4402 0
لسوء الحظ ، حتى الآن يمكن القول أن تشخيص الأمراض الفطرية غالبًا ما يكون في وقت مبكر (مناطق ترقق الشعر والتقشير غالبًا ما يتم الخلط بينها وبين "قشرة الرأس" و "الجفاف"). في الوقت نفسه ، غالبًا ما لا تحدث الأحاسيس الذاتية (الحكة والألم وما إلى ذلك) في الآفات ، ولهذا السبب ، لا يذهب المرضى إلى أخصائي لفترة طويلة.
تعتبر التغييرات في الأظافر (القبيحة ، المتفتتة ، الضعيفة) بمثابة "حثل ظهري" بعد الإصابة ، قضمة الصقيع ، إلخ. والأوعية اللمفاوية ، وما إلى ذلك ، يظل المرضى الذين يعانون من هذا المرض إلى أجل غير مسمى مصدرًا لانتشار العدوى الفطرية. فيما يتعلق بما سبق ، فإن التشخيصات المختبرية في الوقت المناسب لداء الفطريات ، وكذلك العلاج المبكر المحتمل ، هي دائمًا ذات صلة.
أدى تنوع المتغيرات السريرية للأمراض الفطرية ، الموجودة في الغالب في البشر ، بالإضافة إلى خصائص علم الأحياء الدقيقة ، والبنية الشكلية ، والمعايير المناعية وغيرها من الأنواع المختلفة (والأجناس) من الفطريات ، إلى وجود عدد كبير من طرق تشخيص داء الفطريات وتجدر الإشارة إلى أن الأساليب المتاحة يتم تحسينها باستمرار و (مؤخرًا نسبيًا) لديها تحيز خاص تجاه الاختبارات الجينية المناعية والجزيئية.
من ناحية أخرى ، لا تزال الدراسات الثقافية "في فئة المعايير القريبة من الذهب" وتستخدم لتأكيد النتائج المشكوك فيها لدراسات أخرى ؛ هناك رأي مفاده أن الجمع بين الطرق الوراثية الثقافية والجزيئية لتشخيص الأشكال "المشكوك فيها" من داء الفطريات (خاصة المنتشرة ، على خلفية كبت المناعة من أي نشأة ، مع تلف الأعضاء الداخلية ، وما إلى ذلك) هي واحدة من أكثر الطرق موثوقية لتسجيل الطبيعة الفطرية للعملية.
ومع ذلك ، لا ينبغي إهمال التقنيات "القديمة" ، ولا سيما التنظير البكتيري (خاصة في الفحص الأولي) ، خاصةً أنه في الممارسة اليومية ، يتم استخدام "التحقق" المجهري من الفطار في العديد من مؤسسات الأمراض الجلدية على نطاق واسع مقارنةً بالاختبارات الأخرى.
مع الأخذ في الاعتبار الزيادة الكبيرة في عدد مظاهر الحساسية على الجلد (وأحيانًا الحشوية) - مع مسار طويل ومزمن ومتفاقم بشكل دوري من الفطريات (الجلد والأظافر وما إلى ذلك) ، فمن المستحسن إجراء اختبارات الحساسية لتحديد درجة حساسية الجسم ، بما في ذلك العدوى الفطرية والبكتيرية ؛ يمكن أن تؤثر هذه الحقيقة على خصائص العلاج في مريض معين - على سبيل المثال ، تحديد التعيين العقلاني لمضادات الفطريات وعوامل إزالة الحساسية ، إلخ.
تقليديا ، يتم إجراء التشخيص الافتراضي لمرض فطري على أساس المظاهر السريرية وتأكيده من خلال الاختبارات المعملية.
في هذا القسم من الكتاب ، نقدم بإيجاز الطرق الأساسية لتسجيل داء الفطريات (بغض النظر عن موقعها) ، مع مراعاة "نوع البحث والمواد المأخوذة". تجدر الإشارة إلى أن تعدد الأشكال للمظاهر السريرية للفطريات (بما في ذلك تلك التي تحتوي على مكون حساسية) يحدد تنوع المادة المرضية المراد دراستها. في هذه الحالة ، يعتمد نجاح البحث عن عناصر الفطر على أخذها بشكل صحيح.
لذلك ، فإن المنطقة المحيطية للحمامي الحرشفية ، الانفجارات المتعرجة غالبًا ما تكون أكثر ثراءً في الجراثيم الفطرية والفطرية ؛ على المناطق المشعرة من الآفة ، الشعر الملتوي ، المائل إلى البياض ، المتغير اللون ، الباهت أو شظاياها - يؤخذ "القنب" (يُنصح بالتحكم في امتصاص الشعر باستخدام مصباح خشبي). مهارات معينة مطلوبة من خلال أخذ عينات من المواد (باستخدام إبرة) مما يسمى. "النقاط السوداء" - مخاريط قرنية داكنة عند أفواه البصيلات.
في الممارسة اليومية ، عادة ما يتم فحص قشور الجلد (يتم جمعها عن طريق الكشط ، والتلطيخ ، واستخدام شريط لاصق) ، وكشط الأظافر المتغيرة ، ومنطقة فرط التقرن تحت الفطري ، وكذلك إفراز الأغشية المخاطية. وفقًا للإشارات ، يتم فحص البلغم وسوائل الغسيل والبول (في المرضى الذين يعانون من مثانة غير مقسرة) ؛ البول من أكياس البول ، لا يمكن أخذ أوعية الأسرة للفحص.
للدم أيضًا قيمة تشخيصية (لأبحاث الثقافة ، وكذلك ELISA ، PCR) ، والسائل الدماغي النخاعي والسوائل الحيوية الأخرى في الجسم (الجنبي ، داخل المفصل ، داخل الصفاق - بما في ذلك تلك التي تم جمعها عن طريق الشفط أو التصريف) ؛ في بعض الحالات (اعتمادًا على التشخيص الموضعي) ، تكون الصفراء ، والبراز ، ونقاط الخراجات تحت الجلد ، وإفرازات الناسور (خاصة مع داء الفطريات العميقة) مهمة. حتى الاختبارات التشخيصية البسيطة تتطلب التقيد الصارم بعدد من الحالات.
الأساليب المستخدمة حاليًا لتشخيص الأمراض الفطرية:
- الفحص المجهري بناءً على اكتشاف العامل الممرض في مادة الاختبار ، بما في ذلك. في الأنسجة البشرية
- بحث ثقافي يتبعه فحص مجهري لاستزراع الفطر.
- الفحص النسيجي (مع داء فطري عميق) ؛
- طرق المناعة والجزيئية.
التشخيص المجهري
التشخيصات المجهرية - أصبحت ممكنة من فترة ظهور تقنية بصرية خاصة ، ولاحقًا تقنية مجهرية إلكترونية ، مما أتاح دراسة تفصيلية للبنية التحتية للفطريات. في الوقت نفسه ، فإن الكشف عن العناصر الفطرية - خيوط متفرعة رفيعة تشكل أفطورة (mycelium) ، أجسام مستديرة (الأبواغ ؛ هي "العضو" التناسلي للفطريات) ذات قيمة تشخيصية.يشمل التشخيص المجهري دراسة المستحضرات غير الملوثة (الأصلية) والملطخة. هذه الطريقة ، كما لوحظ ، هي الأكثر انتشارًا في ممارسة الأمراض الجلدية نظرًا لبساطتها النسبية وانخفاض تكلفتها ، ولكنها من ناحية أخرى ليست حساسة بدرجة كافية ، وتتطلب اختبارات متكررة في بعض الحالات ، وتأكيدها بطرق أخرى.
لذلك ، عند دراسة المستحضرات غير الملوثة ، بالإضافة إلى العناصر الفطرية ، يمكن للمرء أن يجد الخلايا الظهارية وخلايا الدم والملوثات المختلفة من البيئة الخارجية ، مما يجعل من الصعب العثور على العامل المسبب للفطار ، ويتطلب "تحضيرًا" إضافيًا للمادة - ما يسمى ب. "التنوير" (النقع) والتركيز والتخفيف ، إلخ.
ومع ذلك ، يسمح لك الفحص المجهري المباشر للمستحضرات المحلية بتشخيص الفطار بسرعة ، وتحديد وسائط المغذيات (إذا لزم الأمر) التي يجب تلقيح المادة ، وهناك رأي مفاده أن نتيجتها الإيجابية قد تظل هي التأكيد المختبري الوحيد للفطار مع استجابة سلبية في الثقافة (A.Yu. Sergeev ، Yu.V. Sergeev ، 2003).
من بين الخيارات المختلفة "لتنوير" الأدوية ، الأكثر شيوعًا هو إضافة KOH أو NaOH إلى مادة الاختبار (يتم استخدامه غالبًا للكشف عن الفطريات في قشور الجلد والشعر ، بالإضافة إلى عدد من العوامل المسببة للعوامل العميقة. داء فطري في البلغم ، الخزعات).
من أجل النقع المكسرة والموضوعة على شريحة زجاجية ، يتم إجراء محلول هيدروكسيد الصوديوم (أو البوتاسيوم) بنسبة 10-20 ٪ - 1-3 قطرات ، لمدة 10-20 دقيقة ؛ يتم ضغط المستحضر برفق باستخدام غطاء زجاجي ، للحصول على تعطين أسرع - يتم تسخينه على اللهب حتى تظهر الأبخرة. يتم المشاهدة أولاً بتكبير منخفض ، ثم تحت تكبير عالٍ (نظام جاف).
يقدم المستحضر المعد بشكل صحيح ، والذي لا يخضع لتأثيرات ميكانيكية وحرارية وكيميائية قاسية ، صورة لكتلة متجانسة تتكون من الخلايا الظهارية ، ونواتج التحلل الخلوي للعناصر الفطرية - خيوط الفطريات والجراثيم.
يوضع الشعر المعدل على شريحة زجاجية تحتوي على 10-30٪ قلوي ويتم معالجته بنفس الطريقة ، ولكن لفترة أطول - من 20 دقيقة إلى 3-4 ساعات.مع محتوى وفير من الصبغة ، يوصى بإجراء التبييض المسبق الشعر بمحلول بيروكسيد الهيدروجين 5٪. يعلقون أهمية على الكشف عن عناصر الفطريات ، وكذلك موقعها بالنسبة للشعر.
يتم تحضير المواد من المسامير المعدلة مرضيًا (يفضل مسحوق ناعم يتم الحصول عليه عن طريق الكشط من عمق البؤرة) بنفس الطريقة ، ولكن باستخدام 30 ٪ من الصودا الكاوية ، والتسخين الدقيق الإلزامي على اللهب لأبخرة الضوء والتعرض للأبخرة. حوالي ساعة واحدة (تصل أحيانًا إلى عدة ساعات). يجب عدم تخزين المستحضرات المعالجة بالقلويات لأكثر من 1.5 - 2 ساعة بسبب "تدهورها" (تبلور الكاشف ، انخفاض الموثوقية التشخيصية التي تحددها الصورة المجهرية).
بدلاً من KOH أو NOOH ، يمكنك استخدام: أ) محلول خليط من KOH مع 15٪ DMSO ؛ ب) خليط من الفينول (جزءان) مع هيدرات الكلورال (جزءان) وحمض اللاكتيك (جزء واحد) ؛ ج) أبيض كلسوفلوريك ، الذي له صلة بالهيجي والسليلوز ؛ للبحث ، يلزم وجود مجهر الفلورسنت (لوحظ توهج أزرق أو أخضر ، اعتمادًا على الفلتر المستخدم). في دراسة السائل الدماغي النخاعي (مع الاشتباه في الإصابة بالمكورات الخفية) ، غالبًا ما يستخدم تلوين الحبر.
Kulaga V.V. ، Romanenko IM ، Afonin S.L. ، Kulaga S.M.
التشخيص المختبري لمرض التهاب المفاصل الروماتويدي
أخذ مواد للبحث المخبري عن الفطريات.
1.OST 42-21-2-854: أمر رقم 222/80 بتاريخ 27/06/00
2. المعدات: ملاقط ، شرائح مجهرية ، مقص ، ملعقة فولكمان.
4. دواعى الإستعمال: أمراض فطرية.
5. المضاعفات: لا.
تجهيز غرفة العلاج:
تغيير الحلول.
يحضر:
-1٪ محلول الكلورامين للخرق
-3٪ محلول الكلورامين - لتطهير الضمادات والملاقط
- محلول غسيل (156 مل. بيروكسيد الهيدروجين + 5 جم مسحوق منظف + 839 مل ماء مقطر) - لمعالجة الملاقط
- محلول 6٪ بيروكسيد الهيدروجين - لعلاج القفازات.
خوارزمية لأداء التلاعب.
يجب أن تأخذ ملاقط ، شريحة زجاجية ، ملعقة فولكمان ، مقص ؛
- دعوة المريض إلى غرفة الملابس ؛
- يجلس المريض على كرسي أو أريكة ؛
- م / ث تقف.
تقنية التنفيذ:
خذ قشور الجلد والشعر من الآفة بالملاقط ؛
- ضع المادة المأخوذة على شريحة زجاجية وقم بتغطيتها بشريحة زجاجية أخرى.
- اغسل يديك بالماء والصابون؛
- إرسال المواد المأخوذة إلى المختبر.
جمع المواد
خذ المقص والشرائح الزجاجية.
- قص قطعة من الحافة الحرة للظفر بالمقص ؛
- تغطية المادة المأخوذة بشريحة زجاجية أخرى ؛
انقع المقص والملاقط في محلول الفورمالين بنسبة 3٪.
الجمع الصحيح للمواد من الأظافر المصابة هو مفتاح دراسة ميكروبيولوجية ناجحة. عند التقاط المواد ، فإنها لا تلتقط دائمًا مناطق من الظفر تحتوي على فطريات قابلة للحياة. بطبيعة الحال ، لن ينمو الفطر غير القابل للحياة في الاستزراع ، ولا يمكن تحديد نوعه.
يتم تحديد منطقة الظفر المراد أخذها من خلال شكل فطار الأظافر.
لذلك ، مع وجود شكل سطحي من الفطريات الفطرية ، يجب أن تكون القصاصات مصنوعة من سطح صفيحة الظفر.
في أكثر أشكال الفطريات البعيدة شيوعًا ، توجد الفطريات الأكثر قابلية للحياة تحت صفيحة الظفر. يجب ألا تتضمن المواد التي يتم إرسالها للبحث ليس فقط تشذيب صفيحة الظفر ، ولكن أيضًا كشط طبقة الظفر من أسفل اللوحة.
بالإضافة إلى ذلك ، يجب التقاط مناطق الظفر غير المتغيرة ، حيث توجد الفطريات الأكثر نشاطًا على الحدود بينها وبين المناطق المصابة من الظفر.
في الشكل الفرعي القريب ، يصعب التقاط المواد. في هذه الحالات ، في بعض الأحيان ، خاصة إذا كانوا سيجرون فحصًا نسيجيًا أو تشخيصًا تفاضليًا ، يأخذون خزعة من الظفر ، ويستخدمون أحيانًا مثقابًا.
مع الداحس ، تصنع الكشط من الأسطوانة القريبة ومن تحتها.
في جميع الحالات ، لتجنب التلوث الجرثومي ، يجب معالجة الظفر بالكحول الإيثيلي قبل أخذ العينة.
دراسة مجهرية
يتم إجراء الفحص المجهري للمواد المرضية للفطريات في المستحضرات الأصلية والملونة.
لتحضير المستحضرات غير الملوثة ، يتم سحق المادة الناتجة بمشرط أو إبرة تشريح وتوضع في منتصف شريحة زجاجية. من أجل تحديد أكثر وضوحًا لعناصر الفطر ، يتم تنوير المادة (متبللة). لهذا الغرض ، يلجأون إلى مساعدة مواد مختلفة ، غالبًا ما تكون قلوية كاوية (KOH ، NaOH) ، والتي تعمل على إذابة قشور البشرة والمخاط والقيح وتوضيح صبغة الشعر وبالتالي إتاحة الفطر للبحث.
ضع 1-3 قطرات من محلول KOH (هيدروكسيد الصوديوم) على قشور الجلد أو الظفر المخففة التي توضع في منتصف الشريحة. يتم تسخين مادة الاختبار في القطرات القلوية بعناية فوق لهب مصباح كحول حتى تظهر حافة بيضاء رقيقة من البلورات القلوية على طول محيط القطرة. لا تسخن حتى الغليان. بعد التسخين ، يتم تغطية القطرة بغطاء زجاجي ، لتجنب دخول فقاعات الهواء.
يوصي كل من RA Arabiyskiy و GI Gorshkova (1995) بترك قشور الجلد ومستحضرات الشعر مغطاة بغطاء زجاجي لمدة 5 - 10 دقائق ، وألواح الظفر - لمدة 30 - 40 دقيقة قبل الفحص المجهري.
يمكن إجراء تنوير الأدوية بدون تسخين ، لذلك تُترك في محلول KOH بنسبة 20 ٪ لمدة 30-60 دقيقة أو يتم استخدام طرق أخرى لتنوير المواد المرضية: الكلورالاكتوفينول وفقًا لأمان ؛ لاكتوفينول. محلول يحتوي على 15٪ ثنائي ميثيل سلفوكسيد و KOH في الماء. يتم الحصول على نتائج جيدة بعد تنوير ألواح الظفر ، الموضوعة في محلول 5٪ KOH لمدة 24 ساعة ، ولا حاجة للتدفئة في هذه الحالة.
يتم إجراء الفحص المجهري على مجهر معمل تقليدي دون غمر.
يجب خفض مكثف المجهر وتضييق الحجاب الحاجز. في البداية ، تم العثور على الدواء على الزجاج بتكبير منخفض (40x) ، ويتم إجراء الدراسة اللاحقة بتكبير أعلى (100x) ؛
تمت دراسة التحضير بالتفصيل بتكبير 400x. من الضروري التحقيق في العديد من الأدوية من أجل زيادة موثوقية الفحص وتجنب النتائج الإيجابية الخاطئة.
يمكن أن تحدث أخطاء في التشخيص المجهري للفطريات بسبب كل من العيوب في تحضير الدواء ونقص خبرة مساعد المختبر.
ترتبط عيوب التصنيع بشكل أساسي بما يلي:
مع ارتفاع درجة حرارة الدواء ، مما قد يؤدي إلى فقدان البلورات القلوية ، وتدمير الشعر وظهور التفكك الدقيق في المواد المرضية.
يشبه الترتيب الخطي للبلورات الممدودة ، وحتى القلوية ، إلى حد كبير خيوط الفطريات المتعفنة حتى على الزجاج النظيف بدون مواد مرضية.
الميزات التشخيصية التفاضلية هي التوحيد الاستثنائي للبلورات ، وشفافيتها الزجاجية ، وتعدد الحواف وغياب اتصال لا ينفصم بين عنصر وآخر. في الحالات المشكوك فيها ، يوصى بإضافة قطرات من الماء المقطر الدافئ قليلاً إلى المستحضر ، مما يؤدي إلى إذابة البلورات القلوية بسرعة.
يمكن الخلط بين العناصر التالية وعناصر الفطر:
- قطرات من الدهون ،
- فقاعات هواء،
- خيوط قطنية للملابس
- وما يسمى ب "فطر الفسيفساء".
يمكن أن تشبه دهون الجلد ، والانهيار الدهني للخلايا وحبوب الكيراتوهيالين ، خاصة تلك ذات الشكل الصحيح ، الأبواغ الفردية للفطر. لكن تنوع الأشكال ، والأهم من ذلك ، الأحجام ، وغياب البنية الداخلية للتكوينات (فجوات ، قذائف) يتحدث ضد الطبيعة الفطرية لهذه العناصر. يمكن أن تدخل الدهون أيضًا إلى الدواء عند تناول مادة مرضية من آفة غير مطهرة بشكل كافٍ.
قد تشبه فقاعات الهواء أبواغ الخلايا الشبيهة بالخميرة ، ولكن على عكس الأخيرة ، فهي محاطة بغشاء مظلم كثيف ، وحتى أصغر فقاعات الهواء تكون دائمًا أكبر من خلايا الفطريات.
عادة ما تكون الخيوط من نسيج الجوارب والملابس وما إلى ذلك منفصلة عن المواد المرضية ، فهي دائمًا أكبر من الخيوط ، وخشنة وليست إنتانية.
"فطر الفسيفساء" هو قطعة أثرية تحدث أثناء التبلور (ربما بسبب انهيار الكوليسترول). لها شكل شبكة أو حلقات ، تتوافق حدودها مع حدود المقاييس القرنية ، على عكس خيوط الفطريات ، فإنها لا تعبر أبدًا جدران خلايا البشرة.
في بعض المختبرات ، يتم توضيح مستحضرات الفحص المجهري باستخدام محلول KOH 15-30٪ ، والذي تمت إضافة 5-10٪ من الحبر الأزرق الداكن التجاري من Parker إليه (حبر Parker's Superchrome Blue-Black).
بهذا اللون ، يتحول لون الخيوط والجراثيم إلى اللون الأزرق.
يكشف الفحص المجهري عن خيوط فطرية خيطية أو خلايا ناشئة (الشكل 1).
وبالتالي ، فإن الفحص المجهري يعطي استنتاجًا فقط حول الطبيعة الفطرية للعدوى ، ولكن ليس حول نوع العامل المسبب للفطر.
بالطبع ، تعتمد فعالية الفحص المجهري على مؤهلات موظف المختبر.
أرز. 1. الفحص المجهري لخدوش الأظافر المصابة بـ T. rubrum. خيوط الفطر مرئية.
البحث الثقافي
يتم تلقيح المادة على وسط Sabouraud القياسي ، غالبًا بالمضادات الحيوية. في تشخيص عدوى الفطريات الجلدية ، من المعتاد إضافة هكسيميد حلقي إلى وسط Sabouraud ، مما يثبط نمو الفطريات الملوثة التي تأتي من الهواء. توجد وسائط تجارية متوفرة مع مضادات حيوية ومضافات سيكلوهيكسيميد. يجب أن نتذكر أن العديد من القوالب غير الجلدية وبعض أنواع المبيضات لا تنمو على وسيط مع سيكلوهيكسيميد ، لذلك يوصى بالتلقيح على وسط سابورو مع سيكلو هكسيميد وعلى وسط بدونها. عادة ما يتم تحديد الأنواع عن طريق الفحص المجهري للثقافة المزروعة أو عن طريق إعادة البذر على وسط انتقائي (الشكل 2-15).
أرز. 2. زرع فطر T. rubrum المعزول من الأظافر المصابة. تم الحصول عليها على وسيط Sabouraud (يسار) وأجار الذرة (يمين).
أرز. 3. زراعة الفطر T. mentagrophytes var. interdigitale معزولة عن الأظافر المصابة. تم الحصول عليها عن بيئة Saburo.
أرز. 4. زرع فطر Candida albicans. تم الحصول عليها عن بيئة Saburo.
أرز. 5. عزل فطر Torulopsis glabrata من الأظافر المصابة. تم الحصول عليها عن بيئة Saburo.
أرز. 6. زراعة الفطر Ulocladium sp. ، معزولة عن الأظافر المصابة.
أرز. 7. Micromorphology of Acremonium sp معزولة عن الأظافر المصابة.
أرز. 8. Micromorphology of Fusarium sp معزولة عن الأظافر المصابة.
أرز. 9. Micromorphology of Scopulariopsis sp معزولة عن الأظافر المصابة.
أرز. 10. ميكرومورفولوجيا المبيضات البيض المعزولة من الأظافر المصابة.
أرز. 11. Micromorphology of Altemaria sp معزولة عن الأظافر المصابة.
أرز. 12. Micromorphology لـ Aspergillus sp معزولة عن الأظافر المصابة.
أرز. 13. ميكرومورفولوجيا من Ulocladium sp المعزولة من الأظافر المصابة.
أرز. 14. Micromorphology of Chaetomium sp معزولة عن الأظافر المصابة.
الشكل 15. لوحة من المغذيات التي يتم تغذيتها لتحديد الفطريات الجلدية (يسار - ثقافة T rubrum ، يمين - T mentagrophytes var. Mterdigitale).
من اليسار إلى اليمين: وسط سابورو ، وسط باكستر ، وسط كريستنسن ، أجار الذرة
وتجدر الإشارة إلى أن بعض فطريات العفن ، بما في ذلك الفطريات الجلدية ، تنمو ببطء في المزرعة ، في غضون 2-3 أسابيع.
حتى إذا تم مراعاة جميع القواعد الخاصة بجمع المواد ، مع وجود معدات معملية جيدة ومؤهلات عالية لموظفيها ، فإن عدد النتائج الإيجابية لدراسة الثقافة صغير جدًا.
وبحسب الأدبيات الأجنبية ، فإن نسبة الدراسات الإيجابية لا تتجاوز 50.
بالكاد تصل نسبة النتائج الإيجابية في أفضل المختبرات المنزلية إلى 30.
وبالتالي ، في حالتين من كل 3 حالات من فطار الأظافر ، لا يمكن تحديد مسبباته.
أبحاث الإضاءة
في عام 1925 ، اكتشفت مارغريت وديفيز أن الشعر المتأثر بفطريات جلدية معينة يعطي توهجًا مميزًا عند تعرضه للأشعة فوق البنفسجية التي تمر عبر مرشح بيدا. يتكون زجاج بيدا من كبريتات الباريوم ، ويحتوي على حوالي 9٪ أكسيد النيكل ؛ ينقل أشعة بطول 365 نانومتر. يمكن استخدام أجهزة مختلفة كمصدر للأشعة فوق البنفسجية. لم يتم تحديد طبيعة التوهج بدقة. يستمر الشعر في التوهج بعد موت الفطر وبعد محاولات استخلاص المادة الفلورية بالماء الساخن أو محلول بروميد الصوديوم البارد. تعتمد شدة وطبيعة التوهج على درجة الحموضة في المحلول. يُعتقد أن المادة الفلورية تظهر في عملية التفاعل بين الفطريات والشعر النامي.
التوهج في الأشعة فوق البنفسجية ، التي تمر عبر مرشح الخشب ، هو سمة فقط للشعر المصاب بفطريات من جنس Microsporum (M. canis ، M. audouinii ، M. ferrugineum ، M. distortium ، أحيانًا M. gypseum و M. nanum) ، وكذلك Trichophyton schonleinii ... الشعر المتضرر من microsporums ، وخاصة M. canis و M. audouinii ، يعطي توهجًا أكثر إشراقًا ؛ الشعر المتأثر بـ T. schonleinii له لمعان أخضر باهت.
يتم ملاحظة التوهج فقط في الشعر المتأثر تمامًا بالفطريات. قد لا يكون في الآفات الحديثة. في هذه الحالات ، يجب إزالة الشعر من منطقة الحافة الأكثر نشاطًا ، ويمكن العثور على التوهج في الجزء الجذري من الشعر.
يمكن استخدام طريقة الإنارة للتشخيص ومراقبة فعالية العلاج في المرضى الأفراد وفي البؤر الوبائية. تعتبر الوحدات المتنقلة المدمجة ملائمة لفحص جهات الاتصال في المدارس ورياض الأطفال وما إلى ذلك.
يجب إجراء فحص الإنارة في غرفة مظلمة ، ويجب تنظيف الآفات مسبقًا من القشور وبقايا المرهم وما إلى ذلك. يمكن استخدام طريقة الإنارة لتشخيص حزاز النخالية ، خاصةً عندما تكون الآفات موضعية في فروة الرأس. الآفات في هذا المرض لها وهج أصفر محمر أو بني. ومع ذلك ، فإن هذا التوهج ليس محددًا تمامًا ، حيث يمكن ملاحظته في وجود قشرة الرأس على فروة الرأس وحتى لدى الأشخاص الأصحاء في منطقة أفواه بصيلات الشعر في الوجه والجزء العلوي من الجسم. يجب أن يخضع الشعر المصاب الذي تم تحديده باستخدام طريقة الإنارة للفحص المجهري.
البحث المناعي والبيولوجي
تستخدم طرق البحث المناعي لتحديد إعادة هيكلة الجسم والتشخيص المصلي للأمراض الفطرية. للكشف عن أجسام مضادة محددة في مصل العينة ، يتم إجراء التفاعلات المصلية التالية: التراص ، الترسيب ، الارتباط التكميلي ، التألق المناعي مع المستضدات المقابلة.
يتم الكشف عن حالة حساسية في جسم المريض باستخدام اختبارات حساسية الجلد. يتم تطبيق مسببات الحساسية على الجلد المخدوش وفقًا لـ Pirquet أو عن طريق فرك الجلد وفقًا لـ Moro ، داخل الأدمة وفقًا لـ Mantoux ، وكذلك عن طريق الحقن في الجلد. بمساعدة هذه الاختبارات ، يتم الكشف عن ردود الفعل التحسسية من النوع الفوري والمتأخر ، مما يجعل من الممكن تقييم حالة المناعة الخلطية والخلوية.
للكشف عن التحسس المحدد للخلايا الليمفاوية ، يتم استخدام تحلل الخلايا القاعدية وتفاعلات التكتل والتغيير ، واختبار تحول الانفجار ، وتثبيط هجرة البلاعم ، وما إلى ذلك.
تعتبر مقارنة نتائج التفاعلات المصلية والحساسية مفيدة لتشخيص مسار داء الفطريات والتنبؤ به.
الطريقة البيولوجية. يتم استخدامه للتشخيص المختبري لداء الفطريات العميقة والخطيرة بشكل خاص. بناءً على إصابة الحيوانات بمواد مرضية من مريض أو ثقافة الفطريات المدروسة. أجريت في معامل خاصة.
الفحص الهيستولوجي
علم الأنسجة من داء فطريات الجلد التي تسببها الفطريات الجلدية
تحدث التغيرات المرضية في الآفات بسبب إدخال الفطريات في الطبقة القرنية من البشرة والشعر والأظافر واستجابة التهابية للجلد ، والتي يمكن أن تكون حادة أو تحت الحاد أو مزمنة. يمكن اعتبار التشخيص مؤكدًا فقط إذا تم العثور على العناصر الفطرية في المستحضرات النسيجية. لهذا الغرض ، يتم استخدام العديد من البقع النسيجية ، والأكثر إفادة هو التفاعل الحمضي الدوري (PAS) ، مما يجعل من الممكن التعرف على السكريات الموجودة في السليلوز والكيتين لجدار الخلية لمعظم الفطريات الجلدية (صبغة Shifu وتعديلاتها). يمكنك أيضًا استخدام تفاعلات الكبريتات وتشريب المقاطع النسيجية بالفضة [Khmelnitsky OK، 1973؛ Lewer W. F. and Schaumburg-Lewerl ، 1983].
يتم الكشف عن الفطريات في الطبقة القرنية من البشرة ، حتى عند استخدام البقع الخاصة ، بكميات صغيرة في شكل خيوط وأبواغ الفطريات. في حالات نادرة ، عندما يكون هناك العديد من الفطريات في الآفات ، يمكن العثور عليها في أقسام ملطخة بالهيموتوكسيلين يوزين ، في شكل هياكل قاعدية حساسة في الطبقة القرنية.
يمكن أن تختلف التغيرات الالتهابية في البشرة: من الوذمة الطفيفة داخل وخارج الخلايا للخلايا الشوكية إلى داء الإسفنج الشديد. عادة ما يتطور الإسفنج مع متغيرات خلل التعرق من داء فطريات القدمين واليدين ، سريريًا في هذه الحالات ، يتم ملاحظة الحويصلات. عادة ما يحدث هذا التفاعل بسبب T. mentagrophytes var. interdigitale. في بعض الأحيان يوجد فرط تقرن واضح في البشرة ، والذي غالبًا ما يُلاحظ في الفطار الناجم عن T. rubrum.
التغيرات النسيجية في الأدمة غير محددة وتتوافق مع الالتهاب الحاد وتحت الحاد والمزمن.
في فطار الجلد الأملس الناجم عن T. rubrum ، توجد الفطريات أحيانًا في الشعر الزغبي وبصيلات الشعر. يتطور تفاعل التهابي حول البصيلات ، والتي ، بسبب دخول الفطريات في الأدمة ، يمكن أن تكتسب طابعًا حبيبيًا. يمكن أن يخضع الجزء المركزي من الارتشاح في هذه الحالات للتقيح والنخر ، ويتكون الجزء المحيطي من الخلايا الليمفاوية والخلايا النسيجية والخلايا العملاقة متعددة النوى والشبيهة بالظهارة ، والتي توجد بداخلها جراثيم فطرية أحيانًا. يصل حجم البوغ هنا إلى 6 ميكرون في القطر ، وفي الشعر عادة لا يتجاوز 2 ميكرون.
مع الشكل المتسلل المتقيح من فطريات فروة الرأس ومنطقة نمو اللحية والشارب ، توجد عناصر من الفطريات في بصيلات الشعر ، داخل وحول الشعر. في الشعر ، يتم تحديدها فوق منطقة بداية التقرن (تقريبًا عند مستوى 30 ميكرون). في الأدمة ، لوحظ تفاعل التهابي متفاوت الشدة ، أكثر وضوحًا مع kerion Celsii. مع تفاعل صديدي حاد في تكوين التسلل ، لوحظ عدد كبير من الكريات البيض العدلات ، يمكن أن تختفي عناصر الفطريات في هذه الحالة تمامًا. في المسار المزمن للعملية ، يمكن أن يكتسب التسلل طابعًا حبيبيًا ، وتظهر فيه خلايا عملاقة متعددة النوى. لتأكيد التشخيص في حالة عدم وجود الفطريات في التسلل ، يمكن استخدام طرق التلوين المناعي. لهذه الأغراض ، يتم استخدام المصل المضاد المسمى بالفلورسين ضد T. mentagrophytes ، مما يجعل من الممكن اكتشاف المستضدات الفطرية في الشعر والارتشاح المحيط بالجريب.
تشكل تفاعل الجلد المتسلل المتقيح في فطار فروة الرأس (kerion Celsii) ومنطقة نمو اللحية والشارب التي تسببها الفطريات M. canis و T. tonurans و T. verrucosum هو مظهر من مظاهر مناعة تفاعل. يتضح هذا من خلال:
1. ميل الآفات إلى حل تلقائي.
2. عدم وجود عناصر فطرية مصحوبة برد فعل التهابي شديد الوضوح على جزء الجلد المصاب بالفطار الناجم عن T. verrucosum (faviforme) و T. tonurans.
3. رد فعل إيجابي مستمر استجابة للإعطاء داخل الأدمة من trichophytin في أشكال متسللة متقيحة من الفطار الناجم عن trichophytins (على سبيل المثال ، T.
مع القراع في الطبقة القرنية للبشرة ، تم العثور على عدد كبير من خيوط الفطريات والجراثيم المفردة للفطر. يتم تمثيل سكوتولا بواسطة إفرازات وخلايا متناهية الصغر للبشرة وخلايا التسلل الالتهابي وكذلك خيوط الفطريات والجراثيم الفطرية ، والتي تقع بشكل رئيسي في المنطقة المحيطية للصفف. في المرحلة النشطة من المرض ، لوحظ تسلل التهابي واضح يحتوي على خلايا بلازما عملاقة متعددة النوى في الأدمة حول بصيلات الشعر التنكسية. في الآفات القديمة ، الشعر والغدد الدهنية غائبة ، وهناك ظاهرة تليف.
علم الأنسجة الفطريات في الجلد والأغشية المخاطية التي تسببها الفطريات الشبيهة بالخميرة
مع داء المبيضات في الجلد والأغشية المخاطية ، توجد فطريات من جنس المبيضات في الطبقة القرنية للبشرة أو في الطبقات السطحية لظهارة الغشاء المخاطي. عادة ما تكون عناصر الفطريات قليلة ، فهي ملطخة جيدًا بواسطة تفاعل PAS أو الجرام ؛ يتم تقديمها في شكل خيوط متفرعة مفصصة ، قطرها 2-4 ميكرون ، أو جراثيم بيضاوية ، قطرها 3-5 ميكرون. الكشف عن الشكل الفطري للفطر له قيمة تشخيصية.
في دراسة نسيجية لداء المبيضات الحبيبي المزمن للجلد والأغشية المخاطية ، توجد العناصر الفطرية أيضًا في الغالب في الطبقة القرنية للبشرة أو في الأجزاء العلوية من ظهارة الغشاء المخاطي ، ولكن في بعض الأحيان في الطبقة الشائكة ، داخل الطبقة الشائكة. الشعر وفي الأدمة. هناك أيضا فرط تقرن و ورم حليمي ملحوظ. في الأدمة - ارتشاح التهابي كثيف يتكون من الخلايا اللمفاوية ، العدلات ، البلازما والخلايا العملاقة متعددة النوى. يمكن أن ينتشر الارتشاح في الأنسجة الدهنية تحت الجلد.
مع النخالية المبرقشة ، يوجد عدد كبير من العناصر الفطرية في الطبقة القرنية للبشرة في شكل هياكل حساسة حساسة ، والتي يمكن رؤيتها بوضوح حتى عندما تكون المستحضرات ملطخة بهيموتوكسيلين يوزين. يتم تمثيل الفطر بالخيوط والجراثيم.
مع الشكل الجريبي من النخالية الأشنة ، هناك تراكم للكتل القرنية وخلايا التسلل الالتهابي في أفواه بصيلات الشعر المتوسعة. ويلاحظ أيضًا التسلل الالتهابي حول البصيلات. في تفاعل PAS ، توجد جراثيم كروية أو بيضاوية للفطر ، بقطر 2-4 ميكرون ، داخل فم بصيلات الشعر ، وأحيانًا في الارتشاح المحيط بالجريب. لم يتم اكتشاف الفطريات أبدًا.
ضعف تصبغ الجلد لدى مرضى النخالية المبرقشة يرجع إلى قدرة فطر النخالية على إنتاج مادة تمنع عملية تصبغ البشرة. أظهر الفحص المجهري الإلكتروني لخزعات الجلد من مناطق ناقصة التصبغ أن الخلايا الصباغية الصغيرة جدًا تتشكل في الخلايا الصباغية ، والتي لا تستطيع اختراق الخلايا الكيراتينية. من ناحية أخرى ، في المناطق شديدة التصبغ من الجلد ، تكون الميلانوزومات كبيرة وتحتوي على كمية كبيرة من الميلانين.
أساس تشخيص الأمراض الفطرية هو الفحص المجهري للمستحضرات المحضرة من المناطق المصابة من الجلد والأظافر. ومع ذلك ، فإن الصورة المجهرية في أنواع مختلفة من داء الفطريات متشابهة: في قشور الجلد والأظافر ، تظهر الجراثيم الفطرية والفطريات المتفرعة التي يبلغ قطرها 4-7 ميكرون. لذلك ، لا يمكن تحديد جنس وأنواع الفطريات في معظم الحالات من خلال الصورة المجهرية في قشور الجلد أو في الكشط من الظفر. لتحديد العامل الممرض ، يتم إجراء التطعيمات على وسط المغذيات ، في أغلب الأحيان على وسط سابورو.
فطار البشرة.تتأثر الطبقة القرنية من الجلد ، وغالبًا ما تتأثر القدمين وأظافر الأطراف السفلية. لا يتأثر الشعر أبدًا. تظهر بقع أو خطوط صفراء على الأظافر ، ثم يتطور فرط التقرن (سماكة الأظافر) وتشوهها وتدميرها. تقشير رقائقي للنعال والطيات بين الأصابع ، يظهر احمرار على جلد القدمين. في بعض الأحيان تتشكل الفقاعات والطفح الجلدي من الحفاضات والشقوق. يصاحب المرض حكة وحرق ووجع.
يكشف الفحص المجهري للكشط والمقاييس وأغطية المثانة عن وجود خيوط منخفضة التفسخ من الفطريات بقطر 3-5 مم ، وتتفتت بعض الخيوط إلى جراثيم مستديرة ومستطيلة.
داء المشعرات.وهو مرض فطري يصيب الجلد وملحقاته مع ميل خاص للتأثير على الشعر [اللات. trichosالشعر + فيتونفطر]. تظهر آفات عديدة يبلغ قطرها حوالي 1.5 سم على فروة الرأس. الجلد عليها متورم ، مفرط الدم ، مغطى بالمقاييس. يتكسر الشعر في الآفات عند مستوى 2-3 مم فوق سطح الجلد ، ومن هنا جاء اسم "القوباء الحلقية".
يكشف الفحص المجهري عن سمة مميزة لفطريات Trichophyton - ترتيب جراثيمها في السلاسل. اعتمادًا على خصائص الفطر ، هناك:
Endothrix (العامل المسبب لداء المشعرات السطحي). ينمو الفطر داخل الشعر ويغير بنيته بشكل كبير. يُملأ الشعر بالكامل (محشوًا) بصفوف متوازية من السلاسل ، تتكون من جراثيم كبيرة مستديرة أو مربعة ؛
إكتوثريكس (العامل المسبب لداء المشعرات العميق) ، حيث يتم تغليف الشعر بغلاف من الأبواغ الصغيرة أو الكبيرة المرتبة على طول المحور بالسلاسل.
القراع هو جرب.يتأثر الشعر والجلد ، وغالبًا ما تتأثر الأظافر. يصبح الشعر رقيقًا ، باهتًا ، مثل الشعر المستعار القديم ، لكنه لا ينفصل. تتميز الآفات الجلدية بظهور قشور رمادية صفراء (حلق) ذات حواف مرتفعة ، مثل تلك الموجودة في الصحون.
الفحص المجهري يكشف عن وجود فقاعات هواء داخل الشعر المصاب.
ميكروسبوريا.يتأثر الجلد والشعر. في الآفات ، يتكسر الشعر عند مستوى 6-8 مم فوق سطح الجلد. تظهر الأغماد البيضاء حول الجذوع المتبقية.
يكشف الفحص المجهري للشعر المصاب عن الجراثيم المنتظمة حول وداخل الشعر بنمط فسيفساء (عشوائيًا). فهي صغيرة جدًا (1-3 ملم) ، ومن هنا جاء اسم المرض. يساعد التوهج الفلوري المميز للشعر في تشخيص microsporia.
يكشف الفحص المجهري عن خلايا مستديرة في مهدها ، غالبًا في شكل عنقود عنب.
الفطريات العميقة (العفن).وهي أكثر شيوعًا مثل الأمراض المهنية في مصانع المضادات الحيوية ، وفي العمال الزراعيين الذين يتعاملون مع الحبوب المتعفنة ، والتبن ، والسماد ، وما إلى ذلك. العامل المسبب لمرض البنسيليوس (فطر الفرشاة) له فطر خشن ، واسع ، إنتاني ينتهي بفرشاة. العامل المسبب للمخاط لديه فطيرة واسعة غير إنتانية تنتهي في كيس من الجراثيم. غالبًا ما يوجد العامل المسبب لداء الرشاشيات (العفن اللوكيميا) في الفواكه والخبز المتعفن. إنه يحتوي على فُطر خشن محجوز ، وينتهي بتوسع ، تتفرع منه خيوط مع جراثيم ، تشبه علبة سقي بتيارات من الماء.
داء الشعيات.تسببها أنواع مختلفة من الفطريات المشعة. يتميز بتكوين تسربات كثيفة على الجلد والأغشية المخاطية والأعضاء الداخلية ، عرضة للتقيح وظهور الناسور. حبيبات صفراء صغيرة ذات حافة مشعة مميزة - دروب الشعيات تظهر في إفرازات الناسور. يتم تحضير الاستعدادات للفحص المجهري من خروج الناسور والبلغم.
عند التكبير المنخفض ، تظهر أسراب الفطر المشع على شكل تكوينات مستديرة صفراء ذات وسط غير متبلور فاتح ولون أغمق عند الحواف. عند التكبير العالي ، يتم تحديد خيوط الفطريات في وسط البراريق ، وتورمات على شكل قارورة على طول المحيط. عند تلطيخها وفقًا لـ Gram ، تكون خيوط mycelium هي G + والأقماع هي G-.
التشخيص الدقيق للفطريات الغازيةليس سهلا. لا يفسر ذلك فقط بالصعوبات في الحصول على مزرعة الفطريات ، ولكن أيضًا في تفسير نتائج البحث ، لأن الفطريات ، سواء الخميرة أو الفطريات ، قد تستعمر الأغشية المخاطية وتلوث العينات قيد الدراسة. في هذا الصدد ، يعتمد تشخيص داء الفطريات الغازية على نهج متكامل ، والذي لا يشمل فقط نتائج الدراسات الفطرية (الثقافية) والمصلية (تحديد مستضد الفطريات) ، ولكن أيضًا الأعراض السريرية للعدوى الفطرية ، وبيانات من طرق البحث المساعدة (التصوير بالرنين المغناطيسي أو المحوسب ، الموجات فوق الصوتية).
المجموعة التعاونية الأوروبية الأمريكية لدراسة داء الفطريات الغازيةفي المرضى الذين يعانون من نقص المناعة ، تم تطوير معايير لتشخيص داء الفطريات الغازية. تم تقديمها في عام 2001 في المؤتمر الدولي حول مضادات الميكروبات والعلاج الكيميائي (ICAAC ، شيكاغو) ، وفي عام 2002 مطبوعة. تم تحديد معايير الإصابة بالفطريات الغازية المؤكدة والمحتملة والمحتملة ، والتي يوصى باستخدامها في الدراسات السريرية والوبائية.
ثبت وجود فطار جائر بسبب الفطريات الخيطية: الكشف عن الفطريات الفطرية في الخزعات أو الشفط أثناء الفحص النسيجي أو الخلوي أو عزل الثقافة من العينات التي تم الحصول عليها في ظل ظروف معقمة من بؤرة معقمة بشكل طبيعي ، والتي ، وفقًا لنتائج الدراسات السريرية والإشعاعية ، مرتبطة بالعدوى ، باستثناء من دراسات البول والأغشية المخاطية.
فطار غازي مؤكد بسبب الخميرة: الكشف عن خلايا الخميرة (الفطريات من جنس المبيضات يمكن أن تشكل pseudomycelium أو الفطريات الحقيقية) في الخزعات أو الشفط ، باستثناء العينات من الأغشية المخاطية ، أو عزل المزرعة من العينات التي تم الحصول عليها في ظل ظروف معقمة من بؤرة معقمة عادة ، والتي ، وفقًا لنتائج الدراسات السريرية والإشعاعية المصاحبة للعدوى ، باستثناء عينات البول والجيوب الأنفية والأغشية المخاطية ، أو الكشف عن طريق الفحص المجهري والتلوين المحدد (في قطرة من الحبر ، وتلطيخ بالموسيكارمين) خلايا الخميرة أو مستضد إيجابي المستخفية النيابة. في السائل الدماغي الشوكي.
الفطريات في الدم بسبب الفطريات الخيطية: عزل مزارع الدم من الفطريات ، باستثناء Aspergillus spp. و Penicillium spp. ، بما في ذلك Penicillium marneffei ، بالاشتراك مع الأعراض السريرية لعملية معدية تتفق مع العامل الممرض المعزول.
الفطريات في الدم بسبب فطريات الخميرة: عزل مزارع الدم من المبيضات أو فطريات الخميرة الأخرى في المرضى الذين يعانون من علامات سريرية للعدوى المرتبطة بهذا العامل الممرض.
مجمع الدراسات التشخيصية لداء الفطريات الغازية
| فحص المواد الحيوية | الإشارة ، الوسائط المستخدمة ، القيمة |
| دم |
دواعي الإستعمال:
الحمى المستمرة (4-5 أيام أو أكثر) أثناء العلاج بالمضادات الحيوية واسعة الطيف ؛ "الموجة" الثانية من الحمى على خلفية العلاج بالمضادات الحيوية جمع الدم من الوريد إلى قوارير للبكتيريا الهوائية * أو في وسط انتقائي للفطر ، كرر (2-3 مرات خلال اليوم بفاصل ساعة واحدة) أهمية التشخيص: عزل الخميرة ، التفسير الدقيق عند عزل الفطريات الخيطية ، باستثناء الفطر Fusarium spp. |
| القسطرة الوريدية |
دواعي الإستعمال:
عزل الخميرة من الدم يتم إزالة القسطرة الوريدية المركزية أو المحيطية في جميع حالات إفراز الخميرة من الدم لفحص الفطريات ، يتم استخدام جزء بعيد معقم معقم من القسطرة بطول 5-6 سم ، ويتم إجراء الدراسة شبه الكمية (طريقة ماكي) أو الطريقة الكمية على وسط سابورو أهمية التشخيص:
|
| تصريف الجهاز التنفسي العلوي ، والبلغم ، وغسل القصبة الهوائية ، والشعب الهوائية ، وسائل غسل القصبات الهوائية |
دواعي الإستعمال:
الاشتباه في داء الفطريات الناجم عن الفطريات الخيطية أو المستخفية الحديثة ؛ حمى طويلة أثناء العلاج بمضادات حيوية واسعة الطيف وقلة العدلات الفحص المجهري للعينات باستخدام كلس فلور أبيض (الكشف عن الفطريات أو الفطريات الكاذبة) ؛ البذر يوم الأربعاء سابورو ؛ تحديد مستضد الرشاشيات في سائل غسل القصبات الهوائية في وجود بؤر في الرئتين مميزة لداء الرشاشيات الغازي أهمية التشخيص: عزل الفطريات الخيطية أو Cryptococcus neoformans |
| السائل النخاعي |
دواعي الإستعمال:
أعراض التهاب السحايا. الكشف عن بؤر تركيز (بؤر) في الدماغ بالتصوير بالرنين المغناطيسي أو المحوسب ؛ الأعراض "الدماغية" المصاحبة للحمى وقلة العدلات الفحص المجهري بالكلسوفلور الأبيض ، في قطرة من الحبر ؛ تحديد مستضد Aspergillus ، Cryptococcus ؛ زرع الأربعاء سابورو أهمية التشخيص:
|
| الخزعات ، الشفط ، السائل البريتوني ، السائل الجنبي |
دواعي الإستعمال:
العلامات السريرية و / أو الإشعاعية للفطار الغازي ؛ الحمى أثناء العلاج بالمضادات الحيوية واسعة الطيف. الفحص المجهري بالكلسوفلور الأبيض ، بالطلاء على وسط سابورو أهمية التشخيص:
|
احتمال الإصابة بالفطريات الغازيةتم تشخيصه بمزيج من المعايير التالية:
سمة واحدة من فئة المعايير الميكروبيولوجية ؛
علامة واحدة من فئة "هام" أو اثنتان من مجموعة الأعراض السريرية "الأقل أهمية" للعملية المعدية.
فطار غازي محتملتم التشخيص بناءً على مجموعة من المعايير التالية:
وجود عامل خطر واحد على الأقل يؤدي إلى تطور فطار غازي ؛
علامة واحدة من فئة المعايير الميكروبيولوجية أو علامة واحدة من فئة الأعراض السريرية "المهمة" (اثنتان من مجموعة الأعراض السريرية "الأقل أهمية") للعملية المعدية.
المفهوم " ممكن فطار الغازية»لا ينصح باستخدامه في التجارب السريرية التي تبحث في فعالية الأدوية المضادة للفطريات. يمكنك استخدام هذا المصطلح في تحليل العلاج التجريبي المضاد للفطريات ، والدراسات الوبائية ، ودراسة اقتصاديات الأدوية.
في البحث الفطريتأخذ الشفط أو الخزعات المعقمة في الاعتبار ليس فقط عزل الثقافة الفطرية ، ولكن أيضًا الكشف عن الفطريات أو الفطريات الكاذبة عن طريق الفحص المجهري. في المستحضرات النسيجية ، يصعب التفريق بين الرشاشيات و Fusarium spp. و Sceclosporium apiospermum وبعض الفطريات الخيطية الأخرى. للتشخيص التفريقي ، يجب إجراء دراسة كيميائية مناعية مع الأجسام المضادة لـ Aspergillus.
عزل فطريات الخميرةمن الدم ينتمي على الأقل في دراسة واحدة إلى فئة الفطار الغازي "المثبت" وهو مؤشر مطلق لتعيين مضادات الفطريات الجهازية في المرضى الذين يعانون من قلة العدلات. تواتر اكتشاف فطريات الخميرة من الدم منخفض ، حتى مع داء المبيضات المنتشر ، فهو 35-50٪.
تنفيذ تكرار ثقافات الدميزيد من احتمالية الحصول على نتائج إيجابية.
آخر ترجمةالنتائج في حالة الكشف عن الفطريات الخيطية في الدم. التكرار العالي لعزل الفطريات الخيطية هو سمة من سمات Fusarium spp. وهي 40-60٪. نادرًا ما يتم العثور على الرشاشيات وتعتبر تلوثًا في معظم الحالات ، باستثناء Aspergillus terreus.
تسليط الضوء الرشاشيات الأرضيةمن دم المرضى الذين يعانون من داء الأرومة الدموية قد يشير إلى ورم رشاش حقيقي ، وفي حالة وجود أعراض سريرية للعدوى ، فهذا هو الأساس لتعيين مضادات الفطريات.
معايير الفطريات الغازية
| فهرس | المعايير |
| العوامل التي تحفز ظهور الفطريات الغازية (الكائنات الحية الدقيقة) | العدلات (< 0,5*109/л в течение 10 дней)
حمى مستمرة لأكثر من 96 ساعة مع علاج واسع الطيف بالمضادات الحيوية درجة حرارة الجسم أعلى من 38 درجة مئوية أو أقل من 36 درجة مئوية وأي من العلامات المؤهبة التالية: قلة العدلات لفترات طويلة (أكثر من 10 أيام) في الأيام الستين السابقة ، العلاج المكثف المثبط للمناعة خلال آخر 30 يومًا ، الفطار الغازي المثبت أو المحتمل في الأيام السابقة فترة قلة العدلات أو الإيدز أعراض GVHD ، خاصة الحالات الشديدة (الدرجة الثانية) أو المرض المزمن الشامل الاستخدام طويل الأمد (أكثر من 3 أسابيع) للجلوكوكورتيكويد خلال آخر 60 يومًا |
| العلامات الميكروبيولوجية | عزل مزرعة من الفطريات الخيطية (بما في ذلك Aspergillus spp. و Fusaruim spp. و Sceclosporium spp. و zygomycetes) و Cryptococcus neqformans من البلغم أو سائل غسل القصبات الهوائية النتائج الإيجابية للزراعة أو الفحص الخلوي (الفحص المجهري المباشر) للكشف عن الفطريات الخيطية من رشاشات الجيوب الأنفية الكشف عن الفطريات الخيطية أو المستخفيات المستخفية عن طريق علم الخلايا / الفحص المجهري المباشر من البلغم أو سائل غسل القصبات الهوائية مستضد الرشاشيات موجب في سائل غسل القصبات الهوائية والسائل النخاعي وعينات الدم (اثنان على الأقل) المستضد الإيجابي للمكورات الخفية في عينات الدم الكشف عن طريق الفحص الخلوي أو الفحص المجهري المباشر للعناصر الفطرية في عينات السوائل المعقمة بشكل طبيعي (على سبيل المثال ، Cryptococcus spp. في السائل النخاعي) نتيجتان إيجابيتان للدراسات حول اكتشاف مزرعة فطريات الخميرة في البول في حالة عدم وجود قسطرة بولية بلورات المبيضات في البول في حالة عدم وجود قسطرة بولية عزل المبيضات النيابة. من مزارع الدم |
|
علامات طبيه
الجهاز التنفسي السفلي |
يجب أن يرتبط بالموقع الذي يتم أخذ العينات منه للفحص الميكروبيولوجي أي من الأنواع التالية من الرئة الجديدة تتسرب في التصوير المقطعي المحوسب: أعراض الهالة ، أعراض الهلال ، التجويف مع مناطق التوحيد * أعراض التهاب الجهاز التنفسي السفلي (سعال ، ألم في الصدر ، نفث دم ، ضيق في التنفس) ، نفخة احتكاك جنبي ، أي ارتشاح جديد غير مدرج في علامات الخطورة العالية ؛ الانصباب الجنبي |
| الجهاز التنفسي العلوي علامات ذات أهمية عالية علامات أقل أهمية |
العلامات الإشعاعية لعدوى الجيوب الأنفية الغازية (تآكل الجدار أو انتشار العدوى إلى الهياكل المجاورة ، تدمير واسع النطاق لعظام الجمجمة) سيلان الأنف ، احتقان الأنف ، تقرح الغشاء المخاطي للأنف ، رعاف ، وذمة حول الحجاج ، ألم في الفك العلوي ، تقرح نخر أسود ، أو انثقاب في الحنك الصلب |
| الجهاز العصبي المركزي علامات ذات أهمية عالية علامات أقل أهمية |
علامات الأشعة السينية لعدوى الجهاز العصبي المركزي المشتبه بها (التهاب الخشاء أو بؤرة بارزة أخرى ، والدبيلة خارج الجافية ، وآفات متعددة في الدماغ أو النخاع الشوكي) الأعراض والعلامات العصبية البؤرية ، بما في ذلك النوبات البؤرية ، شلل نصفي ؛ اضطرابات في الوعي ، وأعراض سحائية ، وانتهاكات للتركيب الكيميائي الحيوي للسائل الدماغي النخاعي وتكوينه الخلوي (في غياب مسببات الأمراض الأخرى ، وفقًا للثقافة والفحص المجهري ، في غياب الخلايا السرطانية) |
في الكشف في الدمأو غيرها من الركائز الحيوية المعقمة لفطريات الخميرة ، من الضروري تحديد الأنواع وتحديد الحساسية للأدوية المضادة للفطريات ، عند عزل الفطريات الخيطية (العفن) - تحديد الأنواع فقط ، لا يتم تحديد الحساسية.
في السريرية حاجةلم يتم التحقق من حساسية الفطريات الخيطية بسبب المعايير غير الكاملة لتحديد حساسية هذه الفطريات لمضادات الفطريات. علاوة على ذلك ، أظهرت دراسة واحدة فقط وجود علاقة بين حساسية Aspergillus spp. ونتائج علاج داء الرشاشيات الغازية في مرضى داء الأرومة الدموية. لم تحصل أي من الدراسات التي أجريت منذ ذلك الحين على نتائج مماثلة.
في الآونة الأخيرة ، بدأت تظهر تقارير متفرقة عن تكوين المقاومة المكتسبة لفطر A. fumigatus تجاه itraconazole ، voriconazole.
تحديد الفطريات للأنواع، خاصة تلك التي تم الحصول عليها من مواضع معقمة ، ضروري ، أولاً وقبل كل شيء ، لاختيار مضاد للفطريات ولعلاج مضاد للفطريات مناسب. وبالتالي ، فإن Candida krusei مقاومة للفلوكونازول وأقل حساسية من أنواع الخميرة الأخرى للأمفوتريسين B ؛ Aspergillus terreus و Scedosporium apiospermum (Pseudallescheria boydii) و Trichosporon beigelii و Scopulariopsis spp. مقاومة الأمفوتريسين ب ؛ Mucorales مقاومة لـ itraconazole و voriconazole و Candida glabrata تظهر حساسية تعتمد على الجرعة للفلوكونازول ، وعند عزل هذا النوع من الفطريات ، حتى السلالات الحساسة ، يجب زيادة جرعة فلوكونازول (يتم وصف جرعة للبالغين 800 مجم بدلاً من 400 مجم) ؛ المبيضات lusitaniae مقاومة للأمفوتريسين ب.
تحديد الفطريات للأنواعمن المهم أيضًا إجراء التحليل الوبائي في المستشفى - تحديد العوامل المسببة لتفشي المرض ، وإذا أمكن ، مصدر العدوى. يتم وصف حالات تفشي العدوى التي تسببها الفطريات النادرة مثل C. lusitaniae و C. krusei و C. lipolytica.
على أساس تحديد أنواع الفطرياتيمكن افتراض وجود الفطريات الغازية أو الاستعمار الفطري للأغشية المخاطية. على سبيل المثال ، يعتبر Aspergillus niger أقل احتمالا بكثير من Aspergillus fumigatus للتسبب في داء الرشاشيات الغازية في المرضى الذين يعانون من سرطان الدم الحاد. غالبًا ما يُنظر إلى عزل Aspergillus niger من سائل غسل القصبات الهوائية على أنه استعمار في الجهاز التنفسي ومن البلغم - باعتباره تلوثًا من الهواء ويتطلب بحثًا إضافيًا لتأكيد تشخيص داء الرشاشيات الغازي.
على أساس إفراز الفطريات الخيطيةمن البلغم ، سائل القصبات الهوائية ، نضح من الجيوب الأنفية ، يمكن للمرء أن يفترض فقط الإصابة بالفطريات الغازية ، ولا يشمله في فئة "مثبت". ومع ذلك ، يجب دائمًا النظر في الكشف عن الرشاشيات في البلغم ، وخاصة Aspergillus fumigatus أو Aspergillus flavus ، في المرضى الذين يعانون من قلة العدلات ، والذين يتلقون نخاع العظم الخيفي. وهذا يتطلب فحص فطري متكرر وتصوير مقطعي للرئتين. لذلك ، مع قلة العدلات ، فإن احتمال اكتشاف داء الرشاشيات الغازية في حالة وجود ثقافة إيجابية من Aspergillus spp. في البلغم 80٪.
تسليط الضوء المستخفية الحديثةفي المرضى الذين يعانون من نقص المناعة من الجهاز التنفسي (غسيل ، غسيل) له أهمية تشخيصية. إذا لم يكن تحديد فطريات الخميرة من السوائل التي تم الحصول عليها من الجهاز التنفسي (غسيل من القصبة الهوائية ، والشعب الهوائية ، وغسل القصبات الهوائية) للمرضى الذين يعانون من نقص المناعة أمرًا إلزاميًا ، فمن الضروري إجراء فحص للكشف عن Cryptococcus neoformans من هذه العينات.
الكشف عن المبيضات في البولفي المرضى الذين يعانون من قلة العدلات والحمى ، يُعتبر عادةً مظهرًا من مظاهر العدوى الفطرية المنتشرة.
في الوقت المناسب التشخيصاستخدمت الغازية بنجاح اختبارًا تجاريًا للكشف عن دوران مستضد معين من الفطريات Aspergillus spp. galactomanna (مكون متعدد السكاريد قابل للذوبان في الماء في جدار الخلية الفطرية).
جالاكتومانيمكن تحديدها بطريقتين: طريقة تراص اللاتكس (Pastorex Aspergillus ، BioRAD) ومقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (Platelia Aspergillus ، BioRAD).
الميزة الإنزيم المناعيهو الحد الأدنى من الحساسية لتحديد مستوى الجالاكتومان في الدم - 1 نانوغرام / مل أو أقل ، وبمساعدة تراص اللاتكس - 15 نانوغرام / مل. إن تحديد نسبة السكر في الدم (في عينتين على الأقل) ، السائل الدماغي النخاعي ، غسيل القصبات الهوائية له قيمة تشخيصية. تبلغ حساسية مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم حوالي 90٪ ، والنوعية 90-99٪ ؛ في متلقي نخاع العظم الخيفي ، تكون هذه المؤشرات أقل وتساوي 60-70٪ و 80-90٪ ، على التوالي ، بسبب الاستخدام الوقائي للأدوية المضادة للفطريات (تقلل مضادات الفطريات مستوى عتبة الجالاكتومان).
في 40٪ من الحالات يتم الكشف المجرةفي الدم ، يتقدم على مظاهر داء الرشاشيات الغازية ، التي تحددها دراسة الكمبيوتر للرئتين ، وفي 70 ٪ يتقدم على الأعراض السريرية للعدوى.
القيمة التشخيصية لاختبار الكشف عن المستضد فطر الرشاشياتفي حالة إجراء الدراسة بشكل متكرر. يجب أن يتم تحديد مستضد الرشاشيات في الدم في حالة الحمى أثناء العلاج بالمضادات الحيوية واسعة الطيف في المرضى الذين يعانون من قلة العدلات مرتين في الأسبوع ؛ مع الالتهاب الرئوي الذي يحدث أو يستمر على خلفية العلاج بالمضادات الحيوية ؛ عندما توجد بؤر في أنسجة الرئة (التصوير المقطعي المحوسب).
لا تزال الطرق الرئيسية في التشخيص المختبري المسبب للمرض حتى يومنا هذا هي الطرق الكلاسيكية ، بما في ذلك الفحص المجهري للمادة ، وعزل الثقافة النقية لمسببات الأمراض مع تحديدها لاحقًا. طرق التشخيص المناعي لها أهمية ثانوية. يتم استخدامها لتحديد أهم مسببات الأمراض: الفطريات المسببة للأمراض ثنائية الشكل ، وكذلك العوامل المسببة للمكورات الخبيثة وداء المبيضات وداء الرشاشيات. طرق بيان الجينات (تفاعل البلمرة المتسلسل) لها أيضًا تطبيق محدود بسبب افتقارها إلى الخصوصية ، ولكنها تستخدم بشكل أساسي في تشخيص داء الفطريات العميقة والانتهازية.
يمكن أن تكون مواد البحث في التشخيص المختبري لداء الفطريات ، اعتمادًا على شكل المرض ، هي: الجلد وملحقاته (الشعر والأظافر) ، وإفراز الجروح والناسور ، والبلغم ، والدم ، والسائل النخاعي والبول ، وخزعات الأنسجة. يتم تحديد دقة أخذ المواد المرضية إلى حد كبير من خلال فعالية المزيد من البحوث المختبرية. في حالة الآفات الجلدية ، يتم اختيار المادة في أغلب الأحيان عن طريق الكشط أو استخدام شريط لاصق (بشكل أساسي للأشكال السطحية) قبل العلاج من بؤر جديدة ولكنها مطورة بالكامل على طول المحيط ، حيث توجد مسببات الأمراض الأكثر قابلية للحياة.
عند اكتشاف الفطريات الجلدية ، يعتبر الشعر مادة مفيدة للغاية ، لأن طبيعة آفة الشعر تجعل من الممكن التعرف على العامل الممرض. في بعض الحالات ، يساعد استخدام المصباح الخشبي في تحديد تركيز الآفة. تتم إزالة الشعر المصاب مع القشور بملاقط إزالة الشعر. في داء المشعرات ذو النقاط السوداء المزمن ، يتم إزالة الشعر من الجلد بإبرة تشريح.
تؤخذ المسامير على طول كل الطبقات ، تقطع بمشرط حاد أو مقص. أخذ العينات باستخدام مثقاب الأسنان أكثر كفاءة. في حالة آفات داء المبيضات ، يتم اختيار المادة عن طريق الكشط من بكرة الظفر. يتم تسليم المواد المختارة إلى المختبر في أكياس ورقية داكنة لتجنب الجفاف والتلوث بالنباتات الدقيقة الدخيلة. يتم تسليم المادة التي تحتوي على القيح في مطبوعات بكتيرية معقمة أو أطباق بتري. يتم جمع البلغم في وعاء معقم. يجب إجراء فحص البلغم في موعد لا يتجاوز ساعتين بعد الجمع. عند تمديد فترة الدراسة ، يجب تخزين العينات في الثلاجة بدرجة حرارة +4 درجة مئوية ، وإلا فقد تحدث أخطاء تشخيصية مرتبطة بظهور الأشكال الفطرية الزائفة لخلايا الخميرة.
يتم جمع الدم والسائل النخاعي بطريقة معقمة. تتم عملية زرع الدم في وسط سابورو السائل. لاستبعاد تلوث عينات الدم ، يتم إعادة فحصها. يتم طرد السائل الدماغي النخاعي ، ويتم استخدام الرواسب في الفحص المجهري والتلقيح.
يتم جمع البول في الصباح في وعاء معقم ، في حين أنه من الضروري تجنب تلوث المادة بالميكروفلورا من جلد العجان. يتم إجراء زراعة البول باستخدام طرق الزراعة الكمية.
في تشخيص داء الفطريات ، يتم استخدام المستحضرات من المواد الأصلية والملطخة. عند فحص المستحضرات غير الملوثة ، يتم تنقية المادة الكثيفة مبدئيًا (منقوعة) بمحلول KOH 10-30٪ (يمكن استخدام محاليل ثنائي ميثيل سلفوكسيد) ، ثم يتم فحصها مجهريًا باستخدام طريقة "القطرة المكسرة". لإعطاء التباين ، يتم صبغ المستحضرات بمحلول مائي من الميثيلين الأزرق.
يتم إجراء تلطيخ اللطاخات الثابتة بطرق مختلفة: وفقًا لـ Gram ، الميثيلين الأزرق ، وفقًا لـ Romanovsky - Giemsa. تسمح لك الطريقة الأخيرة برؤية خلايا الخميرة الصغيرة ومراحل البلعمة. بالنسبة للمكورات الخفية ، استخدم صبغة الحبر ، وصمة عار ساوثجيت. عيش الغراب المحتوي على الميلانين (لون غامق) ، على سبيل المثال كلادوفيالوفورا باندانا، ملطخ بالماس - فونتانا (لون الميلانين ، وهو جزء من جدار الخلية). تستخدم الأمصال الفلورية في تشخيص مسببات الأمراض الفطرية العميقة ومسببات الأمراض الجلدية والفطريات من الجنس الكانديدا.
إن عزل الثقافة النقية للعامل الممرض يجعل من الممكن تحديد الانتماء العام والأنواع للفطر ، لدراسة خصائصه وحساسيته للأدوية المضادة للميكروبات. لعزل والتعرف على الفطريات والوسائط الكثيفة والسائلة لسابورو ، يتم استخدام نبتة أجار. توفر هذه البيئات نمو معظم الفطريات المسببة للأمراض والانتهازية. بالإضافة إلى ذلك ، فإن بيئة Sabouraud (الشكل 8.2) تحفز عمليات تكوين الصباغ في الفطريات ، وهو أمر مهم لتحديد الهوية.
لقمع نمو البكتيريا الملوثة ، تضاف المضادات الحيوية إلى الوسائط: الكلورامفينيكول ، الستربتومايسين ، البنسلين ، التتراسيكلين. لعزل الفطريات المسببة للأمراض غريب الأطوار ، يتم استخدام الوسائط المخصبة بالدم وخلاصة القلب الدماغي. يتم استخدام وسائط خاصة لزراعة الفطريات والتعرف عليها: وسيط تشابيك - لتشكيل الكونيديا في تحديد القوالب ، وأجار البطاطس (البطاطس والجزر) ، وأجار الأرز - لتحديد أنواع النمو وإنتاج أبواغ الكلاميديا في تحديد الفطريات من الجنس الكانديدا، أجار الجزر (الخضار) - للحصول على مستعمرات فطرية نموذجية Trichophyton schonleini ،وسط كاشكين - لعزل الفطريات المكونة للصباغ. تُستخدم البيئات التشخيصية التفاضلية أيضًا ، على سبيل المثال ، لتحديد C. البيض -وسائط أو وسائط كروموجينية تسمح لك بتحديد نشاط الفوسفوليباز للفطر.
تتراوح فترة حضانة الفطر من عدة أيام إلى شهر واحد أو أكثر. في حالة الاشتباه في وجود الفطريات ثنائية الشكل المسببة للأمراض ، تتم الزراعة لمدة 8 أسابيع لإعطاء استجابة سلبية.
يتم إجراء التلقيح على وسائط تُسكب في أنابيب الاختبار والقوارير وأطباق بتري. يتم تلقيح المادة على الفطريات الجلدية في وقت واحد على عدة أنابيب مع الوسط. يتم تلقيح المواد المشتبه في احتوائها على قوالب (بلغم) في 3 نقاط وحضانة عند 28 و 37 درجة مئوية. لحل مشكلة عدم وجود تلوث أثناء أخذ عينات المواد ، يتم إجراء ثقافات هواء للتحكم لمحتوى القوالب في مباني المختبر والأجنحة حيث يوجد المرضى.
عند زراعة الفطريات في مختبر الفطريات ، يتم مراعاة تدابير السلامة ، على غرار تلك الموجودة في المختبرات البكتريولوجية. من أجل تجنب الحساسية ، يقوم الموظفون بالعمل مع القوالب والسموم الفطرية في غرف معبأة في ضمادات من الشاش أو في صناديق طاولة بغطاء. لا يمكن العمل مع الثقافات التي تنتمي إلى المجموعة الثانية من مسببات الأمراض (الفطريات المسببة للأمراض ثنائية الشكل) إلا في المختبرات المتخصصة.
يتم تحديد الأنواع الفطرية على أساس مجموعة معقدة من الخصائص الثقافية والمورفولوجية وغيرها. الأول يشمل مورفولوجيا المستعمرة ، لونها وحجمها عند زراعتها على وسائط خاصة ، وهيكل الحافة والمركز ، وطبيعة السطح ، ووجود وطبيعة الأعضاء التناسلية ، والثاني - ملامح المجهرية هيكل mycelium ، وهيكل وشكل وحجم الأعضاء التناسلية - conidiophores ، conidia ، chlamydospore ، arthrospore ، إلخ.
تشكل الفطريات أنواعًا مختلفة من المستعمرات على وسائط المغذيات الصلبة. قام علماء من معهد G. Venter (الولايات المتحدة الأمريكية) ، مع الأخذ في الاعتبار قدرة الفطريات على إطلاق مواد صبغية في الوسط ، بإنشاء "شجرة عيد الميلاد" في وسط المغذيات (الشكل 8.3).
أرز. 8.3 "شجرة عيد الميلاد" للفطر (أعلى: Talaromyces شرط؛ خشب نيدولانس الرشاشياتالزينة: البنسليوم مارنيفي.عقب السيجارة: Aspergillus terreus)
للقدرات الأنزيمية والاستيعابية للثقافات أهمية كبيرة في تحديد الخميرة (الفطريات الشبيهة بالخميرة). حاليًا ، تُستخدم أنظمة الاختبار التجارية لتحديد الفطريات الشائعة - العوامل المسببة لأمراض الإنسان والحيوان: BBL Mycotube ، API 20C bio Merieux ، إلخ.
تحميل ...