Антиген кардиолипиновый для реакции микропреципитации. Неспецифическая серологическая диагностика сифилиса Микрореакция преципитации с кардиолипиновым антигеном (рмп). Диагностические подтверждающие серологические реакции

Анализ крови на РМП — что это такое? О чём говорит это аббревиатура? Насколько этот анализ является полноценным для диагностики сифилиса?

Как диагностируют сифилис?

Возбудитель сифилиса или бледная трепонема вырабатывает несколько видов агрессивных чужеродных человеку белков, которые называют антигенами. Это белковый антиген, который хорошо распознается иммунной системой, полисахаридный антиген, который не используется в диагностике и очень важный липидный антиген. Именно это вещество имеет значительное сходство с фосфолипидами, которые входят в состав мембран человеческих клеток.

Этот антиген составляет около 30% от всей массы возбудителя сифилиса и именно к нему уже в начале второго месяца после заражения нарабатываются особые антитела, которые называются реагинами. Забегая вперёд, можно сказать, что именно это сходство антигена с фосфолипидами человеческих мембран и обусловливает возможные ложноположительные реакции, особенно в том случае, если у пациента существует аутоиммунная патология, так называемый антифосфолипидный синдром.

Диагностика сифилиса основывается на двух больших группах методов. В первом случае непосредственно ищут возбудителя под микроскопом, объектом исследования служат различные отделяемое – из язв, эрозий, со дна гумм, из элементов сыпи. Во-втором, выявляет антитела, который появляются в сыворотке или плазме крови у пациента к вышеупомянутым антигенам.

При этом методы серологической (от лат. serum – сыворотка) диагностики делятся на две группы. В первой из них используют специфические трепонемные антигены, которые получены из чистых культур сифилитических микроорганизмов. А неспецифические серологические реакции используют похожие антигены, но только полученные не из возбудителей и похожие на них — так называемый кардиолипиновый антиген, который получают из бычьих сердец. Он весьма похож на липидный антиген возбудителя сифилиса и может «спровоцировать» иммунный ответ при наличии в крови у пациента антител.

Эти нетрепонемные тесты (в которых реагенты не являются «настоящими») не требуют дорогостоящих специфических антигенов, поэтому они являются дешевыми, доступными и быстрыми. Их назначение — скрининговое, первичное исследование или отборочная реакции. К таким нетрепонемным тестам и относится реакция микропреципитации или РМП.

Для того чтобы окончательно установить диагноз одних нетрепонемных тестов мало. Если у пациента возникает положительный ответ, в таком случае применяется весь арсенал исследований на сифилис – начиная от и заканчивая специальными методами исследования — это реакция пассивной гемагглютинации, и метод иммуноблота. К ним также относятся методы непрямой иммунофлюоресценции, а также реакция иммобилизации трепонем.

Два последних способа применяются специалистами в профильных учреждениях, поскольку в качестве антигена уже используется не вещество из бычьего сердца, а живые сифилитические микроорганизмы, специально выращенные в организмах кроликов для этих целей. Рассмотрим подробнее, что такое реакция микропреципитации или микрореакции.

Анализ крови на микрореакцию — что это такое?

В Рунете существует большое количество запросов, смысл которых сводится к следующему: анализ крови РМП — что это такое? Отвечаем на поставленный вопрос. Реакция преципитации ставится не только для исследования сифилиса, она служит микробиологии и иммунологии уже много десятков лет. В переводе с латинского это означает — реакция осаждения.

В процессе исследования смешиваются антигены, которые заранее вводятся в раствор. В данном случае речь идет о кардиолипиновом антигене. Затем в этот раствор добавляется сыворотка крови, взятая у пациента. И если в этой крови находятся антитела, которые выработались к похожему антигену возбудителя сифилиса, то они «как ключик к замочку» подойдут к активным центрам молекул антигена. В результате появляются крупные, связанные между собой структуры иммунных комплексов, которые называются преципитатами. Это молекулы антигена, «увешанные» антителами. Они более крупные и более тяжелые и в результате будет заметно или помутнение прозрачных растворов, или выпадение их в осадок.

В конкретном случае, при проведении реакции микропреципитации на сифилис заметно появления белых хлопьев. Существует самые разнообразные разновидности реакции преципитации, которые могут проводиться не только в пробирке, но также в полужидком геле, в различных питательных средах, и другими способами.

RPR – модификация

Также в современных лабораториях можно столкнуться с другим похожим названием — тест RPR. Это уже современная модификация преципитации, в которой обнаруживаются быстрые плазменные реагины. Такими реагентами называют антитела, принадлежащие к классам иммуноглобулинов G и M.

Именно RPR тест (его второе название — неспецифический антифосфолипидный или реагиновый тест) рекомендуется приказом Минздрава Российской Федерации для скрининга или первичного исследования на сифилис. Поэтому, если у вас есть выбор: сделать РМП либо выполнить RPR, — то лучше принять решение в пользу второго метода.

RPR — метод исследования позволяет выявить практически 80% лиц с течением первичной инфекции и почти 100% лиц, которые болеют вторичным сифилисом или латентными (скрытыми) формами. RPR — реакция способна выявить сифилис уже через 7 дней после появления первичной сифиломы, например, твердого шанкра. Обычно это можно сделать через месяц после заражения.

Показания к исследованию и правила забора крови

Как сдавать кровь при РМП — исследовании на сифилис? Как готовиться к исследованию? Как и в большинстве случаев сдачи крови, никаких особых подготовительных мероприятий проводить пациенту не требуется. Самое главное, чтобы кровь была взята натощак, что делается обычно рано утром. В том случае, если это правило соблюсти невозможно, то кровь можно сдавать через 4 часа после легкого приёма пищи. Питье жидкости допускается, если она чистая, негазированная и не является минеральной водой. Все остальные виды жидкостей, такие, как соки, кофе и чай нежелательны, во избежание возникновения ложных реакций.

Показано проведение реакции микропреципитации, и ее более совершенный аналог RPR, при первичном подозрении на сифилис. Также эти реакции требуются для проведения, в первую очередь, для диагностики скрытого сифилиса. Как скрининговый метод эти тесты используются для обследования доноров и просто при первичном обращении. Обязательно следует подчеркнуть, что положительное значение этих тестов ни в коем случае не равнозначно постановке диагноза сифилис, ведь антиген использовался не сифилитический, а просто «похожий». Эти результаты должны быть подтверждены трепонемными тестами или другими способами современной диагностики, например .

Интерпретация и расшифровка результатов

Расшифровка анализа крови на РМП предполагает выдачу не количественного, а качественного результата: «положительно» или «отрицательно» — антитела обнаружены или не обнаружены.

В случае первичного сифилиса это реакция может быть положительной уже в 60% случаев и выше. В случае вторичного сифилиса, когда антител в организме много, реакция становится достоверно стопроцентной. Если сифилис протекает скрыто или латентно, но уже достаточно долгое время, то реакция микропреципитации будет достоверной в 80% случаев.

При третичном сифилисе разброс значений может колебаться — от 37% до 94%. Ведь если сифилис протекает очень долгое время, буквально годы, то антитела по разным причинам могут исчезать из крови, или переставать нарабатываться.

Поскольку реакция микропреципитации является скрининговым методом, то необходимо учитывать следующее очень важное обстоятельство. Это реакция проявляется образованием иммунных комплексов-преципитатов только в том случае, если антитела и антиген находятся в крови в строгих соотношениях, их должно быть ровно столько, чтобы антитела полностью связались со всем количеством антигена и не оказалось избытка в растворе ни одного из реагентов.

Если антител значительно больше, в таком случае реакция вообще может не произойти. Этот феномен стал известен при исследовании врождённого сифилиса. У малышей с врождённой инфекцией настолько много антител в крови, что реакция просто не происходит.

Именно поэтому к интерпретации результатов РМП у грудных детей следует подходить очень осторожно.

При каких заболеваниях могут возникать ложноположительные результаты? Их перечень достаточно велик:

  • системные заболевания соединительной ткани и ревматические поражения;
  • беременность (нечасто);
  • подагра и гиперурикемия;
  • хронический алкоголизм;
  • сахарный диабет;
  • , поскольку микобактерии и бледные трепонемы имеют схожие антигены;
  • внутривенная наркомания;
  • лимфоцитарная ангина или ;
  • другие вирусные и бактериальные инфекции (вирусные гепатиты или энтеровирусная диарея, скарлатина, корь);
  • вирусная или бактериальная пневмония;
  • аутоиммунный тиреоидит;
  • пожилой и старческий возраст.

Также эта реакция может быть ложноположительной после различных прививок и вакцинаций.

Однако, в том случае если реакция микропреципитации или ее более совершенный аналог – RPR — отрицательны, то это не может однозначно свидетельствовать об отсутствии сифилитической инфекции. Пациент может заразиться сифилисом буквально за два-три дня, за неделю или за две до проведения обследования и тогда антитела в крови просто ещё не успею появиться. Такое состояние называется серонегативным ранним сифилисом. Возможна и полностью обратная ситуация, когда пациент болеет уже 10 или 20 лет и у него поздний третичный сифилис с отсутствием антител в плазме крови.

Если РМП или RPR положительна

Конечно, больше всего людей беспокоит, если РМП положительна.

В этом случае необходимо проводить дополнительные подтверждающие тесты, о которых говорилось выше. Если предметом выбора будет и , то их специфичность намного выше и составляют 100% при чувствительности в 95%. Но даже эти дополнительные методы могут тоже дать ложный положительный результат, особенно в случае сопутствующих воспалительных заболеваний, а также аутоиммунных процессов. Именно поэтому в клинической практике обязательно подтверждают диагноз сифилиса с помощью двух дополнительных способов. Это может быть реакция иммунофлюоресценции или иммобилизации возбудителей сифилиса (РИБТ). Но эти исследования дорогие и применяются нечасто.

Возможно применять реакцию связывания комплемента (РСК), в которой используется специфический трепонемный антиген. Показано проведение иммунного блота, который помогает в сомнительных случаях при неясных клинической картине. Наконец, на помощь приходит полимеразная цепная реакция, с помощью которой можно определить наличие ДНК бледной спирохеты в организме пациента.

При подозрении на сифилис врачи назначают исследование крови на антитела к кардиолипиновому антигену. Этот анализ является усовершенствованным вариантом реакции Вассермана (RW). В классическом виде тест на RW не используется уже около 30 лет. В наши дни это исследование проводят исключительно иммунологическими методами. Каковы нормальные показатели этой пробы? И как правильно расшифровать ее результаты? Эти вопросы мы рассмотрим в статье.

Что это такое?

Кардиолипиновый антиген представляет собой липидоподобное вещество. По своему составу оно похоже на белки возбудителя сифилиса — бледной трепонемы. Такой препарат используют для ранней диагностики этого опасного венерического заболевания. Он позволяет выявить патологию на ранних стадиях.

На исследование берут венозную кровь и смешивают с кардиолипиновым антигеном. Реакция взаимодействия биоматериала и препарата называется Если человек здоров, то его кровь не вырабатывает антитела к антигену. Если же пациент страдает сифилисом, то в его организме активно образуются иммуноглобулины класса M и G. В этом случае в смеси крови и препарата появляются хлопья. Этот осадок представляет собой скопление комплексов "антиген-антитело" (преципитат).

Образование иммуноглобулинов у зараженного человека начинается через 7-10 дней после появления шанкра (безболезненной язвы) на коже или слизистой. Это ранний симптом сифилиса. Обычно выработка антител наблюдается через 2-3 недели после инфицирования.

Для проведения теста используют набор "Кардиолипиновый антиген". Его получают из бычьего сердца. Экстракт органа смешивают с холестерином и лецитином. Полученное вещество обладает схожими свойствами с протеинами бледной трепонемы. Оно способно вызывать образование иммуноглобулинов при реакции с кровью больного сифилисом.

Показания

Анализ с кардиолипиновым антигеном назначают в следующих случаях:

  • при наличии незащищенных половых контактов пациента со случайными партнерами;
  • при бытовых контактах с больными сифилисом;
  • при симптомах первичной и вторичной стадии сифилиса (шанкре, высыпаниях на теле);
  • при подозрении на нейросифилис (психических и неврологических нарушениях);
  • детям, рожденным инфицированными женщинами;
  • для контроля эффективности противосифилитической терапии.

Этот тест не всегда бывает информативен при запущенных (третичных) формах патологии. На поздних стадиях сифилиса выработка антител существенно снижена.

Пробу с кардиолипиновым антигеном обязательно сдают во время беременности. Кроме этого, такое исследование требуется пройти донорам и людям, оформляющим медицинскую книжку.

Как проводится исследование?

Очень важно тщательно подготовиться к анализу. Этот тест довольно часто дает ложноположительные результаты. За двое суток до сдачи крови нужно полностью исключить:

  • употребление спиртных напитков (даже слабоалкогольных);
  • прием препаратов с наперстянкой;
  • жирную пищу.

Анализ нужно сдавать утром натощак. На исследование берут 8-10 мл венозной крови. Результаты теста обычно бывают готовы через 1-2 дня.

Норма

Если пациент не страдает сифилисом, то его кровь не вступает в реакцию с кардиолипиновым антигеном. Отрицательный результат анализа в большинстве случаев означает, что человек здоров. В расшифровке теста это обозначается знаком "-" или "RW-". Это считается нормой.

Однако даже при отрицательных результатах теста нельзя полностью исключать, что человек инфицирован бледной трепонемой. Ведь антитела не вырабатываются в инкубационный период патологии. Очень слабое продуцирование иммуноглобулинов отмечается и при третичной форме сифилиса. Поэтому если у человека при отрицательной реакции Вассермана имеются признаки патологии, то анализ назначают повторно.

Возможные отклонения

Рассмотрим расшифровку анализа. Выраженность положительной реакции обозначена в бланке с результатами пробы знаками "+". Отклонениями от нормы считаются следующие данные теста:

  • "+ " — сомнительный результат (рекомендуется пересдать анализ).
  • "++" — слабоположительная реакция.
  • "+++" — положительный результат.
  • "++++" — резко положительная проба.

Что делать, если проба с кардиолипином дала положительные результаты? Диагноз "сифилис" обычно не ставится только лишь по реакции Вассермана. В этом случае врачи всегда назначают дополнительные исследования.

Этот тест в 70 % случаев позволяет выявить первичную стадию сифилиса, и в 100 % случаев показывает вторичную форму болезни. Однако положительные результаты исследования не всегда свидетельствуют об инфицировании бледной трепонемой. На данные этого анализа могут повлиять многие факторы. Они будут рассмотрены далее.

Ложные результаты

Нередко бывают случаи, когда проба Вассермана показывает образование антител, однако при этом человек не страдает сифилисом. Ложная положительная реакция отмечается при следующих заболеваниях и состояниях:

Можно сделать вывод, что перечень заболеваний и состояний, при которых отмечаются ложные результаты теста, довольно обширен. Поэтому для постановки точного диагноза назначают иммунофлюоресцентный анализ крови. Он позволяет более достоверно выявить наличие иммуноглобулинов G к бледной трепонеме. Проводят также анализ крови методом ПЦР-диагностики. Он показывает наличие у пациента фрагментов ДНК бледной трепонемы. Окончательный диагноз врач ставит только на основании комплексного исследования.

Последняя актуализация описания производителем 31.07.1996

Фильтруемый список

Состав и форма выпуска

Комплект из 5 ампул антигена кардиолипинового, содержащих по 2 мл препарата, и одного флакона раствора холина хлорида, содержащего 5 мл препарата; в упаковке 2 комплекта. 1 комплект рассчитан на 200-240 определений.

Характеристика

Раствор трех высокоочищенных липидов: кардиолипина, лецитина, холестерина в спирте этиловом абсолютизированном. Прозрачный бесцветный раствор со специфическим запахом спирта.

Фармакологическое действие

Фармакологическое действие — диагностическое .

Выявление антител к возбудителю сифилиса.

Показания препарата Антиген кардиолипиновый для реакции микропреципитации (РМП)

Диагностика сифилиса (исследование активной плазмы или инактивированной сыворотки в реакции микропреципитации).

Условия хранения Антиген кардиолипиновый для реакции микропреципитации (РМП)

В защищенном от света месте, при температуре 6-22 °C.

Хранить в недоступном для детей месте.

Срок годности Антиген кардиолипиновый для реакции микропреципитации (РМП)

1 год.

Не применять по истечении срока годности, указанного на упаковке.

Является отборочным тестом при массовом обследовании населения на сифилис.

Постановка: плазма или инактивированная сыворотка крови + специ­альный кардиолипиновый антиген (экстракт бычьего сердца, обогащенный холестерином и лецитином). Образуется преципитат (комплекс антиген - ан­титело), выпадающий в осадок в виде хлопьев белого цвета.

РМП можно проводить и по количественной методике с разведением сыворотки крови.

Преимущества экспресс-метода:

    быстрота ответа (30-40 минут),

    небольшой объем необходимой для анализа крови (2-3 капли плазмы или сыворотки).

Источники ошибок при постановке РМП:

    неправильное взятие крови из пальца (наличие пузырей воздуха в капил­ляре пипеток);

    неравномерная концентрация антигена в эмульсии вследствие недоста­точного перемешивания ее перед использованием;

    бактериальное загрязнение эмульсии;

    нарушение сроков и условий хранения плазмы и сыворотки крови, ан­тигена и его эмульсии, растворов;

    использование при постановке реакций загрязненных пробирок, пипе­ток, пластинок, растворов.

Вышеуказанные ошибки могут приводить к появлению как ложноот­рицательных, так и ложноположительных результатов реакции.

После окончания терапии ставится РМП и по снижению титра судят о ди­намике инфекционного процесса и эффективности терапии.

Подтверждением эффективности проведенной терапии считается сниже­ние титра в 4 и более раз в течение 1 года; по окончании этого срока осуще­ствляется постановка той же специфической реакции, что и при первичном обследовании.

Диагностические подтверждающие серологические реакции

ИФА, РИФ и РПГА являются высокочувствительными и высокоспеци­фичными реакциями на сифилис.

Ввиду различной чувствительности при разных формах сифилиса, спе­цифичности и сложности постановки каждая из указанных реакций имеет свое предназначение.

Профилактическое обследование населения на сифилис можно прово­дить с помощью РМП, ИФА и РПГА.

При получении положительного результата РМП пациент должен об­следоваться дерматовенерологом с повторным исследованием крови в любом диагностическом тесте на сифилис.

При профилактическом обследовании на сифилис больных глазных, пси­хоневрологических, кардиологических стационаров, беременных должны ис­пользоваться ИФА или РПГА.

При обследовании доноров необходимо применять ИФА или РПГА, но обязательно в сочетании с РМП. Постановка двух реакций одновременно обусловлена высокой ответственностью данного исследования.

Вышеуказанные специфические тесты служат для диагностики всех форм сифилиса, в частности, скрытого, а также для распознавания ложно­положительных результатов, полученных в РМП.

Следует учитывать, что специфические трепонемные тесты могут оста­ваться положительными (не негативировать) в течение ряда лет, а в отдель­ных случаях остаются положительными на всю жизнь.

Иммуноферментный анализ для серо- и ликвородиагностики сифилиса

"■ } ; // U! £//-

Принцип:- шшша Т. pallidum сенсибилизируются к поверхности твер­дофазового носителя (лунки панелей). Добавляется исследуемая сыворотка. При наличии антител против Т. pallidum образуется комплекс антиген- антитело, связанный с поверхностью носителя. На следующем этапе в лунки наливают антивидовую сыворотку (против иммуноглобулинов человека), ме­ченую ферментом (пероксидазой или щелочной фосфатазой). Меченые анти­тела взаимодействуют с комплексом антиген-антитело, образуя новый ком­плекс. Для его выявления в лунки наливают раствор субстрата (5- аминосалициовая кислота). Под действием фермента субстрат меняет цвет, что указывает на положительный результат.

Оптимальным в случае использования ИФА считается одновременное применение трех его вариантов:

    выявление суммарных AT (CAT)

    последующее дифференцированное определение трепонемоспецифических IgM и IgG.

Появление противосифилитических антител происходит в соответствии с общими закономерностями иммунного ответа. Вначале появляются IgM на 2- 4 неделе после заражения и исчезают у нелеченных больных примерно через 18 месяцев; при лечении раннего сифилиса через 3-6 месяцев; позднего - че­рез год. По мере развития болезни начинает преобладать синтез IgG, которые появляются на 4 неделе после заражения, достигают более высоких титров и длительно сохраняются даже после клинического излечения.

Источники возникновения ошибок при использовании ИФА-тест- систем:

    нарушения техники взятия крови, условий транспортировки и хранения тест-систем и проб.

    некачественная работа лаборантов,

    любые отклонения от инструкции по применению тест-системы,

    неисправность инструментов и приборов,

Loading...Loading...