A meghatározások száma 96 (48 példányban)
Működő tabletta formátum: 12x8 -as csíkokkal, 1 lyukat törve.
Érzékenység: 1,5 E / ml.
Mérési tartomány: 0-400 U / ml.
A vizsgálati minta térfogata nem haladja meg a 25 μl -t.
A kromogénnel végzett enzimatikus reakció végrehajtásának feltételeinek szabványosítása 37 ° C -on termosztált rázógépben.
A szett tartalma:
1. Csíkos lemez 12 x 8 lyukú, használatra kész - 1 db.
2. Használatra kész kalibrációs minták (0-400 U / ml), különböző koncentrációjú intenzitással, a koncentrációtól függően-6 üveg.
3. Ellenőrző minta - 1 üveg.
4. Egykomponensű konjugátum, használatra kész, nem igényel hígítást - 1 üveg.
5. Szérumhígító oldat - 1 üveg.
6. Kromogén szubsztrát, egykomponensű - tetrametilbezidin plus (TMB +) oldat, használatra kész, nem igényel hígítást - 1 üveg.
7. Pufferoldat foszfát -fiziológiás sóoldat 2 - 2 fiolával.
8. Stop reagens, használatra kész - 1 üveg.
9. Film a tabletta lezárásához - 1 db.
10. Sablon kalibrációs grafikon készítéséhez - 1 db.
11. Reagens fürdő - 2 db.
12. Pipettahegyek 5-200 µl - 16 db.
Tabletta csomagolás - cipzárral zárható teak tasak.
Az FST-T munkaoldat stabilitása legalább 5 napig +2 ... 8 ° C hőmérsékleten.
A készletet +2 ... 8 ° C hőmérsékleten tárolja. Lejárati idő - a gyártástól számított 1 év.
Regisztrálva a Roszdravnadzor -nál.
A helminthiasis kezelése gyermekeknél rendkívül fontos, mivel ennek következményei késleltethetik a belső szervek és rendszerek fizikai és mentális, kóros folyamatainak fejlődését, sőt akár halált is okozhatnak. Ezenkívül a helminthikus fertőzések nagyon fertőzőek, ezért olyan könnyen terjednek az óvodai és iskolai intézményekben. Ennek alapján egyértelmű, hogy mennyire fontos a gyermekek helminthiasisának időben történő kezelése.
A helminták első jelei gyermekeknél
A férgek feltételesen patogén kórokozók az emberi testben, olyan férgek, amelyeknek végső tulajdonosa egy személy. Ezenkívül ebben a kérdésben a tulajdonos kora nem játszik szerepet, különböző típusú helminthiasis megfigyelhető mind gyermekeknél, mind felnőtt betegeknél.
Miért veszélyes a helminthiasis a gyermekre?
Amint korábban említettük, a gyermekek bélférgei súlyos betegségeket és patológiákat okozhatnak, amelyek következtében a mentális és fizikai fejlődés lelassul. Az egyes típusú helminthiasis lehetséges szövődményei teljesen eltérőek lehetnek, például:
Ezért a gyermekek helminthiázai még nagyobb figyelmet, időben történő orvosi segítséget, szakember hosszú távú nyomon követését és megelőzését igénylik.
A gyermekek fő tünetei
A helminthiasis tünetei gyermekekben a férgek típusától függően eltérőek lehetnek:
1. A kerekférgek azonnal allergiás reakcióként, lázként és hányingerként nyilvánulnak meg a gyermekben. Az első megjelenések általában fényesek, de gyorsan elmúlnak. Ezt követően a következő tünetek figyelhetők meg: 
- kólika és dysbiosis és újszülöttek;
- 1 év alatti csecsemőknél, fájdalom a köldökben, székletproblémák, allergia és diatezis;
- az idősebb gyermekek alvási problémákkal, nyugtalan viselkedéssel, rémálmokkal rendelkeznek;
- a 3-7 éves gyermekeket hányinger, láz, köhögés és hasi fájdalom, kiütés jellemzi.
2. Az enterobiasis, amelynek kórokozója a pinworms, törölt klinikai képként nyilvánul meg. És csak 1 hónap múlva a következő tünetek észlelhetők:
- újszülötteknél a végbélnyílás gyulladása, duzzanata és vörössége, étkezés megtagadása, éjszakai sírás, étvágytalanság;
- az egy év alatti gyermekeket ugyanazok a tünetek jellemzik, valamint a végbélnyílás súlyos viszketése éjszaka (23.00-1.00), a lányok a nemi szervek gyulladásától szenvednek;
- idősebb gyermekeknél hasi fájdalom a köldök közelében, alvászavar, viszketés a fenékben.
3. A toxokariázis tüneteit nehéz felismerni, kivéve az alacsony testhőmérsékletet és az allergiás reakciókat (kiütés, csalánkiütés, viszketés és duzzanat). A fertőzés után köhögés léphet fel, ami tovább okoz tüdőgyulladást vagy hörghurutot, különösen a legkisebb betegeknél. 
A trichinosis enyhe jeleket jelez újszülötteknél, ellenkező esetben a következő jelek figyelhetők meg:
- lázas állapot;
- az arc duzzanata;
- izom fájdalom;
- allergiás reakciók;
- az 5 éves és idősebb gyermekeknél megnagyobbodott mandulák, lép, kiütés és torokfájás jelentkezhet.
A legnehezebb a helminthiasis tüneteinek diagnosztizálása 2 éves vagy annál fiatalabb gyermekeknél, mivel a gyermek nem tudja megmagyarázni viselkedését és állapotát. Ezért a gyermek bármilyen atipikus megnyilvánulása és viselkedése esetén jobb, ha megmutatja az orvost.
Mi az első teendő?
A gyermek székletében talált férgek a betegség legfontosabb tünetei, majd azonnal orvoshoz kell fordulni. Egyetlen helminth kezelés sem lehet sikeres a megfelelően elvégzett diagnózis nélkül. A felmérési módszereknek ebben az esetben bonyolultnak kell lenniük, beleértve a következő eljárásokat: 
- kaparás vétele a végbélnyílásról;
- a gyermek ürülékének tanulmányozása;
- vérvizsgálat;
- izombiopszia ritka esetekben trichinosis gyanúja esetén;
- szerológiai vérvizsgálat;
- Röntgen, ultrahang, tomográfia;
- ELISA az antitestek kimutatására a vérben.
Kezelési módszerek
A gyermekek helminthiasisának kezelésének átfogónak, átgondoltnak kell lennie, pontos adagokkal és a gyógyszer beadásának gyakoriságával kell előírni. Ez annak a ténynek köszönhető, hogy a féreghajtó hatás érdekében mérgező összetevőket tartalmazó gyógyszereket használnak, ami azt jelenti, hogy az irracionális alkalmazás mellékhatásokhoz vezethet. Ezenkívül otthon a gyógynövényekkel való alternatív kezelés megfelelő.
Népi jogorvoslatok
A gyermekek népi gyógymódokkal való modern kezelése 4 hatékony módszert foglal magában: 
Bármilyen otthoni kezelési módszert előzetesen meg kell beszélni orvosával. Nem szabad elfelejteni, hogy a gyógynövényeknek és a népi jogorvoslatoknak ellenjavallatai vannak egyéni intolerancia formájában.
Gyógyszeres kezelés
- Enterobiasis és ascariasis esetén általában olyan gyógyszereket használnak, mint a Pirantel és a Mebendazole. A Pirantel szedése megfelelő, 10 mg hatóanyag dózisban a tűsférgektől származó minden kilogrammonként, és 5 mg / kg az ascaris -tól. A mebendazolt naponta kétszer 50 mg-ban kell bevenni a 2-3 éves gyermekek számára három napon keresztül egymás után, kétszer 100 mg-ot három napon át egymás után a 3 évesnél idősebb gyermekeknél, 3 hét elteltével a kezelést meg kell ismételni.
- A toxocariasis esetén a mebendazolt más dózisban írják fel - 2 éves és idősebb gyermekek számára, naponta kétszer, 100 mg 14-10 napig.
- A trichinosis kezelés 5 mg mebendazolt fogad el testsúlykilogrammonként, ezt követően az adagot napi három adagra osztják. A kezelés időtartama 1 hét, szigorú orvos felügyelete mellett.
A helminthiasis megelőzése
- kézmosás közvetlenül az állatokkal való érintkezés után, az utca és a homokozó után, WC -be járás és evés előtt;
- csak tiszta ételeket kell enni;
- a hús- és haltermékek megfelelően végzett hőkezelése;
- forralt víz fogyasztása;
- a személyes higiénia és higiénia betartása;
- háziállatok rendszeres féregtelenítése;
- megelőző féregtelenítés végrehajtása 2 éves és idősebb gyermekeknél.
Vérvizsgálat a toxokárok számára
A toxokariázisos emberi fertőzés jellemzői
A fertőzés hordozói kutyák, ritkábban macskák. A toxocara tojásokat a kóbor kutyák székletével osztják szét. Miután a földre kerültek, vízben vagy az állat szőrén maradva, különböző módon kerülnek be az egészséges testbe.
Reagálás a behatolásra
Az orvosi statisztikákból ismert, hogy a felnőttek kevésbé valószínű, hogy megbetegednek a toxocariasisban, kivéve, ha foglalkozása veszélyben van. A gyermekek sokkal nagyobb valószínűséggel kapnak el fertőzést.
A toxokariázis leggyakoribb tünetei:
- Láz betegség nélkül.
- Hőmérséklet emelkedés.
- Növekvő és csökkenő fájdalom a fejben vagy a hasban.
- A bőrkiütés megjelenése, amelyet nem lehet megszüntetni.
- Az arc puffadtsága.
- Az eozinofilek szintjének emelkedése a vérben, amelyet általános elemzés mutatott ki.
A pontos diagnózis felállításához a toxokárok immunológiai vizsgálatát írják elő. A fehérjevegyületek jelenléte a vérben, amelyek a helminth (antigének) genetikai információit hordozzák, immunitást vált ki az igg osztályú antitestek termelésére. Ez a toxocariasis fertőzés első jele.
Előzetes diagnosztika
A beteg történetének kezdeti szakasza kollektív. Mielőtt elküldené a beteget vérvizsgálatra a toxocariasis miatt, meg kell vizsgálni a betegség történetét és előzetes vizsgálatot kell végezni.
Elsődleges diagnózis:
- A fertőzést provokáló súlyosbító körülmények tanulmányozása - állatokkal végzett munka vagy háziállat jelenléte, ásatás potenciálisan veszélyes területeken, gyerekek játszása olyan helyeken, ahol kutyák sétálnak.
- A beteg fizikai vizsgálata. A bőr vizsgálata toxokárok, szemhéjak és szemgolyók szubkután inváziójára, tapintással.
- Részletes vérvizsgálat kinevezése. A toxocariasis fertőzés során néhány mutató jelentős növekedése jellemző - eozinofilek (70-80%), limfociták, ESR. Míg a hemoglobin szintje jelentősen csökken.
- Májminták vétele. Súlyos invázió esetén a máj terhelése befolyásolja, ami a bilirubin erős ugrásában nyilvánul meg.
A rutin vizsgálatok (vér, koprogram, kenet) segítségével lehetetlen közvetlen megerősítést kapni a Toxocar invázióról. Ezenkívül a nyombél -vizsgálat nem informatív, mivel a lárvák nehezen vándorolnak.
Miután megkapta az előzetes vizsgálat eredményeit, jelezve egy esetleges toxokarákkal való fertőzést, és megkülönböztetve az állítólagos diagnózist a hasonló tünetekkel járó betegségektől, a beteget ELISA -vizsgálatra osztják ki a toxocariasis miatt.
Kapcsolódó immunszorbens vizsgálat
A tanulmány fő célja, hogy megerősítse a toxokárok jelenlétét az emberi szervezetben. Ezeknek a helmintáknak az ellenanyagai megtalálhatók a vérplazmában, ezért vénából veszik.
A toxokárok elemzése némi előkészítést igényel:
- Az eljárás előtti napon ne egyen zsíros vagy nehéz ételeket.
- Ne igyon cukros italokat, szénsavas italokat vagy alkoholos italokat a laboratórium látogatása előtti napon.
- Vegyen mintát éhgyomorra.
- Ne vegyen be gyógyszereket az elemzés tervezett napján és napján.
Meg kell jegyezni, hogy az invázió észlelésének ezt a nagyon informatív módját bizonyos körülmények befolyásolhatják. Hamis pozitív eredmény akkor fordulhat elő, ha a beteg:
- Onkológiai betegségek.
- Tüdő tuberkulózis.
- Súlyos májbetegségek.
- Autoimmun szindróma.
- Antifoszfolipid szindróma.
- Terhesség.
Ebben az esetben nem lesz lehetséges 100% -os megerősítő elemzést készíteni, mivel ilyen körülmények között a védelmi rendszer immunglobulinokat (antitesteket) is termel. Szükséges további diagnosztika elvégzése és a toxocariasis megkülönböztetése a felsorolt tényezőktől.
Az IgG osztályba tartozó immunglobulinok (titer) koncentrációja az invázió kezdetétől számított 2-3 hónap elteltével eléri a maximális értéket. Minél súlyosabb a fertőzés, annál magasabb ez az érték.
ELISA eredmények
A diagnózis felállításához az enzim immunvizsgálatát alaposan tanulmányozzák, a kapott eredményeket összehasonlítják a referenciaértékekkel. A norma az 1: 100 -as antitest -titer, a pozitivitási index kevesebb, mint 0,9.
A címek számértékei
A kapott eredmények lehetnek negatívak, pozitívak, gyengén pozitívak vagy megkérdőjelezhetők. Az AT titerek száma az invázió súlyosságától és előfordulásának korától függ.
Elemzési dekódolás:
- 1: 100 titerig - az eredmény negatív. A beteg szervezetében nem találtak toxocara lárvákat.
- AT titer 1: 400 -ig - az eredmény gyengén pozitív. A beteg gyenge invázióval rendelkezik, vagy a toxocariasis szemészeti formája alakul ki. Bizonyos esetekben a mutató a közelmúlt fertőzéséről beszél.
- 1: 600 titerig - az eredmény pozitív. Egy személy a helminthiasis klinikai formájától szenved, amelynek észlelése esetén azonnali terápia szükséges.
- 1: 800 titerig - az eredmény pozitív. Progresszív jellegű súlyos invázióról és a belső szervek kóros folyamatának kialakulásának valószínűségének magas arányáról beszél.
Ritka kivételektől eltekintve az ELISA vizsgálatok az invázió elhanyagolt formáját tárják fel, különböző eredetű helminthiases keverékkel. Ebben az esetben az összes antitest 1: 800 felett lehet.
Pozitivitási együttható
A toxocariasis enzimhez kötött immunszorbens vizsgálatában 1: 400-1: 600 titerrel, hogy megkülönböztessék az inváziót az oldaltényezőktől, a kapott mutatókat összehasonlítják a referenciaértékkel. E számok közötti különbséget általában indexnek vagy pozitivitási együtthatónak nevezik.
Általában ELISA formájában az egyik mutató a másikkal szemben áll. Az első a norma, a második jelentése:
- 0,9 -ig - az eredmény negatív. Nem találtak toxocara lárvákat.
- 0,9-1,1 - az eredmény kétséges. Ebben az esetben ismételt diagnosztika van hozzárendelve.
- 1.1-2.2 - az eredmény gyengén pozitív. Az ember hordozó, gyenge invázióval.
- 2.2-4.2 - az eredmény pozitív. A mérsékelt toxocariasis hosszú ideje fejlődik ki.
- 4.4 felett - az eredmény a helminthikus invázió vagy a közelmúltbeli helminthiasis csúcsát jelzi.
A KP 4.4-es eredménnyel és az eozinofília 10% -os növekedése kimutathatja a toxocariasis szemészeti formájának kialakulását és a keresztinváziók elleni antitestek jelenlétét, összesen a toxocariasis-t.
Az immunválasz és az antitestek optikai sűrűsége (pozitivitási együttható) a toxokárokkal való fertőzés mértékétől és helyétől függ. A legkisebb titer és CP indikátor csak azt feltételezi, hogy nincs bélféreg, de nem állíthatjuk ezt.
A megadott információk nem szolgálhatnak öndiagnosztika vagy öngyógyítás forrásaként. Az ELISA eredmények előzetes vizsgálattal kombinálva csak egy szakember számára tudnak tájékoztatni a probléma jelenlétéről. Az Invitro laboratóriumában a vérdiagnosztikát nagy pontossággal végzik, az elemzés eredményét a szakemberek megjegyzései kísérik a pozitivitási együtthatóval kapcsolatban. Ez nagyban segít az orvosnak pontosabb diagnózist készíteni.
Vezető orosz gyártók A fertőzések diagnosztizálására szolgáló reagenskészletek szegmensében: - CJSC Vector -Best, Novoszibirszk; - LLC NPO Diagnostic Systems, N. Novgorod; - CJSC "Ecolab", Electrogorsk, Moszkva régió. A nem fertőző betegségek és élettani állapotok diagnosztizálására szolgáló reagenskészletek területén:-LLC "Alkor-Bio", Szentpétervár; - CJSC "Vector-Best", Novoszibirszk; - LLC "Hema-Medica", Moszkva. Az allergia laboratóriumi diagnosztikai reagensek szegmensében: - LLC "Alkor -Bio", Szentpétervár; - CJSC "Vector-Best", Novoszibirszk; - LLC NPO Immunotex, Stavropol. Laboratóriumi berendezések gyártása: - LLC "Pikon, Moszkva
A lehetséges importhelyettesítés mértékének értékelése a vizsgálati nómenklatúra alapján Analitok, egységek nómenklatúrája RF-ben való használatra jóváhagyva RF-ben gyártva Az import lehetséges helyettesítésének foka Fertőző betegségek jelzői% Nem fertőző betegségek markerei és élettani állapotok mutatói% Allergia jelzői% Összesen:%
Az import helyettesítésének értékelése a táblagépek piacának volumenével ELISA Piaci szegmensek Az Orosz Föderáció piaci volumene, millió A hazai gyártók értékesítési volumene, millió rubel. Az importpótlás aránya Fertőző betegségek jelzői% A nem fertőző betegségek markerei és a fiziológiai állapotok mutatói% Az allergia jelzői% Berendezések 50051% Összesen:%
Az importhelyettesítés mértékének értékelése az immunokémiai módszerekhez tartozó termékek piacának volumenével egészében Piaci szegmensek Az Orosz Föderáció piaci volumene, millió A hazai gyártók értékesítési volumene, millió rubel. Az importpótlás aránya Fertőző betegségek jelzői% A nem fertőző betegségek markerei és a fiziológiai állapotok mutatói% Allergia jelzői% Berendezés% Összesen:%
A hazai gyártók problémái az iparban: Az ELISA módszer elavul. Fokozatosan lecserélik a hazai IF-reagenseket importált kemilumineszcensre; A meglévő közbeszerzési rendszer ösztönzi vagy a legolcsóbb áruk vásárlását, vagy egyedi jellemzőkkel rendelkező importtermékek vásárlását; Az automata berendezések hazai gyártóinak alulfejlettségének és az importált termékek gyártásának lokalizációjának egyik fő oka a vámigazgatási akadály; Az utóbbi idők fő problémája az új termékek állami regisztrációs rendszerének összeomlása az RZN -ben. Az új termékek piaci bevezetése gyakorlatilag leállt, és azok a külföldi gyártók, akik korábban hosszú listákkal regisztráltak, továbbra is előnyben vannak a hazai termékekkel szemben; A technológiai lemaradás fő oka az, hogy képtelenek megszerezni a jogot a modern berendezésekhez kompatibilis termékek előállítására; A hazai termelők alacsony szintű konszolidációja és az egymás közötti állandó árháborúk nem teszik lehetővé a fejlett termékek kifejlesztését és a vezető szereplőkkel való egyenlő versenyzést, beleértve a külföldi piacokat is.
Javaslatok: Az FCC keretein belül vezessenek be egy nem versenyképes eljárást az orvostechnikai eszközök közbeszerzésére, majd ezt követően tegyék közzé a pozíciót. A finanszírozási korlátoknak az átlagos piaci áron alapuló meghatározása bizonyos előnyökkel jár a hazai termelők számára, lehetővé teszi a drága importált reagensek fogyasztásának korlátozását és a költségvetési források felhasználásának hatékonyabb ellenőrzését; Támogassa a hazai gyártók bővítését és konszolidációját annak érdekében, hogy az erőforrásokat a modern termékek fejlesztésére összpontosítsa, és belépjen a nemzetközi piacra. A nem versenyképes közbeszerzési eljárás gyorsan csak igazán versenyképes vállalkozásokat hagy a piacon; Állami források elkülönítése az állami és a magánszféra közötti partnerség elvei alapján az ország biológiai biztonságának biztosításához elegendő tesztsorozat kifejlesztésének ösztönzésére; A vámkedvezményeknek az alkatrészekre és nem a késztermékekre kell vonatkozniuk; Harmonizálja a regisztrációs rendszert az európai rendszerrel, ahol a megfelelõségi nyilatkozat alapján alacsony potenciális kockázatú orvostechnikai eszközöket regisztrálnak.
ELŐKÉSZÍTÉSEK
AZ ELISA ELISA VIZSGÁLATI RENDSZER ÉRTÉKELÉSE
"Rotavírus-antigén-ELISA-LEGJOBB"
12Zhirakovskaya E.V., 3Ignatiev G.M., 3Indikova I.N., 12Tikunova N.V.
1 FGUN SSC VB "Vektor" Rospotrebnadzorból, Koltsovo település, Novoszibirszk régió;
2 Kémiai Biológiai és Alapvető Orvostudományi Intézet, Novoszibirszk;
3 Állami Szabványügyi és Orvosi Biológiai Termékek Ellenőrző Intézete V.I. L.A. Tarasevichag Moszkva
Bemutatjuk a JSC "Vector-Best" (Novoszibirszk) cégnél kifejlesztett "Rotavirus-antigen-IFA-BEST" új reagenskészlet érzékenységének, specifitásának és reprodukálhatóságának tesztelésének eredményeit. A kapott adatok lehetővé teszik az eredmények diagnosztikai megbízhatóságának előrejelzését, amikor ezt a tesztrendszert az A csoportba tartozó rotavírus antigénjének klinikai anyagokban történő kimutatására használják.
Kulcsszavak: ELISA tesztrendszer, hatékonyság, rotavírus A
Az A csoportba tartozó rotavírusok (Reoviridae család, Rotavirus nemzetség) világszerte a kisgyermekek súlyos gasztroenteritisének leggyakoribb okai. A legyengült immunrendszerű felnőttek gyakran megbetegednek. A rotavírus -fertőzés (RVI) egy nagyon fertőző betegség, amely többféle módon terjed. A fertőzés forrása egy személy, akinek a betegség nyilvánvaló vagy tünetmentes formája van, valamint egy vírus hordozója. A gyermekek és felnőttek körében az RVI szórványos esetek, helyi csoportbetegségek, kitörések formájában nyilvánulhat meg, és széles körben elterjedt. Ennek a fertőzésnek a széklet-orális átviteli mechanizmusát az élelmiszer (tej és tejtermékek, bébiétel), a víz és a háztartással való érintkezés útján valósítják meg.
A rotavírus -gasztroenteritis klinikai kép alapján történő diagnosztizálása, különösen szórványos megbetegedések esetén, némi nehézséget okoz, mivel az erre a fertőzésre jellemző tünetek alig különböznek a különböző etiológiájú egyéb akut bélfertőzések (AEI) tüneteitől. A rotavírusos gasztroenteritisben szenvedő betegek differenciáldiagnosztikáját élelmiszer -toxin -fertőzéssel és más vírusos AEI -vel (norovírusok, asztrovírusok, adenovírusok, koronavírusok, Coxsackie enterovírusok és ECHO) és bakteriális (szalmonellózis, dizentéria, kolera mikroorganizmusok) etiológiájával végzik. Sajnos az Orosz Föderáció nem minden speciális egészségügyi intézménye végzi a rotavírus fertőzés diagnosztizálását.
Az RVI diagnosztikai módszereinek célja a teljes virionok, vírusantigén vagy vírus-specifikus RNS kimutatása a székletben. A vírusok klinikai anyagokban és környezeti tárgyakban való közvetlen kimutatásának ígéretes megközelítése a reverz transzkripció - polimeráz láncreakció (RT -PCR) - módszere. Az elmúlt években a modern tudományos fejleményekre épülő tesztrendszereket hoztak létre a rotavírusok kimutatására szolgáló különböző módszerek kombinációjával: multiplex PCR, amplifikációs termékek hibridizációs-fluoreszkáló detektálásával "a végponton"; végpont-alapú immuno-PCR (IPCR) valós idejű észleléssel; kvantitatív RT-PCR valós idejű detektálással. A kutatólaboratóriumok elektronmikroszkópiát alkalmaznak a rotavírusok gyors kimutatására. Mindazonáltal a fenti módszerek mindegyike meglehetősen fáradságos, és költséges eszközöket és magasan képzett személyzetet igényel. Ezért, amikor laboratóriumi diagnosztikát végeznek kórházakban és járóbeteg alapon, előnyben részesítik azokat a módszereket, amelyek a vírusos antigén székletben történő kimutatásán alapulnak, enzimhez kötött immunszorbens vizsgálat (ELISA) alkalmazásával, rotavírusok elleni mono- és polikonális antitestekkel. Ez a módszer a gyakorlati laboratóriumokban elérhető, könnyen beállítható és lehetővé teszi az eredmény gyors elérését.
E munka célja a Novosibirszk-i JSC "Vector-Best" által kifejlesztett "Rotavirus-antigen-IFA-BEST" új reagenskészlet diagnosztikai hatékonyságának tanulmányozása.
^ Szeptember-december
Anyagok és metódusok
A vizsgálat anyaga az AEI diagnózissal rendelkező, bélfertőzés klinikai megnyilvánulásait nem mutató kisgyermekek ürülékmintái voltak, akik kórházba kerültek a novoszibirski Gyermekvárosi Klinikai Kórház 3. számú bélfertőzéseinek és légúti fertőzéseinek osztályain. A székletmintákat egyszeri, steril műanyag edényekben 2-3 ml térfogatban gyűjtöttük össze, amikor a betegeket kórházi osztályra vettük, és - 20 ° C -on 15 napig tároltuk. Az anyag hosszabb tárolása -70 ° C -on történt.
A 104 székletmintából álló panelt előzetesen tesztelték OCI kórokozók jelenlétére. Tőlük:
30 minta, amelyekben csak A csoport rotavírusokat mutattak ki ELISA-val és RT-PCR-rel; az RT-PCR-rel végzett genotipizálás azt mutatta, hogy a székletminták a PG1 (18 minta), a PG2 (4 minta), a PG3 (3 minta), a PG4 (2 minta), a PG4 (1 minta), a PG9 (1 minta) genotípusú rotavírusokat tartalmaztak, PG3 (1 minta);
14 minta, amelyekben csak a második genotípusú norovírusokat detektáltuk RT-PCR-rel, amit az 5 "-os nukleotidszekvencia-az 5085-5485 körüli norovírusok genomján elhelyezkedő kapszidgén régió-meghatározásával igazoltak. h.;
15 minta, amelyekben csak asztrovírusokat detektáltak RT-PCR-rel, amit az 5 "nukleotidszekvencia- a kapszid gén régiója, az asztrovírusok genomján, a 4526-4955 n tartományban történő meghatározásával- megerősített; 15 minta amelyben csak adenovírusokat mutattak ki PCR -rel;
30 székletminta (kontroll) a bélfertőzés klinikai megnyilvánulásai nélküli gyermekektől, kórházban a kórház légző osztályán; az előzetes elemzés nem mutatta ki a fenti vírus kórokozókat ezekben a mintákban.
A mintákat rot-, noro-, astro- és adenovírusok jelenlétére vagy hiányára teszteltük RT-PCR segítségével, az "AmpliSens No go virus 1, 2 genotypes-306/322", "AmpliSens Astrovirus -165" kereskedelmi készletek segítségével. Orosz Föderáció, "AmpliSens Adenovirus - 462", "AmpliSens Rotavirus - 290" (az FGUN Központi Epidemiológiai Kutatóintézet, RF). A mintákat a vonatkozó reagenskészletek használati utasításának megfelelően vizsgáltuk meg az eltarthatósági idő alatt. A rotavírus jelenlétére pozitív mintákat RT-PCR-rel genotipizáltuk. A rotavírus -antigén jelenlétének vagy hiányának meghatározását ELISA -val is elvégeztük, az IDEIA ™ Rotavirus (DakoCytomation, Egyesült Királyság) kereskedelmi tesztrendszer alkalmazásával, a készlet utasításainak megfelelően.
A Rota-vírus-antigén-ELISA-BEST reagens készlet tesztelésekor a fenti mintákat (104) mindegyikét titkosították és háromszor tesztelték a tesztkészlettel. A tesztek befejezése után a mintákat dekódolták és az eredményeket elemezték.
Eredmények és vita
A "Rotavirus-antigen-ELISA-BEST" reagens készlet érzékenységét a tesztelt minták pozitív eredményeinek egybeeséseinek számával (%-ban) értékeltük a tesztelt tesztrendszer és a referencia-gyógyszerek alkalmazásával. Ugyanakkor kiderült, hogy a "Rotavirus-antigen-ELISA-BEST" reagens készlet használatakor mind a 30 minta, amelyek megerősített rotavírus-A jelenlétével rendelkeznek, pozitívak voltak (1. táblázat). Következésképpen a tesztkészlet érzékenysége a rotavírus A kimutatására 100%volt. Meg kell jegyezni, hogy a panel hét különböző rotavírus -genotípusú mintát tartalmazott, és mindegyiket sikeresen kimutatták a "Rotavírus - antigén - I FAB - EST" reagenskészlettel.
A vizsgálati rendszer specifikusságát a negatív eredmények (%-os) egybeeséseinek számával értékeltük a mintákban a tesztelt vizsgálati rendszer segítségével a benyújtott előzetes vizsgálatokkal. A specificitás felmérése érdekében a felhasznált panel 30 mintát tartalmazott, amelyekben nem mutattak ki vírus kórokozókat, valamint 14 mintát, amelyekben csak a második genotípusú norovírusokat mutatták ki RT-PCR módszerrel, 15 mintát, amelyekben RT-PCR módszert alkalmaztak csak asztrovírusokat észleltek; 15 minta, amelyekben csak adenovírusokat mutattak ki PCR -rel. Megállapították, hogy a 74 negatív minta közül 69-ben a rotavírus-antigén-ELISA-BEST reagens készlettel történő detektálás során az optikai sűrűség értékei nem haladták meg a rotavírus A jelenlétét, azaz az értékeket A kontroll negatív minták optikai sűrűségének mérése eredményeként kapott. Két minta, amely asztrovírusokat tartalmaz, egy minta - a második genotípusú norovírus, egy minta - adenovírus, és két minta, amelyekben a fenti vírus kórokozók egyike sem volt kimutatható, pozitív optikai sűrűség indexet mutatott. Meg kell jegyezni, hogy azokban a mintákban, amelyekben korábban egyetlen vírus kórokozót sem észleltek, a pozitív szignálokat csak az egyik megismételt vizsgálatban rögzítették (2. táblázat). Így a Rotavirus-Antigen-ELISA-BEST reagens készlet specificitása 93,2%volt.
A vizsgálatok során a "Rotavirus-antigen-ELISA-BEST" reagens tesztkészlet klinikai anyagon történő felhasználásával kapott eredmények reprodukálhatóságát értékelték-minden mintát háromszor vizsgáltak különböző kísérletekben, hogy meghatározzák az eredmények eltérését. Szinte minden esetben hasonló eredmények születtek: a tesztrendszer minden negatív és pozitív mintát azonos módon észlelt. A kivétel két minta volt, amelyekben korábban egyik vírusos kórokozót sem észlelték: mindkét minta egyik példányában az optikai sűrűség értéke meghaladta az ODcrit értéket. Meg kell jegyezni, hogy a többlet jelentéktelen volt (2. táblázat). Így az eredmények reprodukálhatósága 98,8%volt.
Az elvégzett tesztek eredményei azt mutatták, hogy a "Rotavirus-antigen-ELISA-BEST" reagensek vizsgálati készlete diagnosztikai hatékonysága-specifitása, érzékenysége és reprodukálhatósága-összehasonlítható az Orosz Föderációban rendelkezésre álló diagnosztikával.
a tesztelt "Rotavirus-antigen-ELISA-BEST" reagenskészlet felhasználásával az A csoportba tartozó rotavírus antigénjének klinikai anyagban történő kimutatására.
Irodalom
1. Bogomolov B.P. // "Fertőző betegségek: sürgősségi diagnosztika, kezelés, megelőzés". - M., Új diam. - 2007.
2. Vasiliev B.Ya., Vasilieva R.I., Lobzin Yu.V. // „Akut bélbetegségek. Rotavírusok és rotavírus -fertőzés ”. - S.-Pb., Lan. - 2000.
3. Zhirakovskaya EV, Tikunov A.Yu., Bodnev O.A., et al. // "BIOPreparations". - 2008 - 2. szám - p. 15-18.
4. Zhirakovskaya E.V., Maleev V.V., Bodnev A.C. és mások. // ZhMEI - 2008 - 4. sz. - val vel. 12-16.
5. Ignatyuk TE, Golutvin IA, Nasikan NS, et al. // "A virológiai kérdések". - 2003. - 48. v. - 6. szám - p. 1721.
6. Novikova N.A., Fedorova O.F., Epifanova N.V., Chuprova A.B. // "A virológiai kérdések". - 2007 .-- 52. v. 3. szám - p. 19-23.
7. Podkolzin A.T., Mukhina A.A., Shipulin G.A., et al. //
"Fertőző betegségek". - 2004. - v. 2. - 4. szám - p. 85-91.
8. Podkolzin AT, Fenske EB, Abramycheva N.Yu., et al. // "Terápiás archívum". - 2007. - 79. v. - 11. sz. -P. 10-16.
9. Sergevnin VI, Woldschmidt NB, Sarmometov EV, et al. // Epidemiológia és fertőző betegségek. -2004.-№ 6.-p. 17-20.
10. Sergevnin V.I., Woldschmidt N.B., Sarmometov E.V., et al. // Higiénia és higiénia. - 2007. - 1. szám - p. 56-58.
11. Arcangeletti MC, De Conto E, Pinardi F., és mtsai. Acta Biomed. Ateneo. Parmense. - 2005. -V. 76. (3) bekezdése. - P. 165 -170.
12. Gladstone B. P., Iturriza-Gomara M., Ramani S., és al. Epidemiol. Fertőzi. - 2008. V. 136. (3). - P. 399-405.
13. Min B. S., NohY J., Shin J. H., atal. J. Virol. Mód. -2006. - V. 137. (2) bekezdés. - 280–286.
14. Santos N., Honma S., Timenetsky Mdo C. és mtsai. J. Clin. Microbiol. - 2008. V. 46 (2). - P. 462–469.
15 Schets F. M., van Wijnen J. H., Schijven J. F., és mtsai. Appl. Environ. Microbiol. - 2008. - V. 74 (7). - P. 2069 - 2078.
16. Stockman L. J., Staat M. A., Holloway M., és al. J. Clin. Microbiol. - 2008. - V. 46 (5). - P. 1842 - 1843.
A "Rotavirus-antigen-ELISA-BEST" reagens készlet érzékenységének és specificitásának értékelése
Asztal 1
Minták száma Minták száma Összehasonlító gyógyszerekkel történő észlelés eredményei IDEIA Rotavirus Astro-PCR Hopo 2-PCR Adeno-PCR A "Rotavirus-antigen-ELISA-BEST" készlettel végzett kimutatás eredményei
1. 30 30 0 0 0 30
2. 15 0 15 0 0 2
3. 14 0 0 14 0 1
4. 15 0 0 0 15 1
A "Rotavirus-antigen-ELISA-BEST" reagens készlet specifikációjának értékelése-
2. táblázat
PCR AmpliSens
rotavírus rotavírus rotavírus rotavírus
0,443 1,306 0,676 0,418
Rotavírus-antigén-IFA-BEST CJSC "Vector-Best"
OPKrit OPKrit OPKrit
0,250 0,263 0,251
> 4,000 > 4,000 > 4,000 3,926 > 4,000 3,939
> 4,000 > 4,000 > 4,000
> 4,000 > 4,000 > 4,000
£ szeptember
2009. december
AmpliSens
rotavírus rotavírus rotavírus rotavírus rotavírus rotavírus rotavírus rotavírus rotavírus rotavírus rotavírus rotavírus rotavírus rotavírus rotavírus rotavírus rotavírus rotavírus rotavírus rotavírus rotavírus rotavírus rotavírus rotavírus rotavírus rotavírus rotavírus rotavírus rotavírus rotavírus rotavírus rotavírus asztrovirus asztrovirus astrovirus
IDEIA Rotavirus DakoCytomation OPKrit = 0,150
0,401 0,322 1,659 0,566 0,518 1,278 1,285 0,809 1,160 0,407 0,218 0,703 1,889 1,069 1,302 0,879 1,842 0,747 0,793 1,013 1,124 0,670 0,726 0,683 0,814 0,997 0,206 0,052 0,050 0,034 0,040 0,048 0,040
Rotavírus
OPKrit 0.250
> 4,000 3,933 3,987 3,918 3,853 3,972
> 4,000 3,864 3,879 3,897 3,800
> 4,000 3,981
> 4,000 3,713
> 4,000 4.000
> 4,000 3,989
> 4,000 3,872 0,088 0,103 0,230 0,240 0,268 1,819 0,062
antigén-ELISA-LEGJOBB "Vektor-legjobb"
OPKrit OPKrit 0,263 0,251
> 4,000 > 4,000
> 4,000 > 4,000
> 4,000 > 4,000 3,821 3,899
> 4,000 3,964 3,845 3,923 3,962 3,871
> 4,000 3,929
> 4,000 3,881 3,884 > 4,000
> 4,000 > 4,000 3,800 3,851 3,818 >4,000
> 4,000 > 4,000
> 4,000 3,995
> 4,000 > 4,000
> 4,000 > 4,000
> 4,000 > 4,000 3,837 3,839
> 4,000 > 4,000
> 4,000 > 4,000
> 4,000 3,986
> 4,000 > 4,000
> 4,000 3,998
> 4,000 > 4,000
> 4,000 3,823 0,063 0,073 0,054 0,061 0,255 0,250 0,256 0,244 0,278 0,560 1,117 1,235 0,052 0,052
asztrovirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus astrovirus adenovírus adenovírus adenovírus adenovírus adenovírus adenovírus adenovírus adenovírus adenovírus adenovírus adenovírus adenovírus adenovírus adenovírus adenovírus adenovírus adenovírus adenovírus adenovírus
IDEIA Rotavirus DakoCytomation OIIKpHT = 0,150
0,043 0,043 0,041 0,052 0,040 0,046 0,041 0,040 0,037 0,039 0,030 0,045 0,032 0,030 0,037 0,042 0,034 0,039 0,043 0,043 0,045 0,039 0,050 0,034 0,050 0,043 0,050 0,042 0,041 0,042 0,038 0,047 0,039
PoTaBHpyc-aHTHreH-HOA-EECT 3AO "BeKTop-EecT"
OnKpHT OnKpHT OIIKpHT
0,250 0,263 0,251
0,115 0,075 0,082
0,053 0,046 0,058
0,233 0,198 0,189
0,144 0,105 0,128
0,243 0,062 0,073
0,043 0,040 0,046
0,069 0,043 0,041
0,143 0,044 0,058
0,220 0,206 0,230
3,475 2,577 2,405
0,223 0,247 0,240
0,232 0,236 0,231
0,048 0,042 0,041
0,121 0,085 0,093
0,132 0,111 0,174
0,122 0,052 0,063
0,061 0,044 0,054
0,073 0,035 0,048
0,089 0,046 0,046
0,047 0,043 0,044
0,041 0,039 0,044
0,083 0,046 0,038
0,168 0,074 0,097
0,247 0,118 0,099
0,248 0,251 0,242
0,243 0,259 0,250
0,054 0,048 0,055
0,048 0,040 0,037
0,058 0,045 0,046
0,053 0,045 0,049
0,069 0,058 0,065
0,912 0,344 0,379
0,089 0,037 0,042
2009. december
PCR AmpliSens
adenovírus adenovírus adenovírus adenovírus negatív elhanyagolható negatív
IDEIA Rotavirus DakoCytomation OPKrit = 0,150
0,040 0,044 0,039 0,041 0,260 0,044 0,046 0,042 0,047 0,041 0,039 0,048 0,055 0,035 0,039 0,040 0,041 0,033 0,046 0,049 0,048 0,038 0,039 0,029 0,037 0,036 0,043 0,043 0,039 0,042 0,034 0,037 0,041 0,036
Rotavírus - antigén - IFA -BEST CJSC "Vector -Best"
OPKrit OPKrit OPKrit
0,250 0,263 0,251
0,105 0,042 0,043
0,046 0,143 0,133
0,227 0,045 0,042
0,065 0,068 0,054
0,125 0,039 0,042
0,196 0,191 0,182
0,209 0,170 0,154
0,316 0,071 0,073
0,058 0,043 0,049
0,171 0,056 0,061
0,049 0,060 0,064
0,047 0,062 0,065
0,058 0,047 0,066
0,073 0,072 0,066
0,188 0,120 0,109
0,180 0,074 0,072
0,057 0,063 0,058
0,047 0,060 0,047
0,162 0,146 0,143
0,248 0,248 0,260
0,063 0,066 0,104
0,247 0,223 0,251
0,054 0,053 0,070
0,242 0,240 0,248
0,073 0,061 0,103
0,066 0,065 0,064
0,108 0,123 0,192
0,072 0,067 0,071
0,079 0,079 0,087
0,104 0,079 0,164
0,169 0,150 0,162
0,140 0,166 0,146
0,114 0,133 0,131
Betöltés ...