LES PRÉPARATIFS
ÉVALUATION DU NOUVEAU SYSTÈME DE TEST ELISA
"Rotavirus-antigène-ELISA-BEST"
12Zhirakovskaya E.V., 3Ignatiev G.M., 3Indikova I.N., 12Tikunova N.V.
1 FGUN SSC VB "Vector" de Rospotrebnadzor, colonie de Koltsovo, région de Novossibirsk;
2 Institut de biologie chimique et de médecine fondamentale, Novossibirsk ;
3 Institut d'État pour la normalisation et le contrôle des produits biologiques médicaux nommé d'après V.I. LA. Tarasevichag Moscou
Les résultats des tests de sensibilité, spécificité et reproductibilité d'un nouvel ensemble de réactifs "Rotavirus-antigène-IFA-BEST" développé au JSC "Vector-Best" (Novosibirsk) sont présentés. Les données obtenues permettent de prédire la fiabilité diagnostique des résultats lors de l'utilisation de ce système de test pour détecter l'antigène du rotavirus du groupe A dans le matériel clinique.
Mots clés : système de test ELISA, efficacité, rotavirus A
Les rotavirus du groupe A (famille des Reoviridae, genre Rotavirus) sont la cause la plus fréquente de gastro-entérite sévère chez les jeunes enfants dans le monde. Les adultes dont le système immunitaire est affaibli tombent souvent malades. L'infection à rotavirus (RVI) est une maladie hautement contagieuse avec de multiples voies de transmission. La source de l'infection est une personne présentant une forme manifeste ou asymptomatique de la maladie, ainsi qu'un porteur de virus. Chez les enfants et les adultes, le RVI peut se manifester sous la forme de cas sporadiques, de maladies de groupe local, d'épidémies et est très répandu. Le mécanisme de transmission féco-orale de cette infection est réalisé par les voies alimentaires (lait et produits laitiers, aliments pour bébés), eau et contact-ménage.
Le diagnostic de gastro-entérite à rotavirus par le tableau clinique, en particulier avec une morbidité sporadique, est d'une certaine difficulté, car les symptômes caractéristiques de cette infection diffèrent peu des symptômes d'autres infections intestinales aiguës (AEI) d'étiologies diverses. Le diagnostic différentiel chez les patients atteints de gastro-entérite à rotavirus est réalisé à la fois avec des toxico-infections d'origine alimentaire et avec d'autres AEI d'origine virale (norovirus, astrovirus, adénovirus, coronavirus, entérovirus Coxsackie et ECHO) et bactérienne (salmonellose, dysenterie, microorganismes cholériques). Malheureusement, toutes les institutions médicales spécialisées de la Fédération de Russie ne procèdent pas au diagnostic de l'infection à rotavirus.
Les méthodes de diagnostic du RVI visent à détecter les virions entiers, l'antigène viral ou l'ARN spécifique du virus dans les selles. Une approche prometteuse pour la détection directe des virus à la fois dans le matériel clinique et dans les objets environnementaux est la méthode de transcription inverse - réaction en chaîne par polymérase (RT-PCR). Ces dernières années, des systèmes de test ont été créés sur la base des développements scientifiques modernes avec une combinaison de différentes méthodes de détection des rotavirus : PCR multiplex avec détection par hybridation-fluorescence des produits d'amplification « au point final » ; immuno-PCR (IPCR) basée sur les points de terminaison avec détection en temps réel ; RT-PCR quantitative avec détection en temps réel. Les laboratoires de recherche utilisent la microscopie électronique pour détecter rapidement les rotavirus. Cependant, toutes les méthodes ci-dessus sont plutôt laborieuses et nécessitent des instruments coûteux et un personnel hautement qualifié. Par conséquent, lors de la réalisation de diagnostics de laboratoire dans les hôpitaux et en ambulatoire, la préférence est donnée aux méthodes basées sur la détection de l'antigène viral dans les selles à l'aide d'un dosage immuno-enzymatique (ELISA) avec des anticorps mono- et polyconaux contre les rotavirus. Cette méthode est disponible pour les laboratoires pratiques, est facile à mettre en place et permet d'obtenir rapidement un résultat.
Le but de ce travail est d'étudier l'efficacité diagnostique d'un nouvel ensemble de réactifs "Rotavirus-antigène-IFA-BEST" développé au JSC "Vector-Best", Novosibirsk.
^ septembre-décembre
matériaux et méthodes
Le matériel de l'étude était constitué d'échantillons de matières fécales de jeunes enfants avec un diagnostic d'AEI et sans manifestations cliniques d'infection intestinale, qui ont été hospitalisés dans les services d'infections intestinales et d'infections respiratoires de l'hôpital clinique de la ville pour enfants n ° 3 de Novossibirsk. Des échantillons fécaux ont été collectés dans des récipients en plastique stériles jetables d'un volume de 2-3 ml lors de l'admission des patients dans le service hospitalier et conservés à - 20°C pendant 15 jours. Un stockage plus long du matériau a été réalisé à - 70°C.
Un panel de 104 échantillons de matières fécales a été préalablement testé pour la présence d'agents pathogènes OCI. D'eux:
30 échantillons dans lesquels seuls les rotavirus du groupe A ont été détectés par ELISA et RT-PCR ; le génotypage par RT-PCR a montré que les échantillons fécaux contenaient des rotavirus du génotype PG1 (18 échantillons), PG2 (4 échantillons), PG3 (3 échantillons), PG4 (2 échantillons), PG4 (1 échantillon), PG9 (1 échantillon), PG3 (1 échantillon) ;
14 échantillons dans lesquels seuls les norovirus du deuxième génotype ont été détectés par RT-PCR, ce qui a été confirmé par la détermination de la séquence nucléotidique 5" - la région du gène de capside située sur le génome des norovirus dans la région de 5085-5485 h .;
15 échantillons dans lesquels seuls les Astrovirus ont été détectés par RT-PCR, ce qui a été confirmé par la détermination de la séquence nucléotidique 5" - la région du gène de capside située sur le génome des Astrovirus dans la région de 4526 - 4955 n.; 15 échantillons dans lequel seuls les adénovirus ont été détectés par PCR ;
30 prélèvements fécaux (témoin) d'enfants sans manifestations cliniques d'infection intestinale, hospitalisés dans le service respiratoire de l'hôpital ; l'analyse préliminaire n'a pas révélé les agents pathogènes viraux ci-dessus dans ces échantillons.
Les échantillons ont été testés pour la présence ou l'absence de rot-, noro-, astro- et adénovirus par RT-PCR en utilisant des kits commerciaux "AmpliSens No go virus 1, 2 génotypes - 306/322", "AmpliSens Astrovirus -165" enregistré dans le Fédération de Russie, "AmpliSense Adenovirus - 462", "AmpliSense Rotavirus - 290" (produit par FGUN Central Research Institute of Epidemiology, RF). Les échantillons ont été examinés conformément aux instructions d'utilisation des kits de réactifs respectifs pendant la durée de conservation. Les échantillons positifs pour la présence de rotavirus ont été génotypés par RT-PCR. La détermination de la présence ou de l'absence d'antigène de rotavirus a également été réalisée par ELISA en utilisant un système de test commercial IDEIA™ Rotavirus, (DakoCytomation, UK) conformément aux instructions du kit.
Lors du test du kit de réactifs Rota-virus-antigène-ELISA-BEST, tous les échantillons ci-dessus (104) ont été cryptés et testés trois fois avec le kit de test. À la fin des tests, les échantillons ont été décodés et les résultats analysés.
résultats et discussion
La sensibilité du kit de réactifs "Rotavirus-antigène-ELISA-BEST" a été évaluée par le nombre de coïncidences de résultats positifs (en %) des échantillons de test utilisant le système de test testé et les médicaments de référence. Dans le même temps, il a été révélé qu'en utilisant le kit de réactifs "Rotavirus-antigène-ELISA-BEST", les 30 échantillons avec la présence confirmée de rotavirus A étaient positifs (tableau 1). Par conséquent, la sensibilité du kit de test pour la détection du rotavirus A était de 100 %. Il convient de noter que le panel comprenait des échantillons avec sept génotypes différents de rotavirus, et tous ont été détectés avec succès avec le kit de réactifs "Rotavirus - antigène - I FAB - EST".
La spécificité du système de test a été évaluée par le nombre de coïncidences de résultats négatifs (en %) des échantillons de test utilisant le système de test testé avec les études préliminaires soumises. Pour évaluer la spécificité, le panel utilisé comprenait 30 échantillons dans lesquels aucun agent pathogène viral n'a été détecté, ainsi que 14 échantillons dans lesquels seuls les norovirus du deuxième génotype ont été détectés par la méthode RT-PCR, 15 échantillons dans lesquels la méthode RT-PCR n'a été détecté que des astrovirus ; 15 échantillons dans lesquels seuls les adénovirus ont été détectés par PCR. Il a été déterminé que dans 69 des 74 échantillons négatifs, les valeurs de densité optique lors de la détection avec le kit de réactif Rotavirus-antigène-ELISA-BEST pour la présence de rotavirus A ne dépassaient pas les valeurs de fond, c'est-à-dire les valeurs obtenu à la suite de la mesure de la densité optique dans les échantillons négatifs de contrôle. Deux échantillons contenant des astrovirus, un échantillon - norovirus du deuxième génotype, un échantillon - adénovirus et deux échantillons dans lesquels aucun des agents pathogènes viraux ci-dessus n'a été détecté, ont montré des indices de densité optique positifs. Il convient de noter que dans les échantillons dans lesquels aucun des agents pathogènes viraux n'avait été détecté auparavant, des signaux positifs n'ont été enregistrés que dans l'une des études répétées (tableau 2). Ainsi, la spécificité du kit de réactifs Rotavirus-Antigen-ELISA-BEST était de 93,2 %.
Au cours des tests, la reproductibilité des résultats obtenus lors de l'utilisation du kit de test de réactifs "Rotavirus-antigène-ELISA-BEST" sur du matériel clinique a été évaluée - tous les échantillons ont été examinés trois fois dans différentes expériences pour déterminer la variation des résultats. Dans presque tous les cas, des résultats similaires ont été obtenus : le système de test a détecté tous les échantillons négatifs et positifs de la même manière. L'exception était deux échantillons, dans lesquels aucun des agents pathogènes viraux n'avait été détecté auparavant : dans l'un des réplicats pour les deux échantillons, les valeurs de densité optique dépassaient la DOcrit. Il est à noter que l'excès était non significatif (tableau 2). Ainsi, la reproductibilité des résultats était de 98,8 %.
Les résultats des tests ont montré que l'ensemble de tests de réactifs "Rotavirus-antigène-ELISA-BEST" dans son efficacité diagnostique - spécificité, sensibilité et reproductibilité - est comparable aux diagnostics disponibles dans la Fédération de Russie.
en utilisant le kit testé de réactifs "Rotavirus-antigène-ELISA-BEST" pour la détection de l'antigène du rotavirus du groupe A dans le matériel clinique.
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Evaluation de la sensibilité et de la spécificité du kit de réactifs "Rotavirus-antigène-ELISA-BEST"
Tableau 1
Nombre d'échantillons Nombre d'échantillons Résultats de détection au moyen de médicaments de comparaison IDEIA Rotavirus Astro-PCR Hopo 2-PCR Adeno-PCR Résultats de détection avec le set "Rotavirus-antigène-ELISA-BEST"
1. 30 30 0 0 0 30
2. 15 0 15 0 0 2
3. 14 0 0 14 0 1
4. 15 0 0 0 15 1
Evaluation de la spécificité du kit de réactifs "Rotavirus-antigène-ELISA-BEST" -
Tableau 2
PCR AmpliSens
rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus
0,443 1,306 0,676 0,418
Rotavirus-antigène-IFA-BEST CJSC "Vector-Best"
OPKrit OPKrit OPKrit
0,250 0,263 0,251
> 4,000 > 4,000 > 4,000 3,926 > 4,000 3,939
> 4,000 > 4,000 > 4,000
> 4,000 > 4,000 > 4,000
£ septembre
décembre 2009
AmpliSens
rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus rotavirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus
IDEIA Rotavirus DakoCytomation OPKrit = 0,150
0,401 0,322 1,659 0,566 0,518 1,278 1,285 0,809 1,160 0,407 0,218 0,703 1,889 1,069 1,302 0,879 1,842 0,747 0,793 1,013 1,124 0,670 0,726 0,683 0,814 0,997 0,206 0,052 0,050 0,034 0,040 0,048 0,040
Rotavirus
OPKrit 0.250
> 4,000 3,933 3,987 3,918 3,853 3,972
> 4,000 3,864 3,879 3,897 3,800
> 4,000 3,981
> 4,000 3,713
> 4,000 4.000
> 4,000 3,989
> 4,000 3,872 0,088 0,103 0,230 0,240 0,268 1,819 0,062
antigène-ELISA-BEST "Vector-Best"
OPKrit OPKrit 0,263 0,251
> 4,000 > 4,000
> 4,000 > 4,000
> 4,000 > 4,000 3,821 3,899
> 4,000 3,964 3,845 3,923 3,962 3,871
> 4,000 3,929
> 4,000 3,881 3,884 > 4,000
> 4,000 > 4,000 3,800 3,851 3,818 >4,000
> 4,000 > 4,000
> 4,000 3,995
> 4,000 > 4,000
> 4,000 > 4,000
> 4,000 > 4,000 3,837 3,839
> 4,000 > 4,000
> 4,000 > 4,000
> 4,000 3,986
> 4,000 > 4,000
> 4,000 3,998
> 4,000 > 4,000
> 4,000 3,823 0,063 0,073 0,054 0,061 0,255 0,250 0,256 0,244 0,278 0,560 1,117 1,235 0,052 0,052
astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus adénovirus adénovirus adénovirus adénovirus adénovirus adénovirus adénovirus adénovirus adénovirus adénovirus adénovirus adénovirus adénovirus adénovirus adénovirus adénovirus adénovirus
IDEIA Rotavirus DakoCytomation OIIKpHT = 0,150
0,043 0,043 0,041 0,052 0,040 0,046 0,041 0,040 0,037 0,039 0,030 0,045 0,032 0,030 0,037 0,042 0,034 0,039 0,043 0,043 0,045 0,039 0,050 0,034 0,050 0,043 0,050 0,042 0,041 0,042 0,038 0,047 0,039
PotaBHpyc-aHTHreH-HOA-EECT 3AO "BeKTop-EecT"
OnKpHT OnKpHT OIIKpHT
0,250 0,263 0,251
0,115 0,075 0,082
0,053 0,046 0,058
0,233 0,198 0,189
0,144 0,105 0,128
0,243 0,062 0,073
0,043 0,040 0,046
0,069 0,043 0,041
0,143 0,044 0,058
0,220 0,206 0,230
3,475 2,577 2,405
0,223 0,247 0,240
0,232 0,236 0,231
0,048 0,042 0,041
0,121 0,085 0,093
0,132 0,111 0,174
0,122 0,052 0,063
0,061 0,044 0,054
0,073 0,035 0,048
0,089 0,046 0,046
0,047 0,043 0,044
0,041 0,039 0,044
0,083 0,046 0,038
0,168 0,074 0,097
0,247 0,118 0,099
0,248 0,251 0,242
0,243 0,259 0,250
0,054 0,048 0,055
0,048 0,040 0,037
0,058 0,045 0,046
0,053 0,045 0,049
0,069 0,058 0,065
0,912 0,344 0,379
0,089 0,037 0,042
décembre 2009
PCR AmpliSens
adénovirus adénovirus adénovirus adénovirus negat neglig neglig négatif
IDEIA Rotavirus DakoCytomation OPKrit = 0,150
0,040 0,044 0,039 0,041 0,260 0,044 0,046 0,042 0,047 0,041 0,039 0,048 0,055 0,035 0,039 0,040 0,041 0,033 0,046 0,049 0,048 0,038 0,039 0,029 0,037 0,036 0,043 0,043 0,039 0,042 0,034 0,037 0,041 0,036
Rotavirus - antigène - IFA-BEST CJSC "Vector-Best"
OPKrit OPKrit OPKrit
0,250 0,263 0,251
0,105 0,042 0,043
0,046 0,143 0,133
0,227 0,045 0,042
0,065 0,068 0,054
0,125 0,039 0,042
0,196 0,191 0,182
0,209 0,170 0,154
0,316 0,071 0,073
0,058 0,043 0,049
0,171 0,056 0,061
0,049 0,060 0,064
0,047 0,062 0,065
0,058 0,047 0,066
0,073 0,072 0,066
0,188 0,120 0,109
0,180 0,074 0,072
0,057 0,063 0,058
0,047 0,060 0,047
0,162 0,146 0,143
0,248 0,248 0,260
0,063 0,066 0,104
0,247 0,223 0,251
0,054 0,053 0,070
0,242 0,240 0,248
0,073 0,061 0,103
0,066 0,065 0,064
0,108 0,123 0,192
0,072 0,067 0,071
0,079 0,079 0,087
0,104 0,079 0,164
0,169 0,150 0,162
0,140 0,166 0,146
0,114 0,133 0,131
Le traitement des helminthiases chez les enfants est extrêmement important, car les conséquences peuvent être un retard dans le développement des processus physiques et mentaux, pathologiques des organes et systèmes internes, voire la mort. De plus, les infestations helminthiques sont très contagieuses, c'est pourquoi elles se propagent si facilement dans les établissements préscolaires et scolaires. Sur cette base, il est clair à quel point le traitement rapide des helminthiases chez les enfants est important.
Les premiers signes d'helminthes chez les enfants
Les vers sont des agents pathogènes conditionnels du corps humain, des vers dont une personne est le propriétaire final. De plus, dans cette affaire, l'âge du propriétaire ne joue aucun rôle, différents types d'helminthiases peuvent être observés à la fois chez les enfants et chez les patients adultes.
Pourquoi les helminthiases sont-elles dangereuses pour un enfant ?
Comme mentionné précédemment, les helminthes chez les enfants peuvent provoquer des maladies et des pathologies graves, ce qui ralentit le développement mental et physique. Les complications possibles pour chaque type d'helminthiase peuvent être complètement différentes, par exemple :
Par conséquent, les helminthiases chez les enfants nécessitent encore plus d'attention, une assistance médicale rapide, un suivi à long terme par un spécialiste et une prévention.
Les principaux symptômes chez les enfants
Les symptômes des helminthiases chez un enfant peuvent être différents selon le type de vers :
1. Les vers ronds se manifestent immédiatement par une réaction allergique, de la fièvre et des nausées chez l'enfant. Les premières apparitions sont généralement brillantes, mais s'atténuent rapidement. Après cela, les symptômes suivants peuvent être observés: 
- coliques et dysbiose et nouveau-nés;
- chez les bébés de moins de 1 an, douleurs au nombril, problèmes de selles, allergies et diathèse ;
- les enfants plus âgés ont des problèmes de sommeil, un comportement agité, des cauchemars;
- les enfants de 3 à 7 ans se caractérisent par des nausées, de la fièvre, de la toux et des douleurs abdominales, des éruptions cutanées.
2. L'entérobiase, dont l'agent causal sont les oxyures, se manifeste par un tableau clinique effacé. Et seulement après 1 mois, les symptômes suivants peuvent être remarqués :
- chez le nouveau-né, inflammation, gonflement et rougeur de l'anus, refus de manger, pleurs la nuit, manque d'appétit ;
- les enfants de moins d'un an se caractérisent par les mêmes symptômes, ainsi que par de sévères démangeaisons de l'anus la nuit (de 23h00 à 1h00), les filles souffrent d'inflammation des organes génitaux;
- chez les enfants plus âgés, douleurs abdominales près du nombril, troubles du sommeil, démangeaisons au niveau des fesses.
3. Les symptômes de la toxocarose sont difficiles à reconnaître, à l'exception d'une température corporelle basse et de réactions allergiques (éruption cutanée, urticaire, démangeaisons et gonflement). Après l'infection, une toux peut survenir, ce qui provoque en outre une pneumonie ou une bronchite, en particulier chez les plus petits patients. 
La trichinose suggère des signes bénins chez les nouveau-nés, sinon les signes suivants sont observés :
- état fébrile;
- gonflement du visage;
- douleur musculaire;
- réactions allergiques;
- les enfants de 5 ans et plus peuvent présenter une hypertrophie des amygdales, de la rate, des éruptions cutanées et des maux de gorge.
Il est très difficile de diagnostiquer les symptômes des helminthiases chez les enfants de 2 ans et moins, car l'enfant ne peut pas expliquer son comportement et son état. Par conséquent, pour toute manifestation et comportement atypique de l'enfant, il est préférable de le montrer au médecin.
Quelle est la première chose à faire ?
Les vers qui ont été trouvés dans les selles d'un enfant sont le symptôme le plus important de la maladie, après quoi vous devez immédiatement demander l'aide d'un médecin. Aucun traitement contre les helminthes ne peut réussir sans un diagnostic correctement mené. Les méthodes d'enquête dans ce cas doivent être complexes, y compris les procédures suivantes : 
- prendre un grattage de l'anus;
- étude des selles de l'enfant;
- test sanguin;
- biopsie musculaire dans de rares cas avec suspicion de trichinose ;
- test sanguin sérologique;
- Radiographie, échographie, tomographie ;
- ELISA pour détecter les anticorps dans le sang.
Méthodes de traitement
Le traitement des helminthiases chez l'enfant doit être complet, bien pensé, prescrit avec des dosages et une fréquence d'administration précis du médicament. Cela est dû au fait que des médicaments contenant des composants toxiques sont utilisés pour l'effet vermifuge, ce qui signifie qu'une utilisation irrationnelle peut entraîner des effets secondaires. De plus, à la maison, un traitement alternatif avec des plantes médicinales est approprié.
Remèdes populaires
Le traitement moderne avec des remèdes populaires pour ces maladies chez les enfants implique 4 moyens efficaces: 
Toute méthode de traitement à domicile doit être discutée avec votre médecin à l'avance. Il faut se rappeler qu'il existe des contre-indications aux herbes et aux remèdes populaires sous la forme d'intolérance individuelle.
Traitement médical
- Avec l'entérobiase et l'ascaridiase, des médicaments tels que le Pirantel et le Mebendazole sont généralement utilisés. La prise de Pirantel est appropriée à une dose de 10 mg de substance pour chaque kilogramme de poids d'oxyures et de 5 mg / kg d'ascaris. Le mébendazole est pris deux fois par jour à 50 mg pour les enfants de 2-3 ans pendant trois jours consécutifs, deux fois pour 100 mg pendant trois jours consécutifs pour les enfants de plus de 3 ans, après 3 semaines, le traitement est répété.
- En cas de toxocarose, le mébendazole est prescrit à une dose différente - pour les enfants de 2 ans et plus, deux fois par jour, 100 mg pendant 14 à 10 jours.
- Le traitement de la trichinose accepte 5 mg de mébendazole par kilogramme de poids, après quoi la dose est divisée en trois doses par jour. La durée du traitement est de 1 semaine sous la stricte surveillance d'un médecin.
Prévention des helminthiases
- se laver les mains immédiatement après le contact avec les animaux, après la rue et les bacs à sable, aller aux toilettes et avant de manger;
- manger uniquement des aliments propres;
- traitement thermique correctement effectué des produits à base de viande et de poisson;
- boire de l'eau bouillie;
- le respect de l'hygiène personnelle et de l'assainissement;
- vermifugation régulière des animaux de compagnie;
- la réalisation d'un déparasitage préventif chez les enfants à partir de 2 ans.
Test sanguin pour toxocars
Caractéristiques de l'infection humaine par la toxocarose
Les porteurs de l'infection sont les chiens, moins souvent les chats. Les œufs de Toxocara sont distribués avec les excréments des chiens errants. Une fois au sol, dans l'eau ou s'attardant sur la fourrure d'un animal, ils sont introduits dans un corps sain de diverses manières.
Réaction à l'intrusion
Les statistiques médicales montrent que les adultes sont moins susceptibles de contracter la toxocarose, à moins que leur profession ne soit à risque. Les enfants sont beaucoup plus susceptibles d'attraper une infection.
Les symptômes les plus courants de la toxocarose :
- Fièvre sans aucune maladie.
- Augmentation de la température.
- Douleurs croissantes et décroissantes dans la tête ou l'abdomen.
- L'apparition d'une éruption cutanée qui ne peut être éliminée.
- Bouffissure du visage.
- Une augmentation du taux d'éosinophiles dans le sang, révélée par une analyse générale.
Pour faire un diagnostic précis, un test immunologique pour les toxocars est prescrit. La présence de composés protéiques dans le sang, porteurs de l'information génétique de l'helminthe (antigènes), provoque une immunité à la production d'anticorps de la classe igg. C'est le premier signe d'infection par la toxocarose.
Diagnostics préliminaires
La phase initiale de l'histoire du patient est collective. Avant d'envoyer un patient faire un test sanguin pour la toxocarose, il est nécessaire d'étudier l'histoire de la maladie et de faire un examen préliminaire.
Diagnostic primaire :
- Etude des circonstances aggravantes pouvant provoquer une infection - travaux spécifiques avec des animaux ou présence d'un animal de compagnie, fouilles dans des zones potentiellement dangereuses, enfants jouant dans des endroits où se promènent des chiens.
- Examen physique du patient. Examen de la peau pour une invasion sous-cutanée par des toxocars, des paupières et des globes oculaires, palpation.
- Nomination d'un test sanguin détaillé. Au cours de l'infection par la toxocarose, une augmentation significative de certains indicateurs est caractéristique - éosinophiles (70-80%), lymphocytes, ESR. Alors que le taux d'hémoglobine baisse de façon marquée.
- Prélèvement d'échantillons de foie. En cas d'invasion sévère, la charge sur le foie affecte, ce qui se manifeste par un fort saut de bilirubine.
Il est impossible d'obtenir une confirmation directe de l'invasion de Toxocar en utilisant des tests de routine (sang, coprogramme, frottis). De plus, l'étude duodénale n'est pas informative, car les larves sont difficiles à migrer.
Après avoir reçu les résultats d'un examen préliminaire, indiquant une éventuelle infection à toxocaras et différenciant le diagnostic présumé des maladies présentant des symptômes similaires, le patient est soumis à un test ELISA pour la toxocarose.
Dosage immunosorbant lié
L'objectif principal de cette étude est de confirmer la présence de toxocars dans le corps humain. Les anticorps dirigés contre ces helminthes se trouvent dans le plasma sanguin, il est donc prélevé dans une veine.
L'analyse des toxocars nécessite une certaine préparation :
- Ne mangez pas d'aliments gras ou lourds la veille de votre intervention.
- Ne buvez pas de boissons sucrées, gazeuses ou alcoolisées pendant la journée avant de vous rendre au laboratoire.
- Prélevez des échantillons à jeun.
- Ne prenez pas de médicaments le jour précédent et le jour où le test est prévu.
Il est à noter que cette manière très informative de détecter une invasion peut être influencée par certaines circonstances. Un résultat faussement positif peut survenir si le patient a :
- Maladies oncologiques.
- Tuberculose pulmonaire.
- Pathologies hépatiques sévères.
- Syndrome auto-immun.
- Syndrome des antiphospholipides.
- Grossesse.
Dans ce cas, il ne sera pas possible d'obtenir une analyse de confirmation à 100 %, car dans ces circonstances, le système de défense produit également des immunoglobulines (anticorps). Il est nécessaire d'effectuer des diagnostics supplémentaires et de différencier la toxocarose des facteurs énumérés.
La concentration d'immunoglobulines (titre) de la classe IgG atteint la valeur maximale possible après 2-3 mois à compter du début de l'invasion. Plus l'infection est grave, plus ce chiffre est élevé.
Résultats ELISA
Pour poser un diagnostic, un dosage immunoenzymatique est soigneusement étudié, les résultats obtenus sont comparés à des valeurs de référence. La norme est un titre d'anticorps de 1: 100 avec un indice de positivité inférieur à 0,9.
Valeurs numériques des titres
Les résultats obtenus peuvent être négatifs, positifs, faiblement positifs ou discutables. Le nombre de titres AT dépend de la gravité de l'invasion et de l'âge de son apparition.
Décodage d'analyse :
- Titre AT jusqu'à 1: 100 - le résultat est négatif. Aucune larve de toxocara n'a été trouvée dans le corps du patient.
- Titre AT jusqu'à 1: 400 - le résultat est faiblement positif. Le patient a une faible invasion ou la forme oculaire de la toxocarose se développe. Dans certains cas, l'indicateur parle d'une infection récente.
- Titre AT jusqu'à 1: 600 - le résultat est positif. Une personne souffre d'une forme clinique d'helminthiase, si elle est détectée, un traitement immédiat est nécessaire.
- Titre AT jusqu'à 1: 800 - le résultat est positif. Il parle d'une invasion sévère de nature progressive et d'une forte proportion de la probabilité de développement d'un processus pathologique des organes internes.
À de rares exceptions près, les études ELISA révèlent une forme d'invasion négligée avec un mélange d'helminthiases d'origine différente. Dans ce cas, le total des anticorps peut être supérieur à 1: 800.
Coefficient de positivité
Dans un test immuno-enzymatique pour la toxocarose avec un titre de 1: 400 - 1: 600 pour différencier l'invasion des facteurs secondaires, les indicateurs obtenus sont comparés à la valeur de référence. La différence entre ces nombres est généralement appelée indice ou coefficient de positivité.
Habituellement, sous la forme d'un ELISA réalisé, un indicateur se trouve en face de l'autre. Le premier est la norme, le second peut signifier :
- Jusqu'à 0,9 - le résultat est négatif. Aucune larve de toxocara n'a été trouvée.
- 0,9-1,1 - le résultat est douteux. Dans ce cas, des diagnostics répétés sont attribués.
- 1.1-2.2 - le résultat est faiblement positif. Une personne est un porteur avec une faible invasion.
- 2.2-4.2 - le résultat est positif. La toxocarose modérée se développe depuis longtemps.
- Au-dessus de 4,4 - le résultat indique le pic d'invasion helminthique ou d'helminthiase récente.
KP avec un résultat de 4,4 et une augmentation détectée de l'éosinophilie de 10% peut indiquer le développement de la forme oculaire de la toxocarose et la présence d'anticorps contre les invasions croisées, totales contre la toxocarose.
La réponse immunitaire et la densité optique des anticorps (coefficient de positivité) dépendent du degré d'infection par les toxocars et de leur localisation. Le plus petit indicateur de titre et de CP permet seulement de supposer l'absence d'helminthes, mais pas de l'affirmer.
Les informations fournies ne peuvent servir de source d'autodiagnostic ou d'automédication. Les résultats ELISA combinés à un examen préliminaire ne peuvent qu'informer un spécialiste de la présence d'un problème. Dans le laboratoire Invitro, les diagnostics sanguins sont effectués avec une grande précision, le résultat de l'analyse est accompagné de commentaires de spécialistes sur le coefficient de positivité. Cela aide grandement le médecin à établir un diagnostic plus précis.
Nombre de déterminations 96 (48 en double)
Format tablette de travail : dépouillé 12x8, cassant 1 trou.
Sensibilité : 1,5 U/ml.
Plage de mesure : 0-400 U/ml.
Le volume de l'échantillon d'essai ne dépasse pas 25 l.
Standardisation des conditions de réalisation d'une réaction enzymatique avec un chromogène dans un agitateur thermostaté à 37°C.
L'ensemble comprend :
1. Plaque rayée 12 x 8 puits, prête à l'emploi - 1 pc.
2. Échantillons d'étalonnage prêts à l'emploi (0-400 U/ml) colorés avec une intensité variable selon la concentration - 6 flacons.
3. Échantillon de contrôle - 1 flacon.
4. Conjugué à un composant, prêt à l'emploi, ne nécessite pas de dilution - 1 flacon.
5. Solution de dilution de sérum - 1 flacon.
6. Substrat chromogène, monocomposant - solution de tétraméthylbézidine plus (TMB +), prête à l'emploi, ne nécessite pas de dilution - 1 flacon.
7. Solution tampon phosphate-solution saline avec tween - 2 flacons.
8. Stop réactif, prêt à l'emploi - 1 flacon.
9. Film pour sceller la tablette - 1 pc.
10. Pochoir pour la construction d'un graphique d'étalonnage - 1 pc.
11. Bain de réactif - 2 pcs.
12. Embouts de pipette pour 5-200 µl - 16 pcs.
Emballage pour tablette - sac en teck zip-lock.
Stabilité de la solution de travail FST-T pendant au moins 5 jours à une température de +2 ... 8 ° C.
Conservez le kit à une température de +2 ... 8°C. Date d'expiration - 1 an à compter de la date de production.
Enregistré auprès de Roszdravnadzor.
Principaux fabricants russes Dans le segment des kits de réactifs pour le diagnostic des infections : - CJSC Vector-Best, Novosibirsk ; - LLC NPO Diagnostic Systems, N. Novgorod ; - CJSC "Ecolab", Electrogorsk, région de Moscou. Dans le domaine des kits de réactifs pour le diagnostic des maladies non infectieuses et des conditions physiologiques : - LLC "Alkor-Bio", Saint-Pétersbourg ; - CJSC "Vector-Best", Novossibirsk; - LLC "Hema-Medica", Moscou. Dans le segment des réactifs pour le diagnostic en laboratoire des allergies : - LLC "Alkor-Bio", Saint-Pétersbourg ; - CJSC "Vector-Best", Novossibirsk; - SARL NPO Immunotex, Stavropol. Production d'équipements de laboratoire: - LLC "Pikon, Moscou
Évaluation du degré de substitution possible aux importations par la nomenclature des tests Nomenclature des analytes, unités Approuvé pour une utilisation en RF Produit en RF Degré de substitution possible des importations Marqueurs de maladies infectieuses% Marqueurs de maladies non infectieuses et indicateurs de conditions physiologiques% Marqueurs d'allergie% Total :%
Évaluation du degré de substitution des importations par le volume du marché des produits pour comprimés ELISA Segments de marché Volume du marché dans la Fédération de Russie, mln. Volume des ventes des fabricants nationaux, mln frotter. Part de substitution aux importations Marqueurs de maladies infectieuses% Marqueurs de maladies non transmissibles et indicateurs de conditions physiologiques% Marqueurs d'allergie% Équipement 50051% Total :%
Évaluation du degré de substitution des importations par le volume du marché des produits pour les méthodes immunochimiques dans son ensemble Segments de marché Volume du marché dans la Fédération de Russie, en millions. Volume des ventes des fabricants nationaux, mln frotter. Part de substitution aux importations Marqueurs de maladies infectieuses% Marqueurs de maladies non transmissibles et indicateurs de conditions physiologiques% Marqueurs d'allergie% Équipement% Total :%
Problèmes des fabricants nationaux dans l'industrie : La méthode ELISA devient obsolète. Il y a un remplacement progressif des réactifs FI nationaux par des produits chimiluminescents importés ; Le système actuel de passation des marchés publics stimule soit l'achat des biens les moins chers, soit des produits importés aux caractéristiques uniques ; L'une des principales raisons du sous-développement des fabricants nationaux d'équipements automatiques et de la localisation de la production de produits importés est la barrière administrative douanière ; Le principal problème de ces derniers temps est l'effondrement du système d'enregistrement par l'État des nouveaux produits dans le RZN. L'admission de nouveaux produits sur le marché a pratiquement cessé et les fabricants étrangers qui s'étaient précédemment inscrits sur de longues listes continuent d'avoir un avantage sur les fabricants nationaux; La principale raison du retard technologique est l'impossibilité d'obtenir le droit de fabriquer des produits compatibles pour les équipements modernes ; Le faible degré de consolidation des producteurs nationaux et les guerres de prix constants entre eux ne permettent pas de développer des produits avancés et de concurrencer les acteurs de premier plan sur un pied d'égalité, y compris sur les marchés étrangers.
Propositions : Introduire une procédure non concurrentielle de passation des marchés publics de dispositifs médicaux dans le cadre du FCC, suivie d'une publication positionnelle. La détermination de limites de financement basées sur le prix moyen du marché donnera certains avantages aux producteurs nationaux, permettra de limiter la consommation de réactifs importés coûteux et de contrôler plus efficacement l'utilisation des fonds budgétaires ; Promouvoir l'élargissement et la consolidation des fabricants nationaux afin de concentrer les ressources sur le développement de produits modernes et entrer sur le marché international. La procédure de passation des marchés publics non concurrentiels ne laissera rapidement sur le marché que des entreprises réellement compétitives ; Allouer des fonds publics pour stimuler, sur les principes du partenariat public-privé, le développement d'une gamme de tests suffisante pour assurer la sécurité biologique du pays ; Les avantages douaniers devraient concerner les composants et non les produits finis ; Harmoniser le système d'enregistrement avec le système européen, où les dispositifs médicaux à faible niveau de risque potentiel sont enregistrés sur la base d'une déclaration de conformité.
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