Šiuolaikiniai ŽIV infekcijos diagnozavimo metodai. Šiuolaikiniai ŽIV infekcijos diagnostikos metodai Analitinė ir diagnostinė charakteristika

1 Rinkimo paskirtis

1.1 Rinkinys skirtas vienu metu nustatyti antikūnus prieš 1 ir 2 tipų žmogaus imunodeficito virusus (ŽIV-1 ir ŽIV-2) ir ŽIV-1 p24 antigeną žmogaus serume ir kraujo plazmoje „in vitro“, naudojant netiesioginio fermento metodą. susietas imunosorbentų tyrimas.

2 Rinkinio charakteristikos ir veikimo principas

2.1 Nustatyti turinį:

Komponento pavadinimas	Kiekis
Imunosorbentas	2 tabletės
Teigiamas kontrolinis mėginys AT (K + AT)	1 buteliukas, 3 ml
Teigiamas AG kontrolinis mėginys (K + AG)	3 buteliukai, liofilizuotas preparatas
Neigiamas kontrolinis mėginys (Į -)	2 buteliukai po 3 ml
Konjugato tirpalas Nr. 1 (RK-1)	1 buteliukas, 12 ml
Konjugatas Nr. 2 (Kg-2)	1 buteliukas, 1 ml
Konjugato Nr. 2 skiedimo tirpalas (RR-K2)	2 buteliukai po 18 ml
Buferinis tirpalas substratui ( BRS)	2 buteliukai po 18 ml
Chromogenas TMB	1 buteliukas, 1 ml
Fosfato buferio fiziologinio tirpalo koncentratas su Tween (FSB-T×25)	2 buteliukai po 50 ml
Sustabdykite reagentą	1 buteliukas, 12 ml
Reagento vonios rinkinys su daugiakanaliais pipetės antgaliais	1 komplektas
Lipni plėvelė

2.2 Pagrindiniai „ELISA-HIV 1,2 AGAT“ rinkinio komponentai yra imunosorbentas, konjugato tirpalas Nr. 1 ir konjugatas Nr. 2.

Imunosorbentas yra polistireno plokštelė, kurios šuliniuose adsorbuojamas rekombinantinių ŽIV-1 (gp41) ir ŽIV-2 (gp36) antigenų mišinys bei monokloniniai antikūnai prieš ŽIV-1 p24 antigeną.

Konjugato tirpalas Nr. 1 yra biotinu pažymėto monokloninio mišinys žmogaus antikūnai prieš ŽIV-1 p24 antigeną ir biotinu pažymėtus rekombinantinius ŽIV-1 ir ŽIV-2 baltymus.

Konjugatas Nr. 2 yra streptavidinas, konjuguotas su krienų peroksidaze.

Teigiamas kontrolinis mėginys AT– žmogaus kraujo serumas, kuriame yra antikūnų prieš ŽIV-1 ir ŽIV-2, neturintį antikūnų prieš hepatito C virusą ir Treponema pallidum, ŽIV-1 p24 antigeną ir HBs antigeną, inaktyvuotas kaitinant 3 valandas 56 ºC temperatūroje.

Teigiamas AG kontrolinis mėginys– žmogaus kraujo serumas, kuriame yra natūralaus ŽIV-1 p24 antigeno, neturinčio antikūnų prieš ŽIV-1, ŽIV-2, hepatito C virusą ir Treponema pallidum bei HBs antigeną, inaktyvuotas kaitinant 3 valandas 56 ºC temperatūroje.

Neigiamas kontrolinis mėginys– žmogaus kraujo serumas, kuriame nėra antikūnų prieš ŽIV-1, ŽIV-2, HCV, ŽIV-1 p24 antigeną ir HBs antigeną, inaktyvuotas kaitinant 3 valandas 56 ºC temperatūroje.

Komplekto veikimo principas.Į lėkštelės šulinėlius įpilant konjugato tirpalo Nr. 1 ir serumo mėginių užkrėstas kraujas p24 antigenas jungiasi ir su specifiniais antikūnais ant kietos fazės, ir su monokloniniais biotinilintais anti-p24 antikūnais, įtrauktais į konjugato tirpalą Nr. 1; ŽIV specifiniai antikūnai jungiasi ir su rekombinantiniais ŽIV-1 ir ŽIV-2 antigenais, adsorbuotais ant kietosios fazės, ir su antigenais, esančiais konjugato tirpale Nr. 1, sudarydami antigeno-antikūno kompleksus. Konjugatu Nr. 2 aptinkami anti-p24 specifinių antikūnų ir p24 antigeno imuniniai kompleksai. Nuplovus nesurištus komponentus, į plokštelės šulinėlius įpilama peroksidazės substrato (vandenilio peroksido) ir TMB chromogeno tirpalo.

Peroksidazės reakcija sustabdoma pridedant stabdymo reagento (0,9 M sieros rūgšties tirpalo), o tirpalo spalvos intensyvumas šulinėliuose matuojamas spektrofotometru kaip optinio tankio (OD) vertė esant 450 nm bangos ilgiui.

OD vertė yra tiesiogiai proporcinga specifinių antikūnų ir (arba) p24 antigeno koncentracijai serume arba plazmos mėginyje. Kuo didesnis antikūnų ir (arba) p24 antigeno kiekis serumo mėginyje, tuo didesnis dažymo intensyvumas.

2.3 Rinkinys skirtas atlikti 24 kūriniai ELISA: 1 rinkinys – 1 juostelė (8 skylės). Iš viso – 192 apibrėžimai, įskaitant kontrolinius mėginius.

3 Atsargumo priemonės dirbant su rinkiniu

3.1 Visi rinkinio komponentai naudojamomis koncentracijomis yra netoksiški. Tačiau dirbkite su visais tiriamaisiais žmogaus kraujo serumo (plazmos) mėginiais, kurie turėtų būti laikomi potencialiai užkrėstais, galinčiais saugoti ir perduoti ŽIV, hepatito B virusą ar bet kurį kitą patogeną. virusinė infekcija, su atliekų tirpalais ir skysčiais, įvairi įranga, kuri gali būti užteršta analizės proceso metu, naudojant rinkinį reikalingos tam tikros saugos priemonės:

Darbai turi būti atliekami specialiai įrengtoje patalpoje;

Būtina dirbti naudojant priemones asmeninė apsauga ir imtis atsargumo priemonių pagal , , ir reikalavimus.

3.2 Turi stabdymo reagentą, kuriame yra sieros rūgšties dirginantis poveikis. Patekus ant odos ir gleivinių, nedelsiant nuplauti dideliu kiekiu vandens.

3.3 Dirbant su komplektu, darbo vietose turi būti įrengta tiekiamoji ir ištraukiamoji ventiliacija.

3.4 Visi asmenys, dirbantys laboratorijoje su rinkiniais, privalo atlikti privalomą medicininę apžiūrą pagal reikalavimus.

3.5 Medicininių atliekų ir (arba) nenaudojamų rinkinių, kurių galiojimo laikas pasibaigęs, šalinimas turi būti atliekamas laikantis reikalavimų.

4 Darbo su rinkiniu taisyklės

4.1 Siekiant išvengti klaidingų rezultatų, tiriamieji mėginiai turi būti ruošiami ir laikomi tokiomis sąlygomis, kurios neleidžia daugintis bakterijoms. Serumo mėginius, kuriuose yra agreguotų serumo komponentų arba nuosėdų, reikia nuskaidrinti centrifuguojant (5–10) minučių 3000 aps./min. greičiu. Serumo mėginiai gali būti laikomi (2-8) °C temperatūroje ne ilgiau kaip 5 dienas. Užšaldytus mėginius (geriausia ne žemesnėje kaip minus 20 °C temperatūroje) galima laikyti ne ilgiau kaip 1 metus. Reikėtų vengti kartotinių mėginių užšaldymo ir atšildymo ciklų.

Reikia atsiminti, kad mėginiai su hemolize, hiperlipidemija, bakterijų augimu, taip pat ilgai laikomi neužšalę analizei netinka.

Rezultatų patikimumas priklauso nuo šių taisyklių:

Neleidžiama naudoti rinkinio pasibaigus galiojimo laikui, taip pat maišyti skirtingų serijų rinkinių komponentus;

Kiekvienam reagentui paruošti turi būti naudojamas atskiras indas;

Neapdorokite visų indų, naudojamų reagentams ruošti, dezinfekavimo ir plovimo priemonėmis. Jei reikia, nuplaukite geriamuoju tekančiu vandeniu ir penkis kartus nuplaukite distiliuotu vandeniu;

Norint dirbti su TMB ir PX chromogenu, tirpalams, pipetės antgaliams ir lėkštelėms reikia naudoti atskirus indus.

Būtina atkreipti dėmesį į kruopštų reagentų maišymą;

Laikas nuo lėkštelės šulinėlių užpildymo iki ištuštinimo tirpalais ir reagentais turi būti ne trumpesnis kaip 30 s. Šulinių džiovinimas neleidžiamas visuose ELISA etapuose;

Naudodami poveržlę stebėkite tabletės plovimo tirpalo talpyklos būklę ir jungiamąsias žarnas: jose neturėtų būti bakterijų ar grybelių augimo požymių;

Būtina naudoti automatines pipetes su keičiamais antgaliais, sertifikuotas vidutinei dozei ir pipetavimo rezultatų konsistencijai (paklaida ne daugiau 3%);

Dozatorius ir darbinius paviršius apdorokite tirpalu, kuriame yra 70 % etilo alkoholio. Nenaudokite chloramino ar kitų chloro turinčių medžiagų;

Dirbant su tiriamaisiais ir kontroliniais mėginiais, rekomenduojama naudoti vienkartinius pipetės antgalius. Kiekvienas serumo mėginys, taip pat rinkinio reagentai turi būti renkami atskiru antgaliu.

Pildami RK-1 į duobutes, pipetės antgaliu nelieskite plokštelės paviršiaus ir duobutėse esančio tirpalo.

Analizės metu reikia vengti tiesioginių saulės spindulių ant darbinio paviršiaus.

4.2 Atidarant ir tirpinant liofilizuotus komponentus, būtina užtikrinti, kad ant butelių dangtelių ir sienelių neliktų sausųjų medžiagų.

5 Analizei reikalinga įranga ir medžiagos

5.1 Vertikalus skenuojantis spektrofotometras, leidžiantis išmatuoti tirpalų optinį tankį plokštelės šulinėliuose esant 450 nm bangos ilgiui;

Pusiau arba automatinis įrenginys tablečių plovimui (skalbimo mašina);

Sauso oro termostatas TS-80 M2 tipo, palaikantis (37±1) °C temperatūrą arba panašias į ją charakteristikas;

Vieno kanalo automatinės pipetės su keičiamais antgaliais, leidžiančios ištraukti skysčio tūrį nuo 0,01 iki 5,0 ml;

8 kanalų automatinės pipetės su keičiamais antgaliais, leidžiančios ištraukti iki 0,5 ml skysčio tūrį;

2000 ml talpos matavimo cilindras;

2000 ml talpos laboratorinė kolba;

20 ml talpos stikliniai buteliai;

Padėklai reagentams arba Petri lėkštelėms (skersmuo 100 mm);

Medicininė higroskopinė vata;

Filtravimo popierius;

Guminės chirurginės pirštinės;

Tūrinės frakcijos tirpalas etilo alkoholis 70 %;

Sprendimas su masės dalis vandenilio peroksidas 6%;

Dejonizuotas arba distiliuotas vanduo;

Konteineris kietosioms atliekoms surinkti;

Konteineris skystoms atliekoms nusausinti.

6 Pasiruošimas analizei

6.1 Prieš atlikdami analizę, išimkite reagentų rinkinį iš šaldytuvo, atidarykite dėžutės dangtį ir laikykite rinkinio komponentus temperatūroje. (18-25) °C 30 min.

Prieš tyrimą kruopščiai sumaišykite visus serumo (plazmos) mėginius ir reagentus.

Reagentų sunaudojimas bandymo rinkinyje, kuris nustatomas pagal naudojamų juostelių skaičių, nurodytas A priedo A.1 lentelėje.

6.2 Tirpalo ruošimas plokštelei plauti

Dėmesio! Plokštelės plovimo tirpalą paruoškite likus 15 minučių iki analizės pradžios!

Jei buteliuke su FSB-T×25 yra nuosėdų, prieš naudojimą jį reikia pašildyti (37±1) °C temperatūroje, kol nuosėdos visiškai ištirps. Buteliuko su FSB-T×25 turinį supilkite į 2000 ml talpos matavimo cilindrą, tada įpilkite distiliuoto vandens iki žymės. 1250 ml ir atsargiai sumaišykite tirpalą. Tirpalas gali būti laikomas (2–8) °C temperatūroje 72 valandas.

Jei naudojama viena ar daugiau juostelių, buteliuko turinį su FSB-T×25 stipriai purtykite (20-30) s, į matavimo taurelę arba cilindrą supilkite reikiamą tirpalo tūrį (A.1 lentelė), įpilkite reikiamą kiekį distiliuoto vandens ir sumaišykite tirpalą. Nepanaudotą FSB-T×25 galima laikyti uždarytame buteliuke (2-8) °C temperatūroje per visą rinkinio galiojimo laiką.

6.3 Imunosorbento paruošimas

Imunosorbentas yra paruoštas naudoti.

Atidarykite pakuotę ir įdėkite reikiamą juostelių skaičių ant rėmo. Likusias juosteles laikykite sandariai uždarytame maišelyje su sausikliu (2-8) °C temperatūroje 3 mėnesius.

6.4 K + AT, K -, RK-1, RR-K2, BRS ir sustabdymo reagento paruošimas

K + AT, K – , RK-1, RR-K2, BRS ir sustabdymo reagentas yra paruošti naudoti.

Dėmesio! Butelyje su RK-1 gali susidaryti nuosėdų. Analizei turi būti naudojamas supernatantas.

Nepanaudoti RK-1, RR-K2, BRS ir stabdymo reagentas atidarius buteliukus gali būti laikomi uždarytuose buteliukuose (2-8) °C temperatūroje per visą rinkinio tinkamumo laiką.

Likusią K + AT ir K dalį - atidarius buteliuką, visą rinkinio tinkamumo laiką galima laikyti uždarytuose buteliukuose (2-8) °C temperatūroje.

6.5 K + AG tirpalo paruošimas

Dėmesio! Paruoškite K + AG tirpalą likus 15 minučių iki analizės pradžios!

Norėdami atkurti liofilizuotą K + AG, prieš atidarydami buteliuką lengvai patapšnokite, kad pašalintumėte daleles, prilipusias prie buteliuko sienelių arba kamščio. Atidarykite buteliuką ir uždėkite kamštį aukštyn kojomis ant sauso paviršiaus. Į butelį įpilkite 0,8 ml distiliuoto vandens. Buteliuką užkimšti kamščiu, palaikyti 10 minučių (18-25) °C temperatūroje ir buteliuką atsargiai pakreipti bei pasukioti, maišyti jo turinį, kol visiškai ištirps, išvengiant putų susidarymo.

Sumažintas K + AG gali būti laikomas uždarytame buteliuke (2-8) °C temperatūroje vieną mėnesį, minus 20 °C temperatūroje – šešis mėnesius. Leidžiamas vienkartinis sumažinto K + AG užšaldymas-atšildymas.

6.6 Kg-2 tirpalo ruošimas darbiniame praskiedime

Iš buteliuko su Kg-2 paimkite A.1 lentelėje nurodytą tūrį ir perpilkite į butelį su PP-K2. Buteliuko turinį gerai išmaišykite, kad nesusidarytų putos.

Jei naudojate vieną ar daugiau juostelių, į švarų buteliuką supilkite reikiamą kiekį PP-K2, įpilkite Kg-2 pagal A.1 lentelę ir sumaišykite tirpalą, kad nesusidarytų putos.

Dėmesio! Kg-2 tirpalas darbiniame praskiedime ruošiamas prieš pat naudojimą! Kg-2 tirpalas darbiniame praskiedime gali būti laikomas 15 minučių (18-25) °C temperatūroje. Naudokite tik naują reagento vonią ir naujus patarimus!

Likusią Kg-2 dalį galima laikyti uždarytame buteliuke (2–8) °C temperatūroje per visą rinkinio tinkamumo laiką.

6.7 Darbinio pagrindo tirpalo paruošimas

Prieš naudojimą buteliuką su TMB chromogenu reikia pašildyti iki (37±1)° Kol kristalai visiškai ištirps.

Iš buteliuko su TMB chromogenu paimkite A.1 lentelėje nurodytą tūrį ir supilkite jį į buteliuką su BRS. Buteliuko turinį gerai išmaišykite, kad nesusidarytų putos.

Jei naudojama viena ar daugiau juostelių, reikiamą BRS kiekį supilkite į švarų butelį, įpilkite TMB chromogeno pagal A.1 lentelę ir sumaišykite tirpalą, kad nesusidarytų putos.

Dėmesio! Pagrindo darbinis tirpalas ruošiamas prieš pat naudojimą nuo šviesos apsaugotoje vietoje! Tirpalą galima laikyti 20 minučių (18-25) °C temperatūroje nuo šviesos apsaugotoje vietoje.

Tirpalas turi būti apsaugotas nuo šviesos ir sąlyčio su metalais ar metalo jonais. Prieš naudojimą substrato tirpalas turi būti bespalvis. Indai, kurie reakcijos metu susilies su substrato tirpalu, turi būti plaunami nenaudojant sintetinių ploviklių. plovikliai. Naudokite tik naują reagento vonią ir naujus patarimus!

Likusią TMB chromogeno dalį galima laikyti uždarytame buteliuke (2–8) °C temperatūroje iki rinkinio galiojimo pabaigos datos.

7 Plokštelės plovimo reikalavimai

Visuose plovimo etapuose būtina kontroliuoti visų šulinių užpildymą ir visiškas pašalinimas skysčio (siurbimo) iš jų;

Kiekvieno plovimo metu būtina užpildyti visas duobutes tirpalu iki kraštų (0,30-0,35 ml šuliniui), neperpilant ir nepraleidžiant skysčio iš gretimų šulinių;

Plokštelės plovimo tirpalu užpildytus šulinius reikia palaikyti 30 s;

Kiekvieno siurbimo metu atsargiai pašalinkite likusį skystį iš šulinių, juostelėmis apverstoje padėtyje bakstelėdami į rėmą ant kelis kartus sulankstyto filtravimo popieriaus, padėto ant polietileno lakšto;

Netinkamas lėkštės plovimas lemia neteisingus rezultatus.

8 Analizės atlikimas

8.1 Supilkite į bet kuriuos du lėkštės šulinukus 0,07 ml(70 µl) K + AT, kitose dviejose skylėse – kiekviena 0,07 ml(70 µl) K + AG, kitose trijose skylėse – kiekviena 0,07 ml(70 µl) KAM - .

Dėmesio! Atliekant ELISA vienoje juostelėje, leidžiama naudoti du šulinius K – -, vieną šulinėlį K + AT ir vieną šulinėlį K + AG.

Supilkite į likusius lėkštės šulinėlius 0,07 ml(70 µl) tirtų žmogaus kraujo serumo (plazmos) mėginių.

Dėmesio! Kiekvienas mėginys turi būti paimtas su vienkartiniu antgaliu!

8.2 Visuose plokštelės šuliniuose ant kontrolinių mėginių ir tiriamųjų kraujo serumo (plazmos) mėginių iškarto deponuoti iki 0,05 ml(50 µl) RK-1. Švelniai bakstelėdami lėkštės kraštus sumaišykite šulinėlių turinį.

8.3 (37 ± 1) ° Iš vidaus 60 min.

Dėmesio!(1–2) minutes iki inkubacijos pabaigos paruoškite Kg-2 tirpalą darbiniame praskiedime (6.6 skirsnis).

8.4 Naudodami poveržlę pašalinkite šulinėlių turinį, tada išplaukite plokštelės šulinukus plokštelei skirtu tirpalu (6.2 skirsnis). septynis kartus.

8.5 Supilkite į visus lėkštės šulinėlius 0,15 ml(150 µl) tirpalo Kg-2 darbiniame skiedime (6.6 punktas).

8.6 Uždenkite plokštę plėvele arba uždarykite dangčiu ir inkubuokite termostate esant temperatūrai (37 ± 1) ° Iš vidaus 10 min.

8.7 Išimkite plokštelės šulinėlių turinį naudodami poveržlę, tada išplaukite plokštelės šulinukus plokštelės plovimo tirpalu (6.2 skirsnis). septynis kartus.

8.8 Supilkite į visus lėkštės šulinėlius 0,15 ml(150 µl) substrato darbinis tirpalas(6.7 punktas).

Ruošiant darbinį pagrindo tirpalą (6.7 punktas) f Lakas su TMB chromogenu prieš naudojimą turi būti pašildytas (3-5) minutes (37± 1) ° C, kol kristalai visiškai ištirps.

8.9 Uždenkite plokštę plėvele arba uždarykite dangčiu ir inkubuokite termostate esant temperatūrai (37 ± 1) ° SU nuo šviesos apsaugotoje vietoje 15 minučių.

Dėmesio! Pasibaigus inkubacijai duobutėse su serumo mėginiais, kuriuose yra antikūnų prieš ŽIV-1 ir (arba) ŽIV-2, ir (arba) ŽIV-1 p24 antigeną, tirpalo spalva pasikeis iš bespalvės į mėlyną įvairaus intensyvumo, priklausomai nuo koncentracijos. antikūnų ir (arba) antigeno kiekis tiriamame serumo mėginyje.

8.10 Sustabdykite peroksidazės reakciją pridėdami 0,05 ml(50 µl) sustabdyti reagentą.

Dėmesio!Šulinėliuose su serumo mėginiais, kuriuose yra antikūnų prieš ŽIV-1 ir (arba) ŽIV-2 ir (arba) ŽIV-1 p24 antigeną, tirpalo spalva pasikeis iš mėlynos į įvairaus intensyvumo geltoną.

8.11 Ne vėliau kaip per (1-2) minutes po reakcijos sustabdymo, šulinėlių OD nustatykite vienos bangos režimu, esant bangos ilgiui. 450 nm.

9 Analizės rezultatų apdorojimas

9.2 Į rezultatus atsižvelgiama tik tuo atveju, jei:

OPsr K reikšmė - neviršija 0,2 OE;

Kiekviena atskira OP K reikšmė - neturėtų nukrypti nuo OPsr K - daugiau nei 30%. Jei viena iš trijų OP K verčių viršija šią ribą, ji turėtų būti neįtraukta į OPsr K - skaičiavimą. Jei dvi iš trijų OD K verčių yra už šios ribos, analizę reikia pakartoti naudojant naujo rinkinio reagentus;

OPsr K + AT reikšmė yra didesnė nei 1,0 OE;

OPsr K + AG vertė yra didesnė nei 1,0 OU.

9.3 Jei tenkinamos pirmiau nurodytos sąlygos, apskaičiuokite kritinę vertę (OPcrit.), OE pagal (1) formulę:

OPcrit. = OPsr K - + 0,14 (1).

10 Analitinės ir diagnostinės charakteristikos

Jautrumas reagentų rinkinys ELISA-ŽIV 1.2 AGATŽIV-1 p24 antigenui nustatyti –

Specifiškumas reagentų rinkinys ELISA-ŽIV 1.2 AGAT– 100% AT(-)ŽIV standartas. Standartinė serumų grupė, kurioje nėra antikūnų prieš 1 ir 2 tipų žmogaus imunodeficito virusą (ŽIV-1,2) ir ŽIV-1 (p24) antigeną OCO42-28-214-02P.Kat.Nr.INS-20. UAB "MBS"

11 Nustatyti išleidimo formą

11.1 Rinkinį galima rinktis iš penkių konfigūracijos variantų:

1 rinkinys 1P – rankinė analizė. Rinkinys skirtas atlikti 12 ELISA nustatymų ant sulankstomos plokštelės: 1 paleidimas – 1 juostelė (8 šulinėliai). Iš viso – 96 nustatymai, įskaitant kontrolinius mėginius;

2 rinkinys 2M – rankinė analizė. Rinkinys skirtas atlikti 2 ELISA testus monolitinėse plokštelėse: 1 testas – 1 plokštelė. Iš viso – 192 nustatymai, įskaitant kontrolinius mėginius;

3 rinkinys 2P– analizės atlikimas rankiniu būdu. Rinkinys skirtas atlikti 24 kūriniai ELISA 2 išmontuojamas x tabletės: 1 nustatymas – 1 juostelė (8 duobutės). Iš viso – 192 apibrėžimai, įskaitant kontrolinius mėginius;

4 rinkinys A2M – analizė automatiniame analizatoriuje. Rinkinys skirtas atlikti 2 ELISA testus monolitinėse plokštelėse: 1 testas – 1 plokštelė. Iš viso – 192 nustatymai, įskaitant kontrolinius mėginius;

5 rinkinys A2P – analizė automatiniame analizatoriuje. Rinkinys skirtas atlikti 24 ELISA sąrankas ant 2 sulankstomų plokštelių: 1 paleidimas – 1 juostelė (8 šulinėliai). Iš viso 192 nustatymai, įskaitant kontrolinius mėginius.

12 Rinkinio laikymo ir naudojimo sąlygos

12.1 Rinkinys visą tinkamumo laiką turi būti laikomas švarioje patalpoje, apsaugotoje nuo drėgmės ir šviesos (2–8) °C temperatūroje. Neužšaldykite rinkinio komponentų.

12.2 Norint gauti patikimų rezultatų, būtina griežtai laikytis rinkinio naudojimo instrukcijų.

12.3 Rinkinio galiojimo laikas – 12 mėnesių.

A priedas

A.1 lentelė – ELISA rinkinio reagentų suvartojimas

reagentas, ml

Naudotų juostelių skaičius, vnt.

Tabletės plovimo tirpalo paruošimas

FSB-T×25

Distiliuotas

vandens

Kg-2 tirpalo ruošimas darbiniame praskiedime

RR-K2

Darbinio pagrindo tirpalo paruošimas

Chromogenas TMB

Bibliografija

	Sanitarinės taisyklės	Baltarusijos Respublikos sveikatos apsaugos ministerijos 1998 m. gruodžio 16 d. įsakymas Nr. 351 Dėl žinybinių nuostatų, reglamentuojančių su ŽIV/AIDS susijusius klausimus, patikslinimo
	Baltarusijos Respublikos sveikatos apsaugos ministerijos 2002 m. lapkričio 25 d. įsakymas Nr. 165 Dėl sveikatos priežiūros įstaigų atliekamos dezinfekcijos ir sterilizacijos
	Baltarusijos Respublikos sveikatos apsaugos ministerijos 2010 m. balandžio 28 d. nutarimas Nr. 47 Dėl Privalomojo vykdymo tvarkos instrukcijos patvirtinimo medicininės apžiūros darbo ir kai kurių Baltarusijos Respublikos sveikatos apsaugos ministerijos nutarimų pripažinimo negaliojančiais

Unikalus registro įrašo numeris

Registracijos numeris medicininis prietaisas

FSR 2011/10182

Medicinos prietaiso valstybinės registracijos data

Medicinos gaminio pavadinimas

Reagentų rinkinys „MilaLab-IFA-HIV-AGAT“ fermentų imunologinių tyrimų sistema, skirta 1 ir 2 tipų žmogaus imunodeficito virusų (ŽIV-1 ir ŽIV-2), ŽIV-1 grupės O ir ŽIV-1 p24 antigenų antikūnams nustatyti pagal TU 9398 -187-05941003-2017
susidedantis iš: - Imunosorbento - polistireno 96 šulinėlių išardoma tabletė į juosteles (arba duobutes), kurių duobutėse yra sorbuojami dirbtiniai antigenai - gp160, gp41, p31 ŽIV-1, gp41 ŽIV-1 grupė O, gp36 ŽIV-2 ir antikūnai prieš ŽIV-1 p24 antigeną: 1 rinkinys (1 tabletė), 2 rinkinys (2 tabletės), 3 rinkinys (5 tabletės), - Konjugatas-1: 1 rinkinys (1 buteliukas 1,2 ml), 2 rinkinys (1 buteliukas). 1,2 ml), 3 rinkinys (1 buteliukas po 3,6 ml arba 3 buteliukai po 1,2 ml), - Konjugatas-2: 1 rinkinys (1 buteliukas 2,0 ml), 2 rinkinys (1 buteliukas 2,0 ml). 2,0 ml, 3 rinkinys (1 buteliukas po 4,0 ml arba 2 buteliukai po 2,0 ml), - RRK-1 - skiedimo tirpalas Konjugatas-1: 1 rinkinys (1 buteliukas po 12,0 ml), 2 rinkinys (1 buteliukas 12,0 ml), 3 rinkinys (3 buteliukai 12,0 ml) kiekvienas), - RRK-2 - tirpalas skiedimui Konjugatas-2: 1 rinkinys (1 buteliukas 20,0 ml), 2 rinkinys (1 buteliukas 20,0 ml), 3 rinkinys (2 buteliukai po 20,0 ml), - K+AT - kontrolinis teigiamas mėginys kuriuose yra antikūnų prieš ŽIV: 1 rinkinys (1 buteliukas 2,0 ml), 2 rinkinys (1 buteliukas 2,0 ml), 3 rinkinys (1 buteliukas 4,0 ml arba 2 buteliukai 2,0 ml) , - K+AG - kontrolinis teigiamas mėginys, kuriame yra dirbtinio ŽIV-1 p24 antigenas: 1 rinkinys (1 buteliukas 2,0 ml), 2 rinkinys (1 buteliukas 2,0 ml), 3 rinkinys (1 buteliukas 4, 0 ml arba 2 buteliukai po 2,0 ml), - K- - kontrolė neigiamas mėginys: 1 rinkinys (1 buteliukas 2,5 ml), 2 rinkinys (1 buteliukas 2,5 ml), 3 rinkinys (1 buteliukas 5,0 ml arba 2 buteliukai po 2,5 ml), - PR - skalavimo tirpalas: 1 rinkinys (1 buteliukas 50,0 ml), rinkinys 2 (1 buteliukas 120,0 ml), 3 rinkinys (2 buteliukai po 120,0 ml), - Stop reagentas: 1 rinkinys (1 buteliukas 25,0 ml), 2 rinkinys (2 buteliukai po 25,0 ml), 3 rinkinys (2 buteliukai po 50,0 ml arba 4 buteliukai po 25,0 ml), - SB - substrato buferinis tirpalas: 1 rinkinys (1 buteliukas 25,0 ml), 2 rinkinys (1 buteliukas 25,0 ml), 3 rinkinys (2 buteliukai 50,0 ml arba 3 buteliai 25,0 ml), - TMB - tirpalas kuriame yra 3,3",5,5"-tetrametilbenzidino: 1 rinkinys (1 buteliukas po 2,5 ml), rinkinys 2 (1 buteliukas po 2,5 ml), rinkinys 3 (2 buteliukai po 3,5 ml arba 3 buteliukai po 2,5 ml). Priedai: - polistirolo 96 šulinėlių plokštelių dangteliai: 1 komplektas (1 vnt.), 2 komplektas (2 vnt.), 3 rinkinys (5 vnt.) arba - apsauginės plėvelės ELISA plokštelėms: 1 komplektas (2 vnt.) , rinkinys 2 (4 vnt.), rinkinys 3 (10 vnt.), - vienkartiniai antgaliai: 1 rinkinys (16 vnt.), 2 rinkinys (32 vnt.), 3 rinkinys (80 vnt.), - plastikiniai padėklai skystiems reagentams : rinkinys 1 (2 vnt.), rinkinys 2 (4 vnt.), rinkinys 3 (10 vnt.), - plastikiniai maišeliai su užraktu: 1 rinkinys (1 vnt.), komplektas 2 (2 vnt.) , komplektas 3 (3 vnt.).

Organizacijos pavadinimas – medicinos prietaiso pareiškėjas

Organizacijos, pateikusios medicinos prietaisą, vieta

Medicinos prietaisą pateikusios organizacijos juridinis adresas

603014, Rusija, Nižnij Novgorodas, šv. Kominternas, 47 m

Medicinos prietaiso gamintojo arba medicinos prietaiso gamintojo pavadinimas

UAB "NPO "Diagnostikos sistemos"

Organizacijos-medicinos prietaiso gamintojo arba organizacijos-medicinos prietaiso gamintojo buveinė

603093, Rusija, Nižnij Novgorodas, g. Yabloneva, 22 m., pašto dėžutė 69

Organizacijos-medicinos prietaiso gamintojo arba organizacijos-medicinos prietaiso gamintojo juridinis adresas

Savalaikė ŽIV infekcijos diagnozė tampa itin svarbia priemone, nes ankstyva gydymo pradžia gali iš esmės nulemti tolimesnis vystymas ligą ir pailginti paciento gyvenimą. IN pastaraisiais metais Tai nustatant padaryta didelė pažanga baisi liga: Senas testavimo sistemas keičia pažangesnės, tyrimo metodai tampa prieinamesni, jų tikslumas gerokai didėja.

Šiame straipsnyje kalbėsime apie šiuolaikinius ŽIV infekcijos diagnozavimo metodus, kurių žinios yra naudingos laiku gydytišią problemą ir palaikyti normalią paciento gyvenimo kokybę.

ŽIV diagnostikos metodai

Rusijoje, siekiant diagnozuoti ŽIV infekciją, standartinė procedūra, kurį sudaro du lygiai:

ELISA testavimo sistema(atrankos analizė);
imunoblotingas (IB).

Diagnozei nustatyti gali būti naudojami ir kiti metodai:

greitieji testai.

ELISA testų sistemos

Pirmajame diagnozės etape ŽIV infekcijai nustatyti naudojamas atrankos testas (ELISA), kuris yra pagrįstas ŽIV baltymais, sukurtais laboratorijose, kurios fiksuoja specifinius antikūnus, gaminamus organizme reaguojant į infekciją. Po jų sąveikos su tiriamosios sistemos reagentais (fermentais), pasikeičia indikatoriaus spalva. Toliau šie spalvų pokyčiai apdorojami specialia įranga, kuri lemia atliktos analizės rezultatą.

Tokie ELISA tyrimai gali parodyti rezultatus per kelias savaites nuo ŽIV infekcijos įvedimo. Šis tyrimas nenustato viruso buvimo, bet nustato antikūnų prieš jį gamybą. Kartais žmogaus organizme antikūnai prieš ŽIV pradeda gamintis po 2 savaičių nuo užsikrėtimo, tačiau daugumoje žmonių jie gaminasi ilgiau. vėliau, po 3-6 sav.

Yra keturios ELISA testų kartos, kurių jautrumas skiriasi. Pastaraisiais metais vis dažniau naudojamos trečios ir ketvirtos kartos bandymų sistemos, kurios yra pagrįstos sintetiniais peptidais arba rekombinantiniais baltymais ir pasižymi didesniu specifiškumu bei tikslumu. Jie gali būti naudojami diagnozuojant ŽIV infekciją, stebėti ŽIV paplitimą ir užtikrinti saugumą atliekant tyrimus davė kraujo. III ir IV kartos ELISA testų sistemų tikslumas siekia 93-99% (Vakarų Europoje gaminami testai jautresni – 99%).

ELISA tyrimui atlikti iš paciento venos paimama 5 ml kraujo. Tarp paskutinis susitikimas maistas ir analizė turėtų užtrukti mažiausiai 8 valandas (paprastai tai atliekama ryte tuščiu skrandžiu). Tokį tyrimą rekomenduojama atlikti ne anksčiau kaip po 3 savaičių nuo įtariamos infekcijos (pavyzdžiui, po nesaugių lytinių santykių su nauju lytiniu partneriu).

ELISA tyrimo rezultatai gaunami per 2-10 dienų:

neigiamas rezultatas: rodo, kad nėra ŽIV infekcijos ir nereikia kreiptis į specialistą;
klaidingai neigiamas rezultatas: gali būti stebimas ankstyvosios stadijos infekcija (iki 3 savaičių), su vėlyvieji etapai AIDS su stipria imunosupresija ir netinkamu kraujo paruošimu;
klaidingai teigiamas rezultatas: gali būti stebimas sergant kai kuriomis ligomis ir netinkamai paruošus kraują;
teigiamas rezultatas: rodo infekciją ŽIV infekcija, reikia atlikti IB, o pacientui kreiptis į AIDS centro specialistą.

Kodėl ELISA testas gali duoti klaidingai teigiamus rezultatus?

Klaidingai teigiami ŽIV ELISA tyrimo rezultatai gali atsirasti dėl netinkamo kraujo apdorojimo arba pacientams, kuriems yra šios būklės ir ligos:

daugybinė mieloma;
infekcinės ligos, kurias sukelia Epstein-Barr virusas;
būsena po ;
autoimuninės ligos;
nėštumo fone;
būklė po vakcinacijos.

Dėl aukščiau aprašytų priežasčių kraujyje gali būti nespecifinių kryžmiškai reaguojančių antikūnų, kurių susidarymo neišprovokavo ŽIV infekcija.

Pastaraisiais metais klaidingai teigiamų rezultatų dažnis gerokai sumažėjo dėl III ir IV kartos bandymų sistemų, kuriose yra jautresnių peptidų ir rekombinantinių baltymų (jie sintetinami naudojant genetinė inžinerija in vitro). Pradėjus taikyti tokius ELISA tyrimus, klaidingai teigiamų rezultatų dažnis gerokai sumažėjo ir yra apie 0,02-0,5%.

Aptikimas yra klaidingas teigiamas rezultatas nereiškia, kad žmogus yra užsikrėtęs ŽIV. Tokiais atvejais PSO rekomenduoja atlikti kitą ELISA testą (būtinai IV kartos).

Paciento kraujas siunčiamas į referencinę ar arbitražo laboratoriją su žyma "pakartojimas" ir tiriamas naudojant IV kartos ELISA testų sistemą. Jei naujos analizės rezultatas yra neigiamas, pirmasis rezultatas laikomas klaidingu (klaidingai teigiamas) ir IS neatliekamas. Jei antrojo tyrimo metu rezultatas yra teigiamas arba abejotinas, po 4-6 savaičių pacientui turi būti atlikta IB, kad būtų patvirtinta arba paneigta ŽIV infekcija.

Imuninis blotingas

Galutinė ŽIV infekcijos diagnozė gali būti nustatyta tik gavus teigiamą imunoblotingo (IB) rezultatą. Tam naudojama nitroceliuliozės juostelė, ant kurios dedami virusiniai baltymai.

IB kraujo mėginiai imami iš venos. Tada jis yra specialiai apdorojamas, o jo serume esantys baltymai atskiriami specialiu geliu pagal jų krūvį ir molekulinė masė(manipuliacija atliekama naudojant specialią įrangą veikiant elektriniam laukui). Ant kraujo serumo gelio uždedama nitroceliuliozės juostelė ir specialioje kameroje atliekamas blotavimas („blotingas“). Juostelė yra apdorojama ir, jei naudojamose medžiagose yra antikūnų prieš ŽIV, jie prisijungia prie IB antigeninių juostų ir pasirodo kaip linijos.

IB laikomas teigiamu, jei:

pagal amerikietiškus CDC kriterijus – ant juostelės yra dvi arba trys eilutės gp41, p24, gp120/gp160;
pagal Amerikos FDA kriterijus, juostelė turi dvi eilutes p24, p31 ir liniją gp41 arba gp120/gp160.

99,9% atvejų teigiamas IB rezultatas rodo ŽIV infekciją.

Jei nėra linijų, IB yra neigiamas.

Identifikuojant eilutes su gr160, gr120 ir gr41, IB abejotina. Šis rezultatas gali atsirasti, kai:

onkologinės ligos;
nėštumas;
dažni kraujo perpylimai.

Tokiais atvejais tyrimą rekomenduojama pakartoti naudojant kitos įmonės rinkinį. Jei po papildomo IB rezultatas išlieka abejotinas, tada stebėjimas būtinas šešis mėnesius (IB atliekamas kas 3 mėnesius).

Polimerazės grandininė reakcija

PGR testas gali aptikti viruso RNR. Jo jautrumas yra gana didelis ir leidžia nustatyti ŽIV infekciją per 10 dienų po užsikrėtimo. Kai kuriais atvejais PGR gali duoti klaidingai teigiami rezultatai, nes jo didelis jautrumas taip pat gali reaguoti į antikūnus prieš kitas infekcijas.

Šis diagnostikos metodas yra brangus ir reikalauja specialios įrangos bei aukštos kvalifikacijos specialistų. Dėl šių priežasčių neįmanoma atlikti masinio gyventojų testavimo.

PGR naudojama šiais atvejais:

nustatyti ŽIV naujagimiams, gimusiems iš ŽIV infekuotų motinų;
nustatyti ŽIV „lango periodu“ arba esant abejotinam IB;
kontroliuoti ŽIV koncentraciją kraujyje;
donorų kraujo tyrimui.

Vien PGR testas nenustato ŽIV diagnozės, bet yra atliekamas kaip a papildomas metodas diagnostika, skirta ginčytinoms situacijoms išspręsti.

Ekspreso metodai

Viena iš ŽIV diagnostikos naujovių – greitieji testai, kurių rezultatus galima įvertinti per 10-15 minučių. Veiksmingiausias ir tikslius rezultatus gautas naudojant imunochromatografinius tyrimus, pagrįstus kapiliarinio srauto principu. Tai specialios juostelės, ant kurių užtepamas kraujas ar kiti tiriamieji skysčiai (seilės, šlapimas). Jei yra antikūnų prieš ŽIV, po 10-15 minučių ant testo atsiranda spalvota ir kontrolinė juostelė – teigiamas rezultatas. At neigiamas rezultatas– pasirodo tik valdymo juostelė.

Kaip ir atliekant ELISA testus, greitųjų testų rezultatai turi būti patvirtinti IB analize. Tik po to galima diagnozuoti ŽIV infekciją.

Yra greito testavimo namuose rinkiniai. „OraSure Technologies1“ testas (JAV) yra patvirtintas FDA, parduodamas be recepto ir gali būti naudojamas ŽIV aptikti. Po tyrimo, jei rezultatas yra teigiamas, pacientui rekomenduojama atlikti tyrimą specializuotas centras diagnozei patvirtinti.

Kiti testai, skirti naudojimui namuose dar nepatvirtino FDA ir jų rezultatai gali būti labai abejotini.

Nepaisant to, kad greitieji testai yra prastesni nei IV kartos ELISA testai, jie plačiai naudojami papildomam populiacijos tyrimui.

ŽIV infekcijos nustatymo testus galite atlikti bet kurioje klinikoje, centrinėje rajono ligoninėje ar specializuotuose AIDS centruose. Rusijos teritorijoje jie vykdomi visiškai konfidencialiai arba anonimiškai. Kiekvienas pacientas gali tikėtis medicininės ar psichologinės konsultacijos prieš arba po tyrimo. Mokėti teks tik už ŽIV testus komercinėse parduotuvėse gydymo įstaigos, ir į valstybines klinikas ir ligoninėse jie atliekami nemokamai.

Skaitykite apie būdus, kuriais galite užsikrėsti ŽIV ir kokie mitai egzistuoja apie užsikrėtimo galimybes.