Развитие патологичной физиологии как самостоятельной науки относится ко второй половине XIX столетия, когда в области биологии, химии и физиологии были достигнуты значительные успехи, позволившие начать систематическое изучение механизмов возникновения патологических процессов и болезней. Становлению патологической физиологии как самостоятельной дисциплины в значительной мере способствовало применение методов физиологического эксперимента для изучения патологических процессов.
Особенно большое влияние на развитие патофизиологии оказали работы И. П. Павлова (1852-1936) и его школы. Многие вопросы патофизиологии кровообращения, пищеварения и в особенности высшей нервной деятельности были разработаны И. П. Павловым и его учениками (А. Д. Сперанский, К. М. Быков, Л. А. Орбели и др.). И. П. Павлов развивал в патофизиологии принципы целостности, нервизма и проверки на практике полученных результатов. Велико было влияние и французского физиолога Клода Бернара, известный опыт которого - «сахарный укол» в дно IV желудочка головного мозга был первой экспериментальной моделью болезни человека - сахарного мочеизнурения.
В России развитие патологической физиологии (экспериментальной патологии) связано с именем великого русского физиолога. И. М. Сеченова и в особенности его ученика В. В. Пашутина, основателя первой (самостоятельной кафедры общей и экспериментальной патологии в Казанском университете (1814), а также в Военно-медицинской академии в Петербурге (1879). Однако еще задолго до организации самостоятельных кафедр патологической физиологии основные элементы учения о болезнях (общей патологии) преподавались клиницистами или физиологами на соответствующих кафедрах. В этот период патология как наука, содержащая ряд теоретических сведений о болезнях, являлась вводной частью к клиническим дисциплинам, ввиду чего чаще всего относилась к единой кафедре патологии, терапии и клиники. Первыми преподавателями элементов общей патологии в госпитальных и медицинских школах в XVIII веке были такие выдающиеся клиницисты, как А. М. Шумлянский (1748-1795), занимавший кафедру терапии, акушерства и патологической анатомии в Московской госпитальной школе, М. М. Тереховский (1740-1796), преподаватель фармакологии, патологии и практической медицины в Кронштадском морском госпитале. В Московском университете общую патологию преподавали С. Г. Забелин (1735-1802), М. И. Барсук-Моисеев (1768-1811). Примечательно, что М. И. Барсук-Моисеев был первым доктором медицины Московского университета, в 1794 г. он защитил диссертацию на тему «О дыхании».
В первой половине XIX столетия особенно большой вклад в преподавание общей патологии внесли И. Е. Дядьковский (1784-1841) и его ученик К. В. Лебедев (1802-1884), читавший курс общей патологии в Московском университете. К. В. Лебедев написал учебник по «Общей антропатологии» (1835), представлявший собой первое руководство по общей патологии на русском языке. К. В. Лебедев, как и его учитель И. Е. Дядьковский, занимал материалистические позиции в анализе причин и сущности болезни. Он подчеркивал коренное отличие болезней человека (антропатология) от болезней других живых существ (зоопатология). Но уже в этот период русские ученые отчетливо понимали важность экспериментальных методов исследования для изучения механизмов развития болезней. Так, профессор Московского университета А. М. Филомафитский (1807-1849), руководитель кафедры физиологии и общей патологии, впервые в России произвел ряд чисто патофизиологических экспериментов - удаление почек у животных, перевязку мочеточников и др. Он широко разработал вопросы переливания крови, совместно с Н. И. Пироговым исследовал действие на животный организм наркотических средств (хлороформ, эфир).
Общая патология выделилась как самостоятельная дисциплина в 1863 г., но преподавали ее чаще всего еще патологоанатомы. Так, в Москве с 1863 г. курс общей патологии читал известный патологоанатом А. И. Полунин (1820-1888). Будучи морфологом, он пропагандировал экспериментальные методы в патологии. В Харькове кафедру общей патологии возглавлял И. Н. Оболенский, в Киеве - Н. А. Хржонщевский, в Казани с 1867 по 1872 г. - М. Ф. Субботин. Выделение общей патологии в самостоятельную дисциплину имело огромное значение для дальнейшего развития этого важного раздела медицины как науки экспериментальной. Для русской патологии второй половины XIX века характерен переход от морфологического направления к позициям экспериментальной патологии, т. е. патологической физиологии.
Все более широкое применение экспериментальных методов исследования в патологии, накопление полученного в эксперименте фактического материала привели к необходимости отделения преподавания общей патологии от морфологии (патологической анатомии) и создания кафедр экспериментальной патологии (патологической физиологии). Первая в России кафедра общей и экспериментальной патологии была организована в Казанском университете в 1874 г. В. В. Пашутиным, преобразовавшим общую патологию из умозрительной науки в экспериментальную. Будучи учеником И. М. Сеченова и С. П. Боткина, он развивал в патофизиологии идеи нервизма. В. В. Пашутиным написано первое оригинальное руководство по патологической физиологии, не утерявшее своего значения и в настоящее время. Научные интересы В. В. Пашутина были сосредоточены на основной проблеме патологии - нарушении обмена веществ. Особенно ценны его работы в области полного и частичного голодания. Он разработал оригинальную методику исследования газообмена и впервые создал калориметр для непосредственного определения теплопотерь организмом животного и человека. В. В. Пашутин впервые в России начал заниматься изучением деятельности желез внутренней секреции (половых желез). Имя В. В. Пашутина примечательно и тем, что он является создателем первой в России научной школы патофизиологов. Его ученики развивали начатое В. В. Пашутиным направление в изучении патофизиологии обмена веществ. Ряд его учеников возглавили в дальнейшем кафедры общей патологии в университетах России: А. М. Альбидкий (Военно-медицинская академия в Петербурге), А. В. Репрев (Томск, Харьков), Н. Г. Ушинский (Варшава, Одесса) и др.
Одновременно с петербургской создавалась и московская научная школа патофизиологов, идущая от А. И. Полунина и его ученика А. Б. Фохта (1848-1930). Характерной особенностью этого направления был тесный контакт с клиникой. А. Б. Фохту принадлежат выдающиеся исследования по вопросам патологии сердца, отека, водянки, воспаления околосердечной сумки, функциональных и анатомических изменений сердца при эмболии коронарных артерий, нарушений кровообращения и деятельности сердца при эмболии легочной артерии. Крупные представители московской школы патофизиологов возглавили также кафедры общей патологии и патологической физиологии в различных университетах: в Киеве (В. Линдеман), Москве (Г. П. Сахаров, А. И. Тальянцев), Минске (Ф. А. Андреев) и др.
Большую роль в становлении общей патологии как экспериментальной науки сыграл В. В. Подвысоцкий (1857-1913), возглавивший с 1887 г. кафедру общей патологии в Киеве. Из его школы вышли такие известные ученые, как И. Г. Савченко, Л. А. Тарасевич, Д. К. Заболотный, А. А. Богомолец и др. Научные интересы В. В. Подвысоцкого сосредоточивались в области изучения регенерации, патогенеза новообразований, иммунитета. Он написал учебник «Общей и экспериментальной патологии», переведенный на все европейские и ряд азиатских языков. Учебник в конце XIX и начале XX века служил основным руководством для изучения экспериментальной патологии в России и за рубежом.
Особое место в истории патофизиологии занимает И. И. Мечников работы которого по воспалению, иммунитету, атрофии и самоотравлению организма являются классическими. И. И. Мечников создал сравнительно-патологическое направление в изучении патологических процессов. Фагоцитарная теория воспаления, учение об иммунитете и инфекционном процессе являются основой многих исследований, проводимых в этих направлениях и в настоящее время.
Особенно широкие перспективы развития патологическая физиология как научная дисциплина получила после Великой Октябрьской социалистической революции. Уже с самого начала при реформе медицинского образования патологической физиологии стали придавать большое значение как дисциплине, играющей исключительную роль в формировании мировоззрения советского врача. В 1924 г. по инициативе А. А. Богомольца и С. С. Халатова официально во всесоюзном масштабе для бывших кафедр общей патологии было принято название «Кафедра патологической физиологии». Кафедры и научно-исследовательские лаборатории патологической физиологии возглавлялись крупнейшими учеными-экспериментаторами. Работа этих кафедр получила строго экспериментальное направление. Возник ряд крупных оригинальных школ советских патофизиологов: Н. Н. Аничкова (Ленинград), А. А. Богомольца (Саратов, Москва, Киев), В. В. Воронина (Одесса, Тбилиси), Н. Н. Сиротинина (Казань, Киев), И. Р. Петрова (Ленинград) и др.
Н. Н. Аничков (1885-1964) с 1919 по 1938 г. возглавлял кафедру патологической физиологии Военно - медицинской академии. В 1946 г. был избран первым президентом Академии медицинских наук. Н. Н. Аничков с большим коллективом сотрудников разрабатывал вопросы болезней сердечно-сосудистой системы, физиологии и патологии ретикулоэндотелиальной системы, патогенеза аутоинфекций и др. С именем Н. Н. Аничкова связана теория инфильтрационного происхождения атеросклероза. Из этой шкоты вышли такие крупные патофизиологи, как И. Р. Петров, П. Н. Веселкин, П. П. Гончаров и др.
Большую плодотворную школу создал в Одессе и Тбилиси известный русский ученый В. В. Воронин (1870-1960). Его труды были посвящены патофизиологии, микробиологии и эпидемиологии, зоологии, морфологии и некоторым проблемам физики и математики. Основные научные интересы В. В. Воронина и его учеников были сконцентрированы вокруг общей патологии воспаления, кровообращения, периферической нервной системы. В 1947-1948 гг. В. В. Воронин выпустил двухтомный учебник по патологической физиологии, где для решения вопросов патогенеза заболеваний привлекались закономерности механики, физики и математики.
Большое влияние на развитие отечественной патофизиологии оказал (А. А. Богомолец (1881-1946). Богомолец работал в Саратове, Москве и Киеве и является основателем самой крупной школы советских патофизиологов. Центральной проблемой, разрабатывавшейся школой А. А. Богомольца, была проблема реактивности. Много труда было отдано изучению реакций соединительной ткани при различных патологических процессах, вопросам переливания крови, эндокринопатологии, цитотоксической стимуляции функций. Под редакцией А. А. Богомольца было создано первое многотомное руководство по патологической физиологии (1940-1946). Из школы А. А. Богомольца вышли такие выдающиеся ученые патофизиологи как Н. Н. Сиротинин, Н. А. Федоров, П. Д. Горизонтов и др.
Наиболее активным продолжателем изучения проблемы реактивности в патологии и физиологии в настоящее время являются Н. Н. Сиротинин и его школа. Большой заслугой Н. Н. Сиротинина и его школы является разработка вопросов о сравнительной патологии реактивности, аллергии, иммунитета и инфекционного процесса. Н. Н. Сиротинин систематически с 1929 г. занимается изучением вопросов кислородного голодания и адаптации к гипоксии. Под общей редакцией Н. Н. Сиротинина в последнее время создано 4-томное руководство по патологической физиологии (1966).
И. Р. Петров (1893-1970) всю свою творческую жизнь посвятил работе на кафедре патофизиологии Военно-медицинской академии. Совместно со своими многочисленными учениками он интенсивно и успешно разрабатывал проблемы кислородного голодания, патогенеза травматического шока, кровопотери, переливания крови, гипотермии и реанимации, патологической регуляции кровообращения и др.
Большую роль в развитии представлений о значении нервной системы в патологии сыграли исследования А.Д.Сперанского (1888-1961), например, получившие широкую известность работы по нервной трофике, эпилепсии, следовым последействиям в патологии и др. Ученик А. Д. Сперанского А. М. Чернух плодотворно развивает проблемы выздоровления и экспериментальной терапии.
Патологическая анатомия является составной частью патологии - науки, изучающей закономерности возникновения и развития болезней, отдельных патологических процессов и состояний.
В истории развития патологической анатомии выделяют четыре основных периода: анатомический (с древности до начала XIX века), микроскопический (с первой трети XIX века до 50-х годов XX века), ультрамикроскопический (после 50-х годов XIX века); современный, четвертый период развития патологической анатомии можно охарактеризовать как период патологической анатомии живого человека.
Возможность изучения патологических изменений органов человеческого тела появилась в XV-XVII веках благодаря возникновению и развитию научной анатомии. Наиболее значительную роль в создании метода анатомического исследования, описании строения всех важнейших органов и их взаиморасположения сыграли в середине XVI века работы А.Везалия, Г.Фаллопия, Р.Коломбо и Б.Евстахия.
Анатомические исследования второй половины XVI - начала XVII веков не только укрепили позиции анатомии, но и способствовали появлению интереса к анатомии у врачей. Значительное влияние на развитие анатомии в этот период оказали философ Ф.Бэкон и анатом У.Гарвей.
В 1676 г. Т.Боне сделал первую попытку на значительном материале (3000 вскрытий) показать существование связи между обнаруженными при этом морфологическими изменениями и клиническими проявлениями болезни.
В XVII веке в Европе появились богатейшие анатомические музеи (Лейден), в которых были широко представлены патолого-анатомические препараты.
Важнейшим событием в истории патологической анатомии, определившим ее выделение в самостоятельную науку, стал выход в свет в 1761 г. основного труда Дж.Б.Морганьи "О местоположении и причинах болезней, выявленных анатомом".
На рубеже XVIII и XIX веков во Франции Ж.Корвизар, Р.Ла-эннек, Г.Дюпюитрен, К Лобштейн, Ж.Буйо, Ж.Крювелье широко внедрили патологическую анатомию в клиническую практику; М.К.Биша указал дальнейший путь ее развития - изучение повреждений на тканевом уровне. Ученик М.К.Биша Ф.Бруссе создал учение, которое отвергало существование болезней, не имеющих материального субстрата. Ж.Крювелье выпустил в 1829-1835 гг. первый в мире цветной атлас по патологической анатомии.
В середине XIX века наибольшее влияние на развитие этой отрасли медицины оказали труды К.Рокитанского, в которых он не только представил изменения в органах на различных этапах развития заболеваний, но и уточнил описание патологических изменений при многих болезнях. В 1844 г. К.Рокитанский основал в Венском университете кафедру патологической анатомии, создал крупнейший в мире патологоанатомический музей. С именем К.Рокитанского связывают окончательное выделение патологической анатомии в самостоятельную научную дисциплину и врачебную специальность.
Переломным моментом в развитии этой дисциплины явилось создание в 1855 г. Р.Вирховым теории клеточной патологии.
В России первые попытки организации прозекторского дела относятся к XVIII веку. Они связаны главным образом с деятельностью видных организаторов здравоохранения - И.Фишера и П.З.Кондоиди. Эти попытки не дали ощутимых результатов в связи с низким уровнем развития российской медицины и состоянием медицинского образования, хотя уже в то время проводились отдельные вскрытия с контрольно-диагностическими и исследовательскими целями.
Становление патологической анатомии как научной дисциплины началось лишь в первой четверти XIX века и совпало по времени с улучшением преподавания нормальной анатомии в университетах. Одним из первых анатомов, обращавших внимание студентов на патологические изменения органов во время вскрытия, был Е.О.Мухин.
Впервые вопрос о необходимости включения патологической анатомии в число обязательных предметов преподавания на медицинском факультете Московского университета был поставлен в 1805 г. М.Я.Мудровым в письме к попечителю университета М.Н.Муравьеву. По предложению Ю.Х Лодера, преподавание патологической анатомии в виде курса при кафедре нормальной анатомии было отражено в университетском уставе 1835 г. В соответствии с этим уставом преподавание самостоятельного курса патологической анатомии было начато в 1837 г. проф. Л.С.Севруком на кафедре нормальной анатомии. Профессора Г.И.Сокольский и А.И.Овер начали использовать новейшие патолого-анатомические сведения в преподавании терапевтических дисциплин, а Ф.И.Иноземцев и А.И.Поль - при чтении лекций по курсу хирургии.
В 1841 г. в связи с созданием нового медицинского факультета в Киеве Н.И.Пирогов поставил вопрос о необходимости открытия кафедры для преподавания патологии в Университете Св. Владимира. В соответствии с уставом этого университета (1842) было предусмотрено открытие кафедры патологической анатомии и патологической физиологии, которая начала функционировать в 1845 г.: ее возглавил ученик Н.И.Пирогова Н.И.Козлов.
7 декабря 1845 г. было принято "Дополнительное постановление о медицинском факультете Императорского Московского университета", которое предусматривало создание кафедры патологической анатомии и патологической физиологии. В 1846 г. профессором этой кафедры был назначен Ю.Дитрих - адъюнкт факультетской терапевтической клиники, которой заведовал А.И.Овер. После смерти Ю.Дитриха в конкурсе на замещение вакантной должности приняли участие четыре адъюнкта терапевтических клиник Московского университета - Самсон фон Гим-мельштерн, Н.С.Топоров, А.И.Полунин и К.Я.Млодзиевский. В мае 1849 г. профессором кафедры патологической анатомии и патологической физиологии был избран А.И.Полунин - адъюнкт госпитальной терапевтической клиники И.В.Варвинского.
Для современной медицины характерен постоянный поиск наиболее объективных материальных критериев диагностики и познания сущности болезни. Среди этих критериев морфологический приобретает исключительное значение как наиболее достоверный.
Современная патологическая анатомия широко использует достижения других медико-биологических дисциплин, обобщая фактические данные биохимических, морфологических, генетических, патофизиологических и других исследований с целью установления закономерностей, касающихся работы того или иного органа, системы при различных заболеваниях.
Благодаря задачам, которые решает в настоящее время патологическая анатомия, она занимает особое место среди медицинских дисциплин. С одной стороны, патологическая анатомия - это теория медицины, которая, раскрывая материальный субстрат болезни, непосредственно служит клинической практике, с другой - это клиническая морфология для диагноза, дающая материальный субстрат теории медицины - общей и частной патологии человека.
Под общей патологией понимают наиболее общие, т.е. свойственные всем болезням, закономерности их возникновения, развития и исходов. Уходя своими корнями в частные проявления различных болезней и основываясь на этих частностях, общая патология одновременно синтезирует их, дает представление о типовых процессах, характерных для той или иной болезни.
В результате прогресса медико-биологических дисциплин (физиология, биохимия, генетика, иммунология) и сближения с ними классической морфологии стало очевидным существование единого материального субстрата проявлений жизнедеятельности, включающего весь диапазон уровней организации - от молекулярного до организменного, и никакие, даже ничтожные функциональные нарушения не могут возникнуть и исчезнуть, не отразившись в соответствующих структурных изменениях на молекулярном или ультраструктурном уровне. Таким образом, дальнейший прогресс общей патологии не может быть поставлен в зависимость от развития какой-либо одной дисциплины или их группы, так как общая патология сегодня представляет собой концентрированный опыт всех отраслей медицины, оцененный с широких биологических позиций.
Каждая из современных медицинских и медико-биологических дисциплин вносит свою лепту в построение теории медицины. Биохимия, эндокринология и фармакология раскрывают тонкие механизмы процессов жизнедеятельности на молекулярном уровне; в патологоанатомических исследованиях законы общей патологии получают морфологическую интерпретацию; патологическая физиология дает их функциональную характеристику; микробиология и вирусология являются важнейшими источниками разработки этиологического и иммунологического аспектов общей патологии; генетика раскрывает секреты индивидуальности реакций организма и принципы их внутриклеточного регулирования; клиническая медицина завершает оформление законов общей патологии человека на основе собственного богатейшего опыта и окончательной оценки получаемых экспериментальных данных под углом зрения психологических, социальных и других факторов. Итак, общая патология подразумевает такой подход к оценке наблюдаемых явлений, который характеризуется их широким медико-биологическим анализом.
Для современного этапа развития медицины характерно то, что дисциплины, ранее бывшие преимущественно или даже исключительно экспериментальными (генетика, иммунология, биохимия, эндокринология, патологическая физиология и др.), становятся в равной мере и клиническими.
Таким образом, современная общая патология включает: - обобщение фактических данных, полученных с помощью методов исследования, используемых в различных медико-биологических дисциплинах;
Изучение типовых патологических процессов;
Разработку проблем этиологии, патогенеза, морфогенеза болезней человека;
Развитие философско-методологических аспектов биологии и медицины (проблемы целесообразности, соотношения структуры и функции, части и целого, внутреннего и внешнего, социального и биологического, детерминизма, целостности организма, нервизма и др.) на основе осмысления всей совокупности фактов, полученных в различных областях медицины; - формирование теории медицины вообще и учения о болезни в частности.
Быстрое развитие клинической физиологии, клинической морфологии, клинической иммунологии, клинической биохимии и фармакологии, медицинской генетики, принципиально новых методов рентгенологического исследования, эндоскопии, эхографии и др. чрезвычайно обогатило наши знания о фактических деталях и общих закономерностях развития болезней человека. Все более широкое использование неинвазивных методов исследования (компьютерная томография, ультразвуковая диагностика, эндоскопические методы и др.) позволяет визуально определять локализацию, размеры и даже в известной степени характер патологического процесса, что по существу открывает пути развития прижизненной патологической анатомии - клинической морфологии, которой посвящен курс частной патологической анатомии.
Сфера применения морфологического анализа в клинике постоянно расширяется благодаря все возрастающей хирургической активности и успехам медицинской техники, а также в связи с совершенствованием методических возможностей морфологии. Совершенствование медицинских инструментов привело к тому, что практически не осталось таких областей организма человека, которые были бы недоступны для врача. При этом особое значение для совершенствования клинической морфологии приобретает эндоскопия, позволяющая клиницисту заниматься морфологическим изучением болезни на макроскопическом (органном) уровне. Эндоскопические исследования служат и целям биопсии, с помощью которой патологоанатом получает материал для морфологического исследования и становится полноценным участником решения вопросов диагностики, терапевтической или хирургической тактики и прогноза заболевания. Используя материал биопсии, патологоанатом решает и многие теоретические вопросы патологии. Поэтому биоптат становится основным объектом исследования при решении практических и теоретических вопросов патологической анатомии.
Методические возможности современной морфологии удовлетворяют стремления патологоанатома ко все возрастающей точности морфологического анализа нарушенных процессов жизнедеятельности и все более полной и точной функциональной оценке структурных изменений. Современные методические возможности морфологии огромны. Они позволяют изучать патологические процессы и болезни на уровне организма, системы, органа, ткани, клетки, клеточной органеллы и макромолекулы. Это макроскопические и светооптические (микроскопические), электронно-микроскопические, цито- и гистохимические, имму-ногистохимические и авторадиографические методы. Наблюдается тенденция к комплексированию ряда традиционных методов морфологического исследования, в результате чего возникли электронно-микроскопическая гистохимия, электронно-микроскопическая иммуноцитохимия, электронно-микроскопическая авторадиография, существенно расширившие возможности патологоанатома в диагностике и познании сущности болезней.
Наряду с качественной оценкой наблюдаемых процессов и явлений появилась возможность количественной оцен-к и при использовании новейших методов морфологического анализа. Морфомстрия дала в руки исследователей возможности применения электронной техники и математики для суждения о достоверности результатов и правомочности трактовки выявленных закономерностей.
С помощью современных методов исследования патологоанатом может обнаружить не только морфологические изменения, свойственные развернутой картине того или иного заболевания, но и начальные изменения при болезнях, клинические проявления которых еще отсутствуют в силу состоятельности компенсаторно-приспособительных процессов [Саркисов Д.С., 1988]. Следовательно, начальные изменения (доклинический период болезни) опережают их ранние клинические проявления (клинический период болезни). Поэтому главным ориентиром в диагностике начальных стадий развития заболевания служат морфологические изменения клеток и тканей.
Патологическая анатомия, располагая современными техническими и методическими возможностями, призвана решать задачи как клинико-диагностического, так и научно-исследовательского характера.
Вырастает значение экспериментального направления, когда ответы на сложные вопросы этиологии и патогенеза заболеваний ищут и клиницист, и патолог. Эксперимент используется прежде всего для моделирования патологических процессов и болезней, с его помощью разрабатываются и испытываются новые методы лечения. Однако морфологические данные, полученные в экспериментальной модели болезни, должны быть соотнесены с подобными данными при той же болезни у человека.
Несмотря на то что в последние годы во всех странах число вскрытий неуклонно снижается, патологоанатомическое исследование остается одним из главных методов научного познания болезни. С его помощью осуществляется экспертиза правильности диагноза и лечения, устанавливаются причины смерти. В связи с этим вскрытие трупа как завершающий этап диагностики необходимо не только клиницисту и патологоанатому, но и медицинскому статистику и организатору здравоохранения. Этот метод является базой научных исследований, преподавания фундаментальных и прикладных медицинских дисциплин, школой врача любой специальности. Анализ результатов вскрытия играет важную роль в решении ряда крупных научно-практических проблем, например проблемы изменчивости, или патоморфоза, болезней. Значение этой проблемы постоянно возрастает, так как все чаще и чаще перед клиницистом и патологоанатомом встает вопрос: где кончается патоморфоз и где начинается патология терапии?
Патологическая анатомия в 20 веке испытала влияние экспериментально-физиологического направления. В отличие от органолокалистического направления, господствовавшего на Западе, в России получило развитие направление нозологическое и функциональное, рассматривающее больной организм в целом.
Инициаторами этого направления явились представители московской школы патологоанатомов - А. И. Абрикосов (1875- 1955), М. А. Скворцов (1876-1963), В. Т. Талалаев (1886-1947), И. В. Давыдовский и др. Эта же школа патологоанатомов начала с 1927 г. систематически проводить сравнение клинических и патологоанатомических диагнозов и обсуждать их совместно с лечащими врачами на клинико-анатомических конференциях. В дальнейшем конференции были узаконены для всех больниц СССР; они повысили роль прозектуры в диагностике и стимулировали научную разработку больничного материала, укрепив клинико-анатомическое направление.
Патологоанатомические школы, представленные Н. Н. Аничковым (1885-1964), С. С. Вайлем и др., проводили систематическое изучение сердечно-сосудистой патологии, ретикулоэндотелиальной системы, инфекционных болезней на секционном материале и путем создания экспериментальных моделей. Изучению патологических изменений при инфекционных болезнях посвящены труды И. В. Давыдовского. В. Т. Талалаев изучил гистогенез ревматической гранулемы (гранулема Ашоффа - Талалаева) и создал первую клинико-анатомическую классификацию ревматизма. М. А. Скворцов и Д. Д. Лохов (1892-1958) заложили основы патологической анатомии болезней детского возраста.
А. В. Русаков (1885-1953) с сотр. работал в области костной патологии. А. И. Абрикосов, В. Г. Штефко, А. И. Струков, A. Н. Чистович и другие внесли значительный вклад в разработку патологической анатомии туберкулеза. Н. А. Краевский совместно с клиницистом X. X. Владосом предложил классификацию лейкозов. Разрабатывались новые главы патологии - патологическая анатомия боевой травмы и лучевой болезни, были осуществлены ценные исследования по краевой патологии.
За рубежом Л. Ашофф (Германия), исходя из исследований И. И. Мечникова и B. К. Высоковича, создал учение о ретикулоэндотелиальной системе, первым описал инфекционную гранулему при ревматизме, которая получила его имя.
Центральной проблемой общей патологии, переименованной в СССР в патологическую физиологию (1925), была проблема реактивности. Идеи И. И. Мечникова получили наибольшее развитие в школе А. А. Богомольца (1881-1946), создавшей учение о роли соединительной ткани в реактивности организма, о цитотоксинах, о старении и продлении жизни. Последнее развилось в отдельную научную дисциплину - геронтологию и гериатрию (см.).
Созданные в СССР Е. С. Лондоном (1868 - 1939) методы ангиостомии и органостомии позволили изучать обмен веществ без нарушения нейрогуморальной регуляции я положили начало ангиохимии. Школа А. В. Репрева (1853-1930) исследовала роль эндокринных и гуморальных факторов в патологии. С. С. Халатов (1884-1951), Н. Н. Аничков и их ученики создали учение о патологии холестеринового обмена. Школа А. Д. Сперанского (1888-1961) выдвинула теорию о роли нейродистрофических процессов в патологии. Представителями школы И. П. Павлова (М. К. Петрова, П. С. Купалов, А. О. Долин и др.) создан новый раздел патофизиологии - патофизиология высшей нервной деятельности, учение об экспериментальных неврозах. Интенсивно разрабатывались проблемы кислородного голодания, воспаления, лихорадки, шока, патофизиологии сердечнососудистой системы. Изучено патогенное действие факторов внешней среды (электротравмы, ионизирующие излучения, пониженное и повышенное атмосферное давление и др.).
Термин "патология", составленный из двух греческих слов, означает "наука о болезни". Дисциплина, которая в настоящее время обозначается этим термином в большинстве стран, имеет и ряд других наименований: патологическая анатомия, патоморфология, морбидная анатомия, анатомическая патология, гистопатология, хирургическая патология и др. В отечественной медицине принято называть указанную дисциплину "патологическая анатомия". Патологическая анатомия - научно-прикладная дисциплина, изучающая патологические процессы и болезни с помощью научного, главным образом, микроскопического исследования изменений, возникающих в клетках и тканях.
Под патологическим процессом понимают любое нарушение структуры и функции, а болезнь - это сочетание одного или нескольких патологических процессов, приводящих к нарушению нормального состояния и жизнедеятельности организма.
В истории развития патологической анатомии выделяют четыре периода: анатомический (с древности до начала XIX в.), микроскопический (с первой трети XIX в. до 50-х гг. XX в.), ультрамикроскопический (после 50-х гг. XIX в.); современный четвертый период развития патологической анатомии можно охарактеризовать как период патологической анатомии живого человека.
Возможность изучения патологических изменений органов человеческого тела появилась в XV-XVII вв. благодаря возникновению и развитию научной анатомии. Наиболее значительную роль в создании метода анатомического исследования, описании строения всех важнейших органов и их взаиморасположения сыграли в середине XVI в. работы А.Везалия, Г.Фаллопия, Р.Коломбо и Б.Евстахия.
Анатомические исследования второй половины XVI-начала XVII вв. не только укрепили позиции анатомии, но и способствовали появлению интереса к ней у врачей. Значительное влияние на развитие анатомии в этот период оказали философ Ф.Бэкон и анатом У.Гарвей.
В 1676 г. Т.Боне сделал первую попытку на значительном материале (3000 вскрытий) показать существование связи между обнаруженными морфологическими изменениями и клиническими проявлениями болезни.
В XVII в. в Европе появились богатейшие анатомические музеи (Лейден), в которых были широко представлены патологоанатоми- ческие препараты.
Важнейшим событием в истории патологической анатомии, определившим ее выделение в самостоятельную науку, стало издание в 1761 г. основного труда Дж.Б.Морганьи "О местоположении и причинах болезней, выявленных анатомом".
На рубеже XVIII и XIX вв. во Франции Ж.Корвизар, Р.Лаэннек, Г.Дюпюитрен, К.Лобштейн, Ж.Буйо, Ж.Крювелье широко внедрили патологическую анатомию в клиническую практику, а М.К.Биша указал дальнейший путь ее развития - изучение повреждений на тканевом уровне. Ученик М.К.Биша Ф.Бруссе создал учение, которое отвергало существование болезней, не имеющих материального субстрата. Ж.Крювелье выпустил в 1829-1835 гг. первый в мире цветной атлас по патологической анатомии.
В середине XIX в. наибольшее влияние на развитие этой отрасли медицины оказали труды К.Рокитанского, в которых он не только представил изменения в органах на различных этапах развития заболеваний, но и уточнил описание патологических изменений при многих болезнях. В 1844 г. К.Рокитанский основал в Венском университете кафедру патологической анатомии, создал крупнейший в мире патологоанатомический музей. С именем К.Рокитанского связывают окончательное выделение патологической анатомии в самостоятельную научную дисциплину и врачебную специальность. Переломным моментом в развитии этой дисциплины явилось создание в 1855 г. Р.Вирховым теории клеточной патологии.
В России первые попытки организации прозекторского дела относятся к XVIII в. Они связаны с деятельностью видных организаторов здравоохранения - И.Фишера и П.З.Кондоиди. Эти попытки не дали ощутимых результатов в связи с низким уровнем развития российской медицины и состоянием медицинского образования, хотя уже в то время проводились вскрытия с контрольно-диагностическими и исследовательскими целями.
Становление патологической анатомии как научной дисциплины началось лишь в первой четверти XIX в. и совпало по времени с улучшением преподавания нормальной анатомии в университетах.
Одним из первых анатомов, обращавших внимание студентов на патологические изменения органов во время вскрытия, был Е.О.Мухин.
Впервые вопрос о необходимости включения патологической анатомии в число обязательных предметов преподавания на медицинском факультете Московского университета был поставлен в 1805 г. М.Я.Мудровым в письме к попечителю университета М.Н.Муравьеву. По предложению Ю.Х.Лодера преподавание патологической анатомии в виде курса при кафедре нормальной анатомии было отражено в университетском уставе 1835 г. В соответствии с этим уставом преподавание самостоятельного курса патологической анатомии было начато в 1837 г. проф. Л.С.Севруком на кафедре нормальной анатомии. Профессора Г.И.Сокольский и А.И.Овер начали использовать новейшие патологоанатомические сведения в преподавании терапевтических дисциплин, а Ф.И.Иноземцев и А.И.Поль - при чтении лекций по курсу хирургии.
В 1841 г. в связи с созданием нового медицинского факультета в Киеве Н.И.Пирогов поставил вопрос о необходимости открытия кафедры для преподавания патологии в Университете Св. Владимира. В соответствии с уставом этого университета (1842) было предусмотрено открытие кафедры патологической анатомии и патологической физиологии, которая начала функционировать в 1845 г. Ее возглавил Н.И.Козлов - ученик Н.И.Пирогова.
7 декабря 1845 г. было принято "Дополнительное постановление о медицинском факультете Императорского Московского университета", которое предусматривало создание кафедры патологической анатомии и патологической физиологии. В 1846 г. профессором этой кафедры был назначен Ю.Дитрих - адъюнкт факультетской терапевтической клиники, которой заведовал А.И.Овер. После смерти Ю.Дитриха в конкурсе на замещение вакантной должности приняли участие четыре адъюнкта терапевтических клиник Московского университета - Самсон фон Гиммелыптерн, Н.С.Топоров, А.И.Полунин и К.Я.Млодзиевский. В мае 1849 г. профессором кафедры патологической анатомии и патологической физиологии был избран А.И.Полунин - адъюнкт госпитальной терапевтической клиники И.В.Варвинского.
Для современной медицины характерен постоянный поиск наиболее объективных материальных критериев диагностики и познания сущности болезни. Среди этих критериев морфологический приобретает исключительное значение как наиболее достоверный.
Современная патологическая анатомия широко использует достижения других медико-биологических дисциплин, обобщая фактические данные биохимических, морфологических, генетических, патофизиологических и других исследований с целью установления закономерностей работы того или иного органа и системы при различных заболеваниях.
Благодаря задачам, которые решает в настоящее время патологическая анатомия, она занимает особое место среди медицинских дисциплин. С одной стороны, патологическая анатомия - это теория медицины, которая, раскрывая материальный субстрат болезни, непосредственно служит клинической практике, с другой - это клиническая морфология для диагноза, дающая материальный субстрат теории медицины - общей и частной патологии человека (Серов В.В., 1982).
Под общей патологией понимают наиболее общие, т.е. свойственные всем болезням закономерности их возникновения, развития и исходов. Уходя своими корнями в частные проявления различных болезней и основываясь на этих частностях, общая патология одновременно синтезирует их, дает представление о типовых процессах, характерных для той или иной болезни. Дальнейший прогресс общей патологии не может быть поставлен в зависимость от развития какой-либо одной дисциплины или их группы, так как общая патология представляет собой концентрированный опыт всех отраслей медицины, оцененный с широких биологических позиций.
Каждая из современных медицинских и медико-биологических дисциплин вносит свою лепту в построение теории медицины. Биохимия, эндокринология и фармакология раскрывают тонкие механизмы процессов жизнедеятельности на молекулярном уровне; в патологоанатомических исследованиях законы общей патологии получают морфологическую интерпретацию; патологическая физиология дает их функциональную характеристику; микробиология и вирусология являются важнейшими источниками разработки этиологического и иммунологического аспектов общей патологии; генетика раскрывает секреты индивидуальности реакций организма и принципы их внутриклеточного регулирования; клиническая медицина завершает оформление законов общей патологии человека на основе собственного богатейшего опыта и окончательной оценки получаемых экспериментальных данных под углом зрения психологических, социальных и других факторов.
Для современного этапа развития медицины характерно то, что дисциплины, ранее бывшие преимущественно или даже исключительно экспериментальными (генетика, иммунология, биохимия, эндокринология, патологическая физиология и др.), становятся в равной мере и клиническими.
Быстрое развитие клинической физиологии, клинической морфологии, клинической иммунологии, клинической биохимии и фармакологии, медицинской генетики, принципиально новых методов рентгенологического исследования, эндоскопии, эхографии и др. чрезвычайно обогатило знания о фактических деталях и общих закономерностях развития болезней человека. Все более широкое использование неинвазивных методов исследования (компьютерная томография, ультразвуковая диагностика, эндоскопические методы и др.) позволяет визуально определять локализацию, размеры и даже в известной степени характер патологического процесса, что по существу открывает пути развития прижизненной патологической анатомии - клинической морфологии, которой посвящен курс частной патологической анатомии.
Сфера применения морфологического анализа в клинике постоянно расширяется благодаря все возрастающей хирургической активности и успехам медицинской техники, а также в связи с совершенствованием методических возможностей морфологии. Совершенствование медицинских инструментов привело к тому, что практически не осталось таких областей организма человека, которые были бы недоступны для врача. При этом особое значение для совершенствования клинической морфологии приобретает эндоскопия, позволяющая клиницисту заниматься морфологическим изучением болезни на макроскопическом (органном) уровне. Эндоскопические исследования служат и целям биопсии, с помощью которой патологоанатом получает материал для морфологического исследования и становится полноценным участником решения вопросов диагностики, терапевтической или хирургической тактики и прогноза заболевания. Используя материал биопсии, патологоанатом решает и многие теоретические вопросы патологии. Поэтому биоптат становится основным объектом исследования при решении практических и теоретических вопросов патологической анатомии.
Методические возможности современной морфологии удовлетворяют стремления патологоанатома к все возрастающей точности морфологического анализа нарушенных процессов жизнедеятельности и все более полной и точной функциональной оценке структурных изменений. Современные методические возможности морфологии огромны. Они позволяют изучать патологические процессы и болезни на уровне организма, системы органов, органа, ткани, клетки, клеточной органеллы и макромолекулы. Это макроскопические и светооптические (микроскопические), элекгронно-микроскопические, цито- и гистохимические, иммуногистохимические и авторадиографические методы. Наблюдается тенденция к ком- плексированию ряда традиционных методов морфологического исследования, в результате чего возникли электронно-микроскопическая гистохимия, электронно-микроскопическая иммуноцитохимия, электронно-микроскопическая авторадиография, существенно расширившие возможности патологоанатома в диагностике и познании сущности болезней.
Наряду с качественной оценкой наблюдаемых процессов и явлений при использовании новейших методов морфологического анализа существует возможность количественной оценки. Морфометрия дала в руки исследователей возможности применения электронной техники и математики для суждения о достоверности результатов и правомочности трактовки выявленных закономерностей.
С помощью современных методов исследования патологоанатом может обнаружить не только морфологические изменения, свойственные развернутой картине того или иного заболевания, но и начальные изменения при болезнях, клинические проявления которых еще отсутствуют в силу состоятельности компенсаторно-приспособительных процессов (Саркисов Д.С., 1988). Следовательно, начальные изменения (доклинический период болезни) опережают их ранние клинические проявления (клинический период болезни). Поэтому главным ориентиром в диагностике начальных стадий развития заболевания служат морфологические изменения клеток и тканей.
Патологическая анатомия, располагая современными техническими и методическими возможностями, призвана решать задачи как клинико-диагностического, так и научно-исследовательского характера.
Несмотря на то, что в последние годы во всех странах число вскрытий неуклонно снижается, патологоанатомическое исследование остается одним из главных методов научного познания болезни. С его помощью осуществляется экспертиза правильности диагноза и лечения, устанавливаются причины смерти. В связи с этим вскрытие трупа как завершающий этап диагностики необходимо не только клиницисту и патологоанатому, но и медицинскому статистику и организатору здравоохранения. Этот метод является базой научных исследований, преподавания фундаментальных и прикладных медицинских дисциплин, школой врача любой специальности. Анализ результатов вскрытия играет важную роль в решении ряда крупных научно-практических проблем, например проблемы изменчивости, или патоморфоза, болезней.
Объекты, изучаемые патологоанатомом, можно разделить на три группы: 1) трупный материал, 2) субстраты, полученные от больных при их жизни (органы, ткани и их части, клетки и их части, продукты секреции, жидкости) и 3) экспериментальный материал.
Трупный материал. Традиционно органы и ткани трупов умерших являются предметом изучения в ходе патологоанатомических вскрытий (аутопсий, секций) лиц, умерших от болезней. Случаи смерти, произошедшей не от болезней, а в результате преступлений, катастроф, несчастных случаев или неясных причин, исследуют судебные медики.
Трупный материал изучают на анатомическом и гистологическом уровнях. Реже используются рентгенологические, микробиологические и биохимические методы. В патологоанатомическое отделение вместе с покойником доставляется история болезни и вся имеющаяся медицинская документация. Перед вскрытием патологоанатом обязан все это изучить, а затем пригласить на аутопсию лечащих врачей. Клиницисты должны удостовериться в тех находках, которые подтверждают или опровергают их представления о процессах и изменениях, произошедших в организме при жизни больного. Результаты аутопсии патологоанатом заносит в протокол вскрытия, а причины смерти больного указывает в свидетельстве о смерти, которое затем выдает родственникам покойного.
Вскрытие. Основная цель аутопсии - установление окончательного диагноза и причин смерти больного. Оцениваются также правильность или ошибочность клинического диагноза, эффективность лечения. Существуют критерии оценки расхождений клинического и патологоанатомического диагнозов, а также классификация причин расхождений. Другая цель вскрытия - взаимное обогащение научно-практического опыта клиницистов и патологоанатомов. Значение секционной работы патологоанатома состоит не только в контроле за качеством лечебно-диагностической деятельности клиницистов (контроль этот сложен и осуществляется не только патологонатомами), но и в накоплении статистических и научно-практических данных о болезнях и патологических процессах.
Если секционная работа организована высокопрофессионально и адекватно оснащена методически, то выполнение ее в полном объеме обходится очень дорого. Это и стало одной из причин значительного сокращения числа госпитальных вскрытий в ряде промышленно развитых стран. Тенденция к сокращению количества вскрытий наметилась и в России.
Материал, взятый при жизни больного. Гораздо больший объем в работе патологоанатома занимает микроскопическое изучение материала, полученного с диагностической целью при жизни больного. Чаще всего такой материал поступает от оперирующих клиницистов: хирургов, гинекологов, урологов, оториноларингологов, офтальмологов и др. Диагностическая роль патологоанатома здесь велика, и его заключение нередко определяет формулировку клинического диагноза.
Гистологическое исследование. Этому исследованию подвергаются операционный и биопсийный материалы. От патологоанатома требуется гистологическое подтверждение (уточнение) диагноза. В обоих случаях важна немедленная фиксация удаленных тканей. Даже не очень долгое содержание удаленных кусочков или субстратов на воздухе, в воде или солевом растворе может привести к необратимым, искусственно вызванным изменениям в материале, которые затруднят или исключат постановку правильного гистологического диагноза.
Из фиксированного материала острой бритвой вырезают кусочки не более 1 см диаметром, затем их закладывают в специальные кассеты и помещают в автоматы для гистологической проводки.
Гистологические срезы толщиной 5-10 микрон наклеивают на предметные стекла, депарафинируют, окрашивают тем или иным способом, затем заключают в оптически прозрачные среды под покровное стекло.
При срочных биопсиях, проводимых нередко во время обширных хирургических вмешательств, с целью быстрого получения гистологического диагноза ткань замораживают и нарезают на криостате или замораживающем микротоме. Замороженные срезы обычно толще парафиновых, но они пригодны для предварительной диагностики. Криостат и замораживающий микротом применяют для сохранения спирторастворимых и некоторых других компонентов ткани, которые важны для диагностики (например, жир).
Для обычной диагностики широко используют универсальную гистологическую окраску срезов гематоксилином и эозином. Тинкто- риальные, т.е. красящие свойства гематоксилина реализуются в слабощелочной среде, и структуры, окрашенные этим красителем в синий или темно-синий цвет, принято называть базофильными. К ним относятся ядра клеток, отложения солей извести и колонии бактерий. Слабую базофилию могут давать некоторые виды слизи. Эозин, напротив, при рН менее 7 окрашивает так называемые оксифильные компоненты в розово-красный или красный цвет. К ним относятся цитоплазма клеток, волокна, эритроциты, белковые массы и большинство видов слизи. Очень часто применяют окраску пикрофуксином по ван Гизону, элективно, т.е. избирательно, окрашивающую в красный цвет коллагеновые волокна соединительной ткани, тогда как прочие структуры становятся желтыми или зеленовато-желтыми. Существует также множество гистологических окрасок для выявления тех или иных компонентов ткани или патологических субстратов.
Цитологическое исследование. Его проводят по мазкам, сделанным из содержимого полых или трубчатых органов, а также по препаратам-отпечаткам, пункгатам и аспиратам (аспирационным пунктатам, отсасываемым шприцом). Мазки нередко изготавливают из материала смывов со стенок органов, что позволяет захватить клетки, находящиеся в процессе естественного или патологического слущивания (десквамации, эксфолиации), например, с шейки матки. Более активным вмешательством является соскоб со стенок органов. Если материал соскоба обилен, то его обрабатывают с помощью гистологических методик. В частности, так поступают с диагностическими соскобами эндометрия. При скудных соскобах материал идет в цитологическую обработку. Нередко препараты изготавливают из мокроты, слизи, тканевых цугов и осадков в жидкостях. Осадки можно получить после центрифугирования взвесей.
Цитологический материал фиксируют, обычно, прямо на предметном стекле, часто во время окраски. Наиболее популярны окраски: азур-эозином (его тинкгориальные свойства близки к гематоксилину и эозину) или бисмарк-брауном по Папаниколау.
Иммуногистохимическое исследование. При некоторых патологических состояниях, особенно опухолях, бывает трудно и даже невозможно с помощью гисто- или цитологических окрасок определить тип ткани или ее происхождение (гистогенез). Между тем, такая верификация имеет важное значение для диагностики и прогнозирования. Поэтому используют различные дополнительные методические подходы. Одним из них является иммуногистохимический метод. При нем на гисто- или цитологические препараты наносят растворы с антителами к искомым антигенам: опухолевым, вирусным, микробным, аутоантигенам и др. Антигены при обычных гистологических окрасках тканей не видны. Антитела в сыворотках несут на себе метку: либо флуорохром, т.е. краситель, светящийся в темном поле (иначе говоря, дающий флуоресценцию), либо красящий фермент. Если искомый антиген есть в исследуемых тканях или клетках, то возникший комплекс антиген-антитело плюс маркер точно укажут его локализацию, количество, помогут изучить некоторые свойства.
Иммунофлуоресценцию чаще всего используют при изучении срезов, приготовленных в криостате или на замораживающем микротоме, а также при исследовании цитологических препаратов. Применяются сыворотки с антителами, так называемые антисыворотки, коньюгированные чаще всего с таким надежным флуорохро- мом, как флуоресцеин-изотиоцианат. Наиболее популярен непрямой метод, позволяющий выявить антигены с помощью двойной реакции с антителами.
Еще более распространен иммунопероксидазный метод. Антитела красящей сыворотки несут не флуорохром, а фермент - пероксидазу хрена, реже другой энзим, например, щелочную фосфатазу. Существует несколько вариантов указанного метода. Наиболее часто используются два из них: пероксидазно-антипероксидазный (ПАП-метод), и метод авидин-биотинового комплекса (АВС-метод).
При ПАП-методе цепь промежуточных антител, связывающих энзим с антигеном, несколько длиннее, чем при непрямом иммунофлуоресцентном методе. Энзимное, т.е. пероксидазное антитело связывается с первичным антителом, уже находящемся на антигене, посредством еще одного антитела-мостика.
При авидин-биотиновом методе первичное антитело, находящееся на антигене и меченное биотином, связывается с ПАП-комплексом через промежуточное антитело, меченное авидином. Оба белка - авидин и биотин резко повышают качество реакции, поэтому АВС- метод считается более чувствительным.
Для иммуногистохимических реакций используют 2 типа антител: поли- и моноклональные. Первые получают из антисывороток иммунизированных кроликов. Моноклональные антитела получают в культуре тканей или из асцитической жидкости, полученной из брюшной полости лабораторных животных. Моноклональные антитела абсолютно специфичны по отношению к антигену и не дают перекрестной реактивности.
Популярность иммунопероксидазного метода связана, в основном, с его простотой и доступностью. Существует множество коммерческих наборов (kits) сывороток к различным антигенам, специфичным для тканей или опухолей и получившим название маркеров. Выгоды применения иммунопероксидазных реакций объясняются высокой чувствительностью (по сравнению с иммунофлуоресценцией ПАП-метод чувствительнее в 1000 раз, а АВС-метод - в 10000 раз), относительной стойкостью, возможностью применения некоторых реакций на депарафинированных срезах, прошедших и фиксацию, и проводку через спирты.
Методы молекулярной биологии. В хорошо оснащенных патологоанатомических отделениях и научно-исследовательских институтах для прижизненной диагностики применяют методы молекулярной биологии: проточную цитометрию и технику гибридизации in situ, т.е. на месте, на гистологическом срезе. Первый метод необходим для количественного анализа содержания ДНК в клетках опухолей. С этой целью исследуемый кусочек нефиксированной ткани с помощью ферментов подвергают дезагрегации, т.е. разъединению и размельчению до отдельных клеток. Затем в специальной установке поток суспензии изолированных клеток толщиной в 1 клетку, окруженный обволакивающей жидкостью, проходит через считывающий лазерный пучок.
С помощью гибридизации in situ достигается совмещение генетического материала (фрагментов ДНК, генов) in vitro на основе комплементарности, т.е. взаимного соответствия, например, пуриновых или пиримидиновых оснований у нуклеиновых кислот. Этот метод применяется, в основном, в трех областях патологии: для идентификации по геному микробов или вирусов, находящихся в тканях или жидкостях; для изучения генома при его врожденных нарушениях; при диагностике опухолей, в частности, для распознавания вирусных онкогенов. Есть множество модификаций метода.
Очень популярна полимеразная цепная реакция (ПЦР), которая осуществляется прямо на гистологических срезах. Вначале проводят денатурацию исследуемой ДНК, т.е. разъединение двух ее спиральных нитей и получение одной из них в изолированном состоянии. Затем наслаивают другую, инородную нить (чаще РНК), меченную флуорохромом или ПАП-комплексом. Молекулярная структура этой нити, т.е. последовательность ее оснований, заведомо известна. Если имеется комплементарность с исследуемой нитью, то красящая реакция на гистологическом препарате положительна, а строение этой нити становится известным.
Исследование хромосом. Во многих современных патологоанато- мических отделениях и научно-исследовательских институтах проводят хромосомный анализ, позволяющий определять отклонения в генетическом аппарате (геноме) клеток, имеющие врожденный или приобретенный характер.
Этот анализ приобретает особое значение при распознавании и изучении опухолей, различные варианты которых сопровождаются вполне специфическими маркерными перестройками или аберрациями хромосом. Для этого прижизненно взятую ткань культивируют, т.е. выращивают на искусственных средах. Такой метод культивирования позволяет путем пересевов и отбора клеток добиться получения культуры клеток одного тканевого типа и даже одного клона, т.е. линии, происходящей от одной стволовой клетки.
Основные этапы хромосомного анализа на примере исследования лимфоцитов крови состоят в следующем. В культуру гепаринизированной крови (гепарин - антикоагулянт) добавляют фитогемагглютинин, стимулируя Т-лимфоциты к трансформации в бласты (менее зрелые формы, способные к митозу и делению). Через 2-3 сут инкубации в культуру вносят колхицин д ля задержки митозов на стадии метафазы у делящихся лимфоцитов. Именно в мегафазе хромосомы как бы распластываются, что удобно для изучения. Затем клетки переносят на предметное стекло, фиксируют и окрашивают, чаще всего по методу Гимзы. В результате в каждой паре хромосом выявляются светлые (неокрашенные) и темные (окрашенные) полосы (bands), поэтому метод называют бэцдингом хромосом. Расположение полос в нормальном кариотипе (наборе хромосом) высокоспецифично для каждой пары хромосом, и диаграммы (карты) бэндинга в норме хорошо известны.
Хромосомный анализ относится к экономически дорогим методам и потому применяется нечасто.
Электронная микроскопия. В ходе диагностических исследований на материале, взятом при жизни больного, нередко используется электронная микроскопия: трансмиссионная (в проходящем пучке, подобно светооптической микроскопии) и сканирующая (снимающая рельеф поверхности). Первую применяют чаще, особенно для изучения в ультратонких срезах ткани деталей строения клеток, выявления микробов, вирусов, отложений иммунных комплексов и др. Ультраструктурное исследование стоит очень дорого, однако нередко применяется с диагностической и научной целью.
Экспериментальный материал. Исследуя ткани, взятые при жизни или после смерти больного человека, патологоанатом наблюдает изменения в момент изъятия ткани. Что было до того и могло быть после - остается неизвестным. Эксперимент с достаточным количеством лабораторных животных (белых мышей, белых крыс, морских свинок, кроликов, собак, обезьян и др.) позволяет моделировать и изучать болезни и патологические процессы на любом этапе их развития.
Loading...