4402 0
Ne yazık ki, şimdi bile, mantar hastalıklarının teşhisinin genellikle zamansız olduğu söylenebilir (saç bölgelerinin incelmesi, soyulma genellikle "kepek", "kuruluk" ile karıştırılır. Aynı zamanda lezyonlarda subjektif duyumlar (kaşıntı, ağrı vb.) sıklıkla oluşmaz ve bu nedenle hastalar uzun süre bir uzmana gitmezler.
Tırnaklardaki değişiklikler (çirkin, ufalanan, incelmiş) yaralanma, donma vb. sonrası "onikodistrofi" olarak kabul edilir. Aynı zamanda (tırnaklar dahil izole lezyonlar bile) vücudun alerjik yeniden yapılanmasına yol açabilir, kanı etkileyebilir ve lenfatik damarlar, vb. Buna sahip hastalar süresiz olarak mantar enfeksiyonunun yayılma kaynağı olarak kalır. Yukarıdakilerle bağlantılı olarak, mikozların zamanında laboratuvar teşhisi ve olası erken tedavi her zaman önemlidir.
Ağırlıklı olarak insanlarda bulunan mantar hastalıklarının klinik varyantlarının çeşitliliği ve ayrıca mikrobiyoloji, morfolojik yapı, immünolojik ve çeşitli mantar türlerinin (ve cinslerinin) diğer parametrelerinin özellikleri, teşhis için önemli sayıda yöntemin varlığına yol açmıştır. mikozlar; Mevcut yöntemlerin sürekli olarak geliştirilmekte olduğu ve (nispeten yakın zamanda) immünolojik ve moleküler genetik testlere karşı özel bir önyargıya sahip olduğu belirtilmelidir.
Öte yandan, kültürel çalışmalar hala "altına yakın standartlar kategorisinde" ve diğer çalışmaların şüpheli sonuçlarını doğrulamak için kullanılıyor; Tanısal olarak "şüpheli" mikoz formları için kültürel ve moleküler genetik yöntemlerin kombinasyonunun (özellikle yayılmış, herhangi bir oluşumun immünosupresyonunun arka planına karşı, iç organlara zarar veren vb.) En güvenilir yollardan biri olduğuna dair bir görüş vardır. sürecin mikotik doğasını kaydetmek.
Bununla birlikte, "eski" yöntemleri, özellikle bakteriyoskopiyi (özellikle ilk muayenede) ihmal etmemelisiniz, çünkü özellikle günlük uygulamada, birçok dermatolojik kurumda mikozun mikroskobik "doğrulanması" diğer testlere kıyasla en yaygın şekilde kullanılır.
Derideki (ve bazen visseral) alerjik belirtilerin sayısındaki önemli artış göz önüne alındığında - uzun süreli, kronik, periyodik olarak şiddetlenen bir mikoz seyri (cilt, tırnaklar, vb.) kombine mantar ve bakteriyel enfeksiyon dahil olmak üzere vücudun hassasiyet derecesi; bu gerçek, belirli bir hastada tedavinin özgüllüğünü etkileyebilir - örneğin, antimikotiklerin ve duyarsızlaştırıcı ajanların rasyonel atanmasını vb.
Geleneksel olarak, bir mantar hastalığının olası teşhisi, klinik belirtiler temelinde yapılır ve laboratuvar testleri ile doğrulanır.
Kitabın bu bölümünde, "araştırma türünü ve alınan materyali" dikkate alarak mikozları (yerlerinden bağımsız olarak) kaydettirmek için temel yöntemleri kısaca sunuyoruz. Mikozların (alerjik bileşeni olanlar dahil) klinik belirtilerinin polimorfizminin, çalışılacak patolojik materyalin çeşitliliğini belirlediğine dikkat edilmelidir. Bu durumda, mantarın elementlerini aramanın başarısı, doğru şekilde alınmasına bağlıdır.
Bu nedenle, eritemli-skuamöz, genellikle kıvırcık püskürmelerin periferik bölgesi miselyum, mantar sporları açısından daha zengindir; lezyonun tüylü bölgelerinde, bükülmüş, beyazımsı, rengi bozulmuş, donuk saçlar veya bunların parçaları - "kenevir" alınır (bir Ahşap lamba kullanılarak saç alımının kontrol edilmesi önerilir). Sözde malzemelerden (bir iğne kullanarak) numune almak için belirli beceriler gereklidir. "Siyah noktalar" - foliküllerin ağızlarında koyu azgın koniler.
Günlük uygulamada, cilt pulları genellikle incelenir (kazıma, bulaşma, yapışkan bant kullanılarak toplanır), değiştirilmiş tırnakların kazınması, subungual hiperkeratoz alanı ve ayrıca mukoza zarlarının deşarjı. Endikasyonlara göre balgam, lavaj sıvısı, idrar incelenir (kateterize olmayan mesaneli hastalarda); idrar torbalarından idrar, yatak damarları incelemeye alınmaz.
Kan (kültür araştırmaları ve ayrıca ELISA, PCR için), beyin omurilik sıvısı ve vücudun diğer biyolojik sıvıları (plevral, intraartiküler, intraperitoneal - aspirasyon veya drenaj yoluyla toplananlar dahil) tanı değeri de taşır; bazı durumlarda (topikal tanıya bağlı olarak), safra, dışkı, deri altı apselerin punktatları, fistül akıntısı (özellikle derin mikozlarda) önemlidir. Basit tanı testleri bile bir dizi koşula sıkı sıkıya bağlı kalmayı gerektirir.
Şu anda mantar hastalıklarını teşhis etmek için yöntemler kullanılmaktadır:
- mikroskopi; dahil olmak üzere test materyalindeki patojenin tespitine dayalıdır. insan dokularında;
- kültürel araştırma ve ardından mantar kültürünün mikroskobik incelemesi;
- histolojik inceleme (g.derin mikozlarla);
- bağışıklık ve moleküler yöntemler.
mikroskobik teşhis
Mikroskobik teşhis - özel optik ve daha sonra elektronik mikroskobik teknolojinin ortaya çıktığı dönemden itibaren mümkün oldu, bu da mantarların üst yapısını ayrıntılı olarak incelemeyi mümkün kıldı. Aynı zamanda, mantar elementlerinin tespiti - miselyumu (miselyum) oluşturan ince dallanma filamentleri, yuvarlak gövdeler (sporlar; mantarların üreme "organı" dır) teşhis değeri taşır.Mikroskobik teşhis, boyanmamış (doğal) ve lekeli müstahzarların çalışmasını içerir. Bu yöntem, belirtildiği gibi, karşılaştırmalı basitliği ve düşük maliyeti nedeniyle dermatolojik uygulamada en yaygın olanıdır, ancak diğer yandan yeterince hassas değildir, bazı durumlarda tekrarlanan analizler, diğer yöntemlerle doğrulama gerektirir.
Bu nedenle, lekesiz müstahzarları incelerken, mantar elementlerine ek olarak, epitel hücreleri, kan hücreleri, dış ortamdan çeşitli kirleticiler bulunabilir, bu da mikozun nedensel ajanını bulmayı zorlaştırır, malzemenin ek "hazırlığını" gerektirir - sözde. "Aydınlanma" (maserasyon), konsantrasyon, seyreltme vb.
Bununla birlikte, doğal preparatların doğrudan mikroskopisi, mikozu hızlı bir şekilde teşhis etmenize, materyalin hangi besin ortamına (gerekirse) aşılanması gerektiğini belirlemenize izin verir, olumlu sonucunun, olumsuz bir yanıtla mikozun tek laboratuvar onayı olarak kalabileceğine dair bir görüş vardır. kültür (A.Yu. Sergeev, Yu.V. Sergeev, 2003).
İlaçların "aydınlanması" için çeşitli seçenekler arasında, en yaygın olanı, test malzemesine KOH veya NaOH eklenmesidir (daha sık olarak, cilt pullarında, saçta ve ayrıca bir dizi nedensel ajanda mantarları tespit etmek için kullanılır. balgamda mikozlar, biyopsiler).
Ezilmiş ve bir cam slayt üzerine yerleştirilmiş maserasyon için, %10-20 sodyum hidroksit (veya potasyum) çözeltisi gerçekleştirilir - 1-3 damla, 10-20 dakika; hazırlık, daha hızlı maserasyon için bir kapak camı ile hafifçe bastırılır - buharlar görünene kadar bir alev üzerinde ısıtılır. Görüntüleme önce düşük büyütmede, ardından yüksek büyütmede (kuru sistem) gerçekleştirilir.
Kaba mekanik, termal ve kimyasal etkilere maruz kalmayan uygun şekilde hazırlanmış bir preparat, epitel hücrelerinden, mantar elementlerinin hücresel bozunma ürünleri - miselyum filamentlerinden ve sporlardan oluşan homojen bir kütlenin resmini sunar.
Modifiye edilmiş saçlar, %10-30 alkali içeren bir cam slayt üzerine yerleştirilir ve aynı şekilde, ancak daha uzun bir süre - 20 dakikadan 3-4 saate kadar tedavi edilir.Bol pigment içeriği ile ön ağartma yapılması önerilir. % 5 hidrojen peroksit çözeltisi ile saç. Mantarın elementlerinin tespitine ve saça göre konumlarına önem verirler.
Patolojik olarak değiştirilmiş tırnaklardan (tercihen odak derinliğinden kazıyarak elde edilen ince bir toz) materyalin hazırlanması aynı şekilde gerçekleştirilir, ancak% 30 kostik soda kullanılarak, bir alev üzerinde hafif buharlara zorunlu dikkatli ısıtma ve maruz kalma yaklaşık 1 saat (bazen birkaç saate kadar). Alkali ile işlem görmüş müstahzarlar, "bozulmalarından" (reaktifin kristalleşmesi, mikroskobik tablo ile belirlenen tanısal güvenilirliğin azalması) nedeniyle 1.5-2 saatten fazla saklanmamalıdır.
KOH veya NOOH yerine şunları kullanabilirsiniz: a) %15 DMSO ile bir KOH karışımı çözeltisi; b) fenol (2 kısım) ile kloral hidrat (2 kısım) ve laktik asit (1 kısım) karışımı; c) higi ve selüloza yakınlığı olan kalkoflorik beyaz; araştırma için bir floresan mikroskobu gereklidir (kullanılan filtreye bağlı olarak mavi veya yeşil bir parıltı gözlemlenir). Beyin omurilik sıvısı çalışmasında (kriptokokoz şüphesiyle), mürekkep boyama sıklıkla kullanıldı.
Kulaga V.V., Romanenko I.M., Afonin S.L., Kulaga S.M.
MİKOSİS LABORATUVAR TEŞHİSİ
Mantar için laboratuvar araştırması için malzeme almak.
1.OST 42-21-2-854: 27/06/00 tarihli sipariş No. 222/80
2. Ekipman: cımbız, mikroskop lamı, makas, Volkman kaşığı.
4. Endikasyonlar: mantar hastalıkları.
5. Komplikasyonlar: hayır.
Tedavi odasının hazırlanması:
Çözümlerin değiştirilmesi.
Hazırlamak:
Paçavralar için -%1 kloramin çözeltisi
-%3 kloramin solüsyonu - pansuman ve cımbızların dezenfeksiyonu için
- yıkama solüsyonu (156 ml. hidrojen peroksit + 5 gr. deterjan tozu + 839 ml. damıtılmış su) - cımbızları işlemek için
- %6 hidrojen peroksit çözeltisi - eldivenlerin tedavisi için.
Manipülasyon gerçekleştirmek için algoritma.
Cımbız, cam slayt, Folkman kaşığı, makas almanız gerekir;
- hastayı soyunma odasına davet edin;
- hasta bir sandalyeye veya kanepeye oturur;
- m / s duruyor.
Yürütme tekniği:
Cımbızla lezyondan cilt pullarını ve kılları alın;
- Alınan materyali bir cam slayt üzerine koyun ve başka bir cam slayt ile kapatın.
- ellerini sabun ve suyla yıka;
- Alınan materyali laboratuvara gönderin.
MALZEME TOPLAMA
Makas ve cam slaytlar alın;
- makasla tırnağın serbest kenarından bir parça kesin;
- alınan materyali başka bir cam slaytla örtün;
Makas ve cımbızı %3 formalin solüsyonuna batırın.
Etkilenen tırnaklardan doğru materyal toplanması, başarılı bir mikrobiyolojik çalışmanın anahtarıdır. Malzemeyi alırken, her zaman canlı mantar içeren çivi alanlarını yakalamazlar. Doğal olarak, kültürde canlı olmayan mantarlar büyümeyecek ve türleri tespit edilemeyecektir.
Alınacak tırnağın alanı onikomikoz şekline göre belirlenir.
Bu nedenle, yüzeysel bir onikomikoz formu ile tırnak plağının yüzeyinden kazıma yapılmalıdır.
En yaygın distal subungual formda, en canlı mantarlar tırnak plağının altında bulunur. Araştırma için gönderilen materyal, sadece tırnak plağının kırpılmasını değil, aynı zamanda tırnak yatağından plakanın altından kazımayı da içermelidir.
Ek olarak, en aktif mantarlar, bunlar ile tırnağın etkilenen bölgeleri arasındaki sınırda bulunduğundan, değişmeyen tırnağın alanları yakalanmalıdır.
Proksimal subungual formda materyalin alınması zordur. Bu durumlarda bazen özellikle histolojik inceleme veya ayırıcı tanı yapacaklarsa tırnağın biyopsisini alırlar bazen de frez kullanırlar.
Paronişi ile, proksimal silindirden ve bu silindirden kazıma yapılır.
Her durumda, bakteriyel kontaminasyonu önlemek için, numuneyi almadan önce çivi etil alkol ile muamele edilmelidir.
MİKROSKOPİK ÇALIŞMA
Mantarlar için patolojik materyalin mikroskobik incelemesi, doğal ve renkli müstahzarlarda yapılır.
Boyanmamış preparasyonların hazırlanması için elde edilen materyal bir neşter veya diseksiyon iğnesi ile ezilir ve bir lamın ortasına yerleştirilir. Mantarın elementlerinin daha net tanımlanması için malzeme aydınlatılır (macerlenir). Bu amaçla, epidermal pulları, mukusu, irini çözen, saç pigmentini netleştiren ve böylece mantarları araştırmaya hazır hale getiren, çoğunlukla kostik alkali (KOH, NaOH) olmak üzere çeşitli maddelerin yardımına başvururlar.
Slaytın ortasına yerleştirilen deri veya tırnağın yumuşatılmış pullarına 1-3 damla %20-30 KOH (NaOH) solüsyonu uygulayın. Alkali damlalarındaki test malzemesi, damlanın çevresinde hassas beyaz bir alkali kristal kenarı görünene kadar bir alkol lambasının alevi üzerinde dikkatlice ısıtılır. Kaynamaya ön ısıtma yapmayın. Isıtıldıktan sonra damla, hava kabarcıklarının girmesini önleyerek bir kapak camı ile kaplanır.
RA Arabiyskiy ve GI Gorshkova (1995), mikroskopiden önce cilt pullarını ve bir kapak camı ile kaplanmış saç preparasyonlarını 5 - 10 dakika ve tırnak plakalarını - 30 - 40 dakika bekletmeyi önermektedir.
Preparatların aydınlatılması ısıtılmadan gerçekleştirilebilir, bunun için 30 - 60 dakika boyunca% 20'lik bir KOH çözeltisi içinde bırakılırlar veya patolojik materyali aydınlatmak için başka yöntemler kullanılır: Aman'a göre klorallaktofenol; laktofenol; su içinde %15 dimetil sülfoksit ve KOH içeren bir çözelti. % 5'lik KOH solüsyonunda 24 saat bekletilen tırnak plakalarının aydınlatılmasından sonra iyi sonuçlar alınır, bu durumda ısıtmaya gerek yoktur.
Mikroskobik inceleme, daldırma olmadan geleneksel bir laboratuvar mikroskobu üzerinde gerçekleştirilir.
Mikroskobun kondansatörü indirilmeli, diyafram daraltılmalıdır. Başlangıçta, ilaç düşük büyütmede (40x) cam üzerinde bulunur, sonraki çalışma daha yüksek büyütmede (100x) gerçekleştirilir;
hazırlık 400x büyütmede ayrıntılı olarak incelenir. Testin güvenilirliğini artırmak ve yanlış pozitif sonuçlardan kaçınmak için birkaç ilacın araştırılması gerekmektedir.
Mantarların mikroskobik tanısında hatalar, hem ilacın hazırlanmasındaki kusurlardan hem de laboratuvar asistanının deneyim eksikliğinden kaynaklanabilir.
Üretim kusurları öncelikle şunlarla ilgilidir:
alkali kristallerin kaybına, saçın tahrip olmasına ve patolojik materyalde ince taneli parçalanmanın ortaya çıkmasına neden olabilecek ilacın aşırı ısınması ile.
Uzatılmış, hatta alkali kristallerin doğrusal düzenlemesi, patolojik materyal içermeyen temiz cam üzerinde bile septik miselyum filamentlerine çok benzer.
Ayırıcı tanı özellikleri, kristallerin olağanüstü tekdüzeliği, camsı şeffaflıkları, kenarların çok yönlülüğü ve bir element ile diğeri arasında ayrılmaz bir bağlantının olmamasıdır. Şüpheli durumlarda, müstahzara alkali kristallerini hızla çözen hafif ılık damıtılmış su damlacıkları eklenmesi önerilir.
Aşağıdakiler mantarın unsurlarıyla karıştırılabilir:
- yağ damlacıkları,
- hava balonları,
- pamuklu giysiler
- ve sözde "mozaik mantar".
Cildin lipidleri, hücrelerin yağ parçalanması ve keratohyalin taneleri, özellikle doğru şekle sahip olanlar, mantarın bireysel sporlarına benzeyebilir. Ancak şekillerin çeşitliliği ve en önemlisi boyutları, oluşumların (kofullar, kabuklar) iç yapısının olmaması, bu elementlerin mantar doğasına karşı konuşur. Yetersiz saflaştırılmış bir lezyondan patolojik materyal alırken de lipidler ilaca girebilir.
Hava kabarcıkları, maya benzeri hücrelerin sporlarına benzeyebilir, ancak ikincisinden farklı olarak, yoğun koyu bir zarla çevrilidirler ve en küçük hava kabarcıkları bile her zaman mantarın hücrelerinden daha büyüktür.
Çorap, giysi vb. kumaştan iplikler genellikle patolojik malzemeden ayrı olarak uzanır, her zaman hiphadan daha büyük, daha kalın ve septik değildir.
"Mozaik mantar", kristalizasyon sırasında (muhtemelen kolesterolün parçalanması nedeniyle) oluşan bir eserdir. Ana hatları azgın pulların sınırlarına karşılık gelen bir ağ veya halka şeklindedir, miselyum filamentlerinin aksine, asla epidermisin hücrelerinin duvarlarını geçmez.
Bazı laboratuvarlarda, mikroskobik inceleme için hazırlıkların netleştirilmesi, % 5 - 10 oranında Parker'ın ticari koyu mavi mürekkebinin (Parker's Superchrome Blue-Black Ink) eklendiği %15 - 30 KOH çözeltisi ile gerçekleştirilir.
Bu renkle hifler ve sporlar maviye döner.
Mikroskopi, filamentli mantar hiflerini veya tomurcuklanan hücreleri ortaya çıkarır (Şekil 1).
Bu nedenle mikroskopi, yalnızca enfeksiyonun mantar doğası hakkında bir sonuç verir, ancak mantara neden olan ajanın türü hakkında değil.
Tabii ki, mikroskobik incelemenin etkinliği, laboratuvar çalışanının niteliklerine bağlıdır.
Pirinç. 1. T. rubrum'dan etkilenen tırnaklardaki kazımaların mikroskopisi. Mantarın hifleri görülebilir.
KÜLTÜR ARAŞTIRMASI
Materyal, genellikle antibiyotiklerle standart bir Sabouraud besiyerinde aşılanır. Dermatofit enfeksiyonlarının tanısında, havadan gelen kirletici mantarların büyümesini baskılayan Sabouraud ortamına sikloheksimid eklemek gelenekseldir. Antibiyotik ve sikloheksimit katkı maddeleri içeren hazır ticari ortamlar vardır. Dermatofitik olmayan birçok küfün ve bazı Candida türlerinin sikloheksimidli ortamda üremediği unutulmamalıdır, bu nedenle Sabouraud besiyerinde sikloheksimidli ve onsuz ortamda aşılanması önerilir. Tür tanımlaması genellikle yetiştirilen kültürün mikroskobik incelemesi veya seçici besiyeri üzerinde yeniden tohumlama ile gerçekleştirilir (Şekil 2-15).
Pirinç. 2. Etkilenen tırnaklardan izole edilen T. rubrum mantar kültürü. Sabouraud besiyerinde (solda) ve mısır agarında (sağda) elde edildi.
Pirinç. 3. Mantar kültürü T. mentagrophytes var. Etkilenen tırnaklardan izole edilen interdigitale. Saburo ortamında elde edilmiştir.
Pirinç. 4. Candida albicans mantarının kültürü. Saburo ortamında elde edilmiştir.
Pirinç. 5. Etkilenen tırnaklardan izole edilen mantar Torulopsis glabrata kültürü. Saburo ortamında elde edilmiştir.
Pirinç. 6. Mantar kültürü Ulocladium sp., Etkilenen tırnaklardan izole edilmiştir.
Pirinç. 7. Etkilenen tırnaklardan izole edilen Acremonium sp.'nin mikromorfolojisi.
Pirinç. 8. Etkilenen tırnaklardan izole edilen Fusarium türlerinin mikromorfolojisi.
Pirinç. 9. Etkilenen tırnaklardan izole edilen Scopulariopsis sp.'nin mikromorfolojisi.
Pirinç. 10. Etkilenen tırnaklardan izole edilen Candida albicans mikromorfolojisi.
Pirinç. 11. Etkilenen tırnaklardan izole edilen Altemaria sp.'nin mikromorfolojisi.
Pirinç. 12. Etkilenen tırnaklardan izole edilen Aspergillus sp.'nin mikromorfolojisi.
Pirinç. 13. Etkilenen tırnaklardan izole edilen Ulocladium sp'nin mikromorfolojisi.
Pirinç. 14. Etkilenen tırnaklardan izole edilen Chaetomium sp.'nin mikromorfolojisi.
Şekil 15. Dermatofitlerin tanımlanması için beslenen besin paneli (sol - kültür T rubrum, sağ - T mentagrophytes var. Mterdigitale).
Soldan sağa: Sabouraud besiyeri, Baxter besiyeri, Christensen besiyeri, mısır agar
Dermatofitler de dahil olmak üzere bazı küf mantarlarının kültürde 2-3 hafta içinde yavaş büyüdüğü belirtilmelidir.
İyi laboratuvar ekipmanı ve personelinin yüksek nitelikleri ile tüm materyal toplama kurallarına uyulsa bile, kültür araştırmalarının olumlu sonuçlarının sayısı çok azdır.
Yabancı literatüre göre olumlu çalışmaların yüzdesi 50'yi geçmemektedir.
En iyi yerli laboratuvarlardaki olumlu sonuçların yüzdesi zar zor 30'a ulaşıyor.
Bu nedenle, her 3 onikomikoz vakasından 2'sinde etiyolojisi belirlenemez.
LÜMİNESAN ARAŞTIRMA
1925'te Margaret ve Deveze, belirli dermatofitlerden etkilenen tüylerin, bir Byda filtresinden geçen ultraviyole ışınlarına maruz kaldıklarında karakteristik bir parlaklık verdiğini keşfettiler. Byda camı baryum sülfattan oluşur, yaklaşık %9 nikel oksit içerir; 365 nm uzunluğunda ışınları iletir. Ultraviyole ışınlarının kaynağı olarak çeşitli cihazlar kullanılabilir. Işığın doğası tam olarak belirlenmemiştir. Saç, mantarın ölümünden sonra ve floresan materyali sıcak su veya soğuk sodyum bromür solüsyonu ile çıkarmaya çalıştıktan sonra parlamaya devam eder. Işımanın yoğunluğu ve doğası, çözeltinin pH'ına bağlıdır. Floresan maddenin, mantar ve büyüyen saç arasındaki etkileşim sürecinde ortaya çıktığına inanılmaktadır.
Wood filtresinden geçen ultraviyole ışınlarında parlama, yalnızca Microsporum cinsinin mantarlarından etkilenen saçlar için tipiktir (M. canis, M. audouinii, M. ferrugineum, M. distortium, bazen M. gypseum ve M. nanum), yanı sıra Trichophyton schonleinii ... Mikrosporumlardan, özellikle M. canis ve M. audouinii'den etkilenen saçlar en parlak ışıltıyı verir; T. schonleinii'den etkilenen tüyler donuk yeşilimsi bir floresansa sahiptir.
Parlama sadece mantardan tamamen etkilenen saçlarda görülür. Taze lezyonlarda olmayabilir. Bu durumlarda saçın en aktif kenar bölgesinden epilasyon yapılmalıdır ve parlaklık saçın kök kısmında bulunabilir.
Lüminesans yöntemi, hem bireysel hastalarda hem de epidemiyolojik odaklarda tedavinin etkinliğini teşhis etmek ve izlemek için kullanılabilir. Kompakt mobil üniteler, okullarda, anaokullarında vb. irtibat kişilerini incelemek için uygundur.
Lüminesans muayenesi karanlık bir odada yapılmalıdır, lezyonlar kabuklardan, merhem kalıntılarından vb. önceden temizlenmelidir. Lüminesans yöntemi, özellikle lezyonlar saçlı deride lokalize olduğunda pitriyazis likenini teşhis etmek için kullanılabilir. Bu hastalıktaki lezyonlar kırmızımsı sarı veya kahverengi bir parıltıya sahiptir. Ancak bu parıltı kesin olarak spesifik değildir, çünkü kafa derisinde kepek varlığında ve hatta sağlıklı insanlarda yüz ve üst vücuttaki saç köklerinin ağız bölgesinde gözlemlenebilir. Lüminesans yöntemi kullanılarak tanımlanan etkilenen tüyler, mikroskobik incelemeye tabi tutulmalıdır.
İMMÜNOLOJİK VE BİYOLOJİK ARAŞTIRMA
Vücudun spesifik yeniden yapılanmasını ve mantar hastalıklarının serolojik teşhisini belirlemek için immünolojik araştırma yöntemleri kullanılır. Numunenin serumundaki spesifik antikorları saptamak için aşağıdaki serolojik reaksiyonlar gerçekleştirilir: aglütinasyon, çökeltme, kompleman bağlanması, karşılık gelen antijenlerle immünofloresan.
Alerjik cilt testleri kullanılarak hastanın vücudunda alerjik bir durum tespit edilir. Alerjenler, Pirque'ye göre ya da Moro'ya göre deriye sürtünerek, Mantoux'ya göre intradermal olarak ve ayrıca deriye enjeksiyon yoluyla kazınmış cilde uygulanır. Bu testlerin yardımıyla, hem ani hem de gecikmiş tipte alerjik reaksiyonlar tespit edilir, bu da hümoral ve hücresel bağışıklığın durumunu değerlendirmeyi mümkün kılar.
Lenfositlerin spesifik sensitizasyonunu belirlemek için bazofil degranülasyonu, aglomerasyon ve değişiklik reaksiyonları, blast transformasyon testi, makrofaj göçünün inhibisyonu vb. kullanılır.
Serolojik ve alerjik reaksiyonların sonuçlarının karşılaştırılması, mikozların seyrinin hem teşhisi hem de prognozu için faydalıdır.
Biyolojik yöntem. Derin ve özellikle tehlikeli mikozların laboratuvar teşhisi için kullanılır. Çalışılan mantarın bir hasta veya kültüründen alınan patolojik materyal ile hayvanların enfeksiyonuna dayanarak. Özel laboratuvarlarda gerçekleştirilir.
HİSTOLOJİK İNCELEME
Dermatofitlerin neden olduğu deri mikozlarının histolojisi
Lezyonlardaki patomorfolojik değişikliklere, mantarların epidermisin, saçın ve tırnakların stratum korneumuna girmesi ve derinin akut, subakut veya kronik olabilen enflamatuar bir tepkisi neden olur. Tanı, ancak histolojik preparatlarda mantar elementleri bulunursa kurulmuş olarak kabul edilebilir. Bunun için çeşitli histolojik boyalar kullanılır, en bilgilendirici olanı, çoğu dermatofitin hücre duvarının selüloz ve kitinde bulunan polisakkaritleri (Shifu boyası ve modifikasyonları) tanımlamayı mümkün kılan periyodik asit reaksiyonudur (PAS). Sülfasyon reaksiyonlarını ve histolojik bölümlerin gümüşle emprenye edilmesini de kullanabilirsiniz [Khmelnitsky OK, 1973; Lewer W.F. ve Schaumburg-Lewerl., 1983].
Epidermisin stratum corneum'undaki mantarlar, özel boyalar kullanıldığında bile miselyum filamentleri ve sporlar şeklinde küçük miktarlarda tespit edilir. Nadir durumlarda lezyonlarda çok sayıda mantar bulunduğunda, stratum corneumda hassas bazofilik yapılar şeklinde hematoksilen-eozin ile boyanmış kesitlerde bulunabilirler.
Epidermisteki inflamatuar değişiklikler farklı olabilir: dikenli hücrelerin küçük hücre içi ve hücre dışı ödeminden şiddetli sponjioza. Spongiosis genellikle ayakların ve ellerin mikozlarının dishidrotik varyantları ile gelişir, klinik olarak bu durumlarda kabarcıklar not edilir. Bu reaksiyona genellikle T. mentagrophytes var neden olur. interdigital. Bazen epidermiste, T. rubrum'un neden olduğu mikozda en sık görülen belirgin bir hiperkeratoz vardır.
Dermisteki histolojik değişiklikler spesifik değildir ve akut, subakut ve kronik inflamasyona karşılık gelir.
T. rubrum'un neden olduğu pürüzsüz cilt mikozunda mantarlar bazen vellus kıllarında ve kıl köklerinde bulunur. Mantarların dermise girmesi nedeniyle granülomatöz bir karakter kazanabilen foliküllerin çevresinde inflamatuar bir reaksiyon gelişir. Bu durumlarda infiltratın merkezi kısmı süpürasyon ve nekroza uğrayabilir ve periferik kısım, içinde bazen mantar sporlarının bulunduğu lenfositler, histositler, epiteloid ve çok çekirdekli dev hücrelerden oluşur. Buradaki spor boyutları 6 mikron çapa ulaşır, saçta genellikle 2 mikronu geçmez.
Saç derisinin infiltratif-süpüratif formu ve sakal ve bıyıkların büyüme alanı ile saç folikülünde, saçın içinde ve çevresinde mantar elementleri bulunur. Saçta, keratinizasyonun başladığı bölgenin hemen üzerinde belirlenirler (yaklaşık 30 mikron seviyesinde). Dermiste, en çok kerion Celsii ile belirgin olan, değişen yoğunlukta bir enflamatuar reaksiyon not edilir. Akut pürülan reaksiyon durumunda, infiltratın bileşiminde çok sayıda nötrofilik lökosit not edilir, bu durumda mantarların elementleri tamamen kaybolabilir. Sürecin kronik seyrinde, sızıntı granülomatöz bir karakter kazanabilir, içinde çok çekirdekli dev hücreler belirir. İnfiltratta mantar yokluğunda tanıyı doğrulamak için immünofloresan boyama yöntemleri kullanılabilir. Bu amaçlar için, saçtaki ve perifoliküler infiltrattaki mantar antijenlerinin saptanmasını sağlayan T. mentagrophytes'e karşı floresan etiketli antiserum kullanılır.
Kafa derisinin mikozunda (kerion Celsii) ve M. canis, T. tonsurans ve T. verrucosum mantarlarının neden olduğu sakal ve bıyıkların büyüme alanında infiltratif-süpuratif cilt reaksiyonunun oluşumu, immünolojik bir tezahürdür. reaksiyon. Bu şu şekilde kanıtlanmıştır:
1. Lezyonların kendiliğinden düzelme eğilimi.
2. T. verrucosum (faviforme) ve T. tonsurans'ın neden olduğu mikozlu cilt kısmında çok belirgin bir enflamatuar reaksiyon ile mantar elementlerinin olmaması.
3. Zoofilik trikofitinlerin (örneğin, T. tonsurans) neden olduğu infiltratif-süpüratif mikoz formlarında trikofitinin intradermal uygulamasına yanıt olarak sürekli bir pozitif reaksiyon ve negatif - aynı T. tonsurans'ın neden olduğu yüzeysel mikozlarda.
Epidermisin stratum corneum'unda favus ile çok sayıda miselyum filamenti ve mantarın tek sporları bulunur. Scutula, eksüda, epidermisin parakeratotik hücreleri, inflamatuar infiltrat hücreleri ve ayrıca esas olarak scutula'nın periferik bölgesinde bulunan miselyum filamentleri ve mantar sporları ile temsil edilir. Hastalığın aktif aşamasında, dejeneratif kıl foliküllerinin etrafındaki dermiste çok çekirdekli dev ve plazma hücreleri içeren belirgin bir inflamatuar infiltrat not edilir. Eski lezyonlarda saç ve yağ bezleri yoktur, fibroz fenomeni vardır.
Maya benzeri mantarların neden olduğu deri ve mukoza zarlarının mikozlarının histolojisi
Deri ve mukoza zarının kandidiyazı ile, Candida cinsinin mantarları, epidermisin stratum corneum'unda veya mukoza zarının epitelinin yüzey katmanlarında bulunur. Mantar elementleri genellikle azdır, PAS reaksiyonu veya Gram ile iyi boyanırlar; 2-4 mikron çapında septat dallı miselyum filamentleri veya 3-5 mikron çapında oval sporlar şeklinde sunulur. Mantarın misel formunun tespiti teşhis değeri taşır.
Derinin ve mukoza zarlarının kronik granülomatöz kandidiyazisine ilişkin bir histolojik çalışmada, mantar elementleri de ağırlıklı olarak epidermisin stratum corneum'unda veya mukoza zarının epitelinin en üst kısımlarında bulunur, ancak bazen cildin içindeki dikenli tabakada bulunur. saç ve dermiste. Ayrıca belirgin hiperkeratoz ve papillomatoz vardır; dermiste - lenfoid hücreler, nötrofiller, plazma ve çok çekirdekli dev hücrelerden oluşan yoğun bir enflamatuar sızıntı. Sızıntı deri altı yağ dokusuna yayılabilir.
Pityriasis versicolor ile, epidermisin stratum corneum'unda, preparatlar hemotoksilen-eozin ile boyandığında bile açıkça görülebilen hassas bazofilik yapılar şeklinde çok sayıda mantar elementi bulunur. Mantarlar hem filamentler hem de sporlar ile temsil edilir.
Foliküler pitriyazis liken formu ile, kıl foliküllerinin genişlemiş ağızlarında azgın kitleler ve inflamatuar bir infiltrat hücrelerinin birikimi vardır. Foliküllerin çevresinde de inflamatuar infiltrasyon görülür. PAS reaksiyonunda, mantarın 2-4 mikron çapında küresel veya oval sporları kıl köklerinin ağzında ve bazen de perifoliküler infiltratta bulunur. Miselyum asla tespit edilmez.
Pityriasis versicolor hastalarında bozulmuş cilt pigmentasyonu, Pityrosporum mantarının epidermiste pigmentasyon sürecini engelleyen bir madde üretme kabiliyetinden kaynaklanır. Hipopigmente alanlardan alınan deri biyopsilerinin elektron mikroskobik incelemesi, melanositlerde keratinositlere nüfuz edemeyen çok küçük melanozomların oluştuğunu gösterdi. Öte yandan, cildin hiperpigmente bölgelerinde melanozomlar büyüktür ve büyük miktarda melanin içerir.
Mantar hastalıklarının teşhisinin temeli, cildin ve tırnakların etkilenen bölgelerinden hazırlanan preparatların mikroskobik incelemesidir. Bununla birlikte, farklı mikoz tiplerindeki mikroskobik resim benzerdir: cilt pullarında ve tırnaklarda mantar sporları ve 4-7 mikron çapında dallı septat miselyum görülür. Bu nedenle, çoğu durumda mantarın cinsi ve türü, deri pullarındaki veya tırnaktaki kazımadaki mikroskobik resim ile belirlenemez. Patojeni tanımlamak için, aşılamalar, çoğunlukla Sabouraud's besiyeri olmak üzere, besleyici besiyerinde gerçekleştirilir.
Epidermofitoz. Derinin stratum korneumu, çoğunlukla ayaklar ve alt ekstremitelerin tırnakları etkilenir. Saç asla etkilenmez. Tırnaklarda sarı lekeler veya çizgiler belirir, daha sonra hiperkeratoz (tırnakların kalınlaşması) gelişir, deformasyonları ve yıkımları. Tabanların ve interdigital kıvrımların lamel soyulması, ayak derisinde kızarıklık görülür. Bazen kabarcıklar, bebek bezi döküntüleri, çatlaklar oluşur. Hastalığa kaşıntı, yanma, ağrı eşlik eder.
Kazımaların, pulların, mesane kapaklarının mikroskobik incelemesi, 3-5 mm çapında miselyumun düşük septik filamentlerini ortaya çıkarır, filamentlerin bazıları yuvarlak ve dikdörtgen sporlara ayrılır.
Trikofitoz. Cildin ve eklerinin, saçı etkilemeye özel bir eğilimi olan mantar hastalığıdır [lat. trikolar saç + bitki mantar]. Saçlı deride yaklaşık 1.5 cm çapında çok sayıda lezyon görülür. Üzerlerindeki cilt ödemli, hiperemiktir, pullarla kaplıdır. Lezyonlardaki kıllar, cilt yüzeyinin 2-3 mm üzerinde kırılır, bu nedenle "saçkıran" adı verilir.
Mikroskobik inceleme, Trichophyton mantarlarının karakteristik bir özelliğini ortaya çıkarır - sporlarının zincirler halinde düzenlenmesi. Mantarların özelliklerine bağlı olarak:
Endothrix (yüzeysel trikofitozun etken maddesi). Mantarlar saçın içinde büyür ve yapısını önemli ölçüde değiştirir. Tüm saç, büyük yuvarlak veya kare sporlardan oluşan paralel zincir sıralarıyla doldurulur (doldurulur);
Ektothrix (derin trikofitozun etken maddesi), saçın eksen boyunca zincirler halinde düzenlenmiş küçük veya büyük sporlardan oluşan bir kılıfla sarıldığı.
Favus kabuktur. Saç ve cilt etkilenir, daha az sıklıkla tırnaklar. Saçlar eski peruklar gibi incelir, donuklaşır, “tozlanır”, ancak kırılmaz. Deri lezyonları, tabaklarınki gibi kenarları yükseltilmiş sarı-gri kabukların (scut) görünümü ile karakterize edilir.
Mikroskobik inceleme, etkilenen saçın içinde hava kabarcıklarını ortaya çıkarır.
Mikrosporia. Cilt ve saç etkilenir. Lezyonlarda saç deri yüzeyinden 6-8 mm yükseklikte kopar. Kalan kütüklerin çevresinde beyazımsı kılıflar görülür.
Etkilenen saçın mikroskobik incelemesi, mozaik desende (rastgele) saçın etrafında ve içinde bulunan sporları ortaya çıkarır. Çok küçüktürler (1-3 mm), bu nedenle hastalığın adı. Saçın karakteristik floresan parıltısı, mikrosporiyi teşhis etmeye yardımcı olur.
Mikroskobik incelemede genellikle üzüm salkımı şeklinde yuvarlak tomurcuklanan hücreler görülür.
Derin (küf) mikozlar. Antibiyotik fabrikalarında, küflü tahıl, saman, kompost vb. ile temas eden tarım işçilerinde meslek hastalığı olarak daha sık görülürler. Penisilozun (fırça mantarı) etken maddesi, fırçayla biten kaba, geniş, septik bir miselyuma sahiptir. Mukorozun etken maddesi, bir spor torbasında biten geniş, septik olmayan bir miselyuma sahiptir. Aspergillozun (lösemi küfü) etken maddesi genellikle küflü meyveler ve ekmekte bulunur. Su akıntıları olan bir sulama kabına benzeyen sporlu ipliklerin dallandığı bir genişleme ile biten kaba bir bölmeli miselyuma sahiptir.
Aktinomikoz. Farklı radyan mantar türleri neden olur. Deride, mukoza zarlarında ve iç organlarda yoğun sızıntıların oluşması, süpürasyona eğilimli ve fistüllerin görünümü ile karakterizedir. Fistül deşarjında karakteristik parlak kenarlı küçük sarı granüller - aktinomiset drusları görülebilir. Mikroskopi hazırlıkları fistül ve balgamın boşaltılmasından hazırlanır.
Düşük büyütmede, parlak mantarın drusları, hafif amorf bir orta ve kenarlarda daha koyu bir renk ile sarımsı, yuvarlak oluşumlar görünümündedir. Yüksek büyütmede, drusenin merkezinde miselyum filamentler ve çevre boyunca şişe şeklindeki şişlikler belirlenir. Gram'a göre boyama yaparken miselyum filamentleri G + ve koniler G-'dir.
İnvaziv mikozların kesin teşhisi kolay değil. Bu, yalnızca mantar kültürü elde etmedeki zorluklarla değil, aynı zamanda araştırma sonuçlarının yorumlanmasında da açıklanır, çünkü hem maya hem de misel olan mantarlar, mukoza zarlarını kolonize edebilir ve incelenen örnekleri kontamine edebilir. Bu bağlamda, invaziv mikozların teşhisi, yalnızca mikolojik (kültürel) ve serolojik (mantar antijeninin belirlenmesi) çalışmaların sonuçlarını değil, aynı zamanda mantar enfeksiyonunun klinik semptomlarını, yardımcı araştırma yöntemlerinden elde edilen verileri de içeren entegre bir yaklaşıma dayanmaktadır ( bilgisayarlı veya manyetik rezonans görüntüleme, ultrason).
Avrupa-Amerikan Kooperatif Grubu invaziv mikozların incelenmesi için bağışıklığı baskılanmış hastalarda, invaziv mikoz teşhisi için kriterler geliştirilmiştir. 2001'de Uluslararası Antimikrobiyaller ve Kemoterapi Konferansı'nda (ICAAC, Chicago) ve 2002'de basılı olarak sunuldu. Klinik ve epidemiyolojik çalışmalarda kullanılması önerilen kanıtlanmış, olası ve olası invaziv mikoz kriterleri belirlenmiştir.
Filamentli mantarlar nedeniyle kanıtlanmış invaziv mikoz: histolojik veya sitolojik inceleme veya normalde steril bir odaktan aseptik koşullar altında elde edilen numunelerden kültür izolasyonu sırasında biyopsilerde veya aspiratlarda mantar miselyumunun tespiti, klinik ve radyolojik çalışmaların sonuçlarına göre, istisna dışında enfeksiyonla ilişkili idrar ve mukoz membran çalışmaları.
Maya nedeniyle kanıtlanmış invaziv mikoz: Mukoza zarlarından alınan numuneler haricinde biyopsilerde veya aspiratlarda maya hücrelerinin (Candida cinsinin mantarları psödomiselyum veya gerçek miselyum oluşturabilir) tespiti veya normalde steril bir odaktan aseptik koşullar altında elde edilen numunelerden kültür izolasyonu, ki, idrar, sinüs ve mukoz membran örnekleri veya mikroskopi ve spesifik boyama (bir damla mürekkeple, musikarmin ile boyama) ile saptama haricinde enfeksiyonla ilişkili klinik ve radyolojik çalışmaların sonuçlarına göre maya hücreleri veya pozitif antijen Cryptococcus spp . beyin omurilik sıvısında.
Filamentli mantarlara bağlı mantar hastalığı: Aspergillus spp. dışındaki mantarların kan kültürlerinin izolasyonu. ve Penicillium marneffei de dahil olmak üzere Penicillium spp., izole edilmiş patojenle uyumlu bulaşıcı bir sürecin klinik semptomları ile kombinasyon halinde.
Maya mantarlarına bağlı mantar hastalığı: Bu patojenle ilişkili klinik enfeksiyon belirtileri olan hastalarda Candida veya diğer maya mantarlarının kan kültürlerinin izolasyonu.
İnvaziv mikozlar için teşhis çalışmaları kompleksi
| İncelenen biyomateryal | Gösterge, kullanılan medya, değer |
| Kan |
Belirteçler:
geniş spektrumlu antibiyotiklerle tedavi sırasında kalıcı ateş (4-5 gün veya daha fazla); antibiyotik tedavisinin arka planında ikinci ateş "dalgası" Aerobik bakteriler için bir damardan şişelere kan alınması * veya mantarlar için seçici bir ortamda, tekrarlanır (1 saat arayla gün içinde 2-3 kez) Teşhis alaka düzeyi: maya izolasyonu, Fusarium spp. hariç filamentli mantarları izole ederken dikkatli yorumlama. |
| venöz kateter |
Belirteçler:
kandan maya izolasyonu Merkezi veya periferik venöz kateter, kandan maya salgılanmasının tüm vakalarında çıkarılır. Mikolojik inceleme için kateterin aseptik olarak çıkarılan 5-6 cm uzunluğundaki distal segmenti kullanılır.Çalışma Sabouraud üzerinde yarı kantitatif (Maki yöntemi) veya kantitatif yöntemle gerçekleştirilir. Teşhis alaka düzeyi:
|
| Üst solunum yollarının deşarjı, balgam, trakeadan lavaj, bronşlar, bronkoalveolar lavaj sıvısı |
Belirteçler:
filamentli mantarların veya Cryptococcus neoformans'ın neden olduğu mikoz şüphesi; geniş spektrumlu antibiyotikler ve nötropeni ile tedavi sırasında uzun süreli ateş Beyaz kalkoflorlu numunelerin mikroskopisi (miselyum veya psödomiselyum tespiti); Saburo'nun Çarşamba günü ekim; invaziv aspergillozun özelliği olan akciğerlerde odakların varlığında bronkoalveolar lavaj sıvısında Aspergillus antijeninin belirlenmesi Teşhis alaka düzeyi: Filamentli mantarların veya Cryptococcus neoformans'ın izolasyonu |
| Beyin omurilik sıvısı |
Belirteçler:
menenjit belirtileri; bilgisayarlı veya manyetik rezonans görüntüleme ile beyindeki bir odağın (odakların) tespiti; Ateş ve nötropeni ile ilişkili "serebral" semptomlar Bir damla mürekkep içinde beyaz kalkoflorlu mikroskopi; Aspergillus, Cryptococcus antijeninin belirlenmesi; ekim çarşamba saburo Teşhis alaka düzeyi:
|
| Biyopsiler, aspiratlar, periton sıvısı, plevral sıvı |
Belirteçler:
invaziv mikozun klinik ve/veya radyolojik belirtileri; geniş spektrumlu antibiyotiklerle tedavi sırasında ateş. Beyaz kalkoflorlu mikroskopi, Sabouraud besiyeri üzerine kaplama Teşhis alaka düzeyi:
|
Olası invaziv mikoz Aşağıdaki kriterlerin bir kombinasyonu ile teşhis:
mikrobiyolojik kriterler kategorisinden bir özellik;
"önemli" kategorisinden bir işaret veya bulaşıcı sürecin "daha az önemli" klinik semptomları grubundan iki işaret.
Olası invaziv mikoz Aşağıdaki kriterlerin bir kombinasyonu temelinde teşhis:
invaziv mikoz gelişimini indükleyen en az bir risk faktörünün varlığı;
mikrobiyolojik kriterler kategorisinden bir işaret veya "önemli" kategorisinden bir işaret ("daha az önemli" grubundan iki işaret), bulaşıcı sürecin klinik semptomları.
Kavram " olası invaziv mikoz»Antifungal ilaçların etkinliğini araştıran klinik çalışmalarda kullanılması önerilmez. Bu terimi ampirik antifungal tedavinin analizinde, epidemiyolojik çalışmalarda ve farmakoekonomi çalışmasında kullanabilirsiniz.
NS mikolojik araştırma Steril aspiratlar veya biyopsiler, yalnızca mantar kültürünün izolasyonunu değil, aynı zamanda miselyum veya psödomiselyumun mikroskopi ile saptanmasını da hesaba katar. Histolojik preparasyonlarda Aspergillus'u Fusarium spp., Sceclosporium apiospermum ve diğer bazı filamentli mantarlardan ayırt etmek zordur. Ayırıcı tanı için Aspergillus'a karşı antikorlarla bir immünohistokimyasal çalışma yapılmalıdır.
Maya mantarlarının izolasyonu kandan en az bir çalışmada "kanıtlanmış" invaziv mikoz kategorisine aittir ve nötropenili hastalarda sistemik antimikotiklerin atanması için mutlak bir göstergedir. Kandan maya mantarı tespit sıklığı düşüktür, yayılmış kandidiyazda bile %35-50'dir.
Uygulamak tekrarlanan kan kültürleri olumlu sonuç alma olasılığını artırır.
Başka tercüme kanda filamentli mantarların tespiti durumunda sonuçlanır. Filamentli mantarların yüksek izolasyon sıklığı Fusarium spp.'nin karakteristiğidir. ve %40-60'dır. Aspergillus nadiren bulunur ve Aspergillus terreus dışında çoğu durumda kontaminasyon olarak kabul edilir.
Vurgulama Aspergillus terreus hemoblastozlu hastaların kanından gerçek aspergilinemi gösterebilir ve klinik enfeksiyon semptomlarının varlığında, antimikotiklerin atanmasının temelidir.
İnvaziv mikoz için kriterler
| dizin | Kriterler |
| İnvaziv mikoz (makroorganizma) başlangıcını tetikleyen faktörler | nötropeni (< 0,5*109/л в течение 10 дней)
Geniş spektrumlu antibiyotik tedavisi ile 96 saatten uzun süredir devam eden ateş Vücut ısısı 38°C'nin üzerinde veya 36°C'nin altında ve aşağıdaki yatkınlık belirtilerinden herhangi biri: son 60 gün içinde uzamış nötropeni (10 günden fazla), son 30 gün içinde yoğun immünosupresif tedavi, öncekinde kanıtlanmış veya olası invaziv mikoz dönem nötropeni veya AIDS GVHD semptomları, özellikle ağır vakalar (derece II) veya yaygın kronik hastalık Son 60 gün içinde uzun süreli (3 haftadan fazla) glukokortikoid kullanımı |
| mikrobiyolojik işaretler | Balgam veya bronkoalveolar lavaj sıvısından filamentli mantar (Aspergillus spp., Fusaruim spp., Sceclosporium spp. ve zygomycetes dahil) ve Cryptococcus neqformans kültürünün izolasyonu Paranazal sinüslerin aspiratlarından filamentli mantarların tespiti için kültür veya sitolojik incelemenin (doğrudan mikroskopi) pozitif sonuçları Balgam veya bronkoalveolar lavaj sıvısından sitoloji / direkt mikroskopi ile filamentli mantarların veya Cryptococcus neoformans'ın tespiti Bronkoalveolar lavaj sıvısı, beyin omurilik sıvısı ve kan örneklerinde (en az iki) Aspergillus antijeni pozitif Kan örneklerinde pozitif kriptokok antijeni Normalde steril sıvı örneklerinde (örneğin, beyin omurilik sıvısında Cryptococcus spp.) fungal elementlerin sitolojik incelemesi veya doğrudan mikroskopisi ile tespiti İdrar sondası yokluğunda idrarda maya mantarı kültürünün saptanmasına ilişkin çalışmaların iki olumlu sonucu İdrar sondası yokluğunda idrarda Candida kristalleri Candida spp izolasyonu. kan kültürlerinden |
|
Klinik işaretler
Alt solunum yolu |
Mikrobiyolojik inceleme için numunelerin alındığı lokus ile ilişkilendirilmelidir. BT'de aşağıdaki yeni akciğer infiltratlarından herhangi biri: hale semptomu, hilal semptomu, konsolidasyon alanlı kavite * Alt solunum yolu enfeksiyonu belirtileri (öksürük, göğüs ağrısı, hemoptizi, dispne), plevral sürtünme üfürümleri, yüksek şiddette belirtilere dahil olmayan herhangi bir yeni infiltrat; plevral efüzyon |
| Üst solunum yolları Yüksek öneme sahip işaretler Daha az öneme sahip işaretler |
İnvaziv sinüs enfeksiyonunun radyolojik belirtileri (duvar erozyonu veya enfeksiyonun komşu yapılara yayılması, kafatası kemiklerinin kapsamlı tahribatı) Burun akıntısı, burun tıkanıklığı, burun mukozasında ülserasyon, burun kanaması, periorbital ödem, üst çene ağrısı, siyah nekrotik ülserasyon veya sert damak perforasyonu |
| Merkezi sinir sistemi Yüksek öneme sahip işaretler Daha az öneme sahip işaretler |
Şüpheli CNS enfeksiyonunun röntgen bulguları (mastoidit veya diğer parameningeal odak, ekstradural ampiyem, beyin veya omurilikte çoklu lezyonlar) Fokal nöbetler, hemiparezi dahil olmak üzere fokal nörolojik semptom ve bulgular; bilinç bozuklukları, meningeal semptomlar, beyin omurilik sıvısının biyokimyasal bileşiminin ve hücresel bileşiminin ihlalleri (diğer patojenlerin yokluğunda, kültür ve mikroskopiye göre, tümör hücrelerinin yokluğunda) |
NS kanda tespit veya maya mantarlarının diğer steril biyosubstratları için, filamentli (küf) mantarları izole ederken türlerin tanımlanması ve antifungal ilaçlara duyarlılığın belirlenmesi zorunludur - sadece türlere tanımlama, duyarlılık belirlenmez.
klinikte uygulama filamentli mantarların duyarlılığı, bu tür mantarların antimikotiklere duyarlılığını belirlemek için kusurlu standartlar nedeniyle araştırılmamıştır. Ayrıca, sadece bir çalışma Aspergillus spp'nin duyarlılığı arasında bir korelasyon olduğunu göstermiştir. ve hemoblastozlu hastalarda invaziv aspergilloz tedavisinin sonuçları. O zamandan beri yürütülen çalışmaların hiçbiri benzer sonuçlar elde etmedi.
Son zamanlarda, A. fumigatus mantarlarının itrakonazol, vorikonazole karşı kazanılmış direncinin oluşumu hakkında izole raporlar ortaya çıkmaya başladı.
Mantarların türlere göre tanımlanmasıözellikle steril lokuslardan elde edilenler, her şeyden önce, bir antimikotik seçimi ve yeterli bir antifungal tedavi için gereklidir. Böylece Candida krusei, flukonazole dirençlidir ve amfoterisin B'ye diğer maya türlerinden daha az duyarlıdır; Aspergillus terreus, Scedosporium apiospermum (Pseudallescheria boydii), Trichosporon beigelii, Scopulariopsis spp. amfoterisin B'ye dirençli; Mukoraller itrakonazole, vorikonazole dirençlidir, Candida glabrata flukonazole doza bağlı hassasiyet gösterir ve bu tür mantarları, hatta hassas suşları izole ederken, flukonazol dozu arttırılmalıdır (yetişkinlere 400 mg yerine 800 mg reçete edilir); Candida lusitaniae amfoterisin B'ye dirençlidir.
Mantarların türlere göre tanımlanması Bir hastanede epidemiyolojik analiz yapmak - salgınlara neden olan ajanları ve mümkünse enfeksiyon kaynağını belirlemek için de önemlidir. C. lusitaniae, C. krusei, C. lipolytica gibi nadir mantarların neden olduğu enfeksiyon salgınları anlatılmaktadır.
Temelli mantar türlerinin tanımlanması mukoza zarının invaziv mikoz veya mantar kolonizasyonu varsayılabilir. Örneğin, Aspergillus niger'in akut lösemili hastalarda invaziv aspergilloza neden olma olasılığı Aspergillus fumigatus'tan önemli ölçüde daha düşüktür. Aspergillus niger'in bronkoalveolar lavaj sıvısından izolasyonu çoğunlukla solunum yollarının kolonizasyonu ve balgamdan - havadan kontaminasyon olarak kabul edilir ve invaziv aspergilloz tanısını doğrulamak için ek araştırma gerektirir.
Temelli filamentli mantarların atılımı balgamdan, bronkoalveoler sıvıdan, paranazal sinüslerin aspirasyonundan, "kanıtlanmış" kategorisine dahil olmayan, yalnızca invaziv mikoz varsayılabilir. Bununla birlikte, allojenik kemik iliği alıcıları olan nötropenik hastalarda balgamda Aspergillus, özellikle Aspergillus fumigatus veya Aspergillus flavus tespiti her zaman düşünülmelidir. Bu, tekrarlanan mikolojik muayene ve akciğerlerin bilgisayarlı tomografisini gerektirir. Bu nedenle, nötropeni ile, pozitif bir Aspergillus spp kültürü durumunda invaziv aspergilloz tespit etme olasılığı. balgamda %80'dir.
Vurgulama kriptokok neoformans solunum yolundan bağışıklığı baskılanmış hastalarda (yıkama, lavaj) tanısal olarak önemlidir. Bağışıklığı baskılanmış hastaların solunum yollarından (trakea, bronşlardan, bronkoalveolar lavajdan lavaj) elde edilen sıvılardan maya mantarlarının tanımlanması zorunlu değilse, bu numunelerden Cryptococcus neoformans tespiti için tarama gereklidir.
İdrarda kandida tespiti nötropeni ve ateşi olan hastalarda, genellikle yayılmış kandidal enfeksiyonun bir belirtisi olarak kabul edilir.
zamanında teşhis invaziv, mantar Aspergillus spp'nin spesifik antijeninin dolaşımını tespit etmek için ticari bir testi başarıyla kullandı. galaktomanna (mantar hücre duvarının polisakkarit suda çözünür bileşeni).
Galaktomann iki yöntemle belirlenebilir: lateks aglütinasyon yöntemi (Pastorex Aspergillus, BioRAD) ve enzime bağlı immünosorbent testi (Platelia Aspergillus, BioRAD).
Avantaj enzim immunoassay kandaki galaktomann seviyesini belirlemek için alt duyarlılık eşiğidir - 1 ng / ml veya daha az ve lateks aglütinasyonu yardımıyla - 15 ng / ml. Kanda (en az 2 numunede), beyin omurilik sıvısında, bronkoalveolar lavajda galaktomansi tayini tanısal değerdedir. Enzim bağlantılı immünosorbent testinin duyarlılığı yaklaşık %90'dır, özgüllük %90-99'dur; allojenik kemik iliği alıcılarında bu göstergeler, antifungal ilaçların profilaktik kullanımı (antimikotikler galaktomann eşik seviyesini azaltır).
Vakaların %40'ında tespit galaktomansi kanda, akciğerlerin bir bilgisayar çalışması ile belirlenen invaziv aspergilloz belirtilerinin önündedir ve% 70'inde enfeksiyonun klinik semptomlarının önündedir.
Antijen saptama testinin tanı değeri AspergillusÇalışmanın tekrar tekrar yapılması durumunda vardır. Nötropeni hastalarında geniş spektrumlu antibiyotik tedavisi sırasında ateş olması durumunda haftada 2 kez kanda Aspergillus antijeni tayini yapılmalıdır; antibiyotik tedavisinin arka planında ortaya çıkan veya devam eden pnömoni ile; akciğer dokusunda odaklar bulunduğunda (bilgisayarlı tomografi).
Bu güne kadar mikozların etiyolojik laboratuvar teşhisindeki ana yöntemler, materyalin mikroskopisi, daha sonraki tanımlama ile patojenin saf bir kültürünün izolasyonu dahil olmak üzere klasik yöntemler olmaya devam ediyor. İmmünolojik tanı yöntemleri ikincil öneme sahiptir. En önemli patojenleri tanımlamak için kullanılırlar: patojenik dimorfik mantarların yanı sıra kriptokokoz, kandidiyazis ve aspergillozun etken maddeleri. Gen endikasyon yöntemleri (polimeraz zincir reaksiyonu) da özgüllükleri olmadığından sınırlı bir uygulamaya sahiptir, ancak esas olarak derin ve fırsatçı mikozların tanısında kullanılır.
Hastalığın şekline bağlı olarak mikozların laboratuvar teşhisinde araştırma materyali şunlar olabilir: cilt ve ekleri (saç, tırnaklar), yaraların ve fistüllerin deşarjı, balgam, kan, beyin omurilik sıvısı ve idrar, doku biyopsileri. Patolojik materyal almanın doğruluğu büyük ölçüde daha ileri laboratuvar araştırmalarının etkinliği ile belirlenir. Deri lezyonları durumunda, malzeme en sık olarak, en canlı patojenlerin bulunduğu çevre boyunca taze, ancak tamamen gelişmiş odaklardan tedaviden önce kazıma veya yapışkan bant (esas olarak yüzeysel formlar için) kullanılarak seçilir.
Dermatofit mantarlarını tespit ederken, saç lezyonunun doğası patojeni tanımlamayı mümkün kıldığı için saç son derece bilgilendirici bir materyaldir. Bazı durumlarda, bir Ahşap lambanın kullanılması lezyon odağının belirlenmesine yardımcı olur. Etkilenen saç, pullarla birlikte epilasyon cımbızı ile alınır. Kronik siyah nokta trikofitozunda, saç deriden bir diseksiyon iğnesi ile çıkarılır.
Çiviler tüm katmanlar boyunca alınır, keskin bir neşter veya makasla kesilir. Diş matkabı kullanarak seçim daha verimlidir. Kandidiyaz lezyonlarında tırnak merdanesinden kazınarak malzeme seçilir. Seçilen materyal, kurumasını ve yabancı mikroflora ile kontaminasyonu önlemek için koyu renkli kağıt torbalarda laboratuvara teslim edilir. İrin içeren malzeme, steril bakteri baskıları veya Petri kapları içinde teslim edilir. Balgam steril bir kapta toplanır. Balgam muayenesi, alındıktan sonra en geç 2 saat içinde yapılmalıdır. Çalışma süresi uzatıldığında, numuneler + 4 ° C'de bir buzdolabında saklanmalıdır, aksi takdirde maya hücrelerinin psödomisel formlarının ortaya çıkmasıyla ilişkili teşhis hataları oluşabilir.
Kan ve beyin omurilik sıvısı aseptik olarak toplanır. Kan ekimi, Sabouraud'un sıvı ortamında gerçekleştirilir. Kan örneklerinin kontaminasyonunu önlemek için yeniden incelenirler. Beyin omurilik sıvısı santrifüjlenir ve tortu, mikroskopi ve aşılama için kullanılır.
İdrar, sabahları steril bir kapta toplanırken, malzemenin perine derisinin mikroflorasıyla kirlenmesini önlemek gerekir. İdrar kültürü, kantitatif kültür yöntemleri kullanılarak gerçekleştirilir.
Mikozların tanısında hem doğal materyalden hem de boyanmış preparatlar kullanılır. Boyanmamış müstahzarları incelerken, yoğun malzeme ön olarak %10-30 KOH çözeltisi (dimetil sülfoksit çözeltileri kullanılabilir) ile berraklaştırılır (maserlenir) ve ardından "ezilmiş damla" yöntemi kullanılarak mikroskoplanır. Kontrast vermek için, preparasyonlar sulu bir metilen mavisi çözeltisi ile boyanmıştır.
Sabit yaymaların boyanması çeşitli şekillerde gerçekleştirilir: Gram'a göre, metilen mavisi, Romanovsky - Giemsa'ya göre. İkinci yöntem, küçük maya hücrelerini ve fagositoz aşamalarını görmenizi sağlar. Cryptococci için mürekkep lekesi, Southgate mucicarmine boyası kullanın. Melanin içeren mantarlar (koyu renkli), örneğin Cladophialophora bandana, Mass - Fontana (hücre duvarının bir parçası olan melaninin rengi) ile boyanmıştır. Floresan serumlar, derin mikoz patojenlerinin, dermatofitoz patojenlerinin, cinsin mantarlarının teşhisinde kullanılır. kandida.
Patojenin saf bir kültürünün izolasyonu, mantarın jenerik ve tür ilişkisini belirlemeyi, özelliklerini ve antimikrobiyal ilaçlara duyarlılığını incelemeyi mümkün kılar. Mantarların izolasyonu ve tanımlanması için Sabouraud'un yoğun ve sıvı kültür besiyeri, wort-agar kullanılır. Bu ortamlar çoğu patojenik ve fırsatçı mantarın büyümesini sağlar. Ek olarak, Sabouraud ortamı (Şekil 8.2), mantarlarda tanımlama için önemli olan pigment oluşum süreçlerini uyarır.
Kirletici bakterilerin büyümesini bastırmak için ortama antibiyotikler eklenir: kloramfenikol, streptomisin, penisilin, tetrasiklin. Kaprisli patojenik mantarların izolasyonu için kan ve serebral kalp özü ile zenginleştirilmiş ortamlar kullanılır. Mantarların yetiştirilmesi ve tanımlanması için özel besiyerleri kullanılır: Czapek besiyeri - küfleri tanımlarken konidia oluşumu, patates (patates-havuç) agar, pirinç agar - büyüme tiplerini belirlemek ve cinsin mantarlarını tanımlarken klamidosporları elde etmek için kandida, havuç (sebze) agar - tipik mantar kültürü kolonileri elde etmek için Trichophyton schönleini, Kashkin ortamı - pigment oluşturan mantarların izolasyonu için. Ayırıcı tanı ortamları da örneğin C'yi tanımlamak için kullanılır. albicans - mantarın fosfolipaz aktivitesini belirlemenize izin veren kromojenik ortam veya ortam.
Mantarların kuluçka süresi birkaç gün ile 1 ay veya daha fazla arasında değişmektedir. Patojenik dimorfik mantarlardan şüpheleniliyorsa, olumsuz bir yanıt vermek için 8 hafta boyunca ekim yapılır.
Aşılar, test tüplerine, şişelere ve Petri kaplarına dökülen besiyerlerinde gerçekleştirilir. Materyalin dermatofit mantarları üzerine aşılanması, ortam ile aynı anda birkaç tüp üzerinde gerçekleştirilir. Küf (balgam) olduğundan şüphelenilen materyaller 3 noktadan aşılanır ve 28 ve 37 °C'de inkübe edilir. Malzemeden numune alınması sırasında kontaminasyon olmaması sorununu çözmek için, hastaların bulunduğu laboratuvar tesislerinde ve koğuşlarda küf mantarı içeriği için kontrol hava kültürleri yapılır.
Bir mikolojik laboratuvarda mantar yetiştirirken, bakteriyolojik laboratuvarlardakine benzer güvenlik önlemleri gözlemlenir. Alerji oluşumunu önlemek için personel, gazlı bez sargılı kutulu odalarda veya başlıklı masa kutularında küf ve mikotoksinlerle çalışma yapar. II patojenite grubuna (patojenik dimorfik mantarlar) ait kültürlerle çalışmak sadece özel laboratuvarlarda mümkündür.
Mantar türlerinin tanımlanması, kültürel, morfolojik ve diğer özelliklerden oluşan bir kompleks temelinde gerçekleştirilir. Birincisi, koloninin morfolojisini, özel ortamlarda yetiştirildiğinde rengi ve boyutunu, kenar ve merkezin yapısını, yüzeyin doğasını, üreme organlarının varlığını ve doğasını, ikincisi - mikroskobik özellikleri içerir. miselyumun yapısı, üreme organlarının yapısı, şekli ve boyutu - konidioforlar, konidia, klamidospor, artrospor vb.
Mantarlar, katı besin ortamlarında çeşitli türlerde koloniler oluşturur. G. Venter Enstitüsü'nden (ABD) bilim adamları, mantarların ortama pigment maddeleri salma kabiliyetini dikkate alarak, besin ortamında bir "Noel ağacı" oluşturdular (Şekil 8.3).
Pirinç. 8.3. Mantarların "Noel ağacı" (üstte: talaromyces stipitus; Odun Aspergillus nidulans; süslemeler: Penicillium marneffei; güdük: Aspergillus terreus)
Mayaların (maya benzeri mantarlar) tanımlanmasında kültürlerin enzimatik ve asimilatif yetenekleri büyük önem taşımaktadır. Şu anda, yaygın mantarları - insan ve hayvan hastalıklarına neden olan ajanları belirlemek için ticari test sistemleri kullanılmaktadır: BBL Mycotube, API 20C bio Merieux, vb.
Yükleniyor ...