1 Takım ataması
1.1 Kit, dolaylı enzim yöntemiyle insan serum ve plazmasında birinci ve ikinci tip (HIV-1 ve HIV-2) insan immün yetmezlik virüslerine (HIV-1 ve HIV-2) ve HIV-1 p24 antijenine karşı antikorların eşzamanlı tespiti için tasarlanmıştır. -bağlı immünosorbent deneyi.
2 Setin özellikleri ve çalışma prensibi
2.1 Set şunları içerir:
|
Bileşen Adı |
Miktar |
|
immünosorbent |
2 tablet |
|
Pozitif kontrol AT (K + AT) |
1 şişe, 3 ml |
|
AG'nin pozitif kontrol örneği (K + AG) |
3 şişe, liyofilize preparat |
|
Negatif kontrol (İLE -) |
2 şişe 3 ml |
|
1 numaralı konjugat solüsyonu (RC-1) |
1 şişe, 12 ml |
|
2 No'lu eşlenik (Kg-2) |
1 şişe, 1 ml |
|
Konjugat seyreltme solüsyonu No. 2 (RR-K2) |
2 şişe 18 ml |
|
Substrat tampon çözeltisi ( BRS) |
2 şişe 18 ml |
|
kromojen TMB |
1 şişe, 1 ml |
|
Tween PBS Konsantresi (FSB-T × 25) |
2 şişe 50 ml |
|
Reaktifi durdur |
1 şişe, 12 ml |
|
Çok Kanallı Pipetler için Uçlu Reaktif Tepsisi Kiti |
1 takım |
|
Yapışkan film |
2.2 ELISA-HIV 1,2 AGAT kitinin ana bileşenleri immünosorbent, 1 numaralı konjugat solüsyonu ve 2 numaralı konjugattır.
immünosorbent kuyularında rekombinant HIV-1 (gp41) ve HIV-2 (gp36) antijenlerinin ve HIV-1 p24 antijenine karşı monoklonal antikorların bir karışımının emildiği bir polistiren plakadır.
1 numaralı konjugat solüsyonu HIV-1 p24 antijenine karşı biyotin etiketli monoklonal insan antikorları ve biyotin etiketli rekombinant HIV-1 ve HIV-2 proteinlerinin bir karışımıdır.
2 No'lu eşlenik yaban turpu peroksidaz ile konjuge streptavidindir.
Pozitif kontrol AT- HIV-1 ve HIV-2'ye karşı antikorlar içeren, hepatit C ve Treponema pallidum, HIV-1 p24 antijeni ve HBs antijenine karşı antikor içermeyen, 56 ºC'de 3 saat ısıtılarak inaktive edilen insan kan serumu.
AG'nin pozitif kontrol örneği- doğal HIV-1 p24 antijeni içeren, HIV-1, HIV-2, hepatit C virüsü ve Treponema pallidum ve HBs antijenine karşı antikor içermeyen, 56 ºC'de 3 saat ısıtılarak inaktive edilmiş insan kan serumu.
Negatif kontrol- HIV-1, HIV-2, HCV, HIV-1 p24 antijeni ve HBs antijenine karşı antikorlar içermeyen, 56 ºC'de 3 saat ısıtılarak inaktive edilen insan kan serumu.
Kümenin prensibi. Plakanın oyuklarına bir konjugat No. 1 solüsyonu ve enfekte kan serumu örnekleri eklendiğinde, p24 antijeni hem katı fazdaki spesifik antikorlara hem de konjugat solüsyonunun parçası olan monoklonal biyotinlenmiş anti-p24 antikorlarına bağlanır. 1; HIV'e özgü antikorlar, hem katı fazda adsorbe edilen rekombinant HIV-1 hem de HIV-2 antijenlerine ve antijen-antikor kompleksleri oluşturan 1 numaralı konjugat solüsyonunda yer alan antijenlere bağlanır. Anti-p24'e özgü antikorların ve p24 antijeninin immün kompleksleri, konjugat # 2 ile tespit edilir. Bağlanmamış bileşenleri yıkadıktan sonra, plakanın oyuklarına bir peroksidaz substratı (hidrojen peroksit) ve TMB kromojen solüsyonu eklenir.
Peroksidaz reaksiyonu, bir durdurma reaktifi (0.9 M sülfürik asit solüsyonu) eklenerek durdurulur ve kuyulardaki solüsyonun renk yoğunluğu, 450 nm dalga boyunda optik yoğunluk (OD) değeri olarak bir spektrofotometrede ölçülür.
OD değeri, bir serum veya plazma örneğindeki spesifik antikorların ve/veya p24 antijeninin konsantrasyonu ile doğru orantılıdır. Serum örneğindeki antikor ve/veya p24 antijen içeriği ne kadar yüksek olursa, boyamanın yoğunluğu da o kadar yüksek olur.
2.3 Set tutmak için tasarlanmıştır 24 performans ELISA: 1 takım - 1 şerit (8 delik). Toplam - 192 tanımlar kontrol örnekleri dahil.
3 Kitle çalışırken alınacak önlemler
3.1 Kitin tüm bileşenleri, kullanılan konsantrasyonlarda toksik değildir. Ancak, potansiyel olarak enfeksiyöz olarak kabul edilmesi gereken, HIV, hepatit B virüsü veya viral enfeksiyona neden olan diğer herhangi bir ajanı depolama ve iletme kabiliyetine sahip tüm insan kan serumu (plazma) test numuneleri ile atık solüsyonlar ve sıvılar, çeşitli ekipmanlarla çalışın. Analiz sürecinde kontamine olabilecek, kiti kullanırken belirli güvenlik önlemleri gerektirir:
İş, özel olarak donatılmış bir odada yapılmalıdır;
Kişisel koruyucu donanımların kullanılması ve gerekliliklere uygun önlemlerin alınması ile çalışılması gerekir, ve.
3.2 Sülfürik asit içeren durdurma reaktifi tahriş edicidir. Deri ve mukoz membranlarla teması halinde derhal bol su ile yıkayınız.
3.3 Bir set ile çalışırken, işyerlerinde besleme ve egzoz havalandırması sağlanmalıdır.
3.4 Laboratuarda kitlerle çalışan tüm kişiler, gerekliliklere uygun olarak zorunlu tıbbi muayeneden geçmelidir.
3.5 Tıbbi atıklar ve/veya kullanılmamış son kullanma tarihi geçmiş kitler uygun şekilde imha edilmelidir.
4 Setle çalışmak için kurallar
4.1 Yanlış sonuçları dışlamak için test numuneleri bakteri üremesini önleyen koşullar altında hazırlanmalı ve saklanmalıdır. Agrege serum bileşenleri veya tortu içeren serum numunelerinin 3000 rpm dönüş hızında (5-10) dakika santrifüj edilerek berraklaştırılması gerekir. Serum numuneleri en fazla 5 gün (2-8) ° С sıcaklıkta saklanabilir. Dondurulmuş numuneler (tercihen en az eksi 20 °C sıcaklığa kadar) 1 yıldan fazla saklanamaz. Numunelerin tekrarlanan donma-çözülme döngülerinden kaçınılmalıdır.
Hemoliz, hiperlipidemi, bakteri üremesi olan örneklerin yanı sıra uzun süre donmadan saklanan örneklerin analiz için uygun olmadığı unutulmamalıdır.
Sonuçların güvenilirliği aşağıdaki kuralların yerine getirilmesine bağlıdır:
Kitin son kullanma tarihinden sonra kullanılmasına ve ayrıca farklı serilerdeki kitlerin bileşenlerinin karıştırılmasına izin verilmez;
Her reaktifin hazırlanması için ayrı bir kap kullanılmalıdır;
Reaktiflerin hazırlanmasında kullanılan tüm kapları dezenfektan ve deterjanlarla işlemden geçirmeyin. Gerekirse, içme suyuyla durulayın ve ardından beş kez damıtılmış su ile durulayın;
TMB ve PX kromojeni ile çalışmak için solüsyonlar, pipet uçları ve tabaklar için ayrı kaplar kullanmak gerekir.
Reaktiflerin iyice karıştırılmasına dikkat etmek gerekir;
Plakanın kuyularının çözeltiler ve reaktiflerle doldurulması ve boşaltılması arasındaki süre en az 30 s olmalıdır. ELISA'nın tüm aşamalarında kuyuların kurutulmasına izin verilmez;
Yıkayıcıyı kullanırken, tabak yıkama solüsyonu ve bağlantı hortumları için kabın durumunu izleyin: bunlar bakteri veya mantar üremesi belirtileri göstermemelidir;
Ortalama dozun değeri ve pipetleme sonuçlarının tekrarlanabilirliği ile onaylanmış değiştirilebilir uçlu otomatik pipetlerin kullanılması gerekir (hata en fazla %3);
Dispenserleri ve çalışma yüzeylerini hacim fraksiyonu %70 etil alkol içeren bir solüsyonla işlemden geçirin. Kloramin ve diğer klor içeren maddeleri kullanmayın;
Test ve kontrol numunelerinin işlenmesi için tek kullanımlık pipet uçları önerilir. Her serum numunesi ve kit reaktifleri ayrı bir uçla alınmalıdır.
Kuyulara PK-1 eklerken, pipet ucu ile plakanın yüzeyine ve kuyulardaki solüsyona dokunmayın.
Analiz sırasında, çalışma yüzeyinde doğrudan güneş ışığından kaçının.
4.2 Liyofilize bileşenleri açarken ve çözerken, flakonların kapağında ve duvarlarında kuru madde kalmadığından emin olmak gerekir.
5 Analiz için gerekli ekipman ve malzemeler
5.1 Plakanın kuyularındaki çözeltilerin optik yoğunluğunun 450 nm dalga boyunda ölçülmesini sağlayan dikey tarama spektrofotometresi;
Yarı veya otomatik plaka yıkayıcı (yıkayıcı);
ТС-80 М2 tipi kuru hava termostatı, sıcaklığı koruyan (37 ± 1) ° С veya benzer özellikler;
0,01 ila 5,0 ml arasında sıvı hacimleri almayı sağlayan, değiştirilebilir uçlu tek kanallı otomatik pipetler;
Pipetler 8-kanallı otomatik, değiştirilebilir uçlu, 0,5 ml'ye kadar sıvı hacmini almaya izin verir;
2000 ml kapasiteli dereceli silindir;
2000 ml kapasiteli laboratuvar şişesi;
20 ml kapasiteli cam şişeler;
Reaktifler veya Petri kapları için tepsiler (çap 100 mm);
Tıbbi emici pamuk yünü;
Filtre kağıdı;
Cerrahi lastik eldivenler;
%70 etil alkol hacim oranına sahip bir çözelti;
%6 hidrojen peroksit kütle fraksiyonuna sahip bir çözelti;
Deiyonize veya damıtılmış su;
Katı atık toplama kabı;
Sıvı atıkları boşaltmak için konteyner.
6 Analiz için hazırlık
6.1 Analizden önce reaktif kitini buzdolabından çıkarın, kutu kapağını açın ve kit bileşenlerini bir sıcaklıkta tutun. (18-25) ° С 30 dakika.
Analizden önce tüm serum (plazma) numunelerini ve reaktifleri iyice karıştırın.
Kullanılan strip sayısı ile belirlenen test seti için reaktiflerin tüketimi Ek A Tablo A.1'de verilmiştir.
6.2 Plaka yıkama solüsyonunun hazırlanması
Dikkat! Analiz başlamadan 15 dakika önce plaka yıkama solüsyonunu hazırlayın!
FSB-T × 25 içeren bir şişe bir çökelti içeriyorsa, kullanımdan önce (37 ± 1) ° C sıcaklıkta çökelti tamamen eriyene kadar ısıtılmalıdır. FSB-T × 25 içeren bir şişenin içeriğini 2000 ml kapasiteli bir ölçüm silindirine ekleyin, ardından işarete kadar damıtılmış su ekleyin 1250 ml ve çözeltiyi nazikçe karıştırın. Çözelti (2-8) °C sıcaklıkta 72 saat saklanabilir.
Bir veya birkaç strip kullanılması durumunda, flakonun içeriğini FSB-T × 25 ile (20-30) s kuvvetlice çalkalayın, gerekli hacimde çözeltiyi (Tablo A.1) bir ölçüm kabına veya silindire alın, gerekli miktarda damıtılmış su ekleyin ve çözeltiyi karıştırın ... Kullanılmayan FSB-T × 25, kitin raf ömrü boyunca (2-8) ° C sıcaklıkta kapalı bir şişede saklanabilir.
6.3 İmmünosorbentin hazırlanması
İmmünosorbent kullanıma hazırdır.
Paketi açın ve gerekli sayıda şeridi çerçeveye takın. Kalan stripleri sıkıca kapatılmış bir torbada kurutucu ile (2-8) °C'de 3 ay saklayın.
6.4 K + AT, K -, RK-1, RR-K2, BRS ve stop reaktifinin hazırlanması
K + AT, K -, RK-1, PP-K2, BRS ve stop reaktifi kullanıma hazırdır.
Dikkat! RK-1 içeren bir şişede çökeltme mümkündür. Analiz için bir süpernatant kullanılmalıdır.
Kullanılmayan RK-1, RR-K2, BRS ve stop reaktifi, flakonlar açıldıktan sonra kitin raf ömrü boyunca (2-8) °C sıcaklıkta kapalı flakonlarda saklanabilir.
K + AT ve K - flakon açıldıktan sonra kalanlar, kitin raf ömrü boyunca (2-8) °C sıcaklıkta kapalı flakonlarda saklanabilir.
6.5 K + AG çözeltisinin hazırlanması
Dikkat! Analiz başlamadan 15 dakika önce K + AG solüsyonunu hazırlayın!
Liyofilize K + AG'yi eski haline getirmek için, şişeyi açmadan önce, şişenin veya mantarın duvarlarına yapışan partikülleri sallamak için hafifçe vurun. Şişeyi açın ve tapayı baş aşağı kuru bir yüzeye yerleştirin. Şişeye 0,8 ml distile su ekleyin. Şişeyi bir tıpa ile kapatın, (18-25) ° C sıcaklıkta 10 dakika inkübe edin ve şişeyi hafifçe eğin ve döndürün, köpük oluşumunu önleyerek içeriğini tamamen eriyene kadar karıştırın.
Sulandırılmış K + AG, kapalı bir şişede (2-8) ° С sıcaklıkta bir ay, eksi 20 ° С sıcaklıkta altı ay saklanabilir. Geri kazanılan K + AG'nin bir kerelik donma-çözülmesine izin verilir.
6.6 Çalışma dilüsyonunda Kg-2 solüsyonunun hazırlanması
Kg-2'li şişeden Tablo A.1'de belirtilen hacmi alın ve PP-K2'li şişeye aktarın. Köpük oluşumunu önleyerek şişenin içeriğini iyice karıştırın.
Bir veya daha fazla strip kullanılıyorsa, gerekli miktarda PP-K2 temiz bir şişeye alın, Tablo A.1'e göre Kg-2 ekleyin ve solüsyonu köpük oluşumunu önleyerek karıştırın.
Dikkat!Çalışma dilüsyonunda Kg-2 çözeltisi kullanımdan hemen önce hazırlanır! Çalışma seyreltmesindeki bir Kg-2 çözeltisi, (18-25) ° C sıcaklıkta 15 dakika saklanabilir. Yalnızca yeni reaktif banyosu ve yeni uçlar kullanın!
Kg-2'nin geri kalanı kitin raf ömrü boyunca (2-8) °C sıcaklıkta kapalı bir flakonda saklanabilir.
6.7 Substratın çalışma solüsyonunun hazırlanması
TMB kromojen içeren flakon kullanımdan önce (37 ± 1) C'de ısıtılmalıdır.° Kristaller tamamen çözülene kadar.
TMB kromojen içeren flakondan Tablo A.1'de belirtilen hacmi alın ve BRS içeren flakona aktarın. Köpük oluşumunu önleyerek şişenin içeriğini iyice karıştırın.
Bir veya daha fazla strip kullanılıyorsa, gerekli miktarda BRS'yi temiz bir şişeye alın, Tablo A.1'e göre TMB kromojeni ekleyin ve solüsyonu köpük oluşumunu önleyerek karıştırın.
Dikkat! Alt tabakanın çalışma solüsyonunu kullanmadan hemen önce karanlık bir yerde hazırlayın! Çözelti karanlık bir yerde (18-25) °C sıcaklıkta 20 dakika saklanabilir.
Solüsyon ışıktan ve metaller veya metal iyonları ile temastan korunmalıdır. Substrat solüsyonu kullanımdan önce renksiz olmalıdır. Reaksiyon sırasında substrat çözeltisi ile temas edecek bulaşıklar sentetik deterjan kullanılmadan yıkanmalıdır. Yalnızca yeni reaktif banyosu ve yeni uçlar kullanın!
TMB kromojeninin geri kalanı, kitin raf ömrü boyunca (2-8) ° C sıcaklıkta kapalı bir flakonda saklanabilir.
7 Plaka yıkama için gereklilikler
Yıkamanın tüm aşamalarında, tüm kuyuların doldurulmasını ve sıvının bunlardan tamamen çıkarılmasını (aspirasyonunu) kontrol etmek gerekir;
Her yıkamada (kuyu başına 0,30-0,35 mi), bitişik kuyulardan sıvı taşması ve taşması olmadan tüm kuyuları ağzına kadar bir solüsyonla doldurmak gerekir;
Plaka yıkama solüsyonu ile doldurulan kuyucukların 30 saniye süreyle inkübe edilmesi gerekir;
Her aspirasyonda, bir polietilen levha üzerine serilmiş filtre kağıdına birkaç kez katlanmış filtre kağıdına ters konumda şeritlerle çerçeveye vurarak kuyulardan kalan sıvıyı dikkatlice çıkarın;
Kötü plaka durulama yanlış sonuçlara neden olur.
8 Analiz
8.1 Plakanın herhangi iki kuyusuna ekleyin 0.07 ml(70 ul) K + AT, diğer iki delikte - her biri 0.07 ml(70 ul) K + AG, diğer üç delikte - her biri 0.07 ml(70 ul) İLE - .
Dikkat! ELISA'yı bir şeride ayarlarken, K - için iki kuyu, K + AT için bir kuyu ve K + AG için bir kuyu kullanılmasına izin verilir.
Plakanın kalan kuyularına ekleyin 0.07 ml(70 µl) insan kan serumu (plazma) üzerinde çalışılan numuneler.
Dikkat! Her numune tek kullanımlık bir uçla alınmalıdır!
8.2 Plakanın tüm kuyularında kontrol örnekleri ve test serumu (plazma) kan örneklerinin üstünde hemen tarafından yatırılan 0,05 ml(50 ul) RC-1... Plakanın kenarlarına hafifçe vurarak kuyuların içeriğini karıştırın.
8.3 (37 ± 1) ° İçinden 60 dakika.
Dikkat!(1-2) inkübasyonun bitiminden dakika önce, çalışma dilüsyonunda bir Kg-2 solüsyonu hazırlayın (bölüm 6.6).
8.4 Bir yıkayıcı kullanarak kuyuların içeriğini çıkarın, ardından plakanın kuyularını plakayı yıkamak için bir solüsyonla durulayın (bölüm 6.2) Yedi kere.
8.5 Plakanın tüm kuyularına ekleyin 0.15 ml(150 ul) solüsyon kg-2çalışan üremede (p 6.6).
8.6 Plakayı folyo veya bir kapakla örtün ve bir sıcaklıkta bir termostatta inkübe edin. (37 ± 1) ° İçinden 10 dk.
8.7 Bir yıkayıcı kullanarak plaka kuyularının içeriğini çıkarın, ardından plaka kuyularını plaka yıkama solüsyonuyla durulayın (bölüm 6.2) Yedi kere.
8.8 Plakanın tüm kuyularına ekleyin 0.15 ml(150 ul) substratın çalışma çözümü(madde 6.7).
Substratın çalışan bir solüsyonunu hazırlarken (madde 6.7) F TMB kromojenli cila, kullanımdan önce (3-5) dakika (37 °C sıcaklıkta) ısıtılmalıdır.± 1) °C'de kristaller tamamen eriyene kadar.
8.9 Plakayı folyo veya bir kapakla örtün ve bir sıcaklıkta bir termostatta inkübe edin. (37 ± 1) ° İLE için karanlık bir yerde 15 dakika.
Dikkat! HIV-1 ve/veya HIV-2 ve/veya HIV-1 p24 antijenine karşı antikorlar içeren serum örneklerinin bulunduğu kuyularda inkübasyon sonunda solüsyonun rengi renksizden maviye değişen yoğunlukta değişecektir. test serum örneğindeki antikor ve/veya antijen konsantrasyonu.
8.10 Tüm kuyulara ekleyerek peroksidaz reaksiyonunu durdurun 0,05 ml(50 ul) reaktifi durdur.
Dikkat! HIV-1 ve/veya HIV-2 ve/veya HIV-1 p24 antijenine karşı antikorlar içeren serum numunelerinin bulunduğu kuyularda, solüsyonun rengi değişen yoğunlukta maviden sarıya değişecektir.
8.11 Reaksiyonun durdurulmasından en geç (1-2) dakika sonra, kuyulardaki OD'yi bir dalga boyunda tek dalga boyu modunda belirleyin 450 nm.
9 Analiz sonuçlarının işlenmesi
9.2 Sonuçları yalnızca şu durumlarda göz önünde bulundurun:
Opsr K - değeri 0,2 OE'yi geçmez;
OD K'nin her bir değeri - ODsr K'den %30'dan fazla sapmamalıdır. OP K -'nin üç değerinden biri bu sınırı aşarsa, OPsr K - hesaplamasından çıkarılmalıdır. OD K'nin üç değerinden ikisi - bu sınırın ötesine geçerse, analiz yeni kitin reaktifleri üzerinde tekrarlanmalıdır;
Opsr K + AT değeri 1.0 OE'den fazladır;
Opsr K + AG'nin değeri 1.0 OU'dan fazladır.
9.3 Yukarıdaki koşullar karşılanırsa, formül (1)'e göre kritik değeri (OPcrit.), OE'yi hesaplayın:
OPcrit. = OPsr K - + 0,14 (1).
10 Analitik ve teşhis performansı
Duyarlılık reaktif kiti ELISA-HIV 1,2 AGAT p24 antijeni HIV-1'in tespiti için -
özgüllük reaktif kiti ELISA-HIV 1,2 AGAT- %100 Standart AT (-) HIV. İnsan immün yetmezlik virüsü tip 1 ve 2'ye (HIV-1,2) ve HIV-1 antijenine (p24) karşı antikorlar içermeyen standart serum paneli OSO42-28-214-02P.Kat # INS-20. CJSC MBS.
11 Kit yayın formu
11.1 Set, beş yapılandırma seçeneğinde mevcuttur:
1 set 1P - manuel analiz. Kit, katlanabilir bir plaka üzerinde 12 ELISA çalışması için tasarlanmıştır: 1 set - 1 şerit (8 delik). Toplamda - kontrol numuneleri dahil 96 tespit;
2 set 2M - manuel analiz. Kit, monolitik plakalarda 2 set ELISA gerçekleştirmek için tasarlanmıştır: 1 ayar - 1 plaka. Toplamda - kontrol numuneleri dahil 192 tespit;
3 2P ayarla- analizin elle yapılması. Set taşımak için tasarlanmıştır 24 performans 2 için ELISA katlanabilir x plakalar: 1 takım - 1 şerit (8 delik). Toplam - 192 tanım kontrol örnekleri dahil;
4 set А2М - otomatik bir analizörde analiz. Kit, monolitik plakalarda 2 set ELISA gerçekleştirmek için tasarlanmıştır: 1 ayar - 1 plaka. Toplamda - kontrol numuneleri dahil 192 tespit;
5 set A2P - otomatik analizörde analiz. Kit, 2 katlanabilir plaka üzerinde 24 ELISA çalışması için tasarlanmıştır: 1 set - 1 şerit (8 kuyu). Toplamda - kontrol numuneleri dahil 192 tespit.
12 Kitin saklama ve kullanım koşulları
12.1 Kit, tüm raf ömrü boyunca (2-8) ° C sıcaklıkta nem ve ışıktan korunan temiz bir odada saklanmalıdır. Kit bileşenlerini dondurmayın.
12.2 Güvenilir sonuçlar elde etmek için kitin kullanım talimatlarına sıkı sıkıya bağlı kalmak gerekir.
12.3 Kitin son kullanma tarihi - 12 ay.
Ek Bölüm A
Tablo A.1 - ELISA kiti için reaktiflerin tüketimi
|
reaktif, ml |
Kullanılan şerit sayısı, adet. |
|||||||||||
|
Plaka yıkama solüsyonunun hazırlanması |
||||||||||||
|
FSB-T × 25 |
||||||||||||
|
damıtılmış Su |
||||||||||||
|
Çalışma dilüsyonunda Kg-2 solüsyonunun hazırlanması |
||||||||||||
|
RR-K2 |
||||||||||||
|
Substratın çalışma çözeltisinin hazırlanması |
||||||||||||
|
kromojen TMB |
||||||||||||
bibliyografya
|
sıhhi kurallar |
Belarus Cumhuriyeti Sağlık Bakanlığı'nın 16 Aralık 1998 tarih ve 351 sayılı emri HIV / AIDS ile ilgili konuları düzenleyen departman düzenlemelerinin revizyonu hakkında |
|
|
Belarus Cumhuriyeti Sağlık Bakanlığı'nın 25 Kasım 2002 tarihli ve 165 sayılı Emri Sağlık kuruluşları tarafından yapılan dezenfeksiyon ve sterilizasyon hakkında |
||
|
Belarus Cumhuriyeti Sağlık Bakanlığı'nın 28 Nisan 2010 Tarihli 47 Sayılı Kararı Belarus Cumhuriyeti Sağlık Bakanlığı'nın bazı kararnamelerinin geçersiz kılınması ve işçilerin zorunlu tıbbi muayenelerinin yapılması prosedürüne ilişkin Talimatın onaylanması üzerine |
||
Benzersiz kayıt defteri giriş numarası
Tıbbi cihaz kayıt numarası
FSR 2011/10182
Tıbbi bir cihazın devlet tescil tarihi
Tıbbi cihaz adı
Tip 1 ve 2 (HIV-1 ve HIV-2), HIV-1 grup O ve HIV-1 p24 insan immün yetmezlik virüslerine karşı antikorları saptamak için bir dizi reaktif "MilaLab-ELISA-HIV-AGAT" enzime bağlı immünosorbent testi TU 9398 -187-05941003-2017'ye göre antijen
şunlardan oluşur: - İmmünosorbent - oyuklarında yapay antijenlerin emildiği şeritlere (veya oyuklara) bir polistiren 96 kuyulu katlanabilir plaka - gp160, gp41, p31 HIV-1, gp41 HIV-1 grup O, gp36 HIV- 2 ve HIV-1 p24 antijenine karşı antikorlar: set 1 (1 plaka), set 2 (2 plaka), set 3 (5 plaka), - Konjugat-1: set 1 (1 fl. 1.2 ml), set 2 (1 fl. 1,2 ml), set 3 (1 şişe 3,6 ml veya 3 şişe 1,2 ml), - Konjugat-2: set 1 (1 şişe 2,0 ml), set 2 (1 şişe 2,0 ml), set 3 (1 şişe) 4.0 ml veya 2.0 ml'lik 2 şişe), - RRK-1 - Konjugat-1 için seyreltme solüsyonu: set 1 (1 şişe 12,0 ml), set 2 (1 şişe 12,0 ml), set 3 (her biri 12,0 ml'lik 3 şişe) , - RRK-2 - Konjugat-2 için seyreltme solüsyonu: set 1 (1 şişe 20.0 ml), set 2 (1 şişe 20.0 ml), set 3 (2 şişe 20.0 ml), - K + AT - kontrol pozitif numune içeren HIV antikorları: set 1 (1 flakon 2.0 ml), set 2 (1 flakon 2.0 ml), set 3 (1 flakon 4.0 ml veya 2 flakon 2.0 ml), - K + AG - con Yapay HIV-1 p24 antijeni içeren trol pozitif numune: set 1 (1 şişe. 2,0 ml), set 2 (1 şişe 2,0 ml), set 3 (1 şişe 4,0 ml veya 2 şişe her biri 2,0 ml), - К- - kontrol negatif numune: set 1 ( 1 şişe 2,5 ml), set 2 (1 şişe 2.5 ml), set 3 (1 şişe 5.0 ml veya her biri 2.5 ml 2 şişe), - PR - yıkama solüsyonu: set 1 (1 şişe 50.0 ml), set 2 (1 şişe 120.0 ml), set 3 (2 şişe) 120.0 ml), - Durdurma reaktifi: set 1 (1 şişe 25,0 ml ), set 2 (25.0 ml'lik 2 şişe), set 3 (50.0 ml'lik 2 şişe veya 25,0 ml'lik 4 şişe), - SB - substrat tamponu solüsyon: set 1 (1 flakon 25 , 0 mi), set 2 (1 flakon 25,0 mi), set 3 (2 flakon 50,0 mi veya 3 flakon 25,0 mi), - TMB - 3,3", 5.5"-tetrametilbenzidin içeren çözelti : kit 1 (1 flakon 2.5 ml), kit 2 (1 flakon 2.5 ml), kit 3 (2 flakon 3.5 ml veya 3 flakon 2.5 ml). Aksesuarlar: - 96 oyuklu polistiren plakalar için kapaklar: set 1 (1 adet), Set 2 (2 adet), Set 3 (5 adet) Veya - ELISA plakaları için koruyucu filmler: set 1 (2 adet), set 2 (4 adet), set 3 (10 adet), - tek kullanımlık uçlar: set 1 (16 adet), set 2 (32 adet), set 3 (80 adet), - sıvı reaktifler için plastik tepsiler : 1. takım (2 adet), 2. takım (4 adet), 3. takım (10 adet), - Kilitli plastik poşetler: 1. takım (1 adet), 2. takım (2 adet), takım 3 (3 adet).
Kuruluşun adı - tıbbi cihazın başvuru sahibi
Tıbbi cihazın başvuran kuruluşunun yeri
Tıbbi cihaz için başvuran kuruluşun yasal adresi
603014, Rusya, Nizhny Novgorod, st. Kominterna, 47
Tıbbi cihaz üreticisinin veya tıbbi cihaz üreticisinin adı
OOO "NPO" Teşhis Sistemleri "
Bir tıbbi cihazın veya organizasyonun kuruluş-üreticisinin konumu - tıbbi cihaz üreticisi
603093, Rusya, Nizhny Novgorod, st. Yabloneva, 22, Posta Kutusu 69
Tıbbi cihaz üreticisinin veya tıbbi cihaz üreticisinin yasal adresi
HIV enfeksiyonunun zamanında teşhisi son derece önemli bir önlem haline geliyor, çünkü tedaviye daha erken başlanması, hastalığın daha da gelişmesini büyük ölçüde önceden belirleyebilir ve hastanın ömrünü uzatabilir. Son yıllarda bu korkunç hastalığın tespitinde önemli ilerlemeler kaydedildi: eski test sistemleri daha gelişmiş sistemlerle değiştiriliyor, muayene yöntemleri daha erişilebilir hale geliyor ve doğrulukları önemli ölçüde artıyor.
Bu yazıda, bu sorunun zamanında tedavisi ve hasta kişinin normal yaşam kalitesinin korunması için bilinmesi yararlı olan HIV enfeksiyonu teşhisi için modern yöntemler hakkında konuşacağız.
HIV tanı teknikleri
Rusya'da HIV enfeksiyonunun teşhisi için iki seviye içeren standart bir prosedür gerçekleştirilir:
- ELISA test sistemi (tarama analizi);
- bağışıklık lekeleme (IB).
Ayrıca, teşhis için başka yöntemler de kullanılabilir:
- ekspres testler.
ELISA test sistemleri
Teşhisin ilk aşamasında, HIV enfeksiyonunu tespit etmek için, enfeksiyona yanıt olarak vücutta üretilen spesifik antikorları yakalayan laboratuvarlarda oluşturulan HIV proteinlerine dayanan bir tarama testi (ELISA) kullanılır. Test sisteminin reaktifleri (enzimleri) ile etkileşimlerinden sonra göstergenin rengi değişir. Ayrıca, bu renk değişiklikleri, yapılan analizin sonucunu belirleyen özel ekipman üzerinde işlenir.
Bu tür ELISA testleri, HIV enfeksiyonunun ortaya çıkmasından sonraki birkaç hafta içinde sonuçları gösterebilir. Bu analiz, bir virüsün varlığını tespit etmez, ancak ona karşı antikor üretimini tespit eder. Bazen insan vücudunda HIV'e karşı antikor üretimi enfeksiyondan 2 hafta sonra başlar, ancak çoğu insanda daha sonraki bir tarihte, yani 3-6 hafta sonra geliştirilir.
Değişken hassasiyete sahip dört nesil ELISA testi vardır. Son yıllarda, sentetik peptitler veya rekombinant proteinler temelinde oluşturulan ve daha fazla özgüllüğe ve doğruluğa sahip olan III ve IV neslinin test sistemleri daha sık kullanılmaya başlandı. HIV enfeksiyonunu teşhis etmek, HIV prevalansını izlemek ve bağışlanan kanları tararken güvenliği sağlamak için kullanılabilirler. III ve IV nesil ELISA test sistemlerinin doğruluğu %93-99'dur (Batı Avrupa'da üretilen daha hassas testler %99'dur).
ELISA testinin yapılabilmesi için hastanın damarından 5 ml kan alınır. Son yemek ile test (genellikle sabahları aç karnına yapılır) arasında en az 8 saat geçmelidir. Böyle bir testin, iddia edilen enfeksiyondan en geç 3 hafta sonra yapılması önerilir (örneğin, yeni bir cinsel partnerle korunmasız cinsel ilişkiden sonra).
ELISA testinin sonuçları 2-10 gün içinde elde edilir:
- olumsuz sonuç: HIV enfeksiyonunun olmadığını gösterir ve bir uzmana sevk edilmesini gerektirmez;
- yanlış negatif sonuç: enfeksiyonun erken evrelerinde (3 haftaya kadar), AIDS'in geç evrelerinde, bağışıklığın belirgin şekilde baskılanması ve uygun olmayan kan hazırlığı ile gözlenebilir;
- yanlış pozitif sonuç: bazı hastalıklarda ve uygun olmayan kan hazırlığı ile görülebilir;
- pozitif sonuç: HIV enfeksiyonunu gösterir, IB'yi ve hastanın AIDS merkezindeki bir uzmanla temasa geçmesini gerektirir.
Bir ELISA testi neden yanlış pozitif sonuçlar verebilir?
HIV için bir ELISA testinin yanlış pozitif sonuçları, yanlış kan işleme ile veya aşağıdaki koşullara ve hastalıklara sahip hastalarda gözlemlenebilir:
- multipil myeloma;
- Epstein-Barr virüsünün neden olduğu bulaşıcı hastalıklar;
- sonrası durum;
- otoimmün hastalıklar;
- hamileliğin arka planına karşı;
- aşı sonrası durum.
Yukarıda açıklanan nedenlerle, üretimi HIV enfeksiyonu tarafından tetiklenmeyen kanda spesifik olmayan çapraz reaktif antikorlar bulunabilir.
Son yıllarda, daha hassas peptit ve rekombinant proteinler (in vitro genetik mühendisliği kullanılarak sentezlenirler) içeren III ve IV neslinin test sistemlerinin kullanılması nedeniyle yanlış pozitif sonuçların sıklığı önemli ölçüde azalmıştır. Bu tür ELISA testlerinin kullanımının başlamasından sonra, yanlış pozitif sonuçların sıklığı önemli ölçüde azalmıştır ve yaklaşık %0.02-0.5'tir.
Yanlış bir pozitif bulmak, bir kişinin HIV ile enfekte olduğu anlamına gelmez. Bu gibi durumlarda, WHO başka bir ELISA testi (zorunlu IV nesil) önerir.
Hastanın kanı "tekrar" olarak işaretlenmiş bir referans veya tahkim laboratuvarına gönderilir ve IV nesil ELISA test sisteminde test edilir. Yeni analizin sonucu negatifse, ilk sonuç hatalı (yanlış pozitif) olarak kabul edilir ve IB yapılmaz. İkinci test sırasında pozitif veya şüpheli bir sonuç olması durumunda, HIV enfeksiyonunu doğrulamak veya reddetmek için hastaya 4-6 hafta içinde IB atanmalıdır.
Bağışıklık lekelenmesi
HIV enfeksiyonunun kesin tanısı ancak pozitif bir immün lekeleme (IB) sonucu elde edildikten sonra yapılabilir. Uygulanması için, üzerine viral proteinlerin uygulandığı bir nitroselüloz şerit kullanılır.
IB için kan örneklemesi bir damardan yapılır. Daha sonra özel işleme tabi tutulur ve serumunda bulunan proteinler, yüklerine ve moleküler ağırlıklarına göre özel bir jel içinde ayrılır (manipülasyon, bir elektrik alanının etkisi altında özel ekipman üzerinde gerçekleştirilir). Kan serumu jeline bir nitroselüloz şerit uygulanır ve özel bir haznede lekeleme ("blotlama") yapılır. Şerit işlenir ve kullanılan malzemeler HIV'e karşı antikorlar içeriyorsa, bunlar IB üzerindeki antijenik bantlara bağlanır ve çizgiler olarak görünür.
Aşağıdaki durumlarda IB pozitif kabul edilir:
- Amerikan CDC kriterlerine göre - şerit üzerinde iki veya üç satır gp41, p24, gp120 / gp160 vardır;
- Amerikan FDA kriterlerine göre - şeritte iki satır p24, p31 ve bir satır gp41 veya gp120 / gp160 vardır.
Vakaların %99,9'unda pozitif bir IB sonucu HIV enfeksiyonunu gösterir.
Çizgilerin yokluğunda, IB negatiftir.
gp160, gp120 ve gp41- IB ile hatların tanımlanmasında şüphelidir. Böyle bir sonuç şu durumlarda tespit edilebilir:
- onkolojik hastalıklar;
- gebelik;
- sık kan nakli.
Bu gibi durumlarda başka bir firmadan alınan kit kullanılarak tekrar muayene yapılması önerilir. Ek IB'den sonra sonuç şüpheli kalırsa, altı ay boyunca gözlem gereklidir (IB her 3 ayda bir gerçekleştirilir).
Polimeraz zincirleme reaksiyonu
Bir PCR testi, virüsün RNA'sını tespit edebilir. Duyarlılığı oldukça yüksektir ve HIV enfeksiyonunu enfeksiyondan 10 gün sonra tespit etmenizi sağlar. Bazı durumlarda, yüksek duyarlılığı diğer enfeksiyonlara karşı antikorlara da tepki gösterebildiğinden, PCR yanlış pozitif sonuçlar verebilir.
Bu teşhis tekniği pahalıdır ve özel ekipman ve yüksek nitelikli uzmanlar gerektirir. Bu nedenler, popülasyonun toplu testi sırasında bunu gerçekleştirmeyi mümkün kılmaz.
PCR bu gibi durumlarda kullanılır:
- HIV bulaşmış annelerden doğan yenidoğanlarda HIV'i tespit etmek;
- "pencere döneminde" veya şüpheli IB durumunda HIV'i tespit etmek;
- kandaki HIV konsantrasyonunu kontrol etmek;
- donör kan çalışması için.
Sadece PCR testi ile HIV tanısı konmaz, tartışmalı durumları çözmek için ek bir tanı yöntemi olarak gerçekleştirilir.
ekspres yöntemler
HIV teşhisindeki yeniliklerden biri, sonuçları 10-15 dakika içinde değerlendirilebilen hızlı testler haline geldi. En etkili ve doğru sonuçlar, kılcal akış prensibine dayalı immünokromatografik testler ile elde edilir. Üzerine kan veya araştırılan diğer sıvıların (tükürük, idrar) uygulandığı özel şeritlerdir. HIV'e karşı antikorların varlığında, 10-15 dakika sonra testte renkli bir şerit ve bir kontrol şeridi belirir - pozitif bir sonuç. Sonuç negatifse, yalnızca kontrol şeridi görünür.
ELISA testlerinden sonra olduğu gibi, hızlı testlerin sonuçları bir IB analizi ile doğrulanmalıdır. Ancak o zaman HIV enfeksiyonu tanısı konulabilir.
Evde test için ekspres kitler vardır. OraSure Technologies1 testi (ABD) FDA onaylıdır, reçetesiz satılır ve HIV'i saptamak için kullanılabilir. Testten sonra, pozitif bir sonuç olması durumunda, hastanın tanıyı doğrulamak için uzmanlaşmış bir merkezde muayene edilmesi önerilir.
Evde kullanım için yapılan testlerin geri kalanı henüz FDA tarafından onaylanmamıştır ve oldukça şüpheli olabilir.
Hızlı testlerin doğruluk açısından IV nesil ELISA testlerinden daha düşük olmasına rağmen, popülasyonun ek testleri için yaygın olarak kullanılırlar.
HIV enfeksiyonunu tespit etmek için herhangi bir klinikte, merkez ilçe hastanesinde veya uzmanlaşmış AIDS merkezlerinde test yaptırabilirsiniz. Rusya topraklarında kesinlikle gizli veya isimsiz olarak tutulurlar. Her hasta, testten önce veya sonra tıbbi veya psikolojik tavsiye almayı bekleyebilir. HIV testleri için sadece ticari hastanelerde ödeme yapmanız gerekecek ve devlet polikliniklerinde ve hastanelerde ücretsiz olarak yapılıyor.
HIV ile nasıl enfekte olabileceğinizi ve HIV ile enfekte olma olasılıkları hakkında hangi efsanelerin var olduğunu okuyun.
Yükleniyor ...