Unikalus registro įrašo numeris
Medicinos prietaiso registracijos numeris
FSR 2011/10182
Medicinos prietaiso valstybinės registracijos data
Medicinos prietaiso pavadinimas
Reagentų rinkinys „MilaLab-ELISA-HIV-AGAT“ su fermentais susietas imunosorbentinis tyrimas, skirtas nustatyti antikūnus prieš 1 ir 2 tipo žmogaus imunodeficito virusus (ŽIV-1 ir ŽIV-2), ŽIV-1 O grupę ir ŽIV-1 p24 antigenas pagal TU 9398 -187-05941003-2017
susideda iš:- imunosorbento- polistireno 96 šulinėlių sulankstomos plokštelės prie juostelių (arba šulinėlių), kurių šuliniuose yra sorbuojami dirbtiniai antigenai- gp160, gp41, p31 ŽIV-1, gp41 ŽIV-1 O grupė, gp36 ŽIV- 2 ir antikūnai prieš ŽIV-1 p24 antigeną: 1 rinkinys (1 plokštelė), 2 rinkinys (2 plokštelės), 3 rinkinys (5 plokštelės),-konjugatas-1: 1 rinkinys (1 dalis 1,2 ml), 2 rinkinys (1 1,2 ml), rinkinys 3 (1 buteliukas 3,6 ml arba 3 buteliukai po 1,2 ml) 4,0 ml arba 2 buteliukai po 2,0 ml), - RRK -1 - konjugato -1 skiedimo tirpalas: 1 rinkinys (1 buteliukas 12,0 ml), 2 rinkinys (1 buteliukas 12,0 ml), 3 rinkinys (3 buteliukai po 12,0 ml) , - RRK -2 - konjugato -2 skiedimo tirpalas: 1 rinkinys (1 buteliukas 20,0 ml), 2 komplektas (1 buteliukas 20,0 ml), 3 komplektas (2 buteliukai po 20,0 ml), - K + AT - kontrolinis teigiamas mėginys, kuriame yra antikūnai prieš ŽIV: 1 komplektas (1 buteliukas 2,0 ml), 2 rinkinys (1 buteliukas 2,0 ml), 3 rinkinys (1 buteliukas 4,0 ml arba 2 buteliukai po 2,0 ml), - K + AG - con Trolio teigiamas mėginys, kuriame yra dirbtinio ŽIV-1 p24 antigeno: 1 rinkinys (1 buteliukas. 2,0 ml), 2 rinkinys (1 buteliukas 2,0 ml), 3 rinkinys (1 buteliukas 4,0 ml arba 2 buteliukai po 2,0 ml), - К- - kontrolinis neigiamas mėginys: 1 rinkinys (1 butelis 2,5 ml), 2 rinkinys (1 butelis 2,5 ml), 3 rinkinys (1 butelis 5,0 ml arba 2 buteliukai po 2,5 ml), - PR - plovimo tirpalas: 1 rinkinys (1 butelis 50,0 ml), 2 rinkinys (1 butelis 120,0 ml), 3 rinkinys (2 buteliai po 120,0 ml), - Stop reagentas: 1 rinkinys (1 butelis 25,0 ml), 2 rinkinys (2 buteliukai po 25,0 ml), 3 rinkinys (2 buteliukai po 50,0 ml arba 4 buteliukai po 25,0 ml), - SB - substrato buferinis tirpalas: rinkinys 1 (1 buteliukas 25, 0 ml), 2 rinkinys (1 buteliukas 25,0 ml), 3 rinkinys (2 buteliukai po 50,0 ml arba 3 buteliukai po 25,0 ml), - TMB - tirpalas, kuriame yra 3,3 colio, 5,5 colio tetrametilbenzidino: 1 rinkinys (1 buteliukas 2,5 ml), 2 rinkinys (1 buteliukas 2,5 ml), 3 komplektas (2 buteliukai po 3,5 ml arba 3 buteliukai po 2,5 ml). Priedai: - polistireno 96 šulinėlių plokščių dangteliai: 1 rinkinys (1 vnt.), 2 rinkinys (2 vnt.), 3 rinkinys (5 vnt.) Arba - apsauginės plėvelės ELISA plokštėms: 1 rinkinys (2 vnt.), rinkinys 2 (4 vnt.), 3 rinkinys (10 vnt.), - vienkartiniai antgaliai: 1 rinkinys (16 vnt.), 2 rinkinys (32 vnt.), 3 rinkinys (80 vnt.), - plastikiniai padėklai skystiems reagentams : rinkinys 1 (2 vnt.), 2 rinkinys (4 vnt.), 3 rinkinys (10 vnt.), - plastikiniai maišeliai su užtrauktuku: 1 rinkinys (1 vnt.), 2 rinkinys (2 vnt.), rinkinys 3 (3 vnt.).
Organizacijos pavadinimas - medicinos prietaiso pareiškėjas
Medicinos prietaiso pareiškėjo organizacijos vieta
Medicinos prietaisų pareiškėjų organizacijos juridinis adresas
603014, Rusija, Nižnij Novgorodas, g. Kominterna, 47 m
Medicinos prietaiso gamintojo arba medicinos prietaiso gamintojo pavadinimas
UAB "NPO" diagnostikos sistemos "
Medicinos prietaiso organizacijos -gamintojo ar organizacijos vieta - medicinos prietaiso gamintojas
603093, Rusija, Nižnij Novgorodas, g. Yabloneva, 22, P.O. 69 langelis
Medicinos prietaisų gamintojo arba medicinos prietaiso gamintojo juridinis adresas
Laiku diagnozuojama ŽIV infekcija tampa itin svarbi priemonė, nes ankstesnis gydymo pradžia gali iš esmės lemti tolesnį ligos vystymąsi ir pailginti paciento gyvenimą. Pastaraisiais metais padaryta didelė pažanga nustatant šią baisią ligą: senos bandymų sistemos keičiamos pažangesnėmis, tyrimo metodai tampa prieinamesni, o jų tikslumas žymiai padidėja.
Šiame straipsnyje kalbėsime apie šiuolaikinius ŽIV infekcijos diagnozavimo metodus, kuriuos naudinga žinoti, norint laiku gydyti šią problemą ir palaikyti normalią sergančio žmogaus gyvenimo kokybę.
ŽIV diagnostikos metodai
Rusijoje ŽIV infekcijai diagnozuoti atliekama standartinė procedūra, kurią sudaro du lygiai:
- ELISA bandymų sistema (atrankinė analizė);
- imuninis blotinimas (IB).
Be to, diagnostikai gali būti naudojami kiti metodai:
- greitieji testai.
ELISA testų sistemos
Pirmajame diagnostikos etape ŽIV infekcijai nustatyti naudojamas atrankinis testas (ELISA), kurio pagrindas yra ŽIV baltymai, sukurti laboratorijose, kurios fiksuoja specifinius organizme gaminamus antikūnus reaguojant į infekciją. Po jų sąveikos su bandymo sistemos reagentais (fermentais) pasikeičia indikatoriaus spalva. Be to, šie spalvos pakeitimai apdorojami specialia įranga, kuri lemia atliktos analizės rezultatą.
Tokie ELISA testai gali parodyti rezultatus per kelias savaites nuo ŽIV infekcijos pradžios. Ši analizė neaptinka viruso buvimo, tačiau nustato antikūnų prieš jį gamybą. Kartais žmogaus organizme antikūnų prieš ŽIV gamyba prasideda praėjus 2 savaitėms po užsikrėtimo, tačiau daugumai žmonių jie atsiranda vėliau, po 3–6 savaičių.
Yra keturių kartų ELISA testai su skirtingu jautrumu. Pastaraisiais metais dažniau naudojamos III ir IV kartos bandymų sistemos, sukurtos sintetinių peptidų ar rekombinantinių baltymų pagrindu ir turinčios didesnį specifiškumą bei tikslumą. Jie gali būti naudojami diagnozuoti ŽIV infekciją, stebėti ŽIV paplitimą ir užtikrinti saugumą tikrinant paaukotą kraują. III ir IV kartos ELISA testų sistemų tikslumas yra 93–99% (jautresni testai, kurie gaminami Vakarų Europoje, yra 99%).
Norint atlikti ELISA tyrimą, iš paciento venos paimama 5 ml kraujo. Nuo paskutinio valgio iki tyrimo turi praeiti mažiausiai 8 valandos (paprastai tai daroma ryte tuščiu skrandžiu). Tokį testą rekomenduojama atlikti ne anksčiau kaip praėjus 3 savaitėms po tariamos infekcijos (pavyzdžiui, po nesaugių lytinių santykių su nauju seksualiniu partneriu).
ELISA tyrimo rezultatai gaunami per 2–10 dienų:
- neigiamas rezultatas: rodo, kad nėra ŽIV infekcijos ir nereikalauja vizito pas specialistą;
- klaidingai neigiamas rezultatas: jį galima pastebėti ankstyvosiose infekcijos stadijose (iki 3 savaičių), vėlyvose AIDS stadijose, ryškiai slopinant imunitetą ir netinkamai paruošiant kraują;
- klaidingai teigiamas rezultatas: tai galima pastebėti sergant kai kuriomis ligomis ir netinkamai atliekant kraujo paruošimą;
- teigiamas rezultatas: rodo užsikrėtimą ŽIV infekcija, reikalingas IB ir paciento siuntimas pas AIDS centro specialistą.
Kodėl ELISA testas gali duoti klaidingai teigiamus rezultatus?
Klaidingai teigiami ELISA tyrimo dėl ŽIV rezultatai gali būti pastebėti netinkamai apdorojant kraują arba pacientams, sergantiems šiomis ligomis ir ligomis:
- daugybinė mieloma;
- infekcinės ligos, kurias sukelia Epstein-Barr virusas;
- būklė po;
- autoimuninės ligos;
- nėštumo fone;
- būklė po skiepijimo.
Dėl aukščiau aprašytų priežasčių kraujyje gali būti nespecifinių kryžminio reakcijos antikūnų, kurių gamybą sukėlė ne ŽIV infekcija.
Pastaraisiais metais klaidingai teigiamų rezultatų dažnis labai sumažėjo dėl III ir IV kartos bandymų sistemų, kuriose yra jautresnių peptidų ir rekombinantinių baltymų (jie sintezuojami naudojant genų inžineriją in vitro). Pradėjus naudoti tokius ELISA testus, klaidingai teigiamų rezultatų dažnis gerokai sumažėjo ir yra apie 0,02–0,5%.
Klaidingai teigiamo atradimas nereiškia, kad žmogus yra užsikrėtęs ŽIV. Tokiais atvejais PSO rekomenduoja kitą ELISA testą (privaloma IV karta).
Paciento kraujas siunčiamas į etaloninę ar arbitražo laboratoriją, pažymėtą „pakartoti“, ir tiriamas naudojant IV kartos ELISA testų sistemą. Jei naujos analizės rezultatas yra neigiamas, pirmasis rezultatas pripažįstamas klaidingu (klaidingai teigiamu) ir IB neatliekamas. Jei antrojo tyrimo metu rezultatas yra teigiamas arba abejotinas, pacientui per 4-6 savaites turi būti paskirta IB, kad patvirtintų ar paneigtų ŽIV infekciją.
Imuninis blotinimas
Galutinę ŽIV infekcijos diagnozę galima nustatyti tik gavus teigiamą imuninio blotinimo (IB) rezultatą. Jai įgyvendinti naudojama nitroceliuliozės juostelė, ant kurios tepami virusiniai baltymai.
Kraujo mėginiai IB atliekami iš venos. Tada jis yra specialiai apdorojamas, o jo serume esantys baltymai atskiriami specialiu geliu pagal jų krūvį ir molekulinę masę (manipuliacija atliekama naudojant specialią įrangą veikiant elektriniam laukui). Ant kraujo serumo gelio uždedama nitroceliuliozės juostelė, o specialioje kameroje atliekamas blotinimas („blotting“). Juostelė apdorojama ir jei naudojamose medžiagose yra antikūnų prieš ŽIV, jie jungiasi prie antigeninių juostų IB ir atrodo kaip linijos.
IB laikomas teigiamu, jei:
- pagal Amerikos CDC kriterijus - juostelėje yra dvi ar trys eilutės gp41, p24, gp120 / gp160;
- pagal Amerikos FDA kriterijus - juostelėje yra dvi eilutės p24, p31 ir eilutė gp41 arba gp120 / gp160.
99,9% atvejų teigiamas IB rezultatas rodo ŽIV infekciją.
Jei nėra eilučių, IB yra neigiamas.
Abejotina nustatyti linijas su gp160, gp120 ir gp41-IB. Tokį rezultatą galima nustatyti, kai:
- onkologinės ligos;
- nėštumas;
- dažnas kraujo perpylimas.
Tokiais atvejais rekomenduojama atlikti pakartotinę ekspertizę naudojant kitos įmonės rinkinį. Jei po papildomo IB rezultatas išlieka abejotinas, būtina stebėti šešis mėnesius (IB atliekamas kas 3 mėnesius).
Polimerazės grandininė reakcija
PGR tyrimas gali aptikti viruso RNR. Jo jautrumas yra gana didelis ir leidžia nustatyti ŽIV infekciją jau praėjus 10 dienų po užsikrėtimo. Kai kuriais atvejais PGR gali duoti klaidingai teigiamų rezultatų, nes didelis jautrumas taip pat gali reaguoti į antikūnus prieš kitas infekcijas.
Ši diagnostikos technika yra brangi ir reikalauja specialios įrangos bei aukštos kvalifikacijos specialistų. Šios priežastys neleidžia to atlikti masinio gyventojų tyrimo metu.
PGR naudojamas šiais atvejais:
- nustatyti ŽIV naujagimiams, gimusiems ŽIV infekuotoms motinoms;
- nustatyti ŽIV „lango laikotarpiu“ arba esant abejotinam IB;
- kontroliuoti ŽIV koncentraciją kraujyje;
- už paaukoto kraujo tyrimą.
Tik atliekant PGR testą, ŽIV nėra diagnozuojamas, bet atliekamas kaip papildomas diagnostinis metodas prieštaringoms situacijoms išspręsti.
Ekspresiniai metodai
Viena iš ŽIV diagnostikos naujovių tapo greitieji testai, kurių rezultatus galima įvertinti per 10-15 minučių. Efektyviausi ir tiksliausi rezultatai gaunami atliekant imunochromatografinius tyrimus, pagrįstus kapiliarų srauto principu. Tai specialios juostelės, ant kurių tepamas kraujas ar kiti tiriami skysčiai (seilės, šlapimas). Esant ŽIV antikūnams, po 10-15 minučių ant tyrimo atsiranda spalvota ir kontrolinė juostelė - teigiamas rezultatas. Jei rezultatas neigiamas, pasirodo tik kontrolinė juostelė.
Kaip ir po ELISA tyrimų, greitųjų tyrimų rezultatai turi būti patvirtinti atliekant IB analizę. Tik tada galima nustatyti ŽIV infekcijos diagnozę.
Yra greitųjų rinkinių, skirtų bandymams namuose. „OraSure Technologies1“ testas (JAV) yra patvirtintas FDA, parduodamas be recepto ir gali būti naudojamas ŽIV aptikti. Po tyrimo, jei rezultatas yra teigiamas, pacientui rekomenduojama atlikti tyrimą specializuotame centre, kad būtų patvirtinta diagnozė.
Likę namų naudojimo testai dar nėra patvirtinti FDA ir jų rezultatai gali būti labai abejotini.
Nepaisant to, kad greitieji testai yra prastesni nei IV kartos ELISA testai, jie plačiai naudojami papildomam populiacijos tyrimui.
Galite atlikti testus, kad nustatytumėte ŽIV infekciją bet kurioje klinikoje, centrinėje rajono ligoninėje arba specializuotuose AIDS centruose. Rusijos teritorijoje jie laikomi visiškai konfidencialiai arba anonimiškai. Kiekvienas pacientas gali tikėtis gauti medicininę ar psichologinę konsultaciją prieš arba po tyrimo. Už ŽIV tyrimus turėsite mokėti tik komercinėse ligoninėse, o valstybinėse poliklinikose ir ligoninėse jie atliekami nemokamai.
Skaitykite apie būdus, kaip galite užsikrėsti ŽIV, ir kokie mitai egzistuoja apie galimybes užsikrėsti
1 Nustatykite užduotį
1.1 Rinkinys skirtas vienu metu aptikti antikūnus prieš pirmojo ir antrojo tipo žmogaus imunodeficito virusus (ŽIV-1 ir ŽIV-2) ir ŽIV-1 p24 antigeną žmogaus serume ir plazmoje „in vitro“ netiesioginio fermento metodu -susietas imunosorbentinis tyrimas.
2 Rinkinio charakteristikos ir veikimo principas
2.1 Į komplektą įeina:
|
Komponento pavadinimas |
Kiekis |
|
Imunosorbentas |
2 tabletės |
|
Teigiama kontrolė AT (K + AT) |
1 butelis, 3 ml |
|
Teigiamas kontrolinis AG mėginys (K + AG) |
3 buteliukai, liofilizuotas preparatas |
|
Neigiama kontrolė (TO -) |
2 buteliukai po 3 ml |
|
Konjugato tirpalas Nr (RC-1) |
1 buteliukas, 12 ml |
|
2 konjugatas (Kg-2) |
1 butelis, 1 ml |
|
2 konjuguoto praskiedimo tirpalas (RR-K2) |
2 buteliukai po 18 ml |
|
Pagrindo buferinis tirpalas ( BRS) |
2 buteliukai po 18 ml |
|
Chromogen TMB |
1 butelis, 1 ml |
|
Tween PBS koncentratas (FSB-T × 25) |
2 buteliukai po 50 ml |
|
Sustabdyti reagentą |
1 buteliukas, 12 ml |
|
Reagento dėklo rinkinys su patarimais daugiakanalėms pipetėms |
1 komplektas |
|
Lipni plėvelė |
2.2 Pagrindiniai ELISA-HIV 1,2 AGAT rinkinio komponentai yra imunosorbentas, konjugato tirpalas Nr. 1 ir konjugatas Nr. 2.
Imunosorbentas yra polistireno plokštelė, kurios šuliniuose yra rekombinantinio ŽIV-1 (gp41) ir ŽIV-2 (gp36) antigenų ir monokloninių antikūnų prieš ŽIV-1 p24 antigeną mišinys.
Konjugato tirpalas Nr yra biotinu pažymėtų monokloninių žmogaus antikūnų prieš ŽIV-1 p24 antigeną ir biotinu pažymėtų rekombinantinių ŽIV-1 ir ŽIV-2 baltymų mišinys.
2 konjugatas yra streptavidinas, konjuguotas su krienų peroksidaze.
Teigiama kontrolė AT-žmogaus kraujo serumas, kuriame yra antikūnų prieš ŽIV-1 ir ŽIV-2, be antikūnų prieš hepatitą C ir Treponema pallidum, ŽIV-1 p24 antigeną ir HBs antigeną, inaktyvuojamas kaitinant 3 valandas 56 ° C temperatūroje.
Teigiamas kontrolinis AG mėginys-žmogaus kraujo serumas, kuriame yra natūralus ŽIV-1 p24 antigenas, be antikūnų prieš ŽIV-1, ŽIV-2, hepatito C virusą ir Treponema pallidum, ir HBs antigeno, inaktyvuotas kaitinant 3 valandas 56 ° C temperatūroje.
Neigiama kontrolė-žmogaus kraujo serumas, kuriame nėra antikūnų prieš ŽIV-1, ŽIV-2, HCV, ŽIV-1 p24 antigeną ir HBs antigeną, inaktyvuotas kaitinant 3 valandas 56 ° C temperatūroje.
Rinkinio principas. Kai į plokštelės šulinius pridedamas konjugato Nr. 1 tirpalas ir užkrėsto kraujo serumo mėginiai, p24 antigenas jungiasi tiek prie specifinių antikūnų kietoje fazėje, tiek prie monokloninių biotinilintų anti-p24 antikūnų, esančių konjugato tirpale Nr. 1; ŽIV specifiniai antikūnai jungiasi tiek prie rekombinantinių ŽIV-1 ir ŽIV-2 antigenų, adsorbuotų kietoje fazėje, tiek prie antigenų, įtrauktų į konjugato tirpalą Nr. 1, ir sudaro antigeno-antikūno kompleksus. Konjugatas # 2 nustato anti-p24 specifinių antikūnų ir p24 antigeno imuninius kompleksus. Nuplovus nesusietus komponentus, į plokštelės šulinius pridedamas peroksidazės substrato (vandenilio peroksido) ir TMB chromogeno tirpalas.
Peroksidazės reakcija sustabdoma pridedant sustabdymo reagento (0,9 M sieros rūgšties tirpalo), o tirpalo spalvos intensyvumas šuliniuose matuojamas spektrofotometru kaip optinio tankio (OD) vertė esant 450 nm bangos ilgiui.
OD vertė yra tiesiogiai proporcinga specifinių antikūnų ir (arba) p24 antigeno koncentracijai serume ar plazmos mėginyje. Kuo didesnis antikūnų ir (arba) p24 antigeno kiekis serumo mėginyje, tuo didesnis dažymo intensyvumas.
2.3 Rinkinys skirtas laikyti 24 spektakliai ELISA: 1 rinkinys - 1 juostelė (8 skylės). Iš viso - 192 apibrėžimusįskaitant kontrolinius mėginius.
3 Atsargumo priemonės dirbant su rinkiniu
3.1 Visos rinkinio sudedamosios dalys yra netoksiškos naudojamomis koncentracijomis. Tačiau dirbkite su visais žmogaus kraujo serumo (plazmos) mėginiais, kurie turėtų būti laikomi potencialiai užkrečiamais, galinčiais laikyti ir perduoti ŽIV, hepatito B virusą ar bet kurį kitą virusinės infekcijos sukėlėją, su atliekų tirpalais ir skysčiais, įvairia įranga. kurie gali būti užteršti, analizės procesui naudojant reikia imtis tam tikrų saugos priemonių naudojant:
Darbas turi būti atliekamas specialiai įrengtoje patalpoje;
Būtina dirbti naudojant asmenines apsaugos priemones ir imtis atsargumo priemonių pagal reikalavimus ,, ir.
3.2 Stabdymo reagentas, kuriame yra sieros rūgšties, dirgina. Patekus ant odos ir gleivinės, nedelsiant nuplauti dideliu kiekiu vandens.
3.3 Dirbant su rinkiniu, darbo vietose turi būti įrengta tiekiamoji ir ištraukiamoji ventiliacija.
3.4 Visi asmenys, dirbantys laboratorijoje su rinkiniais, privalo atlikti privalomą medicininę apžiūrą pagal reikalavimus.
3.5 Medicininės atliekos ir (arba) nepanaudoti rinkiniai, kurių galiojimo laikas pasibaigęs, turi būti tinkamai pašalinti.
4 Darbo su rinkiniu taisyklės
4.1 Norint atmesti klaidingus rezultatus, bandiniai turi būti paruošti ir laikomi tokiomis sąlygomis, kurios neleidžia bakterijoms daugintis. Būtina išsiaiškinti serumo mėginius, kuriuose yra agreguotų serumo komponentų arba nuosėdų, centrifuguojant (5–10) minučių, esant 3000 aps./min. Serumo mėginiai (2-8) ° C temperatūroje gali būti laikomi ne ilgiau kaip 5 dienas. Šaldytus mėginius (geriausia ne žemesnėje kaip 20 ° C temperatūroje) galima laikyti ne ilgiau kaip 1 metus. Reikėtų vengti pakartotinių mėginių užšalimo ir atšildymo ciklų.
Reikėtų prisiminti, kad mėginiai su hemolize, hiperlipidemija, bakterijų augimu, taip pat tie, kurie ilgą laiką buvo laikomi be užšalimo, netinka analizei.
Rezultatų patikimumas priklauso nuo šių taisyklių laikymosi:
Neleidžiama naudoti rinkinio pasibaigus galiojimo laikui, taip pat maišyti skirtingų serijų rinkinių komponentus;
Kiekvienam reagentui paruošti reikia naudoti atskirą indą;
Negalima apdoroti visų reagentams paruošti naudojamų indų dezinfekavimo priemonėmis ir plovikliais. Jei reikia, nuplaukite geriamuoju vandeniu, tada penkis kartus nuplaukite distiliuotu vandeniu;
Norint dirbti su TMB ir PX chromogenu, būtina naudoti atskirus konteinerius tirpalams, pipetės antgaliams ir indams.
Būtina atkreipti dėmesį į kruopštų reagentų maišymą;
Laikas tarp plokštelės šulinėlių užpildymo ir ištuštinimo tirpalais ir reagentais turi būti ne trumpesnis kaip 30 s. Džiovinti šulinius neleidžiama visuose ELISA etapuose;
Naudodami skalbyklę, stebėkite indų plovimo tirpalo ir jungiamųjų žarnų būklę: jose neturėtų būti bakterijų ar grybelių augimo požymių;
Būtina naudoti automatines pipetes su keičiamais antgaliais, patvirtintomis pagal vidutinės dozės vertę ir pipetavimo rezultatų pakartojamumą (paklaida ne didesnė kaip 3%);
Dozatoriai ir darbiniai paviršiai turi būti apdoroti tirpalu, kurio tūrio dalis yra 70%etilo alkoholio. Nenaudokite chloramino ir kitų chloro turinčių medžiagų;
Bandomiesiems ir kontroliniams mėginiams tvarkyti rekomenduojami vienkartiniai pipetės antgaliai. Kiekvienas serumo mėginys ir rinkinio reagentai turi būti paimti su atskiru antgaliu.
Pilant PK-1 į šulinius, nelieskite plokštelės paviršiaus ir tirpalo šuliniuose pipetės antgaliu.
Analizės metu venkite tiesioginių saulės spindulių ant darbinio paviršiaus.
4.2 Atidarant ir ištirpinant liofilizuotus komponentus, būtina užtikrinti, kad ant buteliuko dangtelio ir sienelių neliktų sausų medžiagų.
5 Įranga ir medžiagos, reikalingos analizei
5.1 Vertikalios skenavimo spektrofotometras, leidžiantis išmatuoti tirpalų optinį tankį plokštės šuliniuose esant 450 nm bangos ilgiui;
Pusiau arba automatinė plokščių plovimo mašina (plovimo mašina);
ТС-80 М2 tipo sauso oro termostatas, palaikantis temperatūrą (37 ± 1) ° С arba panašių charakteristikų;
Vieno kanalo automatinės pipetės su keičiamais antgaliais, leidžiančios paimti skysčio tūrį nuo 0,01 iki 5,0 ml;
Pipetės 8 kanalų automatinės su keičiamais antgaliais, leidžiančios išgauti iki 0,5 ml skysčio;
Graduotas cilindras, kurio talpa 2000 ml;
2000 ml talpos laboratorinė kolba;
Stikliniai buteliukai, kurių talpa 20 ml;
Reagento padėklai arba Petri lėkštelės (skersmuo 100 mm);
Higroskopinė medicininė vata;
Filtravimo popierius;
Chirurginės guminės pirštinės;
Tirpalas, kurio tūrio dalis 70%etilo alkoholio;
Tirpalas, kurio masės dalis yra 6%vandenilio peroksido;
Dejonizuotas arba distiliuotas vanduo;
Kietųjų atliekų surinkimo konteineris;
Konteineris skystoms atliekoms nusausinti.
6 Pasirengimas analizei
6.1 Prieš analizę išimkite reagento rinkinį iš šaldytuvo, atidarykite dėžutės dangtį ir laikykite rinkinio komponentus temperatūroje (18-25) ° С 30 min.
Prieš analizę kruopščiai sumaišykite visus serumo (plazmos) mėginius ir reagentus.
Reagentų sunaudojimas bandymų rinkiniui, kuris nustatomas pagal naudojamų juostelių skaičių, pateiktas A priedėlio A.1 lentelėje.
6.2 Plokščių plovimo tirpalo paruošimas
Dėmesio! Plokštelių plovimo tirpalą paruoškite likus 15 minučių iki tyrimo pradžios!
Jei buteliuke su FSB-T × 25 yra nuosėdų, prieš naudojimą jį reikia pašildyti (37 ± 1) ° C temperatūroje, kol nuosėdos visiškai ištirps. Į matavimo cilindrą, kurio talpa 2000 ml, įpilkite buteliuko turinį su FSB-T × 25, tada įpilkite distiliuoto vandens iki žymės 1250 ml ir švelniai sumaišykite tirpalą. Tirpalą galima laikyti (2–8) ° C temperatūroje 72 valandas.
Jei naudojama viena ar kelios juostelės, buteliuko turinį FSB-T × 25 stipriai purtykite (20–30) s, įpilkite reikiamą tirpalo kiekį (A.1 lentelė) į matavimo stiklinę arba cilindrą, įpilkite reikiamo kiekio distiliuoto vandens ir išmaišykite tirpalą ... Nepanaudotą FSB-T × 25 galima laikyti uždarytame buteliuke (2–8) ° C temperatūroje visą rinkinio galiojimo laiką.
6.3 Imunosorbento paruošimas
Imunosorbentas yra paruoštas naudoti.
Atidarykite pakuotę ir ant rėmo uždėkite reikiamą skaičių juostelių. Likusias juosteles 3 mėnesius laikykite sandariai uždarytame maišelyje su sausikliu (2–8) ° C temperatūroje.
6.4 K + AT, K-, RK-1, RR-K2, BRS ir sustabdymo reagento paruošimas
K + AT, K-, RK-1, PP-K2, BRS ir sustabdymo reagentas yra paruošti naudoti.
Dėmesio! Buteliuke su RK-1 nuosėdos gali nusėsti. Analizei turi būti naudojamas supernatantas.
Nepanaudotus RK-1, RR-K2, BRS ir sustabdymo reagentus po buteliukų atidarymo galima laikyti uždaruose buteliukuose (2–8) ° C temperatūroje visą rinkinio galiojimo laiką.
Likusią K + AT ir K dalį - atidarius buteliuką, galima laikyti uždaruose buteliukuose (2–8) ° C temperatūroje visą rinkinio galiojimo laiką.
6.5 K + AG tirpalo paruošimas
Dėmesio! Paruoškite K + AG tirpalą likus 15 minučių iki analizės pradžios!
Norėdami atkurti liofilizuotą K + AG, prieš atidarydami buteliuką, švelniai bakstelėkite, kad nukratytumėte daleles, prilipusias prie butelio ar kamštienos sienelių. Atidarykite buteliuką ir uždėkite kamštelį aukštyn kojom ant sauso paviršiaus. Į buteliuką įpilkite 0,8 ml distiliuoto vandens. Uždarykite buteliuką kamščiu, 10 minučių inkubuokite (18–25) ° C temperatūroje ir švelniai pakreipkite ir pasukite buteliuką, maišykite jo turinį, kol jis visiškai ištirps, išvengiant putų susidarymo.
Paruoštą K + AG galima laikyti uždarytame butelyje (2–8) ° C temperatūroje vieną mėnesį, minus 20 ° C temperatūroje-šešis mėnesius. Leidžiama vieną kartą atšaldyti-atšildyti susigrąžintą K + AG.
6.6 Kg-2 tirpalo paruošimas darbiniu praskiedimu
Iš buteliuko su Kg-2 paimkite A.1 lentelėje nurodytą tūrį ir perpilkite į buteliuką su PP-K2. Gerai išmaišykite buteliuko turinį, kad nesusidarytų putos.
Jei naudojama viena ar daugiau juostelių, reikiamą kiekį PP-K2 supilkite į švarų butelį, įpilkite Kg-2 pagal A.1 lentelę ir sumaišykite tirpalą, kad nesusidarytų putos.
Dėmesio! Prieš pat naudojimą paruošiamas darbinio praskiedimo Kg-2 tirpalas! Kg-2 tirpalą darbiniame praskiedime galima laikyti 15 minučių (18-25) ° C temperatūroje. Naudokite tik naują reagentų vonią ir naujus patarimus!
Likusią Kg-2 dalį galima laikyti uždarytame buteliuke (2–8) ° C temperatūroje visą rinkinio galiojimo laiką.
6.7 Darbinio substrato tirpalo paruošimas
Prieš naudojimą buteliuką su TMB chromogenu reikia pašildyti (37 ± 1) temperatūroje.° Nuo tol, kol kristalai visiškai ištirps.
Iš buteliuko su TMB chromogenu paimkite A.1 lentelėje nurodytą tūrį ir perkelkite į buteliuką su BRS. Gerai išmaišykite buteliuko turinį, kad nesusidarytų putos.
Jei naudojate vieną ar kelias juosteles, reikiamą BRS kiekį supilkite į švarų buteliuką, įpilkite TMB chromogeno pagal A.1 lentelę ir sumaišykite tirpalą, kad nesusidarytų putos.
Dėmesio! Darbinį pagrindo tirpalą paruoškite prieš pat naudojimą tamsioje vietoje! Tirpalą galima laikyti 20 minučių (18-25) ° C temperatūroje tamsioje vietoje.
Tirpalas turi būti apsaugotas nuo šviesos ir sąlyčio su metalais ar metalų jonais. Prieš naudojimą substrato tirpalas turi būti bespalvis. Indai, kurie reakcijos metu liečiasi su substrato tirpalu, turi būti plaunami nenaudojant sintetinių ploviklių. Naudokite tik naują reagentų vonią ir naujus patarimus!
Likusią TMB chromogeno dalį galima laikyti uždarytame buteliuke (2–8) ° C temperatūroje visą rinkinio galiojimo laiką.
7 Reikalavimai plokštelių plovimui
Visuose plovimo etapuose būtina kontroliuoti visų šulinių užpildymą ir visišką skysčio pašalinimą (išsiurbimą) iš jų;
Kiekvieną kartą skalbiant būtina užpildyti visus šulinius tirpalu iki krašto (0,30–0,35 ml), be skysčio perpildymo ir perpildymo iš gretimų šulinių;
Būtina 30 sekundžių inkubuoti šulinius, užpildytus plokštelių plovimo tirpalu;
Atliekant kiekvieną aspiraciją, atsargiai pašalinkite likusį skystį iš šulinių, paliesdami rėmą juostelėmis apversta padėtimi ant kelis kartus sulankstyto filtro popieriaus, padėto ant polietileno lakšto;
Prastas skalavimas plokštelėmis duos neteisingus rezultatus.
8 Analizė
8.1 Į bet kuriuos du plokštelės šulinius įpilkite 0,07 ml(70 μl) K + AT, kitose dviejose skylėse - kiekviena 0,07 ml(70 μl) K + AG, kitose trijose skylėse - kiekviena 0,07 ml(70 μl) Į -.
Dėmesio! Nustatant ELISA ant vienos juostos, leidžiama naudoti du šulinius K - - vieną šulinį K + AT ir vieną šulinį K + AG.
Įpilkite į likusius plokštelės šulinius 0,07 ml(70 μl) tirtų žmogaus kraujo serumo (plazmos) mėginių.
Dėmesio! Kiekvienas mėginys turi būti paimtas su vienkartiniu antgaliu!
8.2 Visuose plokštelės šuliniuose ant kontrolinių mėginių ir tirtų serumo (plazmos) kraujo mėginių iškarto deponuoti iki 0,05 ml(50 μl) RC-1... Sumaišykite šulinių turinį, švelniai paliesdami plokštelės kraštus.
8.3 (37 ± 1) ° Iš vidaus 60 minučių.
Dėmesio!(1–2) minutės iki inkubacijos pabaigos paruoškite darbinio praskiedimo Kg-2 tirpalą (6.6 skyrius).
8.4 Plovikliu pašalinkite šulinių turinį, tada šulinius nuplaukite tirpalu, skirtu plokštelėms plauti (6.2 skyrius) septynis kartus.
8.5 Įpilkite į visus plokštelės šulinius 0,15 ml(150 μl) tirpalo Kg-2 skiedžiant darbiniu būdu (6.6 p.).
8.6 Uždenkite plokštelę folija arba uždenkite dangčiu ir inkubuokite termostate esant temperatūrai (37 ± 1) ° Iš vidaus 10 min.
8.7 Plokštelėmis išimkite plokštelių šulinių turinį, tada plokštelių šulinius nuplaukite plokštelių plovimo tirpalu (6.2 skyrius) septynis kartus.
8.8 Įpilkite į visus plokštelės šulinius 0,15 ml(150 μl) darbinis substrato tirpalas(6.7 punktas).
Ruošiant darbinį pagrindo tirpalą (6.7 punktas) f lakas su TMB chromogenu prieš naudojimą turi būti pašildytas (3-5) minutes (37 ° C) temperatūroje± 1) ° C, kol kristalai visiškai ištirps.
8.9 Uždenkite plokštelę folija arba uždenkite dangčiu ir inkubuokite termostate esant temperatūrai (37 ± 1) ° SU tamsoje vietoje 15 minučių.
Dėmesio! Inkubavus šuliniuose su serumo mėginiais, kuriuose yra antikūnų prieš ŽIV-1 ir (arba) ŽIV-2 ir (arba) ŽIV-1 p24 antigeną, tirpalo spalva pasikeis iš bespalvės į mėlyną, priklausomai nuo antikūnų koncentracijos. ir (arba) antigeno tiriamojo serumo mėginyje.
8.10 Sustabdykite peroksidazės reakciją, pridedant prie visų šulinių 0,05 ml(50 μl) sustabdymo reagentas.
Dėmesio!Šuliniuose su serumo mėginiais, kuriuose yra antikūnų prieš ŽIV-1 ir (arba) ŽIV-2 ir (arba) ŽIV-1 p24 antigeną, tirpalo spalva pasikeis nuo mėlynos iki įvairaus intensyvumo geltonos spalvos.
8.11 Ne vėliau kaip (1–2) minutės po reakcijos sustabdymo nustatykite šulinių OD vienos bangos ilgio režimu esant bangos ilgiui 450 nm.
9 Analizės rezultatų apdorojimas
9.2 Apsvarstykite rezultatus tik tuo atveju, jei:
Opsr K vertė - neviršija 0,2 OE;
Kiekviena atskira OD K reikšmė neturėtų nukrypti nuo ODs K - daugiau kaip 30%. Jei viena iš trijų OP K reikšmių viršija šią ribą, ji neturėtų būti įtraukta į OPsr K skaičiavimą. Jei dvi iš trijų OD K reikšmių viršija šią ribą, naujo rinkinio reagentų analizė turėtų būti pakartota;
Opsr K + AT vertė yra didesnė nei 1,0 OE;
„Opsr K + AG“ vertė yra didesnė nei 1,0 OU.
9.3 Jei laikomasi pirmiau nurodytų sąlygų, apskaičiuokite kritinę vertę (OPcrit.), OE pagal formulę (1):
OPcrit. = OPsr K - + 0,14 (1).
10 Analitinė ir diagnostinė veikla
Jautrumas reagento rinkinys ELISA-ŽIV 1,2 AGAT p24 antigeno ŽIV -1 aptikimui -
Specifiškumas reagento rinkinys ELISA-ŽIV 1,2 AGAT- 100% standartinis AT (-) ŽIV. Standartinė serumų grupė, kurioje nėra 1 ir 2 tipo žmogaus imunodeficito viruso (ŽIV-1,2) ir ŽIV-1 antigeno (p24) antikūnų. ОСО42-28-214-02P.Kat # INS-20. CJSC MBS.
11 Rinkinio išleidimo forma
11.1 Rinkinį galima rinktis iš penkių konfigūracijos variantų:
1 1P rinkinys - rankinė analizė. Rinkinys skirtas 12 ELISA važiavimų ant sulankstomos plokštelės: 1 rinkinys - 1 juostelė (8 skylės). Iš viso - 96 nustatymai, įskaitant kontrolinius mėginius;
2 rinkinys 2M - rankinė analizė. Rinkinys skirtas atlikti 2 ELISA rinkinius ant monolitinių plokščių: 1 nustatymas - 1 plokštelė. Iš viso - 192 nustatymai, įskaitant kontrolinius mėginius;
3 nustatyti 2P- analizės atlikimas rankiniu būdu. Rinkinys skirtas nešiojimui 24 spektakliai ELISA 2 sulankstomas x plokštės: 1 komplektas - 1 juostelė (8 skylės). Iš viso - 192 apibrėžimaiįskaitant kontrolinius mėginius;
4 rinkiniai А2М - analizė naudojant automatinį analizatorių. Rinkinys skirtas atlikti 2 ELISA rinkinius ant monolitinių plokščių: 1 nustatymas - 1 plokštelė. Iš viso - 192 nustatymai, įskaitant kontrolinius mėginius;
5 rinkinys A2P - analizė naudojant automatinį analizatorių. Rinkinys skirtas 24 ELISA bandymams ant 2 sulankstomų plokščių: 1 rinkinys - 1 juostelė (8 šuliniai). Iš viso - 192 nustatymai, įskaitant kontrolinius mėginius.
12 Rinkinio laikymo ir naudojimo sąlygos
12.1 Rinkinys turi būti laikomas švarioje patalpoje, apsaugotoje nuo drėgmės ir šviesos (2–8) ° C temperatūroje per visą galiojimo laiką. Neužšaldykite rinkinio komponentų.
12.2 Norint gauti patikimus rezultatus, būtina griežtai laikytis rinkinio naudojimo instrukcijų.
12.3 Rinkinio galiojimo laikas yra 12 mėnesių.
A priedėlis
A.1 lentelė. ELISA rinkinio reagentų sunaudojimas
|
reagentas, ml |
Naudotų juostelių skaičius, vnt. |
|||||||||||
|
Plokštelių plovimo tirpalo paruošimas |
||||||||||||
|
FSB-T × 25 |
||||||||||||
|
Distiliuotas vandens |
||||||||||||
|
Kg-2 tirpalo paruošimas darbiniu praskiedimu |
||||||||||||
|
RR-K2 |
||||||||||||
|
Darbinio substrato tirpalo paruošimas |
||||||||||||
|
Chromogen TMB |
||||||||||||
Bibliografija
|
Sanitarinės taisyklės |
1998 m. Gruodžio 16 d. Baltarusijos Respublikos sveikatos apsaugos ministerijos įsakymas Nr. 351 Dėl departamentų taisyklių, reglamentuojančių ŽIV / AIDS problemas, peržiūros |
|
|
2002 m. Lapkričio 25 d. Baltarusijos Respublikos sveikatos apsaugos ministerijos įsakymas Nr. 165 Apie sveikatos priežiūros įstaigų dezinfekciją ir sterilizavimą |
||
|
Balandžio 28 d. Baltarusijos Respublikos sveikatos apsaugos ministerijos nutarimas Nr. 47 Dėl Privalomojo darbuotojų sveikatos patikrinimo tvarkos instrukcijos patvirtinimo ir kai kurių Baltarusijos Respublikos sveikatos apsaugos ministerijos dekretų pripažinimo negaliojančiais |
||
Įkeliama ...