Tanini (tanini) su biljni fenolni spojevi visoke molekularne težine koji mogu taložiti proteine i imaju opor ukus.
Termin "tanini" se razvio kroz istoriju, zahvaljujući sposobnosti ovih jedinjenja da pretvore sirovu životinjsku kožu u izdržljivu kožu, otpornu na vlagu i mikroorganizme. Da se koristi ovaj termin službeno je predložio Seguin 1796. godine za označavanje u ekstraktima određenih biljaka tvari koje su sposobne za obavljanje procesa štavljenja.
Štavljenje je složena hemijska interakcija tanida sa molekulima kolagena - glavnim proteinom vezivnog tkiva. Svojstva štavljenja poseduju multinuklearni fenoli koji sadrže više od jednog hidroksila u molekulu. Sa ravnim rasporedom tanida na proteinskoj molekuli, između njih nastaju stabilne vodikove veze:
Fragment molekule proteina Fragment molekule tanida
Snaga interakcije tanida sa proteinom zavisi od broja vodoničnih veza i ograničena je veličinom molekula polifenolnog jedinjenja. Molekularna težina tanina može biti do 20 000. Istovremeno, u tanidima se nalaze 1-2 fenolne hidroksi grupe na 100 jedinica molekulske težine. Stoga je broj formiranih vodoničnih veza velik i proces štavljenja je nepovratan. Hidrofobni radikali, orijentisani na spoljašnje okruženje, čine kožu nedostupnom vlazi i mikroorganizmima.
Nisu svi tanini sposobni za pravo tamnjenje. Spojevi s molekulskom težinom od 1000 ili više razlikuju se po ovom svojstvu. Polifenolna jedinjenja sa masom manjom od 1000 nisu sposobna za štavljenje kože i imaju samo adstringentno dejstvo.
Tanini se široko koriste u industriji. Dovoljno je reći da svjetska proizvodnja tanida prelazi 1.500.000 tona godišnje, a udio biljnih tanida je i do 50-60% ukupne količine.
Rasprostranjenost u biljnom svijetu i uloga tanina u biljkama. Tanini se široko nalaze u predstavnicima prekrivenih i golosjemenjača, algama, gljivama, lišajevima, u limfoidima i paprati. Nalaze se u mnogim višim biljkama, posebno u dikotiledonima. Njihov najveći broj pronađen je kod niza predstavnika porodica Fabaceae, Myrtaceae, Rosaceae, Anacardiaceae, Fagaceae, Polygonaceae.
Tanini u biljci nalaze se u ćelijskim vakuolama i tokom ćelijskog starenja se adsorbuju na ćelijskim zidovima. Akumuliraju se u velikim količinama u podzemnim organima, kori, ali mogu biti i u listovima i plodovima.
Tanini obavljaju uglavnom zaštitne funkcije u biljkama. Mehaničkim oštećenjem tkiva počinje pojačano stvaranje tanina, praćeno njihovom oksidativnom kondenzacijom u površinskim slojevima, čime se biljka štiti od daljnjih oštećenja i negativnog utjecaja patogena. Zbog velike količine fenolnih hidroksila, tanini imaju izražena bakteriostatska i fungicidna svojstva, čime štite biljne organizme od raznih bolesti.
Klasifikacija tanina. G. Procter je 1894. godine, proučavajući krajnje produkte pirolize tanina, otkrio 2 grupe spojeva - pirogaličnu (formira se pirogalol) i pirokatehol (pirokatehol nastaje tokom razgradnje):
K. Freidenberg je 1933. razjasnio klasifikaciju G. Proctera. On je, kao i Procter, klasificirao tanine prema krajnjim proizvodima njihovog raspadanja, ali ne pod uvjetima pirolize, već pod kiselom hidrolizom. U zavisnosti od sposobnosti hidrolize, K. Freudenberg je predložio da se razlikuju dve grupe tanina: hidrolizuju i kondenzuju. Trenutno se češće koristi klasifikacija K. Freudenberga.
Za grupu tanini koji se mogu hidrolizovati Jedinjenja se konstruišu prema vrsti estera i razlažu se na sastavne komponente tokom kisele hidrolize. Centralna karika je najčešće glukoza, rjeđe drugi šećeri ili aliciklična jedinjenja (na primjer, kininska kiselina). Alkoholni hidroksili centralnog ostatka mogu biti povezani eterskom vezom sa galnom kiselinom, formirajući tako grupu galotanini, ili elaginska kiselina, formirajući grupu elagitanini.
Galotanini- estri galne kiseline, koji se najčešće nalaze u grupi hidrolizabilnih tanina. Postoje mono-, di-, tri-, tetra-, penta- i polihaloil eteri. Predstavnik monogaloil etera je b-D-glukogalin:
Primjer polihaloil etera je kineski tanin, čiju je strukturu prvi put ustanovio Hawors 1963. godine:
Ellagitan su estri šećera i elaginske kiseline ili njihovi derivati. Elaginska kiselina nastaje oksidacijom dvaju molekula galne kiseline u heksaoksidifensku kiselinu, koja odmah stvara lakton - elaginsku kiselinu:
Kao iu prethodnom slučaju, glukoza je najčešće šećerna komponenta elagitanina.
Estri galne kiseline bez šećera su estri galne kiseline i komponente bez šećera kao što je kininska kiselina, hidroksicimetna kiselina, itd. Primjer ove grupe supstanci je 3,4,5-trihaloilkinska kiselina.
Kondenzirani tanini Razlikuju se od hidrolizabilnih po tome što se tijekom kisele hidrolize ne raspadaju na sastavne komponente, već naprotiv, pod djelovanjem mineralnih kiselina nastaju gusti crveno-smeđi proizvodi polimerizacije - flobafeni.
Kondenzirane tanine uglavnom formiraju katehini i leukocianidini, i, mnogo rjeđe, drugi reducirani oblici flavonoida. Kondenzirani tanini ne pripadaju grupi "Glikozidi": u kondenzovanim taninima nema komponente šećera.
Do stvaranja kondenziranih tanina može doći na dva načina. K. Freidenberg (30-te godine XX vijeka) ustanovio je da je stvaranje kondenziranih tanina neenzimski proces autokondenzacije katehina ili leukocianidina (ili njihove unakrsne kondenzacije) kao rezultat izlaganja atmosferskom kisiku, toplini i kiseloj sredini. . Autokondenzacija je praćena pucanjem piranskog prstena katehina i C-2 atom ugljika jedne molekule je povezan vezom ugljik-ugljik sa C-6 ili C-8 atomom ugljika druge molekule. U ovom slučaju može se formirati dovoljno dugačak lanac:
Prema drugom naučniku, D. Hatueiju, kondenzirani tanini mogu nastati kao rezultat enzimske oksidativne kondenzacije molekula tipa “glava-rep” (prsten A do prstena B) ili “od repa do repa” (prsten B za zvoniti B):
Biljke koje sadrže kondenzirane tanine moraju imati svoje prekursore - slobodne katehine ili leukocianidine. Uobičajeni su miješani kondenzirani polimeri katehina i leukocianidina.
U pravilu su u biljkama istovremeno prisutni tanini i kondenzovanih i hidrolizabilnih grupa.
Fizičko-hemijska svojstva tanina. Tanini imaju veliku molekularnu težinu - do 20 000. Prirodni tanini, uz nekoliko izuzetaka, do danas su poznati samo u amorfnom stanju. Razlog tome je što su ove tvari mješavine spojeva koji su slični po hemijskoj strukturi, ali se razlikuju po molekularnoj težini.
Tanini su žuta ili smeđa jedinjenja koja formiraju koloidne rastvore u vodi. Rastvorljiv u etanolu, acetonu, butanolu i nerastvorljiv u rastvaračima sa izraženom hidrofobnošću - hloroformu, benzenu itd.
Galotanini su slabo rastvorljivi u hladnoj vodi i relativno dobro rastvorljivi u toploj vodi.
Tanini imaju optičku aktivnost i lako se oksidiraju na zraku.
Zbog prisustva fenolnih hidroksila, talože se solima teških metala i formiraju obojena jedinjenja sa Fe +3.
Izolacija tanina iz biljnog materijala. Budući da su tanini mješavina različitih polifenola, njihova izolacija i analiza predstavlja određenu poteškoću.
Često se za dobijanje ukupnih tanina sirovina ekstrahuje toplom vodom (tanini su slabo rastvorljivi u hladnoj vodi), a ohlađeni ekstrakt se tretira organskim rastvaračem (hloroform, benzol, itd.) kako bi se uklonile lipofilne supstance. Zatim se tanini talože solima teških metala, nakon čega slijedi uništavanje kompleksa sa sumpornom kiselinom ili sulfidima.
Za dobivanje frakcije tanina, slične po kemijskoj strukturi, možete koristiti ekstrakciju sirovina dietil eterom, metil ili etil alkoholima uz prethodno uklanjanje lipofilnih komponenti pomoću otapala s izraženom hidrofobnošću - petrolej eter, benzol, kloroform.
Izolacija nekih komponenti tanina precipitacijom iz vodenih ili vodeno-alkoholnih otopina sa solima olova je široko rasprostranjena. Nastali precipitati se zatim tretiraju razrijeđenom sumpornom kiselinom.
Prilikom izdvajanja pojedinih komponenti tanina koriste se hromatografske metode: adsorpciona hromatografija na celulozi, poliamidu; jonska izmjena na raznim kationskim izmjenjivačima; distribucija na silika gelu; gel filtracija na molekularnom situ.
Identifikacija pojedinih komponenti tanina vrši se hromatografijom na papiru ili u tankom sloju sorbenta, spektralnom analizom, kvalitativnim reakcijama i proučavanjem produkata cijepanja.
Kvalitativna analiza tanina. Kvalitativne reakcije na tanine mogu se podijeliti u dvije grupe: reakcije taloženja i reakcije boje. Za izvođenje visokokvalitetnih reakcija sirovine se najčešće ekstrahiraju toplom vodom.
Reakcije precipitacije. 1. Kada tanini stupe u interakciju sa 1% rastvorom želatine pripremljenom u 10% rastvoru natrijum hlorida, formira se talog ili rastvor postaje zamućen. Kada se doda višak želatina, zamućenost nestaje.
2. Tanidi daju obilne precipitacije sa alkaloidima (kofein, pahikarpin), kao i nekim azotnim bazama (urotropin, novokain, dibazol).
3. U interakciji sa 10% rastvorom olovnog acetata, tanini hidrolizabilne grupe formiraju flokulantni talog.
4. Kondenzirani tanini formiraju flokulantni talog u reakciji sa bromnom vodom.
Obojene reakcije. Tanini hidrolizabilne grupe sa rastvorom amonijum gvožđa stipse formiraju crno-plavo obojena jedinjenja, a kondenzovane grupe - crno-zelenu.
Ako biljka istovremeno sadrži tanine i hidrolizabilne i kondenzovane grupe, tada se prvo hidrolizabilni tanidi talože sa 10% rastvorom olovnog acetata, talog se odfiltrira, a zatim filtrat reaguje sa rastvorom amonijum gvožđa stipse. Pojava tamnozelene boje ukazuje na prisustvo kondenzovanih grupnih supstanci.
Kvantifikacija tanina. Uprkos činjenici da postoji oko 100 različitih metoda za kvantitativno određivanje tanina, precizna kvantitativna analiza ove grupe biološki aktivnih supstanci je teška.
Među široko korištenim metodama za kvantitativno određivanje tanina može se izdvojiti sljedeće.
1. Gravimetrijski - baziran na kvantitativnom taloženju tanina želatinom, solima teških metala itd.
2. Titrimetrijski - baziran na oksidativnim reakcijama, prvenstveno sa kalijum permanganatom.
3. Fotoelektrični kolorimetrijski – baziran na sposobnosti tanina da formiraju stabilne obojene produkte reakcije sa solima željeznog oksida, fosfovolframske kiseline itd.
Državna farmakopeja X i XI izdanja preporučila je titrimetrijsku metodu za kvantitativno određivanje tanina.
Sadržaj
OFS.1.5.3.0008.15 Određivanje sadržaja tanina u ljekovitim biljnim sirovinama i ljekovitim biljnim preparatima
Umjesto čl. GF XI
Određivanje sadržaja tanina u ljekovitim biljnim sirovinama i preparatima ljekovitog bilja vrši se titrimetrijskim i/ili spektrofotometrijskim metodama. Titrimetrijska metoda je određivanje količine tanina u smislu tanina, a spektrofotometrijska metoda vam omogućava da odredite količinu tanina u smislu pirogalola.
Metoda 1. Određivanje količine tanina u odnosu na tanin
Oko 2 g (precizno odmereno) zgnječenog lekovitog biljnog materijala ili lekovitog biljnog preparata, prosejanog kroz sito sa otvorima od 3 mm, stavi se u konusnu tikvicu zapremine 500 ml, ulije se 250 ml vode zagrejane do ključanja i kuvano pod refluksom na električnoj peći sa zatvorenom spiralom 30 minuta uz periodično mešanje. Dobiveni ekstrakt se ohladi na sobnu temperaturu i filtrira kroz vatu u volumetrijsku tikvicu kapaciteta 250 ml kako čestice sirovine/preparata ne dođu u tikvicu, dovedite volumen otopine do oznake vodom i promešati. 25,0 ml dobijenog vodenog ekstrakta stavi se u konusnu tikvicu kapaciteta 1000 ml, doda se 500 ml vode, 25 ml rastvora indigosulfonske kiseline i titrira uz stalno mešanje kalijum permanganata sa rastvorom od 0,02 M do zlatnožute boje. obojenost.
Paralelno se radi i kontrolni eksperiment: 525 ml vode, 25 ml rastvora indigosulfonske kiseline stavi se u konusnu tikvicu kapaciteta 1000 ml i titrira uz stalno mešanje kalijum permanganata sa rastvorom od 0,02 M do zlatno žute boje. obojenost.
1 ml rastvora kalijum permanganata 0,02 M odgovara 0,004157 g tanina u smislu tanina.
(V – V 1 ) 0,004157 250 100 100
X = ————————————————— ,
a· 25 · (100 - W)
V- zapremina rastvora kalijum permanganata 0,02 M, utrošena za titraciju vodenog ekstrakta, ml;
V 1 - zapremina rastvora kalijum permanganata 0,02 M, utrošena za titraciju u kontrolnom eksperimentu, ml;
0,004157 - količina tanina koja odgovara 1 ml rastvora kalijum permanganata 0,02 M (u smislu tanina), g;
a- masa sirovine ili biljnog lijeka, g;
W- sadržaj vlage u ljekovitom bilju ili biljnim lijekovima, %;
250 - ukupna zapremina ekstrakcije vode, ml;
25 - zapremina vodenog ekstrakta uzetog za titraciju, ml.
Bilješka.Priprema rastvora indigosulfonske kiseline. 1 g indigo karmina rastvori se u 25 ml koncentrovane sumporne kiseline, zatim se doda još 25 ml koncentrovane sumporne kiseline i razblaži vodom do 1000 ml, pažljivo sipajući dobijeni rastvor u vodu, u odmernoj tikvici kapaciteta od 1000 ml, promešati.
Metoda 2. Određivanje količine taninau smislu pirogalola
Oko 0,5 - 1,0 g (tačno izvaganog ili drugačije navedenog u farmakopejskoj monografiji ili regulatornoj dokumentaciji) zgnječenog ljekovitog biljnog materijala ili biljnog lijeka, prosijanog kroz sito s otvorom od 0,18 mm, stavlja se u konusnu tikvicu kapaciteta 250 ml, dodati 150 ml vode i refluksovati u vodenom kupatilu 30 min. Dobiveni vodeni ekstrakt u tikvici se ohladi na sobnu temperaturu, filtrira kroz vatu u volumetrijsku tikvicu kapaciteta 250 ml tako da čestice sirovine ne dođu u tikvicu, volumen otopine se dovede do označite vodom i promiješajte. Dobijeni rastvor se filtrira kroz papirni filter prečnika oko 125 mm, pri čemu se prvih 50 ml filtrata odbaci.
Određivanje se vrši na tamnom mjestu.
Određivanje količine tanina... 5,0 ml filtrata stavi se u odmjernu tikvicu od 25 ml, volumen otopine se dovede do oznake vodom i pomiješa. Stavite 2,0 ml dobijenog rastvora u volumetrijsku tikvicu od 25 ml, dodajte 1 ml fosforomolibden-volframovog reagensa, 10 ml vode i dovedite zapreminu rastvora do oznake sa natrijum karbonatom sa 10,6% rastvorom (probni rastvor) . Nakon 30 minuta, izmjerite optičku gustinu ispitnog rastvora (A1) na spektrofotometru na talasnoj dužini od 760 nm u kiveti sa debljinom sloja od 10 mm, koristeći vodu kao referentni rastvor.
Određivanje količine tanina koje ne adsorbuje puder za kožu. U 10,0 ml filtrata dodati 0,1 g praha za kožu, mešati dobijenu mešavinu 60 min i filtrirati kroz papirni filter. 5,0 ml dobijenog filtrata stavi se u odmjernu tikvicu od 25 ml, volumen otopine se dovede do oznake vodom i pomiješa. Stavite 2,0 ml dobijenog rastvora u volumetrijsku tikvicu od 25 ml, dodajte 1 ml fosforomolibden-volfram reagensa, 10 ml vode, razblažite zapreminu rastvora do oznake sa natrijum karbonatom sa 10,6% rastvorom i promešajte (ispitni rastvor ). Nakon 30 minuta, izmjerite optičku gustinu ispitnog rastvora (A2) na spektrofotometru na talasnoj dužini od 760 nm u kiveti sa debljinom sloja od 10 mm, koristeći vodu kao referentni rastvor.
Optička gustina standardnog rastvora se meri paralelno.
U odmjernu tikvicu od 25 ml stavi se 2,0 ml rastvora pirogalola CO, doda se 1 ml fosforomolibden-volfram reagensa, 10 ml vode, zapremina rastvora se dovede do oznake natrijum karbonata sa rastvorom od 10,6% i promešano (standardni rastvor). Nakon 30 minuta izmjerite optičku gustinu standardnog rastvora (A 3) na spektrofotometru na talasnoj dužini od 760 nm u kiveti sa debljinom sloja od 10 mm, koristeći vodu kao referentni rastvor.
A 1- optička gustina ispitnog rastvora pri određivanju količine tanina;
A 2 - optička gustoća ispitne otopine pri određivanju količine tanina koji se ne adsorbira u puderu kože, u smislu pirogalola;
A 3— optička gustina standardnog rastvora;
a- izvagana količina ljekovitog bilja ili biljnog lijeka, g;
a 0 - izmjerena količina pirogalola CRM, g;
W- sadržaj vlage u ljekovitom bilju ili biljnim lijekovima,%.
Bilješka. Priprema otopine pirogalola CO... 0,05 g (tačno izvaganog) pirogalola CO stavi se u volumetrijsku tikvicu zapremine 100 ml, rastvori se u vodi, zapremina rastvora se vodom dovede do oznake i promeša. 5,0 ml dobijenog rastvora stavi se u odmernu tikvicu od 100 ml, zapremina rastvora se dovede do oznake vodom i promeša. Rastvor se koristi svježe pripremljen.
Uvod
U biljkama, jedna od najčešćih grupa biološki aktivnih supstanci (BAS) su tanini (tanini), koji imaju širok spektar farmakološke aktivnosti.Taniniimaju hemostatsko, adstringentno, protuupalno, antimikrobno djelovanje, a također pokazuju visoku aktivnost P-vitamina, antisklerotične i antihipoksične učinke. Kondenzirani tanini su antioksidansi i imaju antitumorski učinak. Taninikoristi se kao protuotrov kod trovanja glikozidima, alkaloidima, solima teških metala. U medicini se tanini koriste u liječenju bolesti poput stomatitisa, gingivitisa, faringitisa, tonzilitisa, kolitisa, enterokolitisa, dizenterije, koriste se i kod opekotina, krvarenja materice, želuca i hemoroida..
Definicija sadržajatanini su važna komponenta u uspostavljanju kvaliteta biljnog materijala koji sadrži tanine. Postoje različite metode za određivanje tanina, ali se najčešće koriste titrimetrijske i spektrofotometrijske metode.
svrha rada- validaciona procjena metoda za kvantitativno određivanje tanina u smislu konvergencije, ispravnosti, linearnosti.
Materijali i metode istraživanja
Kao predmet istraživanja korištena je sirovina - zračno suha trava.obična manžetna (Alchemilla vulgaris L.) fam. Rosaceae (Rosaceae).
Za validacijsku procjenu metoda za kvantitativno određivanje tanina u zračno suhoj traviodabrane su dvije metode: permanganatometrijska titracija i spektrofotometrijsko određivanje na osnovu reakcije sa Folin-Ciocalteu reagensom. Izbor tehnika je opravdan učestalošću njihove upotrebe u praksi.
Vazdušno suva travaobična manžetna nabavljeno u rujna 2015. u Primorskom okrugu Arhangelske regije, koji je bio sirovina za istraživanje i kvantitativno određivanje tanina (tanina).
Metoda permanganatometrijskog određivanja je farmakopejska, tjbaziran na reakciji oksidacije tanina sa rastvorom kalijum permanganata.Oko 2 g (precizno izvagane), usitnjene sirovine, prosijane kroz sito s otvorom od 3 mm, stavljeno je u konusnu tikvicu kapaciteta 500 ml, dodano 250 ml kipuće vode i kuhano pod refluksom na električnoj peći sa zatvorenom spiralom 30 minuta uz periodično mešanje. Dobijeni ekstrakt je ohlađen na sobnu temperaturu i tikvica od 250 ml je filtrirana kroz vatu tako da čestice sirovine ne dođu u tikvicu. Pipetirajte 25 ml dobijenog ekstrakta i prebaciteu drugu konusnu tikvicu kapaciteta 750 ml dodati 500 ml vode, 25 ml rastvora indigosulfonske kiseline i titrirati uz stalno mešanje rastvorom kalijumapermanganat (0,02 mol/l) do zlatno žute boje.
Paralelno je izveden i kontrolni eksperiment.
1 ml rastvora kalijum permanganata (0,02 mol/l) odgovara 0,004157 g tanina u smislu tanina.
Sadržaj tanina (X), u procentima, u odnosu na apsolutno suhe sirovine, izračunat je po formuli (1):
Gdje (1)
V je zapremina rastvora kalijum permanganata (0,02 mol/l) utrošenog za titraciju ekstrakcije, ml;
- zapremina rastvora kalijum permanganata (0,02 mol/l) utrošenog za titraciju u kontrolnom eksperimentu, ml;
0,004157 - količina tanina koja odgovara 1 ml rastvora kalijum permanganata (0,02 mol / l) (u smislu tanina), g;
250 - ukupna zapremina ekstrakcije, ml;
25 - zapremina ekstrakcije uzete za titraciju, ml.
m- težina sirovine, g;
W- gubitak mase tokom sušenja sirovina, g;
Za kvantitativno određivanje tanina spektrofotometrijom, oko 1 g (precizno izvaganog) ispitivanog biljnog materijala, usitnjenog do veličine čestica prolazeći kroz sita s otvorom od 1 mm, stavljeno je u konusnu tikvicu tankog presjeka sa kapaciteta 50 ml dodano je 25 ml mješavine aceton-voda u omjeru 7:3 (70% rastvor acetona). Boca je zatvorena i stavljena u laboratorijsku mešalicu (LAB PU-2, Rusija) na 60 minuta. Dobijeni ekstrakt je filtriran u volumetrijsku tikvicu od 50 ml i zapremina je dovedena do oznake sa 70% rastvorom acetona (rastvor A).
U volumetrijsku tikvicu kapaciteta 10 ml stavljen je 1 ml rastvora A, zapremina rastvora u tikvici je dovedena do oznake sa prečišćenom vodom (rastvor B).
U volumetrijsku tikvicu od 10 ml stavljeno je 0,5 ml rastvora B, dodato je 2 ml prečišćene vode, 0,25 ml Folen-Chocalteu reagensa, 1,25 ml 20% rastvora natrijum karbonata i zapremina rastvora je dovedena do oznake. sa vodom. Boca je ostavljena 40 minuta zaštićena od svjetlosti. Optička gustina rastvora određena je na talasnoj dužini od 750 nm. Kao referentno rješenje korištena je mješavina reagenasa bez dodavanja ekstrakcije.
Sadržaj tanina u ekstraktima iz biljnih sirovina izračunat je iz vrijednosti kalibracionog grafikona za čiju smo konstrukciju koristili otopinu standardnog uzorka CO tanina od 0,1 mg/ml. U tu svrhu 0,05 g (tačne težine) CO tanina stavljeno je u odmjernu tikvicu od 100 ml, rastvoreno u 30 ml vode, a zapremina u tikvici je dovedena do oznake istim rastvaračem (rastvor A).
1 ml dobijenog rastvora prebačen je u volumetrijsku tikvicu od 10 ml. Zapremina rastvora u tikvici je dovedena do oznake sa vodom (rastvor B).
Serija rješenja koja sadrže po 1; 2; 3; 4; 5 μg/ml CO tanina pripremljeno je stavljanjem izvaganih porcija otopine B u volumetrijske tikvice od 10 ml, dodani su Folin – Chocalteu reagens i 20% vodeni rastvor natrijum karbonata, a zapremina rastvora u tikvici je dovedena do označiti vodom.
Rastvori su pomiješani, tikvice su zatvorene i držane na sobnoj temperaturi, zaštićene od svjetlosti 40 min.
Optička gustina dobijenih rastvora određena je spektrofotometrijski u kvarcnim kivetama sa debljinom sloja od 1 cm na talasnoj dužini od 725 nm u odnosu na referentni rastvor.
Referentni rastvor je bila mešavina reagensa bez dodatka CO tanina (rastvor B).
Na osnovu rezultata istraživanja izgrađen je graf zavisnosti optičke gustoće od koncentracije tanina (sl. 1).
Uzimajući u obzir dobijene vrijednosti, izračunat je zbir tanina u odnosu na tanin prema formuli:
, gdje
rezultate
Rezultati kvantitativnog određivanja tanina titracijom prikazani su u tabeli. 1.
Tabela 1. Rezultati kvantitativnog određivanja tanina permanganatometrijom
| Težina uzorka biljnih sirovina, g | Zapremina kalijum permanganata (0,02 mol/l), utrošena za titraciju dobijenog ekstrakta iz biljnih sirovina, ml | Količina tanina,% (X i) | |
|
2,10250 |
15,34892 |
15,72%
|
|
|
2,03255 |
15,21262 |
||
|
2,18345 |
15,84713 |
||
|
2,24350 |
16,24333 |
||
|
2,12465 |
15,85257 |
||
|
2,07055 |
15,80574 |
Prosječna vrijednost sadržaja tanina u sirovini iznosila je 15,7%. Izračunata je vrijednost relativne standardne devijacije (0,024%), koja ne prelazi 2%, što karakteriše zadovoljavajuću konvergenciju rezultata.
Za utvrđivanje ispravnosti postupka korištena je metoda dodavanja. U tu svrhu, 1 ml 0,05%, 0,1% i 0,15% CO tanina je dodat u titracionu tikvicu i titriran tri puta za svaki slučaj. Rezultati istraživanja prikazani su u tabeli. 2.
Tabela 2. Određivanje ispravnosti metode permanganatometrijske titracije tanina
| Količina dodatog CO tanina, g | Težina sirovine, g | Izračunato količina tanina, g | Pronađena količina tanina, g | Stopa otvaranja,% | Metrološke karakteristike |
|
0,0005 |
2,2435 |
0,0357 |
0,0353 |
98,87 |
99,91%
|
|
2,1247 |
0,0339 |
0,0340 |
100,29 |
||
|
2,0706 |
0,0330 |
0,0337 |
102,12 |
||
|
0,001 |
2,2435 |
0,0362 |
0,0357 |
98,61 |
|
|
2,1247 |
0,0344 |
0,0340 |
98,84 |
||
|
2,0706 |
0,0335 |
0,0336 |
100,51 |
||
|
0,0015 |
2,2435 |
0,0367 |
0,0366 |
99,73 |
|
|
2,1247 |
0,0349 |
0,0353 |
101,14 |
||
|
2,0706 |
0,0340 |
0,0337 |
99,12 |
Dobijeni rezultati pokazuju da je izračunati Studentov koeficijent manji od tabelarne vrijednosti imetoda ne sadrži sistematsku grešku, što nam omogućava da zaključimo da je ispravna.
Za proučavanje linearnosti utvrđena je ovisnost pronađenih vrijednosti kvantitativnog sadržaja tanina od izvaganog dijela proučavanog biljnog materijala. U tu svrhu izvršili smo kvantitativno određivanje tanina u šest izvaganih porcija zračno suhe sirovine obične manžete, različite težine (tabela 3).
Tabela 3. Zavisnost utvrđenog sadržaja tanina od mase uzorka biljne sirovine permanganatometrijom
|
|
Zapremina kalijum permanganata korištenog za titraciju, ml |
|
|
2,0706 |
0,3159 |
|
|
3,0013 |
10,8 |
0,4490 |
|
4,0595 |
13,0 |
0,5404 |
|
5,1180 |
15,3 |
0,6360 |
|
6,1385 |
18,2 |
0,7566 |
Prema podacima dobijenim tokom istraživanja, urađen je grafikon zavisnosti određenog sadržaja tanina od mase uzorka ispitivanog biljnog materijala (slika 2) i izračunat koeficijent korelacije.
Rice. 2. Grafikon zavisnosti nađene količine tanina od težine uzorka vazdušno suhe sirovine manžetne obične
Izračunati koeficijent korelacije nije prelazio 0,95, što ukazuje na linearnost rezultata određivanja sadržaja ispitivanih supstanci iz mase uzorka analiziranog biljnog materijala u naznačenom opsegu koncentracija.
Rezultati kvantitativnog određivanja tanina u zračno suhoj sirovini travnate manžetne obične metodom spektrofotometrije prikazani su u tabeli. 4.
Tabela 4. Rezultati kvantitativnog određivanja tanina spektrofotometrijom
|
Težina uzorka, g |
Optička gustina rastvora |
Pronađena količina tanina,% (X i) |
Metrološke karakteristike |
|
|
1,02755 |
0,5957 |
7,30920 |
7,87340 |
7,84%
|
|
0,99745 |
0,6130 |
7,52147 |
8,34656 |
|
|
1,0068 |
0,5678 |
6,96687 |
7,65932 |
|
|
0,99580 |
0,5742 |
7,04539 |
7,83120 |
|
|
1,0060 |
0,5750 |
7,05521 |
7,76261 |
|
|
1,00670 |
0,5617 |
6,89202 |
7,57779 |
Prosječna vrijednost sadržaja tanina u biljnim sirovinama iznosi 7,8% sa relativnom standardnom devijacijom (0,034%) koja ne prelazi 2%, što karakteriše zadovoljavajuću konvergenciju rezultata.
Za utvrđivanje ispravnosti postupka korištena je metoda dodavanja. U tu svrhu je u tikvicu sa primarnom ekstrakcijom acetonom dodato 1 ml 0,05%, 0,1% i 0,15% CO rastvora tanina, a zatim je kvantitativno određivanje tanina izvršeno tri puta za svaku koncentraciju. Rezultati istraživanja prikazani su u tabeli. 5.
Nosioci patenta RU 2439568:
Pronalazak se odnosi na oblast farmakologije i može se koristiti za određivanje tanina u biljnim materijalima. Metoda za određivanje tanina u biljnim sirovinama sastoji se u tome što se uzorak sirovine ekstrahuje vodom tokom ključanja, hladi, filtrira, meri se optička gustina alikvotnog uzorka na talasnoj dužini od 277 nm i sadržaj zbir svih tanina se računa po određenoj formuli, zatim se u alikvot uzorka filtrata doda 1% rastvor kolagena u 1% sirćetnoj kiselini, promućka, filtrira, izmeri optička gustina filtrata na talasnoj dužini od 277 nm i izračuna se sadržaj precipitiranih tanina prema određenoj formuli. Metodom se poboljšava tačnost određivanja sadržaja tanina u biljnim sirovinama i selektivno određivanje precipitiranih i netaloženih tanina u biljnim sirovinama.
Pronalazak se odnosi na hemijsko-farmaceutsku industriju, oblast farmakognozije i farmaceutske hemije i može se koristiti za kontrolu kvaliteta biljnih sirovina koje sadrže tanine.
Poznata metoda za određivanje tanina u ljekovitim biljnim sirovinama (HP) metodom kulometrije u odnosu na tanin (SG Abdullina i dr. Kulometrijsko određivanje tanina u ljekovitim biljnim sirovinama. // Farmacija. br. 4. - 2010.). - str.13 -15).
Nedostatak ove metode je upotreba dodatne opreme (kulometar), specifičnog titranta (kalijev hipojodid), koji je po oksidacijskim svojstvima blizak kalijevom permanganatu i ne omogućava razlikovanje tanina visoke i niske molekularne mase.
Poznata je i metoda za određivanje sadržaja tanina i derivata galne kiseline u čaju konduktometrijom (Patent br. 2127878. Metoda za odvojeno određivanje tanina i katehina (u smislu galne kiseline) u čaju. M.: 1999.) .
Nedostatak ove metode je upotreba toksičnih organskih rastvarača (izobutil alkohola), kao i upotreba reakcije boje sa Fe (III), čiji je proizvod obojeno jedinjenje koje je vremenom nestabilno u boji.
Poznata je i metoda za kvantitativno određivanje tanina u pogledu tanina u listovima skumpije i sumaha kompleksometrijskom metodom nakon taloženja tanina sa solima cinka (GOST 4564-79. List Scumpia. Specifikacije; GOST 4565-79. list. Specifikacije).
Nedostatak ove metode je trajanje analize i teškoća određivanja tačke ekvivalencije.
Poznata je i metoda za kvantitativno određivanje tanina spektrofotometrijskom metodom nakon reakcije sa Folin-Chocalteu reagensom u smislu galne kiseline (Smjernice za metode kontrole kvaliteta i sigurnosti biološki aktivnih aditiva u hrani. Vodič. P 4.1. 1672-03 - M. - 2004. - str 94-95).
Nedostatak ove metode je nemogućnost odvojenog određivanja tanina niske i visoke molekulske mase.
Najbliži predloženoj metodi je da se tanini određuju spektrofotometrijski u odnosu na galičnu kiselinu (Smjernice za metode kontrole kvaliteta i sigurnosti biološki aktivnih aditiva u hrani. Vodič. R 4.1.1672-03. - M. - 2004. - str. 120). ).
Nedostatak ove metode je ponovljeno razrjeđivanje ispitnog uzorka, zbog čega je koncentracija tanina u otopini slabo određena. Takođe u ovoj metodi, referentno rešenje je pufer rastvor, što komplikuje analizu. Osim toga, ova metoda ne omogućava odvojeno određivanje sadržaja tanina niske molekulske mase i visoke molekularne mase.
Cilj pronalaska je da se poboljša tačnost određivanja tanina i mogućnost odvojenog određivanja precipitiranih i neprecipitiranih tanina u biljnim sirovinama.
Problem je riješen činjenicom da se uzorak sirovine ekstrahira vodom tokom ključanja, ohladi, filtrira, optička gustina alikvotnog uzorka se mjeri na talasnoj dužini od 277 nm, a sadržaj zbira svih tanina je izračunato pomoću formule
50 - zapremina tikvice, ml,
W - sadržaj vlage u sirovinama,%,
Alikvotnom uzorku filtrata se dodaje 1% rastvor kolagena u 1% sirćetnoj kiselini, promućka, filtrira, optička gustina filtrata se meri na talasnoj dužini od 277 nm i sadržaj precipitiranih tanina se izračunava po formuli
D 1 - optička gustina rastvora 1,
D 2 - optička gustina rastvora 2,
m nav - težina uzorka sirovine, g,
V a je zapremina alikvota uzorka, ml,
250 - ukupna zapremina ekstrakcije, ml,
50 - zapremina tikvice, ml,
508 - specifični indeks apsorpcije galne kiseline (optička gustina 1% rastvora galne kiseline 1 mg/ml),
W - sadržaj vlage u sirovinama,%.
U praksi se metoda provodi na sljedeći način. Oko 2,0 (tačno odmereno) zdrobljene sirovine, prosejane kroz sito prečnika otvora 3 mm, stavi se u tikvicu kapaciteta 500 ml, ulije se 250 ml vode zagrejane do ključanja i kuva 30 minuta. pod refluksom uz periodično mešanje. Ohladi se na sobnu temperaturu, dovede do 250 ml vodom, filtrira kroz vatu da čestice sirovine ne dođu u vodeni ekstrakt. Odbacite prvih 50 ml filtrata.
1-4 ml vodenog ekstrakta stavlja se u volumetrijsku tikvicu kapaciteta 50 ml, dovedenu do oznake vodom (rastvor 1). Izmjerite optičku gustoću otopine 1 na talasnoj dužini od 277 nm. Voda se koristi kao poređenje.
30 ml vodenog ekstrakta stavi se u posudu za merenje kapaciteta 50 ml, doda se 2-10 ml reagensa za taloženje, mućka 30-60 minuta, istaloži, filtrira. 1-4 ml dobijenog filtrata se prebaci u tikvicu kapaciteta 50 ml, dovedenu do oznake vodom (rastvor 2). Izmjerite optičku gustinu rastvora 2 na talasnoj dužini od 277 nm. Voda se koristi kao poređenje.
Pronalazak je ilustrovan sljedećim primjerima.
Primjer 1. Za analizu uzeta biljna sirovina - hrastova kora.
Oko 2,0 (tačno odmereno) zgnječene sirove hrastove kore, prosejane kroz sito prečnika otvora 3 mm, stavi se u tikvicu kapaciteta 500 ml, ulije se 250 ml vode zagrejane do ključanja i kuva 30 minuta. minuta pod refluksom uz periodično mešanje. Ohladi se na sobnu temperaturu, dovede do 250 ml vodom, filtrira kroz vatu da čestice sirovine ne dođu u vodeni ekstrakt. Odbacite prvih 50 ml filtrata.
2 ml vodenog ekstrakta hrastove kore stavlja se u volumetrijsku tikvicu kapaciteta 50 ml, dovedenu do oznake vodom (rastvor 1). Izmjerite optičku gustoću otopine 1 na talasnoj dužini od 277 nm. Voda se koristi kao poređenje. D 1 za hrastovu koru je 0,595.
30 ml vodenog ekstrakta stavi se u mjernu posudu kapaciteta 50 ml, doda se 2 ml reagensa za taloženje, mućka se 30 minuta, istaloži, filtrira. 2 ml dobijenog filtrata se prebaci u tikvicu kapaciteta 50 ml, dovedenu do oznake vodom (rastvor 2). Izmjerite optičku gustinu rastvora 2 na talasnoj dužini od 277 nm. Voda se koristi kao poređenje. D 2 za hrastovu koru je 0,276.
Primjer 2. Za analizu je uzet biljni materijal rizoma zavojnice.
Oko 2,0 (tačno izvagane) zdrobljene sirovine rizoma koturka, prosejanog kroz sito prečnika otvora od 3 mm, stavi se u tikvicu kapaciteta 500 ml, ulije se 250 ml vode zagrejane do ključanja i kuvano 30 minuta pod refluksom uz periodično mešanje. Ohladi se na sobnu temperaturu, dovede do 250 ml vodom, filtrira kroz vatu da čestice sirovine ne dođu u vodeni ekstrakt. Odbacite prvih 50 ml filtrata.
1 ml vodenog ekstrakta iz rizoma zavojnice stavlja se u volumetrijsku tikvicu kapaciteta 50 ml, dovedenu do oznake vodom (rastvor 1). Izmjerite optičku gustoću otopine 1 na talasnoj dužini od 277 nm. Voda se koristi kao poređenje.
30 ml vodenog ekstrakta stavi se u mjernu posudu kapaciteta 50 ml, doda se 7 ml reagensa za taloženje, mućka se 60 minuta, istaloži, filtrira. 1 ml dobijenog filtrata se prebaci u tikvicu kapaciteta 50 ml, dovedenu do oznake vodom (rastvor 2). Izmjerite optičku gustinu rastvora 2 na talasnoj dužini od 277 nm. Voda se koristi kao poređenje.
Predloženom metodom se poboljšava tačnost određivanja sadržaja tanina u biljnim sirovinama i selektivno određivanje precipitiranih i netaloženih tanina u biljnim sirovinama.
Metoda za određivanje tanina u biljnim sirovinama u smislu galne kiseline, koja se sastoji u tome da se uzorak sirovine ekstrahuje vodom tokom ključanja, ohladi, filtrira, optička gustina alikvotnog uzorka se meri na talasnoj dužini od 277 nm, a sadržaj zbroja svih tanina izračunava se pomoću formule: 
gdje je x a - sadržaj zbira tanina izraženih u galičnoj kiselini, %;
50 - zapremina tikvice, ml;
508 - specifična brzina apsorpcije galne kiseline (optička gustina 1% rastvora galne kiseline 1 mg/ml);
W - sadržaj vlage u sirovinama,%,
alikvotu filtrata se doda 1% rastvor kolagena u 1% sirćetnoj kiselini, promućka, filtrira, optička gustina filtrata se meri na talasnoj dužini od 277 nm, a sadržaj precipitiranih tanina se izračunava po formuli : 
gdje je X sadržaj precipitiranih tanina u smislu galne kiseline, %;
D 1 - optička gustina rastvora 1;
D 2 - optička gustina rastvora 2;
m nav - težina uzorka sirovine, g;
V a je zapremina alikvota uzorka, ml;
250 - ukupna zapremina ekstrakcije, ml;
50 - zapremina tikvice, ml;
508 - specifična brzina apsorpcije galne kiseline (optička gustina 1% rastvora galne kiseline 1 mg/ml);
W - sadržaj vlage u sirovinama,%.
Slični patenti:
Pronalazak se odnosi na medicinu, odnosno na psihoneurologiju, i opisuje metodu za predviđanje oporavka neuroloških funkcija kod pacijenata u akutnom periodu ishemijskog moždanog udara provođenjem kliničkih i biohemijskih ispitivanja ukupne koncentracije albumina (OCA) u serumu u g/ l, gdje se dodatno do 5-7 dana bolesti utvrđuje efektivna koncentracija albumina (ECA), izračunava se rezerva vezivanja albumina (PCA), a ako je ovaj pokazatelj manji od jedan, negativan rezultat restauracije neuroloških funkcija kod pacijenata u akutnom periodu ishemijskog moždanog udara.
Pronalazak se odnosi na medicinu, na biološka istraživanja u onkologiji, a može se koristiti za utvrđivanje razvoja malignog procesa kod tumora mozga nakon hirurškog lečenja.
Pronalazak se odnosi na medicinu, tačnije na onkologiju, i opisuje metodu za procjenu efikasnosti neoadjuvantne kemoterapije za karcinom mokraćne bešike pregledom pacijenta kod kojeg se u stadijumu bilježi maksimalni intenzitet autofluorescencije tumorskih tkiva u zelenom dijelu spektra. primarne dijagnoze i 1 mjesec nakon preoperativne kemoterapije i sa povećanjem vrijednosti maksimalnog intenziteta autofluorescencije tumorskog tkiva kod pacijenta za 15% od početne i više, efikasnost liječenja se ocjenjuje kao djelomična regresija tumora procesa, u nedostatku promjene intenziteta autofluorescencije tumorskog tkiva u odnosu na prvobitno, utvrđuje se stabilizacija procesa, uz smanjenje intenziteta autofluorescencije tumorskog tkiva za 15% i više od početne oznake progresija tumorskog procesa.
Učitavanje ...