Taninai (taninai) yra augalų didelės molekulinės masės fenolio junginiai, galintys nusodinti baltymus ir turėti sutraukiantį skonį.

Terminas „taninai“ susiformavo istoriškai dėl šių junginių gebėjimo žaliavinius gyvūnų kailius paversti patvaria oda, atsparia drėgmei ir mikroorganizmams. Vartoti šį terminą, kurį 1796 m. Seguinas oficialiai pasiūlė, tam tikrų augalų ekstraktuose esančias medžiagas, galinčias atlikti rauginimo procesą.

Įdegis yra sudėtinga cheminė tanidų sąveika su kolageno molekulėmis – pagrindiniu jungiamojo audinio baltymu. Įdegio savybes turi daugiabranduoliniai fenoliai, kurių molekulėje yra daugiau nei vienas hidroksilas. Esant plokščiam tanidų išdėstymui ant baltymo molekulės, tarp jų susidaro stabilios vandenilio jungtys:

Baltymų molekulės fragmentas Tanido molekulės fragmentas

Tannido ir baltymų sąveikos stiprumas priklauso nuo vandenilio jungčių skaičiaus ir yra ribojamas polifenolinio junginio molekulės dydžio. Taninų molekulinė masė gali siekti iki 20 000. Tuo pačiu metu taniduose 100 molekulinės masės vienetų yra 1-2 fenolio hidroksigrupės. Todėl susidaro daug vandenilinių jungčių, o rauginimo procesas yra negrįžtamas. Hidrofobiniai radikalai, orientuoti į išorinę aplinką, daro odą neprieinamą drėgmei ir mikroorganizmams.

Ne visi taninai gali iš tikrųjų įdegti. Šia savybe išsiskiria junginiai, kurių molekulinė masė yra 1000 ar daugiau. Polifenoliniai junginiai, kurių masė mažesnė nei 1000, nesugeba rauginti odos ir turi tik sutraukiantį poveikį.

Taninai plačiai naudojami pramonėje. Pakanka pasakyti, kad pasaulyje taninų gamyba viršija 1 500 000 tonų per metus, o augalinių tanidų dalis sudaro iki 50-60% visos.

Paplitimas augalų pasaulyje ir taninų vaidmuo augaluose. Taninų gausiai randama dengtųjų ir gimnasėklių atstovuose, dumbliuose, grybuose, kerpėse, limfoiduose ir paparčiuose. Jų randama daugelyje aukštesnių augalų, ypač dviskilčiuose. Didžiausias jų skaičius aptiktas daugelyje Fabaceae, Myrtaceae, Rosaceae, Anacardiaceae, Fagaceae, Polygonaceae šeimų atstovų.

Taninai augale yra ląstelių vakuolėse ir ląstelėms senstant adsorbuojami ant ląstelių sienelių. Jie dideliais kiekiais kaupiasi požeminiuose organuose, žievėje, bet gali būti lapuose ir vaisiuose.

Taninai augaluose atlieka daugiausia apsaugines funkcijas. Mechaniškai pažeidus audinius, prasideda intensyvesnis taninų susidarymas, lydimas jų oksidacinio kondensacijos paviršiniuose sluoksniuose, taip apsaugant augalą nuo tolesnio pažeidimo ir neigiamo patogenų poveikio. Dėl didelio fenolio hidroksilų kiekio taninai pasižymi ryškiomis bakteriostatinėmis ir fungicidinėmis savybėmis, taip apsaugodami augalų organizmus nuo įvairių ligų.

Taninų klasifikacija. 1894 m. G. Procteris, tirdamas taninų pirolizės galutinius produktus, atrado 2 junginių grupes - pirogalinį (susidaro pirogalolis) ir pirokatecholį (irimo metu susidaro pirokatecholis):

K. Freudenbergas 1933 metais patikslino G. Procterio klasifikaciją. Jis, kaip ir Procter, klasifikavo taninus pagal galutinius jų skilimo produktus, bet ne pirolizės sąlygomis, o rūgštinės hidrolizės būdu. Priklausomai nuo gebėjimo hidrolizuotis, K. Freudenbergas pasiūlė išskirti dvi taninų grupes: hidrolizuojamas ir kondensuotas.Šiuo metu dažniau naudojama K. Freudenbergo klasifikacija.

Į grupę hidrolizuojami taninai Junginiai sudaromi pagal esterių tipą ir rūgščių hidrolizės metu suyra į jų sudedamąsias dalis. Centrinė grandis dažniausiai yra gliukozė, rečiau kiti cukrūs arba alicikliniai junginiai (pavyzdžiui, chinino rūgštis). Centrinės liekanos alkoholiniai hidroksilai gali būti susieti eterio jungtimi su galo rūgštimi, taip sudarydami grupę galotaninai, arba ellaginė rūgštis, sudaranti grupę ellagitanninai.

Gallotaninai- galo rūgšties esteriai, dažniausiai randami hidrolizuojamų taninų grupėje. Yra mono-, di-, tri-, tetra-, penta- ir polihalogeniniai eteriai. Monogalloilo eterių atstovas yra b-D-gliukogalinas:

Polihaloilo eterių pavyzdys yra kiniškas taninas, kurio struktūrą 1963 m. pirmą kartą nustatė Hawors:

Ellagitanninai yra cukraus ir ellaginės rūgšties esteriai arba jų dariniai. Elago rūgštis susidaro oksiduojant dvi galo rūgšties molekules į heksaoksidifeno rūgštį, kuri iš karto sudaro laktoną - ellago rūgštį:

Kaip ir ankstesniu atveju, gliukozė dažniausiai yra ellagitanninų cukraus komponentas.

Galo rūgšties esteriai be cukraus yra galo rūgšties esteriai ir necukrinis komponentas, pvz., chino rūgštis, hidroksicinamono rūgštis ir kt. Šios medžiagų grupės pavyzdys yra 3,4,5-trihalogenilchino rūgštis.

Kondensuoti taninai skiriasi nuo hidrolizuojamųjų tuo, kad rūgštinės hidrolizės metu jie nesuyra į savo sudedamąsias dalis, o priešingai, veikiant mineralinėms rūgštims, susidaro tankūs raudonai rudi polimerizacijos produktai - flobafenai.

Kondensuotus taninus daugiausia sudaro katechinai ir leukocianidinai, o daug rečiau – kitos redukuotos flavonoidų formos. Kondensuoti taninai nepriklauso „glikozidų“ grupei: kondensuotuose taninuose nėra cukraus komponento.

Kondensuotų taninų susidarymas gali vykti dviem būdais. K. Freudenbergas (XX a. 30-ieji) nustatė, kad kondensuotų taninų susidarymas yra nefermentinis katechinų arba leukocianidinų autokondensacijos (arba jų kryžminės kondensacijos) procesas, atsirandantis dėl atmosferos deguonies, šilumos ir rūgščios aplinkos poveikio. . Autokondensaciją lydi katechinų pirano žiedo plyšimas ir vienos molekulės C-2 anglies atomas susijungia anglies-anglies ryšiu su kitos molekulės C-6 arba C-8 anglies atomu. Tokiu atveju gali susidaryti pakankamai ilga grandinė:

Kito mokslininko D. Hatuei teigimu, kondensuoti taninai gali susidaryti vykstant fermentiniam oksidaciniam molekulių kondensavimuisi „nuo galvos iki uodegos“ (žiedas A iki žiedo B) arba „uodega iki uodegos“ (žiedas B iki uodegos). žiedas B):

Augalai, kuriuose yra kondensuotų taninų, turi turėti savo pirmtakus – laisvus katechinus arba leukocianidinus. Įprasti mišrūs kondensuoti katechinų ir leukocianidinų polimerai.

Paprastai augaluose vienu metu yra ir kondensuotų, ir hidrolizuojamų grupių taninų.

Taninų fizikinės ir cheminės savybės. Taninai išsiskiria didele molekuline mase – iki 20 000. Natūralūs taninai, su keliomis išimtimis, iki šiol žinomi tik amorfinės būsenos. Taip yra todėl, kad šios medžiagos yra junginių mišiniai, kurių cheminė struktūra yra panaši, bet skiriasi molekuline mase.

Taninai yra geltoni arba rudi junginiai, kurie sudaro koloidinius tirpalus vandenyje. Tirpus etanolyje, acetone, butanolyje ir netirpus tirpikliuose, turinčiuose ryškų hidrofobiškumą – chloroforme, benzene ir kt.

Galotaninai blogai tirpsta šaltame vandenyje ir gana gerai tirpsta karštame vandenyje.

Taninai pasižymi optiniu aktyvumu ir lengvai oksiduojasi ore.

Dėl fenolio hidroksilų jie nusėda su sunkiųjų metalų druskomis ir sudaro spalvotus junginius su Fe +3.

Taninų išskyrimas iš augalinių medžiagų. Kadangi taninai yra įvairių polifenolių mišinys, jų išskyrimas ir analizė kelia tam tikrų sunkumų.

Dažnai, norint gauti bendrą taninų kiekį, žaliavos ekstrahuojamos karštu vandeniu (taninai blogai tirpsta šaltame vandenyje), o atvėsęs ekstraktas apdorojamas organiniu tirpikliu (chloroformu, benzenu ir kt.), kad būtų pašalintos lipofilinės medžiagos. Tada taninai nusodinami sunkiųjų metalų druskomis, po to kompleksas sunaikinamas sieros rūgštimi arba sulfidais.

Norėdami gauti taninų frakciją, panašią į cheminę struktūrą, galite naudoti žaliavų ekstrahavimą dietilo eteriu, metilo arba etilo alkoholiais, iš anksto pašalindami lipofilinius komponentus, naudodami tirpiklius, turinčius ryškų hidrofobiškumą - petroleterio eterį, benzeną, chloroformą.

Kai kurių taninų komponentų išskyrimas nusodinant iš vandeninių arba vandeninių-alkoholinių tirpalų su švino druskomis yra plačiai paplitęs. Po to susidariusios nuosėdos apdorojamos praskiesta sieros rūgštimi.

Išskiriant atskirus taninų komponentus, naudojami chromatografiniai metodai: adsorbcinė chromatografija ant celiuliozės, poliamido; jonų mainai ant įvairių katijonų keitiklių; paskirstymas ant silikagelio; Gelio filtravimas ant molekulinių sietų.

Atskirų taninų komponentų identifikavimas atliekamas naudojant chromatografiją ant popieriaus arba ploname sorbento sluoksnyje, naudojant spektrinę analizę, kokybines reakcijas ir skilimo produktų tyrimą.

Kokybinė taninų analizė. Kokybines reakcijas į taninus galima suskirstyti į dvi grupes: kritulių reakcijas ir spalvos reakcijas. Norint atlikti kokybiškas reakcijas, žaliavos dažniausiai išgaunamos karštu vandeniu.

Kritulių reakcijos. 1. Taninams sąveikaujant su 1 % želatinos tirpalu, paruoštu 10 % natrio chlorido tirpale, susidaro nuosėdos arba tirpalas drumsčiasi. Įdėjus želatinos perteklių, drumstumas išnyksta.

2. Tanidai duoda gausius kritulių su alkaloidais (kofeinu, pachikarpinu), taip pat kai kuriomis azotinėmis bazėmis (urotropinu, novokainu, dibazolu).

3. Sąveikaujant su 10 % švino acetato tirpalu, hidrolizuojančios grupės taninai susidaro flokuliuojančios nuosėdos.

4. Kondensuoti taninai, reaguodami su bromo vandeniu, sudaro flokuliuojančias nuosėdas.

Spalvotos reakcijos. Hidrolizuojamos grupės taninai su amonio geležies alūno tirpalu sudaro juodai mėlynos spalvos junginius, o kondensuotos grupės – juodai žalius.

Jei augale vienu metu yra ir hidrolizuojamos, ir kondensuotos grupės taninų, tai hidrolizuojantys tanidai pirmiausia nusodinami 10% švino acetato tirpalu, nuosėdos nufiltruojamos, o filtratas reaguoja su geležies amonio alūno tirpalu. Tamsiai žalios spalvos išvaizda rodo, kad yra kondensuotų grupės medžiagų.

Taninų kiekybinis nustatymas. Nepaisant to, kad yra apie 100 skirtingų taninų kiekybinio nustatymo metodų, tiksli kiekybinė šios biologiškai aktyvių medžiagų grupės analizė yra sudėtinga.

Tarp plačiai naudojamų taninų kiekybinio nustatymo metodų galima išskirti šiuos.

1. Gravimetrinis – pagrįstas kiekybiniu taninų nusodinimu želatina, sunkiųjų metalų druskomis ir kt.

2. Titrimetrinis – pagrįstas oksidacinėmis reakcijomis, pirmiausia su kalio permanganatu.

3. Fotoelektrinis kolorimetrinis – pagrįstas taninų gebėjimu sudaryti stabilios spalvos reakcijos produktus su geležies oksido druskomis, fosfovolframo rūgštimi ir kt.

X ir XI leidimų Valstybinė farmakopėja rekomendavo titrimetrinį taninų kiekybinio nustatymo metodą.

Turinys

OFS.1.5.3.0008.15 Taninų kiekio vaistinėse augalinėse žaliavose ir vaistiniuose augaliniuose preparatuose nustatymas

Vietoj str. GF XI

Taninų kiekis vaistinėse augalinėse žaliavose ir vaistinių augalų preparatuose nustatomas titrimetriniu ir (arba) spektrofotometriniu metodu. Titrimetrinis metodas skirtas taninų kiekiui nustatyti pagal taniną, o spektrofotometrinis metodas leidžia nustatyti taninų kiekį pirogalolio atžvilgiu.

1 metodas. Taninų kiekio, išreikšto taninu, nustatymas

Į 500 ml talpos kūginę kolbą supilama apie 2 g (tiksliai pasverta) susmulkintos vaistinės augalinės medžiagos ar vaistinio augalinio preparato, persijoto per sietelį su 3 mm skylutėmis, supilama 250 ml iki virimo pašildyto vandens ir virinama su grįžtamu šaldytuvu ant elektrinės viryklės su uždara spirale 30 minučių periodiškai maišant. Gautas ekstraktas atšaldomas iki kambario temperatūros ir filtruojamas per vatą į 250 ml talpos matavimo kolbą, kad žaliavos/preparato dalelės nepatektų į kolbą, tirpalo tūrį įpilkite iki žymės vandeniu. ir sumaišykite. 25,0 ml gauto vandeninio ekstrakto supilama į 1000 ml talpos kūginę kolbą, įpilama 500 ml vandens, 25 ml indigosulfonrūgšties tirpalo ir titruojama nuolat maišant kalio permanganato 0,02 M tirpalu iki aukso geltonumo. spalvinimas.

Lygiagrečiai atliekamas kontrolinis eksperimentas: 525 ml vandens, 25 ml indigosulfonrūgšties tirpalo supilama į 1000 ml talpos kūginę kolbą ir nuolat maišant kalio permanganato 0,02 M tirpalu titruojama iki aukso geltonumo. spalvinimas.

1 ml 0,02 M kalio permanganato tirpalo taninų kiekiu atitinka 0,004157 g taninų.

(V – V 1 ) 0,004157 250 100 100

X = ————————————————— ,

a· 25 · (100 - W)

V- 0,02 M kalio permanganato tirpalo tūris, sunaudotas vandeniniam ekstrahavimui titruoti, ml;

V 1 - 0,02 M kalio permanganato tirpalo tūris, sunaudotas titravimui kontroliniame eksperimente, ml;

0,004157 - taninų kiekis, atitinkantis 1 ml kalio permanganato tirpalo 0,02 M (tanino atžvilgiu), g;

a- žaliavos arba augalinio vaistinio preparato svoris, g;

W- vaistinių augalų ar augalinių vaistinių preparatų drėgnumas, %;

250 - bendras vandens ištraukimo tūris, ml;

25 - vandens ekstrakto tūris, paimtas titruoti, ml.

Pastaba.Indigosulfonrūgšties tirpalo ruošimas. 1 g indigokarmino ištirpinama 25 ml koncentruotos sieros rūgšties, tada įpilama dar 25 ml koncentruotos sieros rūgšties ir atskiedžiama vandeniu iki 1000 ml, gautą tirpalą atsargiai pilant į vandenį matavimo kolboje, kurios talpa 1000 ml, išmaišykite.

2 metodas. Taninų kiekio nustatymaskalbant apie pirogalolį

Į 250 talpos kūginę kolbą dedama apie 0,5 - 1,0 g (tiksliai pasverta ar kitaip nurodyta farmakopėjos monografijoje ar norminiuose dokumentuose) susmulkintos vaistinės augalinės medžiagos ar augalinio vaistinio preparato, persijoto per sietelį su 0,18 mm skylutėmis. ml , įpilkite 150 ml vandens ir virkite vandens vonioje 30 min. Kolboje gautas vandeninis ekstraktas atšaldomas iki kambario temperatūros, filtruojamas per vatą į 250 ml talpos matavimo kolbą, kad žaliavos dalelės nepatektų į kolbą, tirpalo tūris sumažinamas iki žymę vandeniu ir išmaišyti. Gautas tirpalas filtruojamas per maždaug 125 mm skersmens popierinį filtrą, išpilant pirmuosius 50 ml filtrato.

Nustatymas atliekamas tamsioje vietoje.

Taninų kiekio nustatymas... 5,0 ml filtrato supilama į 25 ml matavimo kolbą, tirpalo tūris pripildomas iki žymės ir sumaišomas. 2,0 ml gauto tirpalo supilkite į 25 ml matavimo kolbą, įpilkite 1 ml fosfomolibdeno-volframo reagento, 10 ml vandens ir natrio karbonatu iki žymės pripildykite tirpalo tūrį 10,6% tirpalu (bandomasis tirpalas). . Po 30 minučių išmatuokite tiriamojo tirpalo (A1) optinį tankį spektrofotometru, kai bangos ilgis yra 760 nm, kiuvetėje, kurios sluoksnio storis 10 mm, naudojant vandenį kaip etaloninį tirpalą.

Odos pudros neadsorbuotų taninų kiekio nustatymas.Į 10,0 ml filtrato įpilkite 0,1 g odos miltelių, gautą mišinį maišykite 60 min. ir filtruokite per popierinį filtrą. 5,0 ml gauto filtrato supilama į 25 ml matavimo kolbą, tirpalo tūris pripildomas iki žymės ir sumaišomas. 2,0 ml gauto tirpalo supilkite į 25 ml matavimo kolbą, įpilkite 1 ml fosforolibdeno-volframo reagento, 10 ml vandens, iki žymės praskieskite tirpalo tūrį natrio karbonatu 10,6% tirpalu ir išmaišykite (tiriamojo tirpalo). ). Po 30 minučių išmatuokite tiriamojo tirpalo (A2) optinį tankį spektrofotometru, kai bangos ilgis 760 nm, kiuvetėje, kurios sluoksnio storis 10 mm, kaip etaloninį tirpalą naudojant vandenį.

Lygiagrečiai matuojamas etaloninio tirpalo optinis tankis.

Į 25 ml matavimo kolbą supilama 2,0 ml pirogalolio CO tirpalo, įpilama 1 ml fosfomolibdeno-volframo reagento, įpilama 10 ml vandens, tirpalo tūris pripildomas iki natrio karbonato žymės 10,6 % tirpalu ir išmaišoma. (standartinis tirpalas). Po 30 minučių išmatuokite etaloninio tirpalo (A 3) optinį tankį spektrofotometru, kai bangos ilgis yra 760 nm, kiuvetėje, kurios sluoksnio storis 10 mm, naudojant vandenį kaip etaloninį tirpalą.

A 1- tiriamojo tirpalo optinis tankis nustatant taninų kiekį;

A 2 - tiriamojo tirpalo optinis tankis, kai nustatomas odos miltelių neadsorbuotų taninų kiekis, apskaičiuojamas kaip pirogalolis;

A 3— standartinio tirpalo optinis tankis;

a- sveriamas vaistinių augalinių žaliavų ar vaistažolių kiekis, g;

a 0 - CRM pirogalolio svoris, g;

W- vaistinių augalų ar augalinių vaistinių preparatų drėgnumas, %.

Pastaba. Pirogalolio CO tirpalo paruošimas... Į 100 ml talpos matavimo kolbą supilama 0,05 g (tiksliai pasverto) pirogalolio CO, ištirpinama vandenyje, tirpalo tūris pripildomas iki žymės ir išmaišomas. 5,0 ml gauto tirpalo supilama į 100 ml talpos matavimo kolbą, tirpalo tūris pripildomas iki žymės ir sumaišomas. Tirpalas naudojamas šviežiai paruoštas.

Įvadas
Augaluose viena iš labiausiai paplitusių biologiškai aktyvių medžiagų (BAS) grupių yra taninai (taninai), turintys platų farmakologinio aktyvumo spektrą.Taninaituri hemostazinį, sutraukiantį, priešuždegiminį, antimikrobinį poveikį, taip pat pasižymi dideliu vitamino P aktyvumu, antiskleroziniu ir antihipoksiniu poveikiu. Kondensuoti taninai yra antioksidantai ir turi priešnavikinį poveikį. Taninainaudojamas kaip priešnuodis apsinuodijus glikozidais, alkaloidais, sunkiųjų metalų druskomis. Medicinoje taninai naudojami gydant tokias ligas kaip stomatitas, gingivitas, faringitas, tonzilitas, kolitas, enterokolitas, dizenterija, taip pat vartojami nuo nudegimų, gimdos, skrandžio ir hemorojaus kraujavimo..
Turinio apibrėžimastaninai yra svarbus komponentas nustatant augalinių medžiagų, kurių sudėtyje yra taninų, kokybę. Yra įvairių taninų nustatymo metodų, tačiau dažniausiai naudojami titrimetriniai ir spektrofotometriniai metodai.
Tikslas- kiekybinio taninų nustatymo metodų patvirtinimas konvergencijos, teisingumo, tiesiškumo požiūriu.
Medžiagos ir tyrimo metodai
Kaip tyrimo objektas buvo panaudota žaliava – orui sausa žolė.paprastoji rankogalė (Alchemilla vulgaris L.) fam. Rosaceae (Rosaceae).
Taninų kiekybinio nustatymo ore sausoje žolėje metodų patvirtinimuibuvo pasirinkti du metodai: permanganatometrinis titravimas ir spektrofotometrinis nustatymas, pagrįstas reakcija su Folin-Ciocalteu reagentu. Metodų pasirinkimas pateisinamas jų naudojimo praktikoje dažnumu.
Orui sausa žolėįprastas rankogalisįsigytas 2015 m. rugsėjo mėn. Archangelsko srities Primorsky rajone, kuris buvo žaliava tiriant ir kiekybiniam taninų (taninų) nustatymui.
Permanganatometrinio nustatymo metodas yra farmakopėjos, kuri yraparemtas taninų oksidacijos reakcija su kalio permanganato tirpalu.Apie 2 g (tiksliai pasverta) susmulkintos žaliavos, persijotos per sietelį su 3 mm skylute, supilama į 500 ml talpos kūginę kolbą, įpilama 250 ml vandens, pašildyto iki virimo ir virinama su grįžtamu šaldytuvu elektrinė viryklė su uždara spirale 30 minučių periodiškai maišant. Gautas ekstraktas atšaldomas iki kambario temperatūros ir 250 ml kūginė kolba perfiltruojama per vatą, kad žaliavos dalelės nepatektų į kolbą. Supilkite pipete 25 ml gauto ekstrakto ir perpilkiteį kitą 750 ml talpos kūginę kolbą, įpilama 500 ml vandens, 25 ml indigosulfonrūgšties tirpalo ir nuolat maišant titruojama kalio tirpalu.permanganatas (0,02 mol / l) iki auksinės geltonos spalvos.
Lygiagrečiai buvo atliktas kontrolinis eksperimentas.
1 ml kalio permanganato tirpalo (0,02 mol/l) pagal taniną atitinka 0,004157 g taninų.
Taninų (X) kiekis procentais, išreikštas absoliučios sausos žaliavos kiekiu, buvo apskaičiuotas pagal formulę (1):

Kur (1)

V – kalio permanganato tirpalo (0,02 mol/l) tūris, sunaudotas ekstrahavimui titruoti, ml;
- kalio permanganato tirpalo (0,02 mol/l) tūris, sunaudotas titravimui kontroliniame eksperimente, ml;
0,004157 - taninų kiekis, atitinkantis 1 ml kalio permanganato tirpalo (0,02 mol / l) (tanino atžvilgiu), g;
250 - bendras ekstrahavimo tūris, ml;
25 - ekstrahavimo tūris, paimtas titruoti, ml.
m- žaliavos svoris, g;
W- masės praradimas džiovinant žaliavas, g;
Taninų kiekybiniam nustatymui spektrofotometriniu metodu apie 1 g (tiksliai pasvertos) tiriamos augalinės medžiagos, susmulkintos iki dalelių dydžio, praeinančios per 1 mm skylutės sietelius, buvo patalpinta į plonos pjūvio kūginę kolbą su 50 ml talpos, įpilama 25 ml acetono ir vandens mišinio santykiu 7:3 (70 % acetono tirpalas). Kolba uždaryta ir įdėta į laboratorinę maišyklę (LAB PU-2, Rusija) 60 minučių. Gautas ekstraktas filtruojamas į 50 ml matavimo kolbą ir tūris padidinamas iki žymės 70 % acetono tirpalu (A tirpalas).
Į 10 ml talpos matavimo kolbą įpilama 1 ml A tirpalo, kolboje esančio tirpalo tūris išgrynintu vandeniu (B tirpalas) padidinamas iki žymės.
0,5 ml tirpalo B supilama į 10 ml matavimo kolbą, įpilama 2 ml išgryninto vandens, 0,25 ml Folen-Chocalteu reagento, 1,25 ml 20 % natrio karbonato tirpalo ir tirpalo tūris praskiedžiamas iki pažymėkite vandeniu. Kolba buvo palikta 40 minučių apsaugota nuo šviesos. Tirpalo optinis tankis buvo nustatytas esant 750 nm bangos ilgiui. Kaip etaloninis tirpalas buvo naudojamas reagentų mišinys, nepridedant ekstrahavimo.
Taninų kiekis augalinių žaliavų ekstraktuose buvo apskaičiuotas pagal kalibravimo grafiko vertes, kurioms sudaryti buvo naudojamas 0,1 mg/ml CO tanino standartinio mėginio tirpalas. Tam tikslui į 100 ml matavimo kolbą buvo patalpinta 0,05 g (tikslus svoris) CO tanino, ištirpintas 30 ml vandens, o tūris kolboje sureguliuojamas iki žymės tuo pačiu tirpikliu (A tirpalas).
1 ml gauto tirpalo supilama į 10 ml matavimo kolbą. Tirpalo tūris kolboje buvo padidintas iki žymės vandeniu (tirpalas B).
Tirpalų serija, kurioje yra po 1; 2; 3; 4; 5 μg/ml CO tanino buvo paruoštas į 10 ml talpos matavimo kolbas dedant pasvertas B tirpalo dalis, įpilamas Folin – Chocalteu reagentas ir 20 % vandeninis natrio karbonato tirpalas, o tirpalų tūris kolboje padidinamas iki žymės. su vandeniu.
Tirpalai sumaišomi, kolbos sandariai uždaromos ir laikomos kambario temperatūroje, apsaugotoje nuo šviesos 40 min.
Gautų tirpalų optinis tankis buvo nustatytas spektrofotometriškai kvarcinėse kiuvetėse, kurių sluoksnio storis 1 cm, esant 725 nm bangos ilgiui lyginant su etaloniniu tirpalu.
Etaloninis tirpalas buvo reagentų mišinys be CO tanino (B tirpalas).
Remiantis tyrimų rezultatais, buvo sudarytas optinio tankio priklausomybės nuo tanino koncentracijos grafikas (1 pav.).

Atsižvelgiant į gautas vertes, taninų suma buvo apskaičiuota taninų atžvilgiu pagal formulę:

, kur

rezultatus
Taninų kiekybinio nustatymo titravimo būdu rezultatai pateikti lentelėje. vienas.

1 lentelė. Taninų kiekybinio nustatymo permanganatometrija rezultatai

Augalinės žaliavos mėginio masė, g	Kalio permanganato tūris (0,02 mol/l), sunaudotas gautam ekstraktui iš augalinių žaliavų titruoti, ml	Taninų kiekis, % (X i)
2,10250		15,34892	15,72% 0,154 Δ = 0,395 ε = 2,52 % S r = 0,024
2,03255		15,21262
2,18345		15,84713
2,24350		16,24333
2,12465		15,85257
2,07055		15,80574

Vidutinė taninų kiekio žaliavoje vertė buvo 15,7%. Apskaičiuota santykinio standartinio nuokrypio reikšmės reikšmė (0,024%), kuri neviršija 2%, charakterizuojanti patenkinamą rezultatų konvergenciją.
Procedūros teisingumui nustatyti buvo naudojamas papildymo metodas. Šiuo tikslu į titravimo kolbą buvo įpilta 1 ml 0,05%, 0,1% ir 0,15% CO tanino ir kiekvienu atveju titruojama tris kartus. Tyrimų rezultatai pateikti lentelėje. 2.

2 lentelė. Taninų permanganatometrinio titravimo metodo teisingumo nustatymas

Pridėto CO tanino kiekis, g	Žaliavos svoris, g	Apskaičiuota taninų kiekis, g	Rastas taninų kiekis, g	Atidarymo rodiklis, %	Metrologinės charakteristikos
0,0005	2,2435	0,0357	0,0353	98,87	99,91% 1,198 0,399 t skaičiuot. = 0,23 t skirtuką. = 2,31
	2,1247	0,0339	0,0340	100,29
	2,0706	0,0330	0,0337	102,12
0,001	2,2435	0,0362	0,0357	98,61
	2,1247	0,0344	0,0340	98,84
	2,0706	0,0335	0,0336	100,51
0,0015	2,2435	0,0367	0,0366	99,73
	2,1247	0,0349	0,0353	101,14
	2,0706	0,0340	0,0337	99,12

Gauti rezultatai rodo, kad apskaičiuotas Stjudento koeficientas yra mažesnis už lentelės reikšmę irmetodu nėra sisteminės klaidos, kuri leidžia daryti išvadą, kad jis teisingas.
Tiesiškumui tirti buvo nustatyta kiekybinio taninų kiekio rastų verčių priklausomybė nuo sveriamos tiriamos augalinės medžiagos dalies. Tam buvo atliktas kiekybinis taninų nustatymas šešiose svertose ore išdžiovintos paprastosios manžetės žaliavos porcijose, kurios skiriasi svoriu (3 lentelė).

3 lentelė. Rasto taninų kiekio priklausomybė nuo augalinės žaliavos mėginio masės permanganatometrijos metodu

Žaliavos svoris, g	Titravimui sunaudoto kalio permanganato tūris, ml
2,0706		0,3159
3,0013	10,8	0,4490
4,0595	13,0	0,5404
5,1180	15,3	0,6360
6,1385	18,2	0,7566

Remiantis tyrimų metu gautais duomenimis, buvo nubraižytas tam tikro taninų kiekio priklausomybės nuo tiriamos augalinės medžiagos mėginio masės grafikas (2 pav.) ir apskaičiuotas koreliacijos koeficientas.

Ryžiai. 2. Rasto taninų kiekio priklausomybės nuo manžetės paprastosios ore sausos žaliavos mėginio masės grafikas.

Apskaičiuotas koreliacijos koeficientas neviršijo 0,95, o tai rodo tirtų medžiagų kiekio nustatymo rezultatų tiesiškumą nuo tiriamos augalinės medžiagos mėginio masės nurodytame koncentracijos intervale.
Taninų kiekybinio nustatymo ore sausoje paprastosios manžetinės žolės žaliavoje spektrofotometriniu metodu rezultatai pateikti lentelėje. 4.

4 lentelė. Kiekybinio taninų nustatymo spektrofotometriniu metodu rezultatai

Mėginio svoris, g	Optinis tirpalo tankis		Rastas taninų kiekis, % (X i)	Metrologinės charakteristikos
1,02755	0,5957	7,30920	7,87340	7,84% 0,11 Δ = 0,28 ε = 3,61 % S r = 0,034 %
0,99745	0,6130	7,52147	8,34656
1,0068	0,5678	6,96687	7,65932
0,99580	0,5742	7,04539	7,83120
1,0060	0,5750	7,05521	7,76261
1,00670	0,5617	6,89202	7,57779

Vidutinė taninų kiekio augalinėse medžiagose vertė yra 7,8%, o santykinis standartinis nuokrypis (0,034%) neviršija 2%, o tai apibūdina patenkinamą rezultatų konvergenciją.
Procedūros teisingumui nustatyti buvo naudojamas papildymo metodas. Šiuo tikslu į kolbą su pirminiu acetonu ekstrahuojant buvo įpilta 1 ml 0,05%, 0,1% ir 0,15% CO tirpalo tanino, o po to tris kartus kiekvienai koncentracijai buvo atliktas kiekybinis taninų nustatymas. Tyrimų rezultatai pateikti lentelėje. 5.

Patento RU 2439568 turėtojai:

Išradimas yra susijęs su farmakologijos sritimi ir gali būti naudojamas taninams augalinėse medžiagose nustatyti. Taninų nustatymo augalinėse žaliavose metodas susideda iš to, kad žaliavos mėginys verdant ekstrahuojamas vandeniu, atšaldomas, filtruojamas, matuojamas alikvotinės dalies optinis tankis, kai bangos ilgis yra 277 nm, o jo kiekis visų taninų suma apskaičiuojama pagal tam tikrą formulę, tada į filtrato alikvotinę dalį įpilama 1 % kolageno tirpalo 1 % acto rūgštyje, suplakama, filtruojama, matuojamas filtrato optinis tankis esant 277 nm bangos ilgiui ir apskaičiuojamas. nusodintų taninų kiekis pagal tam tikrą formulę. Metodas pagerina taninų kiekio augalinėse žaliavose nustatymo tikslumą ir selektyviai nustato nusodintus ir nenusodintus taninus augalinėse žaliavose.

Išradimas yra susijęs su chemijos-farmacijos pramone, farmakognozijos ir farmacinės chemijos sritimi ir gali būti naudojamas augalinės žaliavos, turinčios taninų, kokybei kontroliuoti.

Žinomas taninų nustatymo vaistinės augalinės žaliavos (HP) metodas kulometrijos metodu tanino atžvilgiu (SG Abdullina et al. Taninų kulometrinis nustatymas vaistinių augalų žaliavose. // Farmacija. Nr. 4. - 2010 m. - P.13 -15).

Šio metodo trūkumas yra papildomos įrangos (kulonometro), specifinio titranto (kalio hipojodido), kuris savo oksidacinėmis savybėmis yra artimas kalio permanganatui ir neleidžia atskirti didelės ir mažos molekulinės masės taninų, naudojimas.

Taip pat žinomas tanino ir galo rūgšties darinių kiekio arbatoje nustatymo konduktometrijos metodas (patento Nr. 2127878. Metodas atskiram tanino ir katechinų (galo rūgšties atžvilgiu) nustatymo arbatoje. M .: 1999) .

Šio metodo trūkumas yra toksiškų organinių tirpiklių (izobutilo alkoholio) naudojimas, taip pat spalvinės reakcijos su Fe (III) naudojimas, kurio produktas yra spalvotas junginys, kurio spalva laikui bėgant yra nestabili.

Taip pat žinomas taninų kiekybinio taninų kiekio nustatymo scumpia ir sumach lapuose metodas kompleksometriniu metodu nusodinus taninus cinko druskomis (GOST 4564-79. Scumpia leaf. Specifikacijos; GOST 4565-79. Sumach lapas. Specifikacijos).

Šio metodo trūkumas yra analizės trukmė ir lygiavertiškumo taško nustatymo sunkumai.

Taip pat žinomas taninų kiekybinio nustatymo spektrofotometriniu metodu po reakcijos su Folin-Chocalteu reagentu gallo rūgšties atžvilgiu metodas (Biologiškai aktyvių maisto priedų kokybės kontrolės ir saugos metodų gairės. Vadovas. P 4.1. 1672-03. - M. - 2004 . - p.94-95).

Šio metodo trūkumas yra tai, kad neįmanoma atskirai nustatyti mažos ir didelės molekulinės masės taninų.

Arčiausiai siūlomo metodo taninai nustatomi spektrofotometriškai pagal galio rūgšties kiekį (Biologiškai aktyvių maisto priedų kokybės kontrolės ir saugos metodų gairės. Vadovas. R 4.1.1672-03. - M. - 2004 - p. 120).

Šio metodo trūkumas yra pakartotinis tiriamojo mėginio skiedimas, dėl kurio taninų koncentracija tirpale yra blogai nustatyta. Be to, taikant šį metodą, etaloninis tirpalas yra buferinis tirpalas, o tai apsunkina analizę. Be to, šis metodas neleidžia atskirai nustatyti mažos molekulinės masės ir didelės molekulinės masės taninų kiekio.

Išradimo tikslas – pagerinti taninų nustatymo tikslumą ir galimybę atskirai nustatyti nusodintus ir nenusodintus taninus augalinėse žaliavose.

Problema išspręsta tuo, kad verdant žaliavos mėginys ekstrahuojamas vandeniu, atšaldomas, filtruojamas, alikvotinės dalies mėginio optinis tankis matuojamas esant 277 nm bangos ilgiui, o visų taninų sumos kiekis. apskaičiuojamas pagal formulę

50 - kolbos tūris, ml,

W - žaliavų drėgnumas, %

Į alikvotinę filtrato mėginio dalį įpilama 1 % kolageno tirpalo 1 % acto rūgštyje, sukratoma, filtruojama, matuojamas filtrato optinis tankis esant 277 nm bangos ilgiui ir nusodintų taninų kiekis apskaičiuojamas pagal formulę.

D 1 - 1 tirpalo optinis tankis,

D 2 – 2 tirpalo optinis tankis,

m nav - žaliavos mėginio svoris, g,

V a – alikvotinės dalies tūris, ml,

250 - bendras ekstrahavimo tūris, ml,

50 - kolbos tūris, ml,

508 - specifinis galo rūgšties absorbcijos indeksas (1% galo rūgšties tirpalo optinis tankis 1 mg / ml),

W - žaliavų drėgnumas, %.

Praktiškai metodas atliekamas taip. Apie 2,0 (tiksliai pasvertos) susmulkintos žaliavos, persijotos per 3 mm skylutės skersmens sietelį, supilama į 500 ml talpos kolbą, užpilama 250 ml iki virimo pašildyto vandens ir virinama 30 min. šaldytuve, periodiškai maišant. Jis atšaldomas iki kambario temperatūros, įpilamas iki 250 ml vandens, filtruojamas per vatą, kad žaliavos dalelės nepatektų į vandens ekstraktą. Pirmuosius 50 ml filtrato išpilkite.

1-4 ml vandeninio ekstrakto supilama į 50 ml talpos matavimo kolbą, užpilama vandeniu iki žymės (1 tirpalas). 1 tirpalo optinis tankis matuojamas esant 277 nm bangos ilgiui. Palyginimui naudojamas vanduo.

30 ml vandeninio ekstrakto supilama į 50 ml talpos matavimo indą, įpilama 2-10 ml nusodinimo reagento, purtoma 30-60 min., nusodinama, filtruojama. 1-4 ml gauto filtrato supilama į 50 ml talpos kolbą, užpilama vandeniu iki žymės (2 tirpalas). 2 tirpalo optinis tankis matuojamas esant 277 nm bangos ilgiui. Palyginimui naudojamas vanduo.

Išradimas iliustruojamas šiais pavyzdžiais.

1 pavyzdys. Analizei paimta augalinė žaliava – ąžuolo žievė.

Apie 2,0 (tiksliai pasvertos) susmulkintos žalios ąžuolo žievės, persijotos per 3 mm skylutės skersmens sietelį, supilama į 500 ml talpos kolbą, užpilama 250 ml iki virimo pašildyto vandens ir virinama 30 min. šaldytuve, periodiškai maišant. Jis atšaldomas iki kambario temperatūros, įpilamas iki 250 ml vandens, filtruojamas per vatą, kad žaliavos dalelės nepatektų į vandens ekstraktą. Pirmuosius 50 ml filtrato išpilkite.

2 ml vandens ekstrakto iš ąžuolo žievės supilama į 50 ml talpos matavimo kolbą, įpilama iki žymės vandeniu (1 tirpalas). 1 tirpalo optinis tankis matuojamas esant 277 nm bangos ilgiui. Palyginimui naudojamas vanduo. Ąžuolo žievės D 1 yra 0,595.

30 ml vandeninio ekstrakto supilama į 50 ml talpos matavimo indą, įpilama 2 ml nusodinimo reagento, kratoma 30 min., nusodinama, filtruojama. 2 ml gauto filtrato supilama į 50 ml talpos kolbą, užpilama vandeniu iki žymės (2 tirpalas). 2 tirpalo optinis tankis matuojamas esant 277 nm bangos ilgiui. Palyginimui naudojamas vanduo. Ąžuolo žievės D 2 yra 0,276.

2 pavyzdys. Analizei paimta spiralinių šakniastiebių augalinė medžiaga.

Į 500 ml talpos kolbą supilama 250 ml iki virimo pašildyto vandens ir apie 2,0 (tiksliai pasvertos) susmulkintos spiralinio šakniastiebio žaliavos, persijotos per 3 mm skylutės skersmens sietelį. virinama 30 minučių su grįžtamu šaldytuvu, periodiškai maišant. Jis atšaldomas iki kambario temperatūros, įpilamas iki 250 ml vandens, filtruojamas per vatą, kad žaliavos dalelės nepatektų į vandens ekstraktą. Pirmuosius 50 ml filtrato išpilkite.

1 ml vandens ekstrakto iš spiralės šakniastiebio supilama į 50 ml talpos matavimo kolbą, užpilama vandeniu iki žymės (1 tirpalas). 1 tirpalo optinis tankis matuojamas esant 277 nm bangos ilgiui. Palyginimui naudojamas vanduo.

Į 50 ml talpos matavimo indą supilama 30 ml vandeninio ekstrakto, įpilama 7 ml nusodinimo reagento, purtoma 60 min., nusodinama, filtruojama. 1 ml gauto filtrato supilama į 50 ml talpos kolbą, užpilama vandeniu iki žymės (2 tirpalas). 2 tirpalo optinis tankis matuojamas esant 277 nm bangos ilgiui. Palyginimui naudojamas vanduo.

Siūlomas metodas pagerina taninų kiekio augalinėse žaliavose nustatymo tikslumą ir selektyviai nustato nusodintus ir nenusodintus taninus augalinėse žaliavose.

Taninų nustatymo augalinėse žaliavose metodas, išreikštas galio rūgštimi, kurį sudaro tai, kad žaliavos mėginys verdant ekstrahuojamas vandeniu, atšaldomas, filtruojamas, matuojamas alikvotinės mėginio dalies optinis tankis esant bangos ilgiui 277 nm, o visų taninų sumos kiekis apskaičiuojamas pagal formulę:

čia x a – taninų sumos kiekis, išreikštas galo rūgštimi, %;




50 - kolbos tūris, ml;
508 - specifinis galo rūgšties absorbcijos greitis (1% galo rūgšties tirpalo optinis tankis 1 mg / ml);
W - žaliavų drėgnumas, %
į alikvotinę filtrato mėginio dalį įpilama 1 % kolageno tirpalo 1 % acto rūgštyje, sukratoma, filtruojama, matuojamas filtrato optinis tankis esant 277 nm bangos ilgiui, o nusodintų taninų kiekis apskaičiuojamas naudojant formulė:

čia X yra nusodintų taninų kiekis, išreikštas galo rūgštimi, %;
D 1 - 1 tirpalo optinis tankis;
D 2 - 2 tirpalo optinis tankis;
m nav - žaliavos mėginio svoris, g;
V a – alikvotinės dalies tūris, ml;
250 - bendras ekstrahavimo tūris, ml;
50 - kolbos tūris, ml;
508 - specifinis galo rūgšties absorbcijos greitis (1% galo rūgšties tirpalo optinis tankis 1 mg / ml);
W - žaliavų drėgnumas, %.

Panašūs patentai:

Išradimas yra susijęs su medicina, būtent su psichoneurologija, ir aprašomas metodas, skirtas prognozuoti pacientų neurologinių funkcijų atsigavimą ūminiu išeminio insulto periodu, atliekant klinikinius ir biocheminius bendros albumino (OCA) koncentracijos serume tyrimus, g / l, kur papildomai iki 5-7 ligos dienos nustatoma efektyvioji albumino koncentracija (ECA), apskaičiuojamas albumino surišimo (PCA) rezervas, o jei šis rodiklis mažesnis už vieną – neigiamas atkūrimo rezultatas. prognozuojamas neurologinių funkcijų pablogėjimas pacientams ūminiu išeminio insulto periodu.

Išradimas yra susijęs su medicina, su biologiniais onkologiniais tyrimais ir gali būti naudojamas nustatyti piktybinio proceso išsivystymą smegenų navikuose po chirurginio gydymo.

Išradimas yra susijęs su medicina, konkrečiai su onkologija, ir aprašo šlapimo pūslės vėžio neoadjuvantinės chemoterapijos veiksmingumo įvertinimo, tiriant pacientą, metodą, kurio metu didžiausias naviko audinių autofluorescencijos intensyvumas žaliojoje spektro srityje fiksuojamas ties pirminės diagnozės stadijoje ir praėjus 1 mėnesiui po priešoperacinės chemoterapijos ir paciento reikšmėms padidėjus maksimaliam naviko audinio autofluorescencijos intensyvumui 15% pradinio ir daugiau, gydymo efektyvumas vertinamas kaip dalinė naviko regresija. procesas, nesant naviko audinio autofluorescencijos intensyvumo pokyčių nuo pradinio, nustatomas proceso stabilizavimas, navikinio audinio autofluorescencijos intensyvumui sumažėjus 15% ir daugiau nuo pradinės žymos progresuoja. naviko proceso.