Méthodes modernes pour le diagnostic de l'infection par le VIH. Méthodes modernes de diagnostic de l'infection à VIH Caractéristiques analytiques et diagnostiques

1 affectation définie

1.1 Le kit est destiné à la détection simultanée d'anticorps dirigés contre le virus de l'immunodéficience humaine des premier et deuxième types (VIH-1 et VIH-2) et l'antigène p24 du VIH-1 dans le sérum et le plasma humains « in vitro » par la méthode de l'enzyme indirecte -test immunosorbant lié.

2 Caractéristiques et principe de fonctionnement de l'ensemble

2.1 L'ensemble comprend :

Nom du composant	Quantité
Immunosorbant	2 comprimés
Contrôle positif AT (K + AT)	1 flacon de 3 ml
Échantillon de contrôle positif d'AG (K + AG)	3 flacons, préparation lyophilisée
Contrôle négatif (À -)	2 flacons de 3 ml
Solution conjuguée n°1 (RC-1)	1 flacon de 12 ml
Conjugué n°2 (Kg-2)	1 bouteille, 1 ml
Solution de dilution de conjugué n°2 (RR-K2)	2 flacons de 18 ml
Solution tampon de substrat ( BRS)	2 flacons de 18 ml
Chromogène TMB	1 bouteille, 1 ml
Concentré de Tween PBS (FSB-T × 25)	2 flacons de 50 ml
Arrêter le réactif	1 flacon de 12 ml
Kit plateau de réactifs avec embouts pour pipettes multicanaux	1 jeu
Film adhésif

2.2 Les principaux composants du kit ELISA-HIV 1,2 AGAT sont l'immunosorbant, la solution de conjugué n°1 et le conjugué n°2.

Immunosorbant est une plaque de polystyrène dans les puits de laquelle un mélange d'antigènes recombinants VIH-1 (gp41) et VIH-2 (gp36) et d'anticorps monoclonaux dirigés contre l'antigène p24 de VIH-1 est sorbé.

Solution conjuguée n°1 est un mélange d'anticorps humains monoclonaux marqués à la biotine contre l'antigène p24 du VIH-1 et de protéines recombinantes VIH-1 et VIH-2 marquées à la biotine.

Conjugué n° 2 est la streptavidine conjuguée à la peroxydase de raifort.

Contrôle positif AT- sérum sanguin humain contenant des anticorps anti-VIH-1 et VIH-2, ne contenant pas d'anticorps anti-hépatite C et Treponema pallidum, antigène VIH-1 p24 et antigène HBs, inactivé par chauffage pendant 3 heures à 56 ºC.

Échantillon de contrôle positif d'AG- sérum sanguin humain contenant l'antigène p24 natif du VIH-1, exempt d'anticorps anti-VIH-1, VIH-2, virus de l'hépatite C et Treponema pallidum, et antigène HBs, inactivé par chauffage pendant 3 heures à une température de 56 ºC.

Contrôle négatif- sérum sanguin humain ne contenant pas d'anticorps anti-VIH-1, VIH-2, VHC, VIH-1 antigène p24 et antigène HBs, inactivé par chauffage pendant 3 heures à 56 ºC.

Le principe de l'ensemble. Lorsqu'une solution de conjugué n°1 et des échantillons de sérums de sang infecté sont ajoutés dans les puits de la plaque, l'antigène p24 se lie à la fois aux anticorps spécifiques sur la phase solide et aux anticorps monoclonaux biotinylés anti-p24 inclus dans la solution de conjugué n° . 1; Les anticorps spécifiques du VIH se lient à la fois aux antigènes recombinants du VIH-1 et du VIH-2, adsorbés sur la phase solide, et aux antigènes inclus dans la solution de conjugué n°1, formant des complexes antigène-anticorps. Les complexes immuns d'anticorps spécifiques anti-p24 et d'antigène p24 sont détectés par le conjugué #2. Après lavage des composants non liés, une solution de substrat de peroxydase (peroxyde d'hydrogène) et de chromogène TMB est ajoutée dans les puits de la plaque.

La réaction de la peroxydase est stoppée par l'ajout d'un réactif d'arrêt (solution d'acide sulfurique 0,9 M), et l'intensité de la couleur de la solution dans les puits est mesurée sur un spectrophotomètre en valeur de densité optique (DO) à une longueur d'onde de 450 nm.

La valeur de DO est directement proportionnelle à la concentration d'anticorps spécifiques et/ou d'antigène p24 dans un échantillon de sérum ou de plasma. Plus la teneur en anticorps et/ou en antigène p24 dans l'échantillon de sérum est élevée, plus l'intensité de la coloration est élevée.

2.3 L'ensemble est conçu pour tenir 24 représentations ELISA : 1 jeu - 1 bande (8 trous). Le total - 192 définitions y compris les échantillons de contrôle.

3 Précautions lors de la manipulation du kit

3.1 Tous les composants du kit sont non toxiques dans les concentrations utilisées. Cependant, travaillez avec tous les échantillons de sérum sanguin humain (plasma), qui doivent être considérés comme potentiellement infectieux, capables de stocker et de transmettre le VIH, le virus de l'hépatite B ou tout autre agent causal d'infection virale, avec des solutions et des liquides usagés, divers équipements pouvant être contaminé, le processus d'analyse nécessite certaines mesures de sécurité lors de l'utilisation du kit :

Les travaux doivent être effectués dans un local spécialement aménagé;

Il est nécessaire de travailler avec l'utilisation d'équipements de protection individuelle et en prenant des précautions conformément aux exigences, et.

3.2 Le réactif d'arrêt contenant de l'acide sulfurique est irritant. En cas de contact avec la peau et les muqueuses, rincer immédiatement et abondamment à l'eau.

3.3 Lorsque vous travaillez avec un ensemble, les lieux de travail doivent être équipés d'une ventilation d'alimentation et d'extraction.

3.4 Toutes les personnes travaillant dans le laboratoire avec les kits doivent subir un examen médical obligatoire conformément aux exigences.

3.5 Les déchets médicaux et/ou les kits périmés non utilisés doivent être éliminés correctement.

4 Règles pour travailler avec l'ensemble

4.1 Pour exclure les faux résultats, les échantillons de test doivent être préparés et stockés dans des conditions qui empêchent la croissance bactérienne. Il est nécessaire de clarifier les échantillons de sérum contenant des composants sériques agrégés ou des sédiments par centrifugation pendant (5-10) minutes à une vitesse de rotation de 3000 tr/min. Les échantillons de sérum peuvent être conservés à une température (2-8) ° C pendant 5 jours maximum. Les échantillons congelés (de préférence à une température d'au moins moins 20 ° C) peuvent être conservés pendant 1 an au maximum. Les cycles de gel-dégel répétés des échantillons doivent être évités.

Il convient de rappeler que les échantillons présentant une hémolyse, une hyperlipidémie, une croissance bactérienne, ainsi que ceux qui ont été conservés pendant longtemps sans congélation, ne conviennent pas à l'analyse.

La fiabilité des résultats dépend du respect des règles suivantes :

Il est interdit d'utiliser le kit après la date de péremption, ainsi que de mélanger les composants des kits de différentes séries ;

Un récipient séparé doit être utilisé pour la préparation de chaque réactif ;

Ne pas traiter tous les ustensiles utilisés pour la préparation des réactifs avec des désinfectants et des détergents. Si nécessaire, rincer à l'eau potable, puis rincer cinq fois à l'eau distillée ;

Pour travailler avec les chromogènes TMB et PX, il est nécessaire d'utiliser des récipients séparés pour les solutions, les pointes de pipette et les boîtes.

Il faut faire attention à bien mélanger les réactifs ;

Le temps entre le remplissage et la vidange des puits de la plaque avec des solutions et des réactifs doit être d'au moins 30 s. Le séchage des puits n'est pas autorisé à toutes les étapes de l'ELISA ;

Lors de l'utilisation de la laveuse, surveillez l'état du réservoir de solution de rinçage des plaques et les tuyaux de raccordement : ils ne doivent pas présenter de signes de croissance bactérienne ou fongique ;

Il est nécessaire d'utiliser des pipettes automatiques à pointes remplaçables, certifiées par la valeur de la dose moyenne et la répétabilité des résultats de pipetage (l'erreur ne dépasse pas 3 %) ;

Traiter les distributeurs et les surfaces de travail avec une solution contenant une fraction volumique d'alcool éthylique à 70 %. N'utilisez pas de chloramine et d'autres substances contenant du chlore ;

Des pointes de pipette jetables sont recommandées pour la manipulation des échantillons de test et de contrôle. Chaque échantillon de sérum ainsi que les réactifs du kit doivent être prélevés avec un embout séparé.

Lors de l'ajout de PK-1 dans les puits, ne pas toucher la surface de la plaque et la solution dans les puits avec la pointe de la pipette.

Pendant l'analyse, évitez la lumière directe du soleil sur la surface de travail.

4.2 Lors de l'ouverture et de la dissolution des composants lyophilisés, il est nécessaire de s'assurer qu'aucune matière sèche ne reste sur le couvercle et les parois des flacons.

5 Équipements et matériels nécessaires à l'analyse

5.1 Spectrophotomètre à balayage vertical, qui permet de mesurer la densité optique de solutions dans les puits de la plaque à une longueur d'onde de 450 nm ;

Laveuse de plaques semi ou automatique (laveuse);

Thermostat à air sec de type ТС-80 М2, maintien en température (37 ± 1) ° С, ou caractéristiques similaires ;

Pipettes automatiques monocanal avec embouts remplaçables, permettant de prélever des volumes de liquide de 0,01 à 5,0 ml ;

Pipettes 8 canaux automatiques avec embouts remplaçables, permettant de prélever des volumes de liquide jusqu'à 0,5 ml ;

Éprouvette graduée d'une capacité de 2000 ml;

Flacon de laboratoire d'une capacité de 2000 ml;

Flacons en verre d'une capacité de 20 ml;

Plateaux de réactifs ou boîtes de Pétri (diamètre 100 mm) ;

Coton médical hygroscopique;

Papier filtre;

Gants chirurgicaux en caoutchouc;

Une solution avec une fraction volumique d'alcool éthylique de 70 % ;

Une solution avec une fraction massique de peroxyde d'hydrogène à 6 % ;

Eau déminéralisée ou distillée ;

Conteneur de collecte des déchets solides ;

Conteneur pour vidanger les déchets liquides.

6 Préparation à l'analyse

6.1 Avant l'analyse, retirez le kit de réactifs du réfrigérateur, ouvrez le couvercle de la boîte et maintenez les composants du kit à une température (18-25) ° С pendant 30 min.

Mélanger soigneusement tous les échantillons de sérum (plasma) et les réactifs avant l'analyse.

La consommation de réactifs pour l'ensemble de tests, qui est déterminée par le nombre de bandelettes utilisées, est indiquée dans le tableau A.1 de l'annexe A.

6.2 Préparation de la solution de lavage de plaques

Attention! Préparez la solution de lavage des plaques 15 minutes avant le début du test !

Si une bouteille avec FSB-T × 25 contient un précipité, elle doit être réchauffée avant utilisation à une température de (37 ± 1) ° С jusqu'à ce que le précipité soit complètement dissous. Dans une éprouvette d'une capacité de 2000 ml, ajouter le contenu d'une bouteille avec FSB-T × 25, puis ajouter de l'eau distillée jusqu'au trait 1250 ml et mélanger doucement la solution. La solution peut être conservée à une température de (2-8)°C pendant 72 heures.

Si une ou plusieurs barrettes sont utilisées, agiter vigoureusement le contenu du flacon de FSB-T × 25 pendant (20-30) s, prélever le volume de solution requis (tableau A.1) dans un bécher ou un cylindre gradué, ajouter le quantité requise d'eau distillée et agiter la solution ... Le FSB-T × 25 non utilisé peut être conservé dans un flacon fermé à une température de (2-8) ° C pendant la durée de conservation du kit.

6.3 Préparation de l'immunosorbant

L'immunosorbant est prêt à l'emploi.

Ouvrez l'emballage et installez le nombre requis de bandes sur le cadre. Conserver les bandelettes restantes dans un sac hermétiquement fermé avec un dessiccateur à (2-8)°C pendant 3 mois.

6.4 Préparation de K + AT, K -, RK-1, RR-K2, BRS et réactif d'arrêt

K + AT, K -, RK-1, PP-K2, BRS et le réactif d'arrêt sont prêts à l'emploi.

Attention! Dans une bouteille avec RK-1, la précipitation est possible. Un surnageant doit être utilisé pour l'analyse.

Les réactifs RK-1, RR-K2, BRS et stop non utilisés, après ouverture des flacons, peuvent être conservés dans des flacons fermés à une température de (2-8)°C pendant la durée de conservation du kit.

Le reste de K + AT et K - après ouverture du flacon, peut être conservé dans des flacons fermés à une température de (2-8)°C pendant la durée de conservation du kit.

6.5 Préparation de la solution K + AG

Attention! Préparez la solution K + AG 15 minutes avant le début de l'analyse !

Pour restaurer le K + AG lyophilisé, avant d'ouvrir le flacon, tapotez doucement pour secouer les particules adhérant aux parois du flacon ou du bouchon. Ouvrez le flacon et placez le bouchon à l'envers sur une surface sèche. Ajouter 0,8 ml d'eau distillée dans la bouteille. Fermer le flacon avec un bouchon, incuber 10 minutes à une température de (18-25)°С et incliner et tourner doucement le flacon, mélanger son contenu jusqu'à dissolution complète, en évitant la formation de mousse.

Le K+AG reconstitué peut être conservé en flacon fermé à une température de (2-8)°C pendant un mois, à une température de moins 20°C pendant six mois. La congélation-décongélation unique du K + AG récupéré est autorisée.

6.6 Préparation de la solution Kg-2 en dilution de travail

Prendre le volume indiqué dans le tableau A.1 de la bouteille avec Kg-2 et le transférer dans la bouteille avec PP-K2. Bien mélanger le contenu du flacon en évitant la formation de mousse.

Si une ou plusieurs bandelettes sont utilisées, prélever la quantité requise de PP-K2 dans un flacon propre, ajouter Kg-2 conformément au Tableau A.1 et mélanger la solution en évitant la formation de mousse.

Attention! Une solution de Kg-2 en dilution de travail est préparée immédiatement avant utilisation ! Une solution de Kg-2 en dilution de travail peut être conservée 15 minutes à une température de (18-25)°C. Utilisez uniquement un nouveau bain de réactif et de nouvelles pointes !

Le reste de Kg-2 peut être conservé dans un flacon fermé à une température de (2-8)°C pendant la durée de conservation du kit.

6.7 Préparation de la solution de travail du substrat

Le flacon contenant le chromogène TMB doit être réchauffé avant utilisation à une température de (37 ± 1)° De jusqu'à ce que les cristaux soient complètement dissous.

Prélever le volume indiqué dans le tableau A.1 du flacon avec le chromogène TMB et le transférer dans le flacon avec le BRS. Bien mélanger le contenu du flacon en évitant la formation de mousse.

Si une ou plusieurs barrettes sont utilisées, prélever la quantité requise de BRS dans un flacon propre, ajouter le chromogène TMB conformément au Tableau A.1 et mélanger la solution en évitant la formation de mousse.

Attention! Préparez la solution de travail du substrat immédiatement avant utilisation dans un endroit sombre ! La solution peut être conservée pendant 20 minutes à une température de (18-25)°C dans un endroit sombre.

La solution doit être protégée de la lumière et du contact avec des métaux ou des ions métalliques. La solution de substrat doit être incolore avant utilisation. Les plats qui entreront en contact avec la solution de substrat pendant la réaction doivent être lavés sans utiliser de détergents synthétiques. Utilisez uniquement un nouveau bain de réactif et de nouvelles pointes !

Le reste du chromogène TMB peut être conservé dans un flacon fermé à une température de (2-8)°C pendant la durée de conservation du kit.

7 Exigences pour le rinçage des plaques

A toutes les étapes du lavage, il est nécessaire de contrôler le remplissage de tous les puits et l'élimination complète (aspiration) du liquide de ceux-ci;

Il est nécessaire de remplir tous les puits avec une solution à ras bord à chaque lavage (0,30-0,35 ml par puits), sans débordement ni débordement de liquide des puits adjacents ;

Il est nécessaire d'incuber les puits remplis de la solution de lavage des plaques pendant 30 s ;

A chaque aspiration, retirer délicatement le liquide restant des puits en tapotant le cadre avec des bandes en position inversée sur le papier filtre plié plusieurs fois, posé sur une feuille de polyéthylène ;

Un mauvais rinçage des plaques entraînera des résultats incorrects.

8 Analyse

8.1 Ajouter à deux puits quelconques de la plaque 0,07 ml(70 ul) K + AT, dans les deux autres trous - chacun 0,07 ml(70 ul) K + AG, dans les trois autres trous - chacun 0,07 ml(70 ul) À - .

Attention! Lors du réglage ELISA sur une bande, il est permis d'utiliser deux trous pour K -, un puits pour K + AT et un puits pour K + AG.

Ajouter aux puits restants de la plaque 0,07 ml(70 l) des échantillons étudiés de sérum humain (plasma).

Attention! Chaque échantillon doit être prélevé avec un embout jetable !

8.2 Dans tous les puits de la plaque au-dessus des échantillons de contrôle et des échantillons de sang de sérum (plasma) étudiés tout de suite dépôt par 0,05 ml(50 ul) RC-1... Mélanger le contenu des puits en tapotant doucement les bords de la plaque.

8.3 (37 ± 1) ° De l'Intérieur 60 minutes.

Attention!(1-2) minutes avant la fin de l'incubation, préparer une solution Kg-2 dans une dilution de travail (section 6.6).

8.4 Retirer le contenu des puits à l'aide d'un laveur, puis rincer les puits de la plaque avec une solution de lavage de la plaque (section 6.2) Sept fois.

8.5 Ajouter à tous les puits de la plaque en 0,15 ml(150 l) de solution Kg-2 en dilution de travail (p 6.6).

8.6 Couvrir la plaque avec du papier d'aluminium ou couvrir avec un couvercle et incuber dans un thermostat à une température (37 ± 1) ° De l'Intérieur 10 minutes.

8.7 Retirer le contenu des puits des plaques à l'aide d'un laveur, puis rincer les puits des plaques avec une solution de lavage des plaques (section 6.2) Sept fois.

8.8 Ajouter à tous les puits de la plaque 0,15 ml(150 l) solution de travail du substrat(article 6.7).

Lors de la préparation de la solution de travail du substrat (clause 6.7) F la laque avec le chromogène TMB doit être réchauffée avant utilisation pendant (3-5) minutes à une température de (37± 1)°C jusqu'à dissolution complète des cristaux.

8.9 Couvrir la plaque avec du papier d'aluminium ou couvrir avec un couvercle et incuber dans un thermostat à une température (37 ± 1) ° AVEC dans un endroit sombre pour 15 minutes.

Attention! Après incubation dans les puits avec des échantillons de sérum contenant des anticorps contre le VIH-1 et/ou le VIH-2, et/ou l'antigène p24 du VIH-1, la couleur de la solution passera de l'incolore au bleu avec une intensité variable selon la concentration d'anticorps et/ou l'antigène dans l'échantillon de sérum à tester.

8.10 Arrêter la réaction de la peroxydase en ajoutant à tous les puits 0,05 ml(50 ul) arrêter le réactif.

Attention! Dans les puits avec des échantillons de sérum contenant des anticorps anti-VIH-1 et/ou VIH-2, et/ou l'antigène p24 du VIH-1, la couleur de la solution passera du bleu au jaune d'intensité variable.

8.11 Au plus tard (1-2) minutes après l'arrêt de la réaction, déterminer la DO dans les puits dans un mode de longueur d'onde unique à une longueur d'onde 450 nm.

9 Traitement des résultats d'analyse

9.2 Ne considérez les résultats que si :

La valeur de Opsr K - ne dépasse pas 0,2 OE;

Chaque valeur individuelle de OD K - ne doit pas s'écarter de ODsr K - de plus de 30 %. Si l'une des trois valeurs de OP K - dépasse cette limite, elle doit être exclue du calcul de OPsr K -. Si deux des trois valeurs de DO K - dépassent cette limite, l'analyse doit être répétée sur les réactifs du nouveau kit ;

La valeur de Opsr K + AT est supérieure à 1,0 OE;

La valeur de Opsr K + AG est supérieure à 1,0 OU.

9.3 Si les conditions ci-dessus sont remplies, calculer la valeur critique (OPcrit.), OE, selon la formule (1) :

OPcrit. = OPsr K - + 0,14 (1).

10 Performances analytiques et diagnostiques

Sensibilité kit de réactifs ELISA-VIH 1,2 AGAT pour la détection de l'antigène p24 HIV-1 -

Spécificité kit de réactifs ELISA-VIH 1,2 AGAT- 100 % AT standard (-) VIH. Panel standard de sérums ne contenant pas d'anticorps dirigés contre le virus de l'immunodéficience humaine de types 1 et 2 (VIH-1,2) et l'antigène VIH-1 (p24) .ОСО42-28-214-02P.Kat # INS-20. CJSC MBS.

11 Formulaire de libération du kit

11.1 L'ensemble est disponible en cinq options de configuration :

1 jeu de 1P - analyse manuelle. Le kit est conçu pour 12 analyses ELISA sur une plaque pliable : 1 jeu - 1 bande (8 trous). Au total - 96 déterminations, y compris les échantillons de contrôle ;

2 set 2M - analyse manuelle. Le kit est conçu pour réaliser 2 séries d'ELISA sur plaques monolithiques : 1 pose - 1 plaque. Au total - 192 déterminations, y compris les échantillons de contrôle ;

3 ensemble 2P- effectuer l'analyse à la main. L'ensemble est conçu pour transporter 24 représentations ELISA pour 2 pliant x plaques : 1 jeu - 1 bande (8 trous). Le total - 192 définitions y compris les échantillons de contrôle ;

4 set А2М - analyse sur un analyseur automatique. Le kit est conçu pour réaliser 2 séries d'ELISA sur plaques monolithiques : 1 pose - 1 plaque. Au total - 192 déterminations, y compris les échantillons de contrôle ;

5 set A2P - analyse sur un analyseur automatique. Le kit est conçu pour 24 analyses ELISA sur 2 plaques pliables : 1 set - 1 barrette (8 puits). Au total - 192 déterminations, y compris les échantillons de contrôle.

12 Conditions de stockage et d'utilisation du kit

12.1 Le kit doit être conservé dans une salle blanche à l'abri de l'humidité et de la lumière à une température de (2-8)°C pendant toute la durée de conservation. Ne pas congeler les composants du kit.

12.2 Pour obtenir des résultats fiables, le strict respect du mode d'emploi du kit est requis.

12.3 La date de péremption du kit est 12 mois.

Annexe A

Tableau A.1 - Consommation de réactifs pour le kit ELISA

réactif, ml

Nombre de bandes utilisées, pcs.

Préparation de la solution de lavage des plaques

FSB-T × 25

Distillé

l'eau

Préparation de la solution Kg-2 en dilution de travail

RR-K2

Préparation de la solution de travail du substrat

Chromogène TMB

Bibliographie

	Règles sanitaires	Arrêté du ministère de la Santé de la République du Bélarus du 16 décembre 1998 n° 351 Sur la révision des règlements départementaux régissant les questions liées au VIH/SIDA
	Arrêté du ministère de la Santé de la République du Bélarus du 25 novembre 2002 n° 165 À propos de la désinfection et de la stérilisation par les établissements de santé
	Résolution du ministère de la Santé de la République du Bélarus du 28 avril 2010 n° 47 Sur l'approbation de l'Instruction sur la procédure d'examen médical obligatoire des travailleurs et l'invalidation de certains décrets du ministère de la Santé de la République du Bélarus

Numéro d'inscription unique au registre

Numéro d'enregistrement du dispositif médical

RSF 2011/10182

Date d'enregistrement par l'État d'un dispositif médical

Nom du dispositif médical

Un ensemble de réactifs "MilaLab-ELISA-HIV-AGAT" dosage immuno-enzymatique pour la détection des anticorps contre les virus de l'immunodéficience humaine de types 1 et 2 (VIH-1 et VIH-2), VIH-1 groupe O et VIH-1 p24 antigène selon TU 9398 -187-05941003-2017
composé de : - Immunosorbant - une plaque pliable 96 puits en polystyrène à barrettes (ou à puits), dans les puits de laquelle sont sorbés des antigènes artificiels - gp160, gp41, p31 VIH-1, gp41 VIH-1 groupe O, gp36 VIH- 2 et anticorps contre l'antigène p24 HIV-1 : set 1 (1 plaque), set 2 (2 plaques), set 3 (5 plaques), - Conjugué-1 : set 1 (1 fl. 1,2 ml), set 2 (1 fl. 1,2 ml), set 3 (1 flacon de 3,6 ml ou 3 flacons de 1,2 ml), - Conjugué-2 : set 1 (1 flacon de 2,0 ml), set 2 (1 flacon de 2,0 ml), set 3 (1 flacon 4,0 ml ou 2 flacons de 2,0 ml), - RRK-1 - solution de dilution pour conjugué-1 : set 1 (1 flacon 12,0 ml), set 2 (1 flacon 12,0 ml), set 3 (3 flacons de 12,0 ml chacun) , - RRK-2 - solution de dilution pour conjugué-2 : set 1 (1 flacon 20,0 ml), kit 2 (1 flacon 20,0 ml), kit 3 (2 flacons de 20,0 ml), - K + AT - échantillon contrôle positif contenant anticorps anti-VIH : kit 1 (1 flacon 2,0 ml), set 2 (1 flacon 2,0 ml), set 3 (1 flacon 4,0 ml ou 2 flacons de 2,0 ml), - K + AG - con Échantillon Troll positif contenant l'antigène p24 artificiel du VIH-1 : ensemble 1 (1 flacon. 2,0 ml), set 2 (1 flacon de 2,0 ml), set 3 (1 flacon de 4,0 ml ou 2 flacons de 2,0 ml chacun), - К- - échantillon négatif de contrôle : set 1 (1 flacon de 2,5 ml), set 2 (1 flacon 2,5 ml), set 3 (1 flacon de 5,0 ml ou 2 flacons de 2,5 ml), - PR - solution de lavage : set 1 (1 flacon de 50,0 ml), set 2 (1 flacon de 120,0 ml), set 3 (2 flacons de 120,0 ml) ml), - Stop réactif : set 1 (1 flacon 25,0 ml), set 2 (2 flacons de 25,0 ml), set 3 (2 flacons de 50,0 ml ou 4 flacons de 25,0 ml), - SB - solution tampon substrat : set 1 (1 flacon 25 , 0 ml), set 2 (1 flacon 25,0 ml), set 3 (2 flacons de 50,0 ml ou 3 flacons de 25,0 ml), - TMB - solution contenant 3,3", 5,5" -tétraméthylbenzidine : kit 1 (1 flacon de 2,5 ml), kit 2 (1 flacon de 2,5 ml), kit 3 (2 flacons de 3,5 ml ou 3 flacons de 2,5 ml). Accessoires : - couvercles pour plaques 96 puits en polystyrène : set 1 (1 pc.), Set 2 (2 pcs.), Set 3 (5 pcs.) Ou - films protecteurs pour plaques ELISA : set 1 (2 pcs.) , set 2 (4 pcs.), set 3 (10 pcs.), - embouts jetables : set 1 (16 pcs.), set 2 (32 pcs.), set 3 (80 pcs.), - plateaux en plastique pour réactifs liquides : set 1 (2 pcs.), set 2 (4 pcs.), set 3 (10 pcs.), - sachets en plastique avec Zip-Lock : set 1 (1 pc.), set 2 (2 pcs.) , set 3 (3 pièces).

Nom de l'organisation - le demandeur du dispositif médical

Localisation de l'organisme demandeur du dispositif médical

Adresse légale de l'organisme demandeur du dispositif médical

603014, Russie, Nijni Novgorod, st. Komintern, 47

Nom du fabricant du dispositif médical ou du fabricant du dispositif médical

LLC "NPO" Systèmes de diagnostic "

Localisation de l'organisation-fabricant d'un dispositif médical ou organisation - fabricant d'un dispositif médical

603093, Russie, Nijni Novgorod, st. Yabloneva, 22 ans, case postale 69

Adresse légale d'un fabricant de dispositifs médicaux ou d'un fabricant de dispositifs médicaux

Le diagnostic opportun de l'infection par le VIH devient une mesure extrêmement importante, étant donné que l'initiation précoce du traitement peut largement prédéterminer le développement ultérieur de la maladie et prolonger la vie du patient. Ces dernières années, des progrès significatifs ont été réalisés dans la détection de cette terrible maladie : les anciens systèmes de test sont remplacés par des systèmes plus avancés, les méthodes d'examen deviennent plus accessibles et leur précision augmente considérablement.

Dans cet article, nous parlerons des méthodes modernes de diagnostic de l'infection par le VIH, qu'il est utile de connaître pour le traitement rapide de ce problème et le maintien de la qualité de vie normale de la personne malade.

Techniques de diagnostic du VIH

En Russie, pour le diagnostic de l'infection par le VIH, une procédure standard est effectuée, qui comprend deux niveaux:

Système de test ELISA (analyse de dépistage);
immunoblot (IB).

En outre, d'autres méthodes peuvent être utilisées pour le diagnostic :

épreuves expresses.

Systèmes de test ELISA

Au premier stade du diagnostic, un test de dépistage (ELISA) est utilisé pour détecter l'infection par le VIH, qui est basé sur des protéines du VIH créées en laboratoire qui capturent des anticorps spécifiques produits dans le corps en réponse à l'infection. Après leur interaction avec les réactifs (enzymes) du système de test, la couleur de l'indicateur change. De plus, ces changements de couleur sont traités sur un équipement spécial, qui détermine le résultat de l'analyse effectuée.

De tels tests ELISA sont capables de montrer des résultats quelques semaines après l'introduction de l'infection par le VIH. Cette analyse ne détecte pas la présence d'un virus, mais détecte la production d'anticorps contre celui-ci. Parfois, dans le corps humain, la production d'anticorps anti-VIH commence 2 semaines après l'infection, mais chez la plupart des gens, ils se développent plus tard, après 3 à 6 semaines.

Il existe quatre générations de tests ELISA avec une sensibilité variable. Ces dernières années, les systèmes de test des générations III et IV, qui sont créés sur la base de peptides synthétiques ou de protéines recombinantes et ont une plus grande spécificité et précision, ont été utilisés plus souvent. Ils peuvent être utilisés pour diagnostiquer l'infection à VIH, surveiller la prévalence du VIH et assurer la sécurité lors du dépistage du sang donné. La précision des systèmes de test ELISA des générations III et IV est de 93 à 99 % (les tests les plus sensibles produits en Europe occidentale sont de 99 %).

Pour effectuer le test ELISA, 5 ml de sang sont prélevés dans la veine du patient. Au moins 8 heures doivent s'écouler entre le dernier repas et le test (généralement effectué le matin à jeun). Il est recommandé de passer un tel test au plus tôt 3 semaines après l'infection présumée (par exemple, après un rapport sexuel non protégé avec un nouveau partenaire sexuel).

Les résultats du test ELISA sont obtenus en 2 à 10 jours :

résultat négatif : indique l'absence d'infection par le VIH et ne nécessite pas de visite chez un spécialiste ;
résultat faussement négatif: il peut être observé aux premiers stades de l'infection (jusqu'à 3 semaines), aux derniers stades du SIDA, avec une suppression prononcée de l'immunité et une mauvaise préparation du sang;
résultat faux positif : il peut être observé avec certaines maladies et avec une préparation sanguine mal effectuée ;
résultat positif : indique une infection par le VIH, nécessite une IB et l'orientation du patient vers un spécialiste du centre de lutte contre le sida.

Pourquoi un test ELISA peut-il donner des résultats faussement positifs ?

Des résultats faussement positifs d'un test ELISA pour le VIH peuvent être observés lors d'un traitement sanguin inapproprié ou chez des patients présentant les affections et maladies suivantes :

le myélome multiple;
les maladies infectieuses provoquées par le virus d'Epstein-Barr ;
état après;
maladies auto-immunes;
dans le contexte de la grossesse;
état après la vaccination.

Pour les raisons décrites ci-dessus, des anticorps à réaction croisée non spécifiques peuvent être présents dans le sang, dont la production n'a pas été déclenchée par l'infection par le VIH.

Ces dernières années, la fréquence des résultats faussement positifs a considérablement diminué en raison de l'utilisation de systèmes de test de troisième et quatrième génération, qui contiennent des peptides et des protéines recombinantes plus sensibles (ils sont synthétisés par génie génétique in vitro). Après le début de l'utilisation de ces tests ELISA, la fréquence des résultats faussement positifs a considérablement diminué et est d'environ 0,02 à 0,5 %.

Trouver un faux positif ne signifie pas qu'une personne est infectée par le VIH. Dans de tels cas, l'OMS recommande un autre test ELISA (génération IV obligatoire).

Le sang du patient est envoyé à un laboratoire de référence ou d'arbitrage marqué « repeat » et testé sur un système de test ELISA de génération IV. Si le résultat de la nouvelle analyse est négatif, alors le premier résultat est reconnu comme erroné (faux positif) et IB n'est pas effectué. En cas de résultat positif ou douteux lors du deuxième test, le patient doit se voir attribuer un IB après 4 à 6 semaines pour confirmer ou infirmer l'infection par le VIH.

Buvard immunitaire

Un diagnostic définitif d'infection par le VIH ne peut être posé qu'après l'obtention d'un résultat positif d'immunotransfert (IB). Pour sa mise en œuvre, une bandelette de nitrocellulose est utilisée, sur laquelle sont appliquées des protéines virales.

Le prélèvement sanguin pour IB est effectué à partir d'une veine. Ensuite, il subit un traitement spécial et les protéines contenues dans son sérum sont séparées dans un gel spécial en fonction de leur charge et de leur poids moléculaire (la manipulation est effectuée sur un équipement spécial sous l'influence d'un champ électrique). Une bande de nitrocellulose est appliquée sur le gel de sérum sanguin et un buvardage ("blotting") est effectué dans une chambre spéciale. La bandelette est traitée et s'il y a des anticorps anti-VIH dans les matériaux utilisés, ils se lient aux bandes antigéniques sur IB et apparaissent sous forme de lignes.

IB est considéré comme positif si :

selon les critères américains du CDC - il y a deux ou trois lignes gp41, p24, gp120 / gp160 sur la bande;
selon les critères de la FDA américaine - sur la bande il y a deux lignes p24, p31 et une ligne gp41 ou gp120/gp160.

Dans 99,9% des cas, un résultat IB positif indique une infection par le VIH.

En l'absence de lignes, IB est négatif.

L'identification des lignées avec gp160, gp120 et gp41-IB est douteuse. Un tel résultat peut être détecté lorsque :

maladies oncologiques;
grossesse;
transfusions sanguines fréquentes.

Dans de tels cas, il est recommandé d'effectuer un réexamen à l'aide d'un kit d'une autre société. Si, après IB complémentaire, le résultat reste douteux, alors une observation est nécessaire pendant six mois (IB est réalisée tous les 3 mois).

Réaction en chaîne par polymérase

Le test PCR permet de détecter l'ARN du virus. Sa sensibilité est assez élevée et il permet de détecter l'infection par le VIH dès 10 jours après l'infection. Dans certains cas, la PCR peut donner des résultats faussement positifs, car sa haute sensibilité peut également réagir aux anticorps dirigés contre d'autres infections.

Cette technique de diagnostic est coûteuse et nécessite un équipement spécial et des spécialistes hautement qualifiés. Ces raisons ne permettent pas de le réaliser lors de tests de masse de la population.

La PCR est utilisée dans les cas suivants :

détecter le VIH chez les nouveau-nés nés de mères infectées par le VIH ;
pour détecter le VIH dans la « fenêtre sérologique » ou en cas de BI douteux ;
contrôler la concentration du VIH dans le sang;
pour l'étude du sang des donneurs.

Ce n'est que par le test PCR que le VIH n'est pas diagnostiqué, mais est effectué comme méthode de diagnostic supplémentaire pour résoudre des situations controversées.

Méthodes express

L'une des innovations dans le diagnostic du VIH est devenue les tests rapides, dont les résultats peuvent être évalués en 10 à 15 minutes. Les résultats les plus efficaces et les plus précis sont obtenus en utilisant des tests immunochromatographiques basés sur le principe du flux capillaire. Ce sont des bandes spéciales sur lesquelles du sang ou d'autres liquides étudiés (salive, urine) sont appliqués. En présence d'anticorps anti-VIH, après 10-15 minutes, une bande colorée et de contrôle apparaît sur le test - un résultat positif. Si le résultat est négatif, seule la bande de contrôle apparaît.

Comme après les tests ELISA, les résultats des tests rapides doivent être confirmés par une analyse IB. Ce n'est qu'alors qu'un diagnostic d'infection à VIH peut être posé.

Il existe des kits express pour les tests à domicile. Le test OraSure Technologies1 (USA) est approuvé par la FDA, vendu sans ordonnance et peut être utilisé pour détecter le VIH. Après le test, en cas de résultat positif, il est recommandé au patient de se soumettre à un examen dans un centre spécialisé pour confirmer le diagnostic.

Le reste des tests à usage domestique n'a pas encore été approuvé par la FDA et peut être très discutable.

Malgré le fait que les tests rapides sont inférieurs en précision aux tests ELISA de génération IV, ils sont largement utilisés pour des tests supplémentaires de la population.

Vous pouvez passer des tests pour détecter l'infection par le VIH dans n'importe quelle clinique, hôpital de district central ou dans des centres spécialisés dans le sida. Sur le territoire de la Russie, elles sont détenues de manière absolument confidentielle ou anonyme. Chaque patient peut s'attendre à recevoir des conseils médicaux ou psychologiques avant ou après le test. Vous devrez payer pour les tests de dépistage du VIH uniquement dans les hôpitaux commerciaux, et dans les polycliniques et les hôpitaux publics, ils sont effectués gratuitement.

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