Vektorske najbolje upute za ifa setove. Helminti su najbolji ako mogu. Numeričke vrijednosti naslova

Broj određivanja 96 (48 u duplikatu)
Format radnog tableta: ogoljen 12x8, razbijanje 1 rupe.
Osetljivost: 1,5 U / ml.
Područje mjerenja: 0-400 U / ml.
Zapremina uzorka za ispitivanje nije veća od 25 μl.
Standardizacija uvjeta za provođenje enzimske reakcije s kromogenom u termostatiranoj tresilici na 37 ° C.
Set uključuje:
1. Pločasta ploča 12 x 8 jažica, spremna za upotrebu - 1 kom.
2. Uzorci za kalibraciju spremni za upotrebu (0-400 U / ml) obojeni različitim stepenom intenziteta u zavisnosti od koncentracije-6 bočica.
3. Kontrolni uzorak - 1 boca.
4. Jednokomponentni konjugat, spreman za upotrebu, ne zahtijeva razrjeđivanje - 1 bočica.
5. Rastvor za razblaživanje seruma - 1 bočica.
6. Hromogeni supstrat, jednokomponentni - rastvor tetrametilbezidina plus (TMB +), spreman za upotrebu, ne zahtijeva razrjeđivanje - 1 bočica.
7. Puferski rastvor fosfat -fiziološki rastvor sa dve bočice sa dve boce.
8. Zaustavite reagens, spreman za upotrebu - 1 bočica.
9. Film za zatvaranje tablete - 1 kom.
10. Šablona za izradu kalibracionog grafikona - 1 kom.
11. Kupka sa reagensom - 2 kom.
12. Vrhovi pipeta za 5-200 µl - 16 kom.
Pakovanje tableta - vrećica od tikovine sa zatvaračem.
Stabilnost radne otopine FST-T najmanje 5 dana na temperaturi od +2 ... 8 ° C.
Čuvajte komplet na temperaturi od +2 ... 8 ° C. Rok upotrebe - 1 godina od datuma proizvodnje.
Registrovan kod Roszdravnadzora.

Liječenje helmintoze kod djece izuzetno je važno, jer posljedice toga mogu biti zaostajanje u razvoju fizičkog i mentalnog, patoloških procesa unutarnjih organa i sistema, pa čak i smrt. Osim toga, helmintičke infestacije vrlo su zarazne, zbog čega se tako lako šire u predškolskim i školskim ustanovama. Na osnovu ovoga jasno je koliko je važno pravovremeno liječenje helmintoze kod djece.

Prvi znakovi helminta kod djece

Crvi su oportunistički uzročnici ljudskog tijela, crvi kojima je osoba konačni vlasnik. Osim toga, u ovom slučaju dob vlasnika ne igra nikakvu ulogu, različite vrste helmintijaza mogu se primijetiti i kod djece i kod odraslih pacijenata.

Zašto je helminthiasis opasan za dijete?

Kao što je ranije spomenuto, helminti u djece mogu uzrokovati ozbiljne bolesti i patologije, uslijed čega se usporava mentalni i fizički razvoj. Moguće komplikacije za svaku vrstu helmintoze mogu biti potpuno različite, na primjer:

Stoga dječje helminthiaze zahtijevaju još veću pažnju, pravovremenu medicinsku pomoć, dugotrajno praćenje stručnjaka i prevenciju.

Glavni simptomi kod djece

Simptomi helminthiasis kod djeteta mogu biti različiti, ovisno o vrsti crva:

1. Okrugli crvi odmah se manifestiraju kao alergijska reakcija, groznica i mučnina kod djeteta. Prvi nastupi su obično svijetli, ali brzo nestaju. Nakon toga mogu se primijetiti sljedeći simptomi:

  • kolike i disbioza i novorođenčad;
  • u beba mlađih od 1 godine, bolovi u pupku, problemi sa stolicom, alergije i dijateza;
  • starija djeca imaju problema sa spavanjem, nemirno ponašanje, noćne more;
  • djecu od 3-7 godina karakteriziraju mučnina, groznica, kašalj i bol u trbuhu, osip.

2. Enterobijaza, čiji su uzročnici pinwormi, manifestira se kao izbrisana klinička slika. I tek nakon mjesec dana mogu se primijetiti sljedeći simptomi:

  • u novorođenčadi, upala, oticanje i crvenilo anusa, odbijanje jela, plač noću, nedostatak apetita;
  • djecu mlađu od godinu dana karakteriziraju isti simptomi, kao i jak svrbež anusa noću (od 23.00 do 1.00), djevojčice pate od upale genitalija;
  • kod starije djece, bolovi u trbuhu blizu pupka, poremećaj sna, svrbež u stražnjici.

3. Simptomi toksokaroze teško se prepoznaju, osim niske tjelesne temperature i alergijskih reakcija (osip, osip, svrbež i oteklina). Nakon infekcije može doći do kašlja, koji dodatno uzrokuje upalu pluća ili bronhitis, posebno kod najmanjih pacijenata.

Trihineloza sugerira blage znakove kod novorođenčadi, inače se primjećuju sljedeći znakovi:

  • grozničavo stanje;
  • oticanje lica;
  • bol u mišićima;
  • alergijske reakcije;
  • djeca 5 godina i starija mogu imati povećane krajnike, slezenu, osip i grlobolju.

Najteže je dijagnosticirati simptome helminthiasisa u djece starosti 2 godine i mlađe, jer dijete ne može objasniti svoje ponašanje i stanje. Stoga je za bilo koje atipične manifestacije i ponašanje djeteta bolje pokazati liječniku.

Šta je prvo što treba učiniti?

Crvi koji su pronađeni u stolici djeteta najvažniji su simptom bolesti, nakon čega morate odmah potražiti pomoć liječnika. Nijedno liječenje helminta ne može biti uspješno bez pravilno provedene dijagnoze. Metode istraživanja u ovom slučaju trebaju biti složene, uključujući sljedeće postupke:

  • uzimanje struganja iz anusa;
  • proučavanje djetetovog izmeta;
  • test krvi;
  • biopsija mišića u rijetkim slučajevima sa sumnjom na trihinelozu;
  • serološki test krvi;
  • RTG, ultrazvuk, tomografija;
  • ELISA testom za otkrivanje antitijela u krvi.

Metode liječenja

Liječenje helmintoze kod djece treba biti sveobuhvatno, dobro promišljeno, propisano s preciznim dozama i učestalošću primjene lijeka. To je zbog činjenice da se za anthelmintički učinak koriste lijekovi s otrovnim komponentama, što znači da neracionalna upotreba može dovesti do nuspojava. Osim toga, kod kuće je prikladno alternativno liječenje ljekovitim biljem.

Narodni lijekovi

Savremeni tretman narodnih lijekova za takve bolesti kod djece uključuje 4 efikasna načina:

O bilo kojoj metodi kućnog liječenja potrebno je unaprijed razgovarati sa svojim liječnikom. Mora se zapamtiti da postoje kontraindikacije za bilje i narodne lijekove u obliku individualne netolerancije.

Liječenje lijekovima

  • Kod enterobijaze i askarijeze obično se koriste lijekovi poput Pirantela i Mebendazola. Uzimanje Pirantela prikladno je u dozi od 10 mg tvari za svaki kilogram težine od pinworma i 5 mg / kg od ascarisa. Mebendazol se uzima dva puta dnevno po 50 mg za djecu od 2-3 godine tri dana zaredom, dva puta za 100 mg tri dana zaredom za djecu stariju od 3 godine, nakon 3 sedmice terapija se ponavlja.
  • Uz toksokarijazu, Mebendazol se propisuje u različitim dozama - za djecu od 2 godine i starije, dva puta dnevno, 100 mg 14-10 dana.
  • Liječenje trihineloze prihvaća Mebendazol 5 mg po kilogramu težine, nakon čega se doza dijeli u tri doze dnevno. Tok tretmana je 1 sedmica pod strogim nadzorom ljekara.

Prevencija helminthiasis

  • pranje ruku neposredno nakon kontakta sa životinjama, nakon ulice i pješčanika, odlaska u toalet i prije jela;
  • jedite samo čistu hranu;
  • pravilno provedena toplinska obrada mesa i ribljih proizvoda;
  • pijenje prokuvane vode;
  • poštivanje lične higijene i sanitarnih uslova;
  • redovno uklanjanje glista od kućnih ljubimaca;
  • provođenje preventivnog uklanjanja glista kod djece od 2 godine i starije.

Krvni test na toksokare

Značajke infekcije ljudi toksokarijazom kod ljudi

Nosioci infekcije su psi, rjeđe mačke. Jaja toksokare se distribuiraju izmetom pasa lutalica. Jednom na tlu, u vodi ili zadržavajući se na krznu životinje, unose se u zdravo tijelo na različite načine.

Reakcija na upad

Iz medicinske statistike je poznato da je manje vjerojatno da će odrasli oboljeti od toksokaroze, osim ako je njihovo zanimanje ugroženo. Mnogo je veća vjerojatnost da će djeca zaraziti infekciju.

Najčešći simptomi toksokaroze:

  • Groznica bez ikakvih bolesti.
  • Povećanje temperature.
  • Pojačavanje i smanjenje boli u glavi ili trbuhu.
  • Pojava osipa na koži koji se ne može ukloniti.
  • Natečenost lica.
  • Opšta analiza otkrila je povećanje nivoa eozinofila u krvi.

Za točnu dijagnozu propisan je imunološki test na toksokare. Prisutnost proteinskih spojeva u krvi, koji nose genetske informacije o helmintima (antigenima), izaziva imunitet na stvaranje antitijela klase igg. Ovo je prvi znak infekcije toksokarijazom.

Preliminarna dijagnostika

Početna faza istorije pacijenta je kolektivna. Prije slanja pacijenta na testiranje krvi na toksokarijazu, potrebno je proučiti povijest bolesti i napraviti preliminarni pregled.

Primarna dijagnoza:

  • Proučavanje otežavajućih okolnosti koje bi mogle izazvati infekciju - specifičan rad sa životinjama ili prisustvo kućnog ljubimca, iskopavanje u potencijalno opasnim područjima, djeca koja se igraju na mjestima gdje se šetaju psi.
  • Fizikalni pregled pacijenta. Pregled kože radi potkožne invazije toksokarima, kapcima i očnim jabučicama, palpacija.
  • Zakazivanje detaljnog testa krvi. Tijekom infekcije toksokarijazom karakteristično je značajno povećanje nekih pokazatelja - eozinofila (70-80%), limfocita, ESR. Dok nivo hemoglobina značajno opada.
  • Uzimanje uzoraka jetre. Kod teške invazije utječe opterećenje jetre, što se očituje snažnim skokom bilirubina.

Nemoguće je dobiti direktnu potvrdu invazije toksokara rutinskim testovima (krv, koprogram, bris). Također, duodenalna studija je neinformativna, jer se larve teško migriraju.

Nakon dobivanja rezultata preliminarnog pregleda, koji ukazuje na moguću infekciju toksokarima, i razlikovanja navodne dijagnoze od bolesti sa sličnim simptomima, pacijentu se dodjeljuje ELISA test za toksokarijazu.

Povezani imunosorbentni test

Glavni cilj ove studije je potvrditi prisustvo toksokara u ljudskom tijelu. Antitijela na ove helminte nalaze se u krvnoj plazmi, pa se uzimaju iz vene.

Analiza za toksokare zahtijeva određenu pripremu:

  • Ne jedite masnu ili tešku hranu dan prije zahvata.
  • Nemojte piti zaslađena pića, gazirana pića i alkoholna pića tokom dana prije posjeta laboratoriji.
  • Uzimajte uzorke natašte.
  • Nemojte uzimati lijekove prethodnog dana i dana za koji je zakazan test.

Treba napomenuti da na ovaj vrlo informativan način otkrivanja invazije mogu utjecati neke okolnosti. Lažno pozitivan rezultat može se dogoditi ako pacijent ima:

  • Onkološke bolesti.
  • Plućna tuberkuloza.
  • Teške patologije jetre.
  • Autoimuni sindrom.
  • Antifosfolipidni sindrom.
  • Trudnoća.

U ovom slučaju neće biti moguće dobiti 100% potvrdnu analizu, jer u tim okolnostima obrambeni sistem proizvodi i imunoglobuline (antitijela). Potrebno je provesti dodatnu dijagnostiku i razlikovati toksokarijazu od navedenih čimbenika.

Koncentracija imunoglobulina (titar) klase IgG dostiže najveću moguću vrijednost nakon 2-3 mjeseca od početka invazije. Što je infekcija teža, ta je brojka veća.

ELISA rezultati

Da bi se postavila dijagnoza, imunološki test enzima pažljivo se proučava, dobiveni rezultati se uspoređuju s referentnim vrijednostima. Norma je titar antitijela 1: 100 s indeksom pozitivnosti manjim od 0,9.

Numeričke vrijednosti naslova

Dobiveni rezultati mogu biti negativni, pozitivni, slabo pozitivni ili upitni. Broj AT titra ovisi o ozbiljnosti invazije i starosti njenog pojavljivanja.

Dekodiranje analize:

  • AT titar do 1: 100 - rezultat je negativan. U tijelu pacijenta nisu pronađene larve toksokare.
  • AT titar do 1: 400 - rezultat je slabo pozitivan. Pacijent ima slabu invaziju ili se razvija očni oblik toksokaroze. U nekim slučajevima, indikator govori o nedavnoj infekciji.
  • AT titar do 1: 600 - rezultat je pozitivan. Osoba boluje od kliničkog oblika helminthiasis, ako se otkrije, potrebna je hitna terapija.
  • AT titar do 1: 800 - rezultat je pozitivan. Govori o teškoj invaziji progresivne prirode i velikom udjelu vjerojatnosti razvoja patološkog procesa unutarnjih organa.

Uz rijetke iznimke, ELISA studije otkrivaju zanemareni oblik invazije s primjesom helmintijaza različitog podrijetla. U tom slučaju ukupna antitijela mogu biti veća od 1: 800.

Koeficijent pozitivnosti

U enzimski imunosorbentnom testu na toksokarijazu s titrom 1: 400 - 1: 600 radi razlikovanja invazije od nuspojava, dobiveni pokazatelji uspoređuju se s referentnom vrijednošću. Razlika između ovih brojeva obično se naziva indeksom ili koeficijentom pozitivnosti.

Obično, u obliku provedenog ELISA -e, jedan indikator stoji nasuprot drugom. Prva je norma, druga može značiti:

  • Do 0,9 - rezultat je negativan. Nisu pronađene larve toksokare.
  • 0,9-1,1 - rezultat je sumnjiv. U tom slučaju dodjeljuje se ponovljena dijagnostika.
  • 1.1-2.2 - rezultat je slabo pozitivan. Osoba je nosilac sa slabom invazijom.
  • 2.2-4.2 - rezultat je pozitivan. Umjerena toksokaroza razvija se već duže vrijeme.
  • Iznad 4,4 - rezultat ukazuje na vrhunac helmintičke invazije ili nedavnu helminthiasis.

KP s rezultatom 4,4 i otkrivenim povećanjem eozinofilije za 10% može ukazivati ​​na razvoj očnog oblika toksokaroze i prisutnost antitijela na unakrsnu invaziju, ukupno na toksokarijazu.

Imunološki odgovor i optička gustoća antitijela (koeficijent pozitivnosti) ovise o stupnju infekcije toksokarima i njihovoj lokaciji. Najmanji titar i CP indikator dopuštaju nam samo pretpostavku o odsustvu helminta, ali ne i to.

Dostavljene informacije ne mogu poslužiti kao izvor za samodijagnozu ili samoliječenje. ELISA rezultati u kombinaciji s preliminarnim pregledom mogu samo reći stručnjaku o prisutnosti problema. U laboratoriju Invitro dijagnostika krvi provodi se s velikom točnošću, rezultat analize popraćen je komentarima stručnjaka o koeficijentu pozitivnosti. To uvelike pomaže ljekaru da postavi tačniju dijagnozu.


Vodeći ruski proizvođači U segmentu kompleta reagensa za dijagnostiku infekcija: - CJSC Vector -Best, Novosibirsk; - LLC NPO Diagnostic Systems, N. Novgorod; - CJSC "Ecolab", Electrogorsk, Moskovska regija. U oblasti kompleta reagensa za dijagnostiku nezaraznih bolesti i fizioloških stanja:-LLC "Alkor-Bio", Sankt Peterburg; - CJSC "Vector-Best", Novosibirsk; - LLC "Hema-Medica", Moskva. U segmentu reagensa za laboratorijsku dijagnostiku alergija: - LLC "Alkor -Bio", Sankt Peterburg; - CJSC "Vector-Best", Novosibirsk; - LLC NPO Immunotex, Stavropolj. Proizvodnja laboratorijske opreme: - LLC "Pikon, Moskva


Procjena stepena moguće zamjene uvoza nomenklaturom ispitivanja Nomenklatura analita, jedinica Odobreno za upotrebu u RF Proizvedeno u RF Stepen moguće zamjene uvoza Markeri zaraznih bolesti% Markeri neinfektivnih bolesti i pokazatelji fizioloških stanja% Markeri alergije% Ukupno:%


Procena stepena supstitucije uvoza prema obimu tržišta proizvoda za tablete ELISA Segmenti tržišta Obim tržišta u Ruskoj Federaciji, mil. Obim prodaje domaćih proizvođača, milion rub. Udio zamjene uvoza Markeri zaraznih bolesti% Markeri nezaraznih bolesti i pokazatelji fizioloških stanja% Markeri alergije% Oprema 50051% Ukupno:%


Procena stepena supstitucije uvoza prema obimu tržišta proizvoda za imunohemijske metode u celini Segmenti tržišta Obim tržišta u Ruskoj Federaciji, mil. Obim prodaje domaćih proizvođača, milion rub. Udio zamjene uvoza Markeri zaraznih bolesti% Markeri nezaraznih bolesti i pokazatelji fizioloških stanja% Markeri alergije% Oprema% Ukupno:%


Problemi domaćih proizvođača u industriji: ELISA metoda postaje zastarjela. Postoji postepena zamjena domaćih IF-reagensa uvoznim hemiluminescentnim; Postojeći sistem javnih nabavki stimuliše ili kupovinu najjeftinije robe, ili uvoznih proizvoda sa jedinstvenim karakteristikama; Jedan od glavnih razloga nerazvijenosti domaćih proizvođača automatske opreme i lokalizacije proizvodnje uvezenih proizvoda je carinska administrativna barijera; Glavni problem novijeg vremena je kolaps sistema državne registracije novih proizvoda u RZN -u. Dopuštanje novih proizvoda na tržište je praktično prestalo, a oni strani proizvođači koji su se prethodno registrovali na dugačkim listama i dalje imaju prednost u odnosu na domaće; Glavni razlog tehnološkog zaostajanja je nemogućnost sticanja prava na proizvodnju kompatibilnih proizvoda za savremenu opremu; Nizak stupanj konsolidacije domaćih proizvođača i stalni međusobni ratovi cijena ne omogućuju razvoj naprednih proizvoda i ravnopravno natjecanje s vodećim igračima, uključujući i na stranim tržištima.


Prijedlozi: Uvesti nekonkurentnu proceduru za javne nabavke medicinskih proizvoda u okviru FCC-a, nakon čega slijedi poziciono objavljivanje. Određivanje granica finansiranja na osnovu prosječne tržišne cijene dat će određene prednosti domaćim proizvođačima, omogućiti će ograničenje potrošnje skupih uvezenih reagensa i efikasnije kontrolirati korištenje budžetskih sredstava; Promicati proširenje i konsolidaciju domaćih proizvođača kako bi se koncentrirali resursi na razvoj modernih proizvoda i ušli na međunarodno tržište. Nekonkurentni postupak javnih nabavki brzo će na tržište ostaviti samo stvarno konkurentna preduzeća; Dodijeliti državna sredstva za stimulisanje, na principima javno-privatnog partnerstva, razvoj niza testova dovoljnih za osiguranje biološke sigurnosti zemlje; Carinske povlastice trebaju biti za komponente, a ne za gotove proizvode; Uskladiti sistem registracije sa evropskim, gdje se medicinski proizvodi sa niskim nivoom potencijalnog rizika registruju na osnovu izjave o usaglašenosti.



PRIPREME

OCJENA NOVOG SUSTAVA ELISA TESTIRANJA

"Rotavirus-antigen-ELISA-NAJBOLJI"

12Zhirakovskaya E.V., 3Ignatiev G.M., 3Indikova I.N., 12Tikunova N.V.

1 FGUN SSC VB "Vektor" Rospotrebnadzora, naselje Koltsovo, Novosibirska oblast;

2 Institut za hemijsku biologiju i fundamentalnu medicinu, Novosibirsk;

3 Državni institut za standardizaciju i kontrolu medicinskih bioloških proizvoda nazvan po L.A. Tarasevichag Moskva

Predstavljeni su rezultati ispitivanja osjetljivosti, specifičnosti i ponovljivosti novog seta reagensa "Rotavirus-antigen-IFA-BEST" razvijenog u JSC "Vector-Best" (Novosibirsk). Dobiveni podaci omogućuju predviđanje dijagnostičke pouzdanosti rezultata korištenjem ovog testnog sustava za otkrivanje antigena rotavirusa skupine A u kliničkom materijalu.

Ključne reči: ELISA test sistem, efikasnost, rotavirus A

Rotavirusi grupe A (porodica Reoviridae, rod Rotavirus) najčešći su uzrok teškog gastroenteritisa kod male djece u svijetu. Odrasli sa oslabljenim imunološkim sistemom često se razbole. Rotavirusna infekcija (RVI) je visoko zarazna bolest s više načina prijenosa. Izvor infekcije je osoba s otvorenim ili asimptomatskim oblikom bolesti, kao i prijenosnik virusa. Među djecom i odraslima RVI se može manifestirati u obliku sporadičnih slučajeva, lokalnih grupnih bolesti, izbijanja i široko je rasprostranjen. Fekalno-oralni mehanizam prijenosa ove infekcije ostvaruje se hranom (mlijeko i mliječni proizvodi, dječja hrana), vodom i putem kontakta sa domaćinstvom.

Dijagnoza rotavirusnog gastroenteritisa prema kliničkoj slici, posebno sa sporadičnim morbiditetom, predstavlja određenu poteškoću, jer se simptomi karakteristični za ovu infekciju malo razlikuju od simptoma drugih akutnih crijevnih infekcija (AEI) različite etiologije. Diferencijalna dijagnoza u pacijenata s rotavirusnim gastroenteritisom provodi se i s toksikoinfekcijama u hrani i s drugim virusnim AEI (norovirusi, astrovirusi, adenovirusi, koronavirusi, Coxsackie enterovirusi i ECHO) i bakterijskom (salmoneloza, dizenterija, mikroorganizmi kolere) etiologijom. Nažalost, sve specijalizirane medicinske ustanove Ruske Federacije ne provode dijagnostiku rotavirusne infekcije.

Dijagnostičke metode za RVI usmjerene su na otkrivanje cijelih viriona, virusnog antigena ili virusno specifične RNA u izmetu. Obećavajući pristup izravnoj detekciji virusa i u kliničkom materijalu i u objektima okoliša je metoda obrnute transkripcije - lančana reakcija polimeraze (RT -PCR). Posljednjih godina, testni sustavi stvoreni su na temelju suvremenih znanstvenih dostignuća s kombinacijom različitih metoda za otkrivanje rotavirusa: multipleksna PCR s hibridizacijom-fluorescentnom detekcijom produkata amplifikacije "na krajnjoj točki"; imuno-PCR na bazi krajnjih tačaka (IPCR) sa detekcijom u realnom vremenu; kvantitativna RT-PCR sa detekcijom u stvarnom vremenu. Istraživački laboratoriji koriste elektronsku mikroskopiju za brzo otkrivanje rotavirusa. Međutim, sve gore navedene metode prilično su mukotrpne i zahtijevaju skupe instrumente i visoko kvalificirano osoblje. Stoga se pri provođenju laboratorijske dijagnostike u bolnicama i ambulantno daje prednost metodama koje se temelje na otkrivanju virusnog antigena u izmetu primjenom enzimsko imunološkog testa (ELISA) s mono- i polikonalnim antitijelima na rotaviruse. Ova metoda je dostupna za praktične laboratorije, jednostavna je za postavljanje i omogućuje vam brzo postizanje rezultata.

Svrha ovog rada je proučavanje dijagnostičke efikasnosti novog seta reagensa "Rotavirus-antigen-IFA-BEST" razvijenog u JSC "Vector-Best", Novosibirsk.

^ Septembar-decembar

materijali i metode

Materijal istraživanja bili su uzorci izmeta male djece s dijagnozom akutne crijevne infekcije i bez kliničkih manifestacija crijevne infekcije, koji su bili hospitalizirani na odjelima crijevnih infekcija i respiratornih infekcija Dječje gradske kliničke bolnice br. Novosibirsk. Uzorci izmeta prikupljeni su u sterilne plastične posude za jednokratnu upotrebu u zapremini od 2-3 ml po prijemu pacijenata na bolničko odjeljenje i čuvani na - 20 ° C 15 dana. Dulje skladištenje materijala provedeno je na - 70 ° C.

Panel od 104 uzorka izmeta prethodno je testiran na prisutnost OCI patogena. Od njih:

30 uzoraka u kojima su ELISA i RT-PCR otkrili samo rotaviruse grupe A; genotipizacija RT-PCR-om pokazala je da fekalni uzorci sadrže rotaviruse genotipa PG1 (18 uzoraka), PG2 (4 uzorka), PG3 (3 uzorka), PG4 (2 uzorka), PG4 (1 uzorak), PG9 (1 uzorak), PG3 (1 uzorak);

14 uzoraka u kojima su RT-PCR-om otkriveni samo norovirusi drugog genotipa, što je potvrđeno određivanjem nukleotidne sekvence 5 "-područja kapsidnog gena smještenog na genomu norovirusa u području od 5085-5485 h .;

15 uzoraka u kojima su RT-PCR-om otkriveni samo astrovirusi, što je potvrđeno određivanjem nukleotidne sekvence 5 "- područja kapsidnog gena smještenog na genomu astrovirusa u području 4526- 4955 n .; 15 uzoraka u kojima su PCR -om otkriveni samo adenovirusi;

30 fekalnih uzoraka (kontrola) od djece bez kliničkih manifestacija crijevne infekcije, hospitaliziranih na respiratornom odjelu bolnice; preliminarna analiza nije otkrila gore navedene virusne patogene u ovim uzorcima.

Uzorci su testirani na prisutnost ili odsutnost truleži, noro-, astro- i adenovirusa pomoću RT-PCR-a koristeći komercijalne setove „AmpliSens No go virus 1, 2 genotipa-306/322“, „AmpliSens Astrovirus -165“ registrirani u Ruska Federacija, "AmpliSens Adenovirus - 462", "AmpliSens Rotavirus - 290" (proizveden od Centralnog istraživačkog instituta za epidemiologiju FGUN, RF). Uzorci su ispitani u skladu sa uputstvima za upotrebu odgovarajućih kompleta reagensa tokom roka trajanja. Uzorci pozitivni na prisustvo rotavirusa genotipizirani su RT-PCR-om. Utvrđivanje prisutnosti ili odsutnosti rotavirusnog antigena takođe je izvedeno ELISA -om koristeći komercijalni testni sistem IDEIA ™ Rotavirus (DakoCytomation, UK) u skladu sa uputstvima iz kompleta.

Prilikom testiranja kompleta reagensa Rota-virus-antigen-ELISA-BEST svi gore navedeni uzorci (104) šifrirani su i testirani tri puta s kompletom za testiranje. Po završetku ispitivanja uzorci su dekodirani i rezultati analizirani.

Rezultati i rasprava

Osetljivost kompleta reagensa "Rotavirus-antigen-ELISA-BEST" procenjena je prema broju podudarnosti pozitivnih rezultata (u%) testiranih uzoraka pomoću testiranog sistema za testiranje i referentnih lekova. Istodobno je otkriveno da je pri upotrebi kompleta reagensa "Rotavirus-antigen-ELISA-BEST" svih 30 uzoraka s potvrđenom prisutnošću rotavirusa A bilo pozitivno (Tablica 1). Shodno tome, osjetljivost testnog kompleta za otkrivanje rotavirusa A bila je 100%. Treba napomenuti da je panel uključivao uzorke sa sedam različitih genotipova rotavirusa, a svi su uspješno detektovani kompletom reagensa "Rotavirus - antigen - I FAB - EST".

Specifičnost ispitnog sistema procijenjena je brojem podudarnosti negativnih rezultata (u%) testiranih uzoraka pomoću testiranog testnog sistema sa dostavljenim preliminarnim studijama. Za procjenu specifičnosti, upotrijebljena ploča je uključivala 30 uzoraka u kojima nisu otkriveni virusni patogeni, kao i 14 uzoraka u kojima su samo norovirusi drugog genotipa otkriveni pomoću RT-PCR metode, 15 uzoraka u kojima je RT-PCR metoda otkriveni su samo astrovirusi; 15 uzoraka u kojima su PCR -om otkriveni samo adenovirusi. Utvrđeno je da u 69 od 74 negativna uzorka vrijednosti optičke gustoće tijekom detekcije s kompletom reagensa Rotavirus-antigen-ELISA-BEST za prisutnost rotavirusa A nisu prelazile pozadinske vrijednosti, odnosno vrijednosti dobiveno kao rezultat mjerenja optičke gustoće u kontrolnim negativnim uzorcima. Dva uzorka koja sadrže astroviruse, jedan uzorak - norovirus drugog genotipa, jedan uzorak - adenovirus i dva uzorka u kojima nijedan od navedenih virusnih patogena nije otkriven, pokazala su pozitivne indekse optičke gustoće. Treba napomenuti da su u uzorcima u kojima nijedan od virusnih patogena prethodno nije otkriven, pozitivni signali zabilježeni samo u jednoj od ponovljenih studija (Tablica 2). Tako je specifičnost kompleta reagensa Rotavirus-Antigen-ELISA-BEST bila 93,2%.

Tijekom ispitivanja procijenjena je ponovljivost rezultata dobivenih upotrebom testnog kompleta reagensa "Rotavirus-antigen-ELISA-BEST" na kliničkom materijalu-svi uzorci su ispitani tri puta u različitim eksperimentima kako bi se utvrdila varijacija rezultata. U gotovo svim slučajevima postignuti su slični rezultati: testni sustav otkrio je sve negativne i pozitivne uzorke na isti način. Izuzetak su bila dva uzorka u kojima prethodno nije otkriven nijedan od virusnih patogena: u jednom od ponavljanja za oba uzorka vrijednosti optičke gustoće premašile su ODcrit. Treba napomenuti da je višak bio neznatan (Tabela 2). Dakle, ponovljivost rezultata bila je 98,8%.

Rezultati testova pokazali su da je ispitni set reagensa "Rotavirus-antigen-ELISA-BEST" po svojoj dijagnostičkoj efikasnosti-specifičnosti, osjetljivosti i ponovljivosti-uporediv s dijagnostikom dostupnom u Ruskoj Federaciji.

kemijskim ispitnim sustavima, što omogućuje predviđanje dijagnostičke pouzdanosti rezultata pri korištenju ispitivanog seta reagensa "Rotavirus-antigen-ELISA-BEST" za detekciju rotavirusnog antigena grupe A u kliničkom materijalu.

Književnost

1. Bogomolov B.P. // "Zarazne bolesti: hitna dijagnostika, liječenje, prevencija". - M., New-diamed. - 2007.

2. Vasiliev B.Ya., Vasil'eva RI, Lobzin Yu.V. // „Akutne crijevne bolesti. Rotavirusi i infekcija rotavirusom ”. - S.-Pb., Lan. - 2000.

3. Zhirakovskaya EV, Tikunov A.Y., Bodnev O.A., et al. // "BIOPreparations". - 2008. - br. 2. - str. 15 - 18.

4. Zhirakovskaya E.V., Maleev V.V., Bodnev A.C. i drugi. // ZhMEI - 2008 - br. 4. - sa. 12 - 16.

5. Ignatyuk TE, Golutvin IA, Nasikan NS, et al. // "Pitanja virusologije". - 2003. - s. 48. - br. 6. - str. 1721.

6. Novikova H.A., Fedorova O.F., Epifanova N.V., Chuprova A.B. // "Pitanja virusologije". - 2007.,- s. 52. -№ 3 - str. 19-23.

7. Podkolzin A.T., Mukhina A.A., Shipulin G.A., et al. //

"Zarazne bolesti". - 2004. - s. 2. - br. 4. - str. 85 -91.

8. Podkolzin AT, Fenske EB, Abramycheva N.Yu., et al. // "Terapijska arhiva". - 2007. - s. 79. - br. 11. -str. 10-16.

9. Sergevnin VI, Woldschmidt NB, Sarmometov EV, et al. // Epidemiologija i zarazne bolesti. -2004.-№ 6.-p. 17-20.

10. Sergevnin V.I., Woldschmidt N.B., Sarmometov E.V., et al. // Higijena i sanitacija. - 2007. - br. 1. - str. 56 -58.

11. Arcangeletti M. C., De Conto E, Pinardi F., i dr. // Acta Biomed. Ateneo. Parmense. - 2005. -V. 76 (3). - str. 165 -170.

12. Gladstone B. P., Iturriza-Gomara M., Ramani S., i dr. // Epidemiol. Infect. - 2008. V. 136 (3). - P. 399-405.

13. Min B. S., NohY J., Shin J. H., atal. // J. Virol. Metode. -2006. - V. 137 (2). - str. 280 - 286.

14. Santos N., Honma S., Timenetsky Mdo C., i dr. // J. Clin. Microbiol. - 2008. V. 46 (2). - str. 462 - 469.

15 Schets F. M., van Wijnen J. H., Schijven J. F., i dr. // Appl. Environ. Microbiol. - 2008. - V. 74 (7). - P. 2069 - 2078.

16. Stockman L. J., Staat M. A., Holloway M., et al. // J. Clin. Microbiol. - 2008. - V. 46 (5). - P. 1842 - 1843.

Procjena osjetljivosti i specifičnosti kompleta reagensa "Rotavirus-antigen-ELISA-BEST"

Tabela 1

Broj uzoraka Broj uzoraka Rezultati detekcije s referentnim lijekovima IDEIA Rotavirus Astro-PCR Hopo 2-PCR Adeno-PCR Rezultati detekcije s kompletom "Rotavirus-antigen-ELISA-BEST"

1. 30 30 0 0 0 30

2. 15 0 15 0 0 2

3. 14 0 0 14 0 1

4. 15 0 0 0 15 1

Procjena specifičnosti kompleta reagensa "Rotavirus-antigen-ELISA-BEST"-

tabela 2

PCR AmpliSens

rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus

0,443 1,306 0,676 0,418

Rotavirus-antigen-IFA-BEST CJSC "Vector-Best"

OPKrit OPKrit OPKrit

0,250 0,263 0,251

> 4,000 > 4,000 > 4,000 3,926 > 4,000 3,939

> 4,000 > 4,000 > 4,000

> 4,000 > 4,000 > 4,000

£ septembar

Decembra 2009

AmpliSens

rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus

IDEIA Rotavirus DakoCytomation OPCrit = 0,150

0,401 0,322 1,659 0,566 0,518 1,278 1,285 0,809 1,160 0,407 0,218 0,703 1,889 1,069 1,302 0,879 1,842 0,747 0,793 1,013 1,124 0,670 0,726 0,683 0,814 0,997 0,206 0,052 0,050 0,034 0,040 0,048 0,040

Rotavirus

OPKrit 0.250

> 4,000 3,933 3,987 3,918 3,853 3,972

> 4,000 3,864 3,879 3,897 3,800

> 4,000 3,981

> 4,000 3,713

> 4,000 4.000

> 4,000 3,989

> 4,000 3,872 0,088 0,103 0,230 0,240 0,268 1,819 0,062

antigen-ELISA-BEST "Vector-Best"

OPKrit OPKrit 0,263 0,251

> 4,000 > 4,000

> 4,000 > 4,000

> 4,000 > 4,000 3,821 3,899

> 4,000 3,964 3,845 3,923 3,962 3,871

> 4,000 3,929

> 4,000 3,881 3,884 > 4,000

> 4,000 > 4,000 3,800 3,851 3,818 >4,000

> 4,000 > 4,000

> 4,000 3,995

> 4,000 > 4,000

> 4,000 > 4,000

> 4,000 > 4,000 3,837 3,839

> 4,000 > 4,000

> 4,000 > 4,000

> 4,000 3,986

> 4,000 > 4,000

> 4,000 3,998

> 4,000 > 4,000

> 4,000 3,823 0,063 0,073 0,054 0,061 0,255 0,250 0,256 0,244 0,278 0,560 1,117 1,235 0,052 0,052

astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus

IDEIA Rotavirus DakoCytomation OIIKpHT = 0,150

0,043 0,043 0,041 0,052 0,040 0,046 0,041 0,040 0,037 0,039 0,030 0,045 0,032 0,030 0,037 0,042 0,034 0,039 0,043 0,043 0,045 0,039 0,050 0,034 0,050 0,043 0,050 0,042 0,041 0,042 0,038 0,047 0,039

PoTaBHpyc-aHTHreH-HOA-EECT 3AO "BeKTop-EecT"

OnKpHT OnKpHT OIIKpHT

0,250 0,263 0,251

0,115 0,075 0,082

0,053 0,046 0,058

0,233 0,198 0,189

0,144 0,105 0,128

0,243 0,062 0,073

0,043 0,040 0,046

0,069 0,043 0,041

0,143 0,044 0,058

0,220 0,206 0,230

3,475 2,577 2,405

0,223 0,247 0,240

0,232 0,236 0,231

0,048 0,042 0,041

0,121 0,085 0,093

0,132 0,111 0,174

0,122 0,052 0,063

0,061 0,044 0,054

0,073 0,035 0,048

0,089 0,046 0,046

0,047 0,043 0,044

0,041 0,039 0,044

0,083 0,046 0,038

0,168 0,074 0,097

0,247 0,118 0,099

0,248 0,251 0,242

0,243 0,259 0,250

0,054 0,048 0,055

0,048 0,040 0,037

0,058 0,045 0,046

0,053 0,045 0,049

0,069 0,058 0,065

0,912 0,344 0,379

0,089 0,037 0,042

Decembra 2009

PCR AmpliSens

adenovirus adenovirus adenovirus adenovirus neglig neglig neglig negtig

IDEIA Rotavirus DakoCytomation OPCrit = 0,150

0,040 0,044 0,039 0,041 0,260 0,044 0,046 0,042 0,047 0,041 0,039 0,048 0,055 0,035 0,039 0,040 0,041 0,033 0,046 0,049 0,048 0,038 0,039 0,029 0,037 0,036 0,043 0,043 0,039 0,042 0,034 0,037 0,041 0,036

Rotavirus - antigen - IFA -BEST CJSC "Vector -Best"

OPKrit OPKrit OPKrit

0,250 0,263 0,251

0,105 0,042 0,043

0,046 0,143 0,133

0,227 0,045 0,042

0,065 0,068 0,054

0,125 0,039 0,042

0,196 0,191 0,182

0,209 0,170 0,154

0,316 0,071 0,073

0,058 0,043 0,049

0,171 0,056 0,061

0,049 0,060 0,064

0,047 0,062 0,065

0,058 0,047 0,066

0,073 0,072 0,066

0,188 0,120 0,109

0,180 0,074 0,072

0,057 0,063 0,058

0,047 0,060 0,047

0,162 0,146 0,143

0,248 0,248 0,260

0,063 0,066 0,104

0,247 0,223 0,251

0,054 0,053 0,070

0,242 0,240 0,248

0,073 0,061 0,103

0,066 0,065 0,064

0,108 0,123 0,192

0,072 0,067 0,071

0,079 0,079 0,087

0,104 0,079 0,164

0,169 0,150 0,162

0,140 0,166 0,146

0,114 0,133 0,131

Učitavanje ...Učitavanje ...