Tanin (tanida) adalah senyawa fenolik bermolekul tinggi tumbuhan yang dapat mengendapkan protein dan memiliki rasa yang astringen.
Istilah "tanin" telah berkembang secara historis, berkat kemampuan senyawa ini untuk mengubah kulit hewan mentah menjadi kulit yang tahan lama, tahan terhadap kelembaban dan mikroorganisme. Penggunaan istilah ini secara resmi diusulkan pada tahun 1796 oleh Seguin untuk menunjuk zat dalam ekstrak tumbuhan tertentu yang dapat melakukan proses penyamakan.
Penyamakan merupakan interaksi kimia kompleks tanin dengan molekul kolagen, protein utama jaringan ikat. Sifat penyamakan dimiliki oleh fenol polinuklear yang mengandung lebih dari satu hidroksil dalam molekulnya. Dengan susunan tanida yang datar pada molekul protein, ikatan hidrogen yang stabil muncul di antara mereka:
Fragmen molekul protein Fragmen molekul tanida
Kekuatan interaksi tanida dengan protein tergantung pada jumlah ikatan hidrogen dan dibatasi oleh ukuran molekul senyawa polifenol. Berat molekul tanin bisa mencapai 20.000. Pada saat yang sama, ada 1-2 gugus hidroksi fenolik per 100 unit berat molekul dalam tanin. Oleh karena itu, jumlah ikatan hidrogen yang terbentuk sangat banyak dan proses penyamakan tidak dapat diubah. Radikal hidrofobik yang berorientasi pada lingkungan eksternal membuat kulit tidak dapat diakses oleh kelembaban dan mikroorganisme.
Tidak semua tanin mampu melakukan tanning yang sebenarnya. Sifat ini membedakan senyawa yang memiliki berat molekul 1.000 atau lebih. Senyawa polifenol dengan massa kurang dari 1.000 tidak mampu menyamak kulit dan hanya memiliki efek astringen.
Tanin sangat banyak digunakan dalam industri. Cukuplah untuk mengatakan bahwa produksi tanin dunia melebihi 1.500.000 ton per tahun, dan pangsa tanin nabati mencapai 50-60% dari total.
Distribusi di dunia tumbuhan dan peran tanin dalam tumbuhan. Tanin banyak ditemukan di perwakilan angiospermae dan gymnospermae, ganggang, jamur, lumut, di lumut klub dan pakis. Mereka ditemukan di banyak tumbuhan tingkat tinggi, terutama dikotil. Jumlah terbesar mereka ditemukan di sejumlah perwakilan famili Fabaceae, Myrtaceae, Rosaceae, Anacardiaceae, Fagaceae, Polygonaceae.
Tanin dalam tanaman terletak di vakuola sel dan teradsorpsi pada dinding sel selama penuaan sel. Mereka terakumulasi dalam jumlah besar di organ bawah tanah, kulit kayu, tetapi dapat ditemukan di daun dan buah-buahan.
Tanin melakukan fungsi protektif terutama pada tanaman. Dengan kerusakan mekanis pada jaringan, peningkatan pembentukan tanin dimulai, disertai dengan kondensasi oksidatifnya di lapisan permukaan, sehingga melindungi tanaman dari kerusakan lebih lanjut dan pengaruh negatif patogen. Karena sejumlah besar hidroksil fenolik, tanin memiliki sifat bakteriostatik dan fungisida, sehingga melindungi organisme tanaman dari berbagai penyakit.
Klasifikasi tanin. Pada tahun 1894, G. Procter, mempelajari produk akhir dari pirolisis tanin, menemukan 2 kelompok senyawa - pyrogallic (pyrogallol terbentuk) dan pyrocatechin (pyrocatechin terbentuk selama dekomposisi):
K. Freudenberg pada tahun 1933 menetapkan klasifikasi G. Procter. Dia, seperti Procter, mengklasifikasikan tanin menurut produk akhir dekomposisinya, tetapi tidak dalam kondisi pirolisis, tetapi di bawah hidrolisis asam. Tergantung pada kemampuan untuk menghidrolisis, K. Freudenberg mengusulkan untuk membedakan dua kelompok tanin: terhidrolisis dan terkondensasi. Saat ini klasifikasi K. Freudenberg lebih sering digunakan.
Ke grup tanin terhidrolisis termasuk senyawa yang dibangun menurut jenis ester dan terurai selama hidrolisis asam menjadi komponen penyusunnya. Tautan sentral paling sering adalah glukosa, lebih jarang gula lain atau senyawa alisiklik (misalnya, asam quinic). Hidroksil alkohol dari residu pusat dapat terikat eter dengan asam galat, membentuk gugus galotanin, atau asam ellagic, membentuk grup ellagitannin.
galotanin- ester asam galat, yang paling umum dalam kelompok tanin terhidrolisis. Ada eter mono-, di-, tri-, tetra-, penta- dan poligaloi. Perwakilan dari eter monogalloil adalah b-D-glukogallin:
Contoh eter poligalil adalah tanin Cina, struktur yang pertama kali didirikan pada tahun 1963 oleh Haworth:
ellagitannin adalah ester gula dan asam ellagic atau turunannya. Asam ellagic dibentuk oleh oksidasi dua molekul asam galat menjadi asam heksaoksidifenat, yang segera membentuk lakton - asam ellagic:
Seperti pada kasus sebelumnya, komponen gula ellagitannin paling sering adalah glukosa.
Ester non-gula dari asam galat adalah ester asam galat dan komponen non-gula, seperti asam quinic, hydroxycinnamic, dll. Contoh dari kelompok zat ini adalah asam 3,4,5-trigalloylquinic.
tanin kental berbeda dari yang dapat dihidrolisis karena selama hidrolisis asam mereka tidak dipecah menjadi komponen penyusun, tetapi sebaliknya, di bawah aksi asam mineral, produk polimerisasi merah-coklat padat, flobaphenes, terbentuk.
Tanin terkondensasi dibentuk terutama oleh katekin dan leukosianidin, dan, lebih jarang, oleh bentuk tereduksi lainnya dari flavonoid. Tanin kental tidak termasuk dalam kelompok "Glikosida": tidak ada komponen gula dalam tanin kental.
Pembentukan tanin terkondensasi dapat terjadi dengan dua cara. K. Freidenberg (30-an abad XX) menetapkan bahwa pembentukan tanin terkondensasi adalah proses non-enzimatik dari autokondensasi katekin atau leukocyanidins (atau kondensasi silangnya) sebagai akibat dari paparan oksigen atmosfer, panas dan lingkungan asam . Autokondensasi disertai dengan pecahnya cincin pyran dari katekin dan atom karbon C-2 dari satu molekul dihubungkan oleh ikatan karbon-karbon ke atom karbon C-6 atau C-8 dari molekul lain. Dalam hal ini, rantai yang cukup panjang dapat dibentuk:
Menurut ilmuwan lain, D. Hathway, tanin terkondensasi dapat terbentuk sebagai hasil kondensasi oksidatif enzimatik molekul menurut tipe "kepala ke ekor" (cincin A ke cincin B) atau "ekor ke ekor" (cincin B ke cincin B):
Pada tanaman yang mengandung tanin terkondensasi, harus ada prekursornya - katekin bebas atau leukocyanidins. Seringkali ada polimer kental campuran yang terdiri dari katekin dan leukocyanidins.
Sebagai aturan, tanin dari kedua kelompok terkondensasi dan terhidrolisis secara bersamaan hadir dalam tanaman.
Sifat fisika dan kimia tanin. Tanin dicirikan oleh berat molekul tinggi - hingga 20.000. Tanin alami, dengan beberapa pengecualian, diketahui sampai saat ini hanya dalam keadaan amorf. Alasan untuk ini adalah bahwa zat-zat ini adalah campuran senyawa yang serupa dalam struktur kimia tetapi berbeda dalam berat molekul.
Tanin adalah senyawa berwarna kuning atau coklat yang membentuk larutan koloid dalam air. Larut dalam etanol, aseton, butanol dan tidak larut dalam pelarut dengan hidrofobisitas yang diucapkan - kloroform, benzena, dll.
Galotanin kurang larut dalam air dingin dan relatif baik dalam air panas.
Tanin memiliki aktivitas optik dan mudah teroksidasi di udara.
Karena adanya hidroksil fenolik, mereka diendapkan oleh garam logam berat dan membentuk senyawa berwarna dengan Fe +3.
Isolasi tanin dari bahan baku nabati. Karena tanin adalah campuran dari berbagai polifenol, isolasi dan analisisnya menimbulkan kesulitan tertentu.
Seringkali, untuk mendapatkan jumlah tanin, bahan baku diekstraksi dengan air panas (tanin sulit larut dalam air dingin) dan ekstrak yang didinginkan diperlakukan dengan pelarut organik (kloroform, benzena, dll.) untuk menghilangkan zat lipofilik. Kemudian tanin diendapkan dengan garam logam berat, diikuti dengan penghancuran kompleks dengan asam sulfat atau sulfida.
Untuk mendapatkan fraksi tanin yang serupa dalam struktur kimia, dimungkinkan untuk menggunakan ekstraksi bahan baku dengan dietil eter, metil atau etil alkohol dengan penghilangan awal komponen lipofilik menggunakan pelarut dengan hidrofobisitas yang diucapkan - petroleum eter, benzena, kloroform.
Isolasi beberapa komponen tanin dengan pengendapan dari larutan berair atau air-alkohol dengan garam timbal tersebar luas. Endapan yang dihasilkan kemudian diolah dengan asam sulfat encer.
Saat mengisolasi komponen individu tanin, metode kromatografi digunakan: kromatografi adsorpsi pada selulosa, poliamida; pertukaran ion pada berbagai penukar kation; distribusi pada silika gel; filtrasi gel pada saringan molekuler.
Identifikasi komponen individu tanin dilakukan dengan menggunakan kromatografi di atas kertas atau dalam lapisan tipis sorben, menggunakan analisis spektral, reaksi kualitatif dan studi produk pembelahan.
Analisis kualitatif tanin. Reaksi kualitatif terhadap tanin dapat dibagi menjadi dua kelompok: reaksi pengendapan dan reaksi warna. Untuk melakukan reaksi kualitatif, bahan baku paling sering diekstraksi dengan air panas.
Reaksi presipitasi. 1. Ketika tanin berinteraksi dengan larutan gelatin 1% yang dibuat dalam larutan natrium klorida 10%, terbentuk endapan atau larutan menjadi keruh. Ketika kelebihan gelatin ditambahkan, kekeruhan menghilang.
2. Tanida memberikan presipitasi berlimpah dengan alkaloid (kafein, pachycarpine), serta beberapa basa nitrogen (urotropin, novocaine, dibazol).
3. Ketika berinteraksi dengan larutan timbal asetat 10%, tanin dari gugus terhidrolisis membentuk endapan flokulan.
4. Tanin dari kelompok terkondensasi membentuk endapan flokulan dalam reaksi dengan air brom.
reaksi warna. Tanin dari kelompok terhidrolisis dengan larutan tawas amonium besi membentuk senyawa berwarna hitam-biru, dan kelompok terkondensasi - hitam-hijau.
Jika tanaman secara bersamaan mengandung tanin dari kedua kelompok terhidrolisis dan terkondensasi, maka pertama-tama tanin terhidrolisis diendapkan dengan larutan timbal asetat 10%, endapan disaring, dan kemudian filtrat direaksikan dengan larutan besi amonium tawas. Munculnya warna hijau tua menunjukkan adanya zat dari kelompok kental.
Penentuan kuantitatif tanin. Meskipun ada sekitar 100 metode berbeda untuk penentuan kuantitatif tanin, analisis kuantitatif yang akurat dari kelompok zat aktif biologis ini sulit dilakukan.
Di antara metode yang banyak digunakan untuk penentuan kuantitatif tanin, berikut ini dapat dibedakan.
1. Gravimetri - berdasarkan pengendapan kuantitatif tanin oleh gelatin, garam logam berat, dll.
2. Titrimetri - berdasarkan reaksi oksidatif, terutama dengan kalium permanganat.
3. Fotoelektrokolorimetri - berdasarkan kemampuan tanin untuk membentuk produk reaksi berwarna yang stabil dengan garam oksida besi, asam fosfotungstat, dll.
State Pharmacopoeia edisi X dan XI merekomendasikan metode titrimetri untuk penentuan kuantitatif tanin.
Isi
OFS.1.5.3.0008.15 Penentuan kandungan tanin pada bahan baku jamu dan sediaan jamu
Alih-alih Seni. GF XI
Penetapan kandungan tanin pada bahan baku jamu dan sediaan jamu dilakukan dengan metode titrimetri dan/atau spektrofotometri. Metode titrimetri terdiri dalam menentukan jumlah tanin dalam hal tanin, dan metode spektrofotometri memungkinkan Anda untuk menentukan jumlah tanin dalam hal pirogalol.
Metode 1. Penentuan jumlah tanin dalam hal tanin
Sekitar 2 g (ditimbang secara akurat) bahan baku jamu atau produk jamu yang dihancurkan, diayak melalui saringan berlubang 3 mm, ditempatkan dalam labu berbentuk kerucut 500 ml, dituangkan ke dalam 250 ml air yang dipanaskan hingga mendidih dan direbus di bawah refluks di atas kompor listrik dengan spiral tertutup selama 30 menit sambil sesekali diaduk. Ekstrak yang dihasilkan didinginkan sampai suhu kamar dan disaring melalui kapas ke dalam labu takar berkapasitas 250 ml agar partikel bahan baku/sediaan tidak jatuh ke dalam labu ukur, volume larutan disesuaikan dengan tanda dengan air dan dicampur. 25,0 ml ekstrak berair yang dihasilkan ditempatkan dalam labu kerucut 1000 ml, 500 ml air, 25 ml larutan asam nila sulfonat ditambahkan dan dititrasi dengan pengadukan konstan kalium permanganat dengan larutan 0,02 M sampai warna kuning keemasan.
Pada saat yang sama, percobaan kontrol dilakukan: 525 ml air, 25 ml larutan asam nila sulfonat ditempatkan dalam labu berbentuk kerucut dengan kapasitas 1000 ml dan dititrasi dengan pengadukan konstan kalium permanganat dengan larutan 0,02 M sampai warna kuning keemasan.
1 ml larutan kalium permanganat 0,02 M sama dengan 0,004157 g tanin dalam hal tanin.
(V – V 1 ) 0,004157 250 100 100
x = ————————————————— ,
Sebuah 25 (100 – W)
V adalah volume larutan kalium permanganat 0,02 M yang digunakan untuk titrasi ekstrak air, ml;
V 1 adalah volume larutan kalium permanganat 0,02 M yang digunakan untuk titrasi pada percobaan kontrol, ml;
0,004157 - jumlah tanin yang sesuai dengan 1 ml larutan kalium permanganat 0,02 M (dalam hal tanin), g;
Sebuah- contoh bahan baku atau produk jamu, g;
W– kelembaban bahan tanaman obat atau produk tanaman obat, %;
250 – total volume ekstraksi air, ml;
25 – volume ekstrak air yang diambil untuk titrasi, ml.
Catatan.Pembuatan larutan asam indigo sulfonat. 1 g nila carmine dilarutkan dalam 25 ml asam sulfat pekat, kemudian ditambahkan 25 ml asam sulfat pekat dan diencerkan dengan air hingga 1000 ml, dengan hati-hati menuangkan larutan yang dihasilkan ke dalam air, dalam labu volumetrik dengan kapasitas 1000ml, diaduk.
Metode 2. Penentuan jumlah tanindalam hal pyrogallol
Sekitar 0,5 - 1,0 g (ditimbang secara akurat atau ditentukan lain dalam monografi farmakope atau dokumentasi peraturan) bahan tanaman obat yang dihancurkan atau produk obat herbal, diayak melalui saringan dengan lubang 0,18 mm, ditempatkan dalam labu berbentuk kerucut dengan kapasitas 250 ml , tambahkan 150 ml air dan didihkan di atas penangas air di bawah refluks selama 30 menit. Ekstrak air yang dihasilkan dalam labu didinginkan sampai suhu kamar, disaring melalui kapas ke dalam labu takar berkapasitas 250 ml agar partikel bahan baku tidak jatuh ke dalam labu, volume larutan diatur menjadi tandai dengan air dan campur. Larutan yang dihasilkan disaring melalui kertas saring dengan diameter sekitar 125 mm, membuang 50 ml filtrat pertama.
Penetapan dilakukan di tempat yang terlindung dari cahaya.
Penentuan jumlah tanin. Masukkan 5,0 ml filtrat ke dalam labu takar 25 ml, encerkan larutan dengan air hingga tanda batas, lalu campur. 2,0 ml larutan yang dihasilkan ditempatkan dalam labu takar berkapasitas 25 ml, 1 ml reagen fosfomolibdenum-tungsten, 10 ml air ditambahkan dan volume larutan disesuaikan dengan tanda natrium karbonat dengan larutan sebesar 10,6% (larutan uji). Setelah 30 menit, ukur kerapatan optik larutan uji (A 1) pada spektrofotometer pada panjang gelombang 760 nm dalam kuvet dengan ketebalan lapisan 10 mm, menggunakan air sebagai larutan referensi.
Penentuan jumlah tanin yang tidak teradsorpsi oleh bedak kulit. 0,1 g bubuk kulit ditambahkan ke 10,0 ml filtrat, campuran yang dihasilkan diaduk selama 60 menit dan disaring melalui kertas saring. 5,0 ml filtrat yang dihasilkan ditempatkan dalam labu takar berkapasitas 25 ml, volume larutan disesuaikan dengan tanda dengan air dan dicampur. 2,0 ml larutan yang dihasilkan ditempatkan dalam labu takar berkapasitas 25 ml, 1 ml reagen fosfomolibdenum-tungsten, ditambahkan 10 ml air, volume larutan disesuaikan dengan tanda natrium karbonat dengan larutan 10,6% dan dicampur (larutan uji). Setelah 30 menit, ukur kerapatan optik larutan uji (A 2) pada spektrofotometer pada panjang gelombang 760 nm dalam kuvet dengan ketebalan lapisan 10 mm, menggunakan air sebagai larutan referensi.
Secara paralel, ukur kerapatan optik dari larutan standar.
2,0 ml larutan pyrogallol SS ditempatkan dalam labu ukur 25 ml, 1 ml pereaksi fosfomolibdenum-tungsten, ditambahkan 10 ml air, volume larutan disesuaikan dengan tanda natrium karbonat dengan larutan 10,6% dan dicampur (larutan standar). Setelah 30 menit, ukur kerapatan optik larutan standar (A 3) pada spektrofotometer pada panjang gelombang 760 nm dalam kuvet dengan ketebalan lapisan 10 mm, menggunakan air sebagai larutan referensi.
1- kerapatan optik larutan uji saat menentukan jumlah tanin;
A 2 - kerapatan optik dari larutan uji ketika menentukan jumlah tanin yang tidak diadsorpsi oleh bubuk kulit, dalam hal pirogalol;
A 3— kerapatan optik dari larutan standar;
Sebuah- berat bahan tanaman obat atau sediaan tanaman obat, g;
Sebuah 0 adalah sampel pyrogallol SS, g;
W– kelembaban bahan tanaman obat atau produk tanaman obat, %.
Catatan. Persiapan larutan pyrogallol RS. 0,05 g (ditimbang dengan cermat) pyrogallol SS ditempatkan dalam labu takar berkapasitas 100 ml, dilarutkan dalam air, volume larutan disesuaikan dengan tanda dengan air, dan dicampur. 5,0 ml larutan yang dihasilkan dimasukkan ke dalam labu takar berkapasitas 100 ml, volume larutan diatur sampai tanda dengan air dan dicampur. Solusinya digunakan baru disiapkan.
pengantar
Pada tumbuhan, salah satu kelompok zat aktif biologis (BAS) yang paling umum adalah tanin (tanin), yang memiliki berbagai aktivitas farmakologis.Taninmemiliki efek hemostatik, astringen, anti-inflamasi, antimikroba, dan juga menunjukkan aktivitas vitamin P yang tinggi, efek anti-sklerotik dan antihipoksia. Tanin terkondensasi adalah antioksidan dan memiliki efek antitumor. Tanindigunakan sebagai penangkal keracunan dengan glikosida, alkaloid, garam logam berat. Dalam pengobatan, tanin digunakan dalam pengobatan penyakit seperti stomatitis, radang gusi, faringitis, radang amandel, radang usus besar, enterokolitis, disentri, mereka juga digunakan untuk luka bakar, rahim, pendarahan lambung dan wasir..
Definisi kontentanin merupakan komponen penting dalam menentukan kualitas bahan tanaman yang mengandung tanin. Ada berbagai metode untuk penentuan tanin, tetapi yang paling umum digunakan adalah metode titrimetri dan spektrofotometri.
Objektif- evaluasi validasi metode untuk penentuan kuantitatif tanin dalam hal konvergensi, kebenaran, linieritas.
Bahan dan metode penelitian
Bahan baku yang digunakan sebagai objek penelitian adalah rumput kering.manset umum (Alchemilla vulgaris L.) fam. Rosaceae (Rosaceae).
Untuk evaluasi validasi metode penentuan kuantitatif tanin pada rumput kering udaracuff vulgaris, dua metode dipilih: titrasi permanganometri dan penentuan spektrofotometri berdasarkan reaksi dengan reagen Folin-Ciocalteu. Pilihan metode dibenarkan oleh frekuensi penggunaannya dalam praktik.
rumput kering udaramanset vulgaris dipanen di September 2015 di distrik Primorsky di wilayah Arkhangelsk, yang merupakan bahan baku untuk studi dan penentuan kuantitatif tanin (tanin).
Metode penentuan permanganometrik adalah metode farmakope, yangberdasarkan reaksi oksidasi tanin dengan larutan kalium permanganat.Sekitar 2 g (ditimbang secara akurat) bahan baku yang dihancurkan, diayak melalui saringan dengan ukuran lubang 3 mm, ditempatkan dalam labu berbentuk kerucut 500 ml, ditambahkan 250 ml air yang dipanaskan hingga mendidih dan direbus di bawah refluks di atas kompor listrik dengan spiral tertutup selama 30 menit sambil sesekali diaduk. Ekstrak yang dihasilkan didinginkan hingga suhu kamar dan labu berbentuk kerucut 250 ml disaring melalui kapas agar partikel bahan baku tidak masuk ke dalam labu. 25 ml ekstrak yang diperoleh diambil dengan pipet dan dipindahkanKe dalam labu berbentuk kerucut lain yang berkapasitas 750 ml, tambahkan 500 ml air, 25 ml larutan asam nila sulfonat dan titrasi dengan pengadukan konstan dengan larutan kaliumpermanganat (0,02 mol/l) sampai kuning keemasan.
Secara paralel, percobaan kontrol dilakukan.
1 ml larutan kalium permanganat (0,02 mol/l) sama dengan 0,004157 g tanin dalam hal tanin.
Kandungan tanin (X), dalam persen, dalam hal bahan baku kering absolut, dihitung dengan rumus (1):
Dimana (1)
V adalah volume larutan kalium permanganat (0,02 mol/l) yang digunakan untuk titrasi ekstrak, ml;
adalah volume larutan kalium permanganat (0,02 mol/l) yang digunakan untuk titrasi dalam percobaan kontrol, ml;
0,004157 - jumlah tanin yang sesuai dengan 1 ml larutan kalium permanganat (0,02 mol / l) (dalam hal tanin), g;
250 – total volume ekstraksi, ml;
25 – volume ekstrak yang diambil untuk titrasi, ml.
M- massa bahan mentah, g;
W- kehilangan massa selama pengeringan bahan baku, g;
Untuk penentuan kuantitatif tanin dengan spektrofotometri, sekitar 1 g (ditimbang secara akurat) bahan tanaman yang dipelajari, dihancurkan menjadi ukuran partikel yang melewati saringan dengan ukuran lubang 1 mm, ditempatkan dalam labu berbentuk kerucut dengan bagian tipis dengan kapasitas 50 ml, ditambahkan 25 ml campuran aseton-air dengan perbandingan 7:3 (larutan aseton 70%). Labu ditutup dan ditempatkan dalam mixer laboratorium (LAB PU-2, Rusia) selama 60 menit. Ekstrak yang diperoleh disaring ke dalam labu takar berkapasitas 50 ml dan ditepatkan volumenya dengan larutan aseton 70% (larutan A).
Di dalam labu takar berkapasitas 10 ml, ditempatkan 1 ml larutan A, volume larutan di dalam labu ukur dengan air murni sampai tanda batas (larutan B).
0,5 ml larutan B dimasukkan ke dalam labu takar berkapasitas 10 ml, 2 ml air murni, 0,25 ml pereaksi Folin-Ciocalteu, 1,25 ml larutan natrium karbonat 20% ditambahkan, dan volume larutan larutan dibawa ke tanda dengan air. Labu dibiarkan selama 40 menit di tempat yang terlindung dari cahaya. Kerapatan optik larutan ditentukan pada panjang gelombang 750 nm. Campuran reagen tanpa ekstrak digunakan sebagai larutan referensi.
Kandungan tanin dalam ekstrak dari bahan baku nabati dihitung dari nilai grafik kalibrasi untuk konstruksi yang digunakan larutan standar tanin CO 0,1 mg/ml. Untuk tujuan ini, 0,05 g (massa eksak) tanin CO ditempatkan dalam labu ukur 100 ml, dilarutkan dalam 30 ml air, dan volume dalam labu diatur sampai tanda dengan pelarut yang sama (larutan A).
1 ml larutan yang dihasilkan dipindahkan ke dalam labu ukur 10 ml. Volume larutan dalam labu dibuat sampai tanda dengan air (larutan B).
Serangkaian solusi yang mengandung 1; 2; 3; 4; Tanin CO (5 g/mL) dibuat dengan menempatkan bagian yang ditimbang dari larutan B ke dalam labu ukur 10 mL, reagen Folin-Ciocalteu dan larutan natrium karbonat 20% ditambahkan, dan volume larutan dalam labu dibuat sampai tanda dengan air.
Larutan dicampur, labu ditutup rapat dan disimpan pada suhu kamar di tempat yang terlindung dari cahaya selama 40 menit.
Kerapatan optik dari larutan yang dihasilkan ditentukan secara spektrofotometri dalam kuarsa kuarsa dengan ketebalan lapisan 1 cm pada panjang gelombang 725 nm relatif terhadap larutan referensi.
Larutan pembanding adalah campuran pereaksi tanpa penambahan tanin CO (larutan B).
Berdasarkan hasil penelitian, grafik ketergantungan kerapatan optik pada konsentrasi tanin dibangun (Gbr. 1).
Dengan mempertimbangkan nilai yang diperoleh, jumlah tanin dihitung dalam hal tanin sesuai dengan rumus:
, di mana
hasil
Hasil penentuan tanin secara kuantitatif dengan titrasi disajikan pada tabel. satu.
Tabel 1. Hasil Penentuan Tanin Secara Kuantitatif Secara Permanganatometri
| Berat bahan baku tanaman, g | Volume kalium permanganat (0,02 mol/l) yang digunakan untuk titrasi ekstrak yang diperoleh dari bahan baku nabati, ml | Jumlah tanin, % (X saya) | |
|
2,10250 |
15,34892 |
15,72%
|
|
|
2,03255 |
15,21262 |
||
|
2,18345 |
15,84713 |
||
|
2,24350 |
16,24333 |
||
|
2,12465 |
15,85257 |
||
|
2,07055 |
15,80574 |
Rata-rata kandungan tanin dalam bahan baku adalah 15,7%. Nilai deviasi standar relatif yang dihitung (0,024%), yang tidak melebihi 2%, yang mencirikan konvergensi yang memuaskan dari hasil yang diperoleh.
Metode penambahan digunakan untuk menentukan kebenaran metode. Untuk tujuan ini, 1 ml 0,05%, 0,1% dan 0,15% tanin CO ditambahkan ke labu titrasi dan dititrasi tiga kali untuk setiap kasus. Hasil penelitian disajikan dalam tabel. 2.
Tabel 2. Penentuan kebenaran metode titrasi permanganometri tanin
| Jumlah tanin CO yang ditambahkan, g | Massa bahan mentah, g | dihitung jumlah tanin, g | Ditemukan jumlah tanin, g | Tingkat pembukaan, % | Karakteristik metrologi |
|
0,0005 |
2,2435 |
0,0357 |
0,0353 |
98,87 |
99,91%
|
|
2,1247 |
0,0339 |
0,0340 |
100,29 |
||
|
2,0706 |
0,0330 |
0,0337 |
102,12 |
||
|
0,001 |
2,2435 |
0,0362 |
0,0357 |
98,61 |
|
|
2,1247 |
0,0344 |
0,0340 |
98,84 |
||
|
2,0706 |
0,0335 |
0,0336 |
100,51 |
||
|
0,0015 |
2,2435 |
0,0367 |
0,0366 |
99,73 |
|
|
2,1247 |
0,0349 |
0,0353 |
101,14 |
||
|
2,0706 |
0,0340 |
0,0337 |
99,12 |
Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa koefisien Student yang dihitung lebih kecil dari nilai tabel danTeknik ini tidak mengandung kesalahan sistematis, yang memungkinkan kita untuk menyimpulkan bahwa itu benar.
Untuk mempelajari linearitas, ditentukan ketergantungan nilai yang ditemukan dari kandungan kuantitatif tanin pada berat bahan tanaman yang dipelajari. Untuk tujuan ini, kami melakukan penentuan kuantitatif tanin dalam enam sampel bahan baku kering udara dari manset biasa, berbeda beratnya (Tabel 3).
Tabel 3
|
|
Volume kalium permanganat yang digunakan untuk titrasi, ml |
|
|
2,0706 |
0,3159 |
|
|
3,0013 |
10,8 |
0,4490 |
|
4,0595 |
13,0 |
0,5404 |
|
5,1180 |
15,3 |
0,6360 |
|
6,1385 |
18,2 |
0,7566 |
Berdasarkan data yang diperoleh selama penelitian, grafik ketergantungan kandungan tanin tertentu pada massa sampel bahan tanaman yang dipelajari diplot (Gbr. 2) dan koefisien korelasi dihitung.
Beras. Gambar 2. Grafik ketergantungan jumlah tanin yang ditemukan pada berat sampel bahan baku kering udara dari manset biasa
Koefisien korelasi yang dihitung tidak melebihi 0,95, yang menunjukkan linearitas hasil penentuan kandungan zat yang dipelajari dari berat sampel bahan tanaman yang dianalisis dalam kisaran konsentrasi yang ditunjukkan.
Hasil penentuan kuantitatif tanin dalam bahan baku kering udara herba manset biasa secara spektrofotometri disajikan dalam tabel. 4.
Tabel 4. Hasil Penentuan Tanin Secara Kuantitatif Secara Spektrofotometri
|
Berat sampel, g |
Solusi Kepadatan Optik |
Jumlah tanin yang ditemukan, % (X saya) |
Karakteristik metrologi |
|
|
1,02755 |
0,5957 |
7,30920 |
7,87340 |
7,84%
|
|
0,99745 |
0,6130 |
7,52147 |
8,34656 |
|
|
1,0068 |
0,5678 |
6,96687 |
7,65932 |
|
|
0,99580 |
0,5742 |
7,04539 |
7,83120 |
|
|
1,0060 |
0,5750 |
7,05521 |
7,76261 |
|
|
1,00670 |
0,5617 |
6,89202 |
7,57779 |
Kandungan rata-rata tanin dalam bahan baku nabati adalah 7,8% dengan standar deviasi relatif (0,034%) tidak melebihi 2%, yang mencirikan konvergensi hasil yang memuaskan.
Metode penambahan digunakan untuk menentukan kebenaran metode. Untuk tujuan ini, 1 ml larutan tanin CO 0,05%, 0,1% dan 0,15% ditambahkan ke labu dengan ekstraksi aseton primer, dan kemudian tanin dikuantifikasi tiga kali untuk setiap konsentrasi. Hasil penelitian disajikan dalam tabel. lima.
Pemilik paten RU 2439568:
Invensi ini berkaitan dengan bidang farmakologi dan dapat digunakan untuk menentukan tanin dalam bahan tanaman. Metode untuk menentukan tanin dalam bahan baku nabati terdiri dari mengekstraksi sampel bahan baku dengan air selama perebusan, pendinginan, penyaringan, mengukur kerapatan optik sampel alikuot pada panjang gelombang 277 nm dan menghitung kandungan jumlah semua tanin. menurut formula tertentu, kemudian ditambahkan ke sampel alikuot filtrat. Larutan kolagen 1% dalam asam asetat 1% dikocok, disaring, densitas optik filtrat diukur pada panjang gelombang 277 nm dan kandungan endapan tanin dihitung dengan menggunakan rumus tertentu. Metode tersebut memungkinkan untuk meningkatkan akurasi penentuan kandungan tanin dalam bahan baku nabati dan secara selektif menentukan tanin terendapkan dan tidak terendapkan dalam bahan baku nabati.
Invensi ini berkaitan dengan industri farmasi, bidang farmakognosi dan kimia farmasi, serta dapat digunakan untuk mengontrol kualitas bahan tanaman yang mengandung tanin.
Metode yang dikenal untuk penentuan tanin dalam bahan tanaman obat (MPR) dengan koulometri dalam hal tanin (SG Abdullina dan lain-lain. Penentuan tanin dalam bahan tanaman obat secara koulometrik. // Farmasi. No. 4. - 2010. - P. 13 -15).
Kerugian dari metode ini adalah penggunaan peralatan tambahan (coulometer), titran spesifik (kalium hipoiodida), yang dalam hal sifat pengoksidasi mendekati kalium permanganat dan tidak memungkinkan untuk membedakan antara tanin dengan berat molekul tinggi dan rendah.
Ada juga dikenal metode untuk menentukan kandungan tanin dan turunan asam galat dalam teh dengan konduktometri (Paten No. 2127878. Metode untuk penentuan terpisah tanin dan katekin (dalam hal asam galat) dalam teh. M.: 1999).
Kerugian dari metode ini adalah penggunaan pelarut organik beracun (isobutil alkohol), serta penggunaan reaksi warna dengan Fe (III), yang produknya berupa senyawa berwarna yang warnanya tidak stabil dari waktu ke waktu.
Ada juga dikenal metode untuk penentuan kuantitatif tanin dalam hal tanin dalam daun skumpia dan sumac dengan metode kompleksometri setelah pengendapan tanin dengan garam seng (GOST 4564-79. Daun skumpia. Spesifikasi; GOST 4565- 79. Daun sumac.Spesifikasi).
Kelemahan metode ini adalah lamanya waktu analisis dan sulitnya menentukan titik ekivalen.
Ada juga dikenal metode untuk penentuan kuantitatif tanin dengan metode spektrofotometri setelah reaksi dengan reagen Folin-Ciocalteu dalam hal asam galat (Pedoman untuk metode kontrol kualitas dan keamanan suplemen makanan biologis aktif. Panduan R 4.1.1672 -03. - M. - 2004 - hal.94-95).
Kerugian dari metode ini adalah tidak mungkinnya penentuan tanin dengan berat molekul rendah dan tinggi secara terpisah.
Metode yang paling mendekati adalah bahwa tanin ditentukan oleh spektrofotometri dalam hal asam galat (Pedoman untuk metode pengendalian kualitas dan keamanan suplemen makanan yang aktif secara biologis. Panduan. R 4.1.1672-03. - M. - 2004 g. - P .120).
Kerugian dari metode ini adalah pengenceran sampel uji yang berulang, akibatnya konsentrasi tanin dalam larutan tidak ditentukan dengan baik. Juga dalam metode ini, solusi referensi adalah solusi buffer, yang membuat analisis menjadi sulit. Selain itu, metode ini tidak memungkinkan untuk secara terpisah menentukan kandungan tanin dengan berat molekul rendah dan berat molekul tinggi.
Tujuan dari penemuan ini adalah untuk meningkatkan akurasi penentuan tanin dan kemungkinan penentuan terpisah tanin yang diendapkan dan tidak diendapkan dalam bahan baku nabati.
Masalahnya diselesaikan dengan fakta bahwa sampel bahan baku diekstraksi dengan air selama perebusan, pendinginan, penyaringan, kerapatan optik sampel alikuot diukur pada panjang gelombang 277 nm dan kandungan jumlah semua tanin dihitung. dengan rumus
50 - volume labu, ml,
W - kadar air bahan baku, %,
1% larutan kolagen dalam 1% asam asetat ditambahkan ke alikuot filtrat, dikocok, disaring, kerapatan optik filtrat diukur pada panjang gelombang 277 nm dan kandungan tanin yang diendapkan dihitung dengan rumus
D 1 - kerapatan optik larutan 1,
D 2 - kerapatan optik larutan 2,
m nav - berat sampel bahan baku, g,
V a - volume sampel alikuot, ml,
250 - total volume ekstraksi, ml,
50 - volume labu, ml,
508 - indeks penyerapan spesifik asam galat (densitas optik larutan 1% asam galat 1 mg / ml),
W - kadar air bahan baku, %.
Secara praktis, cara tersebut dilakukan sebagai berikut. Sekitar 2,0 (ditimbang dengan cermat) bahan baku yang dihancurkan, diayak melalui saringan dengan diameter lubang 3 mm, ditempatkan dalam labu berkapasitas 500 ml, tuangkan 250 ml air yang dipanaskan hingga mendidih dan didihkan selama 30 menit di bawah refluks dengan sesekali diaduk. Dinginkan hingga suhu kamar, encerkan dengan air hingga 250 ml, saring melalui kapas agar partikel bahan baku tidak masuk ke dalam ekstrak air. 50 ml filtrat pertama dibuang.
1-4 ml ekstrak air ditempatkan dalam labu ukur 50 ml, disesuaikan dengan tanda dengan air (larutan 1). Ukur kerapatan optik larutan 1 pada panjang gelombang 277 nm. Air digunakan sebagai pembanding.
30 ml ekstrak air ditempatkan dalam wadah pengukur dengan kapasitas 50 ml, ditambahkan 2-10 ml reagen pengendapan, dikocok selama 30-60 menit, diendapkan, disaring. 1-4 ml filtrat yang dihasilkan dipindahkan ke dalam labu takar berkapasitas 50 ml, disesuaikan dengan tanda dengan air (larutan 2). Ukur kerapatan optik larutan 2 pada panjang gelombang 277 nm. Air digunakan sebagai pembanding.
Penemuan ini diilustrasikan dengan contoh-contoh berikut.
Contoh 1. Untuk analisis diambil bahan baku nabati - kulit kayu ek.
Sekitar 2,0 (ditimbang dengan tepat) kulit kayu ek mentah yang dihancurkan, diayak melalui saringan dengan diameter lubang 3 mm, ditempatkan dalam labu 500 ml, dituangkan dengan 250 ml air yang dipanaskan hingga mendidih dan direbus selama 30 menit di bawah refluks sambil sesekali diaduk . Dinginkan hingga suhu kamar, encerkan dengan air hingga 250 ml, saring melalui kapas agar partikel bahan baku tidak masuk ke dalam ekstrak air. 50 ml filtrat pertama dibuang.
2 ml ekstrak air kulit kayu ek dimasukkan ke dalam labu takar berkapasitas 50 ml, disesuaikan dengan air sampai tanda (larutan 1). Ukur kerapatan optik larutan 1 pada panjang gelombang 277 nm. Air digunakan sebagai pembanding. D 1 untuk kulit kayu ek adalah 0,595.
30 ml ekstrak air ditempatkan dalam wadah pengukur dengan kapasitas 50 ml, ditambahkan 2 ml reagen pengendapan, dikocok selama 30 menit, diendapkan, disaring. 2 ml filtrat yang diperoleh dipindahkan ke dalam labu takar berkapasitas 50 ml, disesuaikan dengan tanda dengan air (larutan 2). Ukur kerapatan optik larutan 2 pada panjang gelombang 277 nm. Air digunakan sebagai pembanding. D 2 untuk kulit kayu ek adalah 0,276.
Contoh 2. Untuk analisis, diambil bahan tanaman dari rimpang serpentin.
Sekitar 2,0 (ditimbang dengan cermat) bahan baku rimpang serpentin yang dihancurkan, diayak melalui saringan dengan diameter lubang 3 mm, ditempatkan dalam labu dengan kapasitas 500 ml, tuangkan 250 ml air yang dipanaskan hingga mendidih dan didihkan selama 30 menit di bawah refluks sambil sesekali diaduk. Dinginkan hingga suhu kamar, encerkan dengan air hingga 250 ml, saring melalui kapas agar partikel bahan baku tidak masuk ke dalam ekstrak air. 50 ml filtrat pertama dibuang.
1 ml ekstrak air dari rimpang gelung dimasukkan ke dalam labu takar berkapasitas 50 ml, disesuaikan dengan air sampai tanda (larutan 1). Ukur kerapatan optik larutan 1 pada panjang gelombang 277 nm. Air digunakan sebagai pembanding.
30 ml ekstrak air ditempatkan dalam wadah volumetrik 50 ml, ditambahkan 7 ml reagen pengendapan, dikocok selama 60 menit, diendapkan, disaring. 1 ml filtrat yang diperoleh dipindahkan ke dalam labu takar berkapasitas 50 ml, disesuaikan dengan tanda dengan air (larutan 2). Ukur kerapatan optik larutan 2 pada panjang gelombang 277 nm. Air digunakan sebagai pembanding.
Metode yang diusulkan meningkatkan akurasi penentuan kandungan tanin dalam bahan baku nabati dan secara selektif menentukan tanin terendapkan dan tidak terendapkan dalam bahan baku nabati.
Sebuah metode untuk menentukan tanin dalam bahan baku nabati dalam hal asam galat, yang terdiri dari mengekstraksi sampel bahan baku dengan air selama perebusan, pendinginan, penyaringan, mengukur kerapatan optik sampel alikuot pada panjang gelombang 277 nm dan menghitung kandungan jumlah semua tanin menurut rumus: 
di mana x a - kandungan jumlah tanin dalam hal asam galat,%;
50 - volume labu, ml;
508 - indeks penyerapan spesifik asam galat (densitas optik larutan 1% asam galat 1 mg/ml);
W - kadar air bahan baku, %,
larutan kolagen 1% dalam asam asetat 1% ditambahkan ke alikuot filtrat, dikocok, disaring, kerapatan optik filtrat diukur pada panjang gelombang 277 nm, dan kandungan tanin yang diendapkan dihitung menggunakan rumus : 
di mana X adalah kandungan tanin yang diendapkan dalam hal asam galat,%;
D 1 - kerapatan optik larutan 1;
D 2 - kerapatan optik larutan 2;
m nav - massa sampel bahan baku, g;
V a - volume sampel alikuot, ml;
250 - total volume ekstraksi, ml;
50 - volume labu, ml;
508 - indeks penyerapan spesifik asam galat (densitas optik larutan asam galat 1% 1 mg/ml);
W - kadar air bahan baku, %.
Paten serupa:
Invensi ini berkaitan dengan kedokteran, yaitu psikoneurologi, dan menjelaskan metode untuk memprediksi pemulihan fungsi neurologis pada pasien pada periode akut stroke iskemik dengan melakukan studi klinis dan biokimia dari konsentrasi total albumin (TAC) dalam serum darah dalam g /l, di mana tambahan 5-7 Pada hari penyakit, konsentrasi efektif albumin (ECA) ditentukan, cadangan pengikatan albumin (ARA) dihitung, dan jika indikator ini kurang dari satu, hasil negatif dari pemulihan fungsi neurologis pada pasien pada periode akut stroke iskemik diprediksi.
Invensi ini berkaitan dengan kedokteran, penelitian biologi dalam onkologi, dan dapat digunakan untuk menentukan perkembangan proses keganasan pada tumor otak setelah perawatan bedah.
Invensi ini berkaitan dengan bidang kedokteran, khususnya onkologi, dan menjelaskan metode untuk mengevaluasi efektivitas kemoterapi neoadjuvant untuk kanker kandung kemih dengan memeriksa pasien, di mana intensitas maksimum autofluoresensi jaringan tumor di wilayah spektrum hijau dicatat pada tahap diagnosis primer dan 1 bulan setelah kemoterapi pra operasi dan dengan peningkatan nilai pasien dari intensitas maksimum autofluoresensi jaringan tumor sebesar 15% dari awal dan lebih, efektivitas pengobatan dinilai sebagai parsial regresi proses tumor, dengan tidak adanya perubahan intensitas autofluoresensi jaringan tumor dari yang awal, stabilisasi proses ditentukan, dengan penurunan intensitas autofluoresensi jaringan tumor sebesar 15% dan lebih dari catatan awal perkembangan proses tumor.
Memuat...