4402 0
Sajnos még most is kijelenthető, hogy a gombás betegségek diagnózisa gyakran nem időszerű (a hajszálak elvékonyodása, a hámlás gyakran összetéveszthető "korpásodással", "szárazsággal"). Ugyanakkor a szubjektív érzések (viszketés, fájdalom stb.) Gyakran nem fordulnak elő az elváltozásokban, és a betegek emiatt nem mennek sokáig szakemberhez.
A körmök megváltozása (csúnya, omladozó, elvékonyodott) sérülés, fagyás stb. Után "onychodystrophia" -nak minősül. Ugyanakkor (még az elszigetelt elváltozások, beleértve a körmöket is) a test allergiás szerkezetátalakulásához vezethetnek, befolyásolhatják a vért és nyirokerek, stb. A fentiek kapcsán a mikózisok időben történő laboratóriumi diagnosztikája, valamint a lehetséges korai kezelés változatlanul releváns.
A gombás megbetegedések klinikai változatainak sokfélesége, amelyek túlnyomórészt emberekben találhatók meg, valamint a különböző típusú gombák (és nemzetségek) mikrobiológiája, morfostruktúrája, immunológiai és egyéb paraméterei jelentős számú diagnosztikai módszer jelenlétéhez vezettek mikózisok; Meg kell jegyezni, hogy a rendelkezésre álló módszereket folyamatosan fejlesztik, és (viszonylag nemrégiben) sajátos elfogultsággal rendelkeznek az immunológiai és molekuláris genetikai tesztek irányában.
Másrészt a kulturális tanulmányok még mindig "az aranyhoz közeli szabványok kategóriájába tartoznak", és más tanulmányok kétes eredményeinek megerősítésére szolgálnak; Vélemény szerint az egyik legmegbízhatóbb módszer a kultúrális és molekuláris genetikai módszerek kombinációja a mikózisok diagnosztikailag "kétes" formáinak diagnosztizálására (különösen elterjedt, bármilyen eredetű immunszuppresszió hátterében, a belső szervek károsodásával stb.). hogy regisztrálja a folyamat mykotikus jellegét.
Nem szabad azonban elhanyagolni a "régi" technikákat, különösen a bakterioszkópiát (különösen a kezdeti vizsgálat során), különösen azért, mert a mindennapi gyakorlatban számos bőrgyógyászati intézményben a mikózis mikroszkópos "ellenőrzését" használják a legszélesebb körben más tesztekhez képest.
Tekintettel a bőrön (és néha zsigereken) jelentkező allergiás megnyilvánulások számának jelentős növekedésére - hosszan tartó, krónikus, időszakosan súlyosbodó mycosis lefolyással (bőr, körmök stb.), Célszerű allergológiai vizsgálatokat végezni a fok azonosítására. a test túlérzékenységének kialakulása, beleértve a kombinált gombás és bakteriális fertőzést; ez a tény befolyásolhatja egy adott beteg kezelésének sajátosságait - például határozza meg az antimikotikumok és az érzékenységet csökkentő szerek racionális kinevezését stb.
Hagyományosan a gombás betegség feltételezett diagnózisát a klinikai megnyilvánulások alapján végzik, és laboratóriumi vizsgálatokkal megerősítik.
A könyv ezen részében röviden bemutatjuk a mikózisok regisztrálásának alapvető módszereit (helyüktől függetlenül), figyelembe véve a "kutatás típusát és a felvett anyagot". Meg kell jegyezni, hogy a mikózisok klinikai megnyilvánulásainak polimorfizmusa (beleértve az allergiás komponenseket is) határozza meg a vizsgálandó kóros anyag sokféleségét. Ebben az esetben a gomba elemeinek keresésének sikere a helyes felvételétől függ.
Tehát az erythemato-pikkelyes, gyakran göndör kitörések perifériás zónája gazdagabb micéliumban, gombaspórákban; az elváltozás szőrös területein csavart, fehéres, elszíneződött, fakó hajat vagy töredékeiket - "kendert" veszik (a hajbevitelt Wood lámpával célszerű ellenőrizni). Bizonyos készségeket igényel az anyag mintavétele (tű segítségével) az ún. "Fekete pontok" - sötét kanos kúpok a tüszők száján.
A mindennapi gyakorlatban általában megvizsgálják a bőr pikkelyeit (kaparással, kenettel, ragasztószalaggal összegyűjtve), a megváltozott körmök lekaparását, a subungualis hyperkeratosis területét, valamint a nyálkahártya ürítését. Az indikációk szerint köpetet, öblítőfolyadékot, vizeletet vizsgálnak (katéterezetlen hólyagos betegeknél); vizelet a vizeletzsákokból, az ágyi edények nem vihetők vizsgálatra.
A vér diagnosztikai értékkel is bír (kultúrkutatáshoz, valamint ELISA -hoz, PCR -hez), cerebrospinális folyadékhoz és a test egyéb biofluidjaihoz (pleurális, intraartikuláris, intraperitoneális - beleértve az aspirációval vagy vízelvezetéssel összegyűjtötteket is); bizonyos esetekben (a lokális diagnózistól függően) fontos az epe, a széklet, a szubkután tályogok pontjai, a fistula kisülése (különösen mély mikózisok esetén). Még az egyszerű diagnosztikai tesztek is számos feltétel szigorú betartását igénylik.
A gombás betegségek diagnosztizálására jelenleg módszereket alkalmaznak:
- mikroszkópia; a kórokozónak a vizsgálati anyagban történő kimutatása alapján, pl. emberi szövetekben;
- kulturális kutatások, majd a gomba tenyészetének mikroszkópos vizsgálata;
- szövettani vizsgálat (pl. mély mikózisokkal);
- immun- és molekuláris módszerek.
Mikroszkópos diagnosztika
Mikroszkópos diagnosztika - a speciális optikai, majd az elektronikus mikroszkópos technológia megjelenésének időszakától vált lehetővé, amely lehetővé tette a gombák ultrastruktúrájának részletes tanulmányozását. Ugyanakkor a gombás elemek - vékony elágazó szálak, amelyek a micéliumot (micélium), a lekerekített testek (spórák; a gombák reproduktív "szerve") kimutatása diagnosztikai értékkel bír.A mikroszkópos diagnosztika magában foglalja a festetlen (natív) és festett készítmények vizsgálatát. Ez a módszer, amint megjegyeztük, összehasonlító egyszerűsége és alacsony költsége miatt a legelterjedtebb a bőrgyógyászati gyakorlatban, de másrészt nem elég érzékeny, bizonyos esetekben ismételt vizsgálatokat igényel, más módszerekkel történő megerősítést igényel.
Tehát a festetlen készítmények tanulmányozásakor a gombás elemeken kívül hámsejtek, vérsejtek, különféle külső környezetből származó szennyeződések találhatók, amelyek megnehezítik a mikózis kórokozójának megtalálását, az anyag további "előkészítését" igénylik - az úgynevezett. A "megvilágosodása" (maceráció), koncentrációja, hígítása stb.
Mindazonáltal a natív készítmények közvetlen mikroszkópiája lehetővé teszi a mycosis gyors diagnosztizálását, annak meghatározását, hogy melyik táptalajra (ha szükséges) kell beoltani az anyagot, úgy vélik, hogy pozitív eredménye maradhat a mycosis egyetlen laboratóriumi megerősítése, negatív válasz esetén kultúra (A. Yu Sergeev, Yu.V. Sergeev, 2003).
A gyógyszerek „felvilágosítására” vonatkozó különféle lehetőségek közül a leggyakoribb a KOH vagy NaOH hozzáadása a vizsgálati anyaghoz (gyakrabban használják a gombák kimutatására a bőr pikkelyeiben, a hajban, valamint számos mély kórokozót. mycoses a köpetben, biopsziák).
A zúzott és üveglapra helyezett maceráláshoz 10-20% -os nátrium-hidroxid (vagy kálium) oldatot végzünk-1-3 csepp, 10-20 percig; a készítményt fedőüveggel enyhén préselik, a gyorsabb macerálás érdekében - lángon hevítik, amíg a gőzök megjelennek. A megtekintés először kis, majd nagy nagyítással történik (száraz rendszer).
A megfelelően előkészített, durva mechanikai, termikus és kémiai hatásoknak nem kitett készítmény képet mutat egy homogén tömegről, amely hámsejtekből, gombás elemek - micéliumszálak és spórák sejtbomlásának termékeiből áll.
A megváltozott hajat 10-30% -os lúggal ellátott üveglapra helyezzük, és ugyanúgy kezeljük, de hosszabb ideig-20 perctől 3-4 óráig. Bőséges pigmenttartalom mellett ajánlott előszőkíteni a hajat 5% -os hidrogén -peroxid oldattal. Fontosnak tartják a gomba elemeinek észlelését, valamint azok elhelyezkedését a hajhoz viszonyítva.
A kórosan megváltozott körmökből származó anyag előkészítését (lehetőleg finom por, amelyet a fókusz mélységéből kaparva nyernek) ugyanúgy kell elvégezni, de 30% -os marószódát használva, kötelező óvatos lángon történő melegítéssel, könnyű gőzöknek való kitettséggel. körülbelül 1 óra (néha akár több óra). A lúggal kezelt készítményeket 1,5-2 óránál tovább nem szabad tárolni a "romlásuk" miatt (a reagens kristályosodása, a mikroszkópos kép által meghatározott diagnosztikai megbízhatóság csökkenése).
KOH vagy NOOH helyett használhatja: a) KOH és 15% DMSO keverékének oldatát; b) fenol (2 rész) és klórhidrát (2 rész) és tejsav (1 rész) keveréke; c) kalcifluoros fehér, amely affinitást mutat a higi és a cellulóz iránt; a kutatáshoz fluoreszkáló mikroszkópra van szükség (kék vagy zöld izzás figyelhető meg, az alkalmazott szűrőtől függően). A cerebrospinális folyadék vizsgálatában (cryptococcosis gyanújával) gyakran festékfestést alkalmaztak.
Kulaga V. V., Romanenko I. M., Afonin S. L., Kulaga S. M.
A MIKÓZIS LABORATÓRIAI DIAGNOSZTIKÁJA
Anyagok felvétele a gomba laboratóriumi kutatásához.
1.OST 42-21-2-854: 222/80 számú rendelés 27.06.00
2. Felszerelés: csipesz, mikroszkóp tárgylemez, olló, népi kanál.
4. Javallatok: gombás betegségek.
5. Bonyodalmak: nem.
Kezelő szoba előkészítése:
A megoldások megváltoztatása.
Készít:
-1% klóramin oldat rongyokhoz
-3% klóramin oldat - kötszerek és csipeszek fertőtlenítésére
- mosóoldat (156 ml. hidrogén -peroxid + 5 g. mosószerpor + 839 ml. desztillált víz) - csipeszek feldolgozásához
- 6% -os hidrogén -peroxid oldat - kesztyű kezelésére.
A manipuláció végrehajtásának algoritmusa.
Fognia kell csipeszt, üvegcsúszdát, Folkman kanalat, ollót;
- hívja meg a beteget az öltözőbe;
- a beteg széken vagy kanapén ül;
- m / s áll.
Végrehajtási technika:
Csipesszel vegye ki a bőr pikkelyeit és a haját a sérülésből;
- tegye a felvett anyagot egy üveglapra, és fedje le egy másik üveglemezzel.
- mosson kezet szappannal és vízzel;
- küldje el az anyagot a laboratóriumba.
ANYAGGYŰJTÉS
Vegyünk ollót és üvegcsúszdákat;
- ollóval vágjon le egy darabot a köröm szabad széléről;
- fedje le az átvett anyagot egy másik üvegcsúszdával;
Az ollót és a csipeszt 3% -os formalin oldatban áztassa.
A megfelelő mikrobiológiai vizsgálat kulcsa az érintett körmökből történő megfelelő anyaggyűjtés. Az anyag felszedésekor nem mindig rögzítik a köröm azon részeit, amelyek életképes gombákat tartalmaznak. Természetesen a kultúrában nem életképes gombák nem fognak növekedni, és fajukat nem lehet megállapítani.
A köröm területét az onychomycosis formája határozza meg.
Tehát az onychomycosis felületes formája esetén a karmokat a körömlemez felületéről kell készíteni.
A leggyakoribb distalis subungualis formában a legéletképesebb gombák a körömlemez alatt helyezkednek el. A kutatásra küldött anyagnak nemcsak a körömlemez levágását kell tartalmaznia, hanem a körömágyról, a lemez alól való kaparást is.
Ezenkívül rögzíteni kell a változatlan köröm területeit, mivel a legaktívabb gombák a köröm és a köröm érintett területei közötti határon helyezkednek el.
Proximalis subungualis formában az anyagot nehéz felvenni. Ezekben az esetekben néha, különösen, ha szövettani vizsgálatot vagy differenciáldiagnosztikát végeznek, biopsziát készítenek a körömről, és alkalmanként fúrót használnak.
A paronychia esetében kaparásokat készítenek a proximális hengerből és onnan.
A bakteriális szennyeződés elkerülése érdekében minden esetben a szöget a minta vétele előtt etil -alkohollal kell kezelni.
MIKROSZKÓPOS VIZSGÁLAT
A gombák kóros anyagának mikroszkópos vizsgálatát natív és színes készítményekben végezzük.
A festetlen készítmények előkészítéséhez a kapott anyagot szikével vagy bonctűvel összetörik, és egy üveglemez közepére teszik. A gomba elemeinek egyértelműbb azonosítása érdekében az anyagot megvilágítják (macerálják). Ebből a célból különféle anyagok, leggyakrabban maró alkáli (KOH, NaOH) segítségét veszik igénybe, amelyek feloldják az epidermális pikkelyeket, nyálkát, gennyet, tisztítják a hajfestéket, és ezáltal a gombákat kutatásra teszik elérhetővé.
A bőr vagy a köröm megpuhult pikkelyeire, amelyeket a tárgylemez közepére helyeznek, 1-3 csepp 20-30% -os KOH (NaOH) oldatot kell felhordani. A lúgcseppekben lévő vizsgálati anyagot óvatosan felmelegítik egy alkohollámpa lángja felett, amíg a csepp kerülete mentén meg nem jelenik az alkáli kristályok finom fehér pereme. Ne melegítse fel forrásig. Melegítés után a cseppet fedőüveg borítja, elkerülve a légbuborékok bejutását.
RA Arabiyskiy és GI Gorshkova (1995) azt javasolják, hogy a bőrpikkelyeket és a hajkészítményeket fedőüveggel 5–10 percig, a körömlemezeket pedig 30–40 percig hagyják a mikroszkópia előtt.
A gyógyszerek megvilágítását melegítés nélkül is elvégezhetjük, ehhez 20% -os KOH -oldatban hagyjuk 30 - 60 percig, vagy más, a kóros anyag megvilágítására szolgáló módszereket alkalmazunk: Aman szerint klorallactofenol; laktofenol; 15% dimetil -szulfoxidot és KOH -t tartalmazó oldat vízben. Jó eredményeket kapunk a körömlemezek megvilágosodása után, 24 órára 5% -os KOH -oldatba helyezve, ebben az esetben nincs szükség hevítésre.
A mikroszkópos vizsgálatot hagyományos laboratóriumi mikroszkóppal végezzük merítés nélkül.
A mikroszkóp kondenzátorát le kell engedni, a membránt szűkíteni kell. Kezdetben a gyógyszert üvegre találják kis nagyítással (40x), a későbbi vizsgálatot nagyobb nagyítással (100x) végzik;
a készítményt 400x nagyítással részletesen tanulmányozzák. A vizsgálat megbízhatóságának növelése és a hamis pozitív eredmények elkerülése érdekében több gyógyszert kell megvizsgálni.
A gombák mikroszkópos diagnózisában hibák léphetnek fel mind a gyógyszerkészítés hibái, mind a laboratóriumi asszisztens tapasztalatainak hiánya miatt.
A gyártási hibák elsősorban a következőkhöz kapcsolódnak:
a gyógyszer túlmelegedésével, amely az alkáli kristályok elvesztéséhez, a haj tönkremeneteléhez és a patológiás anyag finom szemcsés szétesésének megjelenéséhez vezethet.
A hosszúkás, egyenletes alkáli kristályok lineáris elrendezése nagyon hasonlít a szeptikus micélium szálaira, még tiszta üvegen is, kóros anyag nélkül.
A differenciáldiagnosztikai jellemzők a kristályok kivételes egyöntetűsége, üveges átlátszósága, az élek sokoldalúsága és az elválaszthatatlan kapcsolat hiánya az egyik és a másik elem között. Kétséges esetekben ajánlott enyhén felmelegített desztillált víz cseppeket adni a készítményhez, amelyek gyorsan feloldják az alkáli kristályokat.
A következő összetéveszthető a gomba elemeivel:
- zsírcseppek,
- légbuborékok,
- pamut ruhaszálak
- és az úgynevezett "mozaikgomba".
A bőr lipidjei, a sejtek zsíros lebomlása és a keratohyalin szemcsék, különösen a megfelelő alakúak, hasonlíthatnak a gomba egyes spóráira. De a különböző formák és, ami a legfontosabb, a méretek, a képződmények (vákuumok, héjak) belső szerkezetének hiánya ezeknek az elemeknek a gombás jellege ellen szól. A lipidek akkor is bejuthatnak a gyógyszerbe, ha egy patológiás anyagot nem megfelelően tisztított lézióból vesznek.
A légbuborékok hasonlíthatnak az élesztőszerű sejtek spóráira, de az utóbbiakkal ellentétben sűrű sötét membrán veszi körül őket, és még a legkisebb légbuborékok is mindig nagyobbak, mint a gomba sejtjei.
A zokni, ruházat stb. Szövetéből készült szálak általában elkülönülnek a kóros anyagtól, mindig nagyobbak, mint a hifák, durvábbak és nem szeptikusak.
A "mozaikgomba" egy műtermék, amely a kristályosodás során fordul elő (valószínűleg a koleszterin lebomlása miatt). Háló vagy hurkok formája van, amelyek körvonalai megfelelnek a kanos pikkelyek határainak, ellentétben a micélium szálaival, soha nem lépi át az epidermisz sejtjeinek falait.
Néhány laboratóriumban a mikroszkópos vizsgálathoz szükséges készítmények tisztítását 15-30% -os KOH-oldattal végzik, amelyhez a Parker kereskedelmi sötétkék tintájának (Parker Superchrome Blue-Black Ink) 5-10% -át adják hozzá.
Ezzel a színnel a hifák és a spórák kék színűvé válnak.
A mikroszkópia fonalas gombás hifákat vagy bimbózó sejteket tár fel (1. ábra).
Így a mikroszkópia csak a fertőzés gombás jellegéről ad következtetést, de nem a gomba-kórokozó típusáról.
Természetesen a mikroszkópos vizsgálat hatékonysága a laboratóriumi alkalmazott végzettségétől függ.
Rizs. 1. A T. rubrum által érintett körmökről származó kaparások mikroszkópiája. A gomba hifái láthatók.
KULTURÁLIS KUTATÁS
Az anyagot szokásos Sabouraud táptalajra oltják, gyakran antibiotikumokkal. A dermatofita fertőzések diagnosztizálásakor szokás cikloheximidet hozzáadni Sabouraud táptalajához, amely elnyomja a levegőből származó szennyező gombák növekedését. Vannak kereskedelmi forgalomban kapható közegek, amelyek antibiotikumokat és cikloheximid adalékokat tartalmaznak. Emlékeztetni kell arra, hogy sok nem dermatofitikus penész és néhány Candida faj nem nő cikloheximiddel, ezért ajánlott Sabouraud táptalajra beoltani cikloheximiddel, és anélkül. A fajok azonosítását általában a kinőtt tenyészet mikroszkópos vizsgálatával vagy szelektív táptalajra történő újbóli vetéssel végezzük (2-15. Ábra).
Rizs. 2. Az érintett körmökből izolált T. rubrum gomba tenyésztése. Sabouraud táptalaján (bal oldalon) és kukorica agaron (jobb oldalon) szerezték be.
Rizs. 3. A T. mentagrophytes var. interdigitale elszigetelt az érintett körmökről. A Saburo környezetében szerezték be.
Rizs. 4. A Candida albicans gomba tenyésztése. A Saburo környezetében szerezték be.
Rizs. 5. A Torulopsis glabrata gomba tenyésztése az érintett körmökből. A Saburo környezetében szerezték be.
Rizs. 6. A gomba tenyésztése Ulocladium sp., Elkülönítve az érintett körmökből.
Rizs. 7. Az Acremonium sp. Mikromorfológiája Az érintett körmökről elkülönítve.
Rizs. 8. A Fusarium sp. Mikromorfológiája Az érintett körmökről izolálva.
Rizs. 9. A Scopulariopsis sp. Mikromorfológiája Elkülönítve az érintett körmöktől.
Rizs. 10. Az érintett körmökről izolált Candida albicans mikromorfológiája.
Rizs. 11. Az Altemaria sp. Mikromorfológiája Elkülönítve az érintett körmökből.
Rizs. 12. Az Aspergillus sp. Mikromorfológiája Elkülönítve az érintett körmöktől.
Rizs. 13. Az érintett körmökből izolált Ulocladium sp mikromorfológiája.
Rizs. 14. A Chaetomium sp. Mikromorfológiája Az érintett körmökről elkülönítve.
15. ábra A dermatofiták azonosítására táplált tápanyag panel (bal oldali tenyészet T rubrum, jobb - T mentagrophytes var. Mterdigitale).
Balról jobbra: Sabouraud táptalaja, Baxter táptalaja, Christensen táptalaja, kukorica agar
Meg kell jegyezni, hogy egyes penészgombák, beleértve a dermatofitákat is, lassan nőnek a tenyészetben, 2-3 hét alatt.
Még ha betartják is az anyaggyűjtés minden szabályát, jó laboratóriumi felszereléssel és személyzet magas képzettségével, a kultúrkutatás pozitív eredményeinek száma nagyon csekély.
A külföldi szakirodalom szerint a pozitív vizsgálatok aránya nem haladja meg az 50 -et.
A pozitív eredmények százaléka a legjobb hazai laboratóriumokban alig éri el a 30 -at.
Így az onychomycosis 3 esetéből 2 -ben nem lehet megállapítani annak etiológiáját.
LUMINESCENT KUTATÁS
1925 -ben Margaret és Deveze megállapították, hogy bizonyos dermatofiták által érintett szőrszálak jellegzetes ragyogást keltenek, amikor a Byda szűrőn áthaladó ultraibolya sugaraknak vannak kitéve. A Byda üveg bárium -szulfátból áll, körülbelül 9% nikkel -oxidot tartalmaz; 365 nm hosszú sugarakat továbbít. Különféle eszközök használhatók az ultraibolya sugarak forrásaként. Az izzás természetét nem állapították meg pontosan. A haj továbbra is ragyog a gomba halála után, és miután megpróbálta a fluoreszkáló anyagot forró vízzel vagy hideg nátrium -bromid -oldattal kivonni. Az izzás intenzitása és jellege az oldat pH -értékétől függ. Úgy gondolják, hogy a fluoreszkáló anyag megjelenik a gomba és a növekvő haj közötti kölcsönhatás folyamatában.
A fa szűrőn áthaladó ultraibolya sugarak fénye csak a Microsporum nemzetség gombáinak (M. canis, M. audouinii, M. ferrugineum, M. deformium, esetenként M. gypseum és M. nanum) által érintett hajra jellemző. valamint a Trichophyton schonleinii ... A mikrosporumok, különösen a M. canis és a M. audouinii által érintett haj a legfényesebb ragyogást adja; a T. schonleinii által érintett szőrszálak tompa zöldes fluoreszcenciájúak.
Az izzás csak a gomba által teljesen érintett hajban figyelhető meg. Lehet, hogy nincs friss elváltozásokban. Ezekben az esetekben a hajat a legaktívabb élzónából kell epilálni, és a ragyogás a haj gyökérrészében található.
A lumineszcens módszer alkalmazható mind a diagnosztikára, mind a kezelés hatékonyságának monitorozására az egyes betegeknél és a járványügyi fókuszokban. A kompakt mobil egységek kényelmesek az iskolákban, óvodákban stb.
Lumineszcens vizsgálatot sötét helyen kell elvégezni, a sérüléseket előzetesen meg kell tisztítani kéregből, kenőcsmaradványokból stb. A betegség elváltozásai vöröses-sárga vagy barna fényűek. Ez a ragyogás azonban nem szigorúan specifikus, mivel megfigyelhető a fejbőr korpásodásának jelenlétében, sőt egészséges embereknél az arcon és a felsőtesten lévő szőrtüszők szája területén. A lumineszcens módszerrel azonosított érintett szőrszálakat mikroszkópos vizsgálatnak kell alávetni.
IMMUNOLÓGIAI ÉS BIOLÓGIAI KUTATÁS
Immunológiai kutatási módszereket alkalmaznak a test specifikus szerkezetátalakításának és a gombás betegségek szerológiai diagnózisának azonosítására. A specifikus antitestek kimutatására a minta szérumában a következő szerológiai reakciókat hajtják végre: agglutináció, kicsapódás, komplementkötés, immunfluoreszcencia a megfelelő antigénekkel.
A beteg testének allergiás állapotát allergiás bőrtesztek segítségével észlelik. Az allergéneket a hegesedett bőrre alkalmazzák Pirque szerint, vagy a bőrbe dörzsölve a Moro szerint, intradermálisan Mantoux szerint, és a bőrbe történő injekcióval is. Ezen tesztek segítségével azonnali és késleltetett típusú allergiás reakciókat észlelnek, amelyek lehetővé teszik a humorális és sejtes immunitás állapotának felmérését.
A limfociták specifikus szenzibilizációjának kimutatására bazofil degranulációt, agglomerációs és elváltozási reakciókat, robbantási transzformációs tesztet, a makrofágok migrációjának gátlását, stb.
A szerológiai és allergiás reakciók eredményeinek összehasonlítása hasznos mind a diagnózishoz, mind a mikózisok előrejelzéséhez.
Biológiai módszer. Mély és különösen veszélyes mikózisok laboratóriumi diagnosztikájára szolgál. Az állatoknak a vizsgált gomba betegének vagy tenyészetéből származó kóros anyaggal való fertőzése alapján. Speciális laboratóriumokban végezték.
HISTOLÓGIAI VIZSGÁLAT
A dermatophyták által okozott bőrmikózisok szövettana
A léziók patomorfológiai elváltozásait az okozza, hogy gombák kerülnek az epidermisz, a haj és a köröm szarurétegébe, valamint a bőr gyulladásos reakciója lehet akut, szubakut vagy krónikus. A diagnózis csak akkor tekinthető megalapozottnak, ha a szövettani készítményekben gombás elemek találhatók. Ehhez különféle szövettani festéseket használnak, a leginformatívabb a periodikus savreakció (PAS), amely lehetővé teszi a legtöbb dermatofita sejtfalában és kitinjében található poliszacharidok azonosítását (Shifu -folt és annak módosításai). Használhat szulfatálási reakciókat és a szövettani metszetek ezüsttel történő impregnálását is [Khmelnitsky OK, 1973; Lewer W. F. és Schaumburg-Lewerl., 1983].
Az epidermisz szarurétegében található gombákat még speciális foltok alkalmazása esetén is kis mennyiségben, micéliumszálak és spórák formájában észlelik. Ritka esetekben, amikor sok gomba található az elváltozásokban, hemotoxilin-eozinnal festett metszetekben találhatók, finom bazofil szerkezetek formájában a szarurétegben.
Az epidermisz gyulladásos elváltozásai eltérőek lehetnek: a tüskés sejtek kisebb intra- és extracelluláris ödémájától a súlyos spongiosisig. A spongiosis általában a láb és a kéz mycosisának dyshidroticus változataival alakul ki, klinikailag ezekben az esetekben buborékokat észlelnek. Ezt a reakciót általában a T. mentagrophytes var. interdigitale. Néha az epidermiszben kifejezett hyperkeratosis van, amely leggyakrabban a T. rubrum által okozott mycosisban figyelhető meg.
A dermisz szövettani elváltozásai nem specifikusak, és az akut, szubakut és krónikus gyulladásoknak felelnek meg.
A T. rubrum által okozott sima bőr mycosisában néha gombák találhatók a vellus hajban és a szőrtüszőkben. A tüszők körül gyulladásos reakció alakul ki, amely a gombák dermisbe való bejutása miatt granulomatózus jelleget kaphat. Ezekben az esetekben a beszivárgás központi része szupperáción és nekrózison eshet át, a perifériás rész pedig limfocitákból, hisztocitákból, epithelioidból és többmagvú óriássejtekből áll, amelyeken belül néha gombás spórák találhatók. A spóra mérete itt eléri a 6 mikron átmérőt, a hajban általában nem haladja meg a 2 mikronot.
A fejbőr mikózisainak infiltratív-suppuratív formájával, valamint a szakáll és a bajusz növekedési területével gombák elemei találhatók a szőrtüszőben, a haj belsejében és környékén. A hajban ezeket közvetlenül a keratinizáció kezdeti zónája felett határozzák meg (körülbelül 30 mikron szint). A dermisben különböző intenzitású gyulladásos reakciót figyelnek meg, a leginkább a kerion Celsii -val. Akut gennyes reakció esetén nagyszámú neutrofil leukocitát észlelnek az infiltrátum összetételében, a gombák elemei ebben az esetben teljesen eltűnhetnek. A folyamat krónikus lefolyása során az infiltrátum granulomatózus jelleget nyerhet, többmagvú óriássejtek jelennek meg benne. A diagnózis megerősítéséhez gombák hiányában az infiltrátumban immunfluoreszcens festési módszerek alkalmazhatók. Ebből a célból fluoresceinnel jelzett T. mentagrophytes elleni szérumot használnak, amely lehetővé teszi a gombás antigének kimutatását a hajban és a perifollikuláris infiltrátumban.
Az infiltratív-suppuratív bőrreakció kialakulása a fejbőr mycosisában (kerion Celsii), valamint a szakáll és a bajusz M. canis, T. tonsurans és T. verrucosum gombák által okozott növekedési területén az immunológiai megnyilvánulása. reakció. Ezt bizonyítja:
1. Az elváltozások spontán feloldódásra való hajlama.
2. A gombás elemek hiánya a T. verrucosum (faviforme) és a T. tonsurans által okozott mycosisos bőr nagyon erős gyulladásos reakcióval.
3. Állandó pozitív reakció a trichophytin intradermális beadására adott válaszként a zoofil trichophytinek (például T. tonsurans) által okozott mycosis infiltratív -suppuratív formáiban, és negatív - ugyanazon T. tonsuránok által okozott felületes mycosisokban.
Ha a favus az epidermisz stratum corneumában található, nagyszámú micéliumszálat és a gomba egyetlen spóráját találjuk. A scutulát az exudátum, az epidermisz parakeratotikus sejtjei, a gyulladásos infiltrátum sejtjei, valamint a micéliumszálak és a gombaspórák képviselik, amelyek elsősorban a scutula perifériás zónájában helyezkednek el. A betegség aktív stádiumában kifejezett, gyulladásos infiltrátumot figyelnek meg, amely többmagvú óriás- és plazmasejteket tartalmaz a dermisben a degeneratív szőrtüszők körül. A régi elváltozásokban a haj és a faggyúmirigyek hiányoznak, vannak fibrózis jelenségek.
Az élesztőszerű gombák által okozott bőr- és nyálkahártya-mikózisok szövettana
A bőr és a nyálkahártya candidiasisával a Candida nemzetség gombái megtalálhatók az epidermisz szarurétegében vagy a nyálkahártya hámjának felszíni rétegeiben. A gombaelemek általában kevések, jól festettek PAS-reakcióval vagy Grammal; szeptátus elágazó micéliumszálak formájában, 2-4 mikron átmérőjű vagy tojásdad spórák formájában, 3-5 mikron átmérőjűek. A gomba micélium formájának kimutatása diagnosztikai értékű.
A bőr és a nyálkahártya krónikus granulomatózus candidiasisának szövettani vizsgálatában a gombás elemek túlnyomórészt az epidermisz szarurétegében vagy a nyálkahártya hámjának legfelső részeiben, de néha a szúrós rétegben is megtalálhatók. a hajban és a dermisben. Van is markáns hyperkeratosis és papillomatosis; a dermisben - sűrű gyulladásos infiltrátum, amely limfoid sejtekből, neutrofilekből, plazmából és többmagvú óriássejtekből áll. Az infiltrátum a bőr alatti zsírszövetbe terjedhet.
A pityriasis versicolor esetében az epidermisz szarurétegében nagyszámú gombás elem található finom bazofil szerkezetek formájában, amelyek akkor is jól láthatóak, ha a készítményeket hemotoxilin-eozinnal festik. A gombákat szálak és spórák egyaránt képviselik.
A pityriasis zuzmó follikuláris formájával a szőrtüszők kitágult szájában felhalmozódnak a gyulladt beszűrődés szarvas tömegei és sejtjei. Gyulladásos infiltrációt is megfigyelnek a tüszők körül. A PAS reakció során a gomba gömb alakú vagy ovális, 2-4 mikron átmérőjű spórái a szőrtüszők száján belül, és néha a perifollikuláris infiltrátumban találhatók. A micéliumot soha nem észlelik.
A pityriasis versicolor betegeknél a bőr pigmentációjának romlása annak köszönhető, hogy a Pityrosporum gomba képes olyan anyagot előállítani, amely gátolja az epidermisz pigmentációjának folyamatát. A hipopigmentált területekről származó bőrbiopsziák elektronmikroszkópos vizsgálata kimutatta, hogy a melanocitákban nagyon kicsi melanoszómák képződnek, amelyek nem képesek behatolni a keratinocitákba. Másrészt a bőr hiperpigmentált területein a melanoszómák nagyok és nagy mennyiségű melanint tartalmaznak.
A gombás betegségek diagnosztizálásának alapja a bőr és a körmök érintett területeiről készített készítmények mikroszkópos vizsgálata. A különböző típusú mikózisok mikroszkópos képe azonban hasonló: a bőr pikkelyein és a körmökön gombaspórák és elágazó szeptikus micéliumok láthatók, 4-7 mikron átmérőjűek. Ezért a gomba nemzetségét és faját az esetek többségében nem lehet meghatározni a bőrpikkelyek mikroszkópos képével vagy a körömről való kaparással. A kórokozó azonosítása érdekében a beoltásokat táptalajra, leggyakrabban Sabouraud táptalajra végezzük.
Epidermophytosis. A bőr szarurétege, leggyakrabban a lábfej és az alsó végtagok körmei érintettek. A hajat soha nem befolyásolja. Sárga foltok vagy csíkok jelennek meg a körmökön, majd hyperkeratosis (köröm megvastagodása) alakul ki, deformációjuk és pusztulásuk. A talp lamellás hámlása és az interdigitalis redők, vörösség jelenik meg a láb bőrén. Néha buborékok, pelenkakiütés, repedések keletkeznek. A betegséget viszketés, égés, fájdalom kíséri.
A kaparások, pikkelyek, hólyagsapkák mikroszkópos vizsgálata során 3-5 mm átmérőjű micélium alacsony szeptikus szálait fedezik fel, egyes szálak kerek és téglalap alakú spórákra bomlanak.
Trichophytosis. Ez a bőr és melléktermékeinek gombás betegsége, amely különösen hajlamos a hajra [lat. trichos haj + phyton gomba]. A fejbőrön számos, körülbelül 1,5 cm átmérőjű elváltozás jelenik meg. A bőr rajtuk ödémás, hiperémiás, pikkelyekkel borított. A sérüléseken a haj a bőr felszíne felett 2-3 mm-es magasságban törik le, innen ered az „ótvar” elnevezés.
A mikroszkópos vizsgálat feltárja a Trichophyton gombák jellegzetes vonását - spóráik láncban való elhelyezkedését. A gombák tulajdonságaitól függően a következők vannak:
Endothrix (a felületes trichophytosis kórokozója). A gombák a haj belsejében nőnek, drámaian megváltoztatva szerkezetét. Az egész haj párhuzamos láncsorokkal van kitöltve (tömve), amelyek nagy, lekerekített vagy négyzet alakú spórákból állnak;
Ectothrix (a mély trichophytosis kórokozója), amelyben a haj a tengely mentén láncokban elrendezett kis vagy nagy spórákból álló burokba van burkolva.
Favus rühes. A haj és a bőr érintett, ritkábban a körmök. A haj vékony, fakó, „púderes” lesz, mint a régi paróka, de nem törik le. A bőrelváltozásokat a sárgás-szürke kéreg megjelenése jellemzi.
A mikroszkópos vizsgálat légbuborékokat tár fel az érintett hajban.
Microsporia. A bőr és a haj érintett. A sérüléseknél a haj 6-8 mm-es szinten törik le a bőrfelszín felett. A fennmaradó tuskók körül fehéres hüvelyek láthatók.
Az érintett haj mikroszkópos vizsgálata olyan spórákat tár fel, amelyek mozdulatszerűen (véletlenszerűen) a haj körül és belül helyezkednek el. Nagyon kicsik (1-3 mm), innen ered a betegség neve. A haj jellegzetes fluoreszkáló fénye segít a mikrospória diagnosztizálásában.
A mikroszkópos vizsgálat kerek, bimbózó sejteket tár fel, gyakran szőlőfürt formájában.
Mély (penészes) mikózisok. Foglalkozási megbetegedésekként gyakoribbak az antibiotikumgyárakban, a penészes gabonával, széna, komposzt stb. A penicilliosis (ecset gomba) kórokozója durva, széles, szeptikus micélium, amely ecsettel végződik. A mucorosis kórokozója széles, nem szeptikus micélium, amely spórák zsákjában végződik. Az aspergillosis (leukémia penész) kórokozója gyakran megtalálható a penészes gyümölcsökön és a kenyéren. Durva, szeptikus micéliummal rendelkezik, amely tágulással végződik, és amelyből a spórákkal ellátott szálak vízfolyásokkal ellátott öntözőkannahoz hasonlítanak.
Actinomycosis. Különféle sugárzó gombák okozzák. Jellemzője, hogy a bőrön, a nyálkahártyákon és a belső szervekben sűrű infiltrátumok képződnek, amelyek hajlamosak a szaporodásra és a fistulák megjelenésére. A fistula kisülésekor a szemen kis sárga szemcsék láthatók, jellegzetes sugárzó éllel - actinomycete drusen. A mikroszkópia előkészítéseit a fistulák és a köpet ürítéséből készítik.
Kis sugárzás mellett a sugárzó gomba porlasztása kerek alakú sárgás képződményeknek tűnik, világos amorf közepe és sötétebb színe a szélein. Nagy nagyításnál a micélium szálakat határozzák meg a drusen közepén, és lombik alakú duzzanatokat a periféria mentén. Gram szerinti festéskor a micélium szálai G +, a kúpok G-.
Az invazív mycoses pontos diagnózisa Nem könnyű. Ez nemcsak a gombatenyészet megszerzésével kapcsolatos nehézségekkel magyarázható, hanem a kutatási eredmények értelmezésével is, mivel a gombák, mind az élesztő, mind a micélium, megtelepedhetnek a nyálkahártyákon és szennyezhetik a vizsgált mintákat. E tekintetben az invazív mikózisok diagnózisa integrált megközelítésen alapul, amely nemcsak a mikológiai (kulturális) és szerológiai (gombás antigén meghatározása) vizsgálatok eredményeit tartalmazza, hanem a gombás fertőzés klinikai tüneteit is, a kiegészítő kutatási módszerek adatait. (számított vagy mágneses rezonancia képalkotás, ultrahang).
Európai-Amerikai Szövetkezeti Csoport invazív mikózisok vizsgálatára immunhiányos betegeknél kidolgozták az invazív mycoses diagnózisának kritériumait. 2001 -ben mutatták be az antimikrobiális szerekről és kemoterápiáról szóló nemzetközi konferencián (ICAAC, Chicago), majd 2002 -ben nyomtatásban. Meghatározták a bizonyított, valószínű és lehetséges invazív mycosis kritériumait, amelyeket klinikai és járványügyi vizsgálatokban ajánlott használni.
Bizonyított invazív mikózis a fonalas gombák miatt: gombás micélium kimutatása biopsziákban vagy aspirációkban szövettani vagy citológiai vizsgálat során, vagy a tenyészet izolálása aszeptikus körülmények között, normálisan steril fókuszból nyert mintákból, amely a klinikai és radiológiai vizsgálatok eredményei szerint fertőzéssel jár, kivéve vizelet- és nyálkahártya -vizsgálatok.
Bizonyított invazív mycosis az élesztő miatt: élesztősejtek kimutatása (a Candida nemzetség gombái pszeudomyceliumot vagy valódi micéliumot képezhetnek) biopsziákban vagy aspirációkban, kivéve a nyálkahártyákból származó mintákat, vagy a tenyészet izolálása aszeptikus körülmények között, normálisan steril fókuszból nyert mintákból, a fertőzéssel összefüggő klinikai és radiológiai vizsgálatok eredményei szerint, kivéve a vizelet-, arcüreg- és nyálkahártya -mintákat, vagy mikroszkópos kimutatással és specifikus festéssel (csepp tintával, mucicarmine -val festve) élesztősejteket vagy pozitív antigént Cryptococcus spp. . a cerebrospinális folyadékban.
Fungaemia a fonalas gombák miatt: gombák vérkultúráinak izolálása, kivéve az Aspergillus spp. és a Penicillium spp., beleértve a Penicillium marneffei -t, kombinálva az izolált kórokozóval összhangban lévő fertőző folyamat klinikai tüneteivel.
Fungaemia az élesztőgombák miatt: Candida vagy más élesztőgombák vérkultúráinak izolálása olyan betegeknél, akiknek a kórokozóhoz kapcsolódó fertőzés klinikai tünetei vannak.
Invazív mycoses diagnosztikai vizsgálatok komplexuma
| Vizsgált bioanyag | Jelzés, használt média, érték |
| Vér |
Javallatok:
tartós láz (4-5 nap vagy több) a széles spektrumú antibiotikumokkal végzett kezelés során; a láz második "hulláma" az antibiotikum terápia során Vérvétel vénából injekciós üvegekbe aerob baktériumok számára * vagy gombák szelektív tápközegében, ismételve (a nap folyamán 2-3 alkalommal, 1 órás intervallummal) Diagnosztikai relevancia: élesztő izolálása, óvatos értelmezés a fonalas gombák izolálásakor, kivéve a Fusarium spp. |
| Vénás katéter |
Javallatok:
az élesztő izolálása a vérből A központi vagy perifériás vénás katétert minden esetben eltávolítják az élesztőváladékból a vérből A mikológiai vizsgálathoz 5-6 cm hosszú katéter aszeptikusan eltávolított disztális szegmensét használjuk. A vizsgálatot félkvantitatív (Maki módszer) vagy kvantitatív módszerrel végezzük Sabouraudon Diagnosztikai relevancia:
|
| Felső légúti váladék, köpet, öblítés a légcsőből, hörgők, bronchoalveolaris mosófolyadék |
Javallatok:
fonalas gombák vagy Cryptococcus neoformans által okozott mikózisok gyanúja; elhúzódó láz a széles spektrumú antibiotikumokkal végzett kezelés során és a neutropenia A minták mikroszkópiája fehér kalcifluorral (micélium vagy pszeudomycelium kimutatása); vetés Saburo szerdáján; az Aspergillus antigén meghatározása bronchoalveolaris mosófolyadékban, az invazív aspergillózisra jellemző tüdőben lévő gócok jelenlétében Diagnosztikai relevancia: Fonalas gombák vagy Cryptococcus neoformans izolálása |
| Gerincvelői folyadék |
Javallatok:
meningitis tünetei; fókusz (gócok) kimutatása az agyban számított vagy mágneses rezonancia képalkotással; Lázhoz és neutropeniához kapcsolódó "agyi" tünetek Mikroszkópia fehér kalcifluorral, csepp tintában; az Aspergillus, Cryptococcus antigén meghatározása; vetés szerda Saburo Diagnosztikai relevancia:
|
| Biopsziák, aspirációk, peritoneális folyadék, pleurális folyadék |
Javallatok:
az invazív mycosis klinikai és / vagy radiológiai jelei; láz a széles spektrumú antibiotikumokkal végzett kezelés során. Mikroszkópia fehér kalcifluorral, Sabouraud táptalajjal történő bevonás Diagnosztikai relevancia:
|
Valószínű invazív mycosis a következő kritériumok kombinációjával diagnosztizálták:
egy tulajdonság a mikrobiológiai kritériumok kategóriájából;
egy jel a "jelentős" kategóriából vagy kettő a fertőző folyamat "kevésbé jelentős" klinikai tüneteinek csoportjából.
Lehetséges invazív mycosis diagnosztizálása a következő kritériumok kombinációja alapján történik:
legalább egy kockázati tényező jelenléte, amely invazív mycosis kialakulását idézi elő;
egy jel a mikrobiológiai kritériumok kategóriájából vagy egy jel a fertőző folyamat klinikai tüneteinek "jelentős" (kettő a "kevésbé jelentős" csoportjából) kategóriájából.
A koncepció " lehetséges invazív mycosis»Nem ajánlott klinikai vizsgálatokban használni, amelyek a gombaellenes gyógyszerek hatékonyságát vizsgálják. Ezt a kifejezést használhatja az empirikus gombaellenes terápia, az epidemiológiai vizsgálatok és a farmakoökonómiai tanulmányok elemzésében.
Nál nél mikológiai kutatások A steril aspirációk vagy biopsziák nemcsak a gombatenyészet izolálását veszik figyelembe, hanem a micélium vagy pszeudomycelium mikroszkópos kimutatását is. A szövettani készítményekben az Aspergillust nehéz megkülönböztetni a Fusarium spp., Sceclosporium apiospermum és néhány más fonalas gombától. A differenciáldiagnózis érdekében immunhisztokémiai vizsgálatot kell végezni Aspergillus elleni antitestekkel.
Az élesztőgombák izolálása a vérből legalább egy vizsgálat a "bizonyított" invazív mycosis kategóriájába tartozik, és abszolút indikáció a szisztémás antimikotikumok kinevezésére neutropeniában szenvedő betegeknél. Az élesztőgombák vérből történő kimutatásának gyakorisága alacsony, még disszeminált candidiasis esetén is 35-50%.
Véghezvitel ismételt vérkultúrák növeli a pozitív eredmények valószínűségét.
Egyéb értelmezés fonalas gombák vérben történő kimutatása esetén következik be. A fonalas gombák elkülönítésének magas gyakorisága a Fusarium spp. és 40-60%. Az Aspergillus ritkán fordul elő, és az Aspergillus terreus kivételével a legtöbb esetben szennyeződésnek minősül.
Kiemelés Aspergillus terreus a hemoblasztózisban szenvedő betegek véréből valódi aspergillómát jelezhet, és a fertőzés klinikai tüneteinek jelenlétében ez az alapja a gombaellenes szerek kinevezésének.
Az invazív mycosis kritériumai
| Index | Kritériumok |
| Az invazív mycosis (makroorganizmus) kialakulását kiváltó tényezők | Neutropenia (< 0,5*109/л в течение 10 дней)
Tartós láz 96 óránál tovább széles spektrumú antibiotikum terápiával A testhőmérséklet 38 ° C felett vagy 36 ° C alatt, és az alábbi hajlamosító jelek bármelyike: elhúzódó neutropenia (több mint 10 nap) az előző 60 napban, intenzív immunszuppresszív kezelés az elmúlt 30 napban, bizonyított vagy valószínű invazív mycosis az előzőekben időszak neutropenia vagy AIDS A GVHD tünetei, különösen súlyos esetek (II. Fokozat) vagy kiterjedt krónikus betegség A glükokortikoidok hosszú távú (több mint 3 hét) alkalmazása az elmúlt 60 napban |
| Mikrobiológiai jelek | Fonalas gombák (beleértve az Aspergillus spp., Fusaruim spp., Sceclosporium spp. És zygomycetes) tenyészetének és a Cryptococcus neqformans tenyészetének izolálása a köpetből vagy a bronchoalveolaris mosófolyadékból A tenyésztés vagy a citológiai vizsgálat (közvetlen mikroszkópia) pozitív eredményei a paranasalis sinusok aspirációiból származó fonalas gombák kimutatására Fonalas gombák vagy Cryptococcus neoformans kimutatása citológiával / közvetlen mikroszkóppal köpetből vagy bronchoalveolaris mosófolyadékból Aspergillus antigén pozitív a bronchoalveolaris mosófolyadékban, a cerebrospinális folyadékban és a vérmintákban (legalább kettő) A cryptococcus pozitív antigénje a vérmintákban A gombás elemek citológiai vizsgálattal vagy közvetlen mikroszkóppal történő kimutatása normálisan steril folyadékmintákban (például Cryptococcus spp. Cerebrospinális folyadékban) Két pozitív eredmény az élesztőgomba -tenyészet vizeletben történő kimutatására irányuló vizsgálatokban, vizeletkatéter hiányában Candida kristályok a vizeletben, vizeletkatéter hiányában Candida spp. Izolálása vérkultúrákból |
|
Klinikai tünetek
Alsó légúti |
Össze kell kötni azzal a hellyel, ahonnan mintákat vesznek a mikrobiológiai vizsgálathoz A következő típusú új tüdőinfiltrációk bármelyike a CT -n: glória tünet, félhold tünet, üreg konszolidációs területekkel * Az alsó légúti fertőzés tünetei (köhögés, mellkasi fájdalom, hemoptysis, nehézlégzés), mellhártya súrlódási zöreje, minden új beszűrődés, amely nem szerepel a súlyos súlyosság jeleiben; mellkasi folyadékgyülem |
| Felső légúti Nagy jelentőségű jelek Kisebb jelentőségű jelek |
Az invazív sinus fertőzés radiológiai jelei (falerózió vagy fertőzés terjedése a szomszédos struktúrákra, a koponyacsontok kiterjedt elpusztulása) Orrfolyás, orrdugulás, az orrnyálkahártya fekélyesedése, orrvérzés, periorbitális ödéma, felső állkapocsfájdalom, fekete nekrotikus fekély vagy a kemény szájpad perforációja |
| központi idegrendszer Nagy jelentőségű jelek Kisebb jelentőségű jelek |
A központi idegrendszeri fertőzés gyanújának röntgen jelei (mastoiditis vagy más parameningealis fókusz, extraduralis empyema, többszörös elváltozások az agyban vagy a gerincvelőben) Fókális neurológiai tünetek és jelek, beleértve a fokális rohamokat, hemiparézist; tudatzavarok, agyhártya -tünetek, a cerebrospinális folyadék biokémiai összetételének és sejtösszetételének megsértése (más kórokozók hiányában, tenyésztés és mikroszkópia szerint, tumorsejtek hiányában) |
Nál nél kimutatása a vérben vagy más élesztőgombák steril bioszubsztrátjai, a fonalas (penész) gombák izolálásakor feltétlenül azonosítani kell a fajt, és meg kell határozni az érzékenységet a gombaellenes szerekkel szemben - csak a faj azonosítása, az érzékenység nincs meghatározva.
Klinikai gyakorlat a fonalas gombák érzékenységét nem vizsgálják az ilyen gombák gombaellenes szerekkel szembeni érzékenységének meghatározására vonatkozó tökéletlen szabványok miatt. Ezenkívül csak egy tanulmány mutatott összefüggést az Aspergillus spp. valamint az invazív aspergillosis kezelésének eredményei hemoblastosisos betegeknél. Az azóta elvégzett vizsgálatok egyike sem hozott hasonló eredményeket.
A közelmúltban elszigetelt jelentések kezdtek megjelenni az A. fumigatus gombák itrakonazollal, vorikonazollal szembeni szerzett rezisztenciájának kialakulásáról.
A gombák azonosítása fajonként- különösen a steril lókuszokból nyerteket - mindenekelőtt az antimikotikum kiválasztásához és a megfelelő gombaellenes kezeléshez szükséges. Így a Candida krusei rezisztens a flukonazollal szemben, és kevésbé érzékeny, mint más élesztőfajok az amfotericin B -re; Aspergillus terreus, Scedosporium apiospermum (Pseudallescheria boydii), Trichosporon beigelii, Scopulariopsis spp. ellenáll az amfotericin B -nek; A mucorales rezisztens az itrakonazollal, a vorikonazollal, a Candida glabrata dózisfüggő érzékenységet mutat a flukonazollal szemben, és az ilyen típusú gombák, még az érzékeny törzsek izolálásakor is növelni kell a flukonazol adagját (a felnőttek 400 mg helyett 800 mg-ot írnak fel); A Candida lusitaniae rezisztens az amfotericin B -vel szemben.
A gombák azonosítása fajonként Fontos a kórházban végzett epidemiológiai elemzéshez is - a járványok kórokozóinak és - ha lehetséges - a fertőzés forrásának meghatározásához. Az olyan ritka gombák, mint a C. lusitaniae, C. krusei, C. lipolytica okozta fertőzés kitöréseket írják le.
Alapú gombák fajok azonosítása feltételezhetjük a nyálkahártya invazív mikózisát vagy gombás kolonizációját. Például az Aspergillus niger sokkal kevésbé valószínű, hogy az Aspergillus fumigatus invazív aspergillózist okoz akut leukémiában szenvedő betegeknél. Az Aspergillus niger elkülönítését a bronchoalveolaris mosófolyadékból leggyakrabban a légutak kolonizációjának, a köpetből pedig a levegőből származó szennyeződésnek tekintik, és további kutatásokat igényel az invazív aspergillosis diagnózisának megerősítésére.
Alapú fonalas gombák kiválasztása a köpetből, a bronchoalveoláris folyadékból, az orrmelléküregek aspirátumából csak feltételezhetjük az invazív mycosis -t, nem sorolva a "bizonyított" kategóriába. Mindazonáltal mindig mérlegelni kell az Aspergillus köpetben, különösen az Aspergillus fumigatusban vagy az Aspergillus flavusban való kimutatását neutropeniás betegeknél, az allogén csontvelő recipiensében. Ehhez ismételt mikológiai vizsgálatra és a tüdő számítógépes tomográfiájára van szükség. Tehát neutropenia esetén az Aspergillus spp. Pozitív tenyészete esetén az invazív aspergillosis kimutatásának valószínűsége. a köpetben 80%.
Kiemelés Cryptococcus neoformans immunrendszerben szenvedő betegeknél a légzőrendszerből (mosás, öblítés) diagnosztikai szempontból jelentős. Ha az élesztőgombák azonosítása az immunhiányos betegek légzőrendszeréből nyert folyadékokból (öblítés a légcsőből, hörgőkből, bronchoalveoláris öblítésből) nem kötelező, akkor szűrés szükséges a Cryptococcus neoformans kimutatására ezekből a mintákból.
Candida kimutatása a vizeletben neutropeniában és lázas betegekben általában a disszeminált candidális fertőzés megnyilvánulásának tekintik.
Időben diagnosztika invazív sikeresen használt kereskedelmi tesztet az Aspergillus spp. gombák specifikus antigénjének keringésének kimutatására. galaktomanna (a gombás sejtfal vízben oldódó poliszacharid komponense).
Galactomann két módszerrel határozható meg: a latex agglutinációs módszerrel (Pastorex Aspergillus, BioRAD) és az enzimhez kötött immunszorbens vizsgálattal (Platelia Aspergillus, BioRAD).
Az előny enzim immunvizsgálat az alsó érzékenységi küszöb a galaktomann szintjének meghatározásához a vérben - 1 ng / ml vagy kevesebb, és a latex agglutináció segítségével - 15 ng / ml. A galaktomancia meghatározása a vérben (legalább 2 mintában), a cerebrospinális folyadékban, a bronchoalveolaris mosásban diagnosztikai értékű. Az enzimhez kötött immunszorbens vizsgálat érzékenysége körülbelül 90%, a specificitás 90-99%; az allogén csontvelő recipiensekben ezek a mutatók alacsonyabbak, és 60-70%-kal, illetve 80-90%-kal egyenlőek. gombaellenes gyógyszerek profilaktikus alkalmazása (gombaellenes szerek csökkentik a galaktomann küszöbszintjét).
Az esetek 40% -ában észlelés galaktomancia a vérben megelőzi az invazív aspergillosis megnyilvánulásait, amelyeket a tüdő számítógépes vizsgálata határoz meg, és 70% -ban megelőzi a fertőzés klinikai tüneteit.
Az antigén észlelési teszt diagnosztikai értéke Aspergillus abban az esetben, ha a vizsgálatot ismételten elvégzik. A vér Aspergillus antigénjének meghatározását láz esetén el kell végezni széles spektrumú antibiotikum-kezelés alatt hetente kétszer neutropeniában szenvedő betegeknél; tüdőgyulladással, amely az antibiotikum terápia hátterében fordul elő vagy fennáll; gócok észlelésekor a tüdőszövetben (számítógépes tomográfia).
A mikózisok etiológiai laboratóriumi diagnosztikájának fő módszerei a mai napig továbbra is a klasszikus módszerek, beleértve az anyag mikroszkópiáját, a kórokozó tiszta tenyészetének izolálását és későbbi azonosítását. Az immunológiai diagnosztikai módszerek másodlagos jelentőségűek. A legjelentősebb kórokozók azonosítására szolgálnak: patogén dimorf gombák, valamint a kriptokokkózis, a candidiasis és az aspergillosis kórokozói. A genoindikációs módszerek (polimeráz láncreakció) szintén korlátozottan alkalmazhatók, mivel nincs specifikusságuk, de főleg a mély és opportunista mikózisok diagnosztizálására használják őket.
A mikózisok laboratóriumi diagnosztizálásának kutatási anyaga a betegség formájától függően a következők lehetnek: bőr és mellékletei (haj, köröm), sebek és fistulák, köpet, vér, cerebrospinális folyadék és vizelet, szövetbiopsziák. A kóros anyagok felvételének pontosságát nagymértékben meghatározza a további laboratóriumi kutatások hatékonysága. Bőrelváltozások esetén az anyagot leggyakrabban kaparással vagy ragasztószalaggal választják ki (főleg felületes formákhoz) a kezelés előtt a friss, de teljesen kifejlődött gócokból a periféria mentén, ahol a legéletképesebb kórokozók találhatók.
A dermatofita gombák kimutatásakor a haj rendkívül informatív anyag, mivel a haj elváltozás jellege lehetővé teszi a kórokozó azonosítását. Bizonyos esetekben a Wood lámpa használata segít meghatározni az elváltozás fókuszát. Az érintett hajat a mérlegekkel együtt epiláló csipesszel távolítják el. Krónikus fekete-pont trichophytosisban a hajat boncoló tűvel távolítják el a bőrről.
A szögeket az összes réteg mentén veszik, éles szikével vagy ollóval vágják. A fogászati fúróval történő kiválasztás hatékonyabb. A candidiasis elváltozásai esetén az anyagot a körömhengerről kaparva választják ki. A kiválasztott anyagot sötét papírzacskókban szállítják a laboratóriumba, hogy elkerüljék a kiszáradást és az idegen mikroflórával való szennyeződést. A gennyes anyagot steril bakteriális nyomatokban vagy Petri -csészékben szállítjuk. A köpetet steril tartályba gyűjtik. A köpetvizsgálatot legkésőbb 2 órával a gyűjtés után kell elvégezni. A vizsgálati időszak meghosszabbításakor a mintákat hűtőszekrényben kell tárolni + 4 ° C -on, különben diagnosztikai hibák léphetnek fel az élesztősejtek pszeudomycelialis formáinak megjelenésével.
A vért és a cerebrospinális folyadékot aszeptikusan gyűjtik össze. A vérvetést a Sabouraud folyékony közegében végezzük. A vérminták szennyeződésének kizárása érdekében újra megvizsgálják. A cerebrospinális folyadékot centrifugálják, és az üledéket mikroszkópiára és oltásra használják.
A vizeletet reggel steril tartályba gyűjtik, miközben el kell kerülni, hogy az anyag a perineum bőrének mikroflórája által szennyeződjön. A vizelet tenyésztését kvantitatív tenyésztési módszerekkel végezzük.
A mikózisok diagnosztizálásakor a készítményeket natív anyagból és festett anyagból egyaránt használják. A festetlen készítmények vizsgálatakor a sűrű anyagot előzetesen 10-30% -os KOH-oldattal tisztítják (macerálják) (dimetil-szulfoxid oldatokat lehet használni), majd mikroszkóppal vizsgálják a „zúzott csepp” módszerrel. A kontraszt növelése érdekében a készítményeket metilén -kék vizes oldatával festjük.
A rögzített kenetek festését különböző módokon hajtják végre: Gram szerint metilén -kék, Romanovsky - Giemsa szerint. Az utóbbi módszer lehetővé teszi a kis élesztősejtek és a fagocitózis szakaszainak megtekintését. A kriptokokkoknál használjon tintafoltot, Southgate mucicarmine foltot. Például melanint tartalmazó gombák (sötét színűek) Cladophialophora bandana, misével festett - Fontana (a melanin színe, amely a sejtfal része). A fluoreszkáló szérumokat a mély mikózisok kórokozóinak, a dermatophytosis kórokozóinak, a nemzetség gombáinak diagnosztizálására használják. Candida.
A kórokozó tiszta tenyészetének izolálása lehetővé teszi a gomba általános és fajhoz való kötődésének megállapítását, tulajdonságainak és antimikrobiális szerekkel szembeni érzékenységének tanulmányozását. A gombák elkülönítésére és azonosítására Sabouraud sűrű és folyékony tenyésztő tápközegeket, sörleves agart használnak. Ezek a környezetek biztosítják a legtöbb patogén és opportunista gomba növekedését. Ezenkívül a Sabouraud környezet (8.2. Ábra) serkenti a gombák pigmentképződési folyamatait, amelyek fontosak az azonosításhoz.
A szennyező baktériumok szaporodásának elnyomása érdekében a táptalajhoz antibiotikumokat adnak: kloramfenikolt, sztreptomicint, penicillint, tetraciklinet. A szeszélyes kórokozó gombák elkülönítésére vérrel és agyi szívkivonattal dúsított tápközeget használnak. A gombák termesztésére és azonosítására speciális tápanyagokat használnak: Czapek táptalaja - a konídiumok kialakulásához a penészgombák azonosításakor, burgonya (burgonya -sárgarépa) agar, rizs agar - a növekedési típusok azonosításához és a klamidospórák megszerzéséhez a nemzetség gombáinak azonosításakor. Candida, sárgarépa (növényi) agar - tipikus gombatenyésztő telepek előállításához Trichophyton schonleini, Kashkin táptalaj - pigmentképző gombák elkülönítésére. Differenciáldiagnosztikai környezeteket is használnak például C azonosítására. albicans - kromogén közeg vagy közeg, amely lehetővé teszi a gomba foszfolipáz aktivitásának meghatározását.
A gombák inkubációs ideje több naptól 1 hónapig vagy tovább tart. Ha patogén dimorf gombákat gyanítanak, 8 hétig tenyésztik, hogy negatív választ kapjanak.
Az oltásokat kémcsövekbe, fiolákba és Petri -csészékbe öntött táptalajon végezzük. Az anyag dermatofita gombákra történő beoltását egyidejűleg több csövön végezzük a táptalajjal. A penészgomba gyanús anyagokat (köpet) 3 ponton oltják be, majd 28 és 37 ° C -on inkubálják. Annak érdekében, hogy megoldódjon a szennyeződés hiánya az anyag mintavételezése során, a laboratóriumi helyiségekben és osztályokon, ahol a betegek találhatók, a penészgombák tartalmát ellenőrző levegőtenyésztéssel végzik.
A gombák mikológiai laboratóriumban történő tenyésztésekor a bakteriológiai laboratóriumokhoz hasonló biztonsági intézkedéseket kell betartani. Az allergizáció elkerülése érdekében a személyzet penészgombákkal és mikotoxinokkal dolgozik a dobozos helyiségekben gézkötésben vagy a csuklyás asztali dobozokban. A II. Patogenitáscsoportba tartozó kultúrákkal (patogén dimorf gombák) csak speciális laboratóriumokban lehet dolgozni.
A gombás fajok azonosítását kulturális, morfológiai és egyéb jellemzők összessége alapján végzik. Az első a kolónia morfológiáját, színét és méretét speciális táptalajon történő tenyésztéskor, a szélének és a középpont szerkezetét, a felület jellegét, a reproduktív szervek jelenlétét és jellegét, a második - a mikroszkópos a micélium szerkezete, a reproduktív szervek szerkezete, alakja és mérete - konidioforok, konídiumok, chlamydospore, arthrospore stb.
A gombák különböző típusú kolóniákat képeznek szilárd táptalajokon. A G. Venter Intézet (USA) tudósai, figyelembe véve a gombák azon képességét, hogy pigmentanyagokat bocsátanak ki a közegbe, "karácsonyfát" hoztak létre a tápközegben (8.3. Ábra).
Rizs. 8.3. Gomba "karácsonyfa" (teteje: Talaromyces stipitatus; faipari Aspergillus nidulans; dekorációk: Penicillium marneffei; csikk: Aspergillus terreus)
A kultúrák enzimatikus és asszimilációs képességei nagy jelentőséggel bírnak az élesztőgombák (élesztőszerű gombák) azonosításában. Jelenleg kereskedelmi tesztrendszereket használnak a gyakori gombák - emberi és állati betegségek okozói - azonosítására: BBL Mycotube, API 20C bio Merieux stb.
Betöltés ...