”. Din cauza inconsecvenței datelor obținute, discuția s-a desfășurat pe încă o întrebare - celulele Ito, care au apărut ca urmare a diferențierii celulelor stem hematopoietice transplantate, vor contribui la dezvoltarea fibrozei sau vor asigura regenerarea completă a țesutul hepatic și reducerea fibrozei. În ultimii ani, a devenit evident (inclusiv din datele de mai sus) că originea miofibroblastelor din ficat poate fi diferită - de la celulele Ito, de la fibroblastele tractului portal și chiar de la hepatocite. De asemenea, s-a constatat că miofibroblastele de diferite origini diferă într-un număr de proprietăți. Astfel, celulele Ito activate diferă de miofibroblastele tractului portal prin conținutul de vitamine, activitatea contractilă, răspunsul la citokine, în special TGF-p și capacitatea de apoptoză spontană. În plus, aceste populații de celule diferă și, dacă este posibil, exprimă molecula de adeziune a celulelor vasculare VCAM-1, care este prezentă pe celulele Ito și absentă pe miofibroblaste. De asemenea, trebuie spus că pe lângă producerea de proteine ​​ale matricei extracelulare, celulele Ito activate produc și metaloproteinaze de matrice, care distrug această matrice. Astfel, rolul celulelor Ito, inclusiv al celor formate din celule stem hematopoietice, în dezvoltarea fibrozei este departe de a fi la fel de clar pe cât se credea anterior. Aparent, ele nu favorizează atât de mult fibroza, ci remodelează matricea extracelulară în procesul de recuperare a ficatului după lezare, oferind astfel un cadru de țesut conjunctiv pentru regenerarea celulelor parenchimatoase hepatice.

ficat de șobolan normal și deteriorat. Celulele de șobolan Ito exprimă, de asemenea, un alt marker al celulelor stem (progenitoare) - CD133, și demonstrează proprietățile celulelor progenitoare capabile, în funcție de condiții, să se diferențieze în diferite - 2) atunci când adaugă citokine care facilitează diferențierea în celule endoteliale, formează structuri tubulare ramificate cu inducerea exprimării markerilor celulelor endoteliale - NO sintaza endotelială și caderina endotelială vasculară; 3) când se utilizează citokine care promovează diferențierea celulelor stem în hepatocite - în celule rotunjite care exprimă markeri hepatocitari - FP și albumină. De asemenea, celulele Ito de șobolan exprimă 0ct4, care este caracteristic celulelor stem pluripotente. Interesant este că doar o parte din populația de celule Ito poate fi izolată printr-un sortator magnetic folosind anticorpi la CD133; cu toate acestea, după izolarea standard (pronază/colagenază), toate celulele atașate la plastic au exprimat CD133 și 0kt4. Un alt marker pentru celulele progenitoare, Bcl-2, este exprimat de celulele desmin + în timpul dezvoltării prenatale a ficatului uman.

Astfel, diverși cercetători au demonstrat posibilitatea exprimării de către celulele Ito a anumitor markeri ai celulelor stem (progenitoare). Mai mult decat atat, destul de recent, a fost publicat un articol in care pentru prima data s-a formulat ipoteza ca spatiul Disse, format din proteine ​​membranare bazale, celule endoteliale si hepatocite, in care se afla celulele Ito, poate constitui un micromediu pentru acestea din urma. , jucând rolul unei „nișe” de celule stem. Acest lucru este evidențiat de câteva trăsături caracteristice nișei de celule stem și identificate în componentele micromediului celulelor Ito. Astfel, celulele situate în imediata apropiere a celulei stem trebuie să dezvolte factori solubili, precum și să efectueze interacțiuni directe care să mențină celula stem într-o stare nediferențiată și să o rețină într-o nișă, adesea situată pe membrana bazală. Într-adevăr, celulele endoteliale ale capilarelor sinusoidale hepatice sintetizează SDF-1 solubil, care se leagă în mod specific de receptorul celulei Ito CXR4 și stimulează migrarea acestor celule in vitro. Această interacțiune joacă un rol cheie în migrarea celulelor stem hematopoietice către nișa lor finală din măduva osoasă în timpul ontogenezei și rezidența lor permanentă în aceasta, precum și în mobilizarea lor în sângele periferic. Este logic să presupunem că o astfel de interacțiune poate juca un rol similar în ficat, menținând celulele Ito în spațiul Disse. În primele etape ale regenerării ficatului, îmbunătățirea expresiei SDF-1 poate promova, de asemenea, recrutarea de compartimente suplimentare ale celulelor stem ale corpului. Inervarea celulelor de nișă ar trebui să implice sistemul nervos simpatic, care este implicat în reglarea recrutării celulelor stem hematopoietice. Semnalele noradrenergice din sistemul nervos simpatic joacă un rol critic în GCSF (mobilizarea celulelor stem hematopoietice din măduva osoasă indusă de factorl stimulator de colonii de granulocite. Localizarea terminațiilor nervoase în imediata vecinătate a celulelor Ito a fost confirmată în mai multe studii. De asemenea, s-a constatat că, ca răspuns la stimularea simpatică, celulele Ito secretă prostaglandine F2a și D, care activează glicogenoliza în celulele parenchimatoase din apropiere.Aceste fapte indică faptul că sistemul nervos simpatic poate avea un efect asupra nișei celulei Ito. O altă funcție a celulelor stem. Nișa celulară este de a menține un ciclu celular „lent” și o stare nediferențiată a celulelor stem.celule. Menținerea stării nediferențiate a celulelor Ito în condiții in vitro este facilitată de celulele hepatice parenchimatoase - în timpul cultivării acestor două populații de celule separate printr-o membrană, expresia markerilor de celule stem CD133 și 0kt4 este reținută în celulele Ito, în timp ce în în absența hepatocitelor, celulele Ito dobândesc fenotipul miofibroblastului și pierd markerii de celule stem. Astfel, expresia markerilor de celule stem este, fără îndoială, un semn al celulelor Ito latente. De asemenea, sa stabilit că efectul celulelor parenchimatoase asupra celulelor Ito se poate baza pe interacțiunea factorilor paracrini Wnt și Jag1 sintetizați de hepatocite cu receptorii corespunzători (Myc, Notchl) de pe suprafața celulelor Ito. Căile de semnalizare Wnt / b-catenina și Notch susțin capacitatea celulelor stem de a se auto-reînnoi prin diviziune simetrică lentă fără diferențiere ulterioară. O altă componentă importantă a nișei sunt proteinele membranei bazale, laminina și colagenul IV, care susțin starea latentă a celulelor Ito și suprimă diferențierea acestora. O situație similară se întâmplă în fibrele musculare și tubii seminiferi contorți, unde celulele satelit (celule stem musculare) și spermatogoniile nediferențiate sunt în contact strâns cu membrana bazală a fibrei musculare sau, respectiv, „epiteliul spermatogen”. Este evident că interacțiunea celulelor stem cu proteinele matricei extracelulare inhibă începutul diferențierii finale a acestora. Datele obținute ne permit, așadar, să considerăm celulele Ito drept celule stem, pentru care spațiul Disse poate servi drept nișă.

Datele noastre despre potența celulelor stem a celulelor Ito și despre posibilitatea formării hepatocitelor din aceste celule au fost confirmate în experimente pentru a studia regenerarea ficatului in vivo folosind modele de hepatectomie parțială și leziuni hepatice toxice de către nitrat de plumb. În mod tradițional, se crede că în aceste modele de regenerare hepatică nu are loc activarea compartimentului stem și lipsesc celulele ovale. Am putut stabili, totuși, că în ambele cazuri este posibil să se observă nu doar activarea celulelor Ito, ci și expresia în ele a unui alt marker al celulelor stem, și anume, receptorul pentru factorul de celule stem C-kit. . Deoarece expresia C-kit a fost observată și în hepatocite singulare (în ele a fost mai puțin intensă), localizate în principal în contact cu celulele Ito C-kit-pozitive, se poate presupune că aceste hepatocite au fost diferențiate de C-kit + Ito. celule. Evident, acest tip de celule nu numai că creează condiții pentru refacerea populației de hepatocite, dar ocupă și o nișă de celule stem regionale ale ficatului.

Astfel, s-a stabilit acum că celulele Ito exprimă cel puțin cinci markeri de celule stem în diferite condiții de dezvoltare, regenerare și cultivare. Toate datele acumulate până în prezent sugerează că celulele Ito pot juca rolul celulelor stem hepatice regionale, fiind una dintre sursele dezvoltării hepatocitelor (și eventual a colangiocitelor), și sunt totodată cea mai importantă componentă a micromediului pentru morfogeneza hepatică și hematopoieza hepatică. Cu toate acestea, pare a fi prematur să se tragă concluzii fără ambiguitate cu privire la apartenența acestor celule la populația de celule stem (progenitoare) ale ficatului. Cu toate acestea, există o nevoie evidentă de noi cercetări în această direcție, care, dacă au succes, vor deschide perspective pentru dezvoltarea unor metode eficiente de tratare a bolilor hepatice bazate pe transplantul de celule stem.

În acest caz, aceste celule se înmulțesc la efectele citokinelor, factorilor de creștere și chemokinelor (citokine proinflamatorii) produse de ficatul afectat. Activarea cronică a celulelor stelate ca răspuns la stresul oxidativ cauzat de replicarea virală HBV și HCV poate contribui la fibrogeneza și creșterea proliferării hepatocitelor infectate cronic cu HBV și HCV.

Astfel, celulele stelate sunt implicate în reglarea creșterii, diferențierii și circulației hepatocitelor, care, împreună cu activarea MAP kinazelor, pot duce la cancer hepatic [Block, 2003].

Link-uri:

Desen aleatoriu

Atenţie! Informatii pe site

destinate exclusiv educaționale

Studiul efectului celulelor Ito hepatice asupra celulelor stem

Comunicarea intercelulară poate fi realizată prin secreție paracrină și contacte directe de la celulă la celulă. Se știe că celulele perisinusoidale hepatice (HPC) stabilesc nișa de celule stem regionale și determină diferențierea acestora. În același timp, HPC rămâne slab caracterizată la nivel molecular și celular.

Shafigullina A.K., Trondin A.A., Shaikhutdinova A.R., Kaligin M.S., Gazizov I.M., Rizvanov A.A., Gumerova A.A., Kiyasov A.P.

GOU VPO „Universitatea Medicală de Stat Kazan a Agenției Federale pentru Sănătate și Dezvoltare Socială”

Evaluarea experimentală a osteoinducției proteinei morfogenetice osoase recombinate

Tehnologii celulare în tratamentul bolilor degenerative-distrofice ale oaselor și articulațiilor

Cușca lui Ito

calmși activat. Celulele Ito activate

stare calmă

perisinusoidal(subendotelial) și interhepatocelular... Primele părăsesc corpul celular și se extind de-a lungul suprafeței capilarului sinusoidal, acoperindu-l cu ramuri subțiri asemănătoare degetelor. Excrescențele perisinusoidale sunt acoperite cu vilozități scurte și au microejecții lungi caracteristice care se extind și mai departe de-a lungul suprafeței tubului endotelial capilar. Excrescențe interhepatocelulare, după ce au depășit placa de hepatocite și ajung la sinusoidul adiacent, sunt împărțite în mai multe excrescențe perisinusoidale. Astfel, celula lui Ito acoperă în medie puțin mai mult de două sinusoide adiacente.

stare activată

Celulele hepatice

Ficatul uman este compus din celule, ca orice țesut organic. Natura este aranjată astfel încât acest organ îndeplinește cele mai importante funcții, curăță organismul, produce bilă, acumulează și stochează glicogen, sintetizează proteinele plasmatice, gestionează procesele metabolice și participă la normalizarea cantității de colesterol și a altor componente necesare pentru activitatea vitală a organismului.

Pentru a-și îndeplini scopul, celulele hepatice trebuie să fie sănătoase, să aibă o structură stabilă, fiecare persoană trebuie să le protejeze de distrugere.

Despre structura și tipurile de lobuli hepatici

Compoziția celulară a organului este caracterizată de diversitate. Celulele hepatice formează lobuli, segmentele sunt formate din lobuli. Structura organului este astfel încât hepatocitele (celule hepatice principale) sunt situate în jurul venei centrale, se ramifică din aceasta, se interconectează, formând sinusoide, adică goluri umplute cu sânge. Sângele curge prin ele ca prin capilare. Ficatul este alimentat cu sânge din vena portă și o arteră situată în organ. Lobulii hepatici produc bilă și o descarcă în canalele de flux.

Alte tipuri de celule hepatice și scopul lor

1. Endoteliale - celule care captusesc sinusoidele si contin fenestra. Acestea din urmă sunt menite să formeze o barieră în trepte între sinusoid și spațiul Disse.
2. Disse-spațiul însuși este umplut cu celule stelate, ele asigură scurgerea fluidului tisular în vasele limfatice ale zonelor portal.
3. Celulele lui Kupffer sunt asociate cu endoteliul, sunt atașate de acesta, funcția lor este de a proteja ficatul atunci când o infecție generalizată intră în organism, în caz de leziune.
4. Celulele gropițelor sunt ucigașele hepatocitelor afectate de virus, în plus, sunt citotoxice pentru celulele tumorale.

Ficatul uman este format din 60% din hepatocite și 40% din alte tipuri de compuși celulari. Hepatocitele au aspectul unui poliedru, sunt cel puțin 250 de miliarde. Funcționarea normală a hepatocitelor se datorează spectrului de componente care sunt secretate de celulele sinusoidale care umplu compartimentul sinusoidal. Adică, celulele Kupffer enumerate mai sus, stelate și gropi (limfocite intrahepatice).

Endotelial este un filtru între sângele din spațiul sinusoidal și plasma din spațiul Disse. Acest filtru biologic sortează compuși mari, excesiv de bogati în retinol și colesterol și nu îi lasă să treacă, ceea ce este benefic pentru organism. În plus, funcția lor este de a proteja ficatul (și anume, hepatocitele) de deteriorarea mecanică a celulelor sanguine.

Cititorul nostru obișnuit a recomandat o metodă eficientă! Noua descoperire! Oamenii de știință de la Novosibirsk au identificat cel mai bun remediu pentru curățarea ficatului. 5 ani de cercetare. Auto-tratament la domiciliu! După ce l-am revizuit cu atenție, am decis să-l oferim atenției dumneavoastră.

Procesul de interacțiune a elementelor organelor

Interacțiunea are loc între toate particulele organului, care are o schemă destul de complexă. Un ficat sănătos se caracterizează prin stabilitatea conexiunilor celulare; în procesele patologice, o matrice extracelulară este urmărită la microscop.

Țesutul organului sub influența toxinelor, de exemplu, alcoolul, agenții virali, suferă modificări. Acestea sunt după cum urmează:

• depunerea în organ a produselor formate în timpul tulburărilor metabolice;
• distrofie celulară;
• necroza hepatocitelor;
• fibroza țesuturilor hepatice;
• proces inflamator al ficatului;
• colestază.

Despre tratamentul patologiei organelor

Este util ca fiecare pacient să știe ce înseamnă modificările la care este supus organul. Nu toate sunt catastrofale. De exemplu, distrofia poate fi ușoară sau severă. Ambele procese sunt reversibile. În prezent, există medicamente care refac celulele și segmentele întregi ale ficatului.

Colestaza poate fi vindecată chiar și cu remedii populare - decocturi și infuzii. Ele contribuie la normalizarea sintezei bilirubinei și elimină tulburările de ieșire a bilei în duoden.

Cu ciroza în stadiul inițial, tratamentul începe cu o dietă, apoi este prescrisă terapia hepatoprotectoare. Cel mai eficient mod de a trata ciroza și fibroza sunt celulele stem, care sunt injectate în vena ombilicală sau intravenos, refac hepatocitele deteriorate de diverși agenți.

Principalele motive pentru moartea celulelor hepatice sunt abuzul de alcool, expunerea la droguri, inclusiv droguri, medicamente. Orice toxină care intră în organism este un distrugător de ficat. Prin urmare, ar trebui să renunți la obiceiurile proaste pentru a avea un ficat sănătos.

Cine a spus că este imposibil să vindeci boala hepatică severă?

• Au fost încercate multe metode, dar nimic nu ajută.
• Și acum sunteți gata să profitați de orice oportunitate care vă va oferi sănătatea mult așteptată!

Există un tratament eficient pentru ficat. Urmăriți linkul și aflați ce recomandă medicii!

Citeste si:

Studii: Universitatea de Stat de Medicină Rostov (Universitatea de Stat de Medicină Rostov), ​​Departamentul de Gastroenterologie și Endoscopie.

CELULELE ENDOTELIALE, CELULELE KUPFER ȘI ITO

Structura celulelor endoteliale, celulele Kupffer și Ito, vom lua în considerare utilizarea exemplului a două figuri.

Figura din dreapta textului prezintă capilarele sinusoidale (SC) ale ficatului - capilare intralobulare de tip sinusoidal, crescând de la venulele de intrare la vena centrală. Capilarele sinusoidale hepatice formează o rețea anastomotică între plăcile hepatice. Căptușeala capilarelor sinusoidale este formată din celule endoteliale și Kupffer.

În figura din stânga textului, lamina hepatică (LF) și două capilare sinusoidale (SC) ale ficatului sunt tăiate vertical și orizontal pentru a arăta celulele perisinusoidale (CI) lui Ito. Figura arată, de asemenea, căile biliare tăiate (GC).

CELULE ENDOTELIALE

Celulele endoteliale (CE) sunt celule scuamoase foarte aplatizate, cu un nucleu mic alungit, organite subdezvoltate și un număr mare de vezicule micropinocitare. Citomembrana este pătată cu deschideri neregulate (O) și fenestre, adesea grupate în plăci reticulate (RP). Aceste găuri permit plasmei sanguine, dar nu celulelor sanguine, să treacă, oferindu-i acces la hepatocite (D). Celulele endoteliale nu au membrană bazală și nu au fagocitoză. Acestea sunt conectate între ele folosind ansambluri mici de conectare (nu sunt prezentate). Împreună cu celulele lui Kupffer, celulele endoteliale formează limita interioară a spațiului Disse (DP); marginea sa exterioară este formată din hepatocite.

CELULELE LUI KUPFER

Celulele Kupffer (KK) sunt celule stelate mari, instabile, în interiorul capilarelor sinusoidale hepatice, parțial la bifurcațiile lor.

Procesele celulelor Kupffer trec fără dispozitive de conectare între celulele endoteliale și traversează adesea lumenul sinusoidelor. Celulele Kupffer conțin un nucleu oval, multe mitocondrii, un complex Golgi bine dezvoltat, cisterne scurte ale reticulului endoplasmatic granular, mulți lizozomi (L), corpuri reziduale și plăci inelare rare. Celulele Kupffer includ, de asemenea, fagolizozomi mari (PL), care conțin adesea globule roșii învechite și materii străine. Se mai poate detecta, mai ales cu colorație supravitală, incluziuni de hemosiderin sau fier.

Suprafața celulelor Kupffer prezintă pliuri citoplasmatice aplatizate neregulate numite lamellipodia (LP) - pedunculi lamelari, precum și procese numite filopodii (F) și microvilli (MV) acoperite cu glicocalix. Plasmolema formează corpi vermiformi (CT) cu o linie densă situată central. Aceste structuri pot reprezenta un glicocalix condensat.

Celulele Kupffer sunt macrofage, foarte probabil formând un gen de celule independente. De obicei provin din alte celule Kupffer din cauza diviziunii mitotice a acestora din urmă, dar pot proveni și din măduva osoasă. Unii autori cred că sunt celule endoteliale activate.

Ocazional, o fibră nervoasă autonomă (NV) trece accidental prin spațiul Disse. În unele cazuri, fibrele vin în contact cu hepatocitele. Marginile hepatocitelor sunt delimitate de depresiuni interhepatocitare (MU), presărate cu microvilozități.

CELULELE ITO

Acestea sunt celule stelate localizate în spațiile Disse (DP). Nucleii lor sunt bogați în cromatină condensată și sunt de obicei deformați de picături mari de lipide (LA). Acestea din urmă sunt prezente nu numai în pericarion, ci și în procesele celulei și sunt vizibile din exterior ca proeminențe sferice. Organelele sunt slab dezvoltate. Celulele perisinusoidale prezintă activitate endocitotică slabă, dar nu posedă fagozomi. Celulele au mai multe procese lungi (O), care sunt în contact cu hepatocitele învecinate, dar nu formează complexe de legătură.

Procesele acoperă capilarele sinusoidale ale ficatului și în unele cazuri trec prin plăcile hepatice, intrând în contact cu sinusoidele hepatice adiacente. Procesele nu sunt constante, ramificate și subțiri; pot fi si turtite. Acumulând grupuri de picături de lipide, acestea se alungesc și iau forma unui ciorchine de struguri.

Se crede că celulele perisinusoidale lui Ito sunt celule mezenchimale slab diferențiate care pot fi considerate celule stem hematopoietice, deoarece pot fi transformate în condiții patologice în celule adipoase, celule stem sanguine active sau fibroblaste.

În condiții normale, celulele Ito sunt implicate în acumularea de grăsime și vitamina A, precum și în producția de fibre intralobulare reticulare și de colagen (KB).

Psihologie și psihoterapie

Această secțiune va include articole despre metode de cercetare, medicamente și alte componente legate de subiecte medicale.

O mică secțiune a site-ului care conține articole despre articole originale. Ceasuri, mobilier, obiecte decorative - toate acestea le gasesti in aceasta sectiune. Secțiunea nu este cea principală pentru site, ci servește mai degrabă ca un plus interesant în lumea anatomiei și fiziologiei umane.

Ito celulele hepatice

Enciclopedie online universală de popularizare

FICAT

FICAT, cea mai mare glandă din corpul vertebratelor. La om, este de aproximativ 2,5% din greutatea corporală, o medie de 1,5 kg pentru bărbați adulți și 1,2 kg pentru femei. Ficatul este situat în partea dreaptă sus a abdomenului; este atașat prin ligamente de diafragmă, perete abdominal, stomac și intestine și este acoperit cu o membrană fibroasă subțire - o capsulă glisson. Ficatul este un organ moale, dar dens, de culoare brun-roșiatică și este de obicei format din patru lobi: un lob drept mare, unul stâng mai mic și lobi caudați și pătrați mult mai mici care formează suprafața posterioară inferioară a ficatului.

Funcții.

Ficatul este un organ vital cu multe funcții diferite. Una dintre cele principale este formarea și secreția bilei, un lichid transparent de culoare portocalie sau galbenă. Bila conține acizi, săruri, fosfolipide (grăsimi care conțin o grupă fosfat), colesterol și pigmenți. Sărurile biliare și acizii biliari liberi emulsionează grăsimile (adică se rup în picături mici), facilitând astfel digestia acestora; transformă acizii grași în forme solubile în apă (care este necesar pentru absorbția atât a acizilor grași înșiși, cât și a vitaminelor liposolubile A, D, E și K); au acțiune antibacteriană.

Toți nutrienții absorbiți în sânge din tractul digestiv - produsele de digestie ale carbohidraților, proteinelor și grăsimilor, mineralelor și vitaminelor - trec prin ficat și sunt procesate în acesta. În acest caz, o parte din aminoacizi (fragmente de proteine) și o parte din grăsimi sunt transformate în carbohidrați, astfel încât ficatul este cel mai mare „depozit” de glicogen din organism. Sintetizează proteinele plasmatice din sânge - globuline și albumine, precum și reacțiile de conversie a aminoacizilor (deminare și transaminare). Dezaminarea - îndepărtarea grupărilor amino care conțin azot din aminoacizi - permite acestora din urmă să fie utilizate, de exemplu, pentru sinteza carbohidraților și grăsimilor. Transaminarea este transferul unei grupe amino de la un aminoacid la un cetoacid cu formarea unui alt aminoacid ( cm. METABOLISM). De asemenea, ficatul sintetizează corpi cetonici (produse ale metabolismului acizilor grași) și colesterol.

Ficatul este implicat în reglarea nivelului de glucoză (zahăr) din sânge. Dacă acest nivel crește, celulele hepatice transformă glucoza în glicogen (o substanță asemănătoare amidonului) și o depun. Dacă glicemia scade sub normal, glicogenul este descompus și glucoza intră în sânge. In plus, ficatul este capabil sa sintetizeze glucoza din alte substante, precum aminoacizii; acest proces se numește gluconeogeneză.

O altă funcție a ficatului este detoxifierea. Medicamentele și alți compuși potențial toxici pot fi transformați într-o formă solubilă în apă în celulele hepatice, ceea ce le permite să fie excretate în bilă; pot suferi, de asemenea, distrugere sau se conjuga (combina) cu alte substante pentru a forma produse inofensive care sunt usor excretate din organism. Unele substanțe sunt depozitate temporar în celulele lui Kupffer (celule speciale care absorb particulele străine) sau în alte celule ale ficatului. Celulele Kupffer sunt deosebit de eficiente în îndepărtarea și distrugerea bacteriilor și a altor particule străine. Datorită acestora, ficatul joacă un rol important în apărarea imunitară a organismului. Deținând o rețea densă de vase de sânge, ficatul servește și ca rezervor de sânge (conține în mod constant aproximativ 0,5 litri de sânge) și participă la reglarea volumului și a fluxului sanguin în organism.

În general, ficatul îndeplinește peste 500 de funcții diferite, iar activitatea sa nu a fost încă reprodusă artificial. Îndepărtarea acestui organ duce inevitabil la moarte în 1-5 zile. Cu toate acestea, ficatul are o rezervă internă uriașă, are o capacitate uimitoare de a se recupera după leziuni, astfel încât oamenii și alte mamifere pot supraviețui chiar și după ce 70% din țesutul hepatic este îndepărtat.

Structura.

Structura complexă a ficatului este perfect adaptată pentru a-și îndeplini funcțiile unice. Lobii sunt formați din mici unități structurale - lobuli. În ficatul uman, există aproximativ o sută de mii dintre ele, fiecare având 1,5–2 mm lungime și 1–1,2 mm lățime. Lobulul este format din celule hepatice - hepatocite, situate în jurul venei centrale. Hepatocitele sunt combinate în straturi groase de o celulă - așa-numitele. plăci hepatice. Ele se depărtează radial de vena centrală, se ramifică și se conectează între ele, formând un sistem complex de pereți; golurile înguste dintre ele, umplute cu sânge, sunt cunoscute sub denumirea de sinusoide. Sinusoidele sunt echivalente cu capilarele; trecând unul în altul, formează un labirint continuu. Lobulii hepatici sunt alimentați cu sânge din ramurile venei porte și ale arterei hepatice, iar bila formată în lobuli pătrunde în sistemul tubular, de la ei în căile biliare și este excretată din ficat.

Vena portă hepatică și artera hepatică asigură ficatului o aport de sânge dublă, neobișnuit. Sângele bogat în nutrienți din capilarele stomacului, intestinelor și mai multor alte organe se adună în vena portă, care, în loc să transporte sângele la inimă, ca majoritatea altor vene, îl duce la ficat. În lobulii ficatului, vena portă se împarte într-o rețea de capilare (sinusoide). Termenul „venă portală” se referă la direcția neobișnuită de transport al sângelui de la capilarele unui organ la capilarele altuia (rinichii și glanda pituitară au un sistem circulator similar).

A doua sursă de alimentare cu sânge a ficatului, artera hepatică, transportă sângele bogat în oxigen de la inimă către suprafețele exterioare ale lobulilor. Vena portă asigură 75–80%, iar artera hepatică 20–25% din cantitatea totală de sânge către ficat. În general, prin ficat trec aproximativ 1500 ml de sânge pe minut, adică. un sfert din debitul cardiac. Sângele din ambele surse ajunge în cele din urmă în sinusoide, unde se amestecă și merge în vena centrală. Din vena centrală începe scurgerea sângelui către inimă prin venele lobare în hepatic (a nu se confunda cu vena portă a ficatului).

Bila este secretată de celulele hepatice în cei mai mici tubuli dintre celule - capilarele biliare. Prin sistemul intern de tubuli și canale, acesta este colectat în canalul biliar. O parte din bilă merge direct în canalul biliar comun și este turnată în intestinul subțire, dar cea mai mare parte a bilei este returnată în vezica biliară, un mic sac de pereți musculari atașat la ficat, pentru depozitare prin canalul cistic. Când alimentele intră în intestine, vezica biliară se contractă și își eliberează conținutul în canalul biliar comun, care se deschide în duoden. Ficatul uman produce aproximativ 600 ml de bilă pe zi.

Triada portală și acinus.

Ramurile venei porte, ale arterei hepatice și ale ductului biliar sunt situate una lângă alta, la marginea exterioară a lobulului, și alcătuiesc triada portală. Mai multe astfel de triade portal sunt situate la periferia fiecărui lobul.

Acinusul este considerat unitatea funcțională a ficatului. Este porțiunea de țesut care înconjoară triada portală și include vasele limfatice, fibrele nervoase și sectoarele adiacente a doi sau mai mulți lobuli. Un acinus conține aproximativ 20 de celule hepatice situate între triada portală și vena centrală a fiecărui lobul. Într-o imagine bidimensională, un acinus simplu arată ca un grup de vase înconjurate de secțiuni adiacente de lobuli, iar într-o imagine tridimensională arată ca o boabă (acinus - lat. Berry), atârnând de o tulpină de sânge și vasele biliare. Acinusul, al cărui cadru microvascular este format din vasele de sânge și limfatice menționate mai sus, sinusoide și nervi, este o unitate microcirculatoare a ficatului.

Celulele hepatice

(hepatocitele) au forma de poliedre, dar au trei suprafețe funcționale principale: sinusoidal, orientat spre canalul sinusoidal; tubular - participând la formarea peretelui capilarului biliar (nu are propriul perete); și intercelular – se învecinează direct cu celulele hepatice vecine.

Cușca lui Ito

Celulele Ito (sinonime: celulă hepatică stelata, celulă care depozitează grăsime, lipocite, ing. Celula stelate hepatice, HSC, Celula Ito, celula Ito) - pericitele conținute în spațiul perisinusoidal al lobulului hepatic, capabile să funcționeze în două stări diferite - calmși activat. Celulele Ito activate joacă un rol major în fibrogeneza - formarea de țesut cicatricial în afectarea ficatului.

Într-un ficat intact se găsesc celule stelate în stare calmă... În această stare, celulele au mai multe excrescențe care acoperă capilarul sinusoidal. O altă trăsătură distinctivă a celulelor este prezența rezervelor de vitamina A (retinoide) în citoplasma lor sub formă de picături de grăsime. Celulele Ito repaus alcătuiesc 5-8% din toate celulele hepatice.

Excrescențele celulelor Ito sunt împărțite în două tipuri: perisinusoidal(subendotelial) și interhepatocelular... Primele părăsesc corpul celular și se extind de-a lungul suprafeței capilarului sinusoidal, acoperindu-l cu ramuri subțiri asemănătoare degetelor. Excrescențele perisinusoidale sunt acoperite cu vilozități scurte și au microejecții lungi caracteristice care se extind și mai departe de-a lungul suprafeței tubului endotelial capilar. Excrescențe interhepatocelulare, după ce au depășit placa de hepatocite și ajung la sinusoidul adiacent, sunt împărțite în mai multe excrescențe perisinusoidale. Astfel, celula lui Ito acoperă în medie puțin mai mult de două sinusoide adiacente.

Dacă ficatul este afectat, celulele lui Ito trec în stare activată... Fenotipul activat se caracterizează prin proliferare, chemotaxie, contractilitate, pierderea rezervelor de retinoizi și formarea de celule asemănătoare miofibroblastelor. Celulele stelate hepatice activate prezintă, de asemenea, niveluri crescute de noi gene, cum ar fi α-SMA, ICAM-1, chemokine și citokine. Activarea indică debutul unui stadiu incipient al fibrogenezei și precede producția crescută de proteine ​​ECM. Etapa finală a vindecării ficatului este caracterizată prin creșterea apoptozei celulelor Ito activate, în urma căreia numărul acestora este redus brusc.

Pentru a vizualiza celulele Ito în timpul microscopiei, se folosește colorarea cu clorură de aur. De asemenea, sa stabilit că expresia lor a proteinei reelin este un marker de încredere pentru diferențierea acestor celule de alte miofibroblaste.

Poveste

În 1876, Karl von Kupfer a descris celulele pe care le-a numit „Sternzellen” (celule stelate). Când au fost colorate cu oxid de aur, incluziunile au fost vizibile în citoplasma celulelor. Considerând în mod eronat că sunt fragmente de eritrocite capturate prin fagocitoză, Kupfer și-a revizuit în 1898 părerile despre „celula stelata” ca un tip separat de celule și le-a referit la categoria fagocitelor. Cu toate acestea, în anii următori, descrieri ale celulelor similare cu „celulele stelare” ale lui Kupffer au apărut în mod regulat. Li s-au dat diverse denumiri: celule interstițiale, celule parasinusoide, lipocite, pericite. Rolul acestor celule a rămas un mister timp de 75 de ani, până când profesorul Toshio Ito a descoperit anumite celule care conţin incluziuni de grăsime în spaţiul perisinusoidal al ficatului uman. Ito le-a numit „shibo-sesshu saibo” – celule care absorb grăsimile. Dându-și seama că incluziunile erau grăsimi produse de celule din glicogen, el a schimbat numele în „shibo-chozo saibo” - celule care stochează grăsime. În 1971, Kenjiro Wake a dovedit identitatea „Sternzellen” a lui Kupffer și a celulelor care depozitează grăsime ale lui Ito. Wake a mai descoperit că aceste celule joacă un rol important în stocarea vitaminei A (anterior se credea că vitamina A se depune în celulele lui Kupffer). La scurt timp după aceea, Kent și Popper au demonstrat o asociere puternică a celulelor Ito cu fibroza hepatică. Aceste descoperiri au marcat începutul procesului de studiu detaliat al celulelor Ito.

Vezi si

Scrieți o recenzie la articolul „Coșca lui Ito”

Legături

• Young-O Kueon, Zachary D. Goodman, Jules L. Dienstag, Eugene R. Schiff, Nathaniel A Brown, Elmar Burckhardt, Robert Skunkhoven, David A Brenner, Michael W. Fraid (2001). Journal of Haepothology 35; 749-755. - traducerea unui articol din revista „Infecții și terapie antimicrobiană”, Volumul 04/N 3/2002, pe site-ul Consilium-Medicum.
• Popper H: Distribuția vitaminei A în țesut, așa cum este evidențiată de microscopia cu fluorescență. Physiol Rev 1944, 24 :.

Note (editare)

1. Geerts A. (2001) Istoria, eterogenitatea, biologia dezvoltării și funcțiile celulelor stelate hepatice repaus. Semin Ficat Dis. 21 (3): 311-35. PMID
2. Wake, K. (1988) Celulele perivasculare hepatice descoperite prin metoda de impregnare cu aur și argint și prin microscopie electronică.În „Biopatologia ficatului. O abordare ultrastructurală” (Motta, P. M., ed.) pp. 23-36, Kluwer Academic Publishers, Dordrecht, Olanda
3. Stanciu A, Cotutiu C, Amalinei C. (2002) Date noi despre celulele ITO. Rev Med Chir Soc Med Nat Iasi. 107 (2): 235-9. PMID
4. John P. Iredale (2001) Comportamentul celulelor stelate hepatice în timpul rezolvării leziunilor hepatice. Seminarii în bolile de ficat, 21 (3): PMID- pe Medscape.
5. Kobold D, Grundmann A, Piscaglia F, Eisenbach C, Neubauer K, Steffgen J, Ramadori G, Knittel T. (2002) Exprimarea reelinei în celulele stelate hepatice și în timpul reparării țesutului hepatic: un nou marker pentru diferențierea HSC de alte miofibroblaste hepatice. J Hepatol. 36 (5): 607-13. PMID
6. Adrian Ruben (2002) hepatologie. Volumul 35, numărul 2, paginile 503-504
7. Suematsu M, Aiso S. (2001) Profesorul Toshio Ito: un clarvăzător în biologia pericitului. Keio J Med. 50 (2): 66-71. PMID (ing.)
8. Querner F: Der mikroskopische Nachweis von Vitamin A im animalen Gewebe. Zur Kenntnis der paraplasmatischen Leberzellen-einschlüsse. Dritte Mitteilung. Klin Wschr 1935, 14 :.

Extras din Cușca lui Ito

O jumătate de oră mai târziu, Kutuzov a plecat spre Tatarinova, iar Bennigsen și alaiul lui, inclusiv Pierre, au condus de-a lungul liniei.

De la Gorki, Bennigsen a coborât pe drumul cel mare până la pod, pe care ofițerul de la movilă îl indicase lui Pierre drept centrul poziției și pe care erau șiruri de iarbă cosită care miroseau a fân pe mal. Au traversat podul cu mașina spre satul Borodino, de acolo au cotit la stânga și pe lângă un număr imens de trupe și tunuri au condus până la o movilă înaltă, pe care milițienii săpau pământul. Era o reduta care nu avea încă un nume, numită mai târziu reduta Raevsky, sau bateria kurgan.

Pierre nu a acordat prea multă atenție acestei redute. Nu știa că acest loc va fi mai memorabil pentru el decât toate locurile din câmpul Borodino. Apoi au condus prin râpă până la Semionovski, în care soldații trăgeau ultimii bușteni de colibe și hambare. Apoi, în jos și în sus, au mers înainte prin secară spartă, zdrobită ca grindina, de-a lungul drumului de artilerie proaspăt asfaltat, de-a lungul împingerilor de teren arabil la culoare [un fel de fortificație. (Notă. Lev Tolstoi.)], Tot atunci încă săpat.

Bennigsen s-a oprit la îmbujorări și a început să privească înainte la reduta Shevardinsky (fostă a noastră de ieri), pe care puteau fi văzuți mai mulți călăreți. Ofițerii au spus că Napoleon sau Murat sunt acolo. Și toată lumea se uita cu nerăbdare la această grămadă de călăreți. Pierre se uită și el acolo, încercând să ghicească care dintre acești oameni abia vizibili era Napoleon. În cele din urmă, călăreții au părăsit movila și au dispărut.

Bennigsen s-a întors către generalul care s-a apropiat de el și a început să explice întreaga situație a trupelor noastre. Pierre a ascultat cuvintele lui Bennigsen, încordându-și toate puterile mentale pentru a înțelege esența bătăliei care urma, dar a simțit cu durere că abilitățile sale mentale nu erau suficiente pentru asta. Nu a înțeles nimic. Bennigsen a încetat să mai vorbească și, observând figura lui Pierre care asculta, i-a spus brusc, adresându-se:

- Cred că nu te interesează?

— O, dimpotrivă, este foarte interesant, repetă Pierre, nu pe deplin sincer.

Cu o culoare, au condus și mai departe spre stânga de-a lungul unui drum care șerpuia printr-o pădure deasă și joasă de mesteacăn. La mijlocul acestui lucru

pădure, un iepure maro cu picioare albe a sărit pe drumul dinaintea lor și, speriat de călcatul unui număr mare de cai, a fost atât de confuz încât a sărit îndelung de-a lungul drumului din fața lor, stârnind pe general. atentie si hohote de ras, si numai cand i-au strigat in mai multe voci, el s-a repezit in o parte si a disparut in desis. După ce au condus două verste prin pădure, au intrat într-o poiană unde erau staționate trupele corpului lui Tuchkov, care trebuia să apere flancul stâng.

Aici, în extrema stângă, Bennigsen a vorbit mult și pasional și a făcut, după cum i s-a părut lui Pierre, un important ordin militar. În fața locației trupelor lui Tuchkov era o înălțime. Această înălțime nu a fost ocupată de trupe. Bennigsen a criticat cu voce tare această greșeală, spunând că este o nebunie să lăsați terenul de comandă neocupat și să plasați trupe sub el. Unii generali și-au exprimat aceeași părere. Unul, mai ales cu fervoare militară, a vorbit despre faptul că au fost puși aici pentru măcelări. Bennigsen a ordonat în nume propriu să mute trupele la înălțime.

Acest ordin pe flancul stâng l-a făcut pe Pierre și mai îndoielnic cu privire la capacitatea sa de a înțelege afacerile militare. Ascultând pe Bennigsen și pe generali condamnând poziția trupelor sub munte, Pierre i-a înțeles pe deplin și le-a împărtășit părerea; dar tocmai din aceasta cauza nu putea intelege cum ar fi putut sa faca o greseala atat de evidenta si grosolana cel care le-a asezat aici sub munte.

Pierre nu știa că aceste trupe nu au fost desfășurate pentru a apăra poziția, așa cum credea Bennigsen, ci au fost plasate într-un loc ascuns pentru o ambuscadă, adică pentru a trece neobservate și a lovi brusc inamicul care avansa. Bennigsen nu știa acest lucru și a înaintat trupele din motive speciale, fără să-i spună comandantului șef despre asta.

Prințul Andrei, în această seară senină de august, pe 25, zăcea, sprijinit de braț, într-o magazie spartă din satul Knyazkov, la marginea locației regimentului său. Prin gaura din zidul spart, se uită la o fâșie de mesteacăn de treizeci de ani, cu ramuri inferioare tăiate, care mergeau de-a lungul gardului, la pământul arabil cu grămezi de ovăz spart pe el și la tufișurile peste care se vedea fumul incendiilor din bucătăriile soldaţilor.

Oricât de înghesuit și de nimeni nevoie și oricât de grea i-ar părea viața prințului Andrey acum, el, la fel ca acum șapte ani la Austerlitz în ajunul bătăliei, s-a simțit agitat și iritat.

Ordinele pentru bătălia de mâine au fost date și primite de el. Nu mai avea nimic de făcut. Dar gândurile erau cele mai simple, mai clare și, prin urmare, gândurile teribile nu l-au lăsat în pace. Știa că bătălia de mâine ar fi trebuit să fie cea mai groaznică dintre toate cele la care a participat, și posibilitatea morții pentru prima dată în viața lui, fără nicio legătură cu viața de zi cu zi, fără a lua în considerare modul în care îi va afecta pe alții, ci doar pentru că i s-a prezentat atitudine față de el, față de suflet, cu vioiciune, aproape cu certitudine, simplu și oribil. Iar de la apogeul acestei reprezentații, tot ce-l chinuia și îl ocupa înainte s-a luminat dintr-o dată cu o lumină albă rece, fără umbre, fără perspectivă, fără distincție de contururi. Toată viața lui i s-a părut ca un felinar magic, în care a privit îndelung prin sticlă și sub lumină artificială. Acum a văzut deodată, fără sticlă, în lumina strălucitoare a zilei, aceste tablouri prost pictate. „Da, da, acestea sunt acele imagini false care m-au entuziasmat, admirat și chinuit”, își spuse el, trecând în imaginație principalele imagini ale felinarului său magic al vieții, uitându-se acum la ele în această lumină albă și rece a ziua – gândul clar al morții. - Iată-le, aceste figuri pictate grosier, care păreau a fi ceva frumos și misterios. Slavă, binele public, dragostea pentru o femeie, patria însăși - cât de grozave mi s-au părut aceste imagini, ce sens profund păreau a fi împlinite! Și toate acestea sunt atât de simple, palide și aspre în lumina albă și rece a acelei dimineți, care, simt că se ridică pentru mine.” Cele trei dureri principale din viața lui i-au atras atenția în special. Dragostea lui pentru o femeie, moartea tatălui său și invazia franceză care a capturat jumătate din Rusia. "Dragoste. Această fată, care mi se părea plină de puteri misterioase. Cum am iubit-o! Am făcut planuri poetice despre dragoste, despre fericire cu ea. O, băiete dragă! spuse el cu voce tare furios. - Cum! Am crezut într-un fel de iubire ideală, care ar fi trebuit să mi-o țină fidelă un an întreg de absența mea! Ca porumbelul tandru al unei fabule, ea ar trebui să se ofilească în despărțirea de mine. Și toate acestea sunt mult mai simple... Toate acestea sunt teribil de simple, dezgustătoare!

Comunicarea intercelulară poate fi realizată prin secreție paracrină și contacte directe de la celulă la celulă. Se știe că celulele perisinusoidale hepatice (HPC) stabilesc nișa de celule stem regionale și determină diferențierea acestora. În același timp, HPC rămâne slab caracterizată la nivel molecular și celular.

Scopul proiectului a fost de a studia interacțiunile dintre celulele perisinusoidale hepatice de șobolan și diferite celule stem, cum ar fi fracțiunea de celule mononucleare a sângelui ombilical ombilical (UCB-MC) și celulele stromale mezenchimale multipotențiale derivate din măduva osoasă de șobolan (BM-MMSC).

Materiale si metode. Celulele BM-MSC și HPC de șobolan, UCB-MC umane au fost derivate folosind tehnici standard. Pentru a studia reglarea paracrină HPC, am co-cultivat celule UCB-MC sau BM-MMSC cu HPC folosind camere Boyden și medii de celule HPC condiționate. Celulele marcate diferențial au fost co-cultivate și interacțiunile lor au fost observate prin microscopie fluorescentă cu contrast de fază și imunocitochimie.

Rezultate. În prima săptămână de cultură a existat autofluorescență a vitaminei A din cauza capacității de depozitare a grăsimilor a PHC. BM-MMSC a demonstrat o viabilitate ridicată în toate modelele de co-cultură. După 2 zile de incubare în mediu condiționat de co-cultură a BM-MMSC cu HPC, am observat modificări ale morfologiei MMSC - acestea au scăzut în dimensiune și mugurii lor au devenit mai scurti. Expresia actinei α-musculare netede și a desminei a fost similară cu miofibroblastul - o formă intermediară a culturii de celule Ito in vitro. Aceste modificări ar putea fi datorate stimulării paracrine de către HPC. Cel mai profund efect al HPC asupra celulelor UCB-MC a fost observat în co-cultura de contact, prin urmare este important ca celulele UCB-MC să creeze contacte directe de la celulă la celulă pentru menținerea viabilității lor. Nu am observat nicio fuziune celulară între celulele HPC / UCB și HPC / BM-MMSC în co-culturi. În experimentele noastre ulterioare intenționăm să studiem factorii de creștere produși de HPC pentru diferențierea hepatică a celulelor stem.

Introducere.

De interes deosebit printre varietatea de celule hepatice sunt celule hepatice perisinusoidale (celule Ito)... Datorită secreției de factori de creștere și componente ale matricei extracelulare, acestea creează un micromediu al hepatocitelor, iar o serie de studii științifice au arătat capacitatea celulelor hepatice stelate de a forma un micromediu pentru celulele progenitoare (inclusiv celulele hematopoietice) și de a le influența. diferențierea în hepatocite. Interacțiunile intercelulare ale acestor populații de celule pot fi efectuate prin secreția paracrină a factorilor de creștere sau prin contacte intercelulare directe, cu toate acestea, baza moleculară și celulară a acestor procese rămâne complet neexplorată.

Scopul studiului.

Studiul mecanismelor de interacțiune Celulele Ito cu celule stem hematopoietice (HSC) și mezenchimale (MMSC). in vitro.

Materiale si metode.

Celulele Ito ale ficatului de șobolan au fost izolate prin două metode enzimatice diferite. În același timp, MMSC-uri stromale au fost obținute din măduva osoasă de șobolan. Fracția mononucleară a celulelor stem hematopoietice este izolată din sângele din cordonul ombilical uman. Efectele paracrine ale celulelor Ito au fost investigate în timpul cultivării MMSC și HSC în mediul în care au crescut celulele Ito și în timpul cocultivării celulelor separate printr-o membrană semipermeabilă. Efectul contactelor celulă la celulă a fost studiat în co-cultivarea co-celulă. Pentru o mai bună vizualizare, fiecare populație a fost etichetată cu o etichetă fluorescentă individuală. Morfologia celulară a fost evaluată prin contrast de fază și microscopie cu fluorescență. Caracteristicile fenotipice ale celulelor cultivate au fost studiate folosind metodele de analiză imunocitochimică.

Rezultate.

În termen de o săptămână după izolarea celulelor perisinusoidale, am observat capacitatea lor de autofluorescență datorită capacității lor de acumulare de grăsime. Apoi celulele au intrat în faza intermediară a creșterii lor și au căpătat o formă stelata. În etapele inițiale ale cocultivării celulelor Ito cu MMSC-uri de măduvă osoasă de șobolan, viabilitatea MMSC-urilor a fost păstrată în toate opțiunile de cultivare. În a doua zi, în timpul cultivării MMSC-urilor în mediul de cultură al celulelor Ito, morfologia MMSC-urilor s-a schimbat - au scăzut în dimensiune, procesele au fost scurtate. Expresia actinei și desminei musculare alfa-netede în MMSC-uri a crescut, ceea ce a indicat similitudinea lor fenotipică cu miofibroblastele, o etapă intermediară în creșterea celulelor Ito activate in vitro. Datele noastre indică influența factorilor paracrini secretați de celulele Ito asupra proprietăților MMSC în cultură.

Pe baza co-cultivării celulelor stem hematopoietice cu celulele Ito, s-a demonstrat că celulele stem hematopoietice își păstrează viabilitatea numai la co-cultivarea de contact cu celulele Ito. Conform datelor analizei de fluorescență a culturilor mixte, fenomenul de fuziune celulară a diferitelor populații nu a fost dezvăluit.

Concluzii. Pentru păstrarea viabilității celulelor stem hematopoietice, factorul decisiv este prezența contactelor intercelulare directe cu celulele Ito. Reglarea paracrină a fost observată numai în timpul cultivării MMSC-urilor într-un mediu nutritiv în care au crescut celulele Ito. Studiul influenței factorilor specifici produși de celulele Ito asupra diferențierii HSC și MMSC în cultura celulară este planificat să fie realizat în următoarele studii.

Shafigullina A.K., Trondin A.A., Shaikhutdinova A.R., Kaligin M.S., Gazizov I.M., Rizvanov A.A., Gumerova A.A., Kiyasov A.P.
GOU VPO „Universitatea Medicală de Stat Kazan a Agenției Federale pentru Sănătate și Dezvoltare Socială”

Sursa principală de endotoxină din organismeste flora intestinală gram-negativă. În prezent, nu există nicio îndoială că ficatul este organul principal, efectuând clearance-ul endotoxinelor. EnDotoxina este captată în primul rând de celulă kami Kupffer (KK), interacționând cu receptorul membranar CD 14. Se poate lega de receptor ca el însuși lipopolizaharidă(LPS), și complexul său cu proteina de legare a lipidelor A bulgăre de plasmă. Interacțiunea LPS cu macrofagele hepatice declanșează o cascadă de reacții bazate pe producerea și eliberarea de citokine și alte active biologic mediatori.

Există multe publicații despre rolul macrofei.fluxul hepatic (CC) în captarea și eliminarea LPS bacteriană, cu toate acestea, interacțiunea endoteliului cu alte mezenchimatoase celule, în special cu perisinusoidal Celulele Ito, practic nestudiate.

TEHNICA DE CERCETARE

Șobolani masculi albi cu o greutate de 200 g au fost injectați intraperitoneal în 1 ml de soluție salină sterilă foarte purificat liofilizat LPS E. coli tulpina 0111 în doze de 0,5,2,5, 10, 25 și 50 mg/kg. La 0,5, 1, 3, 6, 12, 24, 72 ore și 1 săptămână, organele interne au fost îndepărtate sub anestezie și plasate în formalină tamponată 10%. Materialul a fost încorporat în blocuri de parafină. Secțiunile de 5 μm grosime au fost colorate imunohistochimicstreptavidină-biotină prin anticorpi la desmină, α - neted actina musculară (A-GMA) și antigenul nuclear celule care proliferează bine ( PCNA, " Dako"). Desmin a fost folosit ca marker perisinusoidalCelulele Ito, A-GMA - as ve marker miofibroblaste, PCNA - celule în proliferare. Pentru a detecta endotoxina în celulele hepatice, anti-Re-glicolipideanticorpi (Institutul de Patologie Generală și Clinică al KDO, Moscova).

REZULTATELE STUDIULUI

La o doză de 25 mg/kg și mai mult, șoc cu un rezultat fatal a fost observat la 6 ore după administrarea de LPS. Efectul acut al LPS asupra țesutului hepatic a determinat activarea celulelor Ito, care s-a manifestat printr-o creștere a numărului acestora. Număr desmin-pozitiv celulele au crescut de la 6 ore după injectarea LPS și au atins un maxim ma cu 48-72 h (Fig. 1, a, b).

Orez. 1. Secțiuni ale ficatului șobolanului sy procesat LSAB -pe mine- chennyanticorpi la dec A mea(o bandă α - neted actină intestinală (v), x400 (A, b), x200 (c).

a - înainte de introducerea endotoxieipe, singur desmin-pozitivcelule Ito în zona periportală; b- 72 oredupă introducerea endotoxului la: numeroase desmin-pozitiv celule Ito; v- la 120 de ore de la introducerea en Dotoxina: α - musculatura neteda este prezentă doar actinapentru a netezi celulele musculare vase kah.

În 1 numărul săptămânii desmin-pozitiv celulele au scăzut, dar a fosta fost deasupra reperelor. La aceasta in nici un caz nu am observat aparitia A-GMA-pozitiv celule din sinusoide dah de ficat. Positiv intern control la colorarea cu anticorpi la A-GMA a servit la identificarea celulelor musculare netede din sângevasele venoase ale căilor porte care conțin A-GMA (Fig. 1, v).În consecință, în ciuda creșterii numărului de celule Ito, o singură dată noul efect al L PS nu duce la transformare ( transdiferențiere) acestea în miofibroblaste.

Orez. 2. Secțiuni ale ficatuluisobolani tratati LSAB -anticorpi marcati la PCNA. a - înainte de introducerea lui en dotoxină: singurproliferand el patocite, x200; b - 72 ore de la administrarea endotoxinei: numeroase hepatocite proliferante, x400.

Creșterea numărului desmin-pozitiv celulele au început în zona portală. De la 6 ore la 24 ore după administrarea LPS perisinusoidal celulele au fost găsite numai în jurul tracturilor portal, adică. în zona 1 a aci noia... La 48-72 ore, când s-a observat macsuma maxima desmin-pozitiv lipici actuale, au apărut în alte zone ale acinei; cu toate acestea, majoritatea celulelor lui Ito erau totuși localizate periportal.

Poate că acest lucru se datorează faptului că periportalKK-urile localizate sunt primele care au capturat endotoxina provenita din intestin prin vena porte sau din circulatia sistemica. Ak QC-urile activate produc o gamă largă de citokine despre care se crede că declanșează activarea celulelor Ito și transdiferențiere ele în miofibroblaste. Evident, acesta este motivul pentru care celulele Ito situate în apropierea macrofagelor activate ale ficatului (în zona I acinus) sunt primele care răspund la eliberarea de citokine. Cu toate acestea, în studiul nostru, nu le-am observat. transdiferențiere v miofibroblasteși acest lucru sugerează că citokinele secretate de CC și hepatocite pot servi ca un factor care susține procesul deja început. transdiferențiere dar probabil că nu sunt capabili să o declanșeze cu o singură expunere la ficat cu LPS.

O creștere a activității proliferative a celulelor a fost observată și în principal în zona 1 a acinului. Acest lucru înseamnă probabil că toate (sau aproape toate) procesele vizează O- şi reglarea paracrină a interacţiunilor intercelulare, se desfăşoară în zonele periportale. O creștere a numărului de celule în proliferare a fost observată de la 24 de ore după administrarea de LPS; numărul de celule pozitive a crescut până la 72 de ore (maxim de activitate proliferativă, Fig. 2, a, b). Au proliferat atât hepatocitele, cât și celulele sinusoidale. Cu toate acestea, colorarea pe PCNA nu dă capacitatea de a identifica tipul de proliferare celule sinusoidale. Conform literaturii de specialitate, acțiunea endotoxinei duce la creșterea suma de CC. Se crede că este vorba despre vine atât din cauza proliferării macrofagelor hepatice, cât și din cauza migrării monocitelor din alte organe. Citokinele eliberate de CK pot crește capacitatea de proliferare a celulelor Ito. Prin urmare, este logic să presupunem că sunt reprezentate celule în proliferare perisinusoidal Ito celule. Creșterea numărului lor înregistrată de noi este aparent necesară pentru a crește sinteza factorilor de creștere și a restabili matricea extracelulară în condiții de deteriorare. Aceasta poate fi una dintre verigile în reacțiile compensatorii-restauratoare ale ficatului, deoarece celulele Ito sunt sursa principală a componentelor matricei extracelulare, factorul de celule stem și factorul de creștere a hepatocitelor, care sunt implicate în reparare și diferențiere. leziuni ale celulelor epiteliale ale ficatului. Absent aceeași transformare a celulelor Ito în miofibroblaste indică faptul că un episod de agresiune a endotoxinelor nu este suficient pentru dezvoltarea fibrozei hepatice.

Astfel, impactul acut al endotox sina determină o creștere a numărului desmin-pozitiv Celulele Ito, care este un semn indirect de afectare a ficatului. Cantitate perisinusoidal celulele crește, aparent ca urmare a proliferării lor. Un singur episod de agresiune cu endotoxine determină inversarea activarea mea perisinusoidal Ito celule si nu duce la ele transdiferențiereîn miofibroblaste. În acest sens, se poate presupune că în mecanismele de activare și transdiferențiere Celulele Ito au implicat nu numai endotoxina și citokine, ci și alți factori ai interacțiunilor intercelulare.

LITERATURĂ

1. Mayansky D.N., Visse E., Decker K. // Noi frontiere hepatologie... Novosibirsk, 1992.

2. Salahov I.M., Ipatov A.I., Konev Yu.V., Yakovlev M.Yu. // Succesele mint, biol. 1998. T. 118, nr. 1.S. 33-49.

3. Yakovlev M.Yu. // Kazan ... m unități zhurn. 1988. Nr 5. S. 353-358.

4. Freudenberg N., Piotraschke J., Galanos C. et al. // Virchows Arc. [B]. 1992. Vol... 61. P. 343-349.

5. Gressner A. M. // Hepatogastroterologie... 1996. Vol. 43. P. 92-103.

6. Schmidt C, Bladt F., Goedecke S. et al. // Natură. 1995. Vol. 373, nr. 6516. P. 699-702.

7. Wisse E., Braet F., Luo D. şi colab. // Toxicol. Pathol. 1996. Vol. 24, nr 1. P. 100-111.

Cuvinte cheie

FICAT / CELULELE STELE ITO/ MORFOLOGIE / CARACTERISTICE / VITAMINA A / FIBROZA / FICAT / CELULE STELATARE HEPATICE / MORFOLOGIE / CARACTERISTICA / VITAMINA A / FIBROZA

adnotare articol științific despre medicina fundamentală, autorul lucrării științifice - Tsyrkunov V.M., Andreev V.P., Kravchuk R.I., Kondratovich I.A.

Introducere. Rolul celulelor stelate Ito (celulele stelate Ito) a fost identificat ca fiind unul dintre liderii în dezvoltarea fibrozei în ficat; cu toate acestea, vizualizarea intravitală a structurii Ito este utilizată minim în practica clinică. Scopul lucrării: prezentarea caracteristicilor structurale și funcționale ale PCI pe baza rezultatelor identificării citologice a biopsiilor hepatice intravitale. Materiale si metode. Au fost aplicate metodele clasice de microscopie luminoasă și electronică a probelor de biopsie și tehnici originale folosind secțiuni ultrasubțiri, fixare și colorare. Rezultate. Ilustrații foto de microscopie luminoasă și electronică a biopsiilor hepatice ale pacienților cu hepatită cronică C arată caracteristicile structurale ale PCI în diferite stadii (repaus, activare) și în procesul de transformare în miofibroblaste. Concluzii. Utilizarea metodelor originale de identificare morfologică clinică și de evaluare a stării funcționale a PCI va îmbunătăți calitatea diagnosticului și a predicției fibrozei hepatice.

Subiecte asemănătoare lucrări științifice despre medicina fundamentală, autorul lucrărilor științifice - Tsyrkunov V.M., Andreev V.P., Kravchuk R.I., Kondratovich I.A.

• Citologia clinică a ficatului: celule Kupffer

  2017 / Tsyrkunov V.M., Andreev V.P., Kravchuk R.I., Prokopchik N.I.

• Monitorizarea efectelor morfologice ale celulelor stem mezenchimale autologe transplantate în ficat în ciroza virală (caz clinic)

  2018 / Aukashnk S.P., Alenikova O.V., Tsyrkunov V.M., Isaykina Ya.I., Kravchuk R.I.

• Morfologie hepatică clinică: necroză

  2017 / Tsyrkunov V.M., Prokopchik N.I., Andreev V.P., Kravchuk R.I.

• Polimorfismul celulelor stelate hepatice și rolul lor în fibrogeneză

  2008 / Aydagulova S.V., Kapustina V.I.

• Structura celulelor hepatice sinusoidale la pacienții cu coinfecție HIV/virusul hepatitei C

  2013 / Matievskaya N.V., Tsyrkunov V.M., Kravchuk R.I., Andreev V.P.

• Celulele stem mezenchimale ca metodă promițătoare pentru tratamentul fibrozei/cirozei hepatice

  2013 / Lukashik S.P., Aleinikova O.V., Tsyrkunov V.M., Isaykina Ya.I., Romanova O.N., Shimansky A.T., Kravchuk R.I.

• Izolarea și cultivarea miofibroblastelor hepatice de șobolan prin explantare

  2012 / Miyanovich O., Shafigullina A.K., Rizvanov A.A., Kiyasov A.P.

• Aspecte patomorfologice ale formării fibrozei hepatice în infecția cu VHC și alte leziuni hepatice: concepte moderne

  2009 / Lukashik S.P., Tsyrkunov V.M.

• Analiza miofibroblastelor de șobolan obținute din structurile tractului portal hepatic prin explantare

  2013 / Miyanovich O., Katina M.N., Rizvanov A.A., Kiyasov A.P.

• Celulele stelate hepatice transplantate sunt implicate în regenerarea organelor după hepatectomie parțială fără riscul de a dezvolta fibroză hepatică

  2012 / Shafigullina A.K., Gumerova A.A., Trondin A.A., Titova M.A., Gazizov I.M., Burganova G.R., Kaligin M.S., Andreeva D.I., Rizvanov A.A., Mukhammedov A.R., Kiyasov A.P.

Introducere. Rolul celulelor stelate Ito (Hepatic Stellate Cells, HSC) a fost identificat ca fiind unul dintre liderii în dezvoltarea fibrozei hepatice, dar utilizarea vizualizării intravitale a structurilor HSC în practica clinică este minimă. Scopul lucrării este de a prezenta caracteristicile structurale și funcționale ale HSC pe baza constatărilor identificării citologice a probelor de biopsie hepatică intravitală. Materiale si metode. Au fost aplicate metode clasice de microscopie luminoasă și electronică a probelor de biopsie în tehnica originală de utilizare a secțiunilor ultrasubțiri, fixare și colorare. Rezultate. Caracteristicile structurale ale HSC ale probelor de biopsie hepatică de la pacienți cu hepatită cronică C sunt prezentate pe ilustrații foto ale microscopiei luminoase și electronice. HSC sunt descrise în diferite etape (repaus, activare) și în timpul procesului de transformare în miofibroblaste. Concluzii. Utilizarea metodelor originale de identificare și evaluare clinică și morfologică a stării funcționale a HSC permite îmbunătățirea calității diagnosticului și prognosticului fibrozei hepatice.

Textul lucrării științifice pe tema „Citologia clinică a ficatului: celule stelate Ito”

UDC 616.36-076.5

CITOLOGIE CLINICĂ A FICATULUI: CELULELE STELARE ITO

Tsyrkunov V.M. ( [email protected]), Andreev V.P. ( [email protected]), Kravchuk R.I. ( [email protected]), Kondratovich I.A. ( [email protected]) EE „Universitatea Medicală de Stat din Grodno”, Grodno, Belarus

Introducere. Rolul celulelor stelate Ito (celulele stelate Ito) a fost identificat ca fiind unul dintre liderii în dezvoltarea fibrozei în ficat; cu toate acestea, vizualizarea intravitală a structurii Ito este utilizată minim în practica clinică.

Scopul lucrării: prezentarea caracteristicilor structurale și funcționale ale PCI pe baza rezultatelor identificării citologice a biopsiilor hepatice intravitale.

Materiale si metode. Au fost aplicate metodele clasice de microscopie luminoasă și electronică a probelor de biopsie și tehnici originale folosind secțiuni ultrasubțiri, fixare și colorare.

Rezultate. Ilustrații foto de microscopie luminoasă și electronică a biopsiilor hepatice ale pacienților cu hepatită cronică C arată caracteristicile structurale ale PCI în diferite stadii (repaus, activare) și în procesul de transformare în miofibroblaste.

Concluzii. Utilizarea metodelor originale de identificare morfologică clinică și de evaluare a stării funcționale a PCI va îmbunătăți calitatea diagnosticului și a predicției fibrozei hepatice.

Cuvinte cheie: ficat, celule stelate lui Ito, morfologie, caracteristici, vitamina A, fibroză.

Introducere

Rezultatul nefavorabil al majorității leziunilor hepatice difuze cronice de diferite etiologii, inclusiv hepatita cronică C (CHC), este fibroza hepatică, în dezvoltarea căreia participanții principali sunt fibroblastele activate, a căror sursă principală sunt celulele stelate Ito (IOCI) activate. .

ZKI, sinonim - celule stelate hepatice, celule care depozitează grăsime, lipocite perisinusoidale, celule stelate (în engleză Hepatic Stellate Cell, HSC, Cell of Ito, Ito cell). ZKI au fost descrise pentru prima dată în 1876 de K. Kupffer și numite de el celule stelate ("Stemzellen"). T. Ito, după ce a găsit picături de grăsime în ele, le-a desemnat mai întâi ca absorbanți de grăsime ("shibo-sesshusaibo"), iar apoi, după ce a stabilit că grăsimea este produsă de celulele înseși din glicogen, - celule care stochează grăsime (" shibo-chozosaibo")... În 1971, K. Wake a dovedit identitatea celulelor stelate ale lui Kupfffer și a celulelor care depozitează grăsimi ale lui Ito și că aceste celule „stochează” vitamina A.

Aproximativ 80% din vitamina A prezentă în organism se acumulează în ficat, iar până la 80% din toți retinoizii hepatici se depun în picături grase de ZKI. Esterii retinolului din chilomicrone intră în hepatocite, unde sunt transformați în retinol, formând un complex de vitamina A cu proteina de legare a retinolului (RBP), care este secretată în spațiul perisinusoidal, de unde este depus de către celule.

Relația strânsă a PCI cu fibroza hepatică stabilită de K. Popper a demonstrat mai degrabă funcția lor dinamică decât statică - capacitatea de a participa direct la remodelarea matricei perihepatocelulare intralobulare.

Principala metodă de examinare morfologică a ficatului, efectuată pentru a evalua modificările biopsiilor intravitale, este microscopia cu lumină, care în practica clinică face posibilă stabilirea activității

ardere şi stadiul de cronicizare. Dezavantajul acestei metode este rezoluția scăzută, care nu permite evaluarea caracteristicilor structurale ale celulelor, organitelor intracelulare, incluziunilor și caracteristicilor funcționale. Examinarea microscopică electronică pe tot parcursul vieții a modificărilor ultrastructurale ale ficatului face posibilă completarea datelor microscopiei cu lumină și creșterea valorii lor diagnostice.

În acest sens, identificarea PCI hepatice, studiul fenotipului lor în procesul de transdiferențiere și determinarea intensității proliferării lor reprezintă cea mai importantă contribuție la prezicerea rezultatelor bolilor hepatice, precum și la patomorfologia și fiziopatologia fibrogenezei.

Scop - prezentarea caracteristicilor structurale și funcționale ale PCI pe baza rezultatelor identificării citologice a biopsiilor hepatice intravitale.

materiale si metode

Biopsia hepatică intravitală a fost obținută prin biopsie hepatică aspirativă la pacienții cu CHC (HCV ARN+), de la care s-a obținut consimțământul informat scris.

Pentru microscopia luminoasă a secțiunilor semisubțiri, specimenele de biopsie hepatică ale pacienților cu dimensiunea de 0,5 ^ 2 mm au fost fixate prin metoda de dublă fixare: mai întâi, conform metodei Sato Taizan, apoi probe de țesut au fost fixate suplimentar timp de 1 oră în 1. % fixativ de osmiu preparat în tampon fosfat Serensen 0,1 M, pH 7,4. Pentru o mai bună identificare a structurilor intracelulare și a substanței interstițiale pe secțiuni semisubțiri în tetroxid de osmiu 1%, dicromat de potasiu (K2Cr207) sau cristale de anhidridă cromică (1 mg/ml). După deshidratarea probelor într-o serie de soluții de alcool de concentrație crescândă și acetonă, acestea au fost plasate într-un amestec prepolimerizat de metacrilat de butii și stiren și polimerizate la 550C. Secțiunile semi-subțiri (1 μm grosime) au fost colorate secvenţial

azur II-fucsin de bază. Micrografiile au fost obținute folosind o cameră video digitală (Leica FC 320, Germania).

Examenul microscopic electronic a fost efectuat în probe de biopsie hepatică de 0,5x1,0 mm, fixate cu soluție de tetroxid de osmiu 1% în tampon Milloni-ha 0,1 M, pH 7,4, la + 40C timp de 2 ore. După deshidratare în alcooli de concentrație ascendentă și acetonă, probele au fost turnate în araldit. Secțiunile semisubțiri (400 nm) au fost preparate din blocurile obținute pe un ultramicrotom Leica EM VC7 (Germania) și colorate cu albastru de metilen. Preparatele au fost examinate la microscop optic și a fost selectat un loc de același tip pentru studiul ulterioar al modificărilor ultrastructurale. Secțiunile ultrasubțiri (35 nm) au fost puse în contrast cu o soluție de acetat de uranil 2% în metanol 50% și citrat de plumb conform E. S. Reynolds. Preparatele microscopice electronice au fost studiate într-un microscop electronic JEM-1011 (JEOL, Japonia) la măriri de 10.000-60.000 la o tensiune de accelerare de 80 kW. Pentru a obține imagini, s-a folosit un complex de o cameră digitală Olympus MegaViewIII (Germania) și un software de procesare a imaginii iTEM (Olympus, Germania).

rezultate si discutii

ZKI sunt situate în spațiul perisinusoidal (Disse) în buzunarele dintre hepatocite și celulele endoteliale, au procese lungi care pătrund profund între hepatocite. În majoritatea publicațiilor dedicate acestei populații de ICP este dată reprezentarea schematică a acestora, care permite doar indicarea apartenenței „teritoriale” a ICP la ficat și în raport cu „vecinii” din jur (Figura 1).

PCI au contact strâns cu celulele endoteliale prin componente incomplete ale membranei bazale și fibre interstițiale de colagen. Terminațiile nervoase pătrund între PCI și celulele parenchimatoase, motiv pentru care spațiul Disse este definit ca spațiul dintre plăcile celulelor parenchimatoase și

un complex de PCI și celule endoteliale.

Se crede că PCB-urile provin din celule mezenchimale slab diferențiate ale septului transversal al ficatului în curs de dezvoltare. Experimentul a stabilit că celulele stem hematopoietice sunt implicate în formarea PCI și că acest proces nu se datorează fuziunii celulare.

Celulele sinusoidale (SC), în primul rând ZKI, joacă un rol principal în toate tipurile de regenerare a ficatului. Regenerarea fibrozată a ficatului are loc ca urmare a inhibării funcțiilor stem ale PCI și ale celulelor stem ale măduvei osoase. În ficatul uman, ZKI alcătuiește 5-15%, fiind unul dintre cele 4 tipuri de SC de origine mezenchimală: celule Kupffer, endoteliocite, celule Pd. Rezervorul SC conține, de asemenea, 20-25% de leucocite.

Incluziunile grase cu retinol, trigliceride, fosfolipide, colesterol, acizi grași liberi, a-actină și desmină se găsesc în citoplasma PCA. Colorarea cu clorură de aur este utilizată pentru a vizualiza ZKI. S-a descoperit experimental că markerul diferențierii PCI de alte miofibroblaste este expresia proteinei reelin.

PCI există într-o stare liniștită ("PCI inactivă"), de tranziție și activată pe termen lung, fiecare dintre acestea fiind caracterizată prin expresia genei și fenotip (aNMA, ICAM-1, chemokine și citokine).

ZKI în stare inactivă au o formă rotunjită, ușor alungită sau neregulată, un nucleu mare și un semn luminos de vizualizare - incluziuni lipidice (picături) care conțin retinol (Figura 2).

Numărul de picături de lipide din PCI inactiv ajunge la 30 sau mai mult, sunt apropiate ca mărime, alăturate, apăsând în nucleu și împingându-l la periferie (Figura 2). Incluziunile mici pot fi situate între picături mari. Culoarea picăturilor depinde de fixativ și de culoarea materialului. Într-un caz, ele sunt deschise (Figura 2a), în celălalt, verde închis (Figura 2b).

Figura 1. - Schema locației PCI (stellatecell, lipocyte perisinusoidal) în spațiul perisinusoidal al Disse (spațiul Disse), resursă Internet

Figura 2. - ZKI în stare inactivă

a - ZKI de formă rotunjită cu un conținut ridicat de picături de lipide cu o culoare deschisă (săgeți albe), hepatocite (Hz) cu citoplasmă epuizată (săgeată neagră); b - ZKI cu picături lipidice de culoare închisă, în contact strâns cu un macrofag (Mf); a-b - felii semisubțiri. Culoarea Azur II este principalul fuchsin. Micrografii. l-am luat. 1000; c - ZKI cu abundență de picături de lipide (mai mult de 30), având o formă neregulată (magn. 6.000); Componentele r-ultrastructurale ale ZKI: l-picături de lipide, mitocondrii (săgeți portocalii), GRES (săgeți verzi), complex Golgi (săgeată roșie), uv. 15.000; c-d - modele de difracție a electronilor

Cu microscopia electronică, se formează o margine marginală mai osmiofilă pe fundalul unui substrat lipidic ușor (Figura 5a). Împreună cu incluziunile mari de lipide, majoritatea PCI-urilor „de repaus” au o cantitate semnificativ mică de matrice citoplasmatică, săracă în mitocondrii (Mx) și reticul endoplasmatic granular (GRES). În același timp, compartimentele complexului Golgi moderat dezvoltat sunt clar vizibile sub forma unui teanc de 3-4 cisterne aplatizate cu capete ușor lărgite (Figura 2d).

În anumite condiții, PCI activate dobândesc un fenotip mixt sau de tranziție, combinând caracteristicile morfologice atât ale celulelor care conțin lipide, cât și ale celulelor asemănătoare fibroblastelor (Figura 3).

Fenotipul tranzițional PCV are, de asemenea, propriile caracteristici morfologice. Celula capătă o formă alungită, numărul de incluziuni lipidice scade, iar numărul de invaginări ale nucleolemei scade. Volumul citoplasmei, care conține numeroase cisterne de GRES cu ribozomi legați și ribozomi liberi, Mx, crește. Se observă hiperplazia componentelor complexului lamelar Golgi, reprezentată de mai multe stive de 3-8 cisterne turtite, numărul de lizozomi implicați în degradare crește.

Figura 3. - ZKI în stare tranzitorie

a - ZKI (săgeți albe). Feliie semisubțire. Culoarea Azur II este principalul fuchsin. Micrografie. l-am luat. 1000; b - ZKI alungit și cu o cantitate mică de picături de lipide; sw. 8.000; c - ZKI în contact cu celulele Kupfffer (KK) și limfocitele (Lc), uv. 6 000. (Hz - hepatocit, l - picături lipidice, E - eritrocit); d - mitocondrii (săgeți portocalii), GRES (săgeți verzi), Gold-ji (săgeți roșii), lizozomi (săgeți albastre), magn. 20.000; b, c, d - modele de difracție a electronilor

picături de lipide (Figura 3d). Hiperplazia componentelor GRES și a complexului Golgi este asociată cu capacitatea fibroblastelor de a sintetiza molecule de colagen, precum și de a le modela prin hidroxilare și glicozilare post-translațională în reticulul endoplasmatic și elemente ale complexului Golgi.

În ficatul nevătămat, ZKI, fiind într-o stare calmă, acoperă capilarul sinusoidal cu procesele sale. Procesele PCI sunt împărțite în 2 tipuri: perisinusoidale (subendoteliale) și interhepatocelulare (Figura 4).

Primele părăsesc corpul celular și se extind de-a lungul suprafeței capilarului sinusoidal, acoperindu-l cu ramuri subțiri asemănătoare degetelor. Sunt acoperite cu vilozități scurte și au micro-ejecții lungi caracteristice care se extind și mai departe de-a lungul suprafeței tubului endotelial capilar. Excrescențe interhepatocelulare, după ce au depășit placa de hepatocite și ajung la sinusoidul adiacent, sunt împărțite în mai multe excrescențe perisinusoidale. Astfel, PCR acoperă, în medie, mai mult de două sinusoide adiacente.

În caz de afectare a ficatului, se activează PCI și procesul de fibrogeneză, în care se disting 3 faze. Acestea sunt denumite inițiere, prelungire și rezoluție (rezoluția țesutului fibros). Acest proces de transformare a PCI „repaus” în miofibroblaste fibrozante este inițiat de citokine (^ -1, ^ -6,

Figura 4. - Procese perisinusoidale (subendoteliale) și interhepatocelulare (excrescențe) PCI

a - procesul PCI (săgeți galbene), care iese din corpul celular, uv. 30.000; b - un proces al PCI, situat de-a lungul suprafeței capilarului sinusoidal, care conține o picătură de lipide, uv. 30.000; c - procese localizate subendotelial ale PCI. Procesele celulelor endoteliale (săgeți roz); d - proces interhepatocelular al PCI; zona de distrugere a membranelor PCI și hepatocitelor (săgeți negre), uv. 10 000. Modele de difracție a electronilor

TOT-a), produse metabolice sub-oxidate, specii reactive de oxigen, oxid nitric, endotelină, factor de activare a trombocitelor (PDGF), activator de plasminogen, factor de creștere transformator (TGF-1), acetaldehidă și multe altele. Activatorii direcți sunt hepatocitele aflate în stare de stres oxidativ, celulele Kupffer, celulele endoteliale, leucocitele, trombocitele producătoare de citokine (semnale paracrine) și PCI-urile în sine (stimulare autocrină). Activarea este însoțită de expresia (activarea) de noi gene, sinteza de citokine și proteine ​​din matricea extracelulară (colageni I, III, U).

În această etapă, procesul de activare a PCA poate fi finalizat prin stimularea formării de citokine antiinflamatorii în PCA, care inhibă producția de TOT de către macrofage în zona afectată. Ca urmare, cantitatea de ZKI este redusă drastic, ei suferă apoptoză și procesele de fibroză din ficat nu se dezvoltă.

În a doua fază (prelungită), cu acțiune constantă prelungită paracrină și autocrină a stimulilor activatori, în PCI se „menține” un fenotip activat, caracterizat prin transformarea PCI în celule contractile asemănătoare miofibroblastelor care sintetizează colagenul fibrilar extracelular.

Fenotipul activat se caracterizează prin proliferare, chemotaxie, contractilitate, pierderea rezervelor de retinoizi și formarea de celule asemănătoare miofibroblastelor. PCR-urile activate arată, de asemenea, niveluri crescute de noi gene, cum ar fi a-SMA, ICAM-1, chemokine și citokine. Activarea celulară indică debutul unui stadiu incipient al fibrogenezei și precede producția crescută de proteine ​​ECM. Țesutul fibros rezultat suferă o remodelare datorită clivajului matricei folosind metaloproteinaze de matrice (MMP). La rândul său, degradarea matricei este reglată de inhibitorii tisulari ai metaloproteinazelor matricei (TIMP). MMP-urile și TIMP-urile sunt membri ai familiei de enzime dependente de zinc. MMP-urile sunt sintetizate în PCA sub formă de enzime zimogene inactive care sunt activate la scindarea propeptidei, dar sunt inhibate la interacțiunea cu TIMP-urile endogene, TIMP-1 și TIMP-2. PCI-uri produc 4 tipuri de MMP-uri de tip membrană, care sunt activate de IL-1 p. Printre MMP, o importanță deosebită este acordată MMPs-9, o metaloproteinază de matrice neutră, care este activă împotriva colagenului de tip 4, care face parte din membrana bazală, precum și împotriva colagenului de tip 1 și 5 parțial denaturat.

O creștere a populației PCI cu diferite tipuri de leziuni hepatice este apreciată de activitatea unui număr semnificativ de factori mitogeni, receptorii tirozin kinazei înrudiți și alți mitogeni identificați care provoacă cea mai pronunțată proliferare PCI: endotelina-1, trombina, FGF - fibroblast. factor de creștere, PDGF - vase cu factor de creștere endotelial, IGF - factor de creștere asemănător insulinei. Acumularea PCI în zonele de afectare hepatică are loc nu numai datorită proliferării acestor celule, ci și datorită migrării lor direcționate către aceste zone prin chemotaxie, cu participarea unor astfel de chemoatractanți precum PDGF și chemoatractant leucocitar-MCP (monocyte chemotactic). proteina-1).

În PCI activată, numărul picăturilor de lipide este redus la 1-3 cu localizarea lor la polii opuși ai celulei (Figura 5).

PCI activate capătă o formă alungită, zone semnificative ale citoplasmei sunt ocupate de complexul Golgi și sunt dezvăluite cisterne destul de numeroase ale GRES (un indicator al sintezei proteinelor pentru export). Numărul altor organele este redus: există puțini ribozomi și polizomi liberi, mitocondrii unice, neregulat - lizozomi (Figura 6).

În 2007, ZKI au fost denumite pentru prima dată celule stem hepatice, deoarece exprimă unul dintre markerii celulelor stem mezenchimale hematopoietice - CD133.

Figura 5. - ZKI, care sunt în starea activată

a, b - PCI (săgeți albastre) cu incluziuni lipidice simple localizate la polii opuși ai nucleului. Țesutul conjunctiv perisinusoidal (în Fig. 6a) și stratul de matrice intercelulară din jurul hepatocitei (în Fig. 6b) sunt colorate în roșu. Limfocite citotoxice (săgeți violete). Celula endotelială (săgeată albă). Contact strâns între plasmocită (săgeată roșie) și hepatocit. Felii semi-subțiri. Culoarea Azur II este principalul fuchsin. Micrografii. l-am luat. 1000; c, d - componente ultrastructurale ale PCR: mitocondrii (săgeți portocalii), complex Golgi (săgeată roșie), cisterne ale părții cis mai osmiofile în fața elementelor expandate ale reticulului endoplasmatic granular (săgeți verzi), lizozom (săgeată albastră) ( mărire 10.000, respectiv 20.000); c, d - modele de difracție a electronilor

Miofibroblastele, care sunt absente într-un ficat normal, au trei surse potențiale: în primul rând, în timpul dezvoltării intrauterine a ficatului, în tracturile porte, miofibroblastele înconjoară vasele și căile biliare în timpul maturării lor, iar după ce ficatul este complet dezvoltat, dispar și sunt înlocuit în căile porte cu fibroblaste portal; al doilea - în caz de leziuni hepatice, se formează din cauza celulelor mezenchimatoase portal și a PCI în repaus, mai rar din cauza celulelor epitelio-mezenchimatoase de tranziție. Ele sunt caracterizate prin prezența CD45-, CD34-, Desmin +, proteine ​​fibrilare gliale asociate cu (GFAP) + și Thy-1 +.

Studii recente au arătat că hepatocitele, colangiocitele și celulele endoteliale pot deveni miofibroblaste prin intermediul celulelor epiteliale sau prin tranziția celulelor endoteliale la mezenchimale (EMT). Aceste celule includ markeri precum CD45-, albumina + (adică hepatocite), CD45-, CK19 + (adică colangiocite) sau Tie-2 + (celule endoteliale).

Figura 6. - Activitate fibrotică ridicată a PCI

a, b - miofibroblast (Mfb), celula conține un nucleu mare, elemente ale GRES (săgeți roșii), numeroși ribozomi liberi, vezicule și granule polimorfe, mitocondrii unice și un semn luminos de vizualizare - un mănunchi de filamente de actină în citoplasmă (săgeți galbene); luat. 12.000 și 40.000; c, d, e, f - activitate fibrotică ridicată a PCI în timp ce rețin picăturile de lipide care conțin retinoizi în citoplasmă. Numeroase mănunchiuri de fibrile de colagen (săgeți albe) care au păstrat (a) și au pierdut (d, e, f) striație transversală specifică; luat. 25.000, 15.000, 8.000, 15.000. Modele de difracție a electronilor

În plus, celulele măduvei osoase, formate din fibrocite și celule mezenchimale circulante, se pot transforma în miofibroblaste. Acestea sunt celule CD45 + (fibrocite), CD45 +/- (celule mezenchimale circulante), colagen tip 1+, CD11d + și MHC clasa 11+ (Figura 7).

Datele din literatură confirmă nu numai relația strânsă dintre proliferarea celulelor ovale și proliferarea celulelor sinusoidale, ci și datele privind posibila diferențiere a PCI în epiteliul hepatic, care a fost numită transformarea mezenchimato-epitelială a celulelor perisinusoidale.

În starea de activare fibrogenă, PCI asemănătoare miofibroblastelor, împreună cu scăderea numărului și dispariția ulterioară a picăturilor de lipide, se caracterizează prin proliferare focală (Figura 8), expresia imunohistochimică a markerilor asemănătoare fibroblastelor, inclusiv a-actina musculară netedă. , și formarea de fibrile colagenoase pericelulare în fibrile.

În faza de dezvoltare a fibrozei, hipoxia în creștere a țesutului hepatic devine un factor de supraexpresie suplimentară în celulele stem a moleculelor de adeziune proinflamatorii - 1CAM-1, 1CAM-2, VEGF, proinflamatorii

Interacțiunea celulelor progenitoare hepatice ductale cu miofibroblastele hepatice

PCB-uri asemănătoare miofibroblastelor în stare de activare fibrogenică.

Figura 7. - Participanți la activarea miofibroblastică a PCI

chemoatractanți limfatici - M-CSF, MCP-1 (proteina chemotactic monocitară-1) și SGS (chemoatractant neutrofil mediat de citokine) și altele care stimulează formarea de citokine proinflamatorii (TGF-b, PDGF, FGF, PAF, SCF, ET-1) și intensifică procesele de fibrogeneză în ficat, creând condiții pentru inducerea auto-susținută a activării continue a proceselor PCI și de fibrogeneză.

La preparatele microscopice, fibroza pericapilară se manifestă sub forma unei culori intense a țesutului conjunctiv perisinusoidal și a unui strat de matrice intercelulară în jurul hepatocitelor (adesea pe moarte) în roșu. Pe preparatele microscopice electronice, modificările fibrotice sunt vizualizate fie sub formă de mănunchiuri mari de fibrile de fibre de colagen care și-au păstrat striația transversală, fie sub formă de masive.

depozite în spațiul Disse a unei mase fibroase, care este umflată și fibre de colagen care și-au pierdut striația periodică (Figura 9).

Conform conceptelor moderne, fibroza este un proces dinamic care poate progresa și regresa (Figura 10).

Recent, au fost propuși câțiva markeri specifici ai PCI: înflorirea vitaminei A (BA) în picături de lipide, GFAP, receptorul p75 NGF și sinaptofizina. Se efectuează studii privind participarea PCI hepatică la proliferarea și diferențierea celulelor stem hepatice.

Am studiat conținutul de proteină de legare a retinolului (RSB-4), care formează un complex cu VA, a cărui concentrație în plasma sanguină se corelează în mod normal cu aportul de VA al organismului, din care 80% se află în PCI.

Relația dintre conținut

Figura 8. - Proliferarea focală a PCI în stare de activare fibrogenică

a - hiperplazia PCI (săgeți albe) în lumenul sinusoidelor dilatate; b - proliferarea PCI transdiferenţiată (săgeţi albe), celule endoteliale (săgeată roz). Felii semi-subțiri. Culoarea Azur II este principalul fuchsin. Micrografii. l-am luat. 1000

Figura 9. - Etapa finală a activării miofibroblastice a PCI

a, b - fibroza perisinusoidală (săgeți albe). Țesutul conjunctiv perisinusoidal și stratul de matrice intercelulară din jurul hepatocitelor (b) sunt colorate în roșu cu fuchsină bazică. PCI activat și transformat în fibroblaste (săgeți albastre). Hz în fig. a - hepatocit cu citoplasmă epuizată. Felii semi-subțiri. Culoarea Azur II este principalul fuchsin. Micrografii. l-am luat. 1000; c, d - fibroza perisinusoidală și perihepatocelulară în lobul hepatic, creșterea densității electronice a fibrilelor de colagen; condensarea matricei mitocondriale în hepatocit (săgeată portocalie). Uv. 8.000, respectiv 15.000. Modele de difracție a electronilor

Tabel 1. - Indicatori ai conținutului de RSB-4 la pacienții cu ciroză hepatică (LC) și hepatită cronică (CG) de etiologie diferită, ng/ml (M ± m)

Grupa n M ± m p

Ciroză hepatică 17 23,6 ± 2,29<0,05

CG, norma AsAT 16 36,9 ± 2,05 *> 0,05

CG, ASAT> 2 norme 13 33,0 ± 3,04 *> 0,05

CG, norma ALAT 13 37,5 ± 3,02 *> 0,05

CG, ALAT> 2 norme 21 35,9 ± 2,25 *> 0,05

Control 15 31,2 ± 2,82

Notă: p - diferențe semnificative cu controlul (p<0,05); * - достоверные различия между ЦП и ХГ (р<0,05)

Un pseudo-lobul înconjurat de un sept fibros rezoluție cu un sept fibros. Colorarea după cercul de masă al lobulului fals. Colorare conform nu.Uv.x50 Masson. Uv.x200

Figura 10. - Dinamica evenimentelor în lobul fals al unui pacient cu ciroză virală la 6 luni după transplantul de celule stem mezenchimale autologe în ficat

Mâncăm RSB-4 și fibroză în stadiul 4 (ciroză), spre deosebire de hepatita cronică, în care o astfel de dependență nu a fost urmărită, indiferent de markerii biochimici ai activității inflamatorii din ficat.

Acest fapt trebuie luat în considerare atunci când se justifică terapia de substituție pentru eliminarea deficienței de VA din organism, care se poate datora epuizării potențialului PCI din cauza progresiei fibrozei la nivelul ficatului.

1. Eficiența maximă a evaluării stării structurale și funcționale a PCI este asigurată de examinarea morfologică a unui specimen de biopsie intravitală cu utilizarea simultană a unui complex de tehnici de vizualizare celulară (microscopie ușoară, electronică a secțiunilor ultrasubțiri și metode originale de fixare). și colorare).

2. Rezultatele studiilor morfologice ale PCI fac posibilă îmbunătățirea calității diagnosticului intravital al fibrozei, monitorizarea acestuia și prezicerea rezultatelor leziunilor hepatice cronice difuze la un nivel modern superior.

3. Rezultatele concluziilor morfologice vor permite clinicianului să includă suplimentar în formularea diagnosticului final date actualizate privind stadiul de cronicizare (stabilizare, progresie sau rezoluție a fibrozei) în timpul terapiei.

Literatură

1. Ivashkin, VT Simptome clinice ale modificărilor pre-fibrotice: o transcriere a unei prelegeri de la Congresul de Internet al Specialiștilor în Medicină Internă din întreaga Rusie / VT Ivashkin, AO Bueverov // INTERNIST: Societatea Națională de Internet a Specialiștilor de Medicină Internă. - 2013. - Mod de acces: http: // internist. ru / publicații / detaliu / 6569 /. - Data accesului: 21.11.2016.

2. Kiyasov, AP Celule ovale - presupuse celule stem hepatice sau hepatoblaste? / A. P. Kiyasov, A. A. Gumerova, M. A. Titova // Transplantologie celulară și ingineria țesuturilor. - 2006. - T. 2, nr. 4. - S. 55-58.

1. Ivashkin, VT Klinicheskaya simptomatika dofibroticheskih izmenenij: stenogramma lekcii Vserossijskogo Internet-Kongressa specialistov po vnutrennim boleznyam / VT Ivashkin, AO Bueverov // INTERNIST: Nacional "noe Internet-special dobshchestvonut. //publications59 detail. //publications59 detail. .- Data dostupa: 21/11/2016.

2. Kiyasov, AP Oval "nye kletki - predpolagaemye stvolovye kletki pecheni ili gepatoblasty? / AP Kiyasov, AA Gumerova, MA Titova // Kletochnaya transplantologiya i tkanevaya inzheneriya. - 2006. - T. 2, No. 55 - S. 4. - 58.

3. Despre rolul celulelor hepatice sinusoidale și ale celulelor măduvei osoase în furnizarea unei strategii regenerative pentru un ficat sănătos și deteriorat / A. V. Lundup [et al.] // Buletin de transplantologie și organe artificiale. -2010. - T. XII, Nr. 1. - S. 78-85.

4. Serov, VV Criterii morfologice de apreciere a etiologiei, gradului de activitate și stadiului procesului în hepatitele cronice virale B și C / VV Serov, LO Severgina // Arhiva de patologie. - 1996. - Nr 4. - S. 61-64.

5. Caracteristicile structurale și funcționale ale celulelor hepatice stelate în dinamica fibrozei / OA Postnikova [et al.] // Cercetare fundamentală. - 2011. - Nr. 10.

6. Studiu ultrastructural și imunohistochimic al celulelor stelate hepatice în dinamica fibrozei hepatice și a cirozei genezei virale infecțioase / GI Nepomnyashikh [et al.] // Buletinul de biologie și medicină experimentală. - 2006. - T. 142, nr. 12. - S. 681-686.

7. Shcheglev, AI Caracteristicile structurale și metabolice ale celulelor hepatice sinusoidale / AI Shcheglev, OD Mishnev // Progrese în biologia modernă. - 1991. - T. 3, nr. 1. - S. 73-82.

10. Efectele retinoidului și trigliceridelor dietetice asupra compoziției lipidice a celulelor stelate ale ficatului de șobolan și a picăturilor de lipide ale celulelor stelate / H. Moriwaki // J. Lipid. Res. - 1988. - Vol. 29 .-- R. 1523-1534.

13. Friedman, S. Fibroza hepatică 2006: Raportul celei de-a treia conferințe cu subiect unic AASLD / S. Friedman, D. Rockey, B. Montgomery // Hepatologie. - 2006. - Vol. 45 (1). - R. 242-249.

18. Iredale, J. P. Comportamentul celulelor stelate hepatice în timpul rezolvării leziunilor hepatice / J. P. Iredale // Semin. Ficat Dis. -2001. - Vol. 21 (3). - R. 427-436.

19. Kobold, D. Expresia reelinei în celulele stelate hepatice și în timpul reparării țesutului hepatic: un nou marker pentru diferențierea HSC de alte miofibroblaste hepatice / D. Kobold // J. Hepatol. - 2002. - Vol. 36 (5). - R. 607-613.

20. Lepreux, S. Miofibroblaste hepatice umane în timpul dezvoltării și boli cu accent pe portal (mio)

3. O roli sinusoidal "nyh kletok pecheni i kletok kostnogo mozga v obespechenii regeneratornoj strategii zdorovoj i povrezhdennoj pecheni / A. V. Lyundup // Vestnik transplantologii i iskusstvennyh organov. - 2010. - S. HII- 85.

4. Serov, V. V. Morfologicheskie kriterii ocenki ehtiologii, stepeni aktivnosti i stadii processa pri virusnyh hronicheskih gepatitah V i S / V. V. Serov, L. O. Severgina // Arhiv patologii.

1996. - Nr. 4. - S. 61-64.

5. Strukturno-funkcional "naya harakteristika zvezdchatyh kletok pecheni v dinamike fibroza / O. A. Postnikova // Fundamental" nye issledovaniya. - 2011. - Nr. 10. - C. 359-362.

6. Ul "trastrukturnoe i immunogistohimicheskoe issledovanie zvezdchatyh kletok pecheni v dinamike fibroza i cirroza pecheni infekcionno-virusnogo geneza / GI Nepomnyashchih // Byulleten" ehksperimental "12. -686.

7. SHCHeglev, A. I. Strukturno-metabolicheskaya harakteristika sinusoidal "nyh kletok pecheni / A. I. SHCHeglev, O. D. Mishnev // Uspekhi sovremennoj biologii. - 1991. - T. 3, No. 1. - S. 73.

8. Celulele stelate hepatice CD34 sunt celule progenitoare / C. Kordes // Biochem., Biophys. Res. Uzual. - 2007. -Vol. 352 (2). - P. 410-417.

9. Degradarea proteinelor matricei în fibroza ficatului / M. J. Arthur // Pathol. Res. Practică. - 1994. - Vol. 190 (9-10).

10. Efectele retinoidului și trigliceridelor dietetice asupra compoziției lipidice a celulelor stelate ale ficatului de șobolan și a picăturilor de lipide ale celulelor stelate / H. Moriwaki // J. Lipid. Res. - 1988. - Vol. 29. - R. 1523-1534.

11. Ficatul fetal este format din celule în tranziție epitelial-mezenchimală / J. Chagraoni // Sânge. - 2003. - Vol. 101. - P. 2973-2982.

12. Fixarea, degidratarea și înglobarea specimenelor biologice / A. M. Glauert // Practical Methods in Electron Microscopy. - New York: Am. Elsevier, 1975. - Vol. 3, partea 1.

13. Friedman, S. Fibroza hepatică 2006: Raportul celei de-a treia conferințe cu subiect unic AASLD / S. Friedman, D. Rockey, B. Montgomery // Hepatologie. - 2006. - Vol. 45 (1). - R. 242-249.

14. Gaga, M. D. Celulele stelate umane și rathepatic produc factor de celule stem: un posibil mecanism pentru recrutarea mastocitelor în fibroza hepatică / M. D. Gaga // J. Hepatol. - 1999. - Vol. 30, nr 5. - P. 850-858.

15. Glauert, A. M. Araldite ca mediu de încorporare pentru microscopie electronică / A. M. Glauert, R. H. Glauert // J. Biophys. Biochim. Cytol. - 1958. - Vol. 4. - P. 409-414.

16. Celulele stelate hepatice și fibroblastele portale sunt sursele celulare majore de colagen și lizil oxidaze în ficatul normal și la începutul leziunii / M. Perepelyuk // Am. J. Physiol. Test gastro-intestinal. Ficat Physiol. - 2013. - Vol. 304 (6). - P. 605614.

17. Miezul virusului hepatitei C și proteinele nestructurale induc efecte fibrogenice în celulele stelate hepatice / R. Bataller // Gastroenterology. - 2004. - Vol. 126, iss. 2. - P. 529-540.

18. Iredale, J. P. Comportamentul celulelor stelate hepatice în timpul rezolvării leziunilor hepatice / J. P. Iredale // Semin. Ficat Dis. -2001. - Vol. 21 (3). - R. 427-436.

19. Kobold, D. Expresia reelinei în celulele stelate hepatice și în timpul reparării țesutului hepatic: un nou marker pentru diferențierea HSC de alte miofibroblaste hepatice / D. Kobold // J. Hepatol. - 2002. - Vol. 36 (5). - R. 607-613.

20. Lepreux, S. Miofibroblastele ficatului uman în timpul dezvoltării și bolile cu accent pe fibroblastele portal (mio) / S. Lepreux, A. Desmoulière

fibroblaste / S. Lepreux, A. Desmouliere // Front. Physiol. - 2015. - Mod de acces: http: //dx.doi. org / 10.3389 / fphys.2015.00173. - Data accesului: 31.10.2016.

22. Transplantul de celule stem derivate din măduva osoasă mezenchimală la pacienții cu ciroză hepatică legată de HCV / S. Lukashyk // J. Clin. Transl. Hepatol. - 2014. - Vol. 2, iss. 4. - P. 217-221.

23. Millonig, G. A. Avantajele unui tampon fosfat pentru soluții de tetroxid de osmiu în fixare / G. A. Millonig // J. Appl. Fizică. - 1961. - Vol. 32. - P. 1637-1643.

Vol. 158. - P. 1313-1323.

Vol. 24. - P. 205-224.

29. Querner, F. Der mikroskopische Nachweis von Vitamin Aimanimalen Gewebe. Zur Kenntnis der paraplasmatischen Leberzellen-einschlüsse. Dritte Mitteilung / F. Querner // Klin. Wschr. - 1935. - Vol. 14. - P. 1213-1217.

30. Evoluții recente în biologia miofibroblastelor: paradigme pentru remodelarea țesutului conjunctiv / B. Hinz // Am. J. Pathol. - 2012. - Vol. 180. - P. 1340-1355.

35. Mezoteliul derivat din sept transvers dă naștere la celule stelate hepatice și la celule mezenchimale perivasculare în ficatul de șoarece în curs de dezvoltare / K. Asahina // Hepatologie. -2011. - Vol. 53. - P. 983-995.

Vol. 50. - P. 66-71.

38. Thabut, D. Angiogeneza intrahepatică și remodelarea sinusoidală în boala hepatică cronică: noi ținte pentru tratamentul hipertensiunii portale? / D. Thabut, V. Shah // J. Hepatol. - 2010. - Vol. 53. - P. 976-980.

39. Wake, K. Celulele stelate hepatice: structură tridimensională, localizare, eterogenitate și dezvoltare / K.

// Față. Physiol. - 2015. - Mod de acces: http: //dx.doi. org / 10.3389 / fphys.2015.00173. - Data accesului: 31.10.2016.

21. Liganzi ai receptorului activat de proliferator de peroxizomi gama modulat acțiuni profibrogenice și proinflamatorii în celulele stelate hepatice / F. Marra // Gastroenterology. -2000. - Vol. 119. - P. 466-478.

22. Transplantul de celule stem derivate din măduva osoasă mezenchimală la pacienții cu ciroză hepatică legată de HCV / S. Lukashyk // J. Clin. Transl. Hepatol. - 2014. - Vol. 2, iss. 4. - R. 217-221.

23. Millonig, G. A. Avantajele unui tampon fosfat pentru soluții de tetroxid de osmiu în fixare / G. A. Millonig // J. Appl. Rizică. - 1961. - Vol. 32. - P. 1637-1643.

24. Originea și evoluția structurală a celulelor ovale cu proliferare timpurie din ficatul de șobolan / S. Paku // Am. J. Hepatol. - 2001.

Vol. 158. - P. 1313-1323.

25. Originea miofibroblastelor în fibroza hepatică / D. A. Brenner // Fibrogenesis Tissue Repair. - 2012. - Vol. 5, suppl. 1. - S. 17.

26. Originile și funcțiile miofibroblastelor hepatice / S. Lemoinne // Biochim. Biophys. Acta. - 2013. - Vol. 1832 (7). - P. 948-954.

27. Pinzani, M. PDGF și transducția semnalului în celulele stelate hepatice / M. Pinzani // Front. Biosci. - 2002. - Vol. 7. - P. 1720-1726.

28. Popper, H. Distribuția vitaminei A în țesut, așa cum este evidențiată de microscopia cu fluorescență / H. Popper // Physiol. Rev. - 1944.

Vol. 24. - R. 205-224.

29. Querner, F. Der mikroskopische Nachweis von Vitamin Aimanimalen Gewebe. Zur Kenntnis der paraplasmatischen Leberzellen-einschlüsse. Dritte Mitteilung / F. Querner // Klin. Wschr. - 1935. - Vol. 14. - R. 1213-1217.

30. Evoluții recente în biologia miofibroblastelor: paradigme pentru remodelarea țesutului conjunctiv / B. Hinz // Am. J. Pathol. - 2012. - Vol. 180. - R. 1340-1355.

31. Reynolds, E. S. Utilizarea citratului de plumb la pH ridicat ca colorant electronopac în microscopie electronică / E. S. Reynolds // J. Cell. Biol. - 1963. - Vol. 17. - P. 208-212.

32. Safadi, R. Stimularea imună a fibrogenezei hepatice de către celulele CD8 și atenuarea prin interleukina-10 transgenică din hepatocite / R. Safadi // Gastroenterologie. - 2004. - Vol. 127 (3). - P. 870-882.

33. Sato, T. Un studiu microscopic electronic al specimenului fixat pentru perioade mai lungi în formalină tamponată cu fosfat / T. Sato, I. Takagi // J. Electron Microsc. - 1982. - Vol. 31, nr 4. - P. 423-428.

34. Senoo, H. Vitamina A-Storing Cells (Stellate Cells) / H. Senoo, N. Kojima, M. Sato // Vitam. Horm. - 2007. - Vol. 75.

35. Mezoteliul derivat din sept transvers dă naștere la celule stelate hepatice și la celule mezenchimale perivasculare în ficatul de șoarece în curs de dezvoltare / K. Asahina // Hepatologie. -2011. - Vol. 53. - R. 983-995.

36. Stanciu, A. Date noi despre celulele ITO / A. Stanciu, C. Cotutiu, C. Amalinei // Rev. Med. Chir. Soc. Med. Nat. Iasi. -2002. - Vol. 107, nr 2. - P. 235-239.

37. Suematsu, M. Profesorul Toshio Ito: a clarvoyant in pericyte biology / M. Suematsu, S. Aiso // Keio J. Med. - 2000.

Vol. 50. - R. 66-71.

38. Thabut, D. Angiogeneza intrahepatică și remodelarea sinusoidală în boala hepatică cronică: noi ținte pentru tratamentul hipertensiunii portale? / D. Thabut, V. Shah // J. Hepatol. - 2010. - Vol. 53. - R. 976-980.

39. Wake, K. Celulele stelate hepatice: Structura tridimensională, localizare, eterogenitate și dezvoltare / K. Wake // Proc. Jpn. Acad. Ser. B, Fiz. Biol. Sci. - 2006. - Vol.

Trezire // Proc. Jpn. Acad. Ser. B, Fiz. Biol. Sci. - 2006. - Vol. 82 (4). - P. 155-164.

82 (4). - P. 155-164.

40. Wake, K. In Cells of the Hepatic Sinusoid / K. Wake, H. Senoo // Kupffer Cell Foundation (Rijswijk, Olanda). - 1986. - Vol. 1. - P. 215-220.

41. Watson, M. L. Colorarea secțiunilor de țesut pentru microscopie electronică cu metale grele / M. L. Watson // J. Biophys. Biochim. Cyt. - 1958. - Vol. 4. - P. 475-478.

CITOLOGIA CLINICĂ A FICATULUI: CELULELE STELLATE ITO (CELULELE STELLATE HEPATICE)

Tsyrkunov V. M., Andreev V. P., Kravchuk R. I., Kandratovich I. A. Instituția de învățământ „Universitatea de Stat Medicală din Grodno”, Grodno, Belarus

Introducere. Rolul celulelor stelate Ito (Hepatic Stellate Cells, HSC) a fost identificat ca fiind unul dintre liderii în dezvoltarea fibrozei hepatice, dar utilizarea vizualizării intravitale a structurilor HSC în practica clinică este minimă.

Scopul lucrării este de a prezenta caracteristicile structurale și funcționale ale HSC pe baza constatărilor identificării citologice a probelor de biopsie hepatică intravitală.

Materiale si metode. Au fost aplicate metode clasice de microscopie luminoasă și electronică a probelor de biopsie în tehnica originală de utilizare a secțiunilor ultrasubțiri, fixare și colorare.

Rezultate. Caracteristicile structurale ale HSC ale probelor de biopsie hepatică de la pacienți cu hepatită cronică C sunt prezentate pe ilustrații foto ale microscopiei luminoase și electronice. HSC sunt descrise în diferite etape (repaus, activare) și în timpul procesului de transformare în miofibroblaste.

Concluzii. Utilizarea metodelor originale de identificare și evaluare clinică și morfologică a stării funcționale a HSC permite îmbunătățirea calității diagnosticului și prognosticului fibrozei hepatice.