Tanniner (tanider) er plante høymolekylære fenolforbindelser som kan utfelle proteiner og ha en snerpende smak.
Begrepet "tanniner" har utviklet seg historisk, takket være disse forbindelsenes evne til å gjøre rå dyrehud til slitesterk hud, motstandsdyktig mot fuktighet og mikroorganismer. Bruken av dette begrepet ble offisielt foreslått i 1796 av Seguin for å betegne stoffer i ekstraktene av visse planter som kan utføre garveprosessen.
Tanning er en kompleks kjemisk interaksjon mellom tanniner og kollagenmolekyler, hovedproteinet i bindevev. Garveegenskaper besittes av polynukleære fenoler som inneholder mer enn én hydroksyl i molekylet. Med et flatt arrangement av tanid på et proteinmolekyl oppstår stabile hydrogenbindinger mellom dem:
Fragment av et proteinmolekyl Fragment av et tanidmolekyl
Styrken på interaksjonen av tanid med protein avhenger av antall hydrogenbindinger og er begrenset av størrelsen på molekylet til polyfenolforbindelsen. Molekylvekten til tanniner kan være opptil 20 000. Samtidig er det 1-2 fenoliske hydroksygrupper per 100 molekylvektsenheter i tanniner. Derfor er antallet hydrogenbindinger som dannes mange, og solingsprosessen er irreversibel. Hydrofobe radikaler orientert mot det ytre miljø gjør huden utilgjengelig for fuktighet og mikroorganismer.
Ikke alle tanniner er i stand til ekte soling. Denne egenskapen skiller forbindelser med en molekylvekt på 1000 eller mer. Polyfenoliske forbindelser med en masse på mindre enn 1000 er ikke i stand til å garve lær og har bare en snerpende effekt.
Tanniner er svært mye brukt i industrien. Det er nok å si at verdensproduksjonen av tanniner overstiger 1 500 000 tonn per år, og andelen vegetabilske tanniner er opptil 50-60% av totalen.
Utbredelse i planteverdenen og tanniners rolle i planter. Tanniner er mye funnet i representanter for angiospermer og gymnospermer, alger, sopp, lav, i klubbmoser og bregner. De finnes i mange høyere planter, spesielt tobladede. Deres største antall ble funnet i en rekke representanter for familiene Fabaceae, Myrtaceae, Rosaceae, Anacardiaceae, Fagaceae, Polygonaceae.
Tanniner i planten er lokalisert i cellevakuoler og adsorberes på cellevegger under cellealdring. De samler seg i store mengder i underjordiske organer, bark, men kan finnes i blader og frukter.
Tanniner utfører hovedsakelig beskyttende funksjoner i planter. Med mekanisk skade på vev begynner en økt dannelse av tanniner, ledsaget av deres oksidative kondensering i overflatelagene, og beskytter derved planten mot ytterligere skade og den negative påvirkningen av patogener. På grunn av den store mengden fenoliske hydroksylsyrer har tanniner uttalte bakteriostatiske og soppdrepende egenskaper, og beskytter dermed planteorganismer mot ulike sykdommer.
Klassifisering av tanniner. I 1894 oppdaget G. Procter, som studerte sluttproduktene fra pyrolysen av tanniner, 2 grupper av forbindelser - pyrogallic (pyrogallol dannes) og pyrocatechin (pyrocatechin dannes under nedbrytning):
K. Freudenberg spesifiserte i 1933 klassifiseringen til G. Procter. Han, som Procter, klassifiserte tanniner i henhold til sluttproduktene av deres nedbrytning, men ikke under pyrolyseforhold, men under sur hydrolyse. Avhengig av evnen til å hydrolysere, foreslo K. Freudenberg å skille mellom to grupper tanniner: hydrolyserbar og kondensert. For tiden er klassifiseringen til K. Freudenberg oftere brukt.
Til gruppen hydrolyserbare tanniner inkluderer forbindelser bygget i henhold til typen estere og spaltes under syrehydrolyse til bestanddeler. Det sentrale leddet er oftest glukose, sjeldnere andre sukkerarter eller alicykliske forbindelser (for eksempel kininsyre). Alkoholhydroksylene til den sentrale resten kan være eterbundet til gallussyre, og danner en gruppe gallotanniner, eller ellaginsyre, som danner en gruppe ellagitanniner.
Gallotanniner- estere av gallussyre, den vanligste i gruppen hydrolyserbare tanniner. Det finnes mono-, di-, tri-, tetra-, penta- og polygalloyetere. Representanten for monogalloyletere er b-D-glukogallin:
Et eksempel på polygalloyletere er kinesisk tannin, hvis struktur først ble etablert i 1963 av Haworth:
ellagitanniner er estere av sukker og ellaginsyre eller dets derivater. Ellaginsyre dannes ved oksidasjon av to molekyler gallussyre til heksakydifensyre, som umiddelbart danner en lakton - ellaginsyre:
Som i forrige tilfelle er sukkerkomponenten i ellagitanniner oftest glukose.
Ikke-sukkerestere av gallussyrer er estere av gallussyre og en ikke-sukkerkomponent, som kininsyre, hydroksykanel, etc. Et eksempel på denne gruppen av stoffer er 3,4,5-trigalloylkinsyre.
kondenserte tanniner skiller seg fra hydrolyserbare ved at de under sur hydrolyse ikke deles opp i bestanddeler, men tvert imot, under påvirkning av mineralsyrer, dannes tette rødbrune polymerisasjonsprodukter, flobafener.
Kondenserte tanniner dannes hovedsakelig av katekiner og leukocyanidiner, og, mye sjeldnere, av andre reduserte former for flavonoider. Kondenserte tanniner tilhører ikke "Glykosider"-gruppen: det er ingen sukkerkomponent i kondenserte tanniner.
Dannelsen av kondenserte tanniner kan skje på to måter. K. Freidenberg (30-årene av det XX århundre) fastslo at dannelsen av kondenserte tanniner er en ikke-enzymatisk prosess for autokondensering av katekiner eller leukocyanidiner (eller krysskondensering av disse) som et resultat av eksponering for atmosfærisk oksygen, varme og et surt miljø . Autokondensasjon er ledsaget av brudd på pyranringen til katekiner og C-2-karbonatomet til ett molekyl er forbundet med en karbon-karbonbinding til C-6- eller C-8-karbonatomet til et annet molekyl. I dette tilfellet kan en tilstrekkelig utvidet kjede dannes:
I følge en annen forsker, D. Hathway, kan kondenserte tanniner dannes som et resultat av enzymatisk oksidativ kondensering av molekyler i henhold til typen "hode til hale" (ring A til ring B) eller "hale mot hale" (ring B til ring). B):
I planter som inneholder kondenserte tanniner, er det nødvendigvis deres forløpere - frie katekiner eller leukocyanidiner. Ofte er det blandede kondenserte polymerer som består av katekiner og leukocyanidiner.
Som regel er tanniner av både kondenserte og hydrolyserbare grupper samtidig tilstede i planter.
Fysiske og kjemiske egenskaper til tanniner. Tanniner er preget av høy molekylvekt - opptil 20 000. Naturlige tanniner, med noen få unntak, er hittil kun kjent i amorf tilstand. Grunnen til dette er at disse stoffene er blandinger av forbindelser som er like i kjemisk struktur, men forskjellige i molekylvekt.
Tanniner er gule eller brune forbindelser som danner kolloidale løsninger i vann. Løselig i etanol, aceton, butanol og uløselig i løsemidler med uttalt hydrofobicitet - kloroform, benzen, etc.
Gallotanniner er dårlig løselig i kaldt vann og relativt godt i varmt vann.
Tanniner har optisk aktivitet og oksideres lett i luft.
På grunn av tilstedeværelsen av fenoliske hydroksyler blir de utfelt av salter av tungmetaller og danner fargede forbindelser med Fe +3.
Isolering av tanniner fra vegetabilske råvarer. Siden tanniner er en blanding av forskjellige polyfenoler, gir isolering og analyse av dem en viss vanskelighet.
Ofte, for å oppnå mengden tanniner, ekstraheres råvarer med varmt vann (tanniner er dårlig løselige i kaldt vann) og det avkjølte ekstraktet behandles med et organisk løsningsmiddel (kloroform, benzen, etc.) for å fjerne lipofile stoffer. Deretter utfelles tanninene med salter av tungmetaller, etterfulgt av ødeleggelsen av komplekset med svovelsyre eller sulfider.
For å oppnå en brøkdel av tanniner som ligner i kjemisk struktur, er det mulig å bruke ekstraksjon av råvarer med dietyleter, metyl eller etylalkohol med foreløpig fjerning av lipofile komponenter ved å bruke løsemidler med uttalt hydrofobicitet - petroleumseter, benzen, kloroform.
Isoleringen av noen komponenter av tanniner ved utfelling fra vandige eller vann-alkoholløsninger med blysalter er utbredt. De resulterende utfellingene behandles deretter med fortynnet svovelsyre.
Ved isolering av de individuelle komponentene til tanniner, brukes kromatografiske metoder: adsorpsjonskromatografi på cellulose, polyamid; ionebytter på en rekke kationbyttere; distribusjon på silikagel; gelfiltrering på molekylsikter.
Identifikasjon av individuelle komponenter av tanniner utføres ved hjelp av kromatografi på papir eller i et tynt lag med sorbent, ved bruk av spektralanalyse, kvalitative reaksjoner og studiet av spaltningsprodukter.
Kvalitativ analyse av tanniner. Kvalitative reaksjoner på tanniner kan deles inn i to grupper: utfellingsreaksjoner og fargereaksjoner. For å utføre kvalitative reaksjoner ekstraheres råvarer oftest med varmt vann.
Nedbørsreaksjoner. 1. Når tanniner interagerer med en 1 % gelatinløsning fremstilt i en 10 % natriumkloridløsning, dannes det et bunnfall eller løsningen blir uklar. Når overflødig gelatin tilsettes, forsvinner grumset.
2. Tanider gir rikelig nedbør med alkaloider (koffein, pachycarpin), samt noen nitrogenholdige baser (urotropin, novokain, dibazol).
3. Ved interaksjon med en 10 % løsning av blyacetat danner tanniner fra den hydrolyserbare gruppen et flokkulert bunnfall.
4. Tanniner fra den kondenserte gruppen danner et flokkulert bunnfall i reaksjon med bromvann.
fargereaksjoner. Tanninene i den hydrolyserbare gruppen med en løsning av jernammoniumalun danner svart-blåfargede forbindelser, og den kondenserte gruppen - svart-grønn.
Hvis planten samtidig inneholder tanniner av både de hydrolyserbare og kondenserte gruppene, utfelles først de hydrolyserbare tanninene med en 10 % løsning av blyacetat, bunnfallet filtreres fra, og deretter reageres filtratet med en løsning av jernammoniumalun. Utseendet til en mørkegrønn farge indikerer tilstedeværelsen av stoffer fra den kondenserte gruppen.
Kvantitativ bestemmelse av tanniner. Mens det finnes rundt 100 forskjellige metoder for kvantitativ bestemmelse av tanniner, er en nøyaktig kvantitativ analyse av denne gruppen av biologisk aktive stoffer vanskelig.
Blant de mye brukte metodene for kvantitativ bestemmelse av tanniner, kan følgende skilles.
1. Gravimetrisk - basert på kvantitativ utfelling av tanniner av gelatin, salter av tungmetaller, etc.
2. Titrimetrisk - basert på oksidative reaksjoner, først og fremst med kaliumpermanganat.
3. Fotoelektrokolorimetrisk - basert på tanniners evne til å danne stabile fargede reaksjonsprodukter med jernoksidsalter, fosfowolframsyre, etc.
Statens farmakopé av X og XI utgaver anbefaler en titrimetrisk metode for kvantitativ bestemmelse av tanniner.
Innhold
OFS.1.5.3.0008.15 Bestemmelse av innhold av tanniner i medisinske urteråvarer og medisinske urtepreparater
I stedet for Art. GF XI
Bestemmelse av innholdet av tanniner i medisinske urteråvarer og medisinske urtepreparater utføres ved titrimetriske og/eller spektrofotometriske metoder. Den titrimetriske metoden består i å bestemme mengden tanniner i form av tannin, og den spektrofotometriske metoden lar deg bestemme mengden av tanniner i form av pyrogallol.
Metode 1. Bestemmelse av mengde tanniner mht tannin
Omtrent 2 g (nøyaktig veid) knuste medisinske urteråvarer eller urtemedisinske produkter, siktet gjennom en sikt med hull på 3 mm, legges i en 500 ml konisk kolbe, helles i 250 ml vann oppvarmet til kokende og kokt under tilbakeløp. på elektrisk komfyr med lukket spiral i 30 min med sporadisk omrøring. Det resulterende ekstraktet avkjøles til romtemperatur og filtreres gjennom bomullsull til en målekolbe med en kapasitet på 250 ml slik at partiklene av råmaterialet/preparatet ikke faller ned i kolben, volumet av løsningen justeres til merket. med vann og blandet. 25,0 ml av det resulterende vandige ekstraktet anbringes i en 1000 ml konisk kolbe, 500 ml vann, 25 ml indigosulfonsyreløsning tilsettes og titreres under konstant omrøring av kaliumpermanganat med en løsning på 0,02 M inntil gyldengul farge.
Samtidig utføres et kontrolleksperiment: 525 ml vann, 25 ml av en løsning av indigo sulfonsyre plasseres i en konisk kolbe med en kapasitet på 1000 ml og titreres under konstant omrøring av kaliumpermanganat med en løsning av 0,02 M til gyllen gul farge.
1 ml kaliumpermanganatløsning på 0,02 M tilsvarer 0,004157 g tanniner når det gjelder tannin.
(V – V 1 ) 0,004157 250 100 100
X = ————————————————— ,
en 25 (100 – W)
V er volumet av kaliumpermanganatløsning på 0,02 M brukt for titrering av vandig ekstrakt, ml;
V 1 er volumet av kaliumpermanganatløsning på 0,02 M brukt til titrering i kontrolleksperimentet, ml;
0,004157 - mengden tanniner som tilsvarer 1 ml kaliumpermanganatløsning 0,02 M (i form av tannin), g;
en- en prøve av råvarer eller urtemedisin, g;
W– fuktighet i medisinsk plantemateriale eller medisinsk planteprodukt, %;
250 – totalt volum vannekstraksjon, ml;
25 – volum vannekstrakt tatt for titrering, ml.
Merk.Fremstilling av en løsning av indigosulfonsyre. 1 g indigokarmin oppløses i 25 ml konsentrert svovelsyre, deretter tilsettes ytterligere 25 ml konsentrert svovelsyre og fortynnes med vann til 1000 ml, og den resulterende løsningen helles forsiktig i vann, i en målekolbe med en kapasitet på 1000 ml, rørt.
Metode 2. Bestemmelse av mengde tanninernår det gjelder pyrogallol
Omtrent 0,5 - 1,0 g (nøyaktig veid eller på annen måte spesifisert i farmakopémonografien eller forskriftsdokumentasjonen) av knust medisinsk plantemateriale eller urtemedisin, siktet gjennom en sikt med hull på 0,18 mm, legges i en konisk kolbe med en kapasitet på 250 ml, tilsett 150 ml vann og kok på vannbad under tilbakeløp i 30 minutter. Det resulterende vandige ekstraktet i kolben avkjøles til romtemperatur, filtreres gjennom bomullsull til en målekolbe med en kapasitet på 250 ml slik at partiklene av råmaterialet ikke faller ned i kolben, volumet av løsningen justeres til merket med vann og blandet. Den resulterende løsningen filtreres gjennom et papirfilter med en diameter på ca. 125 mm, og de første 50 ml av filtratet kastes.
Bestemmelsen utføres på et sted beskyttet mot lys.
Bestemmelse av mengden tanniner. Plasser 5,0 ml av filtratet i en 25 ml målekolbe, fortynn volumet av løsningen med vann til merket og bland. 2,0 ml av den resulterende løsningen plasseres i en målekolbe med en kapasitet på 25 ml, 1 ml fosfomolybden-wolfram-reagens, 10 ml vann tilsettes og volumet av løsningen justeres til merket av natriumkarbonat med en løsning på 10,6 % (testløsning). Etter 30 minutter, mål den optiske tettheten til testløsningen (A 1) på et spektrofotometer ved en bølgelengde på 760 nm i en kyvette med en lagtykkelse på 10 mm, med vann som referanseløsning.
Bestemmelse av mengden tanniner som ikke adsorberes av hudpulver. 0,1 g hudpulver tilsettes til 10,0 ml av filtratet, den resulterende blandingen omrøres i 60 minutter og filtreres gjennom et papirfilter. 5,0 ml av det resulterende filtratet plasseres i en målekolbe med en kapasitet på 25 ml, volumet av løsningen justeres til merket med vann og blandes. 2,0 ml av den resulterende løsningen plasseres i en målekolbe med en kapasitet på 25 ml, 1 ml fosfomolybden-wolfram-reagens, 10 ml vann tilsettes, volumet av løsningen justeres til merket av natriumkarbonat med en løsning på 10,6 % og blandet (testløsning). Etter 30 minutter, mål den optiske tettheten til testløsningen (A 2) på et spektrofotometer ved en bølgelengde på 760 nm i en kyvette med en lagtykkelse på 10 mm, med vann som referanseløsning.
Parallelt måles den optiske tettheten til standardløsningen.
2,0 ml pyrogallol SS-løsning legges i en 25 ml målekolbe, 1 ml fosfomolybden-wolfram-reagens, 10 ml vann tilsettes, volumet av løsningen justeres til merket av natriumkarbonat med en løsning på 10,6 % og blandet (standardløsning). Etter 30 minutter, mål den optiske tettheten til standardløsningen (A 3) på et spektrofotometer ved en bølgelengde på 760 nm i en kyvette med en lagtykkelse på 10 mm, med vann som referanseløsning.
A 1- optisk tetthet av testløsningen ved bestemmelse av mengden tanniner;
A 2 - den optiske tettheten til testløsningen ved bestemmelse av mengden tanniner som ikke er adsorbert av hudpulveret, i form av pyrogallol;
A 3— optisk tetthet av standardløsningen;
en- vekt av medisinsk plantemateriale eller medisinsk plantepreparat, g;
en 0 er en prøve av pyrogallol SS, g;
W– fuktighet i medisinsk plantemateriale eller medisinsk planteprodukt, %.
Merk. Fremstilling av pyrogallol RS-løsning. 0,05 g (nøyaktig veid) pyrogallol SS plasseres i en målekolbe med en kapasitet på 100 ml, oppløses i vann, volumet av løsningen justeres til merket med vann og blandes. 5,0 ml av den resulterende løsningen plasseres i en målekolbe med en kapasitet på 100 ml, volumet av løsningen justeres til merket med vann og blandes. Løsningen brukes nylaget.
Introduksjon
I planter er en av de vanligste gruppene av biologisk aktive stoffer (BAS) tanniner (tanniner), som har et bredt spekter av farmakologisk aktivitet.Tanninerhar en hemostatisk, snerpende, anti-inflammatorisk, antimikrobiell effekt, og viser også høy P-vitaminaktivitet, antisklerotisk og antihypoksisk effekt. Kondenserte tanniner er antioksidanter og har en antitumoreffekt. Tanninerbrukes som motgift mot forgiftning med glykosider, alkaloider, salter av tungmetaller. I medisin brukes tanniner til behandling av sykdommer som stomatitt, gingivitt, faryngitt, betennelse i mandlene, kolitt, enterokolitt, dysenteri, de brukes også til brannskader, livmor-, mage- og hemorroideblødninger..
Definisjon av innholdtanniner er en viktig komponent for å etablere kvaliteten på plantematerialer som inneholder tanniner. Det finnes ulike metoder for bestemmelse av tanniner, men de mest brukte er titrimetriske og spektrofotometriske metoder.
Objektiv- valideringsevaluering av metoder for kvantitativ bestemmelse av tanniner når det gjelder konvergens, korrekthet, linearitet.
Materialer og metoder for forskning
Råmaterialet som ble brukt som studieobjekt var lufttørt gress.vanlig mansjett (Alchemilla vulgaris L.) fam. Rosaceae (Rosaceae).
For valideringsevaluering av metoder for kvantitativ bestemmelse av tanniner i lufttørt gresscuff vulgaris ble to metoder valgt: permanganometrisk titrering og spektrofotometrisk bestemmelse basert på reaksjonen med Folin-Ciocalteu-reagenset. Valget av metoder er begrunnet med hyppigheten av deres bruk i praksis.
lufttørt gresscuff vulgaris høstet inn september 2015 i Primorsky-distriktet i Arkhangelsk-regionen, som var råstoffet for studiet og kvantitativ bestemmelse av tanniner (tanniner).
Metoden for permanganometrisk bestemmelse er en farmakopé, sombasert på oksidasjonsreaksjonen av tanniner med en løsning av kaliumpermanganat.Omtrent 2 g (nøyaktig veid) knust råmateriale, siktet gjennom en sikt med en hullstørrelse på 3 mm, ble plassert i en 500 ml konisk kolbe, 250 ml vann oppvarmet til kokende ble tilsatt og kokt under tilbakeløp på en elektrisk komfyr med en lukket spiral i 30 minutter med sporadisk omrøring. Det resulterende ekstraktet ble avkjølt til romtemperatur og en 250 ml konisk kolbe ble filtrert gjennom bomull slik at råmaterialepartiklene ikke kom inn i kolben. 25 ml av det oppnådde ekstraktet ble tatt med en pipette og overførti en annen konisk kolbe med en kapasitet på 750 ml, tilsett 500 ml vann, 25 ml indigo-sulfonsyreløsning og titrer under konstant omrøring med en kaliumløsningpermanganat (0,02 mol/l) til det er gyldent.
Parallelt ble det utført et kontrolleksperiment.
1 ml kaliumpermanganatløsning (0,02 mol/l) tilsvarer 0,004157 g tanniner når det gjelder tannin.
Innholdet av tanniner (X), i prosent, i form av absolutte tørre råvarer, ble beregnet med formelen (1):
Hvor (1)
V er volumet av kaliumpermanganatløsning (0,02 mol/l) brukt for titrering av ekstraktet, ml;
er volumet av kaliumpermanganatløsning (0,02 mol/l) brukt til titrering i kontrolleksperimentet, ml;
0,004157 - mengden tanniner som tilsvarer 1 ml kaliumpermanganatløsning (0,02 mol / l) (i form av tannin), g;
250 - totalt ekstraksjonsvolum, ml;
25 – volum ekstrakt tatt for titrering, ml.
m– masse av råvarer, g;
W- tap i masse under tørking av råvarer, g;
For kvantitativ bestemmelse av tanniner ved spektrofotometri ble ca. 1 g (nøyaktig veid) av det undersøkte plantematerialet, knust til en partikkelstørrelse som passerer gjennom sikter med en hullstørrelse på 1 mm, plassert i en konisk kolbe med en tynn seksjon med en kapasitet på 50 ml, 25 ml av en blanding av aceton-vann ble tilsatt i forholdet 7:3 (70% acetonløsning). Kolben ble lukket og plassert i en laboratorieblander (LAB PU-2, Russland) i 60 minutter. Det oppnådde ekstraktet ble filtrert over i en målekolbe med en kapasitet på 50 ml og volumet ble brakt til merket med 70 % acetonløsning (løsning A).
I en målekolbe med en kapasitet på 10 ml ble 1 ml løsning A plassert, volumet av løsningen i kolben ble justert med renset vann til merket (løsning B).
0,5 ml av løsning B ble plassert i en målekolbe med en kapasitet på 10 ml, 2 ml renset vann, 0,25 ml av Folin-Ciocalteu-reagenset, 1,25 ml av en 20 % natriumkarbonatløsning ble tilsatt, og volumet av løsningen ble brakt til merket med vann. Kolben ble stående i 40 minutter på et sted beskyttet mot lys. Den optiske tettheten til løsningen ble bestemt ved en bølgelengde på 750 nm. En blanding av reagenser uten ekstrakt ble brukt som referanseløsning.
Innholdet av tanniner i ekstraktene fra vegetabilske råvarer ble beregnet ut fra verdiene av kalibreringsgrafen for konstruksjonen som det ble brukt en 0,1 mg/ml løsning av tannin CO standardprøven. For dette formål ble 0,05 g (nøyaktig masse) tannin CO plassert i en 100 ml målekolbe, oppløst i 30 ml vann, og volumet i kolben ble justert til merket med samme løsningsmiddel (løsning A).
1 ml av den resulterende løsning ble overført til en 10 ml målekolbe. Volumet av løsningen i kolben ble fylt opp til merket med vann (løsning B).
En serie løsninger som inneholder 1; 2; 3; 4; Tannin CO (5 μg/ml) ble tilberedt ved å plassere veide porsjoner av løsning B i 10 mL målekolber, Folin-Ciocalteu-reagenset og 20 % vandig natriumkarbonatløsning ble tilsatt, og volumet av løsningene i kolben ble laget. opp til merket med vann.
Løsningene ble blandet, kolbene ble forseglet og holdt ved romtemperatur på et sted beskyttet mot lys i 40 minutter.
Den optiske tettheten til de resulterende løsningene ble bestemt spektrofotometrisk i kvartskyvetter med en lagtykkelse på 1 cm ved en bølgelengde på 725 nm i forhold til referanseløsningen.
Referanseløsningen var en blanding av reagenser uten tilsetning av CO tannin (løsning B).
Basert på resultatene fra studiene ble det bygget en graf over avhengigheten av optisk tetthet på tanninkonsentrasjon (fig. 1).
Tatt i betraktning de oppnådde verdiene, ble mengden tanniner beregnet i form av tannin i henhold til formelen:
, hvor
resultater
Resultatene av den kvantitative bestemmelsen av tanniner ved titrering er presentert i tabell. en.
Tabell 1. Resultater av kvantitativ bestemmelse av tanniner ved permanganatometry
| Vekt av planteråvarer, g | Volumet av kaliumpermanganat (0,02 mol/l) brukt til titrering av det oppnådde ekstraktet fra vegetabilske råvarer, ml | Mengden tanniner, % (X Jeg) | |
|
2,10250 |
15,34892 |
15,72%
|
|
|
2,03255 |
15,21262 |
||
|
2,18345 |
15,84713 |
||
|
2,24350 |
16,24333 |
||
|
2,12465 |
15,85257 |
||
|
2,07055 |
15,80574 |
Gjennomsnittlig innhold av tanniner i råvarer var 15,7 %. Den beregnede verdien av det relative standardavviket (0,024%), som ikke overstiger 2%, som karakteriserer den tilfredsstillende konvergensen av de oppnådde resultatene.
Addisjonsmetoden ble brukt for å bestemme riktigheten av metoden. For dette formål ble 1 ml 0,05%, 0,1% og 0,15% tannin CO tilsatt til titreringskolben og titrert tre ganger for hvert tilfelle. Resultatene av forskningen er presentert i tabell. 2.
Tabell 2. Bestemmelse av riktigheten av metoden for permanganometrisk titrering av tanniner
| Mengden tilsatt CO-tannin, g | Masse av råvarer, g | Regnet ut mengde tanniner, g | Funnet mengde tanniner, g | Åpningsrate, % | Metrologiske egenskaper |
|
0,0005 |
2,2435 |
0,0357 |
0,0353 |
98,87 |
99,91%
|
|
2,1247 |
0,0339 |
0,0340 |
100,29 |
||
|
2,0706 |
0,0330 |
0,0337 |
102,12 |
||
|
0,001 |
2,2435 |
0,0362 |
0,0357 |
98,61 |
|
|
2,1247 |
0,0344 |
0,0340 |
98,84 |
||
|
2,0706 |
0,0335 |
0,0336 |
100,51 |
||
|
0,0015 |
2,2435 |
0,0367 |
0,0366 |
99,73 |
|
|
2,1247 |
0,0349 |
0,0353 |
101,14 |
||
|
2,0706 |
0,0340 |
0,0337 |
99,12 |
Resultatene som er oppnådd indikerer at den beregnede elevens koeffisient er mindre enn tabellverdien ogTeknikken inneholder ikke en systematisk feil, som gjør at vi kan konkludere med at den er riktig.
For å studere lineariteten ble avhengigheten av de funnet verdiene av det kvantitative innholdet av tanniner på vekten av det studerte plantematerialet bestemt. For dette formålet ble det utført kvantitativ bestemmelse av tanniner i seks prøver av lufttørke råvarer av den vanlige mansjetten, med forskjellig vekt (tabell 3).
tabell 3
|
|
Volum kaliumpermanganat brukt til titrering, ml |
|
|
2,0706 |
0,3159 |
|
|
3,0013 |
10,8 |
0,4490 |
|
4,0595 |
13,0 |
0,5404 |
|
5,1180 |
15,3 |
0,6360 |
|
6,1385 |
18,2 |
0,7566 |
Basert på data innhentet i løpet av studiene ble en graf over avhengigheten av et visst innhold av tanniner av massen til en prøve av det undersøkte plantematerialet plottet (fig. 2) og korrelasjonskoeffisienten ble beregnet.
Ris. Fig. 2. Graf over avhengigheten av funnet mengde tanniner på vekten av prøven av lufttørke råmaterialer fra den vanlige mansjetten
Den beregnede korrelasjonskoeffisienten oversteg ikke 0,95, noe som indikerer lineariteten til resultatene for å bestemme innholdet av de studerte stoffene fra vekten av prøven av det analyserte plantematerialet i det angitte konsentrasjonsområdet.
Resultatene av den kvantitative bestemmelsen av tanniner i lufttørke råvarer av urten til vanlig mansjett ved spektrofotometri er presentert i tabellen. 4.
Tabell 4. Resultater av kvantitativ bestemmelse av tanniner ved spektrofotometri
|
Prøvevekt, g |
Løsning Optisk tetthet |
Mengden tanniner funnet, % (X Jeg) |
Metrologiske egenskaper |
|
|
1,02755 |
0,5957 |
7,30920 |
7,87340 |
7,84%
|
|
0,99745 |
0,6130 |
7,52147 |
8,34656 |
|
|
1,0068 |
0,5678 |
6,96687 |
7,65932 |
|
|
0,99580 |
0,5742 |
7,04539 |
7,83120 |
|
|
1,0060 |
0,5750 |
7,05521 |
7,76261 |
|
|
1,00670 |
0,5617 |
6,89202 |
7,57779 |
Gjennomsnittlig innhold av tanniner i vegetabilske råvarer er 7,8 % med et relativt standardavvik (0,034 %) som ikke overstiger 2 %, noe som karakteriserer tilfredsstillende konvergens av resultatene.
Addisjonsmetoden ble brukt for å bestemme riktigheten av metoden. For dette formål ble 1 ml 0,05 %, 0,1 % og 0,15 % tannin CO-løsning tilsatt til kolben med primær acetonekstraksjon, og deretter ble tanninene kvantifisert tre ganger for hver konsentrasjon. Resultatene av forskningen er presentert i tabell. 5.
Eierne av patentet RU 2439568:
Oppfinnelsen angår farmakologiområdet og kan brukes til å bestemme tanniner i plantematerialer. Metoden for å bestemme tanniner i vegetabilske råvarer består i å trekke ut en prøve av råvarer med vann under koking, avkjøling, filtrering, måling av den optiske tettheten til en alikvot prøve ved en bølgelengde på 277 nm og beregne innholdet av summen av alle tanniner i henhold til en bestemt formel, deretter tilsettes en 1 % oppløsning av kollagen i 1 % eddiksyre til prøven av filtratet, ristes, filtreres, den optiske tettheten til filtratet måles ved en bølgelengde på 277 nm og innholdet av presipitert tanniner beregnes ved hjelp av en bestemt formel. Metoden gjør det mulig å øke nøyaktigheten av å bestemme innholdet av tanniner i vegetabilske råvarer og å selektivt bestemme utfelte og ikke-utfelte tanniner i vegetabilske råvarer.
Oppfinnelsen vedrører farmasøytisk industri, farmakognosi og farmasøytisk kjemi, og kan brukes til å kontrollere kvaliteten på plantematerialer som inneholder tanniner.
En kjent metode for bestemmelse av tanniner i medisinske plantematerialer (MPR) ved coulometri i form av tannin (SG Abdullina et al. Coulometrisk bestemmelse av tanniner i medisinske plantematerialer. // Apotek. Nr. 4. - 2010. - P. 13-15).
Ulempen med denne metoden er bruken av tilleggsutstyr (coulometer), en spesifikk titrant (kaliumhypojodid), som når det gjelder oksiderende egenskaper nærmer seg kaliumpermanganat og ikke gjør det mulig å skille mellom høy- og lavmolekylære tanniner.
Det er også kjent en metode for å bestemme innholdet av tannin og gallussyrederivater i te ved konduktometri (Patent nr. 2127878. Metode for separat bestemmelse av tannin og katekiner (i form av gallussyre) i te. M.: 1999).
Ulempen med denne metoden er bruken av giftige organiske løsningsmidler (isobutylalkohol), samt bruken av en fargereaksjon med Fe (III), hvis produkt er en farget forbindelse som er ustabil i fargen over tid.
Det er også kjent en metode for kvantitativ bestemmelse av tanniner i form av tannin i bladene til skumpia og sumak ved hjelp av kompleksometrimetoden etter utfelling av tanniner med sinksalter (GOST 4564-79. Blad av skumpia. Spesifikasjoner; GOST 4565- 79. Blad av sumac. Spesifikasjoner).
Ulempen med denne metoden er varigheten av analysen og vanskeligheten med å bestemme ekvivalenspunktet.
Det er også kjent en metode for kvantitativ bestemmelse av tanniner ved den spektrofotometriske metoden etter reaksjon med Folin-Ciocalteu-reagenset når det gjelder gallussyre (Retningslinjer for metoder for kvalitetskontroll og sikkerhet for biologisk aktive kosttilskudd. Veiledning. R 4.1.1672 -03. - M. - 2004 - s.94-95).
Ulempen med denne metoden er umuligheten av separat bestemmelse av tanniner med lav og høy molekylvekt.
Nærmest den foreslåtte metoden er at tanniner bestemmes ved spektrofotometri når det gjelder gallussyre (Retningslinjer for metoder for kvalitetskontroll og sikkerhet for biologisk aktive kosttilskudd. Veil. R 4.1.1672-03. - M. - 2004 g. - P 120).
Ulempen med denne metoden er den gjentatte fortynningen av testprøven, som et resultat av at konsentrasjonen av tanniner i løsningen er dårlig bestemt. Også i denne metoden er referanseløsningen en bufferløsning, noe som gjør analysen vanskelig. I tillegg gjør denne metoden det ikke mulig å separat bestemme innholdet av tanniner med lav molekylvekt og høy molekylvekt.
Formålet med oppfinnelsen er å forbedre nøyaktigheten av bestemmelsen av tanniner og muligheten for separat bestemmelse av utfelte og ikke-utfellbare tanniner i vegetabilske råvarer.
Problemet løses ved at en prøve av råvarer ekstraheres med vann under koking, avkjøles, filtreres, den optiske tettheten til en alikvot prøve måles ved en bølgelengde på 277 nm og innholdet av summen av alle tanniner beregnes. etter formelen
50 - kolbevolum, ml,
W - råstofffuktighetsinnhold, %,
1 % kollagenløsning i 1 % eddiksyre tilsettes til en alikvot av filtratet, ristes, filtreres, den optiske tettheten til filtratet måles ved en bølgelengde på 277 nm og innholdet av utfelte tanniner beregnes med formelen
D 1 - optisk tetthet av løsning 1,
D 2 - optisk tetthet av løsning 2,
m nav - vekten av prøven av råvarer, g,
V a - volum av alikvot prøve, ml,
250 - totalt ekstraksjonsvolum, ml,
50 - kolbevolum, ml,
508 - spesifikk absorpsjonsindeks for gallussyre (optisk tetthet på 1% løsning av gallussyre 1 mg / ml),
W - råstofffuktighetsinnhold, %.
I praksis utføres metoden som følger. Omtrent 2,0 (nøyaktig veid) knuste råvarer, siktet gjennom en sikt med en hulldiameter på 3 mm, legges i en kolbe med en kapasitet på 500 ml, hell 250 ml vann oppvarmet til koking og kok i 30 minutter under tilbakeløp. med sporadisk omrøring. Avkjøl til romtemperatur, fortynn med vann til 250 ml, filtrer gjennom bomullsull slik at råstoffpartiklene ikke kommer inn i det vandige ekstraktet. De første 50 ml av filtratet kastes.
1-4 ml vandig ekstrakt plasseres i en 50 ml målekolbe, justert til merket med vann (løsning 1). Mål den optiske tettheten til løsning 1 ved en bølgelengde på 277 nm. Vann brukes som sammenligning.
30 ml vandig ekstrakt legges i en målebeholder med en kapasitet på 50 ml, 2-10 ml utfellingsreagens tilsettes, ristes i 30-60 minutter, avsettes, filtreres. 1-4 ml av det resulterende filtratet overføres til en kolbe med en kapasitet på 50 ml, justert til merket med vann (løsning 2). Mål den optiske tettheten til løsning 2 ved en bølgelengde på 277 nm. Vann brukes som sammenligning.
Oppfinnelsen er illustrert ved de følgende eksempler.
Eksempel 1. For analyse tatt vegetabilske råvarer - eikebark.
Omtrent 2,0 (nøyaktig veid) knust rå eikebark, siktet gjennom en sikt med en hulldiameter på 3 mm, legges i en 500 ml kolbe, helles med 250 ml vann oppvarmet til koking og kokes i 30 minutter under tilbakeløp med sporadisk omrøring . Avkjøl til romtemperatur, fortynn med vann til 250 ml, filtrer gjennom bomullsull slik at råstoffpartiklene ikke kommer inn i det vandige ekstraktet. De første 50 ml av filtratet kastes.
2 ml av et vandig ekstrakt fra eikebarken legges i en målekolbe med en kapasitet på 50 ml, justert med vann til merket (løsning 1). Mål den optiske tettheten til løsning 1 ved en bølgelengde på 277 nm. Vann brukes som sammenligning. D 1 for eikebark er 0,595.
30 ml vandig ekstrakt plasseres i en målebeholder med en kapasitet på 50 ml, 2 ml utfellingsreagens tilsettes, ristes i 30 minutter, avsettes, filtreres. 2 ml av det oppnådde filtratet overføres til en kolbe med en kapasitet på 50 ml, justert til merket med vann (løsning 2). Mål den optiske tettheten til løsning 2 ved en bølgelengde på 277 nm. Vann brukes som sammenligning. D 2 for eikebark er 0,276.
Eksempel 2. For analyse ble plantematerialet til serpentinrotstokken tatt.
Omtrent 2,0 (nøyaktig veid) av det knuste råmaterialet til serpentin-rhizomet, siktet gjennom en sikt med en hulldiameter på 3 mm, legges i en kolbe med en kapasitet på 500 ml, hell 250 ml vann oppvarmet til koking og kok opp i 30 minutter under tilbakeløp med sporadisk omrøring. Avkjøl til romtemperatur, fortynn med vann til 250 ml, filtrer gjennom bomullsull slik at råstoffpartiklene ikke kommer inn i det vandige ekstraktet. De første 50 ml av filtratet kastes.
1 ml av et vandig ekstrakt fra rhizomet til spolen plasseres i en målekolbe med en kapasitet på 50 ml, justert med vann til merket (løsning 1). Mål den optiske tettheten til løsning 1 ved en bølgelengde på 277 nm. Vann brukes som sammenligning.
30 ml vandig ekstrakt plasseres i en 50 ml volumetrisk beholder, 7 ml utfellingsreagens tilsettes, ristes i 60 minutter, sedimenteres, filtreres. 1 ml av det oppnådde filtratet overføres til en kolbe med en kapasitet på 50 ml, justert til merket med vann (løsning 2). Mål den optiske tettheten til løsning 2 ved en bølgelengde på 277 nm. Vann brukes som sammenligning.
Den foreslåtte metoden forbedrer nøyaktigheten av å bestemme innholdet av tanniner i vegetabilske råvarer og selektivt bestemme utfelte og ikke-utfelte tanniner i vegetabilske råvarer.
En metode for å bestemme tanniner i vegetabilske råvarer i form av gallussyre, som består i å ekstrahere en prøve av råvarer med vann under koking, avkjøling, filtrering, måling av den optiske tettheten til en alikvot prøve ved en bølgelengde på 277 nm og beregning av innhold av summen av alle tanniner i henhold til formelen: 
hvor x a - innholdet av summen av tanniner i form av gallussyre, %;
50 - kolbevolum, ml;
508 - spesifikk absorpsjonsindeks for gallussyre (optisk tetthet av 1% løsning av gallussyre 1 mg/ml);
W - råstofffuktighetsinnhold, %,
en 1 % løsning av kollagen i 1 % eddiksyre tilsettes til en alikvot av filtratet, ristes, filtreres, den optiske tettheten til filtratet måles ved en bølgelengde på 277 nm, og innholdet av utfelte tanniner beregnes ved hjelp av formelen : 
hvor X er innholdet av utfelte tanniner i form av gallussyre, %;
D 1 - optisk tetthet av løsning 1;
D 2 - optisk tetthet av løsning 2;
m nav - masse av prøve av råvarer, g;
V a - volum av alikvot prøve, ml;
250 - totalt volum av ekstraksjon, ml;
50 - kolbevolum, ml;
508 - spesifikk absorpsjonsindeks for gallussyre (optisk tetthet av en 1% løsning av gallussyre 1 mg/ml);
W - råstofffuktighetsinnhold, %.
Lignende patenter:
Oppfinnelsen vedrører medisin, nemlig psykonevrologi, og beskriver en fremgangsmåte for å forutsi utvinning av nevrologiske funksjoner hos pasienter i den akutte perioden med iskemisk slag ved å utføre kliniske og biokjemiske studier av den totale konsentrasjonen av albumin (TAC) i blodserum i g. /l, hvor i tillegg med 5-7 På sykdomsdagen bestemmes den effektive konsentrasjonen av albumin (ECA), albuminbindingsreserven (ARA) beregnes, og hvis denne indikatoren er mindre enn én, et negativt resultat av gjenoppretting av nevrologiske funksjoner hos pasienter i den akutte perioden med iskemisk slag er forutsagt.
Oppfinnelsen vedrører medisin, biologisk forskning innen onkologi, og kan brukes til å bestemme utviklingen av en ondartet prosess i hjernesvulster etter kirurgisk behandling.
Oppfinnelsen vedrører feltet medisin, spesielt onkologi, og beskriver en fremgangsmåte for å evaluere effektiviteten av neoadjuvant kjemoterapi for blærekreft ved å undersøke en pasient, hvor den maksimale intensiteten av tumorvevs autofluorescens i det grønne området av spekteret registreres på stadium av primær diagnose og 1 måned etter preoperativ kjemoterapi og med en økning i pasientens verdier av maksimal intensitet av autofluorescens av tumorvevet med 15% fra den første og mer, vurderes effektiviteten av behandlingen som en delvis regresjon av tumorprosessen, i fravær av endringer i intensiteten av autofluorescensen til tumorvevet fra de første, bestemmes stabiliseringen av prosessen, med en reduksjon i intensiteten av autofluorescensen til tumorvevet med 15% og mer fra det første notatet om progresjonen av svulstprosessen.
Laster inn...