pengantar

1. Total karakteristik dan klasifikasi sitokin.

1.1. Tindakan ukur.

1.2 Suksesi sitokin.

1.3Rol sitokin dalam regulasi fungsi fisiologis tubuh.

2. Kemungkinan studi sitokin.

2.1 Memperlakukan sitokin dalam patogenesis penyakit inflamasi usus besar pada anak-anak.

2.2.Rolo nitrogen oksida dan sitokin dalam pengembangan sindrom kerusakan paru akut.

3. Metode untuk menentukan sitokin

3.1. Rincian aktivitas biologis sitokin

3.2. Sitokin terkait menggunakan antibodi

3.3. Penentuan sitokin dengan metode enzim immunoassay.

3.3.1 Faktor Nekrosis Tumor-Alpha.

3.3.2Gamma-interferon.

3.3.3 Interlakin-4.

3.3.4 Embrellakin-8.

3.3.5 Rustis Antagonis Interleukin-1.

3.3.6 Interferon Falph.

3.3.7tan dan info alfa.

4. Obatimmunotropik berdasarkan sitokin.

Daftar literatur yang digunakan.

Kesimpulan.

pengantar

Dari saat deskripsi sitokin pertama sedikit berlalu. Namun, penelitian mereka mengarah pada alokasi bagian ekstensif pengetahuan - sitokinologi, yang merupakan bagian integral dari berbagai bidang pengetahuan dan, pertama-tama, imunologi, yang telah memberikan dorongan paling kuat untuk studi mediator ini. Kekosokan meresapi semua disiplin klinis, mulai dari etiologi dan patogenesis penyakit dan diakhiri dengan pencegahan dan pengobatan berbagai kondisi patologis. Akibatnya, peneliti dan dokter ilmiah perlu difokuskan pada keragaman molekul peraturan dan memiliki gagasan yang jelas tentang peran masing-masing sitokin dalam proses penelitian. Semua sel sistem kekebalan tubuh memiliki fungsi tertentu dan beroperasi dalam interaksi yang jelas konsisten, yang disediakan oleh zat aktif biologis khusus - sitokin - regulator reaksi imun. Sitokin disebut protein spesifik, dengan mana berbagai sel sistem kekebalan tubuh dapat saling bertukar dan mengoordinasikan tindakan. Set dan jumlah sitokin yang bertindak pada reseptor permukaan sel adalah "medium sitokin" - mewakili matriks berinteraksi dan sering berubah sinyal. Sinyal-sinyal ini kompleks karena beragam reseptor sitokin dan karena fakta bahwa masing-masing sitokin dapat mengaktifkan atau menekan beberapa proses, termasuk sintesisnya sendiri dan sintesis sitokin lainnya, serta pembentukan dan penampilan sel-sel reseptor sitokin . Tujuan dari pekerjaan kami adalah untuk mempelajari cytakin, fungsi dan propertinya, serta kemungkinan penggunaannya dalam kedokteran. Sitokin adalah protein kecil (mol. Massa dari 8 hingga 80 KDA), bertindak Autokrin (I.E., pada sel yang memproduksi mereka) atau Paraconno (pada sel yang terletak di dekat). Formasi dan pelepasan molekul yang sangat aktif ini terjadi secara singkat dan dapat disesuaikan dengan kaku.

Tinjauan Literatur.

Karakteristik umum dan klasifikasi sitokin.

Sitokin adalah sekelompok mediator polipeptida interaksi antar sel yang terlibat terutama dalam pembentukan dan regulasi reaksi perlindungan organisme dalam pengenalan patogen dan pelanggaran integritas jaringan, serta dalam peraturan sejumlah fungsi fisiologis normal. Sitokin dapat dialokasikan ke sistem regulasi independen baru yang ada bersama dengan sistem saraf dan endokrin untuk mempertahankan homeostasis, dan ketiga sistem saling terkait erat dan saling tergantung. Selama dua dekade terakhir, gen sebagian besar sitokin adalah analog kloning dan rekombinan diperoleh, sepenuhnya mengulangi sifat biologis molekul alami. Sekarang sudah ada lebih dari 200 zat individu yang dimiliki oleh keluarga sitokin. Sejarah studi sitokin dimulai pada usia 40-an abad kedua puluh. Saat itulah efek pertama dari cachektin - faktor yang ada dalam serum darah dan yang mampu di-cache atau penurunan berat badan dijelaskan. Di masa depan, mediator ini berhasil mengalokasikan dan menunjukkan identitasnya dengan faktor nekrosis tumor (FNO). Pada saat itu, studi tentang sitokin diadakan pada prinsip mendeteksi efek biologis tunggal yang berfungsi sebagai titik awal untuk nama mediator yang sesuai. Jadi pada tahun 50-an, interferon (IFN) dinamai karena kemampuan untuk melintasi atau meningkatkan resistensi pada infeksi virus berulang. Interleukin-1 (IL-1) juga pertama kali disebut pyrogen endogen dalam lipopolysaccharides bakteri penyeimbang, dianggap pirogen eksogen. Tahap selanjutnya dari mempelajari sitokin, berkaitan dengan 60-70 tahun, dikaitkan dengan pemurnian molekul alami dan karakteristik komprehensif tindakan biologis mereka. Pada saat ini, pembukaan faktor pertumbuhan sel-T dikenal sekarang sebagai IL-2, dan sejumlah molekul lain yang merangsang pertumbuhan dan aktivitas fungsional T-, B-limfosit dan jenis leukosit lainnya. Pada tahun 1979, istilah "interleukin" diusulkan untuk penunjukan dan sistematisasi mereka, yaitu, mediator berkomunikasi antara leukosit. Namun, lebih cepat ternyata bahwa efek biologis sitokin menyebar jauh melampaui sistem kekebalan tubuh, dan oleh karena itu istilah yang diusulkan sebelumnya "sitokin" lebih dapat diterima, dilestarikan hingga hari ini. Pergantian revolusioner dalam studi sitokin terjadi pada awal 1980-an setelah mengkloning gen mouse interferon dan manusia dan produksi molekul rekombinan yang sepenuhnya mengulangi sifat biologis sitokin alami. Setelah ini, ada kemungkinan untuk mengkloning gen dan mediator lain dari keluarga ini. Tonggak penting dalam sejarah sitokin adalah penggunaan klinis interferon rekombinan dan terutama Rekombinan IL-2 untuk pengobatan kanker. 90-an ditandai oleh penemuan struktur subunit reseptor sitokin dan pembentukan konsep "sitokine jaringan", dan awal abad XXI - penemuan banyak sitokin baru dengan analisis genetik. Sitokin menyertakan interferon, faktor kolonulasi (CSF), kemokin mengubah faktor pertumbuhan; faktor nekrosis tumor; Interleukin dengan angka ordinal secara historis yang ada dan beberapa mediator endogen lainnya. Interleukin, memiliki nomor urut, dimulai dengan 1, bukan milik satu subkelompok sitokin yang terkait dengan generalitas fungsi. Mereka, pada gilirannya, dapat dibagi menjadi sitokin pro-inflamasi, pertumbuhan dan diferensiasi faktor limfosit, pisahkan sitokin regulasi. Nama "interleukin" ditugaskan ke mediator yang baru terbuka jika kriteria berikut yang dikembangkan oleh Komite Nomenklatur Uni Internasional Masyarakat Imunologis: Kloning molekuler dan ekspresi faktor yang dihasilkan, adanya nukleotida yang unik dan yang terkait dengan Urutan asam amino, memperoleh antibodi monoklonal menetralkan. Selain itu, molekul baru harus diproduksi oleh sel-sel sistem kekebalan tubuh (limfosit, monosit atau jenis leukosit lainnya), untuk memiliki fungsi biologis yang penting dalam mengatur respon imun, serta fungsi tambahan, karena yang tidak bisa diberi nama fungsional. Akhirnya, properti yang tercantum dari interleukin baru harus dipublikasikan dalam publikasi ilmiah yang ditinjau peer. Klasifikasi sitokin dapat dilakukan sesuai dengan sifat biokimia dan biologis mereka, serta oleh jenis reseptor, di mana sitokin melatih fungsi biologis mereka. Klasifikasi sitokin dalam struktur (Tabel 1) memperhitungkan tidak hanya urutan asam amino, tetapi pertama-tama struktur tersier protein, dengan lebih tepatnya mencerminkan asal molekul evolusi.

Tabel 1. Klasifikasi sitokin dalam struktur.

Kloning gen dan analisis konstruktor reseptor sitokin telah menunjukkan bahwa serta sitokin sendiri, molekul-molekul ini dapat dibagi menjadi beberapa jenis sesuai dengan kesamaan urutan asam amino dan kekhasan organisasi domain ekstraseluler ( Meja 2). Salah satu keluarga reseptor sitokin terbesar disebut keluarga reseptor hematopoethine atau tipe I mengetikkan reseptor sitokin. Fitur dari struktur kelompok reseptor ini adalah keberadaan TRP-SER-X-TRP-SER (WSXWS), yang terletak pada jarak pendek dari membran sel dalam molekul cistein. II Kelas reseptor sitokin berinteraksi dengan interferon dan dengan IL-10. Kedua jenis reseptor pertama memiliki homologi satu sama lain. Kelompok reseptor berikut memberikan interaksi dengan sitokin dari keluarga faktor nekrosis tumor dan keluarga IL-1. Saat ini, lebih dari 20 reseptor kemokin yang berbeda berinteraksi dengan berbagai tingkat afinitas dengan satu atau lebih ligan keluarga kemokin diketahui. Reseptor Chemokine milik superfamili reseptor rhodopsin, memiliki 7 domain transmembran dan melakukan sinyal dengan partisipasi G-protein.

Tabel 2. Klasifikasi reseptor sitokin.

Banyak reseptor sitokin terdiri dari 2-3 subunit dikodekan oleh gen yang berbeda dan dinyatakan secara independen. Pada saat yang sama, interaksi simultan dari semua subunit diperlukan untuk membentuk reseptor yang dimurnikan tinggi. Contoh dari organisasi reseptor sitokin seperti itu adalah struktur kompleks reseptor IL-2. Yang mengejutkan adalah penemuan fakta bahwa masing-masing subunit dari kompleks reseptor IL-2 adalah umum untuk IL-2 dan beberapa sitokin lainnya. Dengan demikian, rantai β secara bersamaan komponen reseptor untuk IL-15, dan rantai γ berfungsi sebagai subunit umum dari reseptor untuk IL-2, IL-4, IL-7, IL-15 dan IL-21. Ini berarti bahwa semua sitokin yang disebutkan yang reseptornya juga terdiri dari 2-3 polipeptida individu, gunakan rantai γ sebagai komponen reseptor mereka, dan, komponen yang bertanggung jawab untuk melakukan sinyal. Dalam semua kasus, spesifisitas interaksi untuk setiap sitokin disediakan oleh subunit lain yang berbeda dalam struktur. Di antara reseptor sitokin ada 2 subunit reseptor yang lebih umum dilakukan setelah interaksi dengan sitokin yang berbeda. Ini adalah total reseptor subunit βC (GP140) untuk reseptor IL-3, IL-5 dan GM-CSF, serta subunit reseptor GP130, secara keseluruhan untuk anggota keluarga IL-6. Kehadiran subunit pensinyalan umum dalam reseptor sitokin adalah salah satu pendekatan klasifikasi mereka, karena memungkinkan Anda menemukan komunitas baik dalam struktur ligan dan dalam efek biologis.

Tabel 3 menunjukkan klasifikasi struktural dan fungsional gabungan, di mana semua sitokin dipisahkan menjadi kelompok-kelompok, terutama dengan mempertimbangkan aktivitas biologis mereka, serta fitur-fitur di atas dari struktur molekul sitokin dan reseptornya.

Tabel 3. Klasifikasi struktural dan fungsional sitokin.

	Sitokin keluarga	Subkelompok dan ligan	Fungsi biologis dasar
	Interferon I Type.	IFN A, B, D, K, W, T, IL-28, IL-29 (IFN L)	Aktivitas antivirus, antiproliferatif, efek imunomodulator
	Faktor Pertumbuhan Sel Hematopoietik	Faktor sel induk (kit-ligan, faktor baja), ligan flt-3, Mr. KSF, M-KSF, IL-7, IL-11 LIGANDS GP140: IL-3, IL-5, GM-KSF	Stimulasi proliferasi dan diferensiasi dari berbagai jenis sel pendahulu di sumsum tulang, aktivasi pembentukan darah Eritropoietin, trombopoietin.
	Interleukina-1 super perempuan dan frf	FRF keluarga: FRF asam, FRF utama, FRF3 - FRF23 Keluarga IL-1 (F1-11): IL-1α, IL-1β, IL-1 Antagonis Reseptor, IL-18, IL-33, dll.	Aktivasi proliferasi fibroblast dan sel epitel Tindakan tidak langsung, aktivasi imunitas tertentu
	Keluarga Faktor Nekrosis Tumor	Fnf, limfotoksin α dan β, fas-ligand, dll.	Tindakan pro-inflamasi, regulasi apoptosis dan interaksi antarel sel imunokompeten
	Keluarga Interleukina-6	LIGANDS GP130: IL-6, IL-11, IL-31, OnCostatin-M, kardiotropin-1, faktor penghambatan leukemia, faktor neurotropik ciliary	Tindakan yang tepat dan imunoregulasi
	Chemokina.	SS, CXC (IL-8), SHS3S, dengan	Peraturan Chemotaxis dari berbagai jenis leukosit
	Keluarga Interleukina-10	IL-10,19,20,22,24,26.	Tindakan imunosupresif
	Interleukina-12.		Peraturan Diferensiasi Pembantu T-Limfosit
	Sitokin dari klon t-helper dan mengatur fungsi limfosit	T-helpers tipe 1: IL-2, IL-15, IL-21, IFNG T-Helders 2 Jenis: IL-4, IL-5, IL-10, IL-13 Reseptor Ligands γ-rantai IL-2: IL-7 TSLP	Aktivasi imunitas seluler Aktivasi imunitas humoral, efek imunomodulasi Stimulasi diferensiasi, proliferasi dan sifat fungsional dari berbagai jenis limfosit, DK, sel NK, makrofag, dll.
	Interleukin Keluarga 17.	IL-17A, B, C, D, E, F	Aktivasi sintesis sitokin pro-inflamasi
	Faktor pertumbuhan superfamily saraf, faktor pertumbuhan trombosit dan mengubah faktor pertumbuhan	Factor Famili Pertumbuhan Saraf: FRN, Faktor Neurotrofik Otak Faktor Pertumbuhan Troomets (PDGF), Faktor Pertumbuhan Angiogenik (VEGF) TRF keluarga: TRFB, kegiatan, menghambat, nodal, protein morfogenik tulang, zat penghambatan mullerian	Peraturan peradangan, angiogenesis, fungsi neuron, pengembangan embrionik dan regenerasi jaringan
	Keluarga faktor pertumbuhan epidermal	ERF, TRFα, dll.
	Keluarga faktor pertumbuhan seperti insulin	IRF-I, IRF-II	Stimulasi proliferasi berbagai jenis sel

Grup pertama termasuk interferon tipe I dan merupakan yang paling sederhana pada organisasi, karena semua molekul termasuk dalamnya memiliki struktur yang sama dan sebagian besar fungsi yang sama terkait dengan perlindungan antivirus. Grup kedua termasuk faktor pertumbuhan dan diferensiasi sel hematopoietik, yang merangsang pengembangan sel-sel pendahulu pembentuk darah, mulai dari sel induk. Grup ini mencakup sitokin, spesifik sempit untuk diferensiasi individu sel hematopoietik (eritropoietin, trombopoiettine, serta IL-7, bertindak pada prekursor T-in-limfosit), serta sitokin dengan kisaran yang lebih luas dari aktivitas biologis, seperti IL-3, IL-11, faktor penggilingan usus besar. Komposisi kelompok sitokin ini menyoroti Ligan GP140 yang memiliki subunit reseptor umum, serta trombopoietin dan eritropoietin karena kesamaan organisasi struktural molekul. Sitokin dari FRF dan IL-1 superfamily memiliki tingkat homologi yang tinggi dan struktur protein yang serupa, yang mengkonfirmasi sifat umum asal. Namun demikian, menurut manifestasi aktivitas biologis, FRF sebagian besar berbeda dari agonis keluarga IL-1. Keluarga molekul IL-1 saat ini, selain judul fungsional, memiliki sebutan F1-F11, di mana F1 sesuai dengan antagonis reseptor IL-1α, F2 - IL-1β, F3 - IL-1, F4 - IL-18 . Anggota keluarga yang tersisa terbuka sebagai hasil dari analisis genetik dan memiliki homologi yang cukup tinggi dengan molekul IL-1, namun, fungsi biologis mereka tidak sepenuhnya diklarifikasi. Kelompok sitokin berikut termasuk keluarga IL-6 (ligan dari Subunit Receptor General GP130), faktor nekrosis tumor dan kemokin diwakili oleh jumlah ligan individu terbesar dan terdaftar sepenuhnya di masing-masing bab. Keluarga faktor nekrosis tumor terbentuk terutama berdasarkan kesamaan dalam struktur ligan dan reseptor mereka yang terdiri dari tiga subunit identik yang tidak terkait secara sementara yang membentuk molekul aktif secara biologis. Pada saat yang sama, sitokin dengan kegiatan yang cukup berbeda dimasukkan dalam sifat biologis keluarga ini. Sebagai contoh, TNF adalah salah satu sitokin pro-inflamasi yang paling dinamis, ligan FAS menyebabkan apoptosis sel-sel target, dan ligan CD40 memberikan sinyal yang merangsang dengan interaksi antar sel-dan b-limfosit. Perbedaan seperti itu dalam aktivitas biologis molekul yang serupa secara struktural terutama ditentukan terutama oleh fitur-fitur ekspresi dan struktur reseptor mereka, seperti ada atau tidak adanya domain intraseluler "kematian", yang menentukan apoptosis sel. Keluarga IL-10 dan IL-12 dalam beberapa tahun terakhir juga telah diisi ulang dengan anggota baru yang menerima nomor urut interleukin. Selanjutnya, kelompok sitokin yang sangat kompleks diikuti, yaitu mediator aktivitas fungsional pembantu T-limfosit. Inklusi dalam kelompok ini didasarkan pada dua prinsip dasar: 1) milik sitokin disintesis oleh TX1 atau TX2, yang menentukan perkembangan tipe reaksi imunologis yang didominasi humoral atau seluler, 2) keberadaan subunit reseptor umum - rantai gamma kompleks reseptor IL-2. Di antara ligan rantai gamma, IL-4 juga terisolasi, yang juga memiliki subunit reseptor umum dengan IL-13, yang sebagian besar menentukan aktivitas biologis yang tumpang tindih parsial dari sitokin ini. Demikian pula, IL-7 telah diisolasi, yang memiliki komunitas struktur reseptor dengan TSLP. Keuntungan dari klasifikasi yang diberikan dikaitkan dengan secara bersamaan dengan mempertimbangkan sifat biologis dan biokimia dari sitokin. Kelayakan pendekatan semacam itu saat ini dikonfirmasi oleh penemuan sitokin baru dengan analisis genetik genom dan mencari gen serupa struktural. Berkat metode ini, tipe I, IL-1, IL-10, IL-12 Interferon, IL-12, telah diperluas secara signifikan, keluarga baru sitokin analog IL-17 telah muncul, yang telah terdiri dari 6 anggota. Rupanya, dalam waktu dekat, munculnya sitokin baru akan terjadi secara signifikan lebih lambat, karena analisis genom manusia hampir selesai. Perubahan kemungkinan besar mungkin karena klarifikasi opsi untuk interaksi reseptor ligan dan sifat biologis yang akan memungkinkan klasifikasi sitokin untuk mengutuk bentuk akhir.

Mekanisme aksi.

B. Reseptor sitokin. Sitokin adalah zat pensinyalan hidrofilik yang tindakannya dimediasi oleh reseptor spesifik pada sisi luar membran plasma. Pengikatan sitokin dengan reseptor (1) mengarah melalui sejumlah tahapan perantara (2-5) untuk mengaktifkan transkripsi gen tertentu (6). Reseptor sitokin tidak memiliki aktivitas tyrosine kinase (untuk beberapa pengecualian). Setelah mengikat dengan sitokin (1), molekul reseptor dikaitkan dengan membentuk homodimer. Selain itu, mereka dapat membentuk heterodimer karena asosiasi dengan protein sinyal-carrier [BPS (STP)] atau merangsang dimerialisasi BPS sendiri (2). Kelas I cytokine reseptor dapat dikumpulkan dengan tiga jenis BPS: protein gp130, βc atau γc. Protein bantu ini sendiri tidak dapat mengikat sitokin, tetapi mereka mengirimkan sinyal ke tyrosine kinase (3), spektrum yang sama dari aktivitas biologis banyak sitokin yang dijelaskan oleh berbagai kompleks reseptor sitokin yang sama dapat mengaktifkan BPS yang sama.

Sebagai contoh transmisi sinyal dari sitokin dalam diagram, ditampilkan sebagai reseptor IL-6 (IL-6) setelah mengikat ke ligan (1) merangsang dimerialisasi GP130 (2). Dimer dari protein membran GP130 mengikat dan mengaktifkan kinase sitoplasma dari keluarga Yak (Janus Kinases, memiliki dua pusat aktif) (3). Janus kinase reseptor sitokin fosforil, bps dan berbagai protein sitoplasma yang melatih transmisi sinyal lebih lanjut; Mereka juga memfosfer faktor transkripsi - pembawa sinyal dan aktivator transkripsi [PSAT (stat, dari transkripsi sinyal bahasa Inggris dan aktivator transription)]. Protein-protein ini milik keluarga BPS dalam struktur domain SH3, mengenali sisa fosfothyrosine (lihat hal. 372). Oleh karena itu, mereka memiliki properti untuk bergaul dengan reseptor sitokin terfosforilasi. Jika fosforilasi molekul PSAT (4) terjadi, faktor memasuki bentuk aktif dan bentuk dimer (5). Setelah translokasi di kernel, dimer sebagai faktor transkripsi dikaitkan dengan promotor (lihat C. Domain memasuki darah, di mana bersaing untuk mengikat sitokin, yang mengurangi konsentrasi sitokin dalam darah. Kombinasi sitokin membentuk grid regulator (kaskade sitokin) dengan tindakan multifungsi. Interlacing antara sitokin mengarah pada fakta bahwa dalam aksi banyak dari mereka, sinergisme diamati, dan beberapa sitokin adalah antagonis. Seringkali dalam tubuh Anda dapat mengamati seluruh kaskade sitokin dengan umpan balik yang kompleks.

Sifat sitokin.

Sifat umum sitokin, berkat mediator-mediator ini dapat digabungkan menjadi sistem regulasi independen.

1. Sitokin adalah polipeptida atau protein, sering glikosilasi, kebanyakan dari mereka memiliki MM dari 5 hingga 50 KDA. Molekul sitokin aktif secara biologis dapat terdiri dari satu, dua, tiga atau lebih subunit yang identik atau berbeda.

2. Sitokin tidak memiliki spesifisitas antigenik tindakan biologis. Mereka mempengaruhi aktivitas fungsional sel yang terlibat dalam reaksi imunitas bawaan dan diperoleh. Namun demikian, mempengaruhi limfosit T-dan B, sitokin dapat merangsang proses yang disebabkan oleh antigen dalam sistem kekebalan tubuh.

3. Untuk gen sitokin ada tiga opsi untuk ekspresi: a) Ekspresi spesifik stadion pada tahap tertentu dari perkembangan embrionik, b) ekspresi konstitutif untuk mengatur sejumlah fungsi fisiologis normal, c) jenis karakteristik ekspresi paling diinduksi dari sebagian besar sitokin . Memang, sebagian besar sitokin di luar respon inflamasi dan respon imun tidak disintesis dengan sel. Ekspresi gen sitokin dimulai sebagai respons terhadap penetrasi ke dalam tubuh patogen, iritasi antigenik atau kerusakan jaringan. Beberapa penginduksi paling kuat dari sintesis sitokin pro-inflamasi adalah struktur molekul terkait patogen. Untuk memulai sintesis sitokin sel-T, aktivasi sel diperlukan oleh antigen tertentu dengan partisipasi reseptor antigenik sel T.

4. Sitokin disintesis sebagai respons terhadap stimulasi waktu yang singkat. Sintesis berhenti karena berbagai mekanisme autoregument, termasuk peningkatan ketidakstabilan RNA, dan karena adanya umpan balik negatif yang dimediasi oleh prostaglandin, hormon kortikosteroid dan faktor-faktor lainnya.

5. Sitokin yang sama dapat diproduksi secara berbeda oleh jenis sel organisme histogenetik di berbagai organ.

6. Sitokin dapat dikaitkan dengan membran mensintesis sel-sel mereka, memiliki dalam bentuk formulir membran dengan spektrum total aktivitas biologis dan menunjukkan efek biologisnya selama kontak antar sel.

7. Efek biologis sitokin dimediasi melalui kompleks reseptor sel tertentu yang mengikat sitokin dengan afinitas yang sangat tinggi, dan sitokin terpisah dapat menggunakan subunit umum reseptor. Reseptor sitokin dapat ada dalam bentuk yang larut, menjaga kemampuan mengikat ligan.

8. Sitokin memiliki playotrofisme biologis. Sitokin yang sama dapat bertindak pada banyak jenis sel, menyebabkan berbagai efek tergantung pada jenis sel target (Gbr. 1). Playotropy dari tindakan sitokin dipastikan oleh ekspresi reseptor sitokin pada berbagai jenis dan fungsi jenis sel dan sinyal menggunakan beberapa messenger intraseluler dan faktor transkripsi yang berbeda.

9. Untuk sitokin, interchangeability dari tindakan biologis adalah karakteristik. Beberapa sitokin yang berbeda dapat menyebabkan efek biologis yang sama atau memiliki aktivitas serupa. Sitokin menginduksi baik menekan sintesis diri mereka sendiri, sitokin lain dan reseptornya.

10. Menanggapi sinyal aktivasi, sintesis sel secara simultan beberapa sitokin yang terlibat dalam pembentukan jaringan sitokin terjadi. Efek biologis pada jaringan dan pada tingkat tubuh bergantung pada keberadaan dan konsentrasi sitokin lain dengan efek sinergis, aditif, atau sebaliknya.

11. Sitokin dapat mempengaruhi proliferasi, diferensiasi dan aktivitas fungsional sel-sel target.

12. Sitokin bertindak pada sel dengan berbagai cara: Autokrin - pada sel, mensintesis dan mengeluarkan sitokin ini; Paraconno - pada sel yang terletak di dekat sel-sel produsen, misalnya, dalam fokus peradangan atau di organ limfoid; Endokrin - jauh pada sel-sel organ dan jaringan apa pun setelah memasuki sirkulasi. Dalam kasus terakhir, aksi sitokin menyerupai aksi hormon (Gbr. 2).

Ara. 1. Sitokin yang sama dapat diproduksi berbeda dalam jenis sel organisme histogenetik di berbagai organ dan bertindak pada banyak jenis sel, menyebabkan berbagai efek tergantung pada jenis sel target.

Ara. 2. Tiga versi efek biologis sitokin.

Rupanya, pembentukan sistem peraturan sitokin adalah evolusioner bersama dengan pengembangan organisme multiseluler dan disebabkan oleh perlunya pembentukan mediator interaksi intercellegal, yang merupakan hormon, neuropeptida, molekul adhesi dan beberapa lainnya mungkin dihitung. Sitokin dalam rencana ini adalah sistem regulasi paling universal, karena mereka dapat menunjukkan aktivitas biologis sebagai jauh setelah sekresi oleh sel yang diproduksi (lokal dan sistemar) dan selama kontak antar sel, secara biologis aktif dalam bentuk formulir membran. Sistem sitokin ini berbeda dari molekul adhesi yang melakukan fungsi sempit hanya dengan kontak langsung sel. Pada saat yang sama, sistem sitokin berbeda dari hormon, yang terutama disintesis oleh otoritas khusus dan memiliki tindakan setelah memasuki sistem sirkulasi.

Peran sitokin dalam regulasi fungsi fisiologis tubuh.

Peran sitokin dalam regulasi fungsi fisiologis organisme dapat dibagi menjadi 4 komponen utama:

1. Peraturan Embriogenesis, Bookmark, dan Pengembangan Organ, termasuk. organ-organ sistem kekebalan tubuh.

2. Peraturan masing-masing fungsi fisiologis normal.

3. Peraturan reaksi pelindung tubuh pada tingkat lokal dan sistem.

4. Peraturan proses regenerasi jaringan.

Ekspresi gen sitokin individu terjadi spesifik stadion pada tahap-tahap pengembangan embrionik tertentu. Faktor sel induk yang mengubah faktor pertumbuhan, sitokin keluarga FNF dan kemokin mengatur diferensiasi dan migrasi berbagai sel dan meletakkan organ-organ sistem kekebalan tubuh. Setelah itu, sintesis dari beberapa sitokin mungkin tidak diperbarui, sementara yang lain terus mengatur proses fisiologis normal atau berpartisipasi dalam pengembangan reaksi perlindungan.

Terlepas dari kenyataan bahwa sebagian besar sitokin adalah mediator yang dapat diinduksi khas dan pada periode postnatal tidak disintesis dengan sel-sel di luar respons inflamasi dan respon imun, beberapa sitokin tidak termasuk dalam aturan ini. Sebagai hasil dari ekspresi konstitusional gen, beberapa di antaranya disintesis secara konstan dan dalam jumlah yang cukup besar beredar, menyesuaikan proliferasi dan diferensiasi jenis sel tertentu sepanjang hidup. Contoh dari jenis pengaturan fisiologis fungsi dengan sitokin dapat menjadi tingkat erythropoietin yang terus-menerus tinggi dan beberapa XFS untuk menyediakan hemopoiesis. Peraturan reaksi pelindung organisme dengan sitokin terjadi tidak hanya dalam kerangka sistem kekebalan tubuh, tetapi juga dengan mengatur reaksi pelindung pada tingkat organisme holistik melalui peraturan hampir semua pihak dalam pengembangan peradangan dan respon imun. Ini adalah fungsi yang paling penting untuk seluruh sistem sitokin dikaitkan dengan dua arah utama aksi biologis sitokin - perlindungan terhadap agen infeksi dan pemulihan jaringan yang rusak. Sitokin terutama mengatur pengembangan reaksi protektif lokal dalam jaringan yang melibatkan berbagai jenis sel darah, endotelium, jaringan ikat dan epitel. Perlindungan pada tingkat lokal berkembang dengan membentuk respons inflamasi yang khas dengan manifestasi klasiknya: hyperemia, edema berkembang, penampilan sindrom nyeri dan gangguan fungsi. Sintesis sitokin dimulai ketika menembus patogen atau mengganggu integritas mereka, yang biasanya mengalir secara paralel. Produksi sitokin adalah bagian integral dari respons sel yang terkait dengan pengakuan sel-sel seri myelonocytic komponen struktural yang serupa dari berbagai patogen, yang disebut pola molekuler yang terkait patogen. Contoh-contoh struktur patogen tersebut adalah lipopolysaccharida dari bakteri gram-negatif, peptidoglikan mikroorganisme gram-positif, flaglin atau DNA, kaya dalam urutan CPOLYG, yang merupakan karakteristik DNA dari semua jenis bakteri. Leukosit mengungkapkan reseptor yang mengenali pola yang sesuai, juga disebut reseptor seperti tol (TLR) dan spesifik untuk pola struktural mikroorganisme tertentu. Setelah interaksi mikroorganisme atau komponennya dengan TLR, kaskade transmisi sinyal intraseluler diluncurkan, yang mengarah pada peningkatan aktivitas fungsional leukosit dan ekspresi gen sitokin.

Aktivasi TLR mengarah pada sintesis dari dua kelompok utama sitokin: sitokin dan interferon pro-inflamasi dari tipe I, terutama ke keyakinan ifnα / β peristiwa adalah sintesis kompleks sitokin pro-inflamasi dari keluarga IL-1, IL-6, FNF dan CHEMOKINES yang merangsang sebagian besar peristiwa berikut dalam pengembangan respon inflamasi dan memberikan ekspansi kipas tentang aktivasi berbagai jenis sel yang terlibat dalam menjaga dan mengatur peradangan, termasuk semua jenis leukosit, sel dendritik, t dan b-limfosit, sel NK, sel endotel dan epitel, fibroblast dan lainnya. Ini memastikan tahapan berturut-turut dari pengembangan respons peradangan, yang merupakan mekanisme utama untuk implementasi imunitas bawaan. Selain itu, sintesis sel-sel dendritik dari keluarga IL-12, merangsang diferensiasi pembantu T-limfosit, yang berfungsi sebagai jembatan aneh hingga awal pengembangan reaksi imunitas spesifik yang terkait dengan pengakuan spesifik struktur antigenik mikroorganisme.

Mekanisme kedua yang tidak kalah penting yang terkait dengan sintesis IFN memberikan implementasi perlindungan antivirus. Tipe I interferon menunjukkan 4 sifat biologis dasar:

1. Tindakan antivirus langsung dengan memblokir transkripsi.

2. Penindasan proliferasi sel diperlukan untuk menghalangi penyebaran virus.

3. Aktivasi fungsi sel NK dengan kemampuan untuk LYSE virus sel sel yang terinfeksi.

4. Memperkuat ekspresi molekul tingkat utama kelas I histokompatibilitas I, yang diperlukan untuk meningkatkan efektivitas representasi antigen virus dengan sel-sel yang terinfeksi dengan limfosit T-limfosit sitotoksik. Hal ini mengarah pada aktivasi pengakuan spesifik sel yang terinfeksi virus T-limfosit - tahap pertama sel target yang terinfeksi virus virus.

Akibatnya, selain tindakan anti-virus langsung, mekanisme diaktifkan sebagai kongenital (sel NK) dan imunitas yang diperoleh (T-limfosit). Ini adalah contoh bagaimana satu molekul sitokin kecil dengan MM 10 kali lebih kecil dari molekul antibodi MM mampu mengaktifkan mekanisme reaksi pelindung yang sama sekali berbeda yang bertujuan untuk melakukan satu tujuan - menghilangkan virus yang ditembus ke dalam tubuh.

Pada tingkat jaringan sitokin bertanggung jawab atas perkembangan peradangan, dan kemudian regenerasi jaringan. Ketika mengembangkan respons inflamasi sistemik (respons fase tajam), sitokin mempengaruhi hampir semua organ dan sistem tubuh yang terlibat dalam peraturan homeostasis. Tindakan sitokin pro-inflamasi pada CNS menyebabkan penurunan nafsu makan dan perubahan dalam seluruh rumit reaksi perilaku. Penghentian sementara pencarian pangan dan penurunan aktivitas seksual bermanfaat dalam hal hemat energi untuk satu tugas - untuk memerangi patogen imajiner. Sinyal ini menyediakan sitokin, karena sirkulasi hit mereka tentu berarti perlindungan lokal belum dikalahkan dengan patogen, dan dimasukkannya respons inflamasi sistemik diperlukan. Salah satu manifestasi pertama dari sistem respon inflamasi yang terkait dengan tindakan sitokin pada termostat hipotalamus termostat adalah terletak pada kebangkitan suhu tubuh. Peningkatan suhu adalah reaksi pelindung yang efektif, karena pada suhu tinggi kemampuan sejumlah bakteri terhadap reproduksi berkurang, tetapi, sebaliknya, proliferasi limfosit meningkat.

Di hati, di bawah pengaruh sitokin, sintesis protein fase tajam dan komponen sistem pelengkap, yang diperlukan untuk memerangi patogen, meningkat, tetapi secara bersamaan mengurangi sintesis albumin. Contoh lain dari tindakan pemilihan sitokin adalah perubahan dalam komposisi ionik plasma dalam pengembangan respon inflamasi sistemik. Pada saat yang sama, ada penurunan pada tingkat ion besi, tetapi meningkatkan tingkat ion seng, dan diketahui telah diketahui bahwa sel-sel bakteri ion besi berarti - untuk mengurangi potensi proliferatinya (the Tindakan Laktorrin didasarkan pada ini). Di sisi lain, peningkatan level seng diperlukan untuk operasi normal sistem kekebalan tubuh, khususnya, perlu untuk pembentukan faktor keju secara biologis dari thymus - salah satu hormon thymik utama yang memastikan diferensiasi limfosit . Efek sitokin pada sistem hematopoietik dikaitkan dengan aktivasi hematopois yang signifikan. Peningkatan jumlah leukosit diperlukan untuk mengisi kembali kerugian dan meningkatkan jumlah sel, terutama granulosit neutrofilik, dalam fokus peradangan purulen. Tindakan pada sistem koagulasi darah ditujukan untuk meningkatkan koagulasi yang diperlukan untuk menghentikan pendarahan dan untuk menghalangi patogen secara langsung.

Dengan demikian, dalam pengembangan peradangan sistemik sitokin, ada sejumlah besar kegiatan biologis dan mengganggu pekerjaan hampir semua sistem organisme. Namun, tidak ada perubahan yang sedang berlangsung acak: semuanya diperlukan untuk secara langsung mengaktifkan reaksi perlindungan atau bermanfaat dalam hal mengalihkan aliran energi untuk satu tugas untuk memerangi patogen imajiner. Dalam bentuk peraturan ekspresi gen individu, pergeseran hormon dan perubahan reaksi perilaku sitokin memastikan inklusi dan efisiensi maksimum dari sistem organisme yang saat ini diperlukan untuk pengembangan reaksi perlindungan. Pada tingkat organisme holistik, sitokin berkomunikasi antara kekebalan tubuh, gugup, endokrin, hematopoietik, dan sistem lain dan berfungsi untuk melibatkan mereka ke dalam organisasi dan regulasi reaksi pelindung tunggal. Sitokin hanya berfungsi sebagai sistem pengorganisasian yang terbentuk dan mengatur seluruh rumit reaksi perlindungan tubuh dalam pengenalan patogen. Rupanya sistem regulasi seperti itu telah dibentuk secara evolusi dan menanggung manfaat tanpa syarat untuk respons pertahanan makrorganisme yang paling optimal. Oleh karena itu, tampaknya, tidak mungkin untuk membatasi konsep reaksi pelindung hanya dengan partisipasi mekanisme resistensi non-spesifik dan respon imun tertentu. Dalam satu reaksi pelindung, seluruh tubuh dan semua sistem terlibat, pada pandangan pertama, tidak terkait dengan pemeliharaan imunitas.

Studi khusus sitokin.

Nilai sitokin dalam patogenesis penyakit inflamasi usus besar pada anak-anak.

S.V. Belmer, A.s. Simbirts, O.V. Golovnko, l.v. Bubnova, L.M. Carpina, N.E. Schigolev, T.L. Mikhailova. Universitas medis negara Rusia GSC Coloproctology, Moskow dan Gnilli dari Biopreparatat Murni, St. Petersburg melakukan pekerjaan untuk mempelajari nilai sitokin dalam patogenesis penyakit radang usus besar pada anak-anak. Penyakit inflamasi kronis pada saluran pencernaan saat ini ditempati oleh salah satu tempat terkemuka dalam patologi organ pencernaan pada anak-anak. Sangat penting melekat pada penyakit radang usus besar (BIS), frekuensi terjadinya di seluruh dunia terus meningkat. Aliran panjang dengan sering, dan dalam beberapa kasus, kambuh fatal, pengembangan komplikasi lokal dan sistemik - semua mendorong studi menyeluruh tentang patogenesis penyakit untuk mencari pendekatan BDS baru. Dalam beberapa dekade terakhir, kejadian kolitis ulserativa (NIAC) non-spesifik sebesar 510 kasus per tahun per 100 ribu populasi, dengan penyakit Crohn (BC), 16 kasus per tahun per 100 ribu populasi. Tingkat prevalensi di Rusia, di wilayah Moskow sesuai dengan data ekonomi menengah, tetapi secara signifikan lebih rendah daripada di negara-negara Skandinavia, Amerika, Israel dan Inggris. Untuk NYN, prevalensi 19,3 per 100 ribu, kejadian 1,2 per 100 ribu orang per tahun. Untuk prevalensi BC 3,0 per 100 ribu, kejadian 0,2 per 100 ribu orang per tahun. Fakta bahwa frekuensi tertinggi dicatat di pusat-pusat yang sangat maju adalah karena faktor sosial dan ekonomi, tetapi juga fitur genetik dan imunologis pasien yang menentukan kecenderungan bis. Faktor-faktor ini mendasar dalam teori imunopatogenetik asal BIS. Teori virus dan / atau bakteri hanya menjelaskan awal penyakit akut, dan kronisasi proses ini disebabkan oleh kecenderungan genetik dan kekhasan respon imun, yang juga ditentukan secara genetis. Perlu dicatat bahwa BDS saat ini dikaitkan dengan penyakit dengan kecenderungan kompleks yang heterogen secara genetik. Lebih dari 15 kandidat generik yang diduga diungkapkan dari 2 kelompok (imunospesifik dan imunoregulasi), menyebabkan kecenderungan turun temurun. Dengan probabilitas terbesar kecenderungan ditentukan oleh beberapa gen yang menentukan sifat reaksi imunologis dan inflamasi. Berdasarkan hasil berbagai penelitian, dapat disimpulkan bahwa pelokalan gen yang paling mungkin terkait dengan pengembangan BDS adalah kromosom 3, 7, 12 dan 16. Saat ini, perhatian besar dibayarkan pada studi tentang fitur fungsi T dan dalam limfosit, serta sitokin mediator inflamasi. Peran interleukins (IL), Interferon (IFN), faktor nekrosis tumor (TNF-A), makrofag dan autoantibod ke protein protein mukosa usus besar dan pengukur otomatis dan seater otomatis dipelajari secara aktif. Fitur-fitur pelanggaran mereka dengan BK dan nyak terungkap, tetapi tetap tidak jelas apakah perubahan ini timbul primer atau sekunder. Untuk memahami banyak pihak patogenesis, penelitian dilakukan dalam pementasan praklinis BDS, serta kerabat tingkat pertama kekerabatan akan sangat penting. Di antara mediator peradangan, peran khusus milik sitokin, yang merupakan kelompok molekul polipeptida dengan massa 5 hingga 50 kd berpartisipasi dalam pembentukan dan peraturan reaksi perlindungan tubuh. Pada tingkat organisme sitokin, ada hubungan antara kekebalan tubuh, gugup, endokrin, hematopoietik dan sistem lain dan berfungsi untuk melibatkan mereka ke dalam organisasi dan regulasi reaksi perlindungan. Klasifikasi sitokin ditunjukkan pada Tabel 2. Sebagian besar sitokin tidak disintesis oleh sel-sel di luar respons inflamasi dan respon imun. Ekspresi gen sitokin dimulai sebagai respons terhadap penetrasi ke dalam tubuh patogen, iritasi antigenik atau kerusakan jaringan. Salah satu penginduksi sintesis sitokin paling kuat adalah komponen dinding sel bakteri: LPS, Peptidoglikan dan Muramildepeptida. Produk sitokin pro-inflamasi terutama monosit, makrofag, sel T, dll. Tergantung pada dampak pada proses inflamasi sitokin, dibagi menjadi dua kelompok: pro-inflamasi (IL-8, IL-8, IL-8, IL-8 , TNF-A, IFN-G) dan anti-inflamasi (IL-4, IL-10, TGF-B). Interleukin-1 (IL-1) adalah mediator imunoregulasi, yang diisolasi di bawah reaksi inflamasi, lesi jaringan dan infeksi (sitokin pro-inflamasi). IL-1 memainkan peran penting dalam mengaktifkan sel-T ketika mereka berinteraksi dengan antigen. 2 Jenis IL-1 dikenal: IL-1A, dan IL-1B, produk dari dua lokus gen yang berbeda terletak di kromosom 2 orang. IL-1A tetap di dalam sel atau mungkin dalam bentuk membran, dalam jumlah kecil muncul di ruang ekstraseluler. Peran bentuk membran IL-1A adalah transmisi sinyal pengaktif dari macrophage T-limfosit dan sel lain selama kontak antar sel. IL-1A - Mediator utama dari tindakan tahan pendek. IL-1B, tidak seperti IL-1A, secara aktif disekresikan oleh sel, bertindak baik secara sistemik dan lokal. Hingga saat ini, diketahui bahwa IL-1 adalah salah satu mediator utama reaksi inflamasi, merangsang proliferasi sel T, meningkatkan ekspresi reseptor IL-2 dan produksi IL-2 pada sel-T. IL-2, bersama dengan antigen, menginduksi aktivasi dan adhesi neutrofil, merangsang pembentukan sitokin lainnya (IL-2, IL-3, dll.) Sel T yang diaktifkan dan fibroblast, merangsang proliferasi fibroblast dan endotelial sel. Secara sistemis IL-1 bertindak secara sinergis dengan TNF-A dan IL-6. Ketika ending IL-1 meningkat, IL-1 mempengaruhi sel-sel hipotalamus dan menyebabkan peningkatan suhu tubuh, demam, kantuk, penurunan nafsu makan, dan merangsang sel-sel hati pada produk dari protein fase akut (CRP, amiloid a , A-2 macrobulin dan fibrinogen). IL4 (kromosom 5). Menghambat aktivasi makrofag dan memblokir banyak efek yang dirangsang oleh IFNG, seperti IL1 produk, nitrogen dan prostaglandin, memainkan peran penting dalam reaksi anti-inflamasi, memiliki efek imunosupresif. IL6 (kromosom 7), salah satu sitokin pro-inflamasi utama, adalah induser utama dari tahap akhir dari diferensiasi peningkatan dan makrofag, stimulan kuat dari produk-produk protein fase akut dari sel-sel hati. Salah satu fungsi dasar stimulasi anti6 dari antibodi in vivo dan in vitro. IL8 (kromosom 4). Mengacu pada mediator Chemocheses yang menyebabkan leukosit migrasi bertarget (hemotaxis) dalam fokus peradangan. Fungsi utama penghambatan IL10 dari produksi sitokin dari kue tipe pertama (TNFB, IFNG) dan makrofag aktif (TNF-A, IL1, IL12). Saat ini, diakui bahwa jenis respons imun dikaitkan dengan salah satu varian aktivasi limfosit dengan partisipasi utama klon tlymphocyte dari pembantu tipe pertama (TH3) atau tipe kedua (TH3). Produk T2 dan T3 secara negatif mempengaruhi aktivasi klon yang berlawanan. Aktivasi yang berlebihan dari beberapa jenis klon Th dapat mengirim respons imun terhadap salah satu opsi pengembangan. Ketidakseimbangan kronis dari klon TH mengarah pada pengembangan kondisi imunopatologis. Perubahan sitokin selama BDS dapat dipelajari dengan berbagai cara dengan penentuan kadar darah mereka atau in situ. Level IL1 meningkat dengan semua penyakit usus inflamasi. Perbedaan antara NIK dan BC akan meningkatkan ekspresi IL2. Jika tingkat IL2 yang dikurangi atau normal terdeteksi pada tidur siang, maka BC mendeteksi tingkat yang meningkat. Kandungan IL4 meningkat dengan NYN, sedangkan dengan SM tetap normal atau bahkan berkurang. Tingkat IL6 yang dimediasi oleh reaksi fase tajam juga meningkat dengan semua bentuk peradangan. Data yang diperoleh terkait dengan profil sitokin memungkinkan untuk mengekspresikan asumsi bahwa dua bentuk utama gearbox kronis ditandai dengan berbagai aktivasi dan ekspresi sitokin. Hasil penelitian menunjukkan bahwa profil sitokin yang diamati pada pasien lebih konsisten dengan profil TH3, sedangkan untuk pasien dengan BC, profil TH2 harus dianggap lebih khas. Daya tarik hipotesis ini tentang peran profil TH2 dan TH3 juga terdiri dari fakta bahwa penggunaan sitokin dapat mengubah respon imun terhadap satu arah atau yang lain dan mengarah pada remisi dengan pemulihan keseimbangan sitokin. Ini dapat dikonfirmasi, khususnya, menggunakan IL10. Penelitian lebih lanjut harus menunjukkan apakah respons sitokin adalah fenomena sekunder dalam menanggapi iritasi atau, sebaliknya, ekspresi sitokin yang sesuai menentukan reaktivitas tubuh dengan perkembangan manifestasi klinis berikutnya. Studi tingkat sitokin selama BDS pada anak-anak belum dilakukan. Makalah ini adalah bagian pertama dari studi ilmiah tentang studi status sitokin selama BDS pada anak-anak. Tujuan dari pekerjaan ini adalah studi tentang aktivitas humoral makrofag dengan definisi level (IL1A, IL8) dalam darah pada anak-anak dari NIAC dan BC, serta dinamika mereka terhadap latar belakang terapi. Dari 2000 hingga 2002, 34 anak dari NIAC dan 19 anak-anak dari BCS antara usia 4 dan 16 diperiksa dari 2000 hingga 2002. Di Departemen Gastroenterologi Diagnosis diverifikasi secara analog, endoskopi dan morfologis. Studi tentang Sitokin Pro-inflamasi IL1A, IL8 dilakukan dengan metode enzim immunoassay (ELISA). Untuk menentukan konsentrasi IL1A, IL8 menggunakan sistem testsys dari produksi LLC "Tsitokin" (St. Petersburg, Rusia). Analisis dilakukan di laboratorium emunofarmakologi pusat ilmiah negara dari Institut Penelitian Biopreparat yang sangat murni (kepala laboratorium. Hasil yang diperoleh selama penelitian mengungkapkan peningkatan yang signifikan pada kadar IL1A, IL8 selama periode eksaserbasi, dinyatakan pada sebagian besar pada anak-anak dari NYN, daripada anak-anak dengan BC. Keluar dari eksaserbasi, kadar sitokin pro-inflamasi berkurang, tetapi tidak mencapai norma. Di tingkat NYM, IL-1A, IL-8 dinaikkan dalam periode eksaserbasi pada 76,2% dan pada 90% anak-anak, dan dalam periode remisi - 69,2% dan 92,3%. Di tingkat BC, IL-1A, IL-8 meningkat dalam periode eksaserbasi pada 73,3% dan pada 86,6% anak-anak, dan selama periode remisi - masing-masing dan dalam 75%.

Tergantung pada tingkat keparahan penyakit, anak-anak diperoleh dengan terapi dengan aminoalcylates atau glukokortikoid. Sifat terapi secara signifikan mempengaruhi dinamika tingkat sitokin. Terhadap latar belakang terapi dengan aminoallatlates, kadar sitokin pro-inflamasi pada kelompok anak-anak dari NIAC dan BC secara signifikan melebihi yang ada dalam kelompok kontrol. Pada saat yang sama, tarif yang lebih tinggi diamati pada kelompok anak-anak dari NIAC. Dengan NYN pada latar belakang terapi dengan aminoallatlates IL1A, IL8 meningkat pada 82,4% dan pada 100% anak-anak, sedangkan dengan terapi glukokortikoid pada 60% anak-anak untuk kedua sitokin. Dengan BC IL1A, IL8 meningkat terhadap latar belakang terapi dengan aminoallatlate pada semua anak, dan dengan terapi glukokortikoid masing-masing pada 55,5% dan pada 77,7% anak-anak. Dengan demikian, hasil penelitian ini menunjukkan keterlibatan yang signifikan dalam proses patogenetik elemen makrofagus dari sistem kekebalan pada kebanyakan anak dengan NIAC dan BC. Data yang diperoleh dalam penelitian ini secara fundamental tidak berbeda dari data yang diperoleh selama pemeriksaan pasien dewasa. Perbedaan kadar IL1A dan IL8 pada pasien dengan NIAC dan BC adalah kuantitatif, tetapi tidak kualitatif, yang menunjukkan sifat non-spesifik dari perubahan ini karena proses inflamasi kronis. Akibatnya, indikator-indikator ini tidak memiliki nilai diagnostik. Hasil studi dinamis dari kerusakan IL1A dan IL8 dibenarkan oleh kemanjuran terapi obat glukokortikoid yang lebih tinggi dibandingkan dengan terapi dengan aminoalcylam. Data yang disajikan adalah hasil dari tahap pertama dari studi status sitokin anak-anak dengan BIS. Studi lebih lanjut tentang masalah diperlukan dengan mempertimbangkan indikator sitokin pro-inflamasi dan anti-inflamasi lainnya.

Peran nitrogen oksida dan sitokin dalam pengembangan sindrom kerusakan paru-paru akut.

Mempelajari masalah ini terlibat dalam t.a. shumatova, v.b.shumatov, mis. Markelova, l.g.sukhotepelya: Departemen anestesiologi dan resusitasi Universitas Medis Negara Bagian Vladivostok. Sindrom kerusakan akut pada paru-paru (sindrom gangguan pernapasan orang dewasa, RDSV) adalah salah satu bentuk kegagalan pernapasan akut yang paling parah yang timbul dari pasien dengan latar belakang cedera parah, sepsis, peritonitis, pankreatitis, kehilangan darah, aspirasi, Setelah intervensi operasional yang luas dan 50-60% kasus yang menyebabkan kematian. Studi-studi tentang patogenesis RDSV, pengembangan kriteria untuk diagnosis dini dan perkiraan sindrom ini sedikit, cukup kontradiktif, yang tidak memungkinkan untuk mengembangkan konsep diagnostik dan terapeutik yang ramping. Didirikan bahwa RDSV didasarkan pada kerusakan pada endotel pada kapiler paru dan epitel alveoli, pelanggaran sifat reologi darah, yang mengarah ke antarmuka dan edema jaringan alveolar, fenomena fenomena, atelektasis, hiperektas. Sastra dari beberapa tahun terakhir telah muncul cukup informasi tentang regulator universal metabolisme seluler dan jaringan - nitrogen oksida. Ketertarikan pada nitrogen oksida (no) terutama disebabkan oleh fakta bahwa itu terlibat dalam peraturan serangkaian fungsi, termasuk nada vaskular, detak jantung, agregasi trombosit, neurotransmisi, sintesis ATP dan protein, perlindungan kekebalan. Selain itu, tergantung pada pilihan target molekuler dan fitur interaksi dengannya, tidak memiliki efek merusak. Diyakini bahwa mekanisme awal aktivasi sel adalah sitokinemia yang tidak seimbang. Sitokin adalah peptida yang larut yang melakukan fungsi mediator dari sistem kekebalan tubuh dan memberikan kerja sama seluler, imunoregulasi positif dan negatif. Kami mencoba mensistematisasikan informasi yang tersedia dalam literatur tentang peran tidak dan sitokin dalam pengembangan sindrom kerusakan paru-paru akut. Tidak larut dalam lemak air dan gas. Molekulnya adalah radikal bebas yang tidak stabil, dengan mudah berdifusi ke dalam jaringan, diserap dan dihancurkan begitu cepat sehingga hanya dapat mempengaruhi sel-sel dari lingkungan terdekat. Tidak ada molekul yang melekat pada messenger klasik: dengan cepat diproduksi, bertindak dalam konsentrasi yang sangat rendah, setelah menghentikan aksi sinyal eksternal, itu berubah menjadi senyawa lain dengan cepat, mengoksidasi ke nitrogen nitrit dan nitrat yang stabil. Durasi kehidupan No dalam jaringan adalah, menurut berbagai sumber, dari 5 hingga 30 detik. Target molekul utama adalah enzim dan protein yang mengandung besi: guanillate larut, sebenarnya nitrooksythsyntase (NOS), hemoglobin, enzim mitokondria, enzim siklus krebs, protein dan sintesis DNA. Tidak ada sintesis dalam tubuh terjadi dengan transformasi enzimatik dari bagian yang mengandung nitrogen dari asam amino L-arginin di bawah pengaruh enzim nos spesifik dan dimediasi oleh interaksi ion kalsium dengan calmodulin. Enzim tidak aktif pada konsentrasi rendah dan paling aktif pada 1 mikron kalsium gratis. Dua isoform NOS diidentifikasi: konstitutif (CNOS) dan diinduksi (INOS), yang merupakan produk dari berbagai gen. CNOS CNOS yang bergantung pada Calmodulin secara permanen hadir dalam sel dan berkontribusi pada alokasi sejumlah kecil tidak dalam menanggapi reseptor dan stimulasi fisik. Tidak, terbentuk di bawah pengaruh isoform ini, bertindak sebagai operator dalam sejumlah respons fisiologis. Inos yang bergantung pada kalsium-calmodulinese dibentuk dalam berbagai jenis sel dalam menanggapi sitokin pro-inflamasi, endotoksin dan oksidan. Isoform NOS ini ditranskripsi oleh gen tertentu 17 kromosom dan mempromosikan sintesis sejumlah besar No. Enzim juga diklasifikasikan menurut tiga jenis: NOS-I (neuronal), NOS-II (makrophagative), NOS-III (endotel). Keluarga enzim mensintesis no, ditemukan pada banyak sel paru-paru: dalam epitel bronkial, dalam alveolosit, dalam macrofag alveolar, dalam sel lemak, dalam endotelosit arteri bronkial dan pembuluh darah, dalam miosit halus bronkus dan kapal, dalam neuron neurinergik nonadenergik. Kemampuan konstitutif epitelosit Bronchi dan manusia dan mamalia alveoli dan mamalia dikonfirmasi dalam berbagai penelitian. Telah ditetapkan bahwa bagian atas saluran pernapasan seseorang, serta departemen yang lebih rendah, terlibat dalam pembentukan No. Studi yang dilakukan pada pasien dengan trakeostomi telah menunjukkan bahwa di udara, dihembuskan melalui trakeostomi, jumlah gas secara signifikan kurang dibandingkan dengan rongga hidung dan mulut. Sintesis tanpa endogen tidak menderita pada pasien yang berada di ventilasi paru-paru buatan. Studi mengkonfirmasi bahwa pelepasan tidak terjadi pada saat kecerahan dan dikendalikan oleh sistem saraf vagus. Data diperoleh bahwa pembentukan no dalam epitel saluran pernapasan seseorang meningkat dengan penyakit radang organ pernapasan. Sintesis gas meningkat karena aktivasi NOS yang diinduksi di bawah pengaruh sitokin, serta endotoksin dan lipopolysaccharides.

Saat ini, lebih dari seratus sitokin diketahui, yang secara tradisional dibagi menjadi beberapa kelompok.

1. Interleukins (IL-1 - IL18) adalah protein regulator sekretori yang memberikan interaksi media dalam sistem kekebalan tubuh dan hubungannya dengan sistem tubuh lainnya.

2. Interferon (ifn-alpha, beta, gamma) - sitokin antivirus dengan efek imunoregulasi yang parah.

3. Faktor nekrosis tumor (TNF alpha, beta) - sitokin dengan tindakan sitotoksik dan peraturan.

4. Faktor kolonistimulasi (G-CSF, M-CSF, GM-CSF) - Stimulan pertumbuhan dan diferensiasi sel hematopoietik yang mengatur hemopoies.

5. Chemokines (IL-8, IL-16) - Hemoattractractan untuk leukosit.

6. Faktor Pertumbuhan - Regulator Pertumbuhan, Diferensiasi dan Aktivitas Fungsional Sel-sel dari berbagai aksesoris jaringan (Faktor Pertumbuhan Fibroblast, Faktor Pertumbuhan Sel Endotel, Faktor Pertumbuhan Epidermis) dan Mengubah Faktor Pertumbuhan (TGF Beta).

Molekul bioregulasi ini menentukan jenis dan durasi respon inflamasi dan imun, mengendalikan proliferasi sel, hemopo, angiogenesis, penyembuhan luka dan banyak proses lainnya. Semua peneliti menekankan bahwa sitokin kehilangan kekhususan dalam kaitannya dengan antigen. Eksperimen dengan makrofag paru berbudaya dan sel-sel obesitas menunjukkan pembentukan INOS sebagai respons terhadap interferon gamma, interleukin-1, faktor nekrosis tumor dan lipopolysaccharides. Ekspresi Inos dan CNOS pada sitokin pro-inflamasi ditemukan pada alveolosit hewan dan manusia. Menambah budaya faktor pertumbuhan epidermal, regulator fungsi sel epitel, mengurangi aktivitas hanya enzim yang diinduksi. Diketahui bahwa, tergantung pada alam, Sitokin bertindak Autocrinno - pada sel-sel sendiri memproduksi sendiri, parabinno - ke sel lain - target atau endocrino - pada sel-sel yang berbeda di luar tempat produk mereka. Pada saat yang sama, mereka dapat berinteraksi satu sama lain dengan prinsip agonis atau antagonis, mengubah keadaan fungsional sel-sel target dan membentuk jaringan sitokin. Dengan demikian, sitokin tidak terfragmentasi peptida, tetapi sistem holistik, komponen utama yang diproduksi sel, protein itu sendiri - sitokin, reseptornya dianggap, dan sel target. Telah ditetapkan bahwa dalam pengembangan kerusakan paru akut, tingkat sitokin pro-inflamasi meningkat: IL-1, 6, 8, 12, TNF Alpha, IFN Alpha. Efek mereka dikaitkan dengan perpanjangan kapal, peningkatan permeabilitas mereka dan akumulasi cairan dalam jaringan paru-paru. Selain itu, penelitian menunjukkan kemampuan IFN GAMMA dan TNF ALPHA menginduksi ekspresi molekul adhesi - ICAM -1 pada endotelosit manusia. Molekul adhesi, penganut leukosit, trombosit dan sel endotelium, bentuk "bergulir" (disentuh) neutrofil dan berkontribusi pada agregasi partikel fibrin. Proses-proses ini berkontribusi pada pelanggaran aliran darah kapiler, meningkatkan permeabilitas kapiler, menginduksi edema jaringan lokal. Perlambatan aliran darah kapiler berkontribusi pada aktivasi tidak, yang menyebabkan panggilan arteriol. Migrasi lebih lanjut dari leukosit dalam fokus peradangan dikendalikan oleh sitokin khusus - kemokin, yang diproduksi dan dikeluarkan tidak hanya dengan makrofag aktif, tetapi juga sel endotel, fibroblast, miosit halus. Fungsi utama mereka adalah memasok neutrofil ke dalam fokus peradangan dan mengaktifkan aktivitas fungsional mereka. Kemokin utama untuk neutrofil adalah IL-8. Induktornya yang terkuat melayani lipopolysaccharides bakteri, IL-1 dan TNFALF. R. Bahra et al. Diyakini bahwa setiap langkah migrasi trans-endelial neutrofil diatur oleh konsentrasi stimulasi TNF Alpha. Ketika mengembangkan kerusakan akut pada endoteliosit paru-paru kapal, epitelocit makrofag Bronchi dan alveolar diaktifkan dan terlibat dalam interaksi fase. Akibatnya, ada, di satu sisi, mobilisasi mereka dan memperkuat sifat-sifat perlindungan, dan, di sisi lain, mungkin ada kerusakan pada sel-sel itu sendiri dan jaringan di sekitarnya. Dalam sejumlah pekerjaan, ditunjukkan bahwa produk pengurangan parsial oksigen mampu menumpuk dalam fokus peradangan - superoksida, pendingin menonaktifkan efek vasoaktif no. Tidak ada dan anion superoksida mengalami interaksi cepat dengan pembentukan peroxinitrite, sel merusak. Reaksi ini membantu menghilangkan no dari dinding vaskular dan bronkial, serta dari permukaan alveolosit. Merupakan kepentingan penelitian, yang menunjukkan bahwa secara tradisional dianggap sebagai mediator tanpa toksisitas, peroksinitrit mungkin memiliki efek fisiologis dan menyebabkan relaksasi vaskular melalui peningkatan CGMF yang tidak dimediasi dalam endotel vaskular. Pada gilirannya, peroxynitrite adalah oksidan kuat yang dapat merusak epitel alveolar dan surfaktan paru. Ini menyebabkan penghancuran lipid protein dan membran, kerusakan endotel, meningkatkan agregasi trombosit, berpartisipasi dalam proses endotoksmia. Pendidikannya yang meningkat tercatat dalam sindrom kerusakan akut pada paru-paru. Para peneliti percaya bahwa aktivasi yang diinduksi tidak ada enzim yang diinduksi enzim dimaksudkan untuk perlindungan non-spesifik dari organisme dari berbagai agen patogen, memperlambat agregasi trombosit dan meningkatkan sirkulasi darah lokal. Telah ditetapkan bahwa jumlah berlebih tidak menekan aktivitas CNO dalam sel karena interaksi dengan superoksida dan, mungkin, sebagai akibat dari desensitisasi guanillatcyclazes, yang mengarah pada penurunan CGMF dalam sel dan meningkat dalam kalsium intraseluler. Brett et al. dan Kooy et al. Dengan menganalisis pentingnya mekanisme nitrooksidergik dalam patogenesis RDSV, INO, peroksinitrit dapat dimainkan peran kunci dalam pengembangan sindrom, dan nitortozin adalah produk utama dari efek peroxinitrite pada protein . Cuthbertson et al. Diyakini bahwa dasar kerusakan paru akut adalah efek dari tidak dan peroxyntrite pada elastase dan interleukin-8. Kobayashi C et al. Juga berakar pada kandungan inos, interleukin-1, interleukin-6, interleukin-8 dalam cairan bronkoalveolar pada pasien dengan sindrom kerusakan paru akut. Meldrum c otomatis. Menunjukkan penurunan produksi sitokin inflamasi dengan makrofag paru dengan RDSV di bawah pengaruh substrat produk no-l-arginin lokal. Telah ditetapkan bahwa dalam genesis sindrom kerusakan akut pada paru-paru, permeabilitas vaskular, karena pengaruh sitokin - TNF alpha, IL-2, GM-CSF, antibodi monoklonal terhadap limfosit CD3 pada sel endotel paru-paru dan immunocytes ditempatkan. Peningkatan yang cepat dan kuat dalam permeabilitas pembuluh paru menyebabkan migrasi neutrofil ke jaringan paru-paru dan pelepasan mediator sitotoksik, yang memimpin dalam pengembangan perubahan patologis paru-paru. Dalam proses pengembangan kerusakan paru akut, TNF Alpha meningkatkan adhesi neutrofil ke dinding vaskular, meningkatkan migrasi mereka dalam jaringan, berkontribusi terhadap perubahan struktural dan metabolisme dalam endotelosit, mengganggu permeabilitas membran sel, mengaktifkan pembentukan sitokin lainnya dan Eikosanoids, menyebabkan apoptosis dan nekrosis paru-paru. Data diperoleh yang menunjukkan bahwa makrofag yang diinduksi oleh pengenalan LPS sebagian besar dikaitkan dengan gamma IFN dan berkurang di bawah aksi IL-4, IL-10, TGF Beta. Namun, Kobayashi et al. Menerima data yang menunjukkan bahwa gamma IFN dapat terlibat dalam proses reparasi epitel dari saluran pernapasan lendir. Dalam studi, Hagimoto berisi informasi bahwa sel epitel bronkus dan alveol dalam menanggapi TNF Alpha atau Fas Ligand terisolasi IL-8, IL-12. Proses ini dikaitkan dengan aktivasi faktor nuklir carrian di ligan FAS.

Diyakini IL-8 adalah salah satu sitokin paling penting dalam patofisiologi kerusakan paru akut. Miller et al. Dalam studi cairan bronko-alveolar pada pasien dengan RDSV, pada latar belakang SESPSIS, peningkatan signifikan pada tingkat IL-8 ditetapkan dibandingkan dengan pasien dengan paru kardiogenik. Disarankan bahwa sumber utama IL-8 adalah cahaya, dan kriteria ini dapat digunakan dalam diagnosis diferensial sindrom. Grau et al. Dipercayai bahwa endoteliosit kapiler paru berfungsi sebagai sumber penting sitokin - IL-6, IL-8 dengan perkembangan kerusakan akut pada paru-paru. Goodman et al. Saat mempelajari dinamika kadar sitokin dalam cairan lavage bronko-alveolar pada pasien dengan RDSV, peningkatan signifikan dalam IL-1BET, IL-8, monocytic chemotactic peptide-1, epitel aktivator neutrofil seluler, peptida inflamasi makrofag-1 alpha ditetapkan . Pada saat yang sama, penulis percaya bahwa peningkatan isi Beta IL-1 dapat berfungsi sebagai penanda hasil yang merugikan dari sindrom. Bauer et al. Itu ditunjukkan bahwa kontrol atas konten dalam cairan bronkoalveolar pada pasien dengan RDSV IL-8 dapat digunakan untuk pemantauan, penurunan level IL-8 menunjukkan proses yang tidak menguntungkan. Sejumlah penelitian juga mengandung informasi bahwa tingkat produk sitokin endotel dari kapal paru-paru mempengaruhi pengembangan kerusakan paru akut dan kontrol yang dapat digunakan dalam praktik klinis untuk diagnosis dini. Pada kemungkinan konsekuensi negatif dari meningkatnya tingkat sitokin pro-inflamasi pada pasien dengan RDSV bersaksi studi Martin et al., Warner et al. Diaktifkan oleh sitokin dan endotoksin bakteri alveolar Macrophages meningkatkan sintesis no. Tingkat produksi tidak ada epiteliosit bronkus dan alveoli, neutrofil, sel-sel lemak, endoteliosit dan miosit halus bejana paru juga meningkat, kemungkinan melalui aktivasi faktor nuklir Carra. Para penulis percaya bahwa NOS yang diinduksi nitrogen yang diinduksi NOS dimaksudkan terutama untuk perlindungan organisme yang tidak spesifik. Menyoroti dari makrofag, tidak dengan cepat menembus bakteri, jamur, di mana menghambat tiga kelompok enzim vital: H-Electro-Transport, siklus krebs dan sintesis DNA. Tidak ada yang terlibat dalam pembelaan tubuh pada tahap terakhir respon imun dan secara resmi dianggap sebagai "pedang menghukum" dari sistem kekebalan tubuh. Namun, terakumulasi dalam sel dalam jumlah yang tidak memadai, tidak ada efek merusak. Dengan demikian, ketika sindrom kerusakan akut pada sitokin cahaya dan tidak diluncurkan oleh rantai reaksi berurutan yang dinyatakan dalam gangguan mikrosirkulasi, terjadinya hipoksia jaringan, alveolar dan edema interstitial, kerusakan pada fungsi metabolisme paru-paru. Oleh karena itu, dapat dinyatakan bahwa studi mekanisme fisiologis dan patofisiologis sitokin dan tidak adalah arah yang menjanjikan untuk penelitian dan selanjutnya tidak hanya memperluas ide-ide tentang patogenesis RDSV, tetapi juga untuk menentukan spidol diagnostik dan prognostik Sindrom tersebut, mengembangkan perwujudan terapi yang mengandung patogenetik yang bertujuan mengurangi mortalitas.

Metode untuk menentukan sitokin.

Tinjauan ini dikhususkan untuk metode dasar studi sitokin yang saat ini digunakan. Secara singkat mengkarakterisasi kemungkinan dan tujuan metode. Keuntungan dan kerugian dari berbagai metode pendekatan terhadap analisis ekspresi gen sitokin pada tingkat asam nukleat dan pada tingkat produk protein diberikan. (Sitokin dan peradangan. 2005. T. 4, No. 1. P. 22-27.)

Sitokin adalah protein peraturan yang membentuk jaringan universal mediator, karakteristik dari sistem kekebalan tubuh dan untuk sel-sel organ dan jaringan lainnya. Kontrol kelas protein regulator ini, melanjutkan semua peristiwa seluler: proliferasi, diferensiasi, apoptosis, aktivitas fungsional sel khusus. Efek dari setiap sitokin pada sel ditandai dengan playotropy, spektrum efek dari berbagai mediator tumpang tindih dan, sebagian besar, keadaan fungsional akhir sel tergantung pada efek beberapa sitokin yang bertindak secara sinergis. Dengan demikian, sistem sitokin adalah jaringan peraturan polimorf yang universal yang dimaksudkan untuk mengendalikan proses proliferasi, diferensiasi, apoptosis dan aktivitas fungsional elemen sel dalam hematopoietik, kekebalan tubuh, dan sistem homeostatis lainnya. Metode untuk menentukan sitokin selama 20 tahun studi intensifnya melewati evolusi yang sangat cepat dan hari ini mewakili seluruh bidang pengetahuan ilmiah. Di depan para peneliti dalam sitokinologi pada awal pekerjaan ada pertanyaan tentang memilih metode. Dan di sini peneliti harus tahu persis informasi apa yang dia butuhkan untuk mencapai tujuan. Saat ini, ratusan berbagai metode untuk mengevaluasi sistem sitokin dikembangkan, yang memberikan beragam informasi tentang sistem ini. Mengevaluasi sitokin di berbagai media biologis dapat digunakan oleh aktivitas biologis tertentu. Dimungkinkan untuk menentukan mereka secara kuantitatif menggunakan sejumlah metode immunoassay menggunakan antibodi poli dan monoklonal. Selain mempelajari bentuk-bentuk sekretori sitokin, konten dan produk intraseluler mereka dalam jaringan metode sitofluorimetri aliran, blot barat dan imunohistokimia in situ dapat dipelajari. Informasi yang sangat penting dapat diperoleh dengan mempelajari ekspresi mRNA sitokin, stabilitas mRNA, keberadaan isoform mRNA sitokin, urutan nukleotida antisense alami. Studi varian alel gen sitokin dapat memberikan informasi penting tentang produk tinggi atau rendah yang diprogram secara genetik dari mediator tertentu. Setiap metode memiliki kelemahan dan keunggulannya, resolusi dan keakuratan tekadnya. Ketidaktahuan dan kesalahpahaman oleh peneliti nuansa ini dapat menyebabkan kesimpulan palsu.

Penentuan aktivitas biologis sitokin.

Sejarah deteksi dan langkah pertama dalam studi sitokin terkait erat dengan penanaman sel imunokompeten dan garis sel. Kemudian efek regulasi (aktivitas biologis) dari sejumlah faktor alam protein yang larut ditunjukkan pada aktivitas limfosit proliferatif, pada sintesis imunoglobulin, pada pengembangan reaksi kekebalan dalam model in vitro. Salah satu metode pertama untuk menentukan aktivitas biologis mediator adalah untuk menentukan faktor migrasi limfosit manusia dan faktor penghambatannya. Sebagai efek biologis dari sitokin, berbagai metode menilai aktivitas biologis mereka muncul. Dengan demikian, IL-1 ditentukan dengan memperkirakan proliferasi timosit mouse in vitro, IL-2 - dengan kemampuan untuk merangsang aktivitas proliferatif limfoblas, IL-3 - untuk pertumbuhan koloni hematopoietik in vitro, IL-4 - pada Efek mengindahkan komute, untuk memperkuat ekspresi protein IA, pada induksi pendidikan IgG1 dan IgE, dll. Daftar metode ini dapat dilanjutkan, ia terus diperbarui karena aktivitas biologis baru dari faktor-faktor yang larut terdeteksi. Kelemahan utama adalah teknik non-standar, ketidakmungkinan penyatuan mereka. Pengembangan teknik lebih lanjut untuk menentukan aktivitas biologis sitokin menyebabkan penciptaan sejumlah besar garis sel yang sensitif terhadap sitokin tertentu, atau garis multichmissif. Sekarang sebagian besar sel cytokinchsten ini dapat dideteksi dalam daftar garis sel terdistribusi secara komersial. Misalnya, untuk pengujian IL-1A dan B, garis sel D10S digunakan untuk saluran sel IL-2 dan IL-15 - CTLL-2, untuk IL-3, IL-4, IL-5, IL-9, IL -13, IL-13, GM-CSF - TF-1 Line, untuk IL-6 - Cell Line B9, untuk IL-7 - Cell Line 2E8, untuk TNFA dan TNFB - L929 Cell Line, untuk IFNG - WIDR Cell Line , untuk IL-18 - garis seluler kg-1. Namun, pendekatan semacam itu dalam studi protein imunoaktif, bersama dengan keunggulan terkenal, seperti pengukuran aktivitas biologis nyata dari protein dewasa dan aktif, reproduktifitas tinggi dalam kondisi standar, memiliki kelemahannya. Ini termasuk, pada awalnya, sensitivitas garis sel bukan satu sitokin, tetapi untuk beberapa sitokin terkait yang efek biologisnya tumpang tindih. Selain itu, tidak mungkin untuk mengecualikan kemungkinan induksi produk sitokin lain dengan sel-sel target yang dapat mendistorsi parameter tes (sebagai aturan, itu adalah proliferasi, sitotoksisitas, kemotaksis). Kami masih tahu tidak semua sitokin dan tidak semua efeknya, oleh karena itu tidak dibuktikan dengan sitokin itu sendiri, tetapi total aktivitas biologis tertentu. Dengan demikian, penilaian aktivitas biologis sebagai total aktivitas mediator yang berbeda (spesifisitas tidak memadai) adalah salah satu kelemahan dari metode ini. Selain itu, menggunakan garis sitokinching, tidak mungkin untuk mengungkapkan molekul non-aktif dan protein terkait. Jadi, teknik seperti itu tidak mencerminkan produk nyata untuk sejumlah sitokin. Kurangnya lain yang penting menggunakan garis sel adalah perlunya laboratorium untuk kultur sel. Selain itu, semua prosedur peningkatan sel meliputi mereka dengan protein dan media yang dipelajari membutuhkan biaya waktu yang besar. Perlu juga dicatat bahwa garis sel selama penggunaan jangka panjang mereka memerlukan pembaruan atau sertifikasi ulang, karena sebagai akibat dari budidaya, mereka dapat bermutasi dan memodifikasi, yang dapat menyebabkan perubahan sensitivitas mereka terhadap mediator dan mengurangi keakuratan definisi aktivitas biologis. Namun demikian, metode ini ideal untuk menguji aktivitas biologis spesifik mediator rekombinan.

Penentuan kuantitatif sitokin dengan antibodi.

Cytokine-diproduksi oleh immunokompeten dan jenis sel sitokin lainnya dilepaskan ke ruang antar sel untuk implementasi paracroid dan interaksi pensinyalan otokrin. Pada konsentrasi protein-protein ini dalam serum atau media terkondisi, seseorang dapat menilai sifat dari proses patologis dan tentang kelebihan atau kurangnya fungsi sel tertentu pada pasien. Metode untuk menentukan sitokin dengan antibodi spesifik hari ini adalah sistem paling umum untuk deteksi protein ini. Metode-metode ini telah melewati serangkaian modifikasi menggunakan label yang berbeda (radioisotop, fluorescent, superiminescent, enzim, dll.). Jika metode radioisotop memiliki sejumlah kerugian yang terkait dengan penggunaan label radioaktif dan waktu yang dibatasi oleh waktu, kemungkinan menggunakan reagen berlabel (paruh), maka metode immunoassima menemukan distribusi yang lebih luas. Mereka didasarkan pada memvisualisasikan produk yang tidak larut dari reaksi enzimatik, menyerap cahaya dari panjang gelombang yang diketahui, jumlah yang setara dengan konsentrasi zat yang ditentukan. Antibodi yang diterapkan pada basis polimer padat digunakan untuk mengikat zat-zat yang diukur, dan untuk visualisasi - antibodi yang terkonjugasi dengan enzim, sebagai aturan, alkali fosfatase atau peroksidase lobak. Keuntungan dari metode ini jelas: ini adalah akurasi tinggi untuk menentukan dengan kondisi standar untuk menyimpan reagen dan prosedur, analisis kuantitatif, reproduktifitas. Kerugiannya meliputi rentang terbatas konsentrasi yang ditentukan, sebagai akibat dari mana semua konsentrasi melebihi ambang tertentu dianggap sama dengannya. Perlu dicatat bahwa waktu yang dihabiskan untuk pelaksanaan metode bervariasi tergantung pada rekomendasi pabrikan. Namun, bagaimanapun, kita berbicara tentang beberapa jam yang diperlukan untuk inkubasi dan pencucian reagen. Selain itu, bentuk sitokin laten dan terkait ditentukan, yang, pada konsentrasi mereka, dapat secara signifikan melebihi formulir bebas, terutama bertanggung jawab atas aktivitas biologis mediator. Oleh karena itu, metode ini diinginkan untuk digunakan bersama dengan metode untuk menilai aktivitas biologis mediator. Modifikasi lain dari metode immunoassay, yang telah banyak digunakan - metode elektrokembiluminescent (EHL) definisi protein oleh antibodi, berlabel ruthenium dan biotin. Metode ini memiliki keunggulan berikut dibandingkan dengan Radioisotop dan immuno-immimensional: Kesederhanaan eksekusi, waktu yang singkat dari eksekusi teknik, tidak ada prosedur pencucian, volume sampel kecil, berbagai konsentrasi sitokin serum, sensitivitas tinggi, sensitivitas tinggi, dari metode dan reprodukibilitasnya. Metode yang dipertimbangkan dapat digunakan untuk menggunakan baik dalam penelitian dan klinis. Metode berikut untuk mengevaluasi sitokin di lingkungan biologis didasarkan pada teknologi fluorimetri aliran. Ini memungkinkan Anda untuk secara bersamaan mengevaluasi dalam sampel ke ratusan protein. Saat ini menciptakan kit komersial untuk menentukan hingga 17 sitokin. Namun demikian, keuntungan dari metode ini ditentukan oleh kerugiannya. Pertama, ini adalah kompleksitas pemilihan kondisi optimal untuk menentukan beberapa protein, kedua, produk sitokin adalah kaskade dengan puncak produk pada waktu yang berbeda. Oleh karena itu, definisi sejumlah besar protein secara bersamaan tidak selalu informatif. Total kebutuhan metode immunoassay menggunakan yang disebut Sandwich, adalah pilihan menyeluruh dari sepasang antibodi, yang memungkinkan untuk menentukan bentuk bebas atau terikat dari protein yang dianalisis, yang memaksakan metode pembatasan ini, dan yang harus selalu diperhitungkan ketika menafsirkan data yang diperoleh . Metode-metode ini menentukan total produksi sitokin dengan sel yang berbeda, pada saat yang sama tentang produk antigensical sitokin oleh sel immunokompeten dapat dinilai hanya diduga. Saat ini, sistem Elispot telah dikembangkan (imunospot yang disukai enzim), yang sangat menghilangkan kekurangan ini. Metode ini memungkinkan untuk mengevaluasi produksi sitokin pada tingkat sel individu. Resolusi tinggi dari metode ini memungkinkan untuk mengevaluasi produk sitokin yang distimulasi antigen, yang sangat penting untuk mengevaluasi respon imun tertentu. Selanjutnya, banyak digunakan untuk keperluan ilmiah, adalah definisi intraseluler dari sitokin dengan aliran sitofluorimetri. Manfaatnya jelas. Kita dapat secara fenotip menggambarkan populasi sel-sel produksi sitokin dan / atau menentukan spektrum sitokin yang dihasilkan oleh sel individu, sedangkan dimungkinkan untuk karakteristik kuantitatif relatif dari produk ini. Pada saat yang sama, metode yang dijelaskan cukup rumit dan membutuhkan peralatan yang mahal. Seri metode berikut, yang digunakan terutama untuk tujuan ilmiah adalah metode imunohistokimia menggunakan antibodi monoklonal berlabel. Keuntungannya jelas - penentuan produk sitokin langsung di jaringan (in situ), di mana berbagai reaksi imunologis terjadi. Namun, metode yang dipertimbangkan sangat melelahkan dan tidak memberikan data kuantitatif yang akurat.

Penentuan sitokin dengan metode enzim immunoassay.

CJSC "Best" di bawah bimbingan ini Ryabicheva, n.a. Varaksin, n.v. Timofeeva, M.Yu. Mustual secara aktif bekerja ke arah menentukan sitokin. Sitokin adalah sekelompok mediator polipeptida, sering glikosilasi, dengan berat molekul 8 hingga 80 CD. Sitokin terlibat dalam pembentukan dan regulasi reaksi perlindungan organisme dan homeostasisnya. Mereka terlibat dalam semua hubungan respons imun humoral dan seluler, termasuk diferensiasi sel-sel pendahulu immunokompeten, representasi antigen, aktivasi sel, dan proliferasi, ekspresi molekul adhesi dan respons fase tajam. Beberapa dari mereka dapat menunjukkan banyak efek biologis sehubungan dengan berbagai sel target. Efek sitokin pada sel dilakukan dengan cara-cara berikut: Autokrin - pada sel, mensintesis dan mengeluarkan sitokin ini; Paraakrinno - pada sel yang terletak di dekat sel-sel produsen, misalnya, dalam fokus peradangan atau di organ limfoid; Endokrin - jarak jauh - pada sel-sel organ dan jaringan apa pun setelah sitokin memasuki sirkulasi darah. Pendidikan dan pelepasan sitokin biasanya terjadi secara singkat dan sulit diatur. Sitokin mempengaruhi sel, mengikat reseptor spesifik pada membran sitoplasma, menyebabkan kaskade reaksi ini menyebabkan induksi, memperkuat atau menekan aktivitas sejumlah gen yang dapat disesuaikan gen. Untuk sitokin, sifat fungsi yang kompleks dari fungsi ditandai, di mana produk salah satu dari mereka mempengaruhi pembentukan atau manifestasi dari aktivitas sejumlah lainnya. Sitokin adalah mediator lokal, oleh karena itu disarankan untuk mengukur level mereka dalam jaringan yang sesuai setelah ekstraksi protein jaringan dari biopsi masing-masing organ atau dalam cairan alami: air seni, cairan sobek, kantong hutan belantara, kerahasiaan bronkinal, ejakulasi , mencuci dari rongga, cairan tulang belakang atau sinovial dan lebih. Informasi tambahan tentang keadaan sistem kekebalan tubuh dapat diperoleh ketika mempelajari kemampuan sel darah ke produk sitokin secara in vitro. Kadar sitokin plasma mencerminkan keadaan saat ini dari sistem kekebalan tubuh dan pengembangan reaksi perlindungan vivo. Produk spontan dari sitokin budaya periode mononuklear dari darah perifer memungkinkan kita untuk memperkirakan keadaan sel yang sesuai. Peningkatan produksi sitokin spontan menunjukkan bahwa sel-sel sudah diaktifkan oleh Antigen in vivo. Produk sitokin yang diinduksi memungkinkan untuk memperkirakan potensi kemampuan sel yang sesuai untuk merespons stimulasi antigenik. Pengurangan induksi sitokin in vitro, misalnya, dapat berfungsi sebagai salah satu tanda dari kondisi imunodefisiensi. Oleh karena itu, baik perwujudan kadar sitokin baik dalam darah yang bersirkulasi dan selama produksi mereka oleh budaya sel penting dari sudut pandang karakteristik imuntoraktivitas seluruh tubuh dan fungsi unit-unit takunture individu. Sampai baru-baru ini, beberapa kelompok peneliti terlibat dalam studi sitokin di Rusia, karena metode penelitian biologis sangat melelahkan, dan mengimpor set imunokimia dengan cara yang sangat mahal. Dengan munculnya set immunoassay domestik yang tersedia, dokter praktisi menunjukkan lebih banyak dan lebih banyak minat dalam mempelajari profil sitokin. Saat ini, signifikansi diagnostik estimasi tingkat sitokin adalah untuk menetapkan fakta meningkatkan atau mengurangi konsentrasi mereka pada pasien tertentu dengan penyakit tertentu. Selain itu, disarankan untuk menentukan konsentrasi sitokin berlawanan dan pro-inflamasi dalam dinamika pengembangan patologi, untuk menilai keparahan dan prediksi penyakit. Misalnya, kandungan sitokin dalam darah perifer ditentukan oleh periode eksaserbasi, mencerminkan dinamika proses patologis dengan penyakit ulseratif dan penyakit lain pada saluran pencernaan. Di awal eksaserbasi, peningkatan isi interleukin-1bet (IL-1BET), interleukin-8 (IL-8), kemudian meningkat konsentrasi interleukin-6 (IL-6), GAMMA Interferon (GAMMA INF) , Tumor Necrosis Factor -Alph (Alpha FNF). Konsentrasi interleukin-12 (IL-12), gamma inf, alfa-fno mencapai maksimumnya di tengah-tengah penyakit, sementara isi penanda fase tajam selama periode ini didekati dengan nilai normal. Pada puncak eksaserbasi, tingkat alfa-TNF secara signifikan melebihi konten interleukin-4 (IL-4), baik dalam serum maupun langsung dalam kain yang terkena zona yang hampir-gilaan, setelah itu ia mulai secara bertahap berkurang. Sebagai fenomena fase akut, peningkatan proses reparasi meningkatkan peningkatan konsentrasi IL-4. Dengan mengubah profil sitokin, seseorang dapat menilai efektivitas dan kelayakan kemoterapi. Ketika melakukan sitokinoterapi, misalnya, dengan terapi Alpha Interferon (alpha-inf), perlu untuk mengendalikan kedua tingkat isinya dalam darah yang bersirkulasi dan pengoperasian antibodi terhadap alpha inf. Diketahui bahwa ketika ada sejumlah besar antibodi ini, interferonoterapi tidak hanya berhenti efektif, tetapi juga dapat menyebabkan penyakit autoimun. Baru-baru ini, obat-obatan baru telah dikembangkan dan diimplementasikan dalam praktik, satu cara atau lain mengubah status sitokin tubuh. Misalnya, untuk pengobatan rheumatoid arthritis, obat berdasarkan antibodi terhadap alpha-flops diusulkan, dirancang untuk menghilangkan alpha-flop yang berpartisipasi dalam penghancuran jaringan ikat. Namun, baik dengan data kami maupun pada sastra, jauh dari semua pasien dengan rheumatoid arthritis kronis, tingkat alpha-fnf meningkat, oleh karena itu, untuk kelompok pasien ini, penurunan tingkat alpha-flo bahkan dapat memperburuk Ketidakseimbangan sistem kekebalan tubuh. Dengan demikian, sitokinoterapi yang benar menyiratkan kontrol status sitokin tubuh selama perawatan. Peran pelindung sitokin pro-inflamasi dimanifestasikan secara lokal dalam fokus peradangan, bagaimanapun, produk sistemik mereka tidak mengarah pada pengembangan kekebalan anti-infeksi dan tidak mencegah perkembangan syok bakteri-toksik, yang menyebabkan mortalitas dini. Pasien bedah dengan komplikasi septik purulen. Dasar patogenesis infeksi bedah adalah peluncuran Cytokine Cascade, yang meliputi, di satu sisi, penghalang, dan di sisi lain - anti-inflamasi sitokin. Keseimbangan antara kedua lawan ini sebagian besar menentukan sifat aliran dan hasil dari penyakit septik purulen. Namun, menentukan konsentrasi darah dalam satu sitokin dari kelompok-kelompok ini (misalnya, alpha-TNF atau IL-4) tidak akan mencerminkan keadaan seluruh saldo sitokin. Oleh karena itu, perlu untuk secara simultan tingkat beberapa mediator (setidaknya 2-3 dari subkelompok yang berlawanan). Dalam CJSC "vektor-best", set reagen untuk penentuan kuantitatif saat ini dikembangkan dan dihasilkan secara seri: faktor nekrosis tumor-alpha (sensitivitas - 2 PG / mL, 0-250 PG / mL); Gamma Interferon (Sensitivitas - 5 PG / ML, 0-2000 PG / ML); Interleukin-4 (sensitivitas - 2 pg / ml, 0-400 pg / ml); Interleukin-8 (sensitivitas - 2 pg / ml, 0-250 pg / ml); Antagonis reseptor interleukin-1 (IL-1R) (sensitivitas - 20 pg / ml, 0-2500 pg / ml); Alpha Interferon (sensitivitas - 10 pg / ml, 0-1000 pg / ml); Antibodi autoimun ke Alpha Interferon (sensitivitas - 2 ng / ml, 0-500 ng / ml). Semua set dimaksudkan untuk menentukan konsentrasi sitokin ini dalam cairan biologis manusia, dalam budaya supernatan ketika mempelajari kemampuan budaya sel manusia ke sitokin in vitro. Prinsip analisis adalah "sandwich" -varians dari tiga tahap padat (waktu inkubasi - 4 jam) atau dua tahap (waktu inkubasi - 3,5 h) dari analisis immunoassay pada tablet. Analisis membutuhkan 100 μl fluida biologis atau budaya supernatan untuk satu lubang. Hasil Akuntansi - Spektrofotometrik pada panjang gelombang 450 nm. Dalam semua set kromogen - tetramethylbenzidine. Umur simpan set kami meningkat menjadi 18 bulan sejak tanggal rilis dan 1 bulan setelah dimulainya penggunaan. Analisis data sastra menunjukkan bahwa isi sitokin dalam plasma darah orang sehat bergantung pada definisi yang digunakan untuk definisi mereka dan dari wilayah tempat orang-orang ini hidup. Oleh karena itu, untuk mengetahui nilai-nilai konsentrasi sitokin normal, penghuni wilayah kami menganalisis sampel plasma acak (dari 80 hingga 400 sampel) dari donor darah praktis yang sehat, perwakilan dari berbagai kelompok sosial berusia 18 hingga 60 tahun tanpa manifestasi klinis. patologi somatik kasar dan tidak adanya HBsAg, antibodi terhadap HIV, virus hepatitis B dan C.

Faktor nekrosis tumor-alpha.

Alpha-fln adalah sitokin pro-inflamasi plamaotropik yang terdiri dari dua rantai B memanjang dengan berat molekul 17 CD dan melakukan fungsi peraturan dan efektor dalam respons imun dan peradangan. Produsen utama alpha-fnf adalah monosit dan makrofag. Cytokine ini juga dilepaskan oleh limfosit dan granulosit darah, pembunuh alami, garis sel T-limfositik. Induktor utama Alfa Fall adalah virus, mikroorganisme dan produk metabolik mereka, termasuk bakteri lipopolysaccharide. Selain itu, beberapa sitokin, seperti IL-1, IL-2, faktor kolonistimulasi granulocyte-macrofage, alfa dan info-beta, juga dapat melakukan peran induktor. Arah utama dari aktivitas biologis Alfa Fall: memanifestasikan sitotoksisitas selektif untuk beberapa sel tumor; Aktifkan granulosit, makrofag, sel endotel, hepatosit (protein fase pedas), osteoklas dan kondorasi (resorpor jaringan tulang dan tulang rawan), sintesis sitokin pro-inflamasi lainnya; Merangsang proliferasi dan diferensiasi: neutrofil, fibroblast, sel endotel (angiogenesis), sel hematopoietik, T-dan B-limfosit; meningkatkan aliran neutrofil dari sumsum tulang dalam darah; Ini memiliki aktivitas antitumor dan antivirus in vivo dan in vitro; Berpartisipasi tidak hanya dalam reaksi pelindung, tetapi juga dalam proses kehancuran dan reparasi yang terkait dengan peradangan; Ini berfungsi sebagai salah satu mediator penghancuran jaringan, biasanya dengan peradangan kronis yang panjang.

Ara. 1. Distribusi Tingkat Alpha-Flo

dalam plasma donor sehat.

Tingkat peningkatan alpha-FFO diamati dalam serum selama keadaan pasca-traumatis, dengan disfungsi paru, pelanggaran kehamilan normal, penyakit onkologi, asma bronkial. Tingkat alpha-trip 5-10 kali lebih tinggi dari norma diamati dalam eksaserbasi bentuk kronis hepatitis C. Selama eksaserbasi penyakit saluran pencernaan, konsentrasi alfa-foto dalam serum melebihi norma Rata-rata 10 kali, dan pada pasien individu - pada 75- 80 kali. Konsentrasi alfa-FNF yang tinggi ditemukan pada cairan serebrospinal pada pasien dengan multiple sclerosis dan meningitis serebrospinal, dan pada pasien dengan rheumatoid arthritis - dalam cairan sinovial. Hal ini memungkinkan untuk mengasumsikan partisipasi alpha-flo dalam patogenesis sejumlah penyakit autoimun. Frekuensi deteksi alfa jepit dalam serum, bahkan dengan peradangan parah, tidak melebihi 50%, dengan produk yang diinduksi dan spontan - hingga 100%. Kisaran konsentrasi alpha-flo adalah 0-6 pg / ml, rata-rata - 1,5 pg / ml (Gbr. 1).

Gamma Interferon.

Ara. 2. Distribusi Tingkat Info Gamma

dalam plasma donor sehat.

Interleukin-4.

IL-4 - glikoprotein dengan berat molekul 18-20 kd, penghambat alami peradangan. Seiring dengan gamma-info IL-4 adalah sitokin utama yang diproduksi oleh sel-T (terutama TN-2-limfosit). Ini mendukung saldo TH-1 / TH-2. Arah utama dari aktivitas biologis IL-4: meningkatkan eosinofilia, akumulasi sel-sel lemak, sekresi IgG4, dimediasi oleh respon imun Humoral TN-2-Cell; Ini memiliki aktivitas antitumor lokal, merangsang populasi T-limfosit T-limfosit sitotoksik dan infiltrasi tumor oleh eosinofil; Menekan pelepasan sitokin peradangan (alf-tnn, IL-1, IL-8) dan prostaglandin dari monosit aktif, produk sitokin dari TN-1-limfosit (IL-2, inframerah gamma, dll.).

Ara. 3. Distribusi level IL-4 dalam plasma

donor sehat.

Tingkat peningkatan kandungan IL-4 dalam serum dan dalam limfosit yang terstimulasi dapat diamati pada penyakit alergi (terutama pada saat eksaserbasi), seperti asma bronkial, rinitis alergi, polinosis, dermatitis atopik, pada penyakit saluran pencernaan. Level IL-4 juga terasa meningkat pada pasien dengan hepatitis C kronis (HGS). Selama periode eksaserbasi HSS, jumlahnya meningkat hampir 3 kali dibandingkan dengan norma, dan selama remisi HGS, tingkat IL-4 berkurang, terutama pada latar belakang pengobatan yang dilakukan oleh Rekombinan IL-2. Kisaran konsentrasi IL-4 adalah 0-162 PG / mL, rata-rata - 6,9 pg / ml, kisarannya normal - 0-20 pg / ml (Gbr. 3).

Interleukin-8.

IL-8 mengacu pada kemuncs, adalah protein dengan berat molekul 8 cd. IL-8 diproduksi oleh fagosit mononuklear, leukosit polimorfoid, sel endotel dan jenis sel lainnya dalam menanggapi berbagai insentif, termasuk bakteri dan virus dan produk-produk metabolisme mereka, termasuk sitokin pro-inflamasi (misalnya, IL-1, alf- Fno). Peran utama interleukin-8 adalah peningkatan leukosit chemotaxis. Ini memainkan peran penting dalam peradangan akut dan kronis. Tingkat tinggi IL-8 diamati pada pasien dengan infesses bakteri, penyakit kronis paru-paru, penyakit saluran pencernaan. Level IL-8 dalam plasma meningkat pada pasien dengan sepsis, dan konsentrasi tinggi berkorelasi dengan peningkatan mortalitas. Hasil pengukuran konten IL-8 dapat digunakan untuk mengontrol kemajuan pengobatan dan memperkirakan penyakit. Dengan demikian, peningkatan kandungan IL-8 terdeteksi dalam cairan sobek pada semua pasien dengan kursus ulkus kornea yang menguntungkan. Pada semua pasien dengan kursus rumit ulkus kornea, konsentrasi IL-8 adalah 8 kali lebih tinggi daripada pada pasien dengan kursus penyakit yang menguntungkan. Dengan demikian, isi sitokin pro-inflamasi (terutama IL-8) dalam cairan sobek di bawah ulkus kornea dapat digunakan sebagai kriteria prognostik untuk perjalanan penyakit ini.

Ara. 4. Distribusi level IL-8 di

plasma donor sehat (novosibirsk).

Menurut data kami dan sastra, orang sehat dalam serum darah IL-8 sangat jarang; Produk spontan dari darah mononuklear IL-8 diamati pada 62%, dan diinduksi - 100% donor sehat. Kisaran konsentrasi IL-8 adalah 0-34 pg / ml, rata-rata - 2 pg / ml, kisarannya normal - 0-10 pg / ml (Gbr. 4).

Ara. 5. Distribusi level IL-8 dalam plasma

donor Sehat (Serbitsovsk).

Antagonis interleukin-1 reseptor.

IL-1R mengacu pada sitokin, adalah oligopeptide dengan berat molekul 18-22 kd. IL-1 adalah inhibitor IL-1 endogen, yang diproduksi oleh makrofag, monosit, neutrofil, fibroblast dan sel epitel. IL-1R menekan aktivitas biologis interleukin IL-1Alph dan IL-1BET, bersaing dengan mereka untuk mengikat reseptor seluler.

Ara. 6. Distribusi level IL-1

dalam plasma donor sehat

Produk IL-1R merangsang banyak sitokin, produk virus dan protein fase akut. IL-1R dapat secara aktif diekspresikan dalam fokus inflamasi dengan banyak penyakit kronis: dengan rheumatoid dan radang sendi kronis, lupus merah sistemik, lesi iskemik otak, penyakit radang usus, asma bronkial, pielonefritis, psoriasis dan lainnya. Dalam sepsis, peningkatan tertinggi dalam IL-1R dicatat - hingga 55 ng / mL dalam beberapa kasus, dan ditemukan bahwa peningkatan konsentrasi IL-1R berkorelasi dengan perkiraan yang menguntungkan. Tingkat tinggi IL-1 diamati pada wanita yang menderita obesitas yang tinggi, dan tingkat ini berkurang secara signifikan dalam waktu 6 bulan setelah sedot lemak. Kisaran konsentrasi IL-1R adalah 0-3070 PG / mL, rata-rata - 316 pg / ml. Rentang normal - 50-1000 pg / ml (Gbr. 6).

Interferon alpha.

Alfa-inf adalah protein kapur monomer dengan berat molekul 18 CD, yang disintesis terutama oleh leukosit (dalam limfosit, monosit). Cytokine ini juga dapat diproduksi pada kenyataannya dengan segala jenis sel dalam menanggapi eksitasi yang sesuai, infeksi virus yang kuat dapat dalam stimulan kuat dari inflasi alfa. Alpha menginformasikan meliputi: virus dan produk mereka, di antaranya tempat terdepan ditempati oleh RNA terdampar ganda yang diproduksi selama replikasi virus, serta bakteri, mikoplasma dan protozoa, sitokin dan faktor pertumbuhan (seperti IL-1, IL-2, Alpha -fernakkan, faktor positif koloni, dll.). Reaksi perlindungan awal dari respons imun antibakteri nonspesifik dari tubuh mencakup induksi info alfa dan beta. Dalam hal ini, itu diproduksi oleh sel-sel yang menyajikan antigen (makrofag) yang menangkap bakteri. Interferon (termasuk Inf alpha) memainkan peran penting dalam tautan non-spesifik dari respons imun antivirus. Mereka meningkatkan resistensi antivirus, disebabkan oleh sintesis enzim yang menghambat pembentukan asam nukleat dan protein virus. Selain itu, mereka memiliki efek imunomodulator, meningkatkan ekspresi sel antigen dari kompleks histokompatibilitas utama. Perubahan konten info alfa terungkap dalam hepatitis dan sirosis etiologi virus. Pada saat memperburuk infeksi virus, konsentrasi sitokin ini meningkat secara signifikan pada sebagian besar pasien, dan selama periode rekonstruksi, turun ke tingkat normal. Ketergantungan antara tingkat serum info alfa dan tingkat gravitasi dan durasi infeksi influenza ditunjukkan.

Ara. 7. Distribusi Info Alpha

dalam plasma donor sehat.

Peningkatan konsentrasi info alfa dicatat dalam serum sebagian besar pasien yang menderita penyakit autoimun, seperti poliartritis, rheumatoid arthritis, spondylosis, artritis psoriatik, polymalgia rematik dan sclerodermia, lupus sistemik dan vaskulitis sistemik. Tingkat tinggi interferon ini juga diamati pada pasien individu selama eksaserbasi penyakit ulseratif dan empedu. Rentang konsentrasi info alfa berjumlah 0-93 PG / ML, rata-rata 20 PG / mL. Rentang normal - hingga 45 pg / ml (Gbr. 7).

Antibodi ke alpha inf.

Antibodi untuk infraksi alfa dapat dideteksi dalam serum dengan lupus eritematosa somatik. Induksi antibodi spontan terhadap alfa infrane juga diamati pada serum pasien dengan berbagai bentuk tumor kanker. Dalam beberapa kasus, antibodi pada infrace alfa ditemukan pada serum orang yang terinfeksi HIV, serta pada cairan serebrospinal dan serum dengan meningitis selama periode fase akut, dalam poliartritis SERA dalam bentuk kronis.

Ara. 8. Distribusi Tingkat Antibodi untuk Alpha Infra

dalam plasma donor sehat.

Info Alfa adalah salah satu obat terapeutik antivirus dan antitumor yang efektif, tetapi penggunaan jangka panjangnya dapat menyebabkan produk antibodi spesifik terhadap alpha inf. Ini mengurangi efektivitas pengobatan, dan dalam beberapa kasus itu menyebabkan berbagai efek samping: dari flu seperti hingga pengembangan penyakit autoimun. Mengingat hal ini, dengan terapi info, penting untuk mengontrol tingkat antibodi terhadap info alfa pada tubuh pasien. Pendidikan mereka tergantung pada jenis obat yang digunakan dalam terapi, durasi perawatan dan jenis penyakit. Kisaran konsentrasi antibodi ke alfa-info berjumlah 0-126 ng / ml, rata-rata - 6,2 ng / ml. Rentang normal - hingga 15 ng / ml (Gbr. 8). Evaluasi tingkat sitokin menggunakan set reagen, diproduksi secara seri di CJSC "Vector-Best", memungkinkan cara baru untuk mempelajari kondisi sistem kekebalan tubuh dalam praktik klinis.

Obat imunotropik berbasis sitokine.

Pekerjaan yang menarik. SS Simbirtseva, GNII dari persiapan biologis yang bersih secara khusus dari Kementerian Kesehatan Rusia, St. Petersburg). Thecytin dapat dialokasikan untuk sistem regulasi independen baru dari fungsi dasar tubuh, yang ada bersama dengan gugup dan endokrin. Peraturan dan terutama dikaitkan dengan memelihara homeostasis dalam pengenalan patogen dan gangguan integritas jaringan. Kelas molekul regulasi baru ini diciptakan secara alami selama jutaan tahun evolusi dan memiliki kemungkinan tidak terbatas untuk digunakan sebagai obat. Di bawah sistem kekebalan sitokin, hubungan antara reaksi perlindungan nonspesifik dan kekebalan tertentu, bertindak di kedua arah. Pada tingkat organisme sitokin, ada hubungan antara kekebalan tubuh, gugup, endokrin, hematopoietik dan sistem lain dan berfungsi untuk melibatkan mereka ke dalam organisasi dan regulasi reaksi perlindungan. Kekuatan pendorong studi intensif sitokin selalu merupakan prospek yang menjanjikan dari penggunaan klinis mereka untuk pengobatan penyakit yang meluas, termasuk kanker, penyakit menular dan imunodefisien. Di Rusia, beberapa persiapan sitokin terdaftar, termasuk interferon, faktor-faktor positif koloni, interleukin, dan antagonis mereka, faktor nekrosis tumor. Semua obat sitokin dapat dibagi menjadi alami dan rekombinan. Alami adalah persiapan berbagai tingkat pemurnian yang berasal dari media kultur sel eukariotik yang dirangsang, terutama sel manusia. Kerugian utama adalah tingkat pemurnian yang rendah, ketidakmungkinan standardisasi karena sejumlah besar komponen, penggunaan komponen darah dalam produksi komponen darah. Rupanya, masa depan terapi sitokin dikaitkan dengan persiapan genen-rekayasa yang diperoleh dengan menggunakan prestasi bioteknologi terbaru. Selama dua dekade terakhir, gen sebagian besar sitokin adalah analog kloning dan rekombinan diperoleh, sepenuhnya mengulangi sifat biologis molekul alami. Dalam praktik klinis ada tiga bidang utama penggunaan sitokin:

1) Terapi sitokin untuk mengaktifkan reaksi pelindung organisme, imunomodulasi, atau mengisi kembali kurangnya sitokin endogen,

2) Terapi imunosupresif anticycinic yang bertujuan menghalangi aksi biologis sitokin dan reseptor mereka,

3) Sitokin Genotherapy untuk meningkatkan imunitas antitumor atau koreksi cacat genetik dalam sistem sitokin.

Sejumlah sitokin dapat digunakan di klinik untuk aplikasi sistemik dan lokal. Administrasi sistemik membenarkan dirinya dalam kasus-kasus di mana perlu untuk memastikan tindakan sitokin di beberapa organ untuk aktivasi imunitas yang lebih efisien atau mengaktifkan sel-sel target yang berbeda di berbagai bagian tubuh. Dalam kasus lain, aplikasi lokal memiliki sejumlah keunggulan, karena memungkinkan Anda untuk mencapai konsentrasi lokal yang tinggi dari awal saat ini, dengan sengaja mempengaruhi organ target dan menghindari manifestasi sistemik yang tidak diinginkan. Saat ini, sitokin dianggap sebagai salah satu obat paling menjanjikan untuk digunakan dalam praktik klinis.

Kesimpulan.

Dengan demikian, saat ini tidak ada keraguan bahwa sitokin adalah faktor penting dari imunopatogenesis. Studi tingkat sitokin memungkinkan untuk memperoleh informasi tentang aktivitas fungsional dari berbagai jenis sel imunokompeten, rasio proses aktivasi jenis-T jenis I dan II, yang sangat penting dalam diagnosis diferensial angka proses infeksius dan imunopatologis. Sitokin adalah protein spesifik dimana sel-sel sistem kekebalan tubuh dapat saling bertukar dan mengimplementasikan interaksi. Saat ini, lebih dari seratus sitokin yang berbeda telah ditemukan, yang umumnya dibagi menjadi pro-inflamasi (memicu peradangan) dan anti-inflamasi (mencegah perkembangan peradangan). Jadi, berbagai fungsi biologis sitokin dibagi menjadi tiga kelompok: mereka mengendalikan pengembangan dan homeostasis sistem kekebalan tubuh, memantau pertumbuhan dan diferensiasi sel darah (sistem hematopopower) dan mengambil bagian dalam reaksi pelindung tubuh yang tidak spesifik , berdampak pada proses inflamasi, koagulasi darah, tekanan darah.

Daftar literatur yang digunakan.

S.V. Belmer, A.s. Simbirts, O.V. Golovnko, l.v. Bubnova, L.M. Carpina, N.E. Schigolev, T.L. Mikhailova. / Universitas Medis Negeri Rusia GSC Coloproctology, Moskow dan Gnilli dari Biopreparat Murni, St. Petersburg.

S.V. Sennikov, A.n. Silkov // Magazine "sitokin dan peradangan", 2005, No. 1, No. 1, No. 1. P.22-27.

T.G. Ryabicheva, n.a. Varaksin, n.v. Timofeeva, M.Yu. Musknikov, bahan pekerjaan CJSC "Best".

A. S. S. SIMBIRSTEV, GNILLI dari produk-produk biologis murni dari Kementerian Kesehatan Rusia, St. Petersburg.

Ketlinsky S.A., Simbirtsev A.s. Gosnia Terutama Biopreparat Murni, St. Petersburg.

T.A. shumatova, v.b.shumatov, mis. Markelova, L.G.Sukhotepelya. Departemen Anestesiologi dan Resusitasi Universitas Medis Negara Bagian Vladivostok.

Pekerjaan menggunakan bahan dari situs http://humbio.ru/humbio/spid/000402c2.htm

agen penyebab tertentu dari penyakit menular. Jadi, Norsulfazole ...

1. Kekebalan Antiviral Mekanisme Seluler Molekuler, Pola Pengembangan dan Immuneto

   Abstrak \u003e\u003e Kedokteran, Kesehatan

   ... "Situs" menunjukkan area tertentu didefinisikan polipeptida (antigen), yang dengannya ... tahap awal. Sitokin. dan kemokin. Lainnya sitokin., selain interferon, ... mereka diproduksi oleh mereka per unit waktu sitokin. Menentukan intensitas proliferasi dan ...

2. Teliti alasan untuk pengembangan fibrosis sumsum tulang pada penyakit myeloproliferatif dengan menganalisis dampak faktor trombosit pada sel induk mesin

   Pekerjaan Rumah \u003e\u003e Kedokteran, Kesehatan

   Konsentrasi yang berbeda; - Kuantitatif definisi Protein dalam sistem eksperimen, ... menyebabkan tindakan yang berkepanjangan sitokin.Apa yang meningkatkan proses fibrosis ... trombosit. Juga meningkat konten sitokin. Ditemukan di urin ...

3. Patogenesis tuberkulosis pada manusia

   Abstrak \u003e\u003e Kedokteran, Kesehatan

   Tetapi pencernaan mungkin. Tertentu Peran dalam pemutaran infeksi aerogenik ... drama, dikeluarkan oleh makrofag dan monosit sitokin. - Tumor Necrosis Factor (TNF). ... ion, setiap sel memiliki didefinisikan Sistem menyediakan zat transportasi ...

). Karena fakta bahwa mereka mengaktifkan atau memodulasi sifat-sifat proliferatif sel-sel kelas ini, mereka dinamai imunocytinis. Setelah diketahui bahwa senyawa ini berinteraksi tidak hanya dengan sel-sel sistem kekebalan tubuh, nama mereka menurun menjadi sitokin, termasuk faktor kolonulasi (CSF) dan banyak lainnya (lihat agen vazoactive).

Sitokin [Yunani. Kytos. - Kapal di sini - sel dan KINEO. - Memindahkan, mendorong] - kelompok besar dan beragam ukuran kecil (berat molekul 8 hingga 80 kDa) dari protein natural mediator - molekul perantara ("protein komunikasi") berpartisipasi dalam transmisi sinyal interlular terutama dalam sistem kekebalan tubuh. Sitokin mencakup faktor nekrosis tumor, interferon, sejumlah interleukin, dan sitokin lainnya, yang disintesis oleh limfosit dan merupakan regulator proliferasi dan diferensiasi, khususnya sel hematopoietik dan sel-sel sistem kekebalan tubuh, disebut limfosin. Istilah "sitokin" diusulkan oleh S. Kenom et al. Pada tahun 1974.

Semua sel sistem kekebalan tubuh memiliki fungsi tertentu dan beroperasi dalam interaksi yang jelas konsisten, yang disediakan oleh zat aktif biologis khusus - sitokin - regulator reaksi imun. Sitokin adalah protein spesifik dimana berbagai sel sistem kekebalan tubuh dapat saling bertukar dan mengoordinasikan tindakan. Set dan jumlah sitokin yang bertindak pada reseptor permukaan sel adalah "medium sitokin" - mewakili matriks berinteraksi dan sering berubah sinyal. Sinyal-sinyal ini kompleks karena beragam reseptor sitokin dan karena fakta bahwa masing-masing sitokin dapat mengaktifkan atau menekan beberapa proses, termasuk sintesisnya sendiri dan sintesis sitokin lainnya, serta pembentukan dan penampilan sel-sel reseptor sitokin . Untuk berbagai kain, "lingkungan sitokin" yang sehat adalah karakteristik. Lebih dari seratus sitokin yang berbeda ditemukan.

Sitokin adalah elemen penting dalam interaksi limfosit yang berbeda di antara mereka sendiri dan dengan fagosit (Gbr. 4). Melalui sitokin yang membantu mengoordinasikan operasi berbagai sel yang terlibat dalam respon imun.

Sejak pembukaan pada tahun 1970-an, lebih dari seratus zat aktif biologis telah ditemukan hingga saat ini. Berbagai sitokin mengatur proliferasi dan diferensiasi sel imunokompeten. Dan jika pengaruh sitokin pada proses yang ditentukan telah dipelajari dengan cukup baik, maka data tentang tindakan sitokin pada apoptosis muncul relatif baru-baru ini. Mereka harus diperhitungkan selama penggunaan klinis sitokin.

Alarm antar sel dalam sistem kekebalan dilakukan dengan interaksi sel kontak langsung atau menggunakan mediator interaksi antar sel. Ketika mempelajari diferensiasi sel imunokompeten dan hematopoietik, serta mekanisme interaksi antarel, membentuk respon imun, dan kelompok besar dan beragam mediator larut dalam sifat protein - molekul perantara ("protein komunikasi") berpartisipasi dalam transmisi antar sel Sinyal - sitokin dibuka. Hormon biasanya dikecualikan dari kategori ini berdasarkan karakter endokrin (dan bukan paracryn atau otokrin) dari tindakan mereka. (Lihat sitokin: mekanisme sinyal hormonal). Bersama dengan hormon dan neurotator, mereka merupakan dasar bahasa alarm kimia, dimana morfogenesis dan regenerasi jaringan diatur dalam organisme multiseluler. Dalam regulasi positif dan negatif dari respons imun, mereka memiliki peran sentral. Hingga saat ini, orang tersebut telah ditemukan dan dipelajari pada satu derajat atau yang lain, seperti yang disebutkan di atas, lebih dari seratus sitokin, dan terus-menerus muncul pesan tentang pembukaan yang baru. Bagi sebagian orang, analog rekayasa genetika diperoleh. Sitokin bertindak melalui aktivasi reseptor sitokin.

Seringkali, pembagian sitokin ke sejumlah keluarga dilakukan bukan oleh fungsinya, tetapi dengan sifat struktur tiga dimensi, yang mencerminkan kesamaan intragroup pada konformasi dan urutan asam amino dari reseptor sitokin sel tertentu (lihat " reseptor ke sitokin "). Beberapa dari mereka diproduksi oleh sel T (lihat "sitokin yang diproduksi oleh sel-T"). Aktivitas biologis utama sitokin adalah regulasi respons imun pada semua tahap perkembangannya di mana mereka memainkan peran sentral. Secara umum, seluruh kelompok besar regulator endogen ini menyediakan berbagai macam proses, seperti:

Induksi sitotoksisitas dari makrofag,

Banyak penyakit parah menyebabkan peningkatan signifikan pada tingkat IL-1 dan FNO Alpha. Sitokin ini berkontribusi pada aktivasi fagosit, migrasi mereka ke tempat peradangan, serta pelepasan mediator inflamasi - turunan lipid, yaitu, prostaglandin E2, thromboxsanes dan faktor aktivasi. Selain itu, mereka secara langsung atau tidak langsung menyebabkan ekspansi arteriol, sintesis glikoprotein perekat, mengaktifkan limfosit T-dan B. IL-1 meluncurkan sintesis IL-8, yang berkontribusi pada hemotaxis monosit dan neutrofil dan keluar dari enzim dari neutrofil. Hati mengurangi sintesis albumin dan sintesis protein dari fase akut peradangan ditingkatkan, termasuk protease inhibitor, komponen komplemen, fibrinogen, cerululzmin, ferritin dan haptoglobin. Tingkat protein C-JET, yang berikatan dengan sel yang rusak dan mati, serta beberapa mikroorganisme, dapat meningkat 1000 kali. Dimungkinkan juga untuk secara signifikan meningkatkan konsentrasi amiloid A dalam serum dan deposisi pada berbagai organ yang mengarah ke amiloidosis sekunder. Mediator paling penting dari fase akut peradangan adalah IL-6, meskipun IL-1 dan FNF Alpha juga dapat memanggil perubahan yang dijelaskan dalam fungsi hati. IL-1 dan FNA Alpha memperkuat pengaruh masing-masing pada manifestasi lokal dan umum peradangan, oleh karena itu, kombinasi dari dua sitokin ini bahkan dalam dosis kecil dapat menyebabkan kekurangan poliorgan dan hipotensi arteri yang persisten. Penindasan aktivitas salah satu dari mereka menghilangkan interaksi ini dan secara signifikan meningkatkan kondisi pasien. IL-1 mengaktifkan T-dan B-limfosit pada 39 * dengan di 37 * s. IL-1 dan TNF Alpha menyebabkan penurunan massa tubuh yang tak bernyawa dan hilangnya nafsu makan, yang mengarah ke Cachexia dengan demam panjang. Sitokin ini jatuh ke aliran darah hanya untuk waktu yang singkat, tetapi ternyata cukup untuk meluncurkan produk IL-6. IL-6 terus-menerus hadir dalam darah, sehingga konsentrasinya lebih konsisten dengan beratnya demam dan manifestasi infeksi lainnya. Namun demikian, IL-6, berbeda dengan IL-1 dan FNF Alpha, tidak dianggap sitokin mematikan.

Ringkasan. Sitokin adalah protein kecil yang bertindak Autokrin (I.E., pada sel yang memproduksi mereka) atau paraconno (pada sel yang terletak di dekat). Formasi dan pelepasan molekul yang sangat aktif ini terjadi secara singkat dan dapat disesuaikan dengan kaku. Sitokin yang disintesis dengan limfosit dan merupakan regulator proliferasi dan diferensiasi, khususnya, sel hematopoietik dan sel-sel sistem kekebalan juga disebut limfosin dan

Bab ini akan mempertimbangkan pendekatan terintegrasi dalam evaluasi sistem sitokin menggunakan metode penelitian modern yang dijelaskan sebelumnya.

Awalnya, kami akan menyajikan ide-ide utama tentang sistem sitokin.

Sitokin saat ini dianggap sebagai molekul proteinopeptida yang diproduksi oleh berbagai sel tubuh dan melaksanakan interaksi antar sel dan intersistem. Sitokin adalah regulator siklus hidup sel universal, mereka mengontrol proses diferensiasi, proliferasi, aktivasi fungsional dan apoptosis yang terakhir.

Sitokin yang diproduksi oleh sel-sel sistem kekebalan namanya disebut imunocytes; Mereka adalah kelas mediator peptida yang larut dari sistem kekebalan yang diperlukan untuk pengembangan, operasi, dan interaksi dengan sistem tubuh lainnya (Kovalchuk L.V. et al., 1999).

Sebagai molekul peraturan, sitokin memainkan peran penting dalam pelaksanaan reaksi imunitas kongenital dan adaptif, memastikan hubungan mereka, mengendalikan hemopo, peradangan, penyembuhan luka, pembentukan pembuluh darah baru (angiogenesis) dan banyak proses vital lainnya.

Saat ini, ada beberapa klasifikasi sitokin yang berbeda yang memperhitungkan struktur, aktivitas fungsional, asal, jenis reseptor sitokin. Secara tradisional, sesuai dengan efek biologis, kelompok sitokin berikut dibuat.

1. Interleukins.(IL-1-IL-33) - Protein peraturan sekretori dari sistem kekebalan tubuh, memberikan interaksi media dalam sistem kekebalan tubuh dan hubungannya dengan sistem tubuh lainnya. Interleukin dipisahkan oleh aktivitas fungsional pada sitokin pro dan anti-inflamasi, faktor pertumbuhan limfosit, sitokin peraturan, dll.

3. Faktor Nekrosis Tumor (FLN)- Sitokin dengan tindakan sitotoksik dan peraturan: fno dan limfotoxins (LT).

4. Faktor Pertumbuhan Sel Hematopoietik- Faktor pertumbuhan sel induk (kit - ligan), IL-3, IL-7, IL-11, eritropoietin, trubopoietin, faktor kolonsimamen granulocytic-macrophageal - GM-CSF, Granulocytic KSF - Mr. KSF, Makrophagal

kSF - M-KSF).

5. Chemokina.- C, SS, CXC (IL-8), sh3c - chemotaxis regulator dari berbagai jenis sel.

6. Faktor pertumbuhan nelmfoid- Regulator pertumbuhan, diferensiasi dan aktivitas fungsional sel-sel dari berbagai aksesoris jaringan (faktor pertumbuhan fibroblast - FRF, faktor pertumbuhan sel endotel, faktor pertumbuhan epidermal - Efidermis EEF) dan mengubah faktor pertumbuhan (TFRβ, TFRα).

Antara lain, dalam beberapa tahun terakhir, faktor yang menghambat migrasi makrofag secara aktif dipelajari (faktor penghambat migrasi - mitos), yang dianggap sebagai neurogormon dengan aktivitas sitokin dan enzim (Suslov A.P., 2003; et al.,

Sitokin berbeda dalam struktur, aktivitas biologis dan sifat lainnya. Namun, bersama dengan perbedaan sitokin miliki sifat umumkarakteristik dari kelas molekul bioregulasi ini.

1. Sitokin adalah, sebagai aturan, polipeptida berat molekul molekul molekil glikasi (kurang dari 30 kd).

2. Sitokin diproduksi oleh sel-sel sistem kekebalan tubuh dan sel-sel lain (misalnya, endotelium, fibroblast, dll.) Menanggapi stimulus pengaktif (struktur molekul patogen, antigen, sitokin, dll.) Dan berpartisipasi dalam reaksi bawaan dan berpartisipasi dalam imunitas adaptif, mengatur kekuatan dan durasi mereka. Beberapa sitokin disintesis secara konstitusi.

3. Sekresi sitokin adalah proses waktu singkat. Sitokin tidak diselamatkan sebagai molekul yang diinformasikan, dan mereka

sintesis dimulai selalu dengan transkripsi gen. Sel-sel menghasilkan sitokin dalam konsentrasi rendah (picogram per mililiter).

4. Dalam kebanyakan kasus, sitokin diproduksi dan dioperasikan pada sel-sel target yang terletak di dekat (tindakan tahan pendek). Tempat utama sitokin - sinap interseluler.

5. Redundansisistem sitokin dimanifestasikan pada kenyataan bahwa setiap jenis sel dapat menghasilkan beberapa sitokin, dan setiap sitokin dapat dikeluarkan oleh berbagai sel.

6. Untuk semua sitokin adalah karakteristik pleotropy,atau polyfungsionalitas tindakan. Jadi, manifestasi tanda-tanda peradangan disebabkan oleh pengaruh IL-1, FNOα, IL-6, IL-8. Duplikasi fungsi memastikan keandalan sistem sitokin.

7. Pengaruh sitokin pada sel-sel target dimediasi oleh reseptor membran yang sangat spesifik, mewakili glikoprotein transmembran, yang terdiri, sebagai aturan, lebih dari satu subunit. Bagian ekstraseluler dari reseptor bertanggung jawab atas pengikatan sitokin. Ada reseptor yang menghilangkan kelebihan sitokin dalam fokus patologis. Ini adalah perangkap reseptor yang disebut. Reseptor larut adalah domain reseptor membran ekstraseluler yang dipisahkan oleh enzim. Reseptor yang larut mampu menetralkan sitokin, berpartisipasi dalam mengangkutnya ke fokus peradangan dan dalam menghilangkan dari tubuh.

8. Sitokin. bekerja pada prinsip jaringan.Mereka dapat bertindak terkoordinasi. Banyak fungsi yang dikaitkan dengan satu sitokin asli, ternyata, disebabkan oleh tindakan yang disepakati dari beberapa sitokin. (Sinergismetindakan). Contoh interaksi sinergis sitokin adalah stimulasi reaksi inflamasi (IL-1, IL-6 dan FNO), serta sintesis IGE

(IL-4, IL-5 dan IL-13).

Beberapa sitokin menginduksi sintesis sitokin lainnya (riam).Cascade dari aksi sitokin diperlukan untuk pengembangan reaksi inflamasi dan imun. Kemampuan beberapa sitokin untuk memperkuat atau melonggarkan produk-produk orang lain menentukan mekanisme peraturan positif dan negatif yang penting.

Efek antagonis dari sitokin, seperti produk IL-6, sebagai respons terhadap peningkatan konsentrasi FNO mungkin

mekanisme regulasi negatif untuk memantau perkembangan mediator ini selama peradangan.

Peraturan sitokin dari fungsi sel-sel target dilakukan dengan menggunakan mekanisme otokrin, paracryn atau endokrin. Beberapa sitokin (IL-1, IL-6, FNFα, dll.) Mampu berpartisipasi dalam implementasi semua mekanisme yang tercantum.

Jawaban sel pada efek sitokin tergantung pada beberapa faktor:

Dari jenis sel dan aktivitas fungsional awal mereka;

Dari konsentrasi sitokin lokal;

Dari hadapan molekul mediator lainnya.

Dengan demikian, sel-sel produksi, sitokin dan mereka reseptor spesifik pada sel target membentuk jaringan media tunggal. Ini adalah seperangkat peptida regulasi, dan bukan sitokin individu, menentukan respons akhir sel. Saat ini, sistem sitokin dianggap sebagai sistem regulasi universal pada tingkat organisme holistik, yang memastikan pengembangan reaksi perlindungan (misalnya, dalam infeksi).

Dalam beberapa tahun terakhir, telah ada gagasan tentang sistem sitokin menyatukan:

1) sel-sel produksi;

2) Sitokin yang larut dan antagonisnya;

3) Sel-sel target dan reseptornya (Gbr. 7.1).

Pelanggaran berbagai komponen sistem sitokin mengarah pada pengembangan berbagai proses patologis, dan oleh karena itu mengidentifikasi cacat dalam sistem peraturan ini penting untuk formulasi yang benar dari diagnosis dan menunjuk terapi yang memadai.

Awalnya, pertimbangkan komponen utama dari sistem sitokin.

Sel-produsen sitokin

I. Kelompok utama produsen sitokin dalam respons imun adaptif adalah limfosit. Sel orang tidak dikeluarkan oleh sitokin. Ketika pengakuan antigen dan dengan partisipasi interaksi reseptor (CD28-CD80 / 86 untuk T-limfosit dan CD40L untuk b-limfosit), sel diaktifkan, mengarah ke transkripsi gen sitokin, disiarkan dan sekresi peptida glikosilasi menjadi ruang antar sel.

Ara. 7.1.Sitokine System.

Pembantu-T CD4 diwakili oleh Subpolasi: TH0, TH1, TH2, TH17, TFH, yang berbeda dalam spektrum sitokin yang dikeluarkan sebagai tanggapan terhadap berbagai antigen.

Th0 menghasilkan berbagai macam sitokin dalam konsentrasi yang sangat rendah.

Arah diferensiasi th0.menentukan pengembangan dua bentuk respons imun dengan dominasi mekanisme humoral atau seluler.

Sifat antigen, konsentrasinya, lokalisasi dalam sel, jenis sel-sel yang menyajikan antigen dan serangkaian sitokin tertentu mengatur arah diferensiasi Th0.

Sel dendritik setelah penangkapan dan pemrosesan antigen adalah peptida antigenik sel th0 dan menghasilkan sitokin yang mengatur arah diferensiasi mereka menjadi sel-sel efektor. Peran sitokin individu dalam proses ini tercermin pada Gambar. 7.2. IL-12 menginduksi sintesis IFNγ T-lymphocytes dan] CHGK. IFNU memberikan diferensiasi dari Anda1, yang mulai mengeluarkan sitokin (IL-2, ILNU, IL-3, FNO, limfotoksin), mengatur pengembangan reaksi terhadap patogen intraseluler

(Hipersensitivitas tipe lambat (GZT) dan berbagai jenis sitotoksisitas sel).

IL-4 menyediakan yang membedakan pada TH2. Diaktifkan Th2 menghasilkan sitokin (IL-4, IL-5, IL-6, IL-13, dll.), Yang menentukan proliferasi B-limfosit, diferensiasi lebih lanjut ke dalam sel plasma, dan pengembangan reaksi Anti-Air Genesis , terutama pada patogen ekstraseluler.

IFNA secara negatif menyesuaikan fungsi sel-sel Th2 dan, sebaliknya, IL-4, IL-10, disekresi oleh T2, tekan fungsi TH1 (Gbr. 7.3). Mekanisme molekuler dari peraturan ini dikaitkan dengan faktor transkripsi. T-taruhan dan ekspresi stat4, ifna deterministik, mengarahkan diferensiasi sel T di sepanjang jalur TH1 dan menekan pengembangan Th2. IL-4 menginduksi ekspresi GATA-3 dan STAT6, yang, karenanya, memastikan konversi Naif You0 dalam sel-sel Th2 (Gbr. 7.2).

Dalam beberapa tahun terakhir, subpopulasi khusus helper T-Cells (TH17) yang memproduksi IL-17 telah dijelaskan. Anggota keluarga IL-17 dapat diekspresikan oleh sel memori yang diaktifkan (CD4CD45RO), sel U5T, sel NKT, neutrofil, monosit di bawah pengaruh IL-23, IL-6, TFRβ yang diproduksi oleh makrofag dan sel dendritik. Faktor diferensiasi utama pada manusia adalah ROR-C, pada tikus - ror-γ l. Peran kardinal IL-17 dalam pengembangan peradangan kronis dan patologi autoimun ditampilkan (lihat Gambar 7.2).

Selain itu, limfosit T dalam timus dapat dibedakan menjadi regulator sel alami (treg), mengekspresikan penanda permukaan CD4 + CD25 + dan faktor transkripsi Foxp3. Sel-sel ini mampu menekan respon imun, dimediasi oleh sel-sel TH1 dan Th2, dengan kontak antar sel yang langsung dan sintesis TFRβ dan IL-10.

Skema diferensiasi klon Th0 dan sitokin yang dikeluarkan oleh mereka diwakili dalam Gambar. 7.2 dan 7.3 (lihat juga CV. Plot).

Sel-T-sitotoksik (CD8 +), pembunuh alami - produksi sitokin yang lemah, seperti interferon, fno dan limfotoksin.

Aktivasi yang berlebihan dari salah satu subpopulasi TH dapat menentukan pengembangan salah satu perwujudan respon imun. Ketidakseimbangan kronis aktivasi ini dapat menyebabkan pembentukan kondisi imunopatologis yang terkait dengan manifestasi

alergi, patologi autoimun, proses inflamasi kronis, dll.

Ara. 7.2.Subpopulasi yang berbeda dari t-limfosit yang menghasilkan sitokin

Ii. Dalam sistem kekebalan kongenital, produsen utama sitokin adalah sel-sel seri myeloid. Menggunakan reseptor nilai tol (TLR), mereka mengenali struktur molekul serupa dari berbagai patogen, yang disebut pathogenast molecular paternes (ramp), seperti lipopolysaccharide (LPS) bakteri gram negatif, asam lipotheychic, peptidoglikan mikroorganisme gram-positif , Flagllin, DNA, kaya akan pengulangan SRGG yang tidak dihasilkan, dan lainnya sebagai hasilnya

interaksi dengan TLR ini diluncurkan oleh kaskade transmisi sinyal intraseluler, yang mengarah pada ekspresi gen dua kelompok utama sitokin: pro-inflamasi dan IFN tipe 1 (Gbr. 7.4, lihat juga col. inclock). Terutama, sitokin ini (IL-1, -6, -8, -12, FNO, GM-CSF, IFN, Chemokina, dll.) Menginduksi peradangan dan berpartisipasi dalam perlindungan tubuh dari infeksi bakteri dan virus.

Ara. 7.3.Spektrum sitokin yang dikeluarkan oleh sel Anda1 dan You2

AKU AKU AKU. Sel-sel yang tidak terkait dengan sistem kekebalan tubuh (sel jaringan ikat, epitel, epithelium), secara konstitut mengeluarkan faktor pertumbuhan otokrin (FRF, EPR, TFR, dll.). dan sitokin mendukung proliferasi sel hematopoietik.

Sitokin dan antagonis merekadijelaskan secara rinci dalam sejumlah monograf (Kovalchuk L.V. et al., 2000; Ketlinsky S.A., Simbirts A.S.,

Ara. 7.4.Induksi produksi sitokin secara tidak langsung dengan sel imunitas bawaan

Ekspresi sitokin yang berlebihan tidak aman bagi tubuh dan dapat mengarah pada pengembangan respons inflamasi yang berlebihan, respons fase tajam. Dalam regulasi produksi sitokin pro-inflamasi, berbagai inhibitor mengambil bagian. Dengan demikian, sejumlah zat dijelaskan bahwa nonspesifik mengikat sitokin IL-1 dan mencegah manifestasi dari tindakan biologisnya (A2-Macroglobulin, komponen C3 dari komplemen, uromodulin). Inhibitor IL-1 spesifik dapat larut reseptor-jebakan, antibodi dan antagonis reseptor IL-1 (IL-1RA). Dalam perkembangan peradangan, peningkatan ekspresi gen IL-1R meningkat. Tetapi sendirian, antagonis ini hadir dalam darah pada konsentrasi tinggi (hingga 1 ng / ml atau lebih), menghalangi efek IL-1 endogen.

Sel Mishenia

Tindakan sitokin pada sel-sel target dimediasi melalui reseptor spesifik yang mengikat sitokin dengan afinitas yang sangat tinggi, dan sitokin individu dapat digunakan

subunit umum reseptor. Setiap sitokin dikaitkan dengan reseptor spesifiknya.

Reseptor sitokin adalah protein transmembran dan dibagi menjadi 5 jenis utama. Apa yang disebut tipe reseptor hemopoietin yang paling umum memiliki dua domain ekstraseluler, salah satunya mengandung urutan total residu asam amino dari dua pengulangan triptofan dan serin, dipisahkan oleh asam amino (motif WSXWS). Jenis reseptor kedua dapat memiliki dua domain ekstraseluler dengan sejumlah besar sistein konservatif. Ini adalah reseptor keluarga IL-10 dan IFN. Jenis tipe diwakili oleh reseptor sitokin milik kelompok FNF. Jenis reseptor sitokin keempat milik reseptor imunoglobulin superfamily yang memiliki domain ekstraseluler menyerupai struktur domain molekul imunoglobulin. Jenis reseptor kelima yang menghubungkan molekul keluarga kemokin diwakili oleh protein transmembran yang melintasi membran sel di 7 tempat. Reseptor sitokin dapat ada dalam bentuk yang larut, sambil mempertahankan kemampuan untuk mengikat ligan (Ketlinsky S.A. et al., 2008).

Sitokin mampu mempengaruhi proliferasi, diferensiasi, aktivitas fungsional, dan apoptosis sel-sel target (lihat Gambar 7.1). Manifestasi aktivitas biologis sitokin dalam sel-sel target tergantung pada partisipasi berbagai sistem intraseluler dalam transmisi sinyal dari reseptor, yang dikaitkan dengan fitur sel target. Sinyal ke apoptosis dilakukan termasuk dengan bantuan bagian tertentu dari keluarga reseptor FNF, yang disebut domain "kematian" (Gbr. 7.5, lihat col. Plot). Diferensiasi dan sinyal pengaktif ditransmisikan melalui protein intraseluler JAK-stat - transduktor sinyal dan aktivator transkripsi (Gbr. 7.6, lihat col. Plot). G-protein terlibat dalam transmisi sinyal hemokin, yang mengarah pada peningkatan migrasi dan sel adhesi.

Analisis komprehensif dari sistem sitokin meliputi yang berikut.

I. Evaluasi sel-sel produksi.

1. Definisi ekspresi:

Reseptor mengenali patogen atau antigen TKR, TLR) pada tingkat gen dan molekul protein (PCR, Flow Cytofluorimetry Method);

Molekul adaptor yang melakukan sinyal yang menjalankan transkripsi gen sitokin (PCR et al.);

Ara. 7.5.Transmisi sinyal dengan reseptor FPF

Ara. 7.6.JAK-STAT - jalur pensinyalan dengan reseptor sitokin tipe 1

Gen sitokin (PCR); Molekul Sitokin Protein (Diperkirakan fungsi sel mononuklear manusia sitokinsint-sensitif).

2. Penentuan kuantitatif subpopulasi sel yang berisi atau sitokin lainnya: TH1, TH17 (metode pewarnaan intraseluler sitokin); Menentukan jumlah sel yang mengeluarkan sitokin tertentu (metode elispot, lihat ch. 4).

Ii. Evaluasi sitokin dan antagonis mereka di lingkungan biologis tubuh.

1. Menguji aktivitas biologis sitokin.

2. Penentuan kuantitatif sitokin menggunakan ELISA.

3. Pewarnaan imunohistokimia sitokin dalam jaringan.

4. Penentuan rasio sitokin yang berlawanan (pro dan anti-inflamasi), sitokin dan antagonis reseptor sitokin.

AKU AKU AKU. Penilaian sel-sel target.

1. Penentuan ekspresi reseptor sitokin pada tingkat gen dan molekul protein (PCR, aliran metode sitofluorimetri).

2. Penentuan molekul sinyal dalam konten intraseluler.

3. Penentuan aktivitas fungsional sel-sel target.

Saat ini, banyak metode untuk memperkirakan sistem sitokin yang memberikan beragam informasi dikembangkan. Di antara mereka dibedakan:

1) Metode biologis molekuler;

2) Metode untuk mengukur sitokin menggunakan immunoassay;

3) Pengujian aktivitas biologis sitokin;

4) pewarnaan intraseluler sitokin;

5) Metode ELISPOT, memungkinkan untuk mengidentifikasi sitokin di sekitar sel penghasil sitokin tunggal;

6) immunofluoresensi.

Kami membawa deskripsi singkat tentang metode ini.

Melalui metode biologis molekulerdimungkinkan untuk menyelidiki ekspresi gen sitokin, reseptor mereka, molekul sinyal, mempelajari polimorfisme gen-gen ini. Dalam beberapa tahun terakhir, sejumlah besar pekerjaan telah dilakukan yang mengungkapkan asosiasi antara varian alel gen molekul sistem sitokin dan kecenderungan

ke sejumlah penyakit. Studi varian Allele gen sitokin dapat memberikan informasi tentang produk yang diprogram secara genetis dari ini atau sitokin lainnya. Yang paling sensitif adalah reaksi berantai polimerase dalam waktu-nyata - PCR-RV (lihat Ch. 6). Metode hibridisasi in situ.memungkinkan Anda mengklarifikasi lokalisasi jaringan dan sel dari ekspresi gen sitokin.

Penentuan kuantitatif sitokin dalam cairan biologis dan dalam budaya sel mononuklear darah perifer oleh metode IFA dapat digambarkan sebagai berikut. Karena sitokin adalah mediator lokal, lebih disarankan untuk mengukur levelnya di jaringan masing-masing setelah ekstraksi protein jaringan atau dalam cairan alami, misalnya, dalam air mata, mencuci dari rongga, air seni, cairan ketuban, cairan tulang belakang, dll. Kadar sitokin serum atau cairan biologis lainnya mencerminkan keadaan sistem kekebalan tubuh saat ini, I.E. Sintesis sitokin dengan sel-sel tubuh in vivo.

Menentukan tingkat produksi sitokin oleh perifer darah mononuclear (MNC) menunjukkan keadaan fungsional sel. Produk spontan dari MNC sitokin dalam budaya menunjukkan bahwa sel-sel sudah diaktifkan in vivo.Diinduksi (berbagai stimulan, mitogen) sintesis sitokin mencerminkan potensi, kemampuan cadangan sel untuk merespons stimulus antigenik (khususnya, pengaruh obat). Pengurangan produksi sitokin yang diinduksi dapat berfungsi sebagai salah satu tanda kondisi imunodefisiensi. Sitokin tidak spesifik untuk antigen tertentu. Oleh karena itu, diagnosis spesifik penyakit infeksi, autoimun dan alergi dengan menentukan tingkat sitokin tertentu tidak mungkin. Pada saat yang sama, perkiraan tingkat sitokin memungkinkan untuk mendapatkan data tentang tingkat keparahan proses inflamasi, transisinya ke tingkat sistem dan perkiraan, aktivitas fungsional sel-sel sistem kekebalan, pada rasio TH1- dan Sel-sel, yang sangat penting dengan diagnosis banding sejumlah proses infeksi dan imunopatologis.

Di lingkungan biologis, dimungkinkan untuk menentukan sitokin secara kuantitatif dengan kisaran metode imunoanalisismenggunakan antibodi poliklonal dan monoklonal (lihat ch. 4). IFA memungkinkan Anda untuk mengetahui konsentrasi sitokin yang tepat apa di Bio

cairan tubuh logika. Deteksi Sitokin Envunophersum memiliki beberapa keunggulan dibandingkan metode lain (sensitivitas tinggi, spesifisitas, independensi dari keberadaan antagonis, kemungkinan akuntansi otomatis, standardisasi akuntansi). Namun, metode ini memiliki keterbatasannya sendiri: IFA tidak mengkarakterisasi aktivitas biologis sitokin, dapat memberikan hasil yang salah oleh epitope silang reaktif.

Pengujian biologismereka dilakukan berdasarkan pengetahuan tentang sifat dasar sitokin, tindakan mereka pada sel-sel target. Studi tentang efek biologis sitokin memungkinkan untuk mengembangkan empat jenis pengujian sitokin:

1) pada induksi proliferasi sel-sel target;

2) dengan efek sitotoksik;

3) tentang induksi diferensiasi pendahulu pernikahan tulang;

4) Menurut tindakan antivirus.

IL-1 menentukan efek merangsang pada proliferasi timosit tikus yang diaktifkan oleh mitogen in vitro;IL-2 - dengan kemampuan untuk merangsang aktivitas proliferatif limfoblas; Menurut efek sitotoksik pada fibroblas mouse (L929), Tnos dan limfotoksin diuji. Faktor-faktor kolonsimulatting dinilai dengan kemampuan mereka untuk menjaga pertumbuhan prekursor marjinal tulang dalam bentuk koloni di agar. Aktivitas antivirus IFN terdeteksi oleh penindasan efek sitopatik virus dalam budaya fibroblas diploid seseorang dan garis tumor fibroblasts tikus L-929.

Garis sel diciptakan, pertumbuhannya tergantung pada adanya sitokin tertentu. Di tab. 7.1 mempresentasikan daftar garis sel yang digunakan untuk menguji sitokin. Oleh kemampuan untuk menginduksi proliferasi sel-sel target sensitif, biosesting IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-15, dll. Namun, metode pengujian ini dibedakan dengan sensitivitas yang tidak memadai dan informativitas. Molekul inhibitor dan antagonis dapat menutupi aktivitas biologis sitokin. Beberapa sitokin menunjukkan aktivitas biologis umum. Namun demikian, metode ini sangat ideal untuk menguji aktivitas spesifik sitokin rekombinan.

Tabel 7.1.Garis sel digunakan untuk menguji aktivitas biologis sitokin

Meja akhir. 7.1.

Pekerjaan laboratorium 7-1.

Penentuan aktivitas biologis IL-1 pada efek komedogenik pada proliferasi tikus timosit

Dasar dari metode pengujian biologis IL-1 adalah kemampuan sitokin untuk merangsang proliferasi thymocytes mouse.

IL-1 dapat didefinisikan dalam budaya monosit, distimulasi oleh LPS, serta dalam tubuh cairan biologis.Perlu memperhatikan jumlah bagian.

1. Untuk pengujian, timosit tikus garis C3H / HEJ digunakan, dirangsang ke proliferasi mitogen (Confanavalin A - Kona dan Phytohemagglutinin - FGA). Tymocytes C3n / HEJ tidak dipilih secara kebetulan: Tikus dari garis bawaan ini tidak menanggapi LPS, yang dapat dalam komposisi bahan yang sedang diuji dan menyebabkan produk IL-1.

2. Timosit bertanggung jawab untuk IL-2 dan Mitogen, oleh karena itu, keberadaan IL-2 dan mitogen juga harus ditentukan dalam persiapan yang diuji pada IL-1.

Prosedur pelaksanaan

1. Suspensi TimOdoCyte diperoleh pada konsentrasi 12 × 10 6 / ml medium RRMI 1640 yang mengandung 10% serum embrio sapi dan 2-mercaptoethanol (5 × 10 -5 m).

2. Siapkan sejumlah pengenceran dua kali berurutan dari eksperimen (cairan biologis tubuh) dan kontrol sampel. Sebagai kontrol, cairan biologis yang mengandung IL-1 atau sampel diperoleh dengan meliputi sel mononuklear tanpa LPS, dan obat standar Laboratorium yang mengandung IL-1. Di lempengan bawah putaran 96-sumur dari setiap pengenceran, 50 μL 6 lubang ditransfer.

3. Dalam tiga lubang setiap pengenceran, 50 μL FGA yang dimurnikan (Wellcome) dilarutkan dalam konsentrasi 3 μg / ml ditambahkan, dan dalam 3 μL lainnya dari 3 μL media.

4. 50 μl suspensi timosit ditambahkan ke masing-masing dengan baik dan diinkubasi selama 48 jam pada 37 ° C.

6. Sebelum menyelesaikan budidaya dalam sumur, 50 μl larutan (1 mkki / ml) ["3 jam] --timidin diperkenalkan dan diinkubasi oleh 20 jam lagi.

7. Untuk menentukan tingkat radioaktivitas, sel kultur ditransfer ke kertas saring menggunakan kolektor sel otomatis, filter dikeringkan dan menentukan dimasukkannya label dengan penghitung kilau cair.

8. Hasilnya dinyatakan dalam bentuk koefisien stimulasi.

di mana M CP adalah jumlah rata-rata pulsa dalam 3 lubang.

Jika tymocytes merespons stimulasi dengan standar IL-1, indeks stimulasi dari sampel yang diteliti melebihi 3 dengan andal menunjukkan aktivitas IL-1.

BioAnalisis adalah satu-satunya metode untuk mengevaluasi fungsi sitokin, tetapi metode ini harus dilengkapi dengan berbagai jenis kontrol yang sesuai pada spesifisitas menggunakan antibodi monoklonal. Menambahkan antibodi monoklonal tertentu ke sitokin ke dalam kultur memblokir aktivitas biologis sitokin, yang membuktikan: sinyal ke proliferasi garis sel adalah sitokin yang ditentukan.

Menggunakan biokalisis untuk mengidentifikasi interferon.Prinsip menilai aktivitas biologis IFN didasarkan pada tindakan antivirusnya, yang ditentukan oleh tingkat penghambatan reproduksi virus uji dalam kultur sel.

Dalam pekerjaan, sel-sel yang peka terhadap tindakan IFN dapat digunakan: sel-sel fibroblast sel trypsinized primer ayam, sel-sel yang diterjemahkan dari fibroblas diploid seseorang dan budaya sel mouse (L929).

Dalam memperkirakan tindakan antivirus IFN, disarankan untuk menggunakan virus dengan siklus pendek reproduksi, sensitivitas tinggi terhadap tindakan IFN: virus ensefalomielitis tikus, stomatitis vesikular mouse, dll.

Pekerjaan laboratorium 7-2.

Penentuan aktivitas interferon

1. Penangguhan Fibroblas Diploid Fibroblas Opaton pada Medium Dengan Serum Sapi Sapi (Konsentrasi Sel - 15-20 × 10 6 / ml) dituangkan ke dalam piring-piring bottomed datar 100 μL yang steril dalam Nah dan ditempatkan di CO 2-Numbater pada suhu 37 ° C.

2. Setelah pembentukan monolayer lengkap dari lubang, hapus media pertumbuhan dan 100 μl media pendukung ditambahkan ke setiap sumur.

3. Titrasi aktivitas IFN dalam sampel yang diteliti dilakukan dengan metode pengembangbiakan ganda pada fibroblas monolayer.

Bersamaan dengan sampel dalam sumur, ensefalomielitis tikus (VEM) diperkenalkan dalam dosis kerusakan sel 100% setelah 48 jam setelah infeksi.

4. Untuk mengontrol, menggunakan sumur dengan sel utuh (tidak diobati) yang terinfeksi virus.

Dalam setiap studi, referensi IFN sampel dengan aktivitas yang diketahui digunakan sebagai persiapan referensi.

5. Pelat pengenceran sampel diinkubasi oleh 24 jam pada suhu 37 ° C dalam suasana dengan kandungan 5% CO 2.

6. Tingkat aktivitas IFNS ditentukan oleh nilai terbalik dari pengenceran maksimum sampel pengujian, yang menunda efek sitopatik virus sebesar 50%, dan mengekspresikannya dalam 1 unit aktivitas.

7. Untuk menentukan jenis IFN, antiserum terhadap IFNα, IFNβ atau IFNγ ditambahkan ke sistem. Anti-vortex membatalkan aksi sitokin yang sesuai, yang memungkinkan Anda mengidentifikasi jenis IFN.

Penentuan aktivitas biologis migrasi faktor penghambatan.Saat ini, benar-benar ide-ide baru tentang sifat dan sifat mitos dibuka pada tahun 60-an abad terakhir sebagai mediator imunitas seluler terbentuk dan selama bertahun-tahun tersisa tanpa perhatian yang tepat (BLOOM Br, Bennet V., 1966; David Jr, 1966). Hanya dalam 10-15 tahun terakhir menjadi jelas: Mitos adalah salah satu mediator biologis paling penting dalam tubuh dengan berbagai fungsi biologis sitokin, hormon, enzim. Tindakan mitos pada sel-sel target diimplementasikan melalui CD74 - -Receptor atau melalui jalur non-klasik endositosis.

Mitos dianggap sebagai mediator peradangan penting yang mengaktifkan fungsi makrofag (produksi sitokin, fagositosis, sitotoksisitas, dll.), Serta hormon imunoregulasi endogen, memodulasi aktivitas glukokortikoid.

Semakin banyak informasi tentang peran mitos dalam patogenesis banyak penyakit inflamasi diakumulasikan, termasuk sepsis, rheumatoid arthritis (RA), glomerulonefritis, dll. Konsentrasi mitos dalam cairan sendi yang terkena secara signifikan meningkat, berkorelacing tingkat keparahan penyakit. Di bawah pengaruh mitos, produksi sitokin pro-inflamasi sebagai makrofag dan sel sinovial meningkat.

Berbagai metode pengujian aktivitas mitos diketahui ketika sel-sel migrasi (sel-sel target untuk mitos) ditempatkan dalam kapiler kaca (uji kapiler), mobil dari agarosa atau yang baik.

Kami menyajikan metode skrining yang relatif sederhana berdasarkan pada pembentukan plak mikro sel datar 96-lubang (leukosit atau makrofag), standar di bidang dan jumlah sel, diikuti oleh budidaya mereka dalam media nutrisi dan menentukan perubahan Di bidang mikro ini di bawah aksi mitos (Suslov A.P., 1989).

Pekerjaan Laboratorium 7-3.

Definisi aktivitas mitos

Definisi aktivitas biologis mitos dilakukan dengan bantuan perangkat untuk pembentukan mikro seluler (Gbr. 7.7) - Migrosurin (Penelitian Institute of Epidemiologi dan Mikrobiologi. N.F. Gamalei Rams).

1. Dalam lubang 96-well tablet (aliran, Inggris atau serupa) Tambahkan 100 μL media kultur sampel dibagi dengan media kultur, di mana aktivitas mitos ditentukan (masing-masing pemuliaan dalam 4 paralel, sampel berpengalaman). Media kultur meliputi RPMI 1640, 2 mm L-glutamine, serum embrio sapi 5%, 40 μg / ml gentamisin.

2. Media kultur ditambahkan ke sumur kontrol (dalam 4 paralel) dari 100 μL.

3. Sel Suspensi sel dari makrofag peritoneum disiapkan, di mana 2 mouse-hybrids (swachs57v1v1v1 / 6) F1 intraperitoneally diadministrasikan dalam 10 ml solusi henksa dengan heparin (10 unit / ml), dengan hati-hati memijat perut selama 2-3 menit . Kemudian hewan itu tersumbat dengan pemenggalan, dengan hati-hati menusuk dinding perut di daerah pangkal paha dan melalui jarum jarum suntik mengisap eksudat. Sel-sel eksudat peritoneum dicuci dengan larutan Henks, sentrifugasi mereka selama 10-15 menit pada 200 g. Kemudian siapkan penangguhan sel dengan konsentrasi 10 ± 1 juta / ml lingkungan RPMI 1640. Penghitungan dilakukan di ruang panas.

4. Kumpulkan sistem migroserin yang mewakili tripod untuk fiksasi terarah dan standar tips dengan kultur sel dalam posisi vertikal yang ketat pada ketinggian tertentu di atas pusat tablet budaya 166-sumur, serta termasuk 92 tips untuk pipet otomatis Perusahaan "Costar", AS (beras. 7.7).

Rekatkan kaki tripod ke sudut sudut tablet. Suspensi sel diperoleh dengan pipet otomatis pada tips - 5 μl di masing-masing, mereka dibilas dari kelebihan sel dengan satu kali menurunkan pada hari Rabu dan masukkan secara vertikal ke dalam slot tripod sistem. Tripod yang sudah selesai dengan tips disimpan pada suhu kamar selama 1 jam pada permukaan horizontal yang ketat. Selama waktu ini, ada sel suspensi di bagian bawah sumur, di mana mikro sel standar terbentuk.

5. Tripod dengan tips dihapus dengan hati-hati dari tablet. Tablet dengan mikro sel ditempatkan dalam posisi horizontal yang ketat di CO 2-indoor, di mana dikultur selama 20 jam. Selama budaya sel bermigrasi di sepanjang bagian bawah sumur.

6. Akuntansi Kuantitatif hasil setelah inkubasi dilakukan pada loupe binokular, menilai secara visual ukuran koloni pada skala di dalam lensa mata. Mikro memiliki bentuk lingkaran. Para peneliti kemudian menentukan nilai rata-rata diameter koloni sesuai dengan hasil mengukur koloni dalam 4 lubang eksperimental atau kontrol. Kesalahan pengukuran adalah ± 1 mm.

Indeks migrasi dihitung oleh rumus:

Sampel memiliki aktivitas mitos jika nilai-nilai mereka sama

Di belakang unit kondisional (unit) aktivitas mitos mengambil nilai terbalik sama dengan nilai pengenceran sampel terbesar (sampel), di mana indeks migrasi 0,6 ± 0,2.

Kegiatan biologis Feo.Ini adalah α ke efek sitotoksik pada L-929 mengubah garis fibroblast. Sebagai kontrol positif, FNO rekombinan digunakan, dan sel-sel dalam media kultur digunakan sebagai kontrol negatif.

Hitung indeks sitotoksik (qi):

dimana sEBUAH.- jumlah sel hidup yang mengendalikan; dgn B.- Jumlah sel hidup dalam pengalaman.

Ara. 7.7.Skema Migrosin - Perangkat untuk Mengukur Migrasi Budaya Sel

Sel-sel dicat dengan pewarna (metilen biru), yang hanya dimasukkan dalam sel yang sudah meninggal.

Di balik unit kondisional aktivitas TNF mengambil nilai dari pengenceran terbalik atas sampel yang diperlukan untuk menghasilkan 50% dari sitotoksisitas sel. Aktivitas spesifik sampel adalah rasio aktivitas pada unit konvensional per 1 ml dengan konsentrasi protein yang terkandung dalam sampel.

Pewarnaan intraseluler sitokin.Mengubah rasio sel yang menghasilkan berbagai sitokin dapat mencerminkan patogenesis penyakit dan berfungsi sebagai kriteria untuk perkiraan penyakit dan mengevaluasi terapi.

Metode pewarnaan intraseluler menentukan ekspresi sitokin pada level satu sel. Flow Cytofluorimetry memungkinkan Anda untuk menghitung jumlah sel yang mengekspresikan satu atau sitokin lainnya.

Kami mencantumkan tahap utama definisi sitokin intraseluler.

Sel-sel yang berlebihan menghasilkan sejumlah kecil sitokin, yang, sebagai aturan, tidak disimpan, oleh karena itu, langkah penting dalam estimasi sitokin intraseluler adalah stimulasi limfosit dan blokade output dari sel-sel ini dari sel-sel.

Sebagai penginduksi sitokin, aktivator protein kinase dengan folubo-12-myristat-13-acetate (FMA) dalam kombinasi dengan ionofore kalsium digunakan dalam kombinasi dengan ionophore kalsium. Penggunaan kombinasi semacam itu menyebabkan sintesis spektrum sitokin: ILNU, IL-4, IL-2, FNUα. Kurangnya penggunaan FMA-in - masalah mendeteksi molekul CD4 pada permukaan limfosit setelah aktivasi tersebut. Juga, produk-produk sitokin T-limfosit diinduksi oleh mitogen (FGA). Sel B dan monosit merangsang

Sel mononuklear diinkubasi dengan adanya induktor produk sitokin dan pemblokir transportasi brefeldin A atau monencin intraseluler selama 2-6 jam.

Sel-sel kemudian disusupensi dalam larutan buffer. Untuk fiksasi, formaldehyde 2% ditambahkan, diinkubasi selama 10-15 menit pada suhu kamar.

Kemudian sel-sel diperlakukan dengan saponin, yang meningkatkan permeabilitas membran sel, dan dicat dengan antibodi monoklonal khusus untuk sitokin yang ditentukan. Pra-pewarnaan penanda permukaan (CD4, CD8) meningkatkan jumlah informasi yang diterima tentang sel dan memungkinkan Anda untuk menentukan afiliasi populasinya secara lebih akurat.

Ada beberapa batasan dalam penerapan metode yang dijelaskan di atas. Jadi, dengan bantuan mereka tidak mungkin untuk menganalisis sintesis sitokin dengan satu sel, tidak mungkin untuk menentukan jumlah sel penghasil sitokin dalam subpopulasi, tidak mungkin untuk menentukan apakah sel sitokinproduksi mengekspresikan spidol unik, apakah beragam Sitokin disintesis dengan sel yang berbeda atau sendirian dan sama. Jawaban atas pertanyaan-pertanyaan ini diperoleh dengan menggunakan metode penelitian lain. Untuk menentukan frekuensi sel-sel penghasil sitokin dalam populasi, metode pembatasan pengenceran dan varian analisis imunode elispot (lihat ch. 4) digunakan.

Dalam metode hibridisasi SITU.Metode meliputi:

2) fiksasi paraformaldehyde;

3) Deteksi mRNA menggunakan CDNA berlabel. Dalam beberapa kasus, MRNA sitokin ditentukan pada bagian dengan PCR radioisotop.

Imunofluoresensi.Metode meliputi:

1) Membekukan organ dan persiapan bagian Cryostat;

2) fiksasi;

3) Pengobatan bagian dengan antibodi anticikin fluorescene berlabel;

4) Pengamatan isual pada fluoresensi.

Teknik-teknik ini (hibridisasi in situ.dan immunofluoresensi) dengan cepat dan tidak tergantung pada konsentrasi ambang batas produk yang disekresikan. Namun, mereka tidak menentukan jumlah sitokin yang dikeluarkan dan dapat secara kompleks secara teknis. Berbagai kendali menyeluruh atas reaksi non-spesifik diperlukan.

Dengan bantuan metode estimasi sitokin yang disajikan, proses patologis yang berkaitan dengan pelanggaran dalam sistem sitokin di berbagai tingkatan diidentifikasi.

Dengan demikian, evaluasi sistem sitokin sangat penting untuk karakteristik keadaan sistem kekebalan tubuh. Studi berbagai tingkat sistem sitokin memungkinkan Anda untuk mendapatkan informasi tentang aktivitas fungsional berbagai jenis sel imunokompeten, tingkat keparahan proses inflamasi, tentang transisinya ke tingkat sistem dan perkiraan penyakit.

Pertanyaan dan Tugas

1. Sebutkan sifat umum sitokin.

2. Berikan klasifikasi sitokin.

3. Sebutkan komponen utama dari sistem sitokin.

4. Sebutkan sel-produser sitokin.

5. Menjelaskan keluarga reseptor sitokin.

6. Apa mekanisme untuk berfungsinya jaringan sitokin?

7. Beri tahu kami tentang perkembangan sitokin dalam sistem imunitas bawaan.

8. Apa pendekatan utama untuk penilaian komprehensif dari sistem sitokin?

9. Apa metode pengujian sitokin dalam cairan biologis tubuh?

10. Apa cacat dalam sistem sitokin dengan patologi yang berbeda?

11. Apa metode utama pengujian biologis IL-1, IFN, Mitos, Flo dalam cairan biologis?

12. Jelaskan proses menentukan kandungan intraseluler sitokin.

13. Jelaskan proses menentukan sitokin yang dikeluarkan oleh satu sel.

14. Jelaskan urutan metode mendeteksi cacat pada tingkat reseptor sitokin.

15. Jelaskan urutan metode yang digunakan untuk mendeteksi cacat pada tingkat produsen sitokin.

16. Informasi apa yang dapat diperoleh dengan mengeksplorasi produksi sitokin dalam budaya sel mononuklear, dalam serum?

pengantar

Umum

Klasifikasi sitokin.

Reseptor sitokin.

Sitokin dan regulasi jawaban imun

Kesimpulan

literatur

pengantar

Sitokin adalah salah satu bagian terpenting dari sistem kekebalan tubuh. Sistem kekebalan membutuhkan sistem peringatan dari sel-sel tubuh, sebagai tangisan untuk bantuan. Ini mungkin penentuan sitokin terbaik. Ketika sel rusak atau kagum dengan organisme patogen, makrofag dan sel-sel yang rusak dibedakan oleh sitokin. Ini termasuk faktor-faktor seperti interleukin, interferon dan faktor nekrosis tumor-alpha. Yang terakhir juga membuktikan bahwa kehancuran jaringan tumor dikendalikan oleh sistem kekebalan tubuh. Ketika sitokin dilepaskan, mereka memanggil sel-sel imun khusus, misalnya, leukosit dan sel T- dan B.

Sitokin juga memberikan sinyal tentang beberapa tujuan tertentu bahwa data sel harus dilakukan. Sitokin dan antibodi benar-benar berbeda, karena antibodi adalah sesuatu yang dikaitkan dengan antigen, mereka memungkinkan sistem kekebalan tubuh untuk mengidentifikasi invasi organisme asing. Dengan demikian, analogi dapat dilakukan: sitokin adalah alarm utama bagi penjajah, dan antibodi - Pramuka. Proses analisis sitokin disebut definisi sitokin.

Umum

Sitokin [Yunani. Kytos - Kapal, di sini - sel dan Kineo - bergerak, mendorong] - kelompok besar dan beragam ukuran kecil (berat molekul dari 8 hingga 80 KDA) dari mediator protein - molekul perantara ("protein komunikasi") berpartisipasi dalam sinyal antar sel transmisi sinyal sebagian besar dalam sistem kekebalan tubuh.

Sitokin mencakup faktor nekrosis tumor, interferon, sejumlah interleukin, dan sitokin lainnya, yang disintesis oleh limfosit dan merupakan regulator proliferasi dan diferensiasi, khususnya sel hematopoietik dan sel-sel sistem kekebalan tubuh, disebut limfosin.

Semua sel sistem kekebalan tubuh memiliki fungsi tertentu dan beroperasi dalam interaksi yang jelas konsisten, yang disediakan oleh zat aktif biologis khusus - sitokin - regulator reaksi imun. Sitokin adalah protein spesifik dimana berbagai sel sistem kekebalan tubuh dapat saling bertukar dan mengoordinasikan tindakan.

Set dan jumlah sitokin yang bertindak pada reseptor permukaan sel adalah "medium sitokin" - mewakili matriks berinteraksi dan sering berubah sinyal. Sinyal-sinyal ini kompleks karena beragam reseptor sitokin dan karena fakta bahwa masing-masing sitokin dapat mengaktifkan atau menekan beberapa proses, termasuk sintesisnya sendiri dan sintesis sitokin lainnya, serta pembentukan dan penampilan sel-sel reseptor sitokin .

Alarm antar sel dalam sistem kekebalan dilakukan dengan interaksi sel kontak langsung atau menggunakan mediator interaksi antar sel. Ketika mempelajari diferensiasi sel imunokompeten dan hematopoietik, serta mekanisme interaksi antarel, membentuk respon imun, dan kelompok besar dan beragam mediator larut dalam sifat protein - molekul perantara ("protein komunikasi") berpartisipasi dalam transmisi antar sel Sinyal - sitokin dibuka.

Hormon biasanya dikecualikan dari kategori ini berdasarkan karakter endokrin (dan bukan paracryn atau otokrin) dari tindakan mereka. (Lihat sitokin: mekanisme sinyal hormonal). Bersama dengan hormon dan neurotator, mereka merupakan dasar bahasa alarm kimia, dimana morfogenesis dan regenerasi jaringan diatur dalam organisme multiseluler.

Dalam regulasi positif dan negatif dari respons imun, mereka memiliki peran sentral. Hingga saat ini, orang tersebut telah ditemukan dan dipelajari pada satu derajat atau yang lain, seperti yang disebutkan di atas, lebih dari seratus sitokin, dan terus-menerus muncul pesan tentang pembukaan yang baru. Bagi sebagian orang, analog rekayasa genetika diperoleh. Sitokin bertindak melalui aktivasi reseptor sitokin.

A. Interferon (IFN):

1. AlamIFN (1 generasi):

2. Recombannate. IFN (2 generasi):

a) tindakan pendek:

IFN A2B: Intron-a

IFN β: Avonex dan lainnya.

(Pagylated ifn): paginterferon

B. Interferon Induktor (Interferonogen):

1. Sintetis - Cycloferon, Tiloron, Dibazole dan sebagainya.

2. Natural.- Ridostin dan lainnya.

DI. Interleukins. : Rekombinan interleukin-2 (roncolin, aldeslakin, prolleikin, ) , Rekombinan interleukin 1-beta (Betalkin).

G. Faktor-faktor yang sedang berlanjut (Argraphworks, dll.)

Obat peptida.

Persiapan peptida timom .

Senyawa peptida yang diproduksi oleh besi garpu, merangsang pematangan T-limfosit(Timopoetins).

Dengan indikator yang awalnya berkurang, persiapan peptida khas meningkatkan jumlah sel T dan aktivitas fungsionalnya.

Dua generasi obat-obatan timsa generasi pertama di Rusia menjadi Tabuti., yang merupakan kompleks peptida yang diekstraksi dari timus sapi. Untuk persiapan yang mengandung kompleks peptida timus juga terkait Timalin, Timopin dan lainnya, dan untuk ekstrak timus - Thorusulin dan Vilozen.

Persiapan peptida dari thymus ternak timalin, Tistibamulin.disuntikkan secara intramuskuler, dan tabuti, Timoptin.- Di bawah kulit terutama dalam kekurangan imunitas seluler:

Dengan d-imunodefisiasi

Infeksi virus.

Untuk pencegahan infeksi selama terapi radiasi dan kemoterapi tumor.

Kemanjuran klinis dari obat-obatan timsa generasi pertama tidak diragukan lagi, tetapi mereka memiliki satu kelemahan: mereka adalah campuran yang tak tertandingi dari peptida aktif secara biologis, cukup sulit untuk standardisasi.

Kemajuan di bidang obat-obatan asal thymic melalui penciptaan sediaan generasi II dan III - analog sintetis hormon alami timus atau fragmen hormon ini dengan aktivitas biologis.

Obat modern. Imunofan -hexapeptide, analog sintetis dari pusat aktif thymopoietin, digunakan untuk imunodefisiensi, tumor. Obat ini merangsang pembentukan sel-sel imunokompeten IL-2, meningkatkan sensitivitas sel limfoid ke limfokin ini, mengurangi produk FNF (faktor nekrosis tumor), memiliki efek pengatur pada produksi mediator imunitas (peradangan) dan imunoglobulin .

Persiapan peptida sumsum tulang

Melopid. Dapatkan dari budaya sel sumsum tulang mamalia (betis, babi). Mekanisme tindakan obat dikaitkan dengan stimulasi proliferasi dan aktivitas fungsional sel-T.

Dalam tubuh, target obat ini dipertimbangkan Dalam limfosit. Dalam hal gangguan imuno atau hematopo, pengenalan myelopide mengarah pada peningkatan aktivitas mitosis secara keseluruhan dari sel-sel sumsum tulang dan arah diferensiasi mereka terhadap matang dalam limfosit.

Myelopid digunakan dalam terapi kompleks dari kondisi imunodefisiensi sekunder dengan lebih disukai lesi imunitas humoral, untuk pencegahan komplikasi infeksi setelah intervensi bedah, cedera ditransfer ke osteomielitis, dalam penyakit paru non-spesifik, piroder kronis. Efek samping dari obat - pusing, kelemahan, mual, hiperemia dan rasa sakit di tempat administrasi.

Semua obat kelompok ini adalah hamil kontraindikasi, myelopid dan immunofan dikontraindikasikan di hadapan konflik rhesus ibu dan janin.

Persiapan imunoglobulinov

Imunoglobulin manusia.

a) imunoglobulin untuk administrasi intramuskuler

Nonspecific: imunoglobulin manusia normal.

Spesifik: Imunoglobulin terhadap hepatitis pada manusia, imunoglobulin manusia antistaphokokus, pria imunoglobulin Anti-manik-manik, imunoglobulin pria terhadap ensefalitis kutu, pria imunoglobulin melawan virus rabies, dll.

b) imunoglobulin untuk administrasi intravena

Nonspecific:pria imunoglobulin normal untuk pemberian intravena (gabriglobin, imunovin, intraglobin, humaglobin)

Spesifik: Imunoglobulin terhadap hepatitis per orang (non-loadect), pentaglobin (mengandung igm antibakteri, IgG, IGA), imunoglobulin terhadap cytomegalovirus (sitotek), pria imunoglobulin terhadap ensefalitis kutu, IG anti-perpustakaan dan lebih banyak.

c) imunoglobulin untuk administrasi oral:obat kompleks imunoglobulin (instrumentasi) untuk penggunaan enteral dalam infeksi usus akut; Anthytavirus imunoglobulin untuk pemberian oral.

Imunoglobulin heterolog:

immunoglobulin anti-perpustakaan dari serum kuda, serum adalah tenaga kuda poligmalen antikunten, dll.

Persiapan imunoglobulin non-spesifik digunakan untuk efisiensi primer dan sekunder, persiapan imunoglobulin spesifik - dengan infeksi yang tepat (dengan tujuan terapeutik atau preventif).

Sitokin dan persiapan berdasarkan pada mereka

Peraturan tentang perkembangan respons imun dilakukan oleh sitokin - kompleks kompleks molekul imunoregulasi endogenyang merupakan dasar untuk menciptakan kelompok besar dari obat immunomodulator alami dan rekombinan.

Interferon (IFN):

1. AlamIFN (1 generasi):

Alpha Niferons: Human LeukocyTaria IFN dan lainnya.

Betaferon: IFN fibroblastik manusia, dll.

2. Recombannate. IFN (2 generasi):

a) tindakan pendek:

IFN A2A: Refaferon, Viferon, dll.

IFN A2B: Intron-a

IFN β: Avonex dan lainnya.

b) tindakan berkepanjangan (Pagylated IFN): PAGINTERFERON (IFN A2B + POLYETHYLENE GLYCOL), dll.

Fokus utama dari efek obat ifn - t-limfosit (pembunuh alami dan limfosit T-limfosit sitotoksik).

Interferon alami diperoleh dalam budaya sel leukosit darah donor (dalam budaya limfoblastoid dan sel-sel lain) di bawah pengaruh virus induktor.

Interferon rekombinan diperoleh dengan metode rekayasa genetika - dengan menumbuhkan strain bakteri yang mengandung dalam aparatur genetik mereka plasmid rekombinan built-in dari gen interferon manusia.

Interferon memiliki efek antivirus, antitumor, dan imunomodulator.

Sebagai persiapan interferon agen antivirus paling efektif dalam pengobatan penyakit mata herpes (secara lokal dalam bentuk tetesan, subkonjunctive), kesederhanaan dengan lokalisasi pada kulit, selaput lendir dan alat kelamin, meluncur turun (secara lokal dalam bentuk salep pada hidrogel -Based), virus hepatitis B akut dan kronis (parenteral, rektal di supositoria), dalam pengobatan dan pencegahan influenza dan ARVI (secara intranasal dalam bentuk tetes). Dalam infeksi HIV, persiapan interferon rekombinan menormalkan parameter imunologis, mengurangi ketajaman arah penyakit dalam lebih dari 50% kasus, menyebabkan penurunan tingkat viremia dan kandungan penanda serum penyakit. AIDS dilakukan terapi gabungan dengan azidothimidine.

Efek antitumor dari persiapan interferon dikaitkan dengan efek fariat antiprols dan stimulasi aktivitas pembunuh alami. Sebagai agen antitumor, IFN alpha, IFN-alpha 2A, IFN-alpha-2B, IFN-ALPHA-N1, IFN-BETA digunakan.

IFN BETA-LB digunakan sebagai imunomodulator dengan multiple sclerosis.

Obat interferon menyebabkan serupa efek samping. Karakteristik - Sindrom Mempengaruhi; Perubahan dari CNS: pusing, pelanggaran visi, kebingungan, depresi, insomnia, parrestzia, tremor. Dari saluran pencernaan: kehilangan nafsu makan, mual; Dari sistem kardiovaskular, gejala gagal jantung dimungkinkan; dari sistem kemih - proteinuria; Dari sisi formasi darah - leukopenia sementara. Mungkin juga rashed, gatal, alopecia, impotensi sementara, pendarahan hidung.

Interferon Induktor (Interferonogen):

1. Sintetis - Cycloferon, Tiloron, Halfd, dll.

2. Alam - Ridostin dan lainnya.

Induktor interferon adalah persiapan yang meningkatkan sintesis interferon endogen. Obat-obatan ini memiliki sejumlah keunggulan dibandingkan dengan interferon rekombinan. Mereka tidak memiliki aktivitas antigenik. Sintesis sintesis interferon endogen tidak menyebabkan hiperinterminemia.

Tilororon.(Amixin) mengacu pada senyawa sintetis berat molekul rendah, adalah interferon induktor oral. Ini memiliki spektrum luas aktivitas antivirus terhadap virus DNA dan yang mengandung RNA. Sebagai agen antivirus dan imunomodulus digunakan untuk pencegahan dan pengobatan influenza, ARVI, hepatitis A, untuk pengobatan hepatitis virus, herpes sederhana (termasuk urogenital) dan konjungtif, dengan terapi infeksi klamidensi, neuroviral, dan infeksif-alergi penyakit, selama imunodefisiensi sekunder. Obat ini ditoleransi dengan baik. Fenomena dyspeptic, kedinginan jangka pendek, meningkatkan nada total, yang tidak memerlukan pembatalan obat.

Setengah Ini adalah kompleks polyyribonukleotida biosintetik dari asam poliadenil dan poliuridil (dalam rasio ekuama). Obat ini memiliki efek penghambatan yang jelas pada virus herpes sederhana. Ini digunakan dalam bentuk tetes mata dan suntikan di bawah konjungtiva. Obat ini diresepkan untuk orang dewasa untuk pengobatan penyakit mata virus: konjungtivilasi herpetik dan adenoviral, keratoconjunovivotitis, keratitis dan keratos-chirosoclites (keratovets), iridocyclites, chorioretines, neurit dari saraf optik.

Efek samping Jarang dan memanifestasikan diri mereka dengan perkembangan reaksi alergi: gatal dan perasaan benda asing di mata.

Cycloferon - Interferon Induktor Berat Molekul Rendah. Ini memiliki efek antivirus, imunomodulator dan anti-inflamasi. Cycloferon efektif untuk virus ensefalitis kutu, herpes, cytomegalovirus, HIV, dll. Memiliki efek anthylamydial. Efektif dengan penyakit sistemik pada jaringan ikat. Memasang perlindungan radio dan efek anti-inflamasi dari obat.

Arbidol.diresepkan di dalam untuk pencegahan dan pengobatan influenza dan ARVI lainnya, serta pada penyakit hpetic.

Interleukins:

rekombinan IL-2 (Aldesleikin, Proleikin, Roncolin ) , Rekombinan IL-1BET ( betalkin.).

Untuk persiapan sitokin asal alami yang mengandung serangkaian sitokin peradangan yang cukup besar dan fase pertama respon imun, efek multifaset pada tubuh manusia ditandai. Obat-obatan ini bertindak pada sel yang terlibat dalam proses peradangan, regenerasi dan respon imun.

Aldeslakin. - Analog rekombinan IL-2. Ini memiliki efek imunomodulatory dan antitumor. Mengaktifkan imunitas sel. Meningkatkan proliferasi T-limfosit dan populasi sel yang bergantung pada IL-2. Meningkatkan sitotoksi limfosit dan pembunuh sel, yang mengenali dan menghancurkan sel-sel tumor. Meningkatkan produk-produk Gamma Interferon, FNF, IL-1. Ini digunakan untuk kanker ginjal.

Betalkin. - Beta IL-1 Manusia Rekombinan. Merangsang perlindungan leukopo dan kekebalan tubuh. Kami disuntikkan di bawah kulit atau secara intravena dengan proses purulen dengan efisiensi imun, selama leukopenia sebagai akibat kemoterapi, selama tumor.

Roncolinkin.- Obat interleukin-2 rekombinan diterapkan secara intravena selama sepsis dengan efisiensi imun, serta dengan kanker ginjal.

Faktor-faktor konsesif:

Mrragrafa. (Lekukoxa) adalah obat rekombinan dari faktor granulocytaric-macrophageal factory. Merangsang leukeopo, memiliki aktivitas imunotropik. Meningkatkan proliferasi dan diferensiasi prekursor, meningkatkan kandungan sel-sel matang dalam darah perifer, pertumbuhan granulosit, monosit, makrofag. Meningkatkan aktivitas fungsional neutrofil matang, meningkatkan fagositosis dan metabolisme oksidatif, memberikan mekanisme fagositosis, meningkatkan sitotoksisitas untuk sel ganas.

PHILGRASTIM. (Neapogen) adalah obat rekombinan faktor kolonistimulasi granulosit manusia. PhilGrantim mengatur produk neutrofil dan alirannya ke dalam darah sumsum tulang.

Lenograftim - Obat rekombinan faktor kolonistimulasi granulosit manusia. Ini adalah protein yang sangat dimurnikan. Ini adalah imunomodulator dan stimulator leukeopoese.

Imunostimulan Sintetis: Levamizol, isoprosis polioksida, galavit.

Levamizol.(DECARIS), derivatif imidazole, digunakan sebagai imunostimulator, serta sebagai obat anti-zhilant selama ascariasis. Sifat imunostimulasi levamizol dikaitkan dengan peningkatan aktivitas makrofag dan limfosit T.

Levamizol diresepkan di dalam dengan infeksi herpetis berulang, hepatitis virus kronis, penyakit autoimun (rheumatoid arthritis, lupus merah sistemik, penyakit mahkota). Obat ini juga digunakan dalam tumor usus besar setelah bedah, radiasi atau terapi obat tumor.

Isoprosis.- Obat yang mengandung inosin. Merangsang aktivitas makrofag, produk-produk interleukin, proliferasi T-limfosit.

Diresepkan di dalam dengan infeksi virus, infeksi saluran pernapasan kronis dan urin, immunodefisiensi.

Polyoxidonium - Senyawa polimer larut air sintetis. Obat ini memiliki efek imunostimulasi dan detoksifikasi, meningkatkan ketahanan kekebalan tubuh dalam kaitannya dengan infeksi lokal dan umum. Polyoxidonium mengaktifkan semua faktor ketahanan alami: sel-sel sistem monocytium-makrofag, neutrofil dan pembunuh alami, meningkatkan aktivitas fungsional mereka dengan indikator yang awalnya berkurang.

Galavit. - turunan dari ftthadzide. Keunikan obat ini terletak di hadapan tidak hanya imunomodulasi, tetapi juga mengucapkan sifat anti-inflamasi.

Persiapan kelas farmakologis lainnya dengan aktivitas imunostimulasi

1. Adaptogen dan persiapan asal sayuran (fitopreparasi): Persiapan Echinacea (Derminal), Eleutherococcus, Ginseng, Rhodiola pink, dll.

2. Vitamin: Asam acorbinat (vitamin C), tokoferol asetat (vitamin E), retinol asetat (vitamin A) (lihat bagian "Vitamin").

Persiapan echinacea. Memiliki sifat imunostimulasi dan anti-inflamasi. Ketika diperoleh, obat-obatan ini meningkatkan aktivitas phagocytic dari makrofag dan neutrofil, merangsang produk interleukin-1, aktivitas pembantu T, diferensiasi dalam limfosit.

Echinacea Persiapan untuk imunodefisiensi dan penyakit inflamasi kronis digunakan. Khususnya, dermayat.diresepkan di dalam tetes untuk pencegahan dan pengobatan infeksi pernapasan akut, serta bersama dengan agen antibakteri dalam infeksi kulit, saluran pernapasan dan saluran kemih.

Prinsip-prinsip umum penerapan imunostimulan pada pasien dengan imunodefisiasi sekunder

Penggunaan imunostimulator yang paling masuk akal disajikan dengan imunodefisiensi yang memanifestasikan diri mereka meningkatkan kejadian infeksi. Target utama obat imunostimulasi tetap memiliki imunodefisiensi sekunder, yang sering dimanifestasikan oleh sering berulang, sulit untuk mengobati penyakit menular dan inflamasi dari semua localization dan etiologi apa pun. Di jantung setiap proses inflamasi infeksius kronis, ada perubahan dalam sistem kekebalan tubuh, yang merupakan salah satu penyebab kegigihan proses ini.

· Immunomodulator diresepkan dalam terapi kompleks secara bersamaan dengan antibiotik, antijamum, anti-pondozoik atau anti -oviral.

· Saat melakukan langkah-langkah imunorelyabitasional, khususnya dengan pemulihan yang tidak lengkap setelah penyakit infeksi akut, imunomodulator dapat diterapkan sebagai monoterapi.

· Terapkan imunomodulator dengan jelas terhadap latar belakang pemantauan imunologis, yang harus dilakukan terlepas dari ada adanya atau tidak adanya perubahan sumber dalam sistem kekebalan tubuh.

· Immunomodulator yang bertindak pada kekebalan fagositik dapat diresepkan untuk pasien dengan gangguan status imun yang diidentifikasi dan tidak dipilih, I.E. Dasar untuk aplikasi mereka adalah gambaran klinis.

Menurunkan parameter imunitas yang diungkapkan dalam studi immunodiagnostic pada orang yang praktis sehat, tidak Sebelum Ini adalah dasar untuk menunjuk terapi imunomodulatory untuk itu.

Pertanyaan Kontrol:

1. Apa itu imunostimulan, apa kesaksian untuk imunoterapi, spesies mana yang dibagi dengan kondisi imunodefisiensi?

2. Klasifikasi imunomodulator untuk tindakan pemilihan preferensial?

3. imunostimulan asal mikroba dan analog sintetisnya, sifat farmakologis mereka, indikasi untuk penggunaan, kontraindikasi, efek samping?

4. imunostimulan endogen dan analog sintetis mereka, sifat farmakologis mereka, indikasi untuk penggunaan, kontraindikasi, efek samping?

5. Persiapan peptida thym dan peptida sumsum tulang dari sifat farmakologis mereka, indikasi untuk penggunaan, kontraindikasi, efek samping?

6. Persiapan dan interferon imunoglobulin (IFNS), sifat farmakologis mereka, indikasi untuk penggunaan, kontraindikasi, efek samping?

7. Persiapan Interferon Induktor (Interferonogen), sifat farmakologisnya, indikasi untuk penggunaan, kontraindikasi, efek samping?

8. Faktor interleukins dan kolonen, sifat farmakologisnya, indikasi untuk penggunaan, kontraindikasi, efek samping?

9. Immunostimulan sintetis dari sifat farmakologis mereka, indikasi untuk penggunaan, kontraindikasi, efek samping?

10. Persiapan kelas farmakologis lainnya dengan aktivitas imunostimulasi dan prinsip-prinsip umum untuk penggunaan imunostimulan pada pasien dengan imunodificy sekunder?