Ds ifa vich agat pozitiv. Metode moderne de diagnosticare a infecției cu HIV. Reacția polimerazei în lanț

Număr unic de înregistrare în registru

Numărul de înregistrare a dispozitivului medical

FSR 2011/10182

Data înregistrării de stat a unui dispozitiv medical

Numele dispozitivului medical

Un set de reactivi „MilaLab-ELISA-HIV-AGAT” test imunosorbent legat de enzime pentru detectarea anticorpilor la virusurile imunodeficienței umane de tipurile 1 și 2 (HIV-1 și HIV-2), HIV-1 grupa O și HIV-1 p24 antigen conform TU 9398 -187-05941003-2017
constând din: - Imunosorbent - o placă pliabilă din polistiren cu 96 de godeuri până la benzi (sau până la godeuri), în godeurile căreia sunt absorbiți antigeni artificiali - gp160, gp41, p31 HIV-1, gp41 HIV-1 grupa O, gp36 HIV-2 și anticorpi la antigenul HIV-1 p24: set 1 (1 placă), set 2 (2 plăci), set 3 (5 plăci), - Conjugat-1: set 1 (1 fl. 1,2 ml), set 2 (1 flacon de 1,2 ml), set 3 (1 flacon de 3,6 ml sau 3 flacoane de 1,2 ml), - Conjugate-2: set 1 (1 flacon de 2,0 ml), set 2 (1 flacon de 2,0 ml), set 3 ( 1 flacon de 4,0 ml sau 2 flacoane de 2,0 ml), - RRK-1 - soluție de diluție pentru Conjugate-1: set 1 (1 flacon de 12,0 ml), set 2 (1 flacon de 12,0 ml), setul 3 (3 flacoane de 12,0 ml) fiecare), - RRK-2 - soluție de diluție pentru Conjugate-2: set 1 (1 flacon de 20,0 ml), set 2 (1 flacon de 20,0 ml), setul 3 (2 fiole de 20,0 ml), - K + AT - control pozitiv proba care contine anticorpi la HIV: set 1 (1 flacon de 2,0 ml), set 2 (1 flacon de 2,0 ml), set 3 (1 flacon de 4,0 ml sau 2 fiole de 2,0 ml), - K + AG - con Probă Troll pozitivă care conține antigen artificial HIV-1 p24: set 1 (1 flacon. 2,0 ml), set 2 (1 flacon de 2,0 ml), set 3 (1 flacon de 4,0 ml sau 2 flacon de 2,0 ml fiecare), - К- - proba negativă de control: set 1 (1 flacon de 2,5 ml), set 2 (1 flacon 2,5 ml), set 3 (1 flacon de 5,0 ml sau 2 flacoane de 2,5 ml fiecare), - PR - soluție de spălare: set 1 (1 flacon de 50,0 ml), set 2 (1 flacon de 120,0 ml), set 3 (2 sticle de 120,0 ml), - Oprire reactiv: set 1 (1 flacon de 25,0 ml), set 2 (2 flacoane de 25,0 ml), setul 3 (2 flacoane de 50,0 ml sau 4 flacoane de 25,0 ml), - SB - tampon substrat soluție: set 1 (1 flacon de 25, 0 ml), setul 2 (1 flacon de 25,0 ml), setul 3 (2 flacoane de 50,0 ml sau 3 flacoane de 25,0 ml), - TMB - soluție care conține 3,3", 5,5"-tetrametilbenzidină : kit 1 (1 flacon de 2,5 ml), kit 2 (1 flacon de 2,5 ml), kit 3 (2 flacoane de 3,5 ml sau 3 flacoane de 2,5 ml). Accesorii: - capace pentru plăci din polistiren cu 96 godeuri: set 1 (1 buc.), Set 2 (2 buc.), Set 3 (5 buc.) Sau - folii de protecție pentru plăci ELISA: set 1 (2 buc.) , set 2 (4 buc.), set 3 (10 buc.), - vârfuri de unică folosință: set 1 (16 buc.), set 2 (32 buc.), set 3 (80 buc.), - tăvi din plastic pentru reactivi lichizi : set 1 (2 buc.), set 2 (4 buc.), set 3 (10 buc.), - pungi de plastic cu Zip-Lock: set 1 (1 buc.), set 2 (2 buc.), set 3 (3 buc.).

Denumirea organizației - solicitantul dispozitivului medical

Locația organizației solicitante a dispozitivului medical

Adresa juridică a organizației solicitante a dispozitivului medical

603014, Rusia, Nijni Novgorod, st. Kominterna, 47

Numele producătorului dispozitivului medical sau al producătorului dispozitivului medical

OOO „NPO” Sisteme de diagnosticare „

Locația organizației-producător al unui dispozitiv medical sau organizației - producător al unui dispozitiv medical

603093, Rusia, Nijni Novgorod, st. Yabloneva, 22, Căsuța poștală 69

Adresa legală a unui producător de dispozitive medicale sau a unui producător de dispozitive medicale

Diagnosticul în timp util al infecției cu HIV devine o măsură extrem de importantă, deoarece inițierea mai devreme a tratamentului poate predetermina în mare măsură dezvoltarea ulterioară a bolii și poate prelungi viața pacientului. În ultimii ani, s-au înregistrat progrese semnificative în depistarea acestei boli groaznice: sistemele vechi de testare sunt înlocuite cu altele mai avansate, metodele de examinare devin din ce în ce mai accesibile, iar acuratețea lor crește semnificativ.

În acest articol, vom vorbi despre metodele moderne de diagnosticare a infecției cu HIV, care sunt utile de cunoscut pentru tratarea în timp util a acestei probleme și menținerea calității normale a vieții persoanei bolnave.

Tehnici de diagnosticare HIV

În Rusia, pentru diagnosticarea infecției cu HIV, se efectuează o procedură standard, care include două niveluri:

Sistem de testare ELISA (analiza screening);
blotting imun (IB).

De asemenea, se pot utiliza și alte metode pentru diagnosticare:

teste exprese.

Sisteme de testare ELISA

În prima etapă a diagnosticului, un test de screening (ELISA) este utilizat pentru a detecta infecția cu HIV, care se bazează pe proteinele HIV create în laboratoare care captează anticorpi specifici produși în organism ca răspuns la infecție. După interacțiunea lor cu reactivii (enzimele) sistemului de testare, culoarea indicatorului se schimbă. În plus, aceste modificări de culoare sunt procesate pe echipamente speciale, care determină rezultatul analizei efectuate.

Astfel de teste ELISA sunt capabile să arate rezultate în câteva săptămâni după introducerea infecției cu HIV. Această analiză nu detectează prezența unui virus, ci detectează producția de anticorpi împotriva acestuia. Uneori, în corpul uman, producția de anticorpi împotriva HIV începe după 2 săptămâni de la infectare, dar la majoritatea oamenilor aceștia se dezvoltă la o dată ulterioară, după 3-6 săptămâni.

Există patru generații de teste ELISA cu sensibilitate diferită. În ultimii ani, au fost utilizate mai des sistemele de testare din generația a III-a și a IV-a, care sunt create pe baza de peptide sintetice sau proteine recombinate și au o specificitate și o precizie mai mare. Acestea pot fi utilizate pentru a diagnostica infecția cu HIV, pentru a monitoriza prevalența HIV și pentru a asigura siguranța la screeningul sângelui donat. Precizia sistemelor de testare ELISA de generația III și IV este de 93-99% (testele mai sensibile care sunt produse în Europa de Vest sunt de 99%).

Pentru efectuarea testului ELISA se prelevează 5 ml de sânge din vena pacientului. Între ultima masă și test trebuie să treacă cel puțin 8 ore (de obicei se face dimineața pe stomacul gol). Se recomandă efectuarea unui astfel de test nu mai devreme de 3 săptămâni după presupusa infecție (de exemplu, după contactul sexual neprotejat cu un nou partener sexual).

Rezultatele testului ELISA se obțin în 2-10 zile:

rezultat negativ: indică absența infecției cu HIV și nu necesită trimitere la un specialist;
rezultat fals negativ: se poate observa în stadiile incipiente ale infecției (până la 3 săptămâni), în stadiile târzii ale SIDA, cu suprimarea pronunțată a imunității și cu pregătirea necorespunzătoare a sângelui;
rezultat fals pozitiv: se poate observa cu unele boli și cu prepararea sângelui efectuată necorespunzător;
rezultat pozitiv: indică infecția HIV, necesită IB și contactul pacientului cu un specialist la centrul SIDA.

De ce poate un test ELISA să dea rezultate fals pozitive?

Rezultatele fals pozitive ale unui test ELISA pentru HIV pot fi observate în cazul procesării necorespunzătoare a sângelui sau la pacienții cu următoarele afecțiuni și boli:

mielom multiplu;
boli infecțioase provocate de virusul Epstein-Barr;
stare după;
boală autoimună;
pe fundalul sarcinii;
starea după vaccinare.

Din motivele descrise mai sus, anticorpii reactivi încrucișați nespecifici pot fi prezenți în sânge, a căror producție nu a fost declanșată de infecția cu HIV.

În ultimii ani, frecvența rezultatelor fals pozitive a scăzut semnificativ datorită utilizării sistemelor de testare din generația III și IV, care conțin peptide mai sensibile și proteine recombinante (sunt sintetizate prin inginerie genetică in vitro). După începerea utilizării unor astfel de teste ELISA, frecvența rezultatelor fals pozitive a scăzut semnificativ și este de aproximativ 0,02-0,5%.

Găsirea unui fals pozitiv nu înseamnă că o persoană este infectată cu HIV. În astfel de cazuri, OMS recomandă un alt test ELISA (generația IV obligatorie).

Sângele pacientului este trimis la un laborator de referință sau de arbitraj marcat „repeat” și testat pe un sistem de testare ELISA de generația IV. Dacă rezultatul noii analize este negativ, atunci primul rezultat este recunoscut ca fiind eronat (fals pozitiv) și IB nu este efectuat. În cazul unui rezultat pozitiv sau îndoielnic în timpul celui de-al doilea test, pacientului trebuie să i se atribuie IB în 4-6 săptămâni pentru a confirma sau infirma infecția cu HIV.

blotting imun

Un diagnostic definitiv al infecției cu HIV poate fi pus doar după obținerea unui rezultat pozitiv de blotting imun (IB). Pentru implementarea sa se folosește o bandă de nitroceluloză, pe care se aplică proteine virale.

Prelevarea de sânge pentru IB se efectuează dintr-o venă. Apoi suferă o prelucrare specială și proteinele conținute în serul său sunt separate într-un gel special în funcție de sarcina și greutatea lor moleculară (manipularea se efectuează pe echipamente speciale sub influența unui câmp electric). Pe gelul de ser sanguin se aplică o bandă de nitroceluloză și se efectuează blotting ("blotting") într-o cameră specială. Banda este prelucrată și dacă materialele folosite conțin anticorpi împotriva HIV, atunci se leagă de benzile antigenice de pe IB și apar ca linii.

IB este considerat pozitiv dacă:

conform criteriilor americane CDC - există două sau trei linii gp41, p24, gp120 / gp160 pe bandă;
conform criteriilor FDA americane - pe bandă există două linii p24, p31 și o linie gp41 sau gp120 / gp160.

În 99,9% din cazuri, un rezultat pozitiv al IB indică infecția cu HIV.

În absența liniilor, IB este negativ.

În identificarea liniilor cu gp160, gp120 și gp41- IB este îndoielnic. Un astfel de rezultat poate fi detectat atunci când:

boli oncologice;
sarcina;
transfuzii de sânge frecvente.

În astfel de cazuri, se recomandă efectuarea unei reexaminări folosind un kit de la o altă companie. Dacă, după IB suplimentar, rezultatul rămâne îndoielnic, atunci observarea este necesară timp de șase luni (IB se efectuează la fiecare 3 luni).

Reacția polimerazei în lanț

Un test PCR poate detecta ARN-ul virusului. Sensibilitatea sa este destul de mare și vă permite să detectați infecția cu HIV încă de la 10 zile după infectare. În unele cazuri, PCR poate da rezultate fals pozitive, deoarece sensibilitatea sa ridicată poate reacționa și la anticorpii la alte infecții.

Această tehnică de diagnosticare este costisitoare și necesită echipamente speciale și specialiști cu înaltă calificare. Aceste motive nu fac posibilă efectuarea acesteia în timpul testării în masă a populației.

PCR este utilizată în astfel de cazuri:

pentru a detecta HIV la nou-născuții care s-au născut din mame infectate cu HIV;
pentru a detecta HIV în „perioada fereastră” sau în caz de IB îndoielnic;
pentru a controla concentrația HIV în sânge;
pentru studiul sângelui donatorului.

Doar prin testul PCR, HIV nu este diagnosticat, ci este realizat ca metodă suplimentară de diagnosticare pentru a rezolva situațiile controversate.

Metode expres

Una dintre inovațiile în diagnosticarea HIV a devenit teste rapide, ale căror rezultate pot fi evaluate în 10-15 minute. Cele mai eficiente si precise rezultate se obtin cu teste imunocromatografice bazate pe principiul curgerii capilare. Sunt benzi speciale pe care se aplică sânge sau alte lichide investigate (salivă, urină). În prezența anticorpilor împotriva HIV, după 10-15 minute, pe test apare o bandă colorată și o bandă de control - un rezultat pozitiv. Dacă rezultatul este negativ, apare doar banda de control.

Ca și după testele ELISA, rezultatele testelor rapide trebuie confirmate printr-o analiză IB. Numai atunci poate fi pus un diagnostic de infecție cu HIV.

Există kituri expres pentru testarea acasă. Testul OraSure Technologies1 (SUA) este aprobat de FDA, vândut fără prescripție medicală și poate fi utilizat pentru a detecta HIV. După test, în cazul unui rezultat pozitiv, pacientului i se recomandă să fie supus unei examinări la un centru specializat pentru confirmarea diagnosticului.

Restul testelor pentru uz casnic nu au fost încă aprobate de FDA și pot fi foarte discutabile.

În ciuda faptului că testele rapide sunt inferioare ca precizie față de testele ELISA de generația IV, acestea sunt utilizate pe scară largă pentru testarea suplimentară a populației.

Puteți face teste pentru depistarea infecției cu HIV în orice clinică, spital central raional sau în centre specializate SIDA. Pe teritoriul Rusiei, acestea sunt ținute în mod absolut confidențial sau anonim. Fiecare pacient se poate aștepta să primească sfaturi medicale sau psihologice înainte sau după test. Testele HIV va trebui sa platesti doar in spitalele comerciale, iar in policlinici si spitale de stat se fac gratuit.

Citiți despre modurile în care vă puteți infecta cu HIV și ce mituri există despre posibilitățile de a vă infecta în

1 Setați atribuirea

1.1 Trusa este destinată detectării simultane a anticorpilor împotriva virusurilor imunodeficienței umane de primul și al doilea tip (HIV-1 și HIV-2) și antigenului HIV-1 p24 în ser și plasmă umană „in vitro” prin metoda enzimei indirecte. -test imunosorbent legat.

2 Caracteristicile și principiul de funcționare al ansamblului

2.1 Setul include:

Numele componentei	Cantitate
Imunosorbent	2 tablete
Control pozitiv AT (K + AT)	1 flacon, 3 ml
Probă de control pozitiv de AG (K + AG)	3 flacoane, preparat liofilizat
Control negativ (LA -)	2 flacoane de 3 ml
Soluția conjugată nr. 1 (RC-1)	1 flacon, 12 ml
Conjugatul nr. 2 (Kg-2)	1 flacon, 1 ml
Soluția de diluare a conjugatului nr. 2 (RR-K2)	2 sticle de 18 ml
Soluție tampon de substrat ( BRS)	2 sticle de 18 ml
Cromogen TMB	1 flacon, 1 ml
Concentrat Tween PBS (FSB-T × 25)	2 sticle de 50 ml
Opriți reactivul	1 flacon, 12 ml
Kit tavă de reactiv cu vârfuri pentru pipete multicanal	1 trusa
Film adeziv

2.2 Principalele componente ale trusei ELISA-HIV 1,2 AGAT sunt imunosorbente, soluția de conjugat nr. 1 și conjugatul nr. 2.

Imunosorbent este o placă de polistiren în godeurile căreia este absorbit un amestec de antigene recombinate HIV-1 (gp41) și HIV-2 (gp36) și anticorpi monoclonali la antigenul HIV-1 p24.

Soluția conjugată nr. 1 este un amestec de anticorpi umani monoclonali marcați cu biotină împotriva antigenului p24 HIV-1 și proteine HIV-1 și HIV-2 recombinante marcate cu biotină.

Conjugatul nr. 2 este streptavidina conjugată cu peroxidază de hrean.

Control pozitiv AT- ser din sânge uman care conține anticorpi la HIV-1 și HIV-2, care nu conține anticorpi la hepatita C și Treponema pallidum, antigenul HIV-1 p24 și antigenul HBs, inactivat prin încălzire timp de 3 ore la 56 ºC.

Probă de control pozitiv de AG- ser din sânge uman care conține antigenul nativ HIV-1 p24, lipsit de anticorpi la HIV-1, HIV-2, virusul hepatitei C și antigenul Treponema pallidum și HBs, inactivat prin încălzire timp de 3 ore la 56 ºC.

Control negativ- ser din sânge uman care nu conține anticorpi împotriva antigenului HIV-1, HIV-2, HCV, HIV-1 p24 și antigenului HBs, inactivat prin încălzire timp de 3 ore la 56 ºC.

Principiul setului. Când o soluție de conjugat nr. 1 și probe de ser sanguin infectat sunt adăugate în godeurile plăcii, antigenul p24 se leagă atât de anticorpi specifici din faza solidă, cât și de anticorpi monoclonali biotinilați anti-p24 care fac parte din soluția de conjugat. Numarul 1; Anticorpii specifici HIV se leagă atât la antigenele recombinate HIV-1 și HIV-2, adsorbite pe faza solidă, cât și la antigenele incluși în soluția de conjugat nr. 1, formând complexe antigen-anticorp. Complexele imune de anticorpi specifici anti-p24 și antigenul p24 sunt detectate prin conjugatul #2. După spălarea componentelor nelegate, în godeurile plăcii se adaugă o soluție de substrat de peroxidază (peroxid de hidrogen) și cromogen TMB.

Reacția peroxidazei este oprită prin adăugarea unui reactiv de oprire (soluție de acid sulfuric 0,9 M), iar intensitatea culorii soluției din godeuri este măsurată pe un spectrofotometru ca valoare a densității optice (OD) la o lungime de undă de 450 nm.

Valoarea DO este direct proporțională cu concentrația de anticorpi specifici și/sau antigen p24 dintr-o probă de ser sau plasmă. Cu cât conținutul de anticorpi și/sau antigen p24 din proba de ser este mai mare, cu atât intensitatea colorării este mai mare.

2.3 Setul este conceput pentru ținere 24 de spectacole ELISA: 1 set - 1 bandă (8 găuri). Total - 192 definiții inclusiv probele de control.

3 Precauții la manipularea trusei

3.1 Toate componentele trusei sunt netoxice în concentrațiile utilizate. Cu toate acestea, lucrați cu toate probele de testare de ser de sânge uman (plasmă), care ar trebui considerate ca potențial infecțioase, capabile să stocheze și să transmită HIV, virusul hepatitei B sau orice alt agent cauzator al infecției virale, cu soluții și lichide reziduale, diverse echipamente. care pot fi contaminate procesul de analiză necesită anumite măsuri de siguranță la utilizarea trusei:

Lucrarea trebuie efectuată într-o încăpere special echipată;

Este necesar să se lucreze cu utilizarea echipamentului individual de protecție și luarea măsurilor de precauție în conformitate cu cerințele, și.

3.2 Reactivul stop care conține acid sulfuric este iritant. În caz de contact cu pielea și mucoasele, clătiți imediat cu multă apă.

3.3 Când se lucrează cu un set, locurile de muncă trebuie să fie prevăzute cu ventilație de alimentare și evacuare.

3.4 Toate persoanele care lucrează în laborator cu trusele trebuie să fie supuse unui examen medical obligatoriu în conformitate cu cerințele.

3.5 Deșeurile medicale și/sau trusele expirate neutilizate trebuie eliminate în mod corespunzător.

4 Reguli pentru lucrul cu setul

4.1 Pentru a exclude rezultatele false, probele de testat trebuie să fie pregătite și depozitate în condiții care împiedică dezvoltarea bacteriilor. Este necesar să se clarifice probele de ser care conțin componente de ser agregate sau sedimente prin centrifugare timp de (5-10) minute la o viteză de rotație de 3000 rpm. Probele de ser pot fi păstrate la o temperatură (2-8) ° С timp de cel mult 5 zile. Probele congelate (de preferință până la o temperatură de cel puțin minus 20 ° C) pot fi păstrate cel mult 1 an. Ciclurile repetate de îngheț-dezgheț ale probelor trebuie evitate.

Trebuie amintit că probele cu hemoliză, hiperlipidemie, creștere bacteriană, precum și cele care au fost depozitate timp îndelungat fără înghețare, nu sunt potrivite pentru analiză.

Fiabilitatea rezultatelor depinde de îndeplinirea următoarelor reguli:

Nu este permisă utilizarea kitului după data de expirare, precum și amestecarea componentelor truselor de diferite serii;

Pentru prepararea fiecărui reactiv trebuie utilizat un recipient separat;

Nu tratați toate ustensilele folosite pentru prepararea reactivilor cu dezinfectanți și detergenți. Dacă este necesar, clătiți cu apă de băut, apoi clătiți de cinci ori cu apă distilată;

Pentru a lucra cu cromogenul TMB și PX, este necesar să folosiți recipiente separate pentru soluții, vârfuri de pipetă și vase.

Este necesar să se acorde atenție amestecării minuțioase a reactivilor;

Timpul dintre umplerea și golirea godeurilor plăcii cu soluții și reactivi trebuie să fie de cel puțin 30 s. Uscarea puțurilor nu este permisă în toate etapele ELISA;

Când utilizați mașina de spălat, monitorizați starea recipientului pentru soluția de clătire a plăcilor și furtunurile de conectare: acestea nu trebuie să prezinte semne de creștere a bacteriilor sau fungilor;

Este necesar să se utilizeze pipete automate cu vârfuri înlocuibile, certificate prin valoarea dozei medii și repetabilitatea rezultatelor pipetării (eroarea nu mai mult de 3%);

Tratați dozatoarele și suprafețele de lucru cu o soluție cu o fracție volumică de alcool etilic de 70%. Nu utilizați cloramină și alte substanțe care conțin clor;

Vârfurile de pipetă de unică folosință sunt recomandate pentru manipularea probelor de testare și de control. Fiecare probă de ser, precum și reactivii trusei trebuie prelevate cu un vârf separat.

Când adăugați PK-1 în godeuri, nu atingeți suprafața plăcii și soluția din godeuri cu vârful pipetei.

În timpul analizei, evitați lumina directă a soarelui pe suprafața de lucru.

4.2 La deschiderea și dizolvarea componentelor liofilizate, este necesar să se asigure că nu rămâne substanță uscată pe capacul și pereții flacoanelor.

5 Echipamente și materiale necesare analizei

5.1 Spectrofotometru de scanare verticală, care permite măsurarea densității optice a soluțiilor din godeurile plăcii la o lungime de undă de 450 nm;

Spalator de placi semi sau automat (spalator);

Termostat de aer uscat de tip ТС-80 М2, menținând temperatura (37 ± 1) ° С, sau caracteristici similare;

Pipete automate cu un singur canal cu vârfuri înlocuibile, permițând preluarea volumelor de lichid de la 0,01 la 5,0 ml;

Pipete automate cu 8 canale cu vârfuri înlocuibile, permițând preluarea volumelor de lichid de până la 0,5 ml;

Cilindru gradat cu o capacitate de 2000 ml;

Balon de laborator cu o capacitate de 2000 ml;

Flacoane de sticlă cu o capacitate de 20 ml;

Tavi pentru reactivi sau vase Petri (diametru 100 mm);

Vată absorbantă medicală;

Hârtie de filtru;

Mănuși de cauciuc chirurgicale;

O soluție cu o fracție volumică de alcool etilic 70%;

O soluție cu o fracție de masă de peroxid de hidrogen 6%;

apă deionizată sau distilată;

Recipient de colectare a deșeurilor solide;

Recipient pentru scurgerea deșeurilor lichide.

6 Pregătirea pentru analiză

6.1 Înainte de analiză, scoateți trusa de reactivi din frigider, deschideți capacul cutiei și păstrați componentele kit-ului la temperatură (18-25) ° С timp de 30 min.

Amestecați bine toate probele de ser (plasmă) și reactivii înainte de analiză.

Consumul de reactivi pentru setul de analiză, care este determinat de numărul de benzi utilizate, este prezentat în Tabelul A.1 din Anexa A.

6.2 Pregătirea soluției de spălare a plăcilor

Atenţie! Preparați soluția de spălare a plăcii cu 15 minute înainte de începerea analizei!

Dacă o sticlă cu FSB-T × 25 conține un precipitat, acesta trebuie încălzit înainte de utilizare la o temperatură de (37 ± 1) ° С până când precipitatul este complet dizolvat. Adăugați conținutul unei sticle cu FSB-T × 25 într-un cilindru de măsurare cu o capacitate de 2000 ml, apoi adăugați apă distilată la semn 1250 mlși amestecați ușor soluția. Soluția poate fi păstrată la o temperatură de (2-8) °C timp de 72 de ore.

În cazul utilizării uneia sau mai multor benzi, agitați puternic conținutul flaconului cu FSB-T × 25 timp de (20-30) s, introduceți volumul necesar de soluție (Tabelul A.1) într-un pahar de măsurat sau cilindru, adăugați cantitatea necesară de apă distilată și amestecați soluția... FSB-T × 25 neutilizat poate fi păstrat într-un flacon închis la o temperatură de (2-8) ° С pe durata de valabilitate a trusei.

6.3 Prepararea imunosorbantului

Imunosorbentul este gata de utilizare.

Deschideți pachetul și instalați numărul necesar de benzi pe cadru. Păstrați benzile rămase într-o pungă închisă ermetic cu un desicant la (2-8) °C timp de 3 luni.

6.4 Prepararea K + AT, K -, RK-1, RR-K2, BRS și reactiv de oprire

K + AT, K -, RK-1, PP-K2, BRS și reactivul de oprire sunt gata de utilizare.

Atenţie!Într-o sticlă cu RK-1, este posibilă precipitarea. Pentru analiză trebuie utilizat un supernatant.

RK-1, RR-K2, BRS și reactivul stop neutilizat, după deschiderea flacurilor, pot fi păstrate în flacoane închise la o temperatură de (2-8) °C pe durata de valabilitate a trusei.

Restul de K + AT și K - după deschiderea flaconului, poate fi păstrat în flacoane închise la o temperatură de (2-8) ° C pe durata de valabilitate a trusei.

6.5 Prepararea soluției de K + AG

Atenţie! Preparați soluția K + AG cu 15 minute înainte de începerea analizei!

Pentru a restabili K + AG liofilizat, înainte de a deschide sticla, atingeți ușor pentru a scutura particulele care aderă de pereții sticlei sau ai plutei. Deschideți sticla și puneți dopul cu capul în jos pe o suprafață uscată. Adăugați 0,8 ml de apă distilată în sticlă. Închideți sticla cu dop, incubați timp de 10 minute la o temperatură de (18-25) ° С și înclinați ușor și rotiți sticla, amestecați conținutul acesteia până se dizolvă complet, evitând formarea spumei.

K + AG reconstituit poate fi păstrat într-o sticlă închisă la o temperatură de (2-8) ° С timp de o lună, la o temperatură de minus 20 ° С timp de șase luni. Este permisă o singură congelare-dezghețare a K + AG recuperat.

6.6 Prepararea soluției Kg-2 în diluție de lucru

Se ia volumul indicat in tabelul A.1 din sticla cu Kg-2 si se transfera in sticla cu PP-K2. Amestecați bine conținutul sticlei, evitând formarea spumei.

Dacă se utilizează una sau mai multe benzi, luați cantitatea necesară de PP-K2 într-o sticlă curată, adăugați Kg-2 conform tabelului A.1 și amestecați soluția, evitând formarea spumei.

Atenţie! O soluție de Kg-2 într-o diluție de lucru se prepară imediat înainte de utilizare! O soluție de Kg-2 într-o diluție de lucru poate fi păstrată timp de 15 minute la o temperatură de (18-25) ° C. Folosiți numai baie de reactiv nouă și vârfuri noi!

Restul de Kg-2 poate fi păstrat într-un flacon închis la o temperatură de (2-8) °C pe durata de valabilitate a trusei.

6.7 Pregătirea soluției de lucru a substratului

Flaconul cu cromogenul TMB trebuie încălzit înainte de utilizare la o temperatură de (37 ± 1)° Din până când cristalele sunt complet dizolvate.

Luați volumul indicat în tabelul A.1 din flaconul cu cromogenul TMB și transferați-l în flaconul cu BRS. Amestecați bine conținutul sticlei, evitând formarea spumei.

Dacă se utilizează una sau mai multe benzi, luați cantitatea necesară de BRS într-un flacon curat, adăugați cromogenul TMB în conformitate cu Tabelul A.1 și amestecați soluția, evitând formarea de spumă.

Atenţie! Pregătiți soluția de lucru a substratului imediat înainte de utilizare într-un loc întunecat! Soluția poate fi păstrată timp de 20 de minute la o temperatură de (18-25) ° C într-un loc întunecat.

Soluția trebuie protejată de lumină și contactul cu metale sau ionii metalici. Soluția de substrat trebuie să fie incoloră înainte de utilizare. Vasele care vor intra în contact cu soluția de substrat în timpul reacției trebuie spălate fără utilizarea detergenților sintetici. Folosiți numai baie de reactiv nouă și vârfuri noi!

Restul cromogenului TMB poate fi păstrat într-un flacon închis la o temperatură de (2-8) ° С pe durata de valabilitate a kitului.

7 Cerințe pentru spălarea plăcilor

În toate etapele de spălare, este necesar să se controleze umplerea tuturor puțurilor și îndepărtarea completă (aspirația) a lichidului din acestea;

Este necesar să umpleți toate godeurile cu o soluție până la refuz la fiecare spălare (0,30-0,35 ml per godeu), fără preaplin și revărsare de lichid din godeurile adiacente;

Este necesar să se incubeze godeurile umplute cu soluția de spălare a plăcilor timp de 30 s;

La fiecare aspiratie se indeparteaza cu grija lichidul ramas din godeuri batand rama cu benzi in pozitie inversata pe hartia de filtru pliata de mai multe ori, asezata pe o foaie de polietilena;

Clătirea slabă a plăcii va duce la rezultate incorecte.

8 Analiză

8.1 Adăugați în oricare două godeuri ale plăcii 0,07 ml(70 μl) K + AT, în celelalte două găuri - fiecare 0,07 ml(70 μl) K + AG, în celelalte trei găuri - fiecare 0,07 ml(70 μl) LA - .

Atenţie! Când setați ELISA pe o bandă, este permisă utilizarea a două godeuri pentru K -, una pentru K + AT și una pentru K + AG.

Adăugați în godeurile rămase ale plăcii 0,07 ml(70 μl) din probele studiate de ser de sânge uman (plasmă).

Atenţie! Fiecare probă trebuie luată cu un vârf de unică folosință!

8.2 În toate godeurile plăcii deasupra probelor de control și a probelor de sânge de ser (plasmă) de testare pe loc depozit de către 0,05 ml(50 μl) RC-1... Se amestecă conținutul godeurilor atingând ușor marginile plăcii.

8.3 (37 ± 1) ° Din cadrul 60 de minute.

Atenţie!(1-2) minute înainte de sfârșitul incubației, se prepară o soluție Kg-2 într-o diluție de lucru (secțiunea 6.6).

8.4 Îndepărtați conținutul godeurilor folosind o șaibă, apoi clătiți godeurile plăcii cu o soluție pentru spălarea plăcii (secțiunea 6.2) de sapte ori.

8.5 Adăugați în toate godeurile plăcii până la 0,15 ml(150 μl) soluție Kg-2în creşterea de lucru (p 6.6).

8.6 Acoperiți farfuria cu folie sau acoperiți cu un capac și incubați într-un termostat la o temperatură (37 ± 1) ° Din cadrul 10 minute.

8.7 Îndepărtați conținutul godeurilor plăcii folosind o spălătorie, apoi clătiți godeurile plăcii cu o soluție pentru spălarea plăcii (secțiunea 6.2) de sapte ori.

8.8 Adăugați în toate godeurile plăcii 0,15 ml(150 μl) soluția de lucru a substratului(clauza 6.7).

La prepararea unei soluții de lucru a substratului (clauza 6.7) f lacul cu cromogen TMB trebuie încălzit înainte de utilizare timp de (3-5) min la o temperatură de (37± 1) ° C până când cristalele sunt complet dizolvate.

8.9 Acoperiți farfuria cu folie sau acoperiți cu un capac și incubați într-un termostat la o temperatură (37 ± 1) ° CU într-un loc întunecat pentru 15 minute.

Atenţie! La sfârșitul incubării în godeurile cu probe de ser care conțin anticorpi la HIV-1 și/sau HIV-2 și/sau antigenul HIV-1 p24, culoarea soluției se va schimba de la incolor la albastru cu intensitate diferită în funcție de concentrația de anticorpi și/sau antigen în proba de ser de testat.

8.10 Opriți reacția peroxidazei prin adăugarea în toate godeurile 0,05 ml(50 μl) opriți reactivul.

Atenţie!În godeurile cu probe de ser care conțin anticorpi la HIV-1 și/sau HIV-2 și/sau antigenul HIV-1 p24, culoarea soluției se va schimba de la albastru la galben cu intensitate diferită.

8.11 Nu mai târziu de (1-2) minute după oprirea reacției, determinați OD în godeuri într-un mod cu o singură lungime de undă la o lungime de undă 450 nm.

9 Prelucrarea rezultatelor analizei

9.2 Luați în considerare rezultatele numai dacă:

Valoarea Opsr K - nu depășește 0,2 OE;

Fiecare valoare individuală a OD K - nu ar trebui să se abate de la ODsr K - cu mai mult de 30%. Dacă una dintre cele trei valori ale OP K - depășește această limită, ar trebui exclusă din calculul OPsr K -. Dacă două dintre cele trei valori ale OD K - depășesc această limită, analiza trebuie repetată pe reactivii noului kit;

Valoarea Opsr K + AT este mai mare de 1,0 OE;

Valoarea Opsr K + AG este mai mare de 1,0 OU.

9.3 Dacă sunt îndeplinite condițiile de mai sus, se calculează valoarea critică (OPcrit.), OE, conform formulei (1):

OPcrit. = OPsr K - + 0,14 (1).

10 Performanță analitică și diagnostică

Sensibilitate trusa de reactivi ELISA-HIV 1,2 AGAT pentru detectarea antigenului p24 HIV-1 -

Specificitate trusa de reactivi ELISA-HIV 1,2 AGAT- 100% Standard AT (-) HIV. Panou standard de seruri care nu conțin anticorpi împotriva virusului imunodeficienței umane tipurile 1 și 2 (HIV-1,2) și antigenul HIV-1 (p24).OSO42-28-214-02P.Kat # INS-20. CJSC MBS.

11 Formular de eliberare a trusei

11.1 Setul este disponibil în cinci opțiuni de configurare:

1 set de 1P - analiză manuală. Kitul este conceput pentru 12 rulări ELISA pe o placă pliabilă: 1 set - 1 bandă (8 găuri). În total - 96 determinări, inclusiv probe de control;

2 set 2M - analiza manuala. Kitul este conceput pentru a efectua 2 seturi de ELISA pe plăci monolitice: 1 setare - 1 placă. În total - 192 determinări, inclusiv probe de control;

3 set 2P- efectuarea analizei manual. Setul este conceput pentru a fi transportat 24 de spectacole ELISA pentru 2 pliabil x farfurii: 1 set - 1 bandă (8 găuri). Total - 192 de definiții inclusiv probe de control;

4 set А2М - analiză pe un analizor automat. Kitul este conceput pentru a efectua 2 seturi de ELISA pe plăci monolitice: 1 setare - 1 placă. În total - 192 determinări, inclusiv probe de control;

5 set A2P - analiză pe un analizor automat. Kitul este conceput pentru 24 de rulări ELISA pe 2 plăci pliabile: 1 set - 1 bandă (8 godeuri). În total - 192 determinări, inclusiv probe de control.

12 Condiții de depozitare și utilizare a trusei

12.1 Setul trebuie depozitat într-o cameră curată, ferită de umiditate și lumină, la o temperatură de (2-8) ° С pe toată durata de valabilitate. Nu înghețați componentele kit-ului.

12.2 Pentru a obține rezultate fiabile, este necesară respectarea strictă a instrucțiunilor de utilizare a trusei.

12.3 Data expirării trusei - 12 luni.

Anexa A

Tabelul A.1 - Consumul de reactivi pentru trusa ELISA

reactiv, ml

Numar benzi folosite, buc.

Pregătirea soluției de spălare a plăcilor

FSB-T × 25

Distilat

apă

Prepararea soluției Kg-2 în diluție de lucru

RR-K2

Pregătirea soluției de lucru a substratului

Cromogen TMB

Bibliografie

	Reguli sanitare	Ordinul Ministerului Sănătății al Republicii Belarus din 16 decembrie 1998 nr. 351 Cu privire la revizuirea reglementărilor departamentale care reglementează problemele legate de HIV/SIDA
	Ordinul Ministerului Sănătății al Republicii Belarus din 25 noiembrie 2002 nr. 165 Despre dezinfecția și sterilizarea de către instituțiile medicale
	Rezoluția Ministerului Sănătății al Republicii Belarus din 28 aprilie 2010 Nr. 47 La aprobarea Instrucțiunii privind procedura de efectuare a examinărilor medicale obligatorii ale lucrătorilor și invalidarea unor decrete ale Ministerului Sănătății al Republicii Belarus