Tanniinid (taniidid) on taimsed kõrgmolekulaarsed fenoolsed ühendid, mis võivad valke sadestada ja millel on kokkutõmbav maitse.

Mõiste "tanniinid" on ajalooliselt välja kujunenud tänu nende ühendite võimele muuta toores loomanahk vastupidavaks nahaks, mis on vastupidav niiskusele ja mikroorganismidele. Selle termini kasutamise pakkus ametlikult välja 1796. aastal Seguin, et tähistada teatud taimede ekstraktides sisalduvaid aineid, mis võivad parkimisprotsessi läbi viia.

Parkimine on tanniinide kompleksne keemiline koostoime kollageenimolekulidega, sidekoe peamise valguga. Parkimisomadused on polünukleaarsetel fenoolidel, mis sisaldavad molekulis rohkem kui ühte hüdroksüülrühma. Taniidi lame paigutusega valgumolekulil tekivad nende vahel stabiilsed vesiniksidemed:

Valgu molekuli fragment Taniidi molekuli fragment

Taniidi ja valgu interaktsiooni tugevus sõltub vesiniksidemete arvust ja seda piirab polüfenoolühendi molekuli suurus. Tanniinide molekulmass võib olla kuni 20 000. Samas on tanniinides 100 molekulmassiühiku kohta 1-2 fenoolset hüdroksürühma. Seetõttu on moodustunud vesiniksidemeid palju ja päevitusprotsess on pöördumatu. Väliskeskkonnale orienteeritud hüdrofoobsed radikaalid muudavad naha niiskusele ja mikroorganismidele kättesaamatuks.

Kõik tanniinid ei ole võimelised tõeliselt päevitama. See omadus eristab ühendeid, mille molekulmass on 1000 või rohkem. Polüfenoolühendid massiga alla 1000 ei ole võimelised nahka parkima ja neil on ainult kokkutõmbav toime.

Tanniine kasutatakse tööstuses väga laialdaselt. Piisab, kui öelda, et maailma tanniinide toodang ületab 1 500 000 tonni aastas ja taimsete tanniinide osakaal on kuni 50-60% kogutoodangust.

Levik taimemaailmas ja tanniinide roll taimedes. Tanniine leidub laialdaselt katteseemne- ja seemnetaimede esindajates, vetikates, seentes, samblikes, samblasammaldes ja sõnajalgades. Neid leidub paljudes kõrgemates taimedes, eriti kaheidulehelistes. Kõige rohkem leiti neid perekondadest Fabaceae, Myrtaceae, Rosaceae, Anacardiaceae, Fagaceae, Polygonaceae.

Taime tanniinid paiknevad raku vakuoolides ja adsorbeeritakse rakuseintele rakkude vananemise käigus. Nad kogunevad suurtes kogustes maa-alustesse elunditesse, kooresse, kuid neid võib leida lehtedest ja viljadest.

Tanniinid täidavad taimedes peamiselt kaitsefunktsioone. Kudede mehaanilise kahjustuse korral algab tanniinide suurenenud moodustumine, millega kaasneb nende oksüdatiivne kondenseerumine pinnakihtides, kaitstes seeläbi taime edasiste kahjustuste ja patogeenide negatiivse mõju eest. Tänu suurele fenoolhüdroksüülide hulgale on tanniinidel väljendunud bakteriostaatilised ja fungitsiidsed omadused, kaitstes seeläbi taimeorganisme erinevate haiguste eest.

Tanniinide klassifikatsioon. 1894. aastal avastas G. Procter tanniinide pürolüüsi lõppsaadusi uurides 2 ühendite rühma - pürogallilised (tekkib pürogallool) ja pürotehhiin (pürokatehiin tekib lagunemisel):

K. Freudenberg täpsustas 1933. aastal G. Procteri klassifikatsiooni. Tema, nagu Procter, klassifitseeris tanniine nende lagunemise lõpp-produktide järgi, kuid mitte pürolüüsi tingimustes, vaid happelise hüdrolüüsi käigus. Sõltuvalt hüdrolüüsivõimest tegi K. Freudenberg ettepaneku eristada kahte tanniinide rühma: hüdrolüüsitav ja kondenseeritud. Praegu kasutatakse sagedamini K. Freudenbergi klassifikatsiooni.

Rühma juurde hüdrolüüsitavad tanniinid hõlmavad ühendeid, mis on ehitatud vastavalt estrite tüübile ja lagunevad happelise hüdrolüüsi käigus koostisosadeks. Keskseks lüliks on enamasti glükoos, harvemini muud suhkrud või alitsüklilised ühendid (näiteks kiinhape). Keskse jäägi alkoholi hüdroksüülrühmad võivad olla eetriga seotud gallushappega, moodustades rühma gallotanniinid või ellagiinhape, moodustades rühma ellagitanniinid.

Gallotanniinid- gallushappe estrid, kõige levinumad hüdrolüüsitavate tanniinide rühmas. On mono-, di-, tri-, tetra-, penta- ja polügalloeetreid. Monogalloüüleetrite esindaja on b-D-glükogalliin:

Polügalloüüleetrite näide on Hiina tanniin, mille struktuuri määras esmakordselt 1963. aastal Haworth:

ellagitanniinid on suhkru ja ellaghappe või selle derivaatide estrid. Ellaghape moodustub kahe gallushappe molekuli oksüdeerimisel heksaoksüdifeenhappeks, mis moodustab kohe laktooni - ellagiinhappe:

Nagu ka eelmisel juhul, on ellagitanniinide suhkrukomponendiks enamasti glükoos.

Gallushapete mittesuhkru estrid on gallushappe ja suhkruvaba komponendi estrid, nagu kiinhape, hüdroksükaneel jne. Selle ainete rühma näide on 3,4,5-trigalloüülkiinhape.

kondenseeritud tanniinid erinevad hüdrolüüsitavatest selle poolest, et happelise hüdrolüüsi käigus ei jagune need koostisosadeks, vaid vastupidi, mineraalhapete toimel tekivad tihedad punakaspruunid polümerisatsiooniproduktid, flobafeenid.

Kondenseeritud tanniine moodustavad peamiselt katehhiinid ja leukotsüanidiinid ning palju harvem ka muud flavonoidide redutseeritud vormid. Kondenseeritud tanniinid ei kuulu "glükosiidide" rühma: kondenseerunud tanniinides puudub suhkrukomponent.

Kondenseerunud tanniinide moodustumine võib toimuda kahel viisil. K. Freidenberg (XX sajandi 30. aastad) tegi kindlaks, et kondenseerunud tanniinide moodustumine on katehhiinide või leukotsüanidiinide autokondensatsiooni (või nende ristkondensatsiooni) mitteensümaatiline protsess õhuhapniku, kuumuse ja happelise keskkonna mõjul. . Autokondensatsiooniga kaasneb katehhiinide püraanitsükli purunemine ja ühe molekuli C-2 süsinikuaatom on süsinik-süsinik sideme kaudu ühendatud teise molekuli C-6 või C-8 süsinikuaatomiga. Sel juhul saab moodustada piisavalt pikendatud ahela:

Teise teadlase D. Hathway sõnul võivad kondenseerunud tanniinid moodustuda molekulide ensümaatilise oksüdatiivse kondenseerumise tulemusena vastavalt tüübile "peast sabani" (rõngas A kuni rõngani B) või "sabast sabani" (rõngas B kuni rõngas). B):

Kondenseeritud tanniine sisaldavates taimedes on tingimata nende eelkäijad - vabad katehhiinid või leukotsüanidiinid. Sageli on segatud kondenseeritud polümeere, mis koosnevad katehhiinidest ja leukotsüanidiinidest.

Reeglina esinevad taimedes samaaegselt nii kondenseerunud kui hüdrolüüsitavate rühmade tanniine.

Tanniinide füüsikalised ja keemilised omadused. Tanniine iseloomustab kõrge molekulmass – kuni 20 000. Looduslikud tanniinid, välja arvatud mõned erandid, on tänaseni teada vaid amorfses olekus. Põhjus on selles, et need ained on segud ühenditest, mis on keemilise struktuuri poolest sarnased, kuid erinevad molekulmassi poolest.

Tanniinid on kollased või pruunid ühendid, mis moodustavad vees kolloidseid lahuseid. Lahustub etanoolis, atsetoonis, butanoolis ja ei lahustu tugeva hüdrofoobsusega lahustites - kloroform, benseen jne.

Gallotanniinid lahustuvad halvasti külmas ja suhteliselt hästi kuumas vees.

Tanniinidel on optiline aktiivsus ja need oksüdeeruvad õhu käes kergesti.

Fenoolhüdroksüülide olemasolu tõttu sadestuvad need raskmetallide sooladega ja moodustavad Fe +3-ga värvilisi ühendeid.

Tanniinide eraldamine taimsest toorainest. Kuna tanniinid on segu erinevatest polüfenoolidest, on nende eraldamine ja analüüs teatud raskustega.

Sageli ekstraheeritakse tanniinide koguse saamiseks toorainet kuuma veega (tanniinid lahustuvad külmas vees halvasti) ja jahutatud ekstrakti töödeldakse orgaanilise lahustiga (kloroform, benseen jne), et eemaldada lipofiilsed ained. Seejärel sadestatakse tanniinid raskmetallide sooladega, millele järgneb kompleksi hävitamine väävelhappe või sulfiididega.

Keemilise struktuuriga sarnase tanniinide fraktsiooni saamiseks on võimalik kasutada tooraine ekstraheerimist dietüüleetriga, metüül- või etüülalkoholiga koos lipofiilsete komponentide eelneva eemaldamisega, kasutades selgelt väljendunud hüdrofoobsusega lahusteid - petrooleeter, benseen, kloroform.

Osade tanniinide komponentide eraldamine pliisooladega vesi- või vesi-alkoholilahustest sadestamisel on laialt levinud. Saadud sadet töödeldakse seejärel lahjendatud väävelhappega.

Tanniinide üksikute komponentide eraldamisel kasutatakse kromatograafilisi meetodeid: adsorptsioonkromatograafia tselluloosil, polüamiidil; ioonivahetus erinevatel katioonvahetitel; jaotus silikageelil; geelfiltreerimine molekulaarsõelatel.

Tanniinide üksikute komponentide identifitseerimine toimub kromatograafia abil paberil või õhukeses sorbendikihis, kasutades spektraalanalüüsi, kvalitatiivseid reaktsioone ja lõhustumisproduktide uurimist.

Tanniinide kvalitatiivne analüüs. Kvalitatiivsed reaktsioonid tanniinidele võib jagada kahte rühma: sadestumise reaktsioonid ja värvusreaktsioonid. Kvalitatiivsete reaktsioonide läbiviimiseks ekstraheeritakse toorained kõige sagedamini kuuma veega.

Sademete reaktsioonid. 1. Kui tanniinid interakteeruvad 10% naatriumkloriidi lahuses valmistatud 1% želatiinilahusega, tekib sade või lahus muutub häguseks. Liigne želatiini lisamisel hägusus kaob.

2. Taniidid annavad ohtralt sadet alkaloididega (kofeiin, pahhükarpiin), samuti mõnede lämmastiku alustega (urotropiin, novokaiin, dibasool).

3. Suheldes 10% pliatsetaadi lahusega moodustavad hüdrolüüsitava rühma tanniinid flokuleeriva sademe.

4. Kondenseerunud rühma tanniinid moodustavad reaktsioonil broomveega flokuleeriva sademe.

värvireaktsioonid. Hüdrolüüsitava rühma tanniinid raud-ammooniummaarja lahusega moodustavad musta-sinise värvusega ühendeid ja kondenseerunud rühma - must-rohelised.

Kui taim sisaldab samaaegselt tanniine ning hüdrolüüsuvaid ja kondenseerunud rühmi, siis esmalt sadestatakse hüdrolüüsuvad tanniinid 10% pliatsetaadi lahusega, sade filtreeritakse välja ja seejärel lastakse filtraat reageerida raudammooniummaarja lahusega. Tumerohelise värvuse ilmumine näitab kondenseerunud rühma ainete olemasolu.

Tanniinide kvantitatiivne määramine. Kuigi tanniinide kvantitatiivseks määramiseks on umbes 100 erinevat meetodit, on selle bioloogiliselt aktiivsete ainete rühma täpne kvantitatiivne analüüs keeruline.

Tanniinide kvantitatiivse määramise laialdaselt kasutatavate meetodite hulgast võib eristada järgmist.

1. Gravimeetriline - põhineb tanniinide kvantitatiivsel sadestamisel želatiini, raskmetallide soolade jne abil.

2. Titrimeetriline - põhineb oksüdatiivsetel reaktsioonidel, peamiselt kaaliumpermanganaadiga.

3. Fotoelektrokolorimeetriline - põhineb tanniinide võimel moodustada stabiilseid värvilisi reaktsiooniprodukte raudoksiidi soolade, fosfovolframhappe jms.

Riiklik farmakopöa X ja XI väljaanne soovitab tanniinide kvantitatiivseks määramiseks kasutada titrimeetrilist meetodit.

Sisu

OFS.1.5.3.0008.15 Tanniinide sisalduse määramine ravimtaimsetes toorainetes ja ravimtaimsetes preparaatides

Art. GF XI

Tanniinide sisalduse määramine ravimtaimsetes toorainetes ja ravimtaimsetes preparaatides toimub titrimeetrilise ja/või spektrofotomeetrilise meetodiga. Titrimeetriline meetod seisneb tanniinide koguse määramises tanniini järgi ja spektrofotomeetriline meetod võimaldab määrata tanniinide kogust pürogallooli järgi.

Meetod 1. Tanniinide koguse määramine tanniini järgi

Umbes 2 g (täpselt kaalutud) purustatud ravimtaimede toorainet või taimseid ravimeid, mis on sõelutud läbi 3 mm avadega sõela, asetatakse 500 ml koonilisse kolbi, valatakse 250 ml keemiseni kuumutatud vette ja keedetakse tagasijooksul. kinnise spiraaliga elektripliidil 30 min aeg-ajalt segades. Saadud ekstrakt jahutatakse toatemperatuurini ja filtreeritakse läbi vati 250 ml mahuga mõõtekolbi nii, et tooraine/preparaadi osakesed ei satuks kolbi, lahuse maht reguleeritakse märgini. veega ja segada. 25,0 ml saadud vesiekstrakti pannakse 1000 ml koonilisse kolbi, lisatakse 500 ml vett, 25 ml indigosulfoonhappe lahust ja tiitritakse pidevalt segades kaaliumpermanganaadi 0,02 M lahusega kuni kuldkollase värvini.

Samal ajal viiakse läbi kontrollkatse: 525 ml vett, 25 ml indigosulfoonhappe lahust pannakse 1000 ml mahutavusega koonilisse kolbi ja tiitritakse pidevalt segades kaaliumpermanganaadi lahusega. 0,02 M kuni kuldkollase värvini.

1 ml 0,02 M kaaliumpermanganaadi lahust vastab tanniini poolest 0,004157 g tanniinidele.

(V – V 1 ) 0,004157 250 100 100

X = ————————————————— ,

a 25 (100 – W)

V on vesiekstrakti tiitrimiseks kasutatud 0,02 M kaaliumpermanganaadi lahuse maht, ml;

V 1 on kontrollkatses tiitrimiseks kasutatud 0,02 M kaaliumpermanganaadi lahuse maht, ml;

0,004157 - tanniinide kogus, mis vastab 1 ml kaaliumpermanganaadi lahusele 0,02 M (tanniini osas), g;

a- tooraine või taimse ravimi proov, g;

W– ravimtaimse materjali või ravimtaimse saaduse niiskus, %;

250 – vee kogumaht, ml;

25 – tiitrimiseks võetud veeekstrakti maht, ml.

Märge.Indigosulfoonhappe lahuse valmistamine. 1 g indigokarmiini lahustatakse 25 ml kontsentreeritud väävelhappes, seejärel lisatakse veel 25 ml kontsentreeritud väävelhapet ja lahjendatakse veega 1000 ml-ni, valades saadud lahuse ettevaatlikult vette, mõõtekolvis mahuga 1000 ml, segatakse.

Meetod 2. Tanniinide koguse määraminepürogallooli osas

Umbes 0,5–1,0 g (täpselt kaalutud või farmakopöa monograafias või regulatiivses dokumentatsioonis muul viisil täpsustatud) purustatud ravimtaimmaterjali või taimset ravimit, mis on sõelutud läbi 0,18 mm avadega sõela, asetatakse koonilisse kolbi mahuga 250 ml , lisage 150 ml vett ja keetke veevannil püstjahuti all 30 minutit. Saadud vesiekstrakt kolvis jahutatakse toatemperatuurini, filtreeritakse läbi vati 250 ml mahuga mõõtekolbi nii, et tooraine osakesed ei satuks kolbi, lahuse maht reguleeritakse märk veega ja segada. Saadud lahus filtreeritakse läbi umbes 125 mm läbimõõduga paberfiltri, visates ära esimesed 50 ml filtraati.

Määramine toimub valguse eest kaitstud kohas.

Tanniinide hulga määramine. 5,0 ml filtraati asetatakse 25 ml mõõtekolbi, lahjendatakse lahuse maht veega märgini ja segatakse. 2,0 ml saadud lahust pannakse 25 ml mahuga mõõtekolbi, lisatakse 1 ml fosfomolübdeen-volframreaktiivi, 10 ml vett ja lahuse maht reguleeritakse lahusega naatriumkarbonaadi märgini. 10,6% (testlahus). 30 minuti pärast mõõdetakse uuritava lahuse (A 1) optiline tihedus spektrofotomeetril lainepikkusel 760 nm küvetis, mille kihi paksus on 10 mm, kasutades võrdluslahusena vett.

Nahapulbriga adsorbeerimata tanniinide koguse määramine. 10,0 ml filtraadile lisatakse 0,1 g nahapulbrit, saadud segu segatakse 60 minutit ja filtreeritakse läbi paberfiltri. 5,0 ml saadud filtraati pannakse 25 ml mahuga mõõtekolbi, lahuse maht viiakse veega märgini ja segatakse. 2,0 ml saadud lahust pannakse 25 ml mahuga mõõtekolbi, lisatakse 1 ml fosfomolübdeen-volframreaktiivi, 10 ml vett, lahuse maht reguleeritakse lahusega naatriumkarbonaadi märgini. 10,6% ja segatakse (testlahus). 30 minuti pärast mõõdetakse uuritava lahuse (A 2) optiline tihedus spektrofotomeetril lainepikkusel 760 nm küvetis, mille kihi paksus on 10 mm, kasutades võrdluslahusena vett.

Paralleelselt mõõdetakse standardlahuse optiline tihedus.

25 ml mõõtekolbi pannakse 2,0 ml pürogallooli SS lahust, lisatakse 1 ml fosfomolübdeen-volframreaktiivi, 10 ml vett, lahuse maht reguleeritakse 10,6% lahusega naatriumkarbonaadi märgini ja segatud (standardlahus). 30 minuti pärast mõõdetakse standardlahuse (A 3) optiline tihedus spektrofotomeetril lainepikkusel 760 nm küvetis, mille kihi paksus on 10 mm, kasutades võrdluslahusena vett.

A 1- uuritava lahuse optiline tihedus tanniinide koguse määramisel;

A 2 - uuritava lahuse optiline tihedus koorepulbri poolt adsorbeerimata tanniinide koguse määramisel pürogalloolina;

A 3— standardlahuse optiline tihedus;

a- ravimtaimmaterjali või ravimtaimepreparaadi mass, g;

a 0 on pürogallooli SS proov, g;

W– ravimtaimse materjali või ravimtaimse saaduse niiskus, %.

Märge. Pürogallool RS lahuse valmistamine. 0,05 g (täpselt kaalutud) pürogallooli SS pannakse 100 ml mahuga mõõtekolbi, lahustatakse vees, lahuse maht reguleeritakse veega märgini ja segatakse. 5,0 ml saadud lahust pannakse 100 ml mahuga mõõtekolbi, lahuse maht reguleeritakse veega märgini ja segatakse. Lahust kasutatakse värskelt valmistatud.

Sissejuhatus
Taimedes on üheks levinumaks bioloogiliselt aktiivsete ainete rühmaks (BAS) tanniinid (tanniinid), millel on lai valik farmakoloogilist aktiivsust.Tanniinidneil on hemostaatiline, kokkutõmbav, põletikuvastane, antimikroobne toime ning neil on ka kõrge P-vitamiini aktiivsus, antisklerootiline ja antihüpoksiline toime. Kondenseeritud tanniinid on antioksüdandid ja neil on kasvajavastane toime. Tanniinidkasutatakse vastumürgina mürgistuse korral glükosiidide, alkaloidide, raskmetallide sooladega. Meditsiinis kasutatakse tanniine selliste haiguste ravis nagu stomatiit, igemepõletik, farüngiit, tonsilliit, koliit, enterokoliit, düsenteeria, samuti kasutatakse neid põletuste, emaka-, mao- ja hemorroidide verejooksude korral..
Sisu määratlustanniinid on oluline komponent tanniine sisaldavate taimsete materjalide kvaliteedi määramisel. Tanniinide määramiseks on erinevaid meetodeid, kuid kõige sagedamini kasutatakse titrimeetrilisi ja spektrofotomeetrilisi meetodeid.
Eesmärk- tanniinide kvantitatiivse määramise meetodite valideerimine lähenemise, korrektsuse ja lineaarsuse seisukohast.
Uurimistöö materjalid ja meetodid
Uurimisobjektina kasutatud tooraineks oli õhkkuiv muru.harilik mansett (Alchemilla vulgaris L.) perekond. Rosaceae (Rosaceae).
Õhkkuiva rohu tanniinide kvantitatiivse määramise meetodite valideerimisekscuff vulgaris, valiti kaks meetodit: permanganomeetriline tiitrimine ja spektrofotomeetriline määramine, mis põhineb reaktsioonil Folin-Ciocalteu reagendiga. Meetodite valikut põhjendab nende praktikas kasutamise sagedus.
õhkkuiv rohimansett vulgaris aastal koristatud septembril 2015 Arhangelski oblastis Primorski rajoonis, mis oli tanniinide (tanniinide) uurimise ja kvantitatiivse määramise tooraineks.
Permanganomeetrilise määramise meetod on farmakopöa meetod, mispõhineb tanniinide oksüdatsioonireaktsioonil kaaliumpermanganaadi lahusega.Umbes 2 g (täpselt kaalutud) purustatud toorainet, mis sõeluti läbi 3 mm avaga sõela, pandi 500 ml koonilisse kolbi, lisati 250 ml keemiseni kuumutatud vett ja keedeti tagasijooksul elektripliidil. suletud spiraaliga 30 minutit aeg-ajalt segades. Saadud ekstrakt jahutati toatemperatuurini ja 250 ml kooniline kolb filtriti läbi puuvilla, nii et tooraineosakesed ei sattunud kolbi. Saadud ekstraktist võeti pipetiga 25 ml ja viidi ületeise 750 ml mahuga koonilisse kolbi, lisage 500 ml vett, 25 ml indigosulfoonhappe lahust ja tiitrige pidevalt segades kaaliumilahusegapermanganaat (0,02 mol/l) kuldkollaseks.
Paralleelselt viidi läbi kontrollkatse.
1 ml kaaliumpermanganaadi lahust (0,02 mol/l) vastab tanniini poolest 0,004157 g tanniinidele.
Tanniinide sisaldus (X) protsentides absoluutse kuiva tooraine kohta arvutati valemiga (1):

Kus (1)

V on ekstrakti tiitrimiseks kasutatud kaaliumpermanganaadi lahuse (0,02 mol/l) maht, ml;
on kontrollkatses tiitrimiseks kasutatud kaaliumpermanganaadi lahuse (0,02 mol/l) maht, ml;
0,004157 - tanniinide kogus, mis vastab 1 ml kaaliumpermanganaadi lahusele (0,02 mol / l) (tanniini osas), g;
250 – ekstraheerimise kogumaht, ml;
25 – tiitrimiseks võetud ekstrakti maht, ml.
m– tooraine mass, g;
W- massikadu tooraine kuivatamisel, g;
Tanniinide kvantitatiivseks määramiseks spektrofotomeetriliselt pandi umbes 1 g (täpselt kaalutud) uuritud taimset materjali, mis oli purustatud osakese suuruseni, mis läbis 1 mm auguga sõelu, õhukese osaga koonilisse kolbi. 50 ml mahuga, lisati 25 ml atsetooni-vee segu vahekorras 7:3 (70% atsetooni lahus). Kolb suleti ja asetati 60 minutiks laborissegistisse (LAB PU-2, Venemaa). Saadud ekstrakt filtriti 50 ml mahuga mõõtekolbi ja maht viidi 70% atsetooni lahusega (lahus A) märgini.
10 ml mahuga mõõtekolbi pandi 1 ml lahust A, lahuse maht kolvis reguleeriti puhastatud veega märgini (lahus B).
0,5 ml lahust B pandi 10 ml mahuga mõõtekolbi, lisati 2 ml puhastatud vett, 0,25 ml Folin-Ciocalteu reaktiivi, 1,25 ml 20% naatriumkarbonaadi lahust ja lahus viidi veega märgini. Kolb jäeti 40 minutiks valguse eest kaitstud kohta seisma. Lahuse optiline tihedus määrati lainepikkusel 750 nm. Võrdluslahusena kasutati reaktiivide segu ilma ekstraktita.
Tanniinide sisaldus taimse tooraine ekstraktides arvutati kalibreerimisgraafiku väärtustest, mille koostamisel kasutati tanniini CO standardproovi lahust kontsentratsiooniga 0,1 mg/ml. Selleks pandi 100 ml mõõtekolbi 0,05 g (täpne mass) tanniini CO, lahustati 30 ml vees ja kolvi maht viidi sama lahustiga (lahus A) märgini.
1 ml saadud lahust viidi 10 ml mõõtekolbi. Kolvis oleva lahuse maht täideti veega (lahus B) märgini.
Lahuste seeria, mis sisaldab 1; 2; 3; 4; Tanniin-CO (5 μg/mL) valmistati, asetades kaalutud osad lahust B 10-mL mõõtekolbidesse, lisati Folin-Ciocalteu reaktiiv ja 20% naatriumkarbonaadi vesilahus ning kolvis olevate lahuste maht muudeti. märgini veega.
Lahused segati, kolvid suleti ja hoiti toatemperatuuril valguse eest kaitstud kohas 40 minutit.
Saadud lahuste optiline tihedus määrati spektrofotomeetriliselt kvartsküvettides, mille kihi paksus oli 1 cm lainepikkusel 725 nm võrdluslahuse suhtes.
Võrdluslahus oli reaktiivide segu ilma CO-tanniini lisamiseta (lahus B).
Uuringute tulemuste põhjal koostati graafik optilise tiheduse sõltuvusest tanniini kontsentratsioonist (joonis 1).

Võttes arvesse saadud väärtusi, arvutati tanniinide kogus tanniini järgi valemiga:

, kus

tulemused
Tanniinide tiitrimise teel kvantitatiivse määramise tulemused on esitatud tabelis. üks.

Tabel 1. Tanniinide kvantitatiivse määramise tulemused permanganatomeetria abil

Taimse tooraine kaal, g	Taimsest toorainest saadud ekstrakti tiitrimiseks kasutatud kaaliumpermanganaadi (0,02 mol/l) maht, ml	Tanniinide kogus, % (X i)
2,10250		15,34892	15,72% 0,154 Δ = 0,395 ε = 2,52% Sr = 0,024
2,03255		15,21262
2,18345		15,84713
2,24350		16,24333
2,12465		15,85257
2,07055		15,80574

Keskmine tanniinide sisaldus tooraines oli 15,7%. Suhtelise standardhälbe arvutuslik väärtus (0,024%), mis ei ületa 2%, mis iseloomustab saadud tulemuste rahuldavat lähenemist.
Meetodi õigsuse määramiseks kasutati liitmismeetodit. Sel eesmärgil lisati tiitrimiskolbi 1 ml 0, 05%, 0, 1% ja 0, 15% tanniini CO ja tiitriti iga kord kolm korda. Uuringu tulemused on toodud tabelis. 2.

Tabel 2. Tanniinide permanganomeetrilise tiitrimise meetodi õigsuse määramine

Lisatud CO-tanniini kogus, g	Tooraine mass, g	Arvutatud tanniinide kogus, g	Leitud kogus tanniine, g	Avamismäär, %	Metroloogilised omadused
0,0005	2,2435	0,0357	0,0353	98,87	99,91% 1,198 0,399 t arvut. =0,23 t vahekaart. =2,31
	2,1247	0,0339	0,0340	100,29
	2,0706	0,0330	0,0337	102,12
0,001	2,2435	0,0362	0,0357	98,61
	2,1247	0,0344	0,0340	98,84
	2,0706	0,0335	0,0336	100,51
0,0015	2,2435	0,0367	0,0366	99,73
	2,1247	0,0349	0,0353	101,14
	2,0706	0,0340	0,0337	99,12

Saadud tulemused näitavad, et arvutatud Studenti koefitsient on väiksem kui tabeli väärtus jaTehnika ei sisalda süstemaatilist viga, mis võimaldab järeldada, et see on õige.
Lineaarsuse uurimiseks määrati tanniinide kvantitatiivse sisalduse leitud väärtuste sõltuvus uuritava taimse materjali massist. Selleks viisime läbi tanniinide kvantitatiivse määramise kuues tavalise manseti õhukuiva tooraine proovis, mis erinevad massist (tabel 3).

Tabel 3

Tooraine kaal, g	Tiitrimiseks kasutatud kaaliumpermanganaadi kogus, ml
2,0706		0,3159
3,0013	10,8	0,4490
4,0595	13,0	0,5404
5,1180	15,3	0,6360
6,1385	18,2	0,7566

Uuringute käigus saadud andmete põhjal joonistati graafik tanniinide teatud sisalduse sõltuvusest uuritava taimse materjali proovi massist (joonis 2) ja arvutati korrelatsioonikoefitsient.

Riis. Joonis 2. Leitud tanniinide koguse sõltuvuse graafik hariliku manseti õhukuiva tooraine proovi massist

Arvutatud korrelatsioonikoefitsient ei ületanud 0,95, mis näitab uuritavate ainete sisalduse määramise tulemuste lineaarsust analüüsitud taimse materjali proovi massist näidatud kontsentratsioonivahemikus.
Tanniinide kvantitatiivse määramise tulemused hariliku manseti ürdi õhukuivades toorainetes spektrofotomeetriliselt on toodud tabelis. 4.

Tabel 4. Tanniinide kvantitatiivse määramise tulemused spektrofotomeetria abil

Proovi kaal, g	Lahuse optiline tihedus		Leitud tanniinide kogus, % (X i)	Metroloogilised omadused
1,02755	0,5957	7,30920	7,87340	7,84% 0,11 Δ=0,28 ε = 3,61% S r = 0,034%
0,99745	0,6130	7,52147	8,34656
1,0068	0,5678	6,96687	7,65932
0,99580	0,5742	7,04539	7,83120
1,0060	0,5750	7,05521	7,76261
1,00670	0,5617	6,89202	7,57779

Taimse tooraine tanniinide sisaldus on keskmiselt 7,8% suhtelise standardhälbega (0,034%) mitte üle 2%, mis iseloomustab tulemuste rahuldavat ühtlustumist.
Meetodi õigsuse määramiseks kasutati liitmismeetodit. Sel eesmärgil lisati primaarse atsetooniga ekstraheerimisega kolbi 1 ml 0, 05%, 0, 1% ja 0, 15% tanniini CO lahust ja seejärel kvantifitseeriti tanniinid iga kontsentratsiooni jaoks kolm korda. Uuringu tulemused on toodud tabelis. 5.

Patendi RU 2439568 omanikud:

Leiutis käsitleb farmakoloogia valdkonda ja seda saab kasutada tanniinide määramiseks taimsetes materjalides. Taimse tooraine tanniinide määramise meetod seisneb tooraineproovi ekstraheerimises veega keetmise, jahutamise, filtreerimise ajal, alikvoodiproovi optilise tiheduse mõõtmises lainepikkusel 277 nm ja kõigi tanniinide summa sisalduse arvutamises. teatud valemi järgi, seejärel lisatakse filtraadi alikvoodiproovile 1% kollageeni lahust 1% äädikhappes loksutatakse, filtreeritakse, filtraadi optiline tihedus mõõdetakse lainepikkusel 277 nm ja sademe sisaldus. tanniinid arvutatakse teatud valemi abil. Meetod võimaldab suurendada taimse tooraine tanniinide sisalduse määramise täpsust ning määrata selektiivselt sadestunud ja mittesadestunud tanniine taimses tooraines.

Leiutis käsitleb farmaatsiatööstust, farmakognoosia ja farmatseutilise keemia valdkonda ning seda saab kasutada tanniine sisaldavate taimsete materjalide kvaliteedi kontrollimiseks.

Tuntud meetod tanniinide määramiseks ravimtaimsetes materjalides (MPR) kulomeetria abil tanniini osas (SG Abdullina jt. Tanniinide kulomeetriline määramine ravimtaimedes. // Apteek. Nr 4. - 2010. - Lk. 13-15).

Selle meetodi puuduseks on lisaseadmete (kulomeeter), spetsiifilise tiitri (kaaliumhüpojodiidi) kasutamine, mis oksüdeerivate omaduste poolest läheneb kaaliumpermanganaadile ega võimalda eristada kõrge ja madala molekulmassiga tanniine.

Tuntud on ka meetod tanniini ja gallushappe derivaatide sisalduse määramiseks tees konduktomeetrilise meetodiga (Patent nr 2127878. Method for külön determination of tanniini and catechins (terminal of the gallus acid) in tee. M.: 1999).

Selle meetodi puuduseks on toksiliste orgaaniliste lahustite (isobutüülalkohol) kasutamine, samuti värvusreaktsiooni kasutamine Fe (III)-ga, mille produkt on värviline ühend, mille värvus on aja jooksul ebastabiilne.

Tuntud on ka meetod tanniinide kvantitatiivseks määramiseks tanniinisisalduse määramiseks skumpia ja sumaki lehtedes kompleksomeetria meetodil pärast tanniinide sadestamist tsingisooladega (GOST 4564-79. Skumpia leht. Tehnilised andmed; GOST 4565- 79. Sumaki leht. Tehnilised andmed).

Selle meetodi puuduseks on analüüsi kestus ja samaväärsuse punkti määramise raskus.

Tuntud on ka meetod tanniinide kvantitatiivseks määramiseks spektrofotomeetrilisel meetodil pärast reaktsiooni Folin-Ciocalteu reagendiga gallushappe osas (Juhised bioloogiliselt aktiivsete toidulisandite kvaliteedikontrolli ja ohutuse kohta. Juhend. R 4.1.1672 -03. - M. - 2004 - lk 94-95).

Selle meetodi puuduseks on madala ja suure molekulmassiga tanniinide eraldi määramise võimatus.

Kavandatavale meetodile kõige lähedasem on see, et tanniinid määratakse gallushappe osas spektrofotomeetriliselt (Juhised bioloogiliselt aktiivsete toidulisandite kvaliteedikontrolli ja ohutuse kohta. Juhend. R 4.1.1672-03. - M. - 2004 g. - P 120).

Selle meetodi puuduseks on uuritava proovi korduv lahjendamine, mille tulemusena on tanniinide kontsentratsioon lahuses halvasti määratud. Ka selle meetodi puhul on võrdluslahuseks puhverlahus, mis muudab analüüsi keeruliseks. Lisaks ei võimalda see meetod madala molekulmassiga ja suure molekulmassiga tanniinide sisaldust eraldi määrata.

Leiutise eesmärgiks on parandada parkainete määramise täpsust ning taimsetes toorainetes sadestunud ja mittesadestunud tanniinide eraldi määramise võimalust.

Probleemi lahendab asjaolu, et toormaterjali proovi ekstraheeritakse keetmise ajal veega, jahutatakse, filtreeritakse, alikvoodiproovi optiline tihedus mõõdetakse lainepikkusel 277 nm ja kõigi tanniinide summa sisaldus. arvutatakse valemiga

50 - kolvi maht, ml,

W - tooraine niiskusesisaldus, %,

filtraadi alikvoodile lisatakse 1% kollageeni lahus 1% äädikhappes, loksutatakse, filtreeritakse, filtraadi optiline tihedus mõõdetakse lainepikkusel 277 nm ja sadestunud tanniinide sisaldus arvutatakse valemiga

D 1 - lahuse 1 optiline tihedus,

D 2 - lahuse 2 optiline tihedus,

m nav - tooraine proovi kaal, g,

V a – alikvoodiproovi maht, ml,

250 - ekstraheerimise kogumaht, ml,

50 - kolvi maht, ml,

508 - gallushappe spetsiifiline absorptsiooniindeks (gallushappe 1% lahuse optiline tihedus 1 mg / ml),

W - tooraine niiskusesisaldus, %.

Praktiliselt viiakse meetod läbi järgmiselt. Umbes 2,0 (täpselt kaalutud) purustatud toorainet, mis on sõelutud läbi 3 mm ava läbimõõduga sõela, asetatakse 500 ml kolbi, valatakse 250 ml keemistemperatuurini kuumutatud veega ja keedetakse 30 minutit tagasijooksul aeg-ajalt segades. Jahutage toatemperatuurini, lahjendage veega 250 ml-ni, filtreerige läbi vati, et tooraineosakesed ei satuks vesiekstrakti. Esimesed 50 ml filtraati visatakse ära.

1-4 ml vesiekstrakti pannakse 50 ml mõõtekolbi, reguleeritakse veega märgini (lahus 1). Mõõtke lahuse 1 optiline tihedus lainepikkusel 277 nm. Võrdluseks kasutatakse vett.

30 ml vesiekstrakti pannakse 50 ml mahuga mõõtenõusse, lisatakse 2-10 ml sadestamisreaktiivi, loksutatakse 30-60 minutit, settitakse, filtreeritakse. 1-4 ml saadud filtraati viiakse 50 ml mahuga kolbi, mis reguleeritakse veega märgini (lahus 2). Mõõdetakse lahuse 2 optiline tihedus lainepikkusel 277 nm. Võrdluseks kasutatakse vett.

Leiutist illustreerivad järgmised näited.

Näide 1. Analüüsiks võetud taimne tooraine - tamme koor.

Umbes 2,0 (täpselt kaalutud) purustatud toorest tammekoort, sõelutud läbi 3 mm ava läbimõõduga sõela, pannakse 500 ml kolbi, valatakse 250 ml keemiseni kuumutatud veega ja keedetakse 30 minutit tagasijooksul aeg-ajalt segades. . Jahutage toatemperatuurini, lahjendage veega 250 ml-ni, filtreerige läbi vati, et tooraineosakesed ei satuks vesiekstrakti. Esimesed 50 ml filtraati visatakse ära.

2 ml tammekoore vesiekstrakti pannakse 50 ml mahuga mõõtekolbi, mis on reguleeritud veega märgini (lahus 1). Mõõtke lahuse 1 optiline tihedus lainepikkusel 277 nm. Võrdluseks kasutatakse vett. Tammekoore D 1 on 0,595.

30 ml vesiekstrakti asetatakse 50 ml mahuga mõõtenõusse, lisatakse 2 ml sadestamisreaktiivi, loksutatakse 30 minutit, settitakse, filtreeritakse. 2 ml saadud filtraati viiakse 50 ml mahuga kolbi, mis reguleeritakse veega märgini (lahus 2). Mõõdetakse lahuse 2 optiline tihedus lainepikkusel 277 nm. Võrdluseks kasutatakse vett. Tammekoore D 2 on 0,276.

Näide 2. Analüüsiks võeti serpentiini risoomi taimne materjal.

Umbes 2,0 (täpselt kaalutud) serpentiini risoomi purustatud toorainet, mis on sõelutud läbi 3 mm ava läbimõõduga sõela, pannakse 500 ml mahuga kolbi, valatakse 250 ml keemiseni kuumutatud vett ja keedetakse. 30 minutit tagasijooksul aeg-ajalt segades. Jahutage toatemperatuurini, lahjendage veega 250 ml-ni, filtreerige läbi vati, et tooraineosakesed ei satuks vesiekstrakti. Esimesed 50 ml filtraati visatakse ära.

1 ml mähise risoomi vesiekstrakti pannakse 50 ml mahuga mõõtekolbi, mis reguleeritakse veega märgini (lahus 1). Mõõtke lahuse 1 optiline tihedus lainepikkusel 277 nm. Võrdluseks kasutatakse vett.

30 ml vesiekstrakti pannakse 50 ml mahumõõturisse, lisatakse 7 ml sadestamisreaktiivi, loksutatakse 60 minutit, settitakse, filtreeritakse. 1 ml saadud filtraati viiakse 50 ml mahuga kolbi, mis reguleeritakse veega märgini (lahus 2). Mõõdetakse lahuse 2 optiline tihedus lainepikkusel 277 nm. Võrdluseks kasutatakse vett.

Kavandatav meetod parandab taimse tooraine tanniinide sisalduse määramise täpsust ning määrab selektiivselt sadestunud ja mittesadestunud tanniinid taimses tooraines.

Meetod taimsete toorainete tanniinide määramiseks gallushappe osas, mis seisneb tooraine proovi ekstraheerimises veega keetmise, jahutamise, filtreerimise ajal, alikvoodiproovi optilise tiheduse mõõtmises lainepikkusel 277 nm ja proovi optilise tiheduse mõõtmises. kõigi tanniinide summa sisaldus vastavalt valemile:

kus x a - tanniinide summa sisaldus gallushappes,%;




50 - kolvi maht, ml;
508 - gallushappe spetsiifilise absorptsiooni indeks (gallushappe 1% lahuse optiline tihedus 1 mg/ml);
W - tooraine niiskusesisaldus, %,
filtraadi alikvoodile lisatakse 1% kollageeni lahus 1% äädikhappes, loksutatakse, filtreeritakse, filtraadi optiline tihedus mõõdetakse lainepikkusel 277 nm ja sadestunud tanniinide sisaldus arvutatakse valemiga. :

kus X on sadestunud tanniinide sisaldus gallushappes, %;
D 1 - lahuse 1 optiline tihedus;
D 2 - lahuse 2 optiline tihedus;
m nav - tooraine proovi mass, g;
V a - alikvoodiproovi maht, ml;
250 - ekstraheerimise kogumaht, ml;
50 - kolvi maht, ml;
508 - gallushappe spetsiifilise absorptsiooni indeks (gallushappe 1% lahuse optiline tihedus 1 mg/ml);
W - tooraine niiskusesisaldus, %.

Sarnased patendid:

Leiutis käsitleb meditsiini, nimelt psühhoneuroloogiat, ning kirjeldab meetodit neuroloogiliste funktsioonide taastumise ennustamiseks patsientidel isheemilise insuldi ägedal perioodil, viies läbi kliinilisi ja biokeemilisi uuringuid albumiini (TAC) üldkontsentratsiooni kohta vereseerumis grammides. /l, kus lisaks 5-7-ks haiguspäeval määratakse albumiini efektiivne kontsentratsioon (ECA), arvutatakse albumiini sidumisreserv (ARA) ja kui see näitaja on alla ühe, siis negatiivne tulemus prognoositakse neuroloogiliste funktsioonide taastumist patsientidel isheemilise insuldi ägedal perioodil.

Leiutis käsitleb meditsiini, onkoloogia bioloogilisi uuringuid ja seda saab kasutada ajukasvajate pahaloomulise protsessi arengu määramiseks pärast kirurgilist ravi.

Leiutis käsitleb meditsiinivaldkonda, täpsemalt onkoloogiat, ning kirjeldab meetodit põievähi neoadjuvantse keemiaravi efektiivsuse hindamiseks patsiendi uurimisel, mille käigus registreeritakse kasvajakoe autofluorestsentsi maksimaalne intensiivsus spektri rohelises piirkonnas. esmase diagnoosimise staadiumis ja 1 kuu pärast operatsioonieelset keemiaravi ning kasvajakoe autofluorestsentsi maksimaalse intensiivsuse väärtuse suurenemisega patsiendil 15% võrreldes esialgsega ja rohkem, hinnatakse ravi efektiivsust osaliseks. kasvajaprotsessi taandareng, kasvajakoe autofluorestsentsi intensiivsuse muutuste puudumisel esialgsetest, määratakse protsessi stabiliseerumine, kusjuures kasvajakoe autofluorestsentsi intensiivsus väheneb 15% võrra. ja rohkemgi alates esialgsest märkusest kasvajaprotsessi progresseerumist.